METABOLISMUL CROMOPROTEINELOR

Cromoproteinele sunt heteroproteine care au ca grup prostetic un compus ce absoarbe n vizibil

determinnd o culoare specific.

n funcie de natura grupei prostetice, cromoproteinele se pot clasifica n :

cromoproteine porfirinice (hemoglobina, mioglobina - transportori de oxigen, citocromii

transportori de electroni n diverse lanuri oxidative, catalaza, peroxidaze enzime ce funcioneaz ca
antioxidani, etc.);
cromoproteine neporfirinice (siderofilina, feritina proteine implicate n transportul, respectiv
depozitarea fierului n organism, ceruloplasmina protein ce conine cupru, etc.).
Unele cromoproteine sunt i metaloproteine, deoarece conin i ioni metalici.
Cromoproteinele porfirinice au ca grup prostetic hemul, o porfirin substituit, deosebindu-se
ntre ele prin modul de legare a hemului la apoprotein (componenta proteic), prin natura
apoproteinei i, uneori, prin mici diferene n structura hemului.
Mioglobina i hemoglobina. Pentru a-i asigura necesarul de oxigen, gaz puin solubil n soluii
apoase, neputnd fi furnizat celulelor n cantiti suficiente, organismele au evoluat spre formarea
unor proteine transportoare de oxigen. Pentru c aminoacizii constitueni ai proteinelor nu pot lega
oxigenul, au fost exploatate proprietile unor metale, precum Fe, Cu, capabile s-l fixeze. Acestea au
fost incluse n structura unor proteine, n scopul evitrii reaciilor cu formare de specii reactive ale
oxigenului pe care metalele bivalente le poteneaz.
Mioglobina i hemoglobina au reprezentat modele importante pentru studiul structurii i
proprietilor proteinelor i al interrelaiilor structur funcii biologice.
Mioglobina (Mb) este o protein globular compact, avnd masa molecular de 17,2 kDa,
alctuit din hem legat de un singur lan polipeptidic cu 153 aminoacizi, globina, care prezint
structur primar, secundar i teriar. Este cromoproteina din muchi care are rolul de a depozita
oxigenul n esutul muscular. La mamiferele care se scufund, muchii conin mai mult mioglobin,
la celelalte conin cantiti variabile, ns mai mari n muchii scheletici i miocard, conferindu-le
acestora culoarea roie.
Hemoglobinele (Hb) sunt i ele proteine globulare compacte, dar tetramerice, cu masa
aproximativ 64,5 kDa, coninute n eritrocitele din sngele vertebratelor, alctuite ca i Mb din hem
i globin. Legturile ntre hem i globin sunt de aceeai natur n Mb i Hb.
Hemoglobinele ndeplinesc roluri biologice importante:
a) transport O2 de la plmni la esuturi i CO2 de la esuturi la plmni;
b) contribuie la meninerea constant a echilibrului acido-bazic n snge printr-o mare
capacitate de tamponare conferit de histidin, componenta proteic coninnd n proporie de
aproximativ 10% acest aminoacid.
Structura mioglobinei i hemoglobinei. Hemul, grupa prostetic a mioglobinei i
hemoglobinei, este alctuit din protoporfirin IX i Fe2+.
Protoporfirina IX este un derivat al unui nucleu format din 4 heterocicluri pirolice unite prin
puni metinice (-CH=). Conine legturi duble conjugate a cror prezen confer acestor sisteme
capacitate de a absorbi n vizibil (hemoglobina absoarbe la 405 nm - banda lui Sort).
n funcie de intensitatea luminii absorbite, se poate face dozarea hemoglobinei.
Lipsa conjugrii la unii intermediari de sintez se traduce prin absena culorii.
n lumin UV, hemoglobina prezint fluorescen.
Prin includerea ionului Fe2+ n nucleul protoporfirinei IX rezult hemul.
Dintre cele ase valene ale ionului Fe 2+, patru sunt satisfcute de protoporfirina IX, la valenele
a 5-a i a 6-a, perpendiculare pe planul protoporfirinei, putndu-se lega diferii liganzi (O 2, CO, NO).
n hemul liber, reacia cu oxigenul la una din cele dou valene libere poate determina oxidarea
ireversibil a Fe2+ la Fe3+, hemina rezultat neputnd lega oxigenul.

