Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Reguli Laborator PDF
Reguli Laborator PDF
manipuleaza substante corozive (acizi sau baze tari, solutii concentrate de alcool) sau
toxice.
1.3.Utilizarea reactivilor biochimici si solutiilor
Calitatea apei
Cel mai comun solvent utilizat la prepararea solutiilor din laboratorul de biochimie
este apa. Nu se va folosi apa de canal deoarece aceasta contine o varietate de
impuritati incluzand particule (nisip), compusi organici si anorganici sau gazele
dizolvate, microorgansime (bacterii, virusuri, protozoare, alge). Mai mult, degradarea
acestor organisme conduce la aparitia unor produsi suplimentari. Pentru majoritatea
experimentelor efectuate in laboratorul de biochimie se foloseste apa deionizata sau
distilata. Pentru experimente speciale (cromatografia de lichide-HPLC sau FPLC,
culturi de tesuturi, masuratori de fluorescenta) se va utiliza numai apa cu un grad inalt
de puritate (pastrata in sticle speciale).
1.4. Manipularea materialelor si instrumentelor
1. Pisetele contin apa distilata;
2. Sticlele picuratoare contin solutii alcoolice;
3. Sticlaria si alte materiale necesare pentru laborator se gasesc pe masa de
laborator. Sticlaria utilizata se clateste cu apa distilata, iar la sfarsitul
laboratorului se imerseaza in recipientul care contine o solutie acida diluata;
4. Resturile solide netoxice se arunca in sacii menajeri din laborator, iar cele
toxice se depoziteaza in recipienti speciali;
5. Sticlele se manipuleaza cu grija. Nu trebuie schimbate dopurile de la sticle.
Dupa fiecare utilizare sticlele se inchid imediat.
Acuratetea experimentala depinde in mare masura de calitatea echipamentelor si a
instrumentarului. Se vor utiliza numai pipete de sticla sau varfuri de pipete curate,
pentru a aspira lichide din sticle, din doua motive:
o Multe chimicale si compusi biochimici sunt utilizati la concentratii mici (de
ordinul picograme, micrograme sau miligrame). Orice contaminare a pipetei,
paharelor sau cuvelor poate modifica compozitia solutiei rezultate si implicit
determina erori mari in experimente;
o Multe biochimicale si procese biochimice sunt sensibile la agenti de
contaminare (ioni metalici, detergenti, compusi organici).
Sticlaria si lucrurile din plastic trebuie spalate cu o solutie cu detergent
(concentratie mai mica decat 0,5% in apa), clatite cu apa si in final cu apa distilata.
Uscarea sticlariei se va face numai in etuve speciale folosite numai in acest scop.
6. Materialele din plastic
2. Stabilirea
referintei
3. Citirea
absorbantei
Temperatura
din cuva
Intervalul
citirii
Pasul
citirii
9.
Trasferul calitativ al lichidelor
Practica biochimica se bazeaza pe multe metode analitice.
Figura 1.6. ilustreaza tipurile de pipete si adaptori utilizati in laboratorul de biochimie.
Bulbii mai mici din cauciuc sunt utilizati pentru pipetele Pasteur, pipete cu care se
aspira volume de 1-2 ml. Para din silicon este folosita pentru pipetele gradate sau cu
volum fix. Trebuie evitata patrunderea solventului in bulbul/para pipetei. De aceea se
aspira un volum de lichid astfel incat sa se depaseasca linia de umplere cu circa 2-3
cm. Se elibereaza lichidul pana cand meniscul se situeaza pe aceasta linie. Pentru
transferul lichidului se atinge recipientul sau paharul cu varful pipetei si se elibereaza
lichidul. Pipetele Mohr sunt cele mai utilizate in laboratorul de chimie (pentru volume
intre 0,1-10 ml). Pipetele serologice sunt gradate invers comparativ cu pipetele Mohr
Curatirea pipetelor
Imediat dupa utilizare pipetele sunt plasate intr-un cilindru vertical si se acopera cu o
solutie diluata de detergent ( 0,5%). Dupa clatire cu apa de canal se continua cu apa
distilata.
E
G
A
Figura 1.6. Dispozitive pentru masurarea volumelor si adaptorii
A. Pipete de sticla (volumetrica, Mohr sau seroloegica);
B. Pipeta Pasteur;
C. Seringa Hamilton;
D. Para pentru pipetare;
E. Bulbi pentru pipeta Pasteur;
F. si G. Dispozitive mecanice folosite la pipetare
Pipetele automate
Pipetele automate sunt folosite cu varfurile corespunzatoare.
Tabel 1.1. Tipuri de pipete automate folosite frecvent in laborator
Modelul pipetei Volumul
Culoarea varfului
P2
alba
0,5-2 l
P20
galbena
2-20 l
P200
galbena
20-200 l
P1000
alb-albastra
200-1000 l
P10000
1-10 ml
alba
Aspirarea-Se actioneaza
pistonul pipetei pana la primul
punct (pasul 1) fara a imersa
pipeta in lichid. Se elibereaza
incet pistonul pentru a aspira
proba.
