Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
CUPRINS
Abstract ............................................................................................................................................. 3 1. 2. 3. 3.1. Introducere ................................................................................................................................ 4 Scheme de cercetare si finantare pentru Biosenzori ................................................................... 5 Biosenzori .................................................................................................................................. 6 Bazele si clasificarea biosenzorilor .......................................................................................... 6
3.1.1 Traductoare electrochimice ................................................................................................... 6 3.1.2 Traductoare optice ................................................................................................................ 7 3.1.3 Senzori sensibili de masa ....................................................................................................... 7 3.1.4 Senzori termometrici............................................................................................................. 8 3.2. Biosenzori pentru monitorizarea mediului .............................................................................. 8
3.2.1 Biosenzorii de tip enzime ..................................................................................................... 9 3.2.2 Imunosenzori ...................................................................................................................... 10 3.2.3 Biosenzori de tip ADN.......................................................................................................... 10 3.2.4 Biosenzori celulari .............................................................................................................. 11 3.3. 4. Re ele wireless autonome de biosenzori .............................................................................. 11 Viitoare tendinte i concluziile ................................................................................................. 13
BIBLIOGRAFIE .................................................................................................................................. 14
Abstract
Tehnologia biosenzorilor se bazeaza pe un element specific de recunoa tere biologica n combina ie cu un traductor de procesare a semnalului. nc de la nceputul folosirii biosenzorilor s-a a teptat ca acestia s joace un rol semnificativ n metodele analitice de monitorizare a mediului. Utilizarea datelor biologice pentru a completa analizele chimice, precum i dezvoltarea unor biosenzori i alte abord ri biologice, a crescut constant n ultimii ani. Cu toate acestea, comercializarea tehnologiei biosenzorilor a r mas n urma n mod semnificativ dup cum se reflect printr-o serie de publica ii i activit i de brevetare. Motivul din spatele transferului lent de tehnologie i limitat ar putea fi atribuit considerentului de cost i unele bariere tehnice cheie. n decursul ultimilor 15 ani, un sprijin relevant a fost furnizat de c tre institu iile publice pentru cercetarea biosenzorilor din Statele Unite ale Americii, Japonia i, mai ales, din Europa. n plus, biomonitorizarea este un instrument esen ial pentru monitorizarea rapid i rentabil a mediului. Din acest motiv, tehnologia biosenzorilor a fost considerata ca un instrument-cheie pentru implementarea noilor directive in Uniunea Europena (UE), cum ar fi Directiva Cadru privind Apa (DCA), i alte directive relationate, cum ar fi recenta Directivacadru privind strategiile marine. Chimia analitic s-a schimbat considerabil, condusa de automatizare, miniaturizarea i integrarea unui sistem cu randament ridicat de sarcini multiple. Astfel de cerin e reprezint o mare provocare n tehnologia biosenzorilor unde biosenzorii sunt deseori conceputi pentru a detecta un singur sau cateva substan e int . Pentru a avea succes, biosenzorii trebuie s fie versatiil pentru a suporta biorecunoasterea elementelor interschimbabile i, n plus, miniaturizarea trebuie sa fie realizabila, pentru a permite automatizarea senzorului in paralel cu usurinta de operare, la un cost acceptabil. O investi ie semnificativ n cercetare i dezvoltare este o condi ie prealabil n comercializarea de biosenzori. Progresul n astfel de eforturi este incrementat cu un succes limitat, astfel, intrarea pe pia pentru o noua incercare este foarte dificila daca un produs de ni nu poate fi dezvoltat cu un volum considerabil de pia . Evolu iile tehnologice recente n miniaturizarea aparatelor electronice si a comunicarii wireless au dus la apari ia de Retelelor Senzorilor pentru Mediu (ESN). Acestea vor spori foarte mult monitorizarea mediului natural i, n unele cazuri, vor deschide noi tehnici de a efectua m sur tori sau vor permite implementari de senzori anterior imposibile. Aici vom prezenta principiile, avantajele i limit rile tehnologiei biosenzorilor pentru diagnostice de mediu, cu accent special pe cele pe baz de nanomateriale si tehnologii pentru biosensing la distan dezvoltate cu sprijinul oferit de c tre institu iile publice pentru cercetare din Statele Unite ale Americii, Japonia i Europa.
3
1. Introducere
Din cauza dificult ii de a prevedea efectele colective ale num rului tot mai mare de poluan i n ecosistemele receptoare, este nevoie de metode de screening n monitorizarea mediului. Punerea n aplicare a programelor de siguran necesit o analiz de mediu care cuprinde dou p r i: metode de screening bazata pe analiza de mare de transfer i capabila de monitorizare continu on-line pe site-uri cu costuri reduse, i analiza probