Sedimentarea si centrifugarea

I. N oiu n i teoretice
1. Sedimentarea
Sedimentarea - E ste o tehnic de separare ce se bazeaz pe diferen a de densitate dintre
componentele amestecului. n practica medical se utilizeaz nu num ai ca tehnic de separare dar i ca o
metoda de analiz (VSH - viteza de sedimentare a sngelui).
P entru o nelegere m ai bun a procesului se poate modela comportarea unei hematii n cmp
gravitaional.
S consideram o suspensie de particule sferice de raz R i densitate aflate ntr-un lichid de
densitate 0 (0). Asupra particulelor acioneaz urm toarele forte:
- fora de greutate: G m g

4
R 3 g
3

- fora A rhim edic: FA m 0 g

4
R 3 0 g
3

- fora de frecare cu m oleculele lichidului - fora de vscozitate; p entru particule sferice i viteze
mici de deplasare, fora de vscozitate este dat de legea lui Stokes: FV 6 R v
unde: v este viteza, coeficientul de vscozitate iar R raza particulei.
La echilibru dinam ic rezultanta acestor fore este nul i particula coboar cu vitez constant
(figura 5.1).

Figura 5.1. F o rele ce acioneaz asupra unei particule

de raz R i densitate aflat ntr-un lichid de densitate 0 ( 0).

4
4
2
R 3 g R 3 0 g 6 R v v R 2 g 0 1 (1)
3
3
9

Considernd v
sedim entare, obinem :

L
unde L este spaiul parcurs n m icare rectilinie i uniform iar t timpul de
t

9
1
L R 2 g 1 0
2

D up cum se constat din relaia (1) viteza de sedim entare depinde att de m rim ea particulelor
(R) ct i de interaciunea acestora cu lichidul n care se afl, prin coeficientul de vscozitate .
Sedimentarea poate fi deci folosit nu numai ca tehnic de separare a unor particule de interes dar
i ca metod de cercetare n vederea obinerii unor inform aii legate de aceste particule.
De mare importan clinic este determinarea vitezei de sedimentare a eritrocitelor. n tabelul
urm tor sunt prezentate valorile norm ale obinute prin m etoda W estergreen.
Subiect
barbat
femeie
nou - nascut
sugar
copil mic

1 ora
2 - 8 mm
4 - 10 mm
1 - 2 mm
5 - 10 mm
7 - 12 mm

2 ore
5 - 18 mm
6 - 20 mm
-

2. Centrifugarea
Centrifugarea - reprezint o tehnic de separare a com ponentelor unui am estec cu densiti
diferite sub influena unui cmp centrifugal.
Deoarece viteza de sedim entare pentru particule de m rim ea hem atiilor, sau mai mici, este
deosebit de sczut, este necesar o m etod care s creasc fora activ (greutatea n cazul sedimentarii).
A stfel, n cazul centrifugrii, rolul forei de greutate l joac fora centrifug.

Figura 5.2. F o rele ce acioneaz asupra unei particule

de raza R i densitate aflat ntr-un lichid de densitate 0 ( 0).

Fcf m a c

16 3 3 2
R x
3

N eglijnd fora de greutate i considernd c m igrarea duce la creterea razei traiectoriei

circulare, avem urm toarele relaii:

Fa Fv Fcf
dx
Fv 6 R
dt

Fa

16 3 3 2
R 0 x
3

9
1 dx
dt 2 R 2 2 0
8
x

P rin integrare obinem tim pul necesar separrii:

9
x
1
t c ( R ) 2 0 ln f .
8
xi
Ultracentrifugarea - Pentru particule foarte mici cum ar fi proteinele plasmatice sedimentarea
prin centrifugarea obinuit este practic nerealizabil din cauza fenomenelor de difuzie. Sunt necesare n
acest caz turaii deosebit de m ari 15000rot/min.
U ltracentrifugele ce realizeaz aceste turaii trebuie s fie bine stabilizate mecanic (pentru a evita
fenom enul de bti care ar duce la ruperea axului) i bine termostatate (pentru a mpiedica degradarea
termic).
Cnd sistemul este monodispers apare o limit net de separaie ntre solvent i particulele
dispuse la fundul eprubetei.
Cnd sistemul este polidispers apar m ai m ulte cm puri i este necesar o ultracentrifugare
fracionat. S e centrifugheaz pe rnd la fiecare turaie de interes i se recolteaz sau sedim entul sau
super-natantul.

