Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Enzime
Enzime
Noiune despre enzime, natura chimic i rolul biologic al enzimelor. Diferena dintre aciunea enzimelor i
catalizatorilor nebiologici.
Dovezile naturii proteice a enzimelor. Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noiune despre centrul activ i
centrul alosteric al enzimelor.
Izoenzimele i rolul lor.
Cofactorii enzimelor. Coenzimele i ionii metalici. Funciile de coenzime a vitaminelor i microelementelor.
Natura chimic (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP i rolul lor ca coenzime.
Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor i rolul lui n formarea i transformarea complecilor
intermediari dintre enzim i substrat. Rolul modificrilor conformaionale reciproce ale moleculei enzimei i
substratului la favorizarea catalizei (reaciei).
Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor. Caracteristica general a claselor i subclaselor principale de
enzime. Numrul de cod al enzimei.
Enzimele
- cea mai imens
imens i
i specializat
specializat clas
clas de proteine, care regleaz
regleaz i
i coordoneaz
coordoneaz decurgerea armonioas
armonioas a reac
reaciilor chimice.
- reprezint
reprezint catalizatori biologici,
biologici, care mresc viteza reac
reaciei chimice i
i rezult
rezult la sf
sfrit nemodifica
nemodificai cantitativ i
i calitativ.
calitativ.
- ac
acioneaz
ioneaz strict ntr-o anumit
anumit consecutivitate i cu o anumit
anumit specificitate.
- energia substan
substanelor reagente trece dintr-o form
form n alta cu o eficacitate mare. Se acumulez n ATP ce este utilizat
utilizat n
procesele vitale.
Particularitile comune pentru E i catalizatori nebiologici.
Dovezile experimentale:
1. Sunt alctuite din AA
2. Prezena macromolecule.
3. n apa formeaz substane coloidale cu proprietdtile sale specifice
4. Prezintd electroliti amfoliti
s. Sunt termolabili i anume: distrug
distrugerea lan
lanului polipeptidic prin fierbere n solu
soluii acide sau bazice (hidroliza) sau
denaturarea lor.
6. Enzimele, fiind proteine sunt supuse aciunii altor E care scindeaz proteinele Ex: Pepsina n mediu acid scindeaz
amilaza.
7. Cel mai solid argument este c in condii de laborator din AA
au fost sintetizate: ribonucleaza scindeaz acizii nucleici
lizozima - ce distruge capsulele microorganismelor.
Enzimele
Enzimele pot fi :
Cele conjugate sint asociate cu compui ce au mase moleculare mici, dializabili i termostabili cofactor
Cind aceti compui organici sint strins legai n structura enzimei poart denumirea de grupari prostetice:
prostetice: cind, ins
imbinarea lor este usor disociabil-poart denumirea de coenzime.
.
coenzime
Aceti biocatalizatori se numesc holoenzime, iar componena proteic - apoenzima de care depinde specificitatea.
CA - combinarea unical n spaiu i n timp a anumitor resturi de AA care asigur interaciunea cu S i transformarea
ulterioar a acestuia
Unele particulariti ale centrului activ (CA):
Centrul activ este alctuit dintr-un "centru de legare" i un "centru catalitic". Adic n centrul activ unele grupri (sau
resturi ale aminoacizilor) sint implicate n legarea substratului, altele asigur cataliza propriuzis.
- CA ocup o parte relativ mic din volumul enzimei i majoritatea restului de aminoacizi n molecula enzimei nu
contacteaza cu substratul.
- CA e o structura tridimensionala (nu e punct, linie, sau plan) - o structur compus la formarea careia particip grupe ce
aparin diferitor resturi de aminoacizi, ce n secvena liniar se afl la deprtare
- S relativ slab se leag cu E.
-CA are forma de "adncitur" sau "cavitate" (ant, dispictur), unde nu-i acces la apa, cu excepia cnd apa este un reagent
al reaciei.
Fixarea specific e dependent de poziia bine determinat a atomilor n CA. S intra n CA, dac e asemntor dup forma
lui.
Centrul alosteric (Allo stereos - alt loc) i efectorii alosterici
Multe enzime n afar de centrul activ posed i centrul alosteric sau centrul de reglare. Substanele care se combin
cu centrul alosteric al enzimei i modific activitatea ei poart denumirea de efectori alosterici (inhibitori sau activatori). Sub
aciunea efectorilor se modific configuraia moleculei enzimatice i simultan i conformaia CA ce la rndul su posed
proprietatea de a reaciona cu substratul. Efectorii alosterici realizeaz prin urmare reglarea metabolismului.
Ce e caracteristic pentru enzimele
enzimele alosterice
alosterice:
au ca i toate enzimele centru catalitic, unde se fixeaz i se modific S, dar mai au un alt centru,
centru, pentru fixare a
metabolitului reglator, numit efector sau modulator.
moleculele E alosterice sint mai mari, mai complexe i sint oligomere pare;
c)au cinetica lor - viteza reaciilor n dependen de concentraia substratului are forma sigmoldal, dar nu hiperbolica,
cauzat
cauzat de urm
urmrile interac
interaciunii ntre
ntre protomeri ce leag
leag S n mod cooperativ (exemplu mioglobina i hemoglobina).
Reacii de transcetolare
Natura chimic (structura) vitaminei B2 i rolul ei ca coenzim,
Derivai ai vitaminei B2
(FMN sau FAD)
Rolul:
Metalele sunt fixate de apoenzim prin legturi electrostatice la care particip resturile de AA acizi (Asp, Glu) sau
bazici (Arg, Lyz, His)
Pentru ca reacia s aib loc e necesar de trodus un exes de energie sau de micorat bariera energetic. E
accelereaz, viteza reaciilor chimice (VRC) micornd barierul de activare i reacia decurge dup alt mecanism, ce se
caracterizeaz printr-o energie de tranziie mult mai mic.
Mecanismul de aciune al enzimelor.
Procesul catalizei enzimatice poate fi divizat convenional n trei stadii:
Difuzia S spre E i legarea cu CA al E (formarea complexului ES). Prima etap de scurt durat depinde de
concentraia Si i de viteza lui de difuzie spre CA al E. Mecanismul interaciunii ntre S i E este explicat prin dou
concepte.
2. Transformarea complexului primar enzima-substrat n unul sau cteva complexe activate, indicate n ecuaie prin
ES* i ES**. Aceast etap este cea mai lent i depinde de energia de activare a reaciei chimice respective. La aceast
etap are loc dereglarea legturilor substratului, ruperea lor sau formarea noilor legturi n urma interaciunii grupelor
catalitice ale enzimei.
3. Desprirea produselor reaciei de centrul activ al enzimei i difuzia lor n mediul ambiant (complexul EP disociaz
n E i P).
Conceptul
Conceptul coencidenei inductive
coincidena forat (Kochland)
n enzima liber CA este preformat (tensionat) ceea ce nseamn c el are o configuraie spaial uor diferit de cea
necesar fixrii S. Substratul induce o modificare conformaional a CA, care favorizeaz fixarea S.
Proenzimele (zimogenii).
forme
moleculare
de E_care apar ca consecin
Prezint
consecin de ordin genetic deosebindu-se doar prin structura primar
primar i
mai mult prin propriet
ile fizico-chimice. Ele catalizeaz
proprietile
catalizeaz una i aceia
aceiai reac
reacie. Se deosebesc prin aceea c
c pot modifica
direc
direcia i viteza transform
transformrilor deoarece au afinitate diferit
diferit fa
fa de S.
Raportul dintre aceste catene este diferit in fiecare izoenzima. La electroforeza se separa 5 izoenzime: HHHH;
HHHM; HHMM; HMMM; MMMM;
S-au p
pstrat i denumir
denumirile vechi tradi
tradiionale pepsina, tripsina.
Creterea
vitezei reaciei odat cu creterea t este nterpretat prin prisma "energiei de activare". Pentru fiecare
enzim se poate stabili o t optim la care viteza ajunge valoarea maxima, mai departe viteza scade din cauza distruciei
enzimei, denaturarea proteinei.
Specificitatea
Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip de reac
reacii sau transformarea unui anumit S.
1) Specificitatea de reacie:
reacie: E-catalizeaz un anumit tip de reacie ce st la baza clasificrii enzimelor: o hidroliza, o
reacie redox, formarea unei legturi, etc.
2) Enzimele cu o anumit specificitate de reac
reacie poate avea specificitate de substrat relativ sau absolut:
a. specificitate relativa - asigura transformarea unui grup de substante inrudite chimic i se intlnete n diferite
ipostaze:
ipostaze:
- transforma un numar mare de substrate (proteazele): chimotripsina - legatura peptidica, formata de COOH a
Phe, Tyr, Trp; tripsina - de COOH ai Lyz si Arg.
- transform mai puine substrate: alcooldehidrogenaza - dehidrogenaza un grup de alcooli monohidroxilici,
recunoscind gruparea OH (specificitatea de grup)
- lipazele digestive specific recunosc pozitia legaturii esterice intre glicerina i acizi grai:
In CA al E se afl grupri ionizabile, acide sau bazice, acestea interacioneaz direct cu ionii H+ si OH-, rezultatul
fiind creterea sau scderea gradului lor de disociere, acionnd ca adevrai inhibitori ai enzimelor (amilaza n sucul gastric).
Ionii H+ si OH- au un efect denaturant asupra enzimelor - rup legturile, ce determin structura teriar.
Majoritatea enzimelor celulare au pH-ul optim n jurul pHului fiziologic de 7,4 cu excepii ca hidrolazele acide
lizozomale, pentru care este n jur de 5 sau monoaminooxidaza din membrana mitocondriala externa, circa 10. La enzimele
digestive pH-lui optim este cel al sediului lor de actiune: 1,5 2 al pepsinei, 7 al amilazei pancreatice, 8 al tripsinei, etc.
Deci mrind sau micorind pH-ul mediului, se poate regla activitatea catalitica a enzimelor. Dependena activitii
enzimatice de variaia pH-ului este deseori descris de o curb n forma de clopot.