H2O

CH 2=CH
H 3C
H 3C
-

CH 3
CH=CH 2

N
N
Fe
N
N

CH 3
CH 2-CH 2-COO

OOC-CH 2-CH 2

H2O

Structura hemului
Reacia de oxidare este mpiedicat prin sechestrarea hemului ntr-o structur proteic n care
accesul la valenele libere ale Fe2+ este restricionat. n aceast form, valena a 5-a este satisfcut de
un rest de histidin din globin, iar a asea reprezint situsul de legare pentru oxigen, legndu-se apoi
de un rest de histidin din globin.
Globina este o protein globular coninut n toate proteinele transportoare de oxigen,
existnd mici diferene structurale ntre acestea. Globina din mioglobin i hemoglobin conine un
numr mare de resturi de histidin i se poate asocia cu o molecul de hem prin interaciuni
necovalente. Globina are rolul de a proteja intereacia hemului cu oxigenul.
Globina din Hb rezult prin asocierea a patru catene polipeptidice, identice dou cte dou: 2
catene , fiecare cu 141 aminoacizi, i 2 catene , fiecare alctuit din 146 aminoacizi.
Exist similaritate ntre secvena de aminoacizi din lanurile globinei din Hb i cel al Mb, 27
dintre acetia fiind identici. Lanurile i se unesc dou cte dou formnd un dimer , iar ulterior
se formeaz tetramerul 22. Fiecare lan polipeptidic include un rest hem, astfel c tetramerul Hb are
4 resturi hem. Structura tetrameric a hemoglobinei este esenial pentru funciile ei biologice.
Hemoglobine fiziologice. n eritrocitele umane, n diferite perioade de via, s-au identificat mai
multe tipuri de hemoglobin ce difer ntre ele prin natura lanurilor, toate coninnd lanurile : HbA
(22), HbA2 (22), HbF (22), HbE2(22), HbE1(4).
HbE (hemoglobina embrionar) se sintetizeaz n primele luni dup concepie, mai nti ca
HbE1 (Gower) i apoi HbE2. Ulterior, ea este nlocuit de HbF (hemoglobina fetal), majoritar ntre
lunile 3 i 8 de via intrauterin. Din luna a 3-a, ncepe s se sintetizeze i HbA (hemoglobina
adult), dar aceasta predomin abia dup natere. n viaa extrauterin, sngele mai conine i o alt
hemoglobin adult, HbA2.
Fiecare din cele patru tipuri de hemoglobin se caracterizeaz prin:
a) mobilitate electroforetic caracteristic;
b) punct izoelectric caracteristic;

c) formarea de cristale sub form de bipiramide simetrice; cristalele sunt specifice ca

form fiecrei specii. Specificitatea de specie este conferit de globin.
d) denaturare n mediu acid sau bazic.
Legarea O2 la Mb i Hb. n oximioglobin (MbO2) i oxihemoglobin (HbO2) (forme cu
oxigen), la a 6-a valen a fierului se leag oxigenul .
Studiile de cristalografie cu raze X, au evideniat modificri semnificative ale dispoziiei fierului
fa de planul hemului atunci cnd se leag molecula de oxigen.
Pentru Mb astfel de deplasri sunt puin importante, ns ele afecteaz sever structura
hemoglobinei i ele sunt rspunztoare de proprietile allosterice ale acesteia.
n oxihemoglobin (HbO2), legarea primei molecule O2 la lanul 1 determin deplasarea Fe2+
spre planul porfirinei. Aceast deplasare determin modificri conformaionale ce sunt transmise
lanurilor adiacente crescndu-le afinitatea pentru oxigen.
Efectul se numete efect cooperativ pozitiv i din acest motiv aspectul curbei de saturare cu
oxigen este diferit la hemoglobin i mioglobin.

CH2-CH-CO-

His proximal
..N

NH
NH
CH3

CH2=CH
H3 C

globin

CH=CH2

N N
Fe
N N

H3C

OOC-CH2-CH2
Lys-NH 3
+

globin

O=O

globin

CH3
CH2-CH2-COO
+

H3N-Lys

His distal NH
N
CH2

OC

NH

CH
Reprezentarea schematic a legrii hemului de globin

Mb, leag O2 dup o curb cu aspect hiperbolic, avnd afinitate mai mare pentru oxigen dect
Hb la orice presiune.O protein care leag O 2 dup o curb hiperbolic nu poate funciona ca protein
transportoare de O2, deoarece dac are afinitate mare, l poate fixa n plmni la o presiune crescut,
dar nu-l poate ceda esuturilor. Dac l fixeaz cu afinitate mai mic pentru a-l putea ceda esuturilor,
nu s-ar ncrca la plmni cu o cantitate suficient de O 2. De aceea, funcioneaz ca protein de
rezerv de oxigen,.

Curbele de saturare cu oxigen ale Mb i Hb

Hb poate funciona ca protein de transport de O 2. Aceasta are o curb de saturare cu aspect
sigmoid. Se satureaz cu oxigen n plmni, unde pO 2 este de aproximativ 100 torri i cedeaz
oxigenul n esuturi unde presiunea din capilare este 40 torri.
Modulatori ce influeneaz legarea O 2 la hemoglobin. Legarea oxigenului la hemoglobin
este influenat de concentraia H+, CO2, i de acidul 2,3-difosfogliceric (DPG).
Deoxihemoglobina (Hb) are afinitate mai mare pentru H+ dect oxihemoglobina. De aceea, dac
pH-ul scade, se accentueaz disocierea HbO 2.

HbO 2 + H

HbH + O2

Deci H+ este un antagonist al legrii oxigenului la hemoglobin. Importana biologic a acestei

3

modulri rezid n faptul c, n esuturile cu acidoz ca rezultat al unor procese metabolice, se

elibereaz mai uor oxigenul necesar.
Dioxidul de carbon (CO2) influeneaz oxigenarea hemoglobinei similar cu ionii H +, deoarece
la dizolvarea lui n snge se formeaz H +. Anhidraza carbonic din hematii catalizeaz hidratarea
CO2, iar protonii rezultai la ionizarea acidului carbonic contribuie la disocierea O 2.

CO2 + H2O

H CO 3 + H +

H2CO 3

HbO 2 + H

HbH + O2

Ionii bicarbonat (HCO3-) sunt transportai la plmni. Cnd hemoglobina se oxigeneaz din nou
n plmni, H+ sunt eliberai, reacioneaz cu ionul HCO 3- pentru a forma acidul carbonic din care
rezult CO2 ce se elimin prin respiraie. O parte din CO 2 se leag de hemoglobin, sub form de
carbamat la resturile amino, rezultnd carbhemoglobina.
Un alt factor care influeneaz acceptarea O 2 de ctre hemoglobin este acidul 2,3difosfogliceric (DPG). Legarea DPG la hemoglobin duce la eliberarea O 2 . Eritrocitele conin o
concentraie de DPG echivalent celei a hemoglobinei, de aproximativ 4,5 mM.
Legarea DPG stabilizeaz hemoglobina n forma neoxigenat.

Interaciunea DPG Hb permite adaptarea multor mamifere (primate, om) n condiiile unor
presiuni reduse ale O2 (de exemplu, la altitudine, n hipoxie).
Cnd organismul se gsete n condiii n care pO 2 este mai mic, cantitatea de DPG crete
determinnd scderea afinitii hemoglobinei pentru O 2, acesta fiind mai uor eliberat n esuturi. La
alte mamifere (cal, oaie, capr), hemoglobina are afinitate mai mic pentru O 2 i DPG nu este
important pentru acestea.
Interaciunea cu DPG este diferit la hemoglobinele fiziologice. HbF interacioneaz cu DPG
mai puin. De aceea, HbF are afinitate mai mare pentru O 2 putndu-l lega la presiuni la care este
disociat de pe HbA, ceea ce face posibil oxigenarea ftului de la mam prin schimbul de oxigen ntre
HbF i HbA.
Hemoglobine anormale i patologice. n anumite situaii, cantitatea de hemoglobin sau
calitatea acesteia sunt diferite de cele normale, fiind nsoite de anemie. Aceste afeciuni de numesc
hemoglobinopatii sau talasemii. Hemoglobinopatiile pot fi:
a) calitative, se formeaz o hemoglobin cu secven de aminoacizi diferit de cea normal, de
exemplu HbS, HbC, Hb Malta, Sasketon, Boston;
b) cantitative, se formeaz cantitate mai mic de Hb normal sau anormal.
Hemoglobina glicozilat (HbA1c) este o fraciune din HbA, glicozilat prin legarea glucozei la
valina terminal din catena . n condiii normale, pentru o glicemie de 60 110 mg/dl, HbA 1c
reprezint ~ 7,5%. Aceasta crete proporional cu concentraia glucozei n snge, fiind un indice util
pentru monitorizarea diabetului zaharat, concentraii mai mari de 10% indicnd un control metabolic
4

defectuos. Aceasta form se poate separa prin cromatografie sau electroforez.

