Metabolismul

nucleotidelor
2
Metabolismul
nucleotidelor
3
Digestia i absorbia nucleotidelor
Acizii nucleici, RNA i DNA nutriionali sunt
supui modificrilor n tractul gastro-intestinal.
Ribonucleazele i dezoxiribonucleazele secretate de
pancreas vor scinda polinucleotidele pn la
oligonucleotide.
Fosfodiesterazele pancreatice vor conduce la
formarea 3- i 5- mononucleotide.
n continuare, nucleotidazele vor hidroliza fosfatul,
genernd nucleozide. Ultimele pot fi absorbite n
celulele intestinale sau scindate de nucleozidaze la
bazele respective.
4
Purinele i pirimidinele alimentare nu sunt utilizate
n sinteza acizilor nucleici tisulari.
Purinele n celulele mucoasei intestinale sunt
transformate n acid uric, eliminat apoi din
circulaie prin urin.
n metabolizarea bazelor purinice e implicat i
flora intestinal.
Pirimidinele, riboza (dezoxiriboza) i o parte din
purine ptrund n circulaia sanguin.
5
Digestia i absorbia nucleotidelor
6
Metabolismul general al organismului trebuie s
asigure existena unui fond, elucidnd cantitatea i
varietatea de nucleotide necesare pentru participarea
la procesele eseniale.
Acest fond se realizeaz prin: sinteza de novo,
interconversia nucleotidelor, conversia parial a
ribonucleotidelor n dezoxiribonucleotide.
7
Biosinteza de novo
a nucleotidelor purinice
Inelul purinic are ca precursori mai multe substane.
Prin ulilizarea pecursorilor marcai s-a stabilit
originea fiecrui atom din acest nucleu.
Prima reacie const n activarea ribozil-5-fosfatului
cu ATP catalizat de PRPP sintetaz.
Produsul format 5-PR--1-PPi este un compus-
cheie n metabolismul nucleotidelor, fiind precursor
i la sinteza triptofanului i histidinei.
8
CO
2
N
C
N
C
C
C
N
N
C
Glicina
Aspartat
N
10
Formil-FH
4
Glutamina
N
5
-N
10
-metenil-FH
4
Sursa de atomi pentru inelul purinic
9
Etapa cheie n sintez decurge n stadiul urmtor,
finaliznd cu formarea 5-fosforibozil-aminei.
Enzima, amidofosforibozil-transferaza este al 2-lea
punct de control al secvenei.
Fora motrice a procesului este hidroliza
pirofosfatului.
Glutamin amidotransferaza poate fi inhibat de analogii
structurali ai glutaminei ca: azaserina i acivicina,
ultima este un agent chemoterapeutic n tratamentul
cancerului.
10
Biosinteza de novo a IMP
O
OH
OH
CH
2
P
O
O
OH
CH
2
P
O
O
P P
ATP
AMP
PRPP sintetaza
1
O
OH
CH
2
NH
2
P
O
Glutamin PRPP
amidotransferaza
2
Gln
Glu
H
2
O
PPi
Ribozo-5-fosfat
PRPP
5-fosfo-beta-
D-riboxilamina
AMP
GMP
I MP
Gln
Gly ATP
ADP +Pi
Glicinamid ribonucleotid
sintetaza
3
O
OH
CH
2
NH
P
C
O
O
CH
2
NH
2
Glicinamid
ribonucleotid
Glicinamid ribonucleotid
transformilaza
H
2
O
I
FH
4
N
5
N
10
-metenil-FH
4
4
O
OH
CH
2
NH
P
C
O
O
CH
2
NH CHO
Formilglicinamid
ribonucleotid
Formilglicinamid
ribonucleotid
amidotransferaza
5
Gln
Glu
ATP
ADP +Pi
OH
OH
OH
OH OH
11
O
OH
CH
2
NH
P
C
O
CH
2
NH CHO
Formilglicinamidin
ribonucleotid
OH
O
OH
CH
2
N
P
C
O
5-amidoimidazol
ribonucleotid
OH
H
2
N
HN
N
CH
HC
O
OH
CH
2
N
P
C
O
5-amino-4-carboxiamino-
imidazol ribonucleotid
OH
H
2
N
N
CH
C
-
OOC
O
OH
CH
2
N
P
C
O
N-succinil-5-aminoimidazol -4-
carboxiamid ribonucleotid
OH
H
2
N
N
CH
C
C O
NH CH
CH HOOC
HOOC
O
OH
CH
2
N
P
C
O
5-aminoimidazol -4-
carboxiamid ribonucleotid
OH
H
2
N
N
CH
C
C
O
H
2
N
O
OH
CH
2
N
P
C
O
N-formilaminoimidazol -4-
carboxiamid ribonucleotid
OH
N
CH
C
C
O
H
2
N
OHC
NH
O
OH
CH
2
N
P
C
O
I nozin-5
,
-monofosfat
(I MP)
OH
N
CH
C
C
O
H
2
N
NH
HC
ATP
ADP +Pi
5-amidoimidazol
ribonucleotid
sintetaza
6
CO
2
7
5-amidoimidazol
ribonucleotid
carboxilaza
ATP
ADP +Pi
N-succinil-5-aminoimidazol-4-
carboxiamid ribonucleotid
sintetaza
Asp
8
Fumarat
9
N-succinil-5-aminoimidazol-4-
carboxiamid ribonucleotid
liaza N
10
-formil-FH
4
FH
4
I
10
5-aminoimidazol-4-
carboxiamid ribonucleotid
transformilaza
H
2
O
I nozin-5
,
- monofosfat
sintaza
11
12
Urmeaz condensarea glicinei (ATP), metenil-FH
4
,
glutaminei (ATP), ATP, CO
2
, aspartatul (ATP),
formil-FH
4
, cu sinteza acidului inozinic sau
inozinmonofosfat.
Sinteza necesit 6 P, ioni de Mg
2+
, K
+
, secvena
este exergonic i ireversibil.
Procesul de sintez este modificat sub aciunea
unor preparate medicamentoase cum sunt analogii
acidului p-aminobenzoic (APAB) i acidului folic.
Sulfonamidele, analogi dup structur cu APAB,
competitiv inhib sinteza de acid folic la bacterii.

13
ntruct sinteza purinelor necesit FH
4
n calitate
de coenzim, preparatele date reduc aceast cale n
bacterii.
n corpul omenesc acidul folic nu se sintetizez i,
deci, este nevoie de surs extern.
De aceea, sulfonamidele, nu impiedic sinteza
purinelor la om.
Metotrexatul i compuii analogi inhib reacia de
reducere a dihidrofolatului n tetrafolat.

14
Ele limitez cantitatea de FH
4
necesar sintezei
purinelor i astfel, diminueaz replicarea DNA n
celulele mamiferelor.
Aceti compui sunt utilizai n terapia cancerului
care se dezvolt rapid, ns sunt toxici pentru toate
celulele care divizez.
Analogii structurali ai purinelor (acicloguanozina
aciclovir) sunt folosii n tratamentul infeciilor
herpetice.
15
Aceti antimetabolii sunt fosforilai de enzimele
celulare sau virale, rezultnd derivai activi care
blocheaz specific DNA-polimerazele virale.
IMP este mai departe convertit n AMP i GMP
conform schemei de mai jos.
Consumarea diferitelor surse de energie ofer
posibilitatea controlului reciproc al sintezei
nucleotidelor cu adenin i guanin.
16
Conversia IMP n AMP i GMP
i reglarea acestor reacii
HOOC CH CH
2
COOH
NH
N
N
N
N
Riboza-5
,
P
Acid adenilo
succinic
Adenilosuccinaza
Acid fumaric
NH
N
N
N
N
Riboza-5
,
P
AMP (acid adenilic)
2
OH
N
N
N
N
Riboza-5
,
P
I MP (acid inozinic)
Acid aspartic
GDP + Pi
GTP
Adenilosuccinat
sintetaza
OH
N
N
N
N
Riboza-5
,
P
XMP (xantozin-5
,
-monofosfat)
HO
OH
2
NAD
+
NADH + H
+
N
N
N
N
Riboza-5
,
P
GMP (acid guanilic)
H
2
N
OH
I MP - dehidrogenaza
NH
3
sau
Glutamina
Glu
ATP
AMP +PPi
GMP - dehidrogenaza
17
Reutilizarea purinelor
La hidroliza acizilor nucleici, nucleozidelor se
formez baze purinice libere, care pot fi utilizate
pentru sintez.
mpreun cu cele sintetizate de novo, alctuiesc un
fond metabolic comun accesibil tuturor celulelor.
Sinteza din produse finite (rencorporarea,
reutilizarea) este mai eficace, mai ieftin pentru
celule, mai ales n celulele cu o mare vitez de
cretere, de regenerare (embrionul, tumorile,
reproducerea).
18
La prima etap are loc condensarea bazei purinice
cu PRPP i crearea direct a ribonucleotidului,
reacie catalizat de fosforibozil transferaze.
Exist o enzim specific pentru adenin (APRT)
adenin-fosforibozil transferaza i alta pentru guanin i
hipoxantin (HGPRT hipoxantin-guanin-fosforibozil
transferaza).