Mecanismele de activare a E
Sunt : 1.
nespecifice: temperatura , iradierea
2.
specifice
- Se activeaz la majorarea concentraiei S cnd este insuficient
- La majorarea cantitii E (crete numrul
numrul de molecule de produs, n-tr-o unitate de timp)
La introducerea coenzimelor cnd sunt insuficiente
Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu
Modificarea chimica sau covalent a E.
proteoliza limitata (pepsinogen - pepsin in HCI)
Activarea
prin
efectori alosterici
Autoasamblarea cuaternara .
Aici se mai refer i re
reactivarea dar noi ne vom opri la mecanismele de inhibiie.
Prot
Proteoliz limitat
La asamblarea lor se modific conformaia fiecrui protomer i corespunztor se modific i conformaia CA,
devenind astfel favorabil pentru fixarea i transformarea S
Inhibi
Inhibiia activitii enzimelor.
Deosebim:
Deosebim:
inhibiie specific
inhibiie nespecific (T, pH, agenisii denaturrii )
Inhibiiia st la baza aciiunii substanielor medicamentoase, agenilor toxici.
Retroinhibiie
Sistemele polienzimatice
Fiecare celul a organismului conine setul su specific de enzime. Unele se gsesc n toate celulele, altele sunt
prezente doar n anumite celule sau anumite compartimente celulare. Funcia fiecrei enzime, nu este izolat, ci strins legat
de funcia altor enzime. Astiel din enzime aparte se formeaza sisteme polienzimatice sau conveiere.
Func
tia sistemelor polienzimatice depinde de particularitatile de organizare a lor in celule.
Functia
Se cunosc urmatoarele tipuri de organizare a sistemelor polienzimatice:
- funcional,
- structural-funcional i
- mixt.
Tipurile
ipurile de organizare a sistemelor polienzimatice:
Organizarea funcional - enzimele sunt asociate n sisteme polienzimatice, care ndeplinesc o anumit func ie. Produsul
reaciei prirmei enzime a lanului servete drept substrat pentru enzima urmtoare etc.
Ex.de organizare funcional - enzimele glicolizei, unde toate E participante se gsesc n stare solubil; Fiecare reacie
este catalizat de enzime aparte. Drept verig de legtura aici servesc metaboliii.
Organizarea structural-funcional consta n faptul ca enzimele formeaz sisteme structurale cu o anumit funcie.
Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din cteva enzime, care particip la oxidarea acidului
piruvic, sau sintetaza acizilor grai constituit din apte enzime legate structural, care n ansamblu ndeplinesc funcia de
sinteza a acizilor grasi.
Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de organizare structural-funcional. Astfel enzimele
se pot aranja n lan, fixindu-se de membrana biologic. Ex.enzimele lanului respirator mitocondrial, care particip la
transferul de electroni i protoni i la generarea de energie.
Tipul mixt de organizare a sistemelor polienzimatice reprezint o mbinare a ambelor tipuri de organizare, adic o parte
din sistemul polienzimatic are organizare structurala, iar cealalt
cealalt parte - organizare funcional.
Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate n complex structural (complexul 2oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag funcional prin metaboliii de legtur.
Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea activitii
enzimatice n diferite afeciuni (enzimodiagnosticul).
Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular: n citoplasm (lactatdehidrogenaza, aldolaza), n mitocondrii
glutamatdehidrogenaza), n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin). Acestea enzime n norm n plasm se gsesc
n concentr
concentraii foarte mici. La afeciunile celulare activitatea acestor enzime n plasm este brusc mrit.
Unitile de activitate ale enzimelor.
Unitatea Internaional (U.I.) cantitatea de E care catalizeaz transformarea 1 mol de S ntr-un minut n condiii
standard
Katal (kat) cantitatea de E care asigur transformarea unui mol de S ntr-o secund n condiii standard (1U.I.=16,67
nkat)
Terapia cu enzime
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca medicaie sunt legate de natura proteic:
- distribuie redus n organism dependena de dimensiuni, sarcina i de fenomenele de glicozilare (prin glicozilare
proteinele sunt recunoscute de receptori i fixate n anumite locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd tendin de a cptta i reine proteinele strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul administrarii orale, iar proteazele tisulare le scurteaza de
asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera reacii de hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva
enzima.
Tehnici propuse pentru optimizarea proprietilor terapeutice ale enzimelor.
- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie
- S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici ori prin ataare
covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii.
Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi alterate
proprietaisile farmacocinetice. Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol (PEG) ai arginazei, ai
glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii, enzime cu efect antitumoral. Un succes n terapia defectelor
genetice a fost imobilizarea enzimelor din ciclul ureogenetic pe un suport de fibrina.
S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in lipozomi - microsfere cu membrana bistratificata
lipido proteica, in hematii umane, in fantome eritrocitare sau in alti transportori celulari. Noile forme obinute prezint un
potenial de ntire tisular. De ex. in cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se impune o terape
de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.