II. P arte exp erim en tal

A. Determinarea vitezei de sedimentare a eritrocitelor
(metoda Westergreen)
Materiale necesare:
-snge venos, 1.6 ml, recoltat pe anticoagulantul citrat trisodic 3.8%, n cantitate de 0.4 ml;
-m ateriale pentru puncie venoas;
-eprubete de hem oliz;
-hem osedim entrul W estergren, alctuit dintr-un stativ m etalic prevzut cu pipete W estergren, de
aproxim ativ 300m m lungim e i 2.5 3mm diametru.
Mod de lucru:
-se aspir cu seringa, n condiii sterile, o cantitate de 0.4m l citrat trisodic 3.8% ;
-se puncioneaz vena pacientului i se aspir snge pn la diviziunea de 2m l;
-dup o m ogenizare sngele se pune ntr-o eprubet de hem oliz;
-se aspir sngele n pipetele W estergren pn la diviziunea zero;
-se fixeaz pipetele n stativ (ntr-o poziie perfect vertical), apoi se noteaz tim pul (momentul se
start) i num ele pacientului.
Citirea rezultatului se face la o or i/sau la dou ore, valoarea fiind dat de nlim ea coloanei de
plasm aprut n partea superioar a tubului exprim at n m m , pe unitate de timp.

B. Centrifugarea sngelui
Materiale necesare:
- sering i ac pentru puncie venoas
- eprubete de hemoliz
- stativ
- pipete gradate
- citrat trisodic 3,8%
- balan de echilibrare
- ser fiziologic
- eprubete de centrifugare
Mod de lucru:
-se recolteaz o cantitate de 5-6 ml snge dup metoda descris anterior;
-se introduce n eprubeta de centrifugare 1ml citrat trisodic 3,8%, 4m l ser fiziologic i 5ml snge
dup care se aseaz eprubeta pe balana de echilibrare;
-pe platanul opus se aseaz o eprubet identic n care se introduce ap distilat pn la
echilibrarea balanei;
-se aeaz cele dou eprubete n centrifug n poziii diametral opuse una fa de alta, se nchide
capacul centrifugii i se regleaz la 2000rotatii/min, dup care se centrifugheaz 2minute;
-se scoate eprubeta i se masoar deplasarea frontului eritrocitar, apoi se continu centrifugarea.
Probleme:
1._Cunoscnd valorile fiziologice ale coeficientului de vscozitate la brbat B=0,047Kg/ms i la
femeie F= 0,043K g/m s, densitatea eritrocitului = 1095K g/m

i a plasm ei o=1027Kg/m3 calculai din

formula vitezei de sedimentare ct ar trebui s fie raza eritrocitului presupus sferic.

2._Determinai viteza de sedimentare a unor particule de cret suspendate ntr-un lichid i raza
acestor particule presupuse sferice cunoscnd apa=1 g/cm3, apa=1.05 10-3K g/m s, creta=1,545 g/cm3.
3._Cunoscnd raza particulei de cret determinat anterior, evaluai folosind m odelul m atem atic al
centrifugrii, tim pul de centrifugare pentru aceste particule suspendate ntr-un m ediu vscos (glicerin). S e
cunosc:
- =1000rot/min, (500rot/min)
- glicerina=13,93 10-3Kg/ms
- glicerina=1,26 g/cm3
- ln(x2/x1)=0,143