Adenin + PRPP Adenilat + PPi
Hipoxantin + PRPP Inozinat + PPi
Guanin + PRPP Guanilat + PPi
19
O transformare la care sunt supuse purinele libere
sau derivaii lor este dezaminarea, prin care o
funcie NH
2
este nlocuit cu una oxigenat.
Reacia poate avea loc la nivel de nucleotid,
nucleozid sau baz purinic.
Dezaminarea AMP la IMP, sub aciunea AMP
dezaminazei, este calea cea mai probabil de
metabolizare a AMP.
Guanin dezaminaza (guanaza) transform guanina
xantin i inozina hipoxantin.
La mamifere lipsete enzima care transform
adenina n hipoxantin.

20
Reglarea biosintezei
Un mecanism asigur cantitatea de IMP i altul
repartizarea lui ntre AMP i GMP.
Transformarea lor n trifosfai este dependent de
sarcina energetic celular.
Nucleotidele acioneaz ca factori negativi asupra
PRPP sintetazei, amidofosfo-ribozil transferazei,
forma monomeric fiind activ, iar dimeric
inactiv.
21 Reglarea biosintezei nucleotidelor purinice
22
Creterea concentraiei PRPP provoac
depolimerizarea asociat, cu activarea enzimei.
Nucleozidele acioneaz n mod invers, drept
activator servete glutamina.
Aici se mai nregistreaz un control pozitiv reciproc
din partea ATP i GTP.
23
Catabolismul purinelor
Bazele purinice endogene sau exogene, care n-au
fost ncorporate n nucleotide sunt transformate
n acid uric i eliminate pe cale renal.
Nucleotidele pot fi transformate n nucleozide
prin hidroliz, catalizat de 5 nucleotidaze.
O
OH OH
CH
2
O P O
BA
H
2
O
Pi
E
BA R
24
Nucleozidele sunt scindate la baze printr-o
reacie fosforolitic, catalizat de o nucleozid
fosforilaz (E
1
), cu formarea R-1-P care poate fi
izomerizat sub aciunea fosforibozil mutazei
(E
2
) n R-5-P, substrat pentru sinteza PRPP.

BA R
Pi
BA +

R
1
P
E
2
E
1
R
5
P
25
Acidul uric se formeaz din hipoxantin i din
xantin prin oxidare, cu participarea xantin oxidazei.
Enzima este o flavoprotein dimer, ce conine
molibden i Fe
++
.
Psrile i reptilele elimin acid uric, pstrnd apa
n organism, deoarece cristalele lui se elimin cu o
minim cantitate de ap.
Ureea leag cantiti mari de ap.

26
Aceste specii ce elimin acidul uric sunt numite
uricotelice fa de ureotelice (elimin uree).
Acidul uric este un compus greu solubil n ap, pe
cnd monouratul de sodiu este ceva mai solubil.
Pe msur ce procesul de acidifiere a urinei
progreseaz, uratul trece n acid uric.
La un pH = 5,75 uratul i acidul uric coexist n
cantiti egale, iar la pH < 5 predomin acidul
uric mai puin solubil.
27
n 24 ore excreia constituie 400-600 mg.
Acidul uric este o substan uor oxidabil i, prin
capacitatea sa de a capta radicali liberi, este un
factor protector contra agresiunii oxidante continue
la care sunt expuse majoritatea esuturilor
organismului.
28
Patologia metabolismului purinelor
Cteva tulburri afecteaz metabolismul purinelor.
Ele sunt guta i sindromul asociat cu deficien de
HPRT, APRT, adenozin deaminaz, nucleozid
fosforilaz, monoadenilat deaminaz i xantin
oxidaz.
29
Guta
Este un grup heterogen de boli genetice i
dobndite caracterizate de nivele nalte de urat n
snge (hiperuricemia) i de acid uric n urin
(uricurie).
Hiperuricemia la brbai este definit ca
concentraie seric de urat mai mare de 7 mg/dL
(420 mol/L) i la femei 6 mg/dL (357 mol/L).
n gut hiperuricemia este un eveniment biochimic
frecvent, totui muli subieci hiperuricemici pot s
nu dezvolte clinic guta (hiperuricemia
asimptomatic).
30
Toate simptomele clinice de gut cresc de la
solubilitatea sczut a uratului n fluidele biologice.
Solubilitatea maxim a uratului n plasm la 37C
este de aproximativ 7 mg/dL.
Totui, n structuri periferice i la extremiti, unde
temperatura este mai mic dect 37C, solubilitatea
uratului se micoreaz.
Cnd uratul este prezent n soluii suprasaturate,
formarea cristalelor monosodiului monohidrat de
urat are loc mai rapid.
31
Depozite de cristale agregate, cunoscute ca tofus,
n i mprejurul articulaiilor extremitilor iniiaz o
reacie inflamatoare strin corpului (artrit acut)
ce implic leucocitele, complementul i ali
mediatori.
Aceast reacie cauzez dureri severe, umflturi,
roea i fierbineal n locurile afectate.
Atacurile iniiale sunt de obicei acute i frecvent
afecteaz articulaia metatarsofalangian a degetului
mare.
32
Tofusurile de asemenea pot fi prezente n esuturile
subcutanate, cartilaje, oase i rinichi.
Formarea calculilor urinari (urolitiaz) de urat este
frecvent.
Guta este potenial cronic i disfigurativ.
Guta primar este o tulburare a metabolismului
purinic ce se ntlnete mai des la brbai.
Condiia este multifactorial i implic factori
genetici i negenetici.
Frecvena la femei este joas, cnd apare de obicei
este identificat la femei dup menopauz.
33
Concentraia normal de urat n snge la brbai
este ~1 mg/dL, mai nalt dect la femei, dar
aceast diferen dispare dup menopauz.
Astfel, la femei creterea nivelului de urat n ser
dup menopauz poate mri riscul de dezvoltare a
gutei.
Guta se ntlnete rar la copii i adolesceni.
34
Guta primar poate fi cauzat de supraproducia
sau subexcreia acidului uric sau a unei combinaii a
acestora.
Frecvent, persoanele din aceeai generaie sau alte
rude apropiate a indivizilor afectai au niveluri
ridicate de acid uric n snge, dar nu dezvolt guta,
indicnd faptul c hiperuricemia nu este unicul
factor implicat.
Guta renal primar se datoreaz subexcreiei
acidului uric, cauzat de un defect tubular renal n
transportul acestui compus.
35
Guta primar metabolic se datorea
supraproduciei de purine i acid uric.
Predominarea gutei este mai nalt n anumite
populaii (ex. 10% din aduli masculini Maori din
Noua Zeilanda).
n Europa i SUA, rata persoanelor afectate este de
0,13%-0,37%.
36
Guta secundar se dezvolt ca o complicaie a
hipruricemiei cauzat de alte tulburri (ex.
leucemie, nefrit cronic, policetemia).
Acest tip de hiperuricemie, de obicei este asociat cu
o producie anormal de rapid de acizi nucleici.
Cazurile rare de gut la adolsceni i copii sunt de
obicei de acest tip.
37
Supraproducia de PRPP
Mecanismul hiperuricemiei la muli indivizi care au
gut nu este cunoscut.
Se discut ipoteza leziunilor biochimice care duc la
hiperuricemie i pot eventual duce la gut.
Sinteza mrit de PRPP rezult din mutaii la nivelul
cromozomului X-linkat a PRPP sintetazei.
Cteva variante arat un Vmax mrit, rezisten la
inhibiia feed-back sau Km sczut pentru ribozo-5-
fosfat.
38
Niveluri PRPP pot fi de asemenea crescute ca
rezultat al subutilizarii cii purinice
recupertoare.
Astfel, deficiena HPRT (parial sau total)
cauzeaz hiperuricemia ca o trastur X-linkat
recesiv.
n situaiile cnd ATP-ul este consumat mai rapid
dect este sintetizat sau cnd ATP-sintaza este
afectat, ADP i AMP se acumuleaz i eventual
este convertit n acid uric.
39
Hiperuricemia poate aprea n condiii hipoxice
(ex. sindromul adult al deficienei respiratorii),
deficiena glucozei-6-fosfat i boal acut (ex. oc
hemoragic sever).
Astfel hiperuricemia poate servi ca un marker
pentru crizele energetice celulare.
40
Ingestia de etanol cauzeaz hiperuricemia datorat
degradrii crescute a ATP-ului la AMP.
Cel din urm, apare n metabolismul etanolic n
timpul conversiei acetatului la acetilCoA.
n toate aceste instane a produciei de acid uric de
ctre xantin-oxidaza, nivelul formrii produselor
citotoxice din aceste reacii ca peroxidul de
hidrogen i radicalul superoxid, de asemenea este
crescut.
41
Pacieniii cu dificien de glucoz-6-fosfat (boala
depozitrii de glicogen de tip I) manifest
hiperuricemie din copilrie i unii dezvolt guta mai
trziu.
Din cauza hipoglicemiei lor, aceti pacieni
dezvolt o acidemie hiperlactic marcat i lactatul
reduce eliminarea renal de acid uric, supresnd
secreia lui tubular.
42
Excreia renal de urat este comlex, cuprinznd
filtrarea glomerular, reabsorbia tubular i secreia
tubular.
Se presupune c uratul n urin este crescut n urma
secreiei tubulare.
Producia crescut de acid uric n deficiena
glucozei-6-fosfat a fost atribuit produciei mrite
de ATP i ca urmare epuizarea nucleotidelor
adenilice, cu inhibarea feed-back-ului de ctre
amidofosforiboziltransferaz i a accelerrii de
novo a sintezei de nucleotide purinice.
43
Nivelurile sczute de ATP i Pi rezult din prezena
nivelurilor crescute de intermediari glicolitici
fosforilai.
Un mecanism similar a fost propus pentru
hiperuricemia ce rezult la administrarea
intravenos a fructozei la oameni.
Producia excesiv de acizi organici duce la niveluri
ridicate de acid uric.
44
Lactatul, acetoacetatul i -hidroxibutiratul
(ultimele dou sunt cunoscute ca corpi cetonici)
concureaz cu acidul uric pentru secreia efectuat
de tubii renali.
Acidemia lactic poate aprea n deficiena
glucozei-6-fosfat i la ingestia alcoolului.
Cetonemia i cetonuria apar n diabetul netratat,
inaniie, deficiena de glucoz-6-fosfat.
45
Tratamentul gutei
O serie de medicamente sunt folosite n controlul
gutei n 3 situaii clinice:

1. A trata guta acut artritic;
2. A preveni atacurile acute;
3. A scdea concentraiile serice de urat.
46
Atacurile de gut acut frecvent afecteaz prima
ariculaie metatarsian a piciorului.
n fluidele aspirate din articulaie, cristalele de urat
pot fi vzute la microscopul luminiscent polarizant,
ce este folosit la diagnoza definitiv.
Tratamentul gutei acute include administrarea de
colchicine, medicamente nesteroide
antiinflamatoare (NSAIDs), corticosteroizii,
hormonul adrenocorticotrop (ACTH) i analgezice.
Colchicina i NSAID de asemenea pot fi folosite
profilactic pentru a preveni atacuri acute la
pacienii cu gut.
47
Medicamentele folosite pentru a scadea
concentraiile serice de urat sunt probenecidul,
sulfinpirazon, allopurinol.
Colchicina depolimerizeaza microtubulii i structuri
ca fusul mitotic, constituit din microtubuli.
Ea este efectiv pentru scderea durerilor i
frecvenei atacurilor, dar mecanismul aciunii lui
este necunoscut.
Allopurinolul, un analog al hipoxantinei, inhib
xantin-oxidaza i reduce formarea xantinei i a
acidui uric.
48
El este convertit de xantin-oxidaz la alloxantin, ce
leaga strns la centrul activ Mo
4+
.
Aceasta reduce reoxidarea Mo
4+
la Mo
6+
i
afecteaza activitatea catalitic.
Acest tip de inhibitor n care un substrat analog este
convertit la un inhibitor i nu sunt eliberate de la
centrul activ, este cunoscut ca inactivator enzimatic
suicidal sau ca mecanism bazat pe inhibitor.
Allopurinolul de asemenea este convertit de HPRT
la allopurinol ribonucleotid.
49
Producerea de acid uric este scazut prin epuizarea
de PRPP.
Allopurinolul ribonucleotid, de asemenea inhiba
alosteric PRPP-amido transferaza.
Att timp ct xantina este i un produs, i un
substrat pentru xantin-oxidaza, terapia cu
allopurinol poate cauza acumularea xantinei n
organism.
Xantina este puin solubil n urin (dar mai
solubil ca acidul uric), aceasta poate cauza xantin
cristaluria urinar sau formarea de pietre.
50
Aceast complicaie nu a fost observat la pacienii
care au primit medicamente pentru tratarea gutei
sau a pietrelor acidului uric, dar ea s-a manifestat la
civa pacieni cu sindromul Lesch-Nyhan,
limfosarcoma.
Medicamentele ce cresc excreia acidului uric includ
probenecidul, ce este efectiv n reglarea
hiperuricemiei i n prevenirea tofusului, i
sulfinpirayon, ce are efecte similare.
Ambii ageni sunt acizi organici slabi i probabil
acioneaza ca inhibitori competitivi n reabsorbia
tubulara a acidului uric.
51
Nivelurile serice a uratului pot scdea n urma
dietei i a schimbrilor n stilul de viaa.
Acestea includ corecia obezitii, evitarea
consumarii etanolului i evitarea alimentelor cu
nivel nalt de purine (ex. carnea).
Pseudoguta este o tulburare cauzat de depozitarea
pirofosfatului de calciu dehidratat n articulaiile
mari ca genunchii, incheietura minii i glezna.
52
Sindromul Lesch-Nyhan
Acest sindrom este caracterizat de o absen
virtuala de HPRT, producie excesiva de acid uric
i anormalitai a SNC.
Aceste anormalitati includ retard mintal, spasme
(tensiunea muscular crescut ce rezulta n
continua cretere a rezistenei la ntindere),
horeoatetoz (caracterizat de micri involuntare
neregulate, explozive i de zbateri, i agitatie ce
implic orice extremitate sau trunchi).
53
Tulburarile asociate cu deficiena parial de
HPRT de asemenea duce la hiperuricemie, ns
lipsesc trsturile devastrii neurologice
caracteristice sindromului Lesch-Nyhan.
Ambele tulburari sunt X-linkate.
Hiperuricemia la pacienii cu Lesch-Nyhan este
explicat parial prin faptul acumulrii intracelulare
a PRPP care duce la creterea biosintezei de novo a
nucleotidelor purinice i astfel crete producia de
acid uric.
54
Astfel de pacieni nu dezvolt guta artritica
prematur, dar manifest cristaluria acidului uric i
formarea de pietre.
La pacienii Lesch-Nyhan, toate esuturile sunt
lipsite de HPRT.
Aceste tulburri pot fi detectate prin orice test de
HPRT n eritrocite i fibroblati.
55
Testul anterior a fost folosit pentru detectarea strii
heterozigote.
HPRT este o enzima citozolica format din 217
aminoacizi, codificata de o singura gena din
cromozomul X.
Cteva mutaii a genei HPRT sunt cunoscute.
Mutaiile includ alterari majore a genelor i mutaii
missens cauznd sau guta artritica, sau sindromul
Lesch-Nyhan.
56
Un exemplu a mutaiei missens ce cauzeaza
sindromul este HPRT-Kinston, ce are substituit
asparagina n locul acidului asparagic n poziia 194.
Enzima mutant prezent ntr-o concentraie
similar cu a unei enzime normale este
incompetenta catalitic din cauza valorilor Km nalte
pentru hipoxantin i PRPP.
57
Mecanismul prin care deficiena de HPRT cauzeaza
tulburari ale SNC rmne necunoscut.
Pacienii cu Lesch-Nyhan nu manifest
anormaliti anatomice ale creierului.
La subiecii normali activitatea HPRT este nalt n
creier i n particular n ganglionul bazal unde
biosinteza de novo a purinelor este sczut.
Aceasta sugereaza importana cii purinice
salvatoare n acest esut.
58
Cu toate acestea relaia dintre deficiena HPRT i
manifestrile neurologice nu este neleas.
Cea mai semnificativ anormalitate n sistemele
neurotransmitoare este n calea dopaminergic.
Nu este cunoscut tratamentul tulburrilor SNC.
Allopurinolul a fost folosit n reglarea
hiperuricemiei.
59
Degradarea nucleotidelor purinice. Defectele
genetice i asociate cu aceast cale
AMP
Adenina
IMP
Inozina
Hipoxantina (ceto forma)
Xantina (ceto forma)
Acid uric
Guanina
Guanozina
GMP
N
N
N
N
O
H
H
N
N
N
N
O
H
H
NH
2
N
N
N
N
O
HO
H
H
N
N
N
N
O
HO
OH
H
H
H
2
O
NH
3
AMP dezaminaza
H
2
O
H
2
O
Pi
Pi
5
- nucleotidaza
5- nucleotidaza
5- nucleotidaza
H
2
O
Pi
H
2
O
2
H
2
O +O
2
Xantin
oxidaza
Xantin
oxidaza
H
2
O +O
2
H
2
O
2
H
2
O
NH
3
Guanin
deaminaza
Adenozin
deaminaza
H
2
O
NH
3
H
2
O
H
2
O
Riboza
Riboza
Nucleozidaza
Nucleozidaza
AMP
Adenina
IMP
Inozina
Hipoxantina (ceto forma)
Xantina (ceto forma)
Acid uric
Guanina
Guanozina
GMP
N
N
N
N
O
H
H
N
N
N
N
O
H
H
NH
2
N
N
N
N
O
HO
H
H
N
N
N
N
O
HO
OH
H
H
H
2
O
NH
3
AMP dezaminaza
H
2
O
H
2
O
Pi
Pi
5
- nucleotidaza
5- nucleotidaza
5- nucleotidaza
H
2
O
Pi
H
2
O
2
H
2
O +O
2
Xantin
oxidaza
Xantin
oxidaza
H
2
O +O
2
H
2
O
2
H
2
O
NH
3
Guanin
deaminaza
Adenozin
deaminaza
H
2
O
NH
3
H
2
O
H
2
O
Riboza
Riboza
Nucleozidaza
Nucleozidaza
60
Deficiena adenin
fosforiboziltransferazei
APRT izolat din eritrocite este un dimer, fiecare
subunitate avnd o greutate molecular de 19481
Da, gena e localizat pe cromozomul 16.
Aceast trstur autosomal recesiv rezult n
incapacitatea de a recupera adenina, care se
acumuleaz i se oxideaz la 2,8-dihidroxiadenina
de ctre xantin oxidaza.
Anormalitatea clinic principal este excreia
urinar a 2,8-dihidroxiadeninei ca material
nesolubil.
61
Aceste pietre pot fi confundate cu cele de urat la o
analiz de rutin.
Astfel analizele biochimice sunt necesare n
particular la grupa de vrst pediatric pentru a
identifica deficiena APRT la indivizi.
Tulburrile neurologice caracteristice deficienei de
HPRT nu sunt gsite n deficiena APRT, indicnd
c APRT poate s nu joace un rol semnificativ n
toate reglrile metabolismului purinic.
Deficiena APRT este tratat cu o diet ce conine
cantiti mici de purine i allopurinol.
62
Deficitul de adenozin deaminaz (ADA) i deficitul
fosforilrii nucleotidelor purinice (PNP)
Deficitul ADA i PNP sunt trasturi autosomal
recesive ce cauzez desfuncia sistemului imun.
Ambele funcii enzimatice implicate n conversia
adenozinei i a dezoxiadenozinei la hipoxantin.
PNP este de asemenea implicat n conversia
guanozinei i a dezoxiguanozinei n guanin.
n deficiena ADA i PNP substratele potrivite se
acumuleaz alturi de alte produse care pot cauza
un efect toxic asupra celulelor sistemului imun.
63
Pacienii cu deficiena ADA nu au funcii mediate
de limfocitele T i B, numite imunitate celular i
umorala.
Se manifest o tulburare sever a imunodeficienei
(SCID).
Alte tulburri genetice pot cauza SCID, dar
tulburarea ADA este responsabil de apariia SCID
la aproximativ 1/3 din pacieni.
64
Deficiena PNP este asociat doar cu disfuncia
limfocitelor T.
Mecanismele exacte responsabile de disfuncia
sistemului imun nu sunt cunoscute.
n deficiena ADA limfocitele T sunt crescute i e
crescut concentraia de dATP, similar deficiena de
PNP manifest mrirea limfocitelor T n majorarea
concentraiei de dGTP.
Ambele dATP i dGTP inhib ribonucleotid
reductaza, cauzeaz o reducere de alte
dezoxiribonucleotide (UDP, CDP) care sunt
necesare pentru sinteza DNA i inhib diviziunea
celular.
65
S-adenozilhomocisteina (SAH) de asemenea se
acumuleaz i inhib metilrile necesare pentru
funcionarea normal a celulei.
Acumularea de SAH rezult n inactivarea SAH
hidrolazei de dezoxiadenozin.
La hidroliza de SAH, substratul sufer o oxidare
temporar efectuat prin intermediul NAD, care
este strns cuplat la enzim.
Aceast reacie eventual duce la hidroliza
substratului i la reoxidarea NADH.
66
Dezoxiadenozina se leag la enzim i sufer iniial
oxidarea la un intermediar cetozaharic, ce este
instabil i se descompune cu eliminarea de adenin,
prsind enzima n form redus.
Cataliza este stopat i NAD/NADH+H exogen
nu poate afecta reacia.
Astfel, inactivarea de hidrolaza SAH prin conversia
enzimei leaga NAD la NADH este o inactivare in
care nici o modificare covalenta a enzimei nu este
implicat.
67
Disfuncia sistemului imun n deficiena ADA a
fost de asemenea atribuit inhibiiei sintezei de
nucleotide pirimidinice de ctre adenozin,
cunoscut sub denumirea de foamete pirimidinic.
Aceasta poate duce de la inhibiia conversiei
acidului orotic la orotidin 5-monofosfat sau prin
inhibiia sintezei de PRPP prin sinteza excesiv de
nucleotide adenilice.
68
Deficiena ADA cauzeaz moarte prin infecie
masiv nainte ca pacienii s implineasc vrsta de
2 ani.
Unii copii cu deficit ADA i PNP au benificiat prin
infuzie periodic de eritrocite iradiate (care conine
ADA i PNP).
Iradierea eritrocitelor este necesar pentru
inactivarea celulelor albe a sngelui ce pot fi
prezente i astfel a reduce riscul bolii.
69
Deficienta PNP de obicei cauzeaz hipouricemia i
hipouricozuria, i excreia de inozin, guanozin,
dezoxiinozin i dezoxiguanozin.
Alt mod de terapie n substituirea enzimelor este
administrarea periodic a unei forme de polietilen-
glicol modificat, prin injecie intramuscular.
Enzima modificat, ce este preparata prin
conjugarea la polietilen glicol cu ADA purificat
(PEG-ADA), posed o via mai lung.
Ca consecin are loc corecia a 2 anormaliti
biochimice, numite: acumularea de metabolii toxici
fosforilai i inhibiia de SAH hidrolaza.
70
Terapia prin substituirea genelor poate fi posibil i
n deficiena ADA, ct i de PNP.
Celulele T modificate sunt rentroduse n fluxul
sanguin a pacientului.
Pacienii au aratat mbuntiri clinice att timp ct
au continuat s primeasc tratamentul cu
PEG-ADA.
71
Deficit de monoadenilat deaminaza
Este o tulburare musculara benigna caracterizat de
o istovire.
Relaia dintre disfuncia muchilor scheletici i
deficiena de AMP deaminaza se explic prin
ntreruperea ciclului purinic.
Ciclul nucleotidelor purinice const din conversia
de AMP-IMP-ATP i necesit AMP deaminaza,
adenilosuccinat sintetaza i adenilosuccinat liaza.
Fluxul prin acest ciclu creste n timpul exerciiilor
72
Au fost naintate cteva mecanisme pentru a explica
cum creterea n flux este responsabil de
meninerea nivelurilor energetice proprii n timpul
exerciiilor:
o 1. n timpul contraciilor musculare activitatea AMP
deaminazei crete.
Nucleotidele trifosfatidice sunt modulatori negativi,
unde nucleotidele mono- i difosfatidice sunt
modulatori pozitivi a enzimelor.
o 2. NH
3
produs n reacia AMP deaminazei i
nivelurile sczute de ATP ca rezultat a exerciiilor
stimulate de fosfofructokinaza pentru a spori rata de
glucoz utilizat.
73
o 3. Concentraia crescut de IMP poate activa
glicogen fosforilaza.
o 4. Producia de fumarat poate spori ciclul TCA cnd
necesitatea de producie de ATP crete.
o 5. Formarea de IMP poate intreine un mijloc prin
care fondul intracelular de nucleotide purinice este
meninut.
Deficiena AMP deaminazei ntrerupe ciclul
nucleotidelor purinice i duce la disfuncii musculare
n timpul exerciiilor.
Deficiena AMP deaminazei nu trebuie s cauzeze
disfuncii musculare n timpul odihnei.
74
Metabolismul
nucleotidelor pirimidinice
Primul metabolit carbamoil-fosfatul este comun i
pentru ureogeneza ce se sintetizeaz n
mitocondrii, n cazul pirimidinelor n citozol.
Enzimele utilizeaz surse diferite de azot NH
3