Carboxihemoglobina (HbCO) se formeaz prin legarea coordinativ a monoxidului de carbon
(CO) la ionul Fe2+ din hem. Reacia este reversibil, afinitatea hemoglobinei pentru CO fiind de
aproximativ 200 ori mai mare dect pentru oxigen, astfel c semisaturarea are loc la o presiune foarte
mic i Hb devine nefuncional.
Pn la o concentraie de 10 % HbCO nu apar simptome caracteristice. ntre 1030% apare
cefalee, la 3050% accentuarea cefaleei, confuzii mintale, grea, vom, accelerarea pulsului, com, la
5060% apar convulsii, iar dup 6070% oc anafilactic, insuficien respiratorie, moarte. La
concentraii de 8090%, moartea survine n cteva secunde.
Methemoglobina (MetHb). Sub aciunea oxidanilor, Fe2+ din hem se oxideaz la Fe3+ cu
formarea heminei, grupa prostetic a methemoglobinei, ce nu poate transporta oxigenul. MetHb se
formeaz fiziologic n mod continuu n eritrocite, dar este redus rapid la Hb de un sistem n care
intervin methemoglobin reductazele I i II, vitamina C i glutationul redus (GSH). Afectarea
genetic a sintezei celor dou enzime determin acumularea MetHb i duce la lezarea membranei
eritrocitare.
Nou nscuii prezint o tendin mai mare spre methemoglobinemie, datorit unei insuficiene a
sistemelor enzimatice, sensibilitii mai mari a HbF la oxidare, hipovitaminozei C. La acetia se
produce hemoliza.
Unele xenobiotice (compui strini organismului medicamente, nitrii, nitrai) determin
producerea unei cantiti mai mari de MetHb ce depete capacitatea reductazelor existente de a o
transforma n forma redus:
a) antipiretice i analgezice: paracetamol, acetanilid, fenazol;
b) ageni antibacterieni: sulfamide, cloramfenicol;
c) ageni antimalarici: chinin;
d) compui coninui de unele preparate dermice: unguente cu benzocain, pirogalol
e) nitrii, nitrai preluai din ap, sol.

Citocromii
Aceste heteroproteine au fost descrise, la nceput, ca pigmeni similari celor sanguini de ctre
Mac Munn (1886) i redenumii citocromi pe baza calitilor spectrale (Keilin, 1925).
n aceast clas de cromoproteine sunt incluse toate hemoproteinele intracelulare legate de
particulele subcelulare ce au una din urmtoarele funcii biologice:
a) catalizatori n reacii de oxidoreducere;
b) intervin n conservarea energiei, fotosintez i n metabolismul unor bacterii anaerobe;
c) intervin n reacii de metabolizare a unor compui endogeni i exogeni (xenobiotice).
Funcia transportoare de electroni se manifest prin schimbarea valenei fierului din grupa
prostetic sau prin schimbul de H+:
2+

Fe

2+

R-Fe : OH2

3+
Fe + e -

+
3+
R-Fe : HO + H

Clasificarea citocromilor se face n funcie de mai multe criterii: structura grupei prostetice i
modul de legare cu apoproteina, spectrele de absorbie, potenialul redox.
Sunt denumii, n general, cu literele mici ale alfabetului latin, urmate de anumii indici
numerici: a, a3, b, b5, c. Exist ns i denumiri particulare, de exemplu citocromii P450.
Citocromul c este o hemoprotein cu mas molecular mic, 12,4 kD, alctuit din 104
aminoacizi. Este coninut n mitocondrii i se izoleaz uor din miocard.
Este o protein globular, cu form aproape sferic.
Citocromul c este o component a lanului redox din membrana mitocondrial.
Citocromul c este i un mediator al procesului de moarte celular programat (apoptoz),
eliberarea sa n citoplasm ca efect al unor semnale intramitocondriale fiind important n continuarea
evenimentelor citoplasmatice din acest proces.
Citocromul b este tot o hemoprotein mitocondrial care are rol n desfurarea transferului de
electroni i H+ prin membrana mitocondrial. Conine acelai hem ca i Hb.
Citocromul a este o hemoprotein mitocondrial component a lanului respirator care se
caracterizeaz prin prezena unei catene cu 15 atomi de carbon la grupa vinil din poziia 2 a hemului i
prin transformarea grupei metil din poziia 8 n grup formil (-CHO).
Intervine n transferul electronilor i H + n membrana mitocondrial n respiraia celular.
5

Citocromul b5 este o hemoprotein coninut n microzomi fiind component al lanului oxidativ

de la nivelul reticulului endoplasmatic neted implicat n procese biochimice particulare, cum ar fi
desaturarea acizilor grai.
Citocromii P450 sunt reprezentai de cteva sute de hemoproteine prezente n aproape toate
celulele mature, cu excepia eritrocitelor i muchilor scheletici, denumite astfel datorit maximului de
absorbie pe care complexele cu CO ale formelor reduse l prezint la 450 nm. Sunt grupai n mai
multe familii, n fiecare familie (numerotat cu cifre arabe) existnd mai multe subfamilii denumite cu
literele alfabetului latin (Cyp 2A, Cyp 3C etc).
Sunt proteine oligomere alctuite din 16 monomeri ce conin 8 molecule de hem.
Se gsesc n veziculele reticulului endoplasmatic neted i fac parte dintr-un sistem transportor
de e- nefosforilant a crui energie este utilizat pentru monooxigenarea substratului (oxidaze cu
functie mixt microzomiale, OFMM).

Sistemul transportor de e al citocromilor P450

Acest sistem intervine n metabolizarea unor compui endogeni i exogeni (hemoglobin,
colesterol, medicamente, alcool, etc.), avnd specificitate de substrat diferit.
Unele procese metabolice se desfoar cu participarea sistemului citocromilor P 450:
a) reaciile de aromatizare i hidroxilare din biosinteza hormonilor steroizi;
b) oxidarea unor hormoni tisulari, eicosanoidele;
c) hidroxilarea vitaminei D3;
d) -oxidarea acizilor grai.
Inducerea enzimelor din acest sistem are importan clinic, deoarece reprezint mecanismul
biochimic al interaciunilor dintre medicamente.

Metabolismul hemoglobinei
Cea mai important cromoprotein ce conine nucleul porfirinic este hemoglobina. Porfirinele
sunt compui de provenien endogen, fiind sintetizate continuu pe msur ce sunt catabolizate i
eliminate.
Metabolismul hemoglobinei presupune metabolismul celor 3 componente:
protoporfirina IX;
globina;
Fe2+
Biosinteza hemoglobinei
Este un proces complex care const n sinteza separat a gruprii prostetice i a componentei
proteice i asamblarea lor cu ionul de fier.
Biosinteza hemoglobinei are loc n celulele sistemului eritroformator din mduv, ficat, splin.
Localizarea intracelular a biosintezei:
- primele i ultimele reacii au loc n mitocondrie;
- reaciile intermediare au loc n citosol.
Biosinteza hemoglobinei are ca precursori:
- glicocol;
- succinil~ScoA provine din ciclul Krebs.
Etapele biosintezei hemului:
a. sinteza acidului -aminolevulinic;
b. sinteza porfobilinogenului;
c. sinteza protoporfirinei IX;
d. unirea protoporfirinei IX cu Fe2+.
Schematic reaciile pot fi reprezentate:
Acid -amino--cetoadipic
Glicocol + Succinil ~ CoA
1
Acid -aminolevulinic
2
Porfobilinogen

Uroporfirinogen III

Uroporfirinogen I

Coproporfirinogen III

Coproporfirinogen III

Mezoporfirinogen III
Hematoporfirinogen III
Protoporfirinogen III
Protoporfirina IX

HEM

Etapele biosintezei hemului:

1. Sinteza acidului -aminolevulinic n mitocondrie:
- -aminolevulinat sintaza (-ALAS)
COOH
CH 2
ACoS

~C
+
H
C

COOH

Mg2+
PALPO
TPP
Ac.lipoic

CH 2

- CoASH

COOH

CH2
CH 2
C
H

- CO2
COOH

CH2
CH2
C O
CH2
NH 2

NH 2

COOH

Acid -amino-cetoadipic

NH 2

Acid-aminolevulinic

2. Sinteza porfobilinogenului n citosol:

- Porfobilinogensintaza
Acidul -aminolevulinic format n mitocondrie difuzeaz n citosol unde se enolizeaz. Prin
condensarea celor 2 forme enolice se formeaz un ciclu pirolic porfobilinogenul.
COOH
CH 2

CH 2

CH2

Enolizare

CH 2
C O

NH 2

- 2 H 2O

C OH
C

HC

CH 2

H C H

COOH
P CH 2 COOH A
CH CH 2

COOH

COOH

HO

N
H

CH 2 NH 2

CH 2 NH 2

Porfobilinogen

3. Sinteza aminometil bilanului are loc n citosol prin condensarea a dou molecule de
porfobilinogen i dezaminare.
- porfobilinogen dezaminaza
A
I

H 2C
H 2N

N
H

-3NH3

H 2C

N
H

II

CH 2

III

CH 2

N
H

H 2N

CH 2

N
H

P
IV

N
H

Aminometilbilan

4. Dezaminare ntre ciclurile I i IV are loc n citosol i se formeaz uroporfirinogen I:

- uroporfirinogen sintaza
A

P
A

N
N
H
H
H
NH N

II

IV

III

I porfobilinogenului, urmat de reacii de

Uroporfirinogenul III se formeazUroporfirinogen
prin dezaminarea
tautomerizare, ciclizare, deciclizare i o nou ciclizare ce au ca rezultat formarea uroporfirinogenului
III ce are nucleul IV rotit cu 1800 fa de uroporfirinogenul I. uroporfirinogen III cosintaza

P
A

NH HN

II

NH HN
A

IV

III

rotire
cu 1800

Uroporfirinogen
III
8

7- P
8- A

5. Sinteza coproporfirinogenului III n citosol prin decarboxilarea gruprilor CH 2 COOH

din poziiile 1,3,5,8 i CH 3 , sub aciunea uroporfirinogen decarboxilazei. Se obine
coproporfirinogenul I din uroporfirinogenul I i coproporfirinogenul III din uroporfirinogen III.
P

CH 3

II

H 3C

NH HN

NH HN
H 3C

IV

III

CH 3

Coproporfirinogen III

6. Sinteza continu pe calea coproporfirinogenului III care difuzeaz n mitocondrie unde prin
decarboxilarea resturilor de acid propionic din poziiile 2 i 4 i formarea radicalilor etil (- CH 2 CH3)
se obine mezoporfirinogen III.
7. Prin oxidarea radicalilor etil din 2 i 4 (-CH 2-CH2-OH) se formeaz hematoporfirinogenul
III, sub aciunea coproporfirinogen oxidazei n mitocondrie.
8. Sinteza protoporfirinogenului III n mitocondrie prin deshidratatrea radicalilor din poziia 2
i 4 cu formare de radicali vinil.
9. Protoporfirina IX se obine din protoporfirinogen III prin dehidrogenare sub aciunea
protoporfirinogenoxidazei, n mitocondrie.
CH3

HC CH2
H 3C

CH CH2

NH HN

Protoporfirinogen
oxidaza

NH HN

CH 3

H 3C
CH2
CH2
COOH

CH3

HC CH2
H3C

N
NH

CH CH2

HN
N

CH3

H3C

CH2
CH2

CH2
CH2
COOH

COOH

Protoporfirinogen III

CH2
CH2
COOH

Protoporfirina IX

10. n mitocondriile hepatice i din organele hematoformatoare, sub aciunea ferochelatazei /

hemsintetazei, are loc ncorporarea Fe 2+ n protoporfirina IX cu formarea hemului. Fierul provine din
hemoglobina catabolizat sau este de origine alimentar.
CH3

HC CH2
H3C

N
N

Fe

CH CH2

2+

N
CH3

H3C
CH2
CH2
COOH

CH2
CH2
COOH

HEM

Globina se sintetizeaz n ribozomii din ficat i eritroblati. Este alctuit din dou lanuri i
cu patru molecule de HEM formnd hemoglobina.
9

Globina confer hemoglobinei specificitate de specie / organ. Cele unsprezece legturi

conjugate din structura protoporfirinei IX confer anumite caracteristici:
- stabilitate ridicat;
- capacitate de absorbie ridicat n spectrul vizibil la = 400 nm, banda de absorbie se
numete banda lui Sort. Pe baza intensitii acestei benzi diversele porfirine pot fi dozate;
- prin iradierea porfirinelor cu radiaii cuprinse n banda lui Sort, se obine o fluorescen roie
utilizat pentru dozare;
- absena conjugrii determin lipsa de culoare.
Reglarea biosintezei hemoglobinei
Etapa cel mai bine controlat este cea catalizat de - aminolevulinat sintaz:
prin mecanism allosteric inhibitorul fiind hemul ce acioneaz ca un aporepresor;
prin mecanism de inducie represie.
Sinteza este indus de scderea concentraiei hemului iar represia de creterea concentraiei
peste limite normale.
Aciuni asupra - aminolevulinat sintazei:
inductoare: barbiturice, sulfamide, hormoni estrogeni, insecticide;
represoare: glucoza, derivai glucidici.
Ferochelataza este inhibata allosteric de hem.
Porfirii
Sunt stri patologice caracterizate prin eliminarea crescut n urin i fecale a unor
intermediari ai biosintezei hemului.
Profiriile pot fi:
primare determinate de defecte enzimatice genetice: uroporfirinogen sintaza,
porfobilinogensintaza, uroporfirinogen decarboxilaza, coproporfirinogen oxidaza, ferochelataza;
secundare consecutive altor afeciuni: afeciuni hepatice, diabet cu acidoz, intoxicaii cu metale
grele (Pb, Hg, CCl4), leucemie, anemie pernicioas.
Fiecare porfirie primar este cauzat de sinteza deficitar a unei singure enzime. Frecvente
sunt porfiriile hepatice, eritropoietice i mixte.
Pot fi determinate de unele medicamente: sulfamide, estrogeni, anticoncepionale, barbiturice.
Se elimin cantiti crescute de acid -aminolevulinic i porfobilinogen n urin. Activitatea aminolevulinat sintazei este crescut, dar hemoglobina scade pentru c este folosit la sinteza
citocromului P450, necesar degradrii medicamentelor).
Porfiriile cronice se caracterizeaz prin simptome ca: dureri abdominale, fotosensibilitate
cutanat, hepatomegalie.
Catabolismul hemoglobinei
Diferitele hemoproteine se catabolizeaz printr-un mecanism unic cu viteze diferite n primele
etape. Prin experiene cu precursori marcai radioactiv s-a constatat apariia a dou maxime de
producere a principalului produs de degradare: primul dup aproximativ 3 zile i corespunde
citocromului P450 i catalazei, al doilea dup aproximativ 120 zile rezultnd din degradarea
hemoglobinei.
La om se degradeaz zilnic aproximativ 6gr hemoglobin, 300 mg hem.
Hematiile ajunse la maturitate sunt captate de macrofagele din splin, ficat, mduv, ganglioni
limfatici, membranele sunt distruse i hemoglobina eliberat sufer modificri. Se produc alterri
discrete ale componentei proteice i oxidarea protoporfirinei IX cu deciclizare n poziia dintre
ciclurile I i II sub aciunea hemoxigenazei microzomale, sistem enzimatic din categoria oxidazelor cu
funcie mixt ce necesit prezena O 2, NADPH,H+ , cit. P450.
Se formeaz hidroxihemina (Fe3+), apoi verdoglobina. Fe3+ i globina sunt eliminate rezultnd
biliverdina.
Fe3+ este depozitat ca feritin iar globina este degradat la aminoacizii componeni.
Biliverdina este redus la bilirubin n prezena enzimei biliverdinreductaza, NADPH, H +
dependent. Urobilinogenul este reabsorbit, readus la ficat i reexcretat prin bil, relund circuitul
10

enterohepatic. O mic parte se elimin pe cale renal, iar n contact cu aerul se oxideaz formnd
urobilina, un compus colorat.
Schema general de degradare a hemului:
Hemoxigenaza microzomal din
SRE (ficat, splin, mduv)
HEM
Biliverdin
O2
NADPH,H+
3+
+
CO Fe
NADPH,H Cit P450
NADP+

Bilirubin indirect (BI)

SNGE

BI - albumin

FICAT

BI

UDP-glucuronat

UDP-glucuronil
transferaza

UDP

Bilirubinmonoglucuronid 20%
UDP-glucuronat

UDP-glucuronil
transferaza

UDP

Bilirubindiglucuronid 80% (BD)

BILA
INTESTIN
BDBI

FICAT

Reducere

SNGE

Urobilinogen
Reducere

RINICHI

Stercobilinogen
URINA
Urobilin

MATERII FECALE
Stercobilin

Reaciile chimice:

M
CH

N
H

P
CH

N
H

M
CH

N
H

Biliverdina

NADPH,H+

Biliverdin reductaza

NADP+
M

N
H

M
CH

N
H

P
CH 2

N
H

Bilirubina indirecta (libera)

11

M
CH

N
H

CH

N
H

P
CH 2

N
H

M
CH

N
H

N
H

Bilirubina indirecta (libera)

2 UDP-glucuronat

UDP-glucuronil
transferaza

2 UDP

COOH

COOH
OO
H
H
OH H
H
HO
H OH

C O

O C

CH 2

H2C

CH 2

H2C

OH H

III
N
H

CH

IV
N
H

CH2

H
OH

II
N
H

H
H HO

M
CH

I
N
H

Bilirubindiglucuronid

HO

CH2

N
H

P
IV
N
H

CH2

N
H

M
I

CH2

OH

N
H

Urobilinogen
M

HO

CH2

N
H

P
IV
N

HC

N
H

M
I

CH2

OH

N
H

Urobilina

V
II

HO

M
CH2

N
H

P
III

P
IV
N
H

CH 2

N
H

M
I

CH 2

OH

N
H

stercobilinogen
M

HO

N
H

M
CH2

N
H

M
IV
N

HC
stercobilina

12

M
CH2

I
N
H

OH

Hiperbilirubinemii
n mod normal n snge ajunge numai bilirubina indirect, prehepatic (concentraia de 0.8 mg
%) i doar o mic parte din bilirubina direct (< 0.2mg%).
Creterea concentraiei bilirubinei directe peste 1 mg % se numete hiperbilirubinemie.
Bilirubina poate difuza n esuturi ducnd la colorarea n galben a pielii i mucoaselor situaie
caracteristic sindroamelor icterice.
Patologia bilirubinei este complex fiind determinat de:
intensificarea degradrii hemoproteinelor ;
diminuarea capacitii ficatului de a conjuga bilirubina indirect ;
perturbri ale mecanismului de eliminare a bilirubinei prin bil;
tulburri extrahepatice ale fluxului biliar.
Icterele pot fi:
cu bilirubin indirect: icter neonatal determinat de capacitatea ficatului de a conjuga
bilirubina i incapacitatea intestinului de a o reduce;
cu bilirubin direct: icter mecanic;
cu bilirubin direct i bilirubin indirect: icter hemolitic, icter hepatic.
n cazul n care crete concentraia bilirubinei directe n snge aceasta se elimin n urin,
icterul fiind nsoit de prezena pigmenilor biliari n urin.
Bilirubina este mai puin polar la pH fiziologic. n realitate nu are structur liniar ci n zigzag stabilizat prin legturi de hidrogen, ceea ce o face insolubil n ap i greu de eliminat.
H2C

CH3

H3C

C
N
H

N
H
O

O
CH2

H
N

H
N

CH2

O
CH3

CH3

Bilirubina

Bilirubina liber format este degradat ulterior n ficat. Pentru c este insolubil, bilirubina
indirect este sintetizat n alte esuturi este transportat la ficat prin snge legat de albumin.
Concentraia crescut a acizilor grai, unele medicamente (sulfamide, unele antiinflamotore, substane
de contrast) limiteaz legarea bilirubinei indirecte la albumin. Ficatul o extrage de pe albumin i o
internalizeaz cu dou proteine citosolice J (ligandina) i Z (leag bilirubina indirect la concentraii
crescute) care mpiedic ieirea i ptrunderea n organitele celulare.
n ficat este transformat prin conjugare cu acid glucuronic, ntr-o form mai solubil,
bilirubina conjugat.
n ficat se formeaz, sub aciunea UDP- gflucuronil transferazei, enzim din membrana
microzomal, bilirubinmonoglucuronidul.
n bil predomin bilirubindiglucuronidul rezultat i prin dismutarea a 2 moli de
bilirubinmonoglucuronid.
Etapele finale se petrec n intestin . Bilirubindiglucuronidul este deconjugat (-glucuronidaza
bacterian) iar bilirubina liber este supus reaciilor de reducere catalizate de reductaze bacteriene.
Se formeaz urobilinogenul i stercobilinogenul, compui ce sunt incolori i care se oxideaz
n aer. Stercobilinogenul este eliminat prin fecale, oxidndu-se n contact cu aerul formnd astfel
stercobilina. Urobilinogenul se reabsoarbe din intestin i se elimin n final prin urin, oxidndu-se cu
formare de urobilin, care alturi de urocromul urinar contribuie la culoarea acestui lichid biologic.

13