Expulzarea-Se actioneaza
pistonul pipetei pana la primul
punct (pasul 1) dupa care se
asteapta circa 1 secunda si se
continua pana la cel de-al doilea
punct (pasul 2) in scopul de a
indeparta si resturile de lichid
ramase pe varf.
Pentru transferul rapid si exact
al unor volume mai mari decat
5 ml se pot folosi dispozitive
speciale. Acestea sunt
disponibile in diferite marimi si
sunt folosite pentru transferul
materialelor
corozive.
11. Centrifugarea
Centrifugarea este un proces care utilizeaza forta centrifuga pentru a separa
lichidele pe baza densitatii materialului. De exemplu, proteinele sau acizii nucleici
pot precipita in anumite solutii tampon sau organice. Aceste biomolecule pot fi
sedimentate prin centrifugare. Unul dintre aspectele importante in cazul
centrifugarii este balansarea centrifugii (un tub cu aceeasi greutate este plasat
diametral opus fata de un alt tub; exista insa si situatii cand tuburile nu se plaseaza
diametral opus, ci simetric trei tuburi pot fi plasate la distante egale). In cazul in
care centrifuga nu este calibrata corespunzator exista probabilitate mare de
producere a unor accidente grave. In cazul in care in decursul centrifugarii se aude
un zgomot suspect se va opri imediat centrifuga. In situatia in care se va efectua
centrifugarea la temperaturi scazute (folosite in special la prepararea extractelor
enzimatice) capacul centrifugei va fi inchis dupa ce probele au fost centrifugate.
In caz contrar sistemul de racire al centrifugei poate fi afectat.
Intrebari:
1. Ce masuri de protectie trebuie luate in cazul manipularii unei solutii de acid
clorhidric? Cum neutralizati aceasta solutie in cazul unui accident?
2. Ce tip de apa distilata se utilizeaza in cromatografie?
3. Cum se omogenizeaza continutul din cuvele de plastic in vederea citirii
absorbantei?
4. Ce tip de cuva se foloseste pentru masurarea absorbantei la 270 nm?
5. Care din urmatoarele materiale de laborator este adecvat pentru masurarea
unui volum de 2 mL solutie:
a) Pipeta Pasteur;
b) Pipeta automata;
c) Seringa Hamilton.
6. Care din urmatoarele materiale de laborator permite masurarea cu o precizie
satisfacatoare a unor volume mai mari de solutie:
a) Flacoane cotate;
b) Cilindri gradati;
c) Biuretele.
7. Descrieti modul de preparare a 100 mL de solutie:
a) 50 mM glicina;
b) 1% clorura de sodiu;
c) 10 M citocrom c.
8. Preparati 1 mL de solutie de clorura de sodiu de concentratie 5%.
9. Cum sunt stocate solutiile tampon? De ce?
10. Care din urmatoarele materialele pot fi folosite la stocarea unor volume reduse
de solutie:
a) Tuburi de 50 mL;
b) Tuburi de 15 mL;
c) Tuburi Eppendorf.
11. Cum procedati pentru a calibra o pipeta automata de volum maxim 1000 l?
12. Cantariti la balanta analitica 20 mg de clorura de sodiu si 300 mg de sulfat de
cupru. Convertiti cantitatile in grame.
13. Cum procedati in situatia in care o centrifuga tepideaza la cateva secunde dupa
ce a fost pornita? In ce situatii se utilizeaza temperaturi scazute in timpul
centrifugarii?
Bibliografie:
1. Hill, Jr., R. H si Finster, D. (2010) Laboratory safety for Chemistry students,
John Wiley & Sons, Hoboken, N.J.
2. Coyne, G. S. (1997) The laboratory Companion: A practical guide to
materials, equipment, and technique, John Wiley & Sons, USA.
3. Word Health Organization (2003) Manual of basic techniques for a health
laboratory, Second Edition, Geneva.
4. National Academy of Science (1995) Prudent Practices in the Laboratory:
Handling and Disposal of Chemicals, the Courtesy of the National Academy
Press, Washington, D.C.
5. Ministerul muncii si protectiei sociale. Departamentul protectiei muncii (1996)
Norme specifice de securitate a muncii pentru laboratoarele de analize fizicochimice si mecanice, Bucuresti.
6. Ministerul muncii si protectiei sociale (1996), Legea protectiei muncii
nr.90/1996 si normele metodologice de aplicare, p.43, Bucuresti.
7. Tipuri de pipete si modul de pipetare
http://www.biology.lsu.edu/introbio/tutorial/webtutorial/1208_pipet.php
8. 10 modalitati de a inbunatati tehnica de pipetare
http://wikisites.mcgill.ca/djgroup/images/a/ac/10PipetteTips.pdf
9. Cum sa pipetam corect
http://www.kirkhousetrust.org/Docs/19_pipettors.pdf
10. Utilizarea micropipetelor in laborator (Universitatea Leicester) video
http://www.youtube.com/watch?v=uEy_NGDfo_8.s