Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Ananiza Bacteriologica A Apei
Ananiza Bacteriologica A Apei
organice provin prin descompunerea fiinelor vii (cadrave) sau din instalaiile
sanitare.
Din fericire, o mare parte din germenii patogeni pentru om (bacterii care
transmit maladii) dispar repede n sol datorit concurenei vitale, dintre acetiai
bacteriile humificante, nitrificante, ciuperci, antibiotice.
Totui, atunci cnd terenurile sunt foarte fisurate, microbii patogeni pot
ajunge cu uurin n apa freatic i deci, n fntni. Riscul cel mai mare este
atunci cnd sursele de ap se afl n imediata vecintate a unor bonlavi de febr
tifoid sau dezinterie i nu se iau msuri drastice de mpiedicare a contaminrii
apei cu fecalele acestor bolnavi.
Obiectul analizei bacteriologice a apei este de a depista prezena n ap a
bacteriilor susceptibile de a provoca consumatorului maladii infecioase i
totodat de a verifica eficiena mijloacelor de protecie mpotriva contaminrii
surselor de ap.
Analiza bacteriologic a apei nu poate fi efectuat de chimiti analiti
obinuii, ci de bacteriologi specializai.
CAPITOLUL 1
MALADII PROVOCATE DE MICROORGANISMELE DIN AP
Febra tifoid
Este cauzat de bacilul lui Eberth, Salomella typhi i de germenii
paratifici A i B. n multe situaii, colibacilii, oaspei normali ai intestinului,
cns sunt prezeni n ape, pot provoca entero-gastrite grave, n special la copii.
Dezinteria
Se datorete bacilului lui Flexner, Shigells paradysenteriae. Att febra
tifoid, ct i dezinteria, care se dezvolt n aceleai condiii ecologice, nu se
mai ntlnesc n rile cu servicii igienice i sanitare bine puse la punct. Totui,
n regiunile cu puin ap i impur, aceste boli produc adevrate epidemii.
Holera
Este cauzat de germenul Vibrio cholerae i este foarte transmisibil prin
intermediul apei.
Tot printre germenii fecali patogeni ai intestinului se numr enterococul
(Streptococus faecalis) i perfringens (Clostridium perfringens).
Apa este mediul cel mai adecvat pentru rspndirea altor boli infecioase
pe baz de bacterii: diareea infantil, cauzat de proteus; enterita pseudomonas,
cauzat de bacilul Pseudomonas aeruginosa i tularemia cauzat de Pasteurella
tularensis.
Prin consumarea apei impure se pot transmite parazitoze animale i
maladii pe baz de protozuare: dezenteria ambiant, cauzat de Entamoeba
histolytica; spirochetoza ictereo-hemoragic, cauzat de Leptospira
icterohemorragiae i posibil de a fi contractat i prin traversarea pielii de ctre
parazitul respectiv.
Exist i maladii pe baz de virui care se pot rspndi prin intermediul
apei: hepatita infecioas i poliomielita. Din fericire, virusul foarte periculos al
poliomielitei poate fi distrus prin dezinfectarea apei cu clor liber.
CAPITOLUL 2
NUMRAREA GLOBAL A BACTERIILOR
Maladiile infecioase susceptibile de a fi transmise de ctre ape sunt
aproape ntotdeauna de o poluare cu fecale. Bacteriile patogene sunt cu mult
mai puin numeroase fa de cele care triesc obinuit n intestin. Acestea din
urm (colibacilii) sunt mult mai rezistente n apele naturale dect bacteriile
patogene. Se poate deduce c o ap lipsit de colibacili nu poate conine bacterii
patogene. i invers, prezena colibacililor presupune o poluare sigur cu fecale.
Iat, deci, raiunea pentru care de mai multe ori se efectueaz numai numrarea
global a bacteriilor.
Se introduc eprubetele n autoclav la 115C, timp de 15-20 minute. pHul final al mediului trebuie s fie aproximativ 7, la temperatur ordinar. Mediul
astfel preparat se poate conserva o lun de zile n frigider la 4-6C.
Pentru numrare, n dou serii de cutii Petri, indice cu diametrul de
90mm, splate i sterilizate se transform n probe de ap, n mod gradat; 1ml;
1ml din proba diluat de 10 ori; 1ml din proba diluat de 100 de ori; 1ml din
proba diluat de 1000 de ori. Mai bine este ca diluarea s se fac cu soluia
Ringer ( ea nsi diluat de 3 ori cu ap distilat i apoi sterilizat). Apoi se
aeaz pe baia de ap att tuburile din mediul nutritiv, ct i cutiile Petri cu
probele i la 45C se transform mediile de geloz n fiecare cutie cu prob. Se
agit coninutul ntr-o micare dute-vino i cutiile se aeaz pe o suprafa
orizontal pentru rcire. O serie de cutii se incubeaz la 37 C i cealalt serie se
incubeaz la 20-22 C, la ntuneric. Coloniile se numr dup 24 de ore, pentru
probele inute la 37 C i dup 72 de ore pentru probele incubate la 20-22 C,
imediat la scoaterea din incubator (etuv). Cu ajutorul unei lupe se numr
coloniile i se iau n considerare numai probele n care se pot numra 50-300 de
colonii. Numrul gsit pentru fiecare cutie se raporteaz la 1 ml de ap, n
funcie de diluia corespunztoare i se adopt ca coninut final media
numrtorilor, oferind un rezultat cuprins ntre limitele 50-300 pentru fiecare
din cele 2 serii de culturi (la 37C i la 20-22 C).
dintr-o cutie Perti. Substanele nutritive dizolvate din mediu difuzeaz i permit
dezvoltarea microbilor.
Mediul nutritiv poate fi constituit din geloz peptonat cu extract de
drojdie. Incubarea se poate face la 37 C, la 20-22 C sau la ambele temperaturi,
dac s-au filtrat probe paralele de ap. Apoi se efectueaz numrtoarea,
facilitat de mprirea suprafeei celulozei filtrante n ptrate.
Metoda membranelor filtrante prezint un interes deosebit, deoarece se
pot colecta microorganismele la suprafaa locului i n loc s se transporte
probele de ap la laborator se trimite receptacolul cu membrana, nchise ermetic
ntr-o cutie.
Totodat, subliniem i faptul c aceast metod este inaplicabil pentru
apele care conin numeroase suspensii minerale.
2.3.1. COLIFORMI
Sunt microorganismele cele mai numeroase n materiile fecale. Depesc
de 10-100 de ori enterococii i de 100-1000 ori perfringenii sporulai n probele
de ap.
n apele normale colibacilii nu mai ntlnesc aceleai condiii favorabile
ca n intestin i de aceea dispar treptat. Astfel, colimetria (testarea germenilor
coliformi) d rezultate foarte bune, atunci cnd este vorba de a depista o poluare
recent.
specia
ESCHERICHIA COLI
ESCHERICHIA INTERMEDIUM
ESCHERICHIA FREUNDII
AEROHACTER AEROGENES
KLEIBSIELLA
AEROHACTER
(KLEIBSIELLA)
PARACOLOBACTRUM
PARACOLOBACTRUM AEROGENOIDES
BACILLUS PARACOLI ANAEROGENES
10
11
12
grade Celsius, timp de 5 zile. La 5ml din coninutul fiecrei eprubete se adaug
cteva picturi de rou de metil (0,1g/l), 300 ml alcool etilic pur i se
completeaz cu ap distilat 500 ml. Testul este pozitiv pentru coloraie roie
(pH<4,4) i negativ pentru coloraie galben (pH>6).
Testul cu formare de acetilmetilcarbinol
Se pregtesc eprubete cu soluii i se nsmneaz la fel ca i n cazul
testului cu rou de metil. Apoi se in n etuv la 30 grade Celsius, timp de 48 de
ore. Pentru a decela acetilmetilcarbinolul format de ctre cultur se adaug la
1ml din coninutul eprubetelor 0,6 ml soluie proaspt de alfa naftol (5g n 100
ml alcool etilic absolut) i 0,2 ml soluie de KOH 40%. Apariia unei coloraii
rou purpuriu sau rubiniu, dup 2-4 ore, indic un rezultat pozitiv.
Testul cu citrat
Se prepar o soluie cu 1,5g NaNH4HPO4 * 4H2O, 1g K2HPO4, 0,2g
MgSO4* 7H2O, 2,5-3g citrat trisodic cristalizat i ap distilat pn la 1000ml.
Se ajusteaz pH-ul la valoarea de 6,8 i cte 5ml din soluie se repartizeaz n
eprubete de 160x16mm. Se sterilizeaz 20 de minute, la temperatura de 120
grade Celsius. Se nsmneaz din aceleai culturi ca i n cele trei teste
precedente, cu ajutorul unui fir de platin, pentru a evita, introducerea altui
mediu nutritiv n afar de citrat. Se incubeaz n etuv la 30 grade Celsius, timp
de 72-96 de ore. Dezvoltarea unor colonii constituie testul pozitiv.
Cele 4 teste verificative (IMVIC) dau unele indicaii preioase asupra
diferenierii speciilor bacteriene, aa cum se arat n tabelul 1.
14
Tabelul 1
Diferenierea speciilor bacteriene cu teste IMVIC
Specia
Indol
Escherichia
Coli
Escherichia
Intermedium
Escherichia
freundii
Aerobacter
aerogenes
Aerobacter
Cloaccae
Paracolobactrum
intermedium
Paracolobactrum
aerogenoides
Rou
de
metil
+
+/-
Teste
Acetilmetilcarbinol
Citrat
trisodic
+/-
+/-
+/-
+/-
+/-
+/-
15
Germeni
Coliformi/dm
Pn la 10
Moderat poluat
10 - 10
Intens poluat
Peste 10
Posibiliti
de utilizare
Utilizat pentru toate
solurile i plantele
Utilizat pentru toate
solurile i plantele,
cu excepia solurilor foarte
permeabile i a plantelor cu
destinaia alimentar i
furajer n stare proaspt
sau conservat prin
congelare, murare, fr
prelucrare termic
Utilizat numai pentru soluri
cu pnza de ap freatic
peste 4m i pentru culturi ale
cror produse sunt lucrate
termic industrial, precum
i produse vegetale,
nealimentare.
16
2.3.2. ENTEROCOCII
Streptococii fecali sau enterococii, existeni n mod normal n cile
aparatului digestiv, n anumite condiii pot provoca unele maladii, ca
enterocolite, afeciuni genitale, endocardite sau chiar septicemii. Cu mult mai
puin rezisteni fa de coliformi, streptococii fecali dispar repede n apele
naturale i sunt descompui instantaneu atunci cnd se efectueaz o dezinfecie
cu ozon sau chiar clor liber.
Enterococii, reprezentai prin Steptococus faecalis este o bacterie
aerobian, se dezvolt uor pe medii de cultur obinuit la 37 grade Celsius i
pot rezista chiar i 30 minute la 56 de grade Celsius.
Prezena streptococilor fecali n ape poate fi pus n eviden cu ajutorul
a dou teste succesive: azotur de sodiu i etil violet.
Testul indicator cu pepton-glucoz-azotur de sodiu
Se prepar dou medii: unul concentrat ( 30g pepton, 10g glocoz, 10g
clorur de sodiu, 5,4g fosfat dipotasic, 0,4g azotur de sodiu) i altul diluat
( 20g pepton i jumtatea din cantitatea celorlalte substane). Se dizolv n ap
distilat, prin nclzire slab, se potrivete pH-ul la valoarea 6,9-7 i se
completeaz fiecare soluie cu ap distilat pn la un litru.
n eprubete de 220X22 mm se repartizeaz cte 10 ml din mediul
concentrat i n eprubete cu dimensiunile de 160X16 mm se transfer cte 10 ml
din mediul diluat. Sterilizarea se efectueaz 20 de minute la 120 grade Celsius.
n 5 eprubete din mediul concentrat se transfer cte 10 ml prob de ap,
n dou eprubete cu mediul diluat se transfer cte 1ml prob de ap i n alte 3
eprubete cu mediu diluat se transfer cte 1 ml diluat de 10 ori, de 100 de ori,
respectiv de 1000 de ori, cu ap sterilizat. Probele se incubeaz 24-48 de ore,
la temperatura de 37 grade Celsius i apariia unei opalescene indic testul
pozitiv.
Estimarea se efectueaz aritmetic sau prin indicele de probabilitate, aa
cum s-a artat la testul indicatori pentru coliformi, cu bulion lactozat.
17
18
20
21
CONCLUZII
Microorganismele din ap provoac maladii foarte grave, cum ar fi: febra
tifoid, dizenteria, holera. Exist maladii pe baz de virui, care se pot rspndi
prin intermediul apei: hepatita infecioas i poliomielita.
Maladiile infecioase sunt cauzate de poluarea cu fecale.
Metodele folosite pentru tratarea apei, pentru a elimina microorganismele
din ap sunt:
- metoda culturii pe geloz nutritriv;
- metoda membranelor filtrante;
- metoda testelor pentru determinarea contaminrii cu fecale; cu
germenii test: germenii coliformi, streptococi, bacterii sporulate
Perfrigens i bacteriofage fecale.
Pe lng bacteriile fecale, n apse mai gsesc i microbi (germeni)
patogeni. Analiza acestora, n probele de ap trebuie efectuat imediat dup
recoltare.
Dintre germenii patogeni amintim: germenii tifoidici (Salmonella) i germenii
dezinterici: Shigella), germenul holerei (Vibrio comma), germenul icterului
infecios.
Germenii autotrofi (bacteriile autotrofe) se hrnesc numai cu substane
minerale. Acetia sunt: nitrozanii, nitrifianii, denitrifianii, fixatorii de azot
atmosferic, sulfato-reductorii i sulfhidro-oxidanii.
Lucrarea realizat este foarte important, deoarece prezint aproape toate
metodele de analiz bacteriologic a apei.
22