ureogeneza i glutamina n pirimidinogenez.
Enzimele sunt distincte (2-carbamoil-fosfat
sintetaze).
Consecutivitatea reaciilor e reprodus mai jos.
Biosinteza de novo
75
Sinteza pirimidinelor i
unele defecte metabolice
HOOC CH
NH
2
(CH
2
)
2 C
O
NH
2
HOOC CH
NH
2
(CH
2
)
2 C
O
OH
2ATP
2ADP
ATP
ADP +Pi
CO
2
Pi
NH
3
NH
2
C
OH O
CO
2
NH
3
NH
2
C
O O P
ATP
ADP
(1)
(2)
HN
C
N
CH
CH
2
C
COOH
O
O
H
HO
C
N
CH
CH
2
C
COOH
O
O
H
2
N
H
HO
H
2
N
CH
CH
2
C
COOH
O
Carbamoil kinaza
Acid carbamic
Carbamoil fosfat
Glutamin
sintetaza
Carbamoil fosfat
sintetaza
Glutamina
Acid glutamic
+
Acid aspartic
Aspartat
transcarbamoilaza
Dihidroorotaza
NAD
+
NADH +H
+
Dihidroorotat
dehidrogenaza
(3)
(4)
HN
C
N
CH
CH
C
COOH
O
O
H
Acid carbamoil aspartic
Acid dihidroorotic
Acid orotic
O
P
CH
2
O
OH OH
P
O
P
PRPP
+
O
CH
2
O
OH OH
P
O
HN
C
N
CH
CH
C
COOH
O
O
O
CH
2
O
OH OH
P
O
HN
C
N
CH
CH
C
O
O
(5)
(6)
Orotodin-5
,
-monofosfat (OMP)
Uridin-5
,
-monofosfat (UMP)
OMP-decarboxilaza
Orotat-fosfo-ribozil
transferaza
CO
2
PPi
H
2
O Pi
76
Reacia-cheie este catalizat de aspartat
transcarbamoilaz cu sinteza N-carbamoil-aspartat,
apoi are loc ciclizarea lui, cu eliminarea H
2
O.
Enzima dihidroorotaza catalizeaz formarea
acidului dihidroorotic, dup care dehidrogenaza
NADd formeaz acidul orotic.
Transferul restului P-ribozil de la PRPP, graie unei
transferaze succedat de decarboxilarea acidului
orotidilic, finalizeaz ciclul de reacii, formndu-se
UMP.
77
Enzimele 1-3 i 5-6 au o localizare citozolic i
numai E
4
mitocondrial.
Enzimele citozolice formeaz 2 complexe
multienzimatice.
Primul complex duce la sinteza (1-3) acidului
dihidroorotic, care difuzeaz n mitocondrii, unde
este dehidrogenat de E
4
(pe membrana intern),
apoi produsul trece n citozol, unde este supus
aciunii complexului multienzimatic urmtor (5-6).

78
Enzimele n complexe se sintetizeaz n cantiti
echimolare.
La deficien de OMP-decarboxilaz i orotat-fosfo-
ribozil transferaza, care prezint domenii separate ale
aceluiai polipeptid, apare orotataciduria.
Boala debuteaz timpuriu i se caracterizeaz prin
creterea anormal, anemie megaloblastic i
excreie excesiv de orotat n urin.
79
Dieta bogat n uridin amelioreaz anemia i
diminueaz eliminarea orotatului.
Administrarea uridinei, a citadinei care sunt
convertite n derivaii respectivi reia diviziunea
celular i amelioreaz situaia.
UTP sintetizat stopeaz sinteza acidului orotic
(efect inhibitor asupra carbomoil-fosfat sintetazei).
80
De la UMP, prin fosforilare se obin celelalte
nucleotide pirimidinice graie enzimelor E
1
-
nucleozidmonofosfo kinaza i E
2
-
nucleoziddifosfo kinaza:


CTP se obine din UTP conform reaciei:

UTP + Glutamina + ATP + H
2
O
CTP + Glutamat + ADP + Pi + 2H
+
Enzima ce catalizeaz aceast reacie este
CTP-sintetaz


UMP UDP
UTP
ATP
ADP
ATP
ADP
E
1
E
2
81
Sinteza dezoxiribonucleotidelor are loc prin reducerea
ribonucleotidelor la 2 a difosfailor.
Electronii sunt transferai pe substrat prin SH
grupe.
Tireodoxina reperezint o protein mic.
Enzima tireodoxin reductaza e o flavoprotein ce
reduce tireodoxina.
Enzima ribonucleotid reductaza, pentru activitate,
necesit vit. B
1
, vit. B
2
,Mg
2+
.
82
Reducerea ribonucleotidelor n dezoxiribonucleotide
83
Ea const din dou subuniti R
1
i R
2
:R
1
are
locusuri de fixare a substraturilor ribonucleotidice,
efectorilor alosterici, conine grupe SH, donatori de
electroni la reducerea restului ribozil;
R
2
e o protein ce conine Fe i S, participnd la
formarea unui radical liber al restului de tirozin,
funcioneaz n ansamblu.
n structura DNA e prezent i timina, analog
metilat al uracilului.
84
Structura i reglarea ribonucleotid reductazei
85
Cum se sintetizeaz acest dezoxiribonucleotid ?
Se metileaz dezoxiribonucleozid monofosfatul
(dUMP).
Enzima e timidilat sintaz.
Donator de CH
3
servete tetrahidrofolatul i nu S-
adenozil metionina.
N
5
,N
10
metilen-FH
4
, cednd grupa CH
3
, se
oxideaz la dihidrofolat FH
2
, pierznd H
2
necesari
pentru formarea grupei CH
3
.
86
Regenerarea FH
4
are loc sub aciunea enzimei
dihidrofolat reductazei, utiliznd NADPH.
esuturile n diviziune, unde are loc o sintez rapid
de TMP, sunt foarte sensibile la inhibiia dihidrofolat
reductazei.
De aceea n chimioterapia cancerului ca factor de
inhibiie poate fi folosit i timidilat sintaza.
Fluoruracilul (analog al uracilului) ireversibil inhib
timidilat sintaza, formnd legturi covalente ntre
componenii reactivi i enzim.

87
O
H
CH
2
P O
dUMP
OH
N
HN
O
O
O
H
CH
2
P O
dTMP
OH
N
HN
O
O
C
H
H
H
N
HN
N
N
H
2
N
O
H
CH
2
C
H
H N R
H
N
HN
N
N
H
2
N
O
CH
2
N R H
N
HN
O
O
CH
3
HOCH
2
O
H H
H
H
H
N N N
N
HN
N
N
H
2
N
O
CH
2
N R
H
H
H
H
N
HN
N
N
H
2
N
CH
2
N
CH
3
NH
2
H
H
C CH
2
CH
2
COO
-
NH CH
COO
-
N
5
,N
10
- metilen - FH
4
7,8-dihidrofolat
AZT
Tetrahidrofolat
Metotrexatul
Fluoruracilul
Timidilat sintaza
NADPH + H
+
NADP
+
Glicina
Serina
PLP
Serin
hidroximetil
transferaza
Dihidrofolat
reductaza
Sinteza TMP
88
Aminopterina, ametopterina (metotrexatul) sunt analogi ai
acidului folic, inhibitori competitivi ai dihidrofolat
reductazei.
mpiedic diviziunea celular i 6-mercaptopurina, 6-
tioguanina.
Un analog structural al nucleotidelor pirimidinice
este azidotimidina (AZT), utilizat n tratamentul
infeciilor cu virusul imunodeficienei umane
89
Reglarea metabolismului pirimidinic
Reglarea este fin, alosteric.
dATP inhib reducerea sa i stimuleaz reducerea
pirimidinelor dUDP,dCDP.
TTT frneaz reducerea pirimidinelor i stimuleaz
reducerea purinelor.
Reglarea biosintezei poate fi redat n felul urmtor:
CO
2
+ 2ATP + Gln Carbamoil fosfat Carbamoil aspartat UMP UTP
CTP
E
1
E
2
UMP
Glutamina
PRPP
GTP
ATP
Aspartat
90
Aspartat transcarbamoilaza (ATS-E
2
) reprezint o
enzim compus din dou subuniti catalitic i
reglatoare.
Activarea ATS de ctre ATP are n consecin:

1) echilibrarea vitezei de sintez a nucleotidelor
purinice i pirimidinice;
2) semnaleaz prezena ATP-ului n concentraii
suficiente ca substrat pentru sinteza pirimidin
nucleotidelor (UMP i carbamoil fosfatului).
91
Sistemul de reglare e destul de complicat, dar
asigur sinteza unor cantiti echilibrate ale tuturor
celor 4 dezoxiribonucleotide.
Evident c ribonucleotid reductaza posed stri
conformaionale cu diferite proprieti catalitice.

92
Reutilizarea i catabolismul
nucleotidelor pirimidinice
Fondul metabolic al acestor compui include
compui sintetizai de novo i cei eliberai din acizii
nucleici, acizii nucleici exogeni nu contribuie la
formarea acestui fond.
n metabolismul pirimidinelor au loc reacii similare
cu cele descrise la purine.


Nucleozidele pirimidinice sunt reciclate dup
fosforilare.
Nucleotid
Nucleozid
Baza pirimidinica
E
1 E
2
H
2
O Pi
Pi
R 1 P
Nucleozid
Nucleotid
Kinaza
ATP
ADP
93
O kinaz accept ca substrat uridina i citidina, iar
alta timidina.
La purine aceast cale metabolic este de mic
importan, nsi adenozina fiind fosforilat n
ATP.
Bazele pirimidinice nu sunt reutilizate, ci degradate
n compui cu molecul mic.
-alanina i acidul -amino-izobutiric sunt excretai sau
catabolizai n cile respective
94
Metabolismul cromoproteinelor
Structura hemoglobinei.
Reprezint proteine complexe, avnd ca
constituieni o protein simpl i un component
neproteic ionii metalici ai unor heterocicluri
diverse, dintre care cei mai importani sunt hemul
hemoproteidele cu derivaii si: hemoglobina (Hb),
mioglobina, sistemul citocromic, catalaza, peroxidaza i
eritrocruorinele proteine situate n sngele i
esuturile unor nevertebrate.
O protein fieroporfirinic este i triptofan pirolaza.
95
Patologia molecular a hemoglobina
Spre deosebire de Hb-A (Hb omului adult), exist i
Hb patologice.
La anemia falciform se nregistreaz Hb-S primul
exemplu de boal molecular descris.
Hb-S se caracterizeaz prin prezena n caten (n
poziia 6, la captul N terminal), n locul acidului
glutamic, a valinei, la care se diminueaz
solubilitatea hemoglobinei dezoxigenate.
Solubilitatea Hb S oxigenate nu se modific.
96
Aceast schimbare conduce la apariia unui
fragment capabil de agregare.
Dup eliberarea O
2
, are loc o transformare
conformaional, cu apariia la suprafa a acestor
zone ce conduc la agregarea moleculelor de Hb, la
care se formeaz agregate mari, lungi, simultan
deformnd eritrocitul, care capt o form
drepanocitar.
Cinetica formrii fibrelor de dezoxihemoglobin are
o importan primordial, cci de ea depinde
configuraia adevrat a eritrocitului care trece prin
capilare (timp de 1 secund).
97
Procesul depinde de concentraia Hb-S.
Scderea concentraiei de 2 ori (la heterozigoi)
micoreaz viteza de formare a fibrelor de 1000 ori.
Indivizii heterozigoi sunt rezistente la malarie, nu
atest anemie drepanocitar caz tipic de
polimorfism balansat adaptabil.
Sunt remarcate mai mult de 100 de Hb defectate,
fr influen sau cu efect nociv.
98
Se difereniaz cteva tipuri de anomalii ale Hb:
a) Substituirile n partea exterioar a moleculei de
Hb, practic, sunt benigne, cu excepia Hb S.
b) Se modific centrul activ. n Hb M histidina
proximal sau distal e substituit cu tirozina ce
conduce la stabilizarea formei oxidate (fieri)
complex al tirozinei cu Fe. Substituirea se poate
produce n catenele i . Au fost depistate toate
cele 4 variante mutante. Hb cu dou hemuri n
fieriform Hb M (methemoglobin) se atest
la heterozigoi; la homozigoi duce la un sfrit
letal;
99
c) Modificri n structura teriar. n cazul dat
formarea conformaiei normale a moleculelor nu
are loc i astfel de tipuri de hemoglobin nu sunt
stabile (glicina e substituit cu arginina). Sunt
nregistrate Hb incapabile s rein hemul datorit
modificrilor conformaionale.
d) Modificri n structura cuaternar. Aceste mutaii
ating. Regiunea contactelor, ceea ce cauzeaz
pierderea proprietilor alosterice nsoit de
tulburri ale afinitii fa de O
2
.

100
Modificrile n regiunea contactului
1
,
2
conduc
la cooperativitate joas, concomitent sporind
afinitatea la O
2
.
Contactele ntre subunitile de acelai tip sunt
polare, iar ntre subunitile de tip diferit mai
intense i nepolare.
Se atest cteva cazuri:
1) Substituirea aspartatului n caten cu asparagina
micoreaz P
50
de la 26 la 15 tori (Hb-Kempsey).
2) Substituirea n caten a aspartatului cu treonin
mrete afinitatea la P50 egal cu 50 tori (Hb-
Kansas).

101
Sinteza hemului
Experimentele cu administrarea atomilor marcai,
efectuate de David Shemin cu colaboratorii, au
demonstrat c precursorul hemului se formeaz
prin condensarea glicinei cu succinatul activ la
sinteza amino-levulinatului.
Reacia este catalizat de -amino-levulinat sintaz
(E
1
) dependent de vit.B
6
.
Amino levulinat sintaza este o enzim
mitocondrial reglatoare.
102
-
OOC CH
2
N
C
CH
2
CH
2
COO
-
H
2
H
2
N
N
N
N
N
H
H
H
H
H
CH
2
CH
2
H
2
C
H
2
C
A
A
A
A
P
P
P
P
N
N
H
H
CH
CH
HC
HC
N
N
M
M
M
M
P
P
V
V
N
CH
CH
HC
HC
N
N
N
Fe
M
M
M
M
P
P
V
V
Hem
Protoporfirina IX
Uroporfirinogen
Porfobilinigen
(condensarea a 4 molecule)
Fe (II)
2H
+
Fierochelataza
Cosintetaza
(uroporfirinogen sintaza)
uroporfirinogen III
-cosintaza
-decarboxilaza
coproporfirinogen
oxidaza
4NH
3
Formarea hemului
V-vinil, M-metil, P-propionil
103
Viteza de reacie crete n lipsa hemului.
Apoi 2 molecule de -amino-levulinat se
condenseaz, cu formarea porfobilinogenului.
E o reacie catalizat de o dehidrataz (E
2
).
Enzima este localizat n citozol, conine Zn i
este inhibat de ionii de plumb.
n consecin, 4 molecule de porfobilinogen se
condenseaz, formnd un tetrapirol, care,
dezaminndu-se, se ciclizeaz producnd
uroporfirinogenul.
104
Prin decarboxilare i oxidri succesive, se produce
protoporfirina IX.
O hemosintetaz, enzim mitocondrial, introduce
fierul; enzima conine grupa SH.
Pentru sinteza hemului sunt necesari i urmtorii
compui: acidul tetrahidrofolic, vit.B
12
, Cu
2+
.
Fierul este transferat de o transferin Fe
3+
, ce
reprezint o protein.
O alt protein l depoziteaz n esut sub form
de feritin.
105
Cavitatea interioar a acestei proteine poate fixa
pn la 4500 fierioni.
n organism se conin aproximativ 4,5-5,0 g de
Fe; pe contul Hb = 60-70%; mioglobinei = 3,5-
5,0%; fieritinei = 20%; transferinei = 0,18%,
fierului funcional din esuturi i revine 5%.
Firete, fierul cromoproteidelor alimentare nu se
utilizeaz pentru sinteza fieroproteidelor din
organism, deoarece hemul se oxideaz n
hematina care nu se absoarbe n intestin.
106
Acest pigment se elimin prin masele fecale.
Drept surs de fier pentru scopuri sintetice
servesc alimentele i, de asemenea, fierul ce se
elibereaz la degradarea eritrocitelor.
n procesul sintezei cele trei enzime enumerate
se regleaz prin retroinhibiie de hem.
107
Sinteza
porfobilinogenului
CH
2
COO
-
NH
3
-
OOC CH
2
CH
2
C
O
CoA
-
OOC CH
2
CH
2
C
O
CH COO
-
NH
3
-
OOC CH
2
CH
2
C
O
CH
2
NH
3
N
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
COO
- -
OOC
H
2
N
H
Succinil-CoA
Glicina
CoA
CO
2
2H
2
O
Hemina
Plumb
Condensarea moleculelor
-amino
levulinat
sintaza
-aminolevulinat
dehidrataza
-aminolevulinat
Porfobilinogen
108
Degradarea hemului
Eritrocitele vieuiesc aproape 120 zile.
Zilnic se degradeaz i se sintetizeaz n organism 6-
7 grame de hemoglobin.
Celulele vechi sunt eliminate din sistemul circulant
i scindate n splin de celulele sistemului
macrofagal.
La prima etap hemoglobina eliberat prin liza
hematiilor mbtrnite formeaz cu haptoglobina un
complex Hb-haptoglobina (o
2
-glicoprotein
seric).
109
Complexul este supus oxidrii enzimatice
microzomale, cu formarea unor compui
intermediari ca coleglobina, verdoglobina, care apoi
pierd globina, transformndu-se n hem.
Globina se hidrolizeaz pn la aminoacizi, iar fierul
din hem este fixat de transferina plasmei, apoi poate
fi depozitat n ficat i reciclat.
Reacia de degradare a hemului const n scindarea
punii metenilice , cu deschiderea ciclului
tetrapirolic (fig.6,62, pag.432).
110
Globina
Macrofage
Hem
NADPH +H
+
NADP
+
O
2
Fe
2+
CO
Hemoxigenaza
N O C
M V
N C
P M
N C
M P
N O
M V
H H H H H H
N O C
M V
N C
P M
N C
M P
N O
M V
H H H
2
H H H
NADPH +H
+
NADP
+
Biliverdin
reductaza
Biliverdina
Bilirubina
Ficat
2UDP-glucuronat
2UDP
Transferaza
Globina
Macrofage
Hem
NADPH +H
+
NADP
+
O
2
Fe
2+
CO
Hemoxigenaza
N O C
M V
N C
P M
N C
M P
N O
M V
H H H H H H
N O C
M V
N C
P M
N C
M P
N O
M V
H H H
2
H H H
NADPH +H
+
NADP
+
Biliverdin
reductaza
Biliverdina
Bilirubina
Ficat
2UDP-glucuronat
2UDP
Transferaza
Snge
Complexul
bilirubin-proteine
Bil
Verdoglobina
Bilirubin diglucuronid
Formarea bilirubinei
111
Reacia este catalizat de hemooxigenaza numit i
-metinil-oxigenaza, care are dou particulariti:
a) se prezint drept o monooxigenaz solicitant de
O
2
i NADPH.
b) carbonul punii metenilice se elimin sub form
de CO. Particip n calitate de cofactori, vitamina
C, Fe
2+
. Aceasta este unica reacie n organism
unde se elibereaz CO.
112
Ulterior, puntea metenilic central n biliverdin se
reduce sub aciunea biliverdin reductazei, utiliznd
NADPH, cu formarea bilirubinei.
Biliverdin reductaza este prezent n numeroase
esuturi, dar prioritar n ficat.
n mod normal, bila conine numai urme de
biliverdin, dar graie culorii sale intense, ea imprim
bilei o culoare verzuie.
Bilirubina liber n exces este un decuplant al
fosforilrii oxidative, ce duce la inhibarea sintezei de
ATP.

113
Bilirubina, n complex cu albumina seric, e
denumit bilirubina liber indirect, cu o cot de 75%
din toat cantitatea (2,5 12mg/L, 8,7 20,5
mol/L), fiind transferat apoi n ficat.
Bilirubina indirect este toxic, nu trece prin filtrul
renal i nu se elimin prin bil.
Bilirubina liber este solubil n solveni organici i
numai apoi d reacie cu diazoreactivul (reacie
indirect).
Aici, n ficat, se modific n form mai solubil,
conjugat cu acidul glucuronic, ce adiioneaz la
catenele propionice.
114
Sub form de diglucuronid este excretat prin bil
bilirubina direct.
Un rol important n procesul de eliminare a
bilirubinei la nivelul celulei hepatice i revine
proteinei transportatoare lingandina (masa
molecular aproximativ 44000 Da), ce reprezint
aproximativ 6% din totalul proteinelor hepatice.
n intestine, sub aciunea enzimelor bacteriene, ce
scindeaz acidul glucuronic, fiind redus (bilirubina)
prin mezobilirubin la mezobilirubinogen.
115
Aproximativ 4 mg este cantitatea diurn de
urobilinogen i aproximativ 300 mg este cea de
stercobilinogen.
Bilirubina fiind redus (2 vinil 2 etil i 2 metin
2 metilen), va fi transformat n urobilinogen
care, prin reducerea legturilor duble din nucleele
terminale, se va transforma n stercobilinogen.
n continuare, dehidrogenarea acestor compui la
nivelul punii -metinice rezult urobilina i
stercobilina principalii pigmeni ai materialelor
fecale.
116
O mic parte din bilirubin, urobilinogen i
stercobilinogen se reabsoarbe din intestin n
circulaia portal, ajungnd la ficat, de unde sunt
reexcretai prin bil ciclul entero-hepatic al pigmenilor
biliari.
Cantiti mici se elimin prin urin, excreia prin
urin a acestor compui crete n insuficiena
hepatic.
117
Sunt atestate cteva tulburri genetice ale
metabolismului porfirinelor, ce se caracterizeaz
prin excreia crescut de porfirine i precursori ai
acestora.
1. Porfiria intermitent acut. Sunt afectate celulele
ficatului, reducndu-se activitatea uroporfirinogen
sintazei i, compensator, amplificat de -amino
levulinat sintaza, crete concentraia amino
levulinatului i a porfobilinogenului n ficat,
eliminndu-se prin urin, ceea ce cauzeaz
dereglri neurologice, dereglri intermitente n
abdomen.
118
2. Porfiria eritropoetic congenital. E diminuat de
activitatea enzimelor (cosintaz, izomeraz),
provocnd acumularea uroporfirinei,
coproporfirinei. Eritrocitele se distrug prematur.
Urina este de culoare roie, dinii roz, pielea
sensibil la lumin.
3. Sunt studiate i porfirinele hepatice primare porfiria
cutanea tarda ce se caracterizeaz prin
hipersintez i eliminare urinar de uro- i
coproporfirina I. Pacienii sunt fotosensibili cauza
este deficiena de uroporfirinogen decarboxilaza.
119
4. La deficiena coproporfirinogen oxidazei (coproporfiria
ereditar), se acumuleaz i se elimin prin urin
coproporfirinogen III i alte intermediate
porfobilinogen, ac. -amino levulinic.
Manifestrile clinice sunt asemntoare cu cele din
porfiria acut intermitent.
5. La insuficiena ALA dehidratazei i a
fierochelatazei, se acumuleaz n urin
coproporfirina III i acidul -amino levulinic.
Deficitul fierochelatazei n esuturi duce la
protoporfirie eritrocitele, plasma, fecalele cinin
cantiti mari de protoporfirina IX.
120
Bolnavii sunt fotosensibili, au ciroz i urticrie
prin expunerea la soare.
Creterea activitii amino levulinat sintazei duce la
porfirie toxic prin urin se elimin ac. amino
levulinic i porfobilinogen, coproporfirina III.
Organismul reacioneaz vdit la droguri, inclusiv
la alcool.
Hepatitele i cirozele se caracterizeaz prin
coproporfirinii secundare cu izomeri de tip I;
intoxicaiile alcoolice i ciroza etilic prin
izomeri de tip III.
121
Metabolismul
proteoglicanilor
122
Proteoglicanii (PG) principalul component al
substanei fundamentale din matricea
extracelular.
Se caracterizeaz printr-o mare diversitate
tisular, precum i a glucidelor (85-90%).
Sunt constituentele glicozoaminglicanilor
covalent legai cu proteinele (5-15%).
Glicozoaminglicanii (GAG) sunt catene mari
neramificate, compuse din elemente dizaharidice
repetabile.
123
Aceti compui se mai numeau
mucopolizaharide.
Denumirea actual e determinat de faptul c n
componena dizaharidic se conine un
aminozahr (N-acetil-glucozoamin sau N-acetil-
galactozoamin).
Prezena grupelor carboxil sau sulfat (a ambelor
grupri) la majoritatea resturilor de zahr le
aprovizioneaz cu o sarcin electric negativ
mare.
124
Dup tipul resturilor de zahr, tipul legturii
ntre ele, numrul i poziia grupelor sulfat
deosebim 7 grupe de glicozoaminglicani (fig.
8.15).
Biosinteza are loc n fibroblati, cu participarea a
trei categorii de compui: aminoacizi, glucoz i
radicali sulfurici (PAPS).
Se consider c activarea sulfului se efectueaz n
baza ATP, sub aciunea ATP-sulfurilazei i APS
(adenozil monofosfosulfat) kinazei.
125
Prima enzim i intensific activitatea n
prezena retinolului, fapt ce explic rolul
favorizant al vit.A la anabolismul esutului
conjunctiv.
La fel ca i colagenul, PG, anterior secretai sunt
modificri n aparatul Golgi (sulfatarea i
epimerizarea) i covalent se fixeaz de resturile
de serin sau treonin n proteina cor.
Moleculele proteoglicanilor se asociaz cu fibrele
de colagen, formnd o barier pentru molecule
o sit molecular.
126
Proteoglicanii se deosebesc de glicoproteine, al
cror component glucidic e de circa 1-60% din
masa total i e reprezentat prin catene mici
ramificate de oligozaharide, care deseori conin
acid sialic.
Proteoglicanii au molecule mult mai mari,
componentul glucidic e reprezentat printr-o
mulime de lanuri neramificate de GAG,
normal nu conin acid sialic i constituie pn la
90-95% din masa total.
127
128
Funcionnd ca nite site moleculare, PG
regleaz ptrunderea prin ei a moleculelor mari
(proteine etc.).
n organism exist un echilibru dinamic
permanent ntre biosintez i degradare.
Degradarea PG se produce cu mult mai rapid
dect a colagenului, n majoritatea esuturilor, n
rinichi 3-8 zile.
Produsele scindrii se excret prin urin
cantitatea diurn 250 mg.
129
Proteoglicanaza ( o metalenzim cu un pH cuprins
ntr-un domeniu larg 5-9) are proprieti
diverse i scindeaz hidrolitic legturile ntre
condroitin sulfat i proteina central n multe
regiuni i n numeroi PG.
Enzima are i capacitatea de a proteja peptidele
de extensie, precum i de a degrada glicoproteina
matriceal.
130
Ulterior, intr n funciune endo- i
exoglicozidazele, sulfatazele; dintre glicozidaze
-glucuronidaza, -iduronidaza, -acetil-hexozaminaza,
-galactozidaza, aril-sulfatazele (fig. 8.18).
131
Modificrile constituenilor PG
Distingem modificri fiziologice asociate, cu
naintarea n vrst, i patologice cauzate de
funcionarea anormal a unor enzime
participante la ana- sau catabolismul lor.
n funcie de vrst, e stabilit majorarea
cantitii de colagen, ca, de altfel, i a keratan
sulfatului n esuturi, unde se localizeaz.
132
Coninutul condroitin sulfatului n cartilaje,
discuri intervertebrale i al acidului hialuronic n
piele se micoreaz.
Aceste schimbri au efecte importante pentru
gradul de hidratare, precum i pentru
posibilitatea eventualei calcifieri (n cartilaje,
oase).
Hormonul de cretere (GH) stimuleaz adiionarea
prolinei n lanul tropocolagenului.
133
Administrarea lui la orice vrst apropie caracterul
sintezei PG de procesele ce au loc la animalele
tinere amplific proliferaia celulelor i
stimuleaz ataarea grupelor sulfat n PG.
Testosteronul amplific viteza sintezei acidului
hialuronic, la fel ca i insulina (plus condroitin
sulfaii).
La diabet sunt vdite consecinele inhibiiei
sintezei PG, amplificarea degeneraiei vaselor,
vindecarea tardiv a rnilor, cnd pacienii sunt
mai sensibili la infecie.
134
Stimuleaz sinteza PG i mineralocorticoizii,
amplificnd proliferarea fibroblatilor.
Glucocorticoizii administrai conduc la
repolimerizarea acidului hialuronic i a altor PG,
inhib sinteza, reducnd aciunea defavorizant a
acestor hormoni n procesul de tratare a rnilor.
Mucopolizaharidozele sunt o categorie de boli
genetice, ce se caracterizeaz prin depozitarea n
esuturi i excreia urinar a GAG, ca rezultat al
insuficienei unei sau mai multe enzime lizozomale
implicate n degradarea lor.
135
Au loc modificri n structura scheletului, n
dezvoltarea organelor, afeciuni mintale,
tulburri cardiopulmonare de diverse genuri i
intensiti.
Defectul enzimatic specific se stabilete prin
fixarea activitii unor enzime n lichidul
amniotic.
136
Au fost detectate un grup de erori umane nnscute
de metabolism, implicnd depozitarea de glicolipide,
glicopeptide, mucopolizaharide i oligozaharide.
Aceste boli sunt cauzate de defecte n activitatea
glicozidazelor, care mpiedic catabolismul
oligozaharidelor
137
Dereglrile implic acumularea n esuturi i urin a
compuilor derivai de la degradarea incomplet a
oligozaharidelor i poate fi acompaniat de
anormaliti scheletale, renale, hepatice sau defecte
cardiovasculare, cu retarduri mintale severe.
138
Exist un grup de dereglri genetice ce sunt
caracterizate printr-o acumulare excesiv i excreie
de oligozaharide ale proteoglicanilor, numite
mucopolizaharidoze.
Bazele chimice pentru acest tip de dereglri sunt
similare, modul de motenire ca i manifestrile
chimice putnd s varieze.
Sindromul lui Hurler i cel al lui Sanfilippo sunt
motenite cu transmitere autosomal recesiv, ns
boala lui Hunter este dependent de sex.
139
Att sindromul lui Hurler, ct i boala lui Hunter
sunt caracterizate prin anormaliti scheletale i
retard mintal, care n cazuri severe pot cauza
moartea.
n contrast, sindromul lui Sanfilippo (MPS III)
defectele fizice sunt relativ minore, n schimb
dereglri severe ale sistemului nervos cu retard
mintal.
Per total, incidena pentru toate
mucopolizaharidozele este de 1 la 30 000 nateri.
140
n plus la cele menionate, mai sunt altele puin
nelese.
Sindromul lui Morquio implic degradarea
nepereche a keratin-sulfatului, probabil datorat
unei deficiene n 4-sulfataz; deficiena multipl de
sulfataz implic deficiena n ultimele 6 sulfataze; i
boala i-cell (celul-i) implic o descretere n
cteva hidrolaze.
141
Aceste dereglri sunt posibil de diagnosticat n
perioada prenatal, din moment ce modelul de
metabolism patern obinut din celulele afectate din
lichidul amniotic este extrem de diferit de normal.
Mai departe o terapie promitoare pentru a corecta
o parte din aceste boli, o contribuie terapia prin
nlocuirea de gene sau enzime.
142
Structura dermatan i heparan sulfatului
Dermatan sulfat:
IdUA GalNAc GlcUA GalNAc
OSO
3
H OSO
3
H OSO
3
H
1
2
3
4
5
Heparan sulfat:
IdUA GlcNAc GlcUA GlcNAc
OSO
3
H OSO
3
H OSO
3
H
1
2
3
7
5
8
9
143
Maladie Produse
acumulate
Deficiena enzimei
Hunter (MPS II) Heparan sulfat
Dermatan sulfat
Iduronat sulfataza (1)
Hurler Scheie
(dereglri alele)
Heparan sulfat
Dermatan sulfat
-L-iduronidaza (2)
Marateaux - Lamy Dermatan sulfat N-acetilgalactozamin
(3) sulfataza
Sindromul Sly
(MPS VII)
Heparan sulfat
Dermatan sulfat
-glucuronidaza (5)
144
Maladie Produse
acumulate
Deficiena enzimei
Sanfilippo A Heparan sulfat

Heparan sulfamidaza (6)
Sanfilippo B Heparan sulfat

N-acetilglucozaminidaza
(9)
Sanfilippo C Heparan sulfat N-acetil transferaza
Sanfilippo D Heparan sulfat

N-acetil glucozamin -6-
sulfataza
145
Sinteza tetrahidrobiopterinei din GTP
146
Degradarea nucleotidelor purinice
147
Sursele de carbon i azot din pirimidine
(C4, C5, C6 i N1 din aspartat; N3 din glutamin; i C2 din CO
2
)

148
Sinteza de novo a
2-deoxiribonucleotidelor pirimidinice
149
Sinteza deoxitimidin nucleotidei
150
Degradarea uracilului i timinei n produse finale
151
Reglarea de ctre mucosa
intestinal a absorbiei fierului
152
Distribuia aproximativ a fierului
(la un adult de 70 kg)
153
Calea de biosintez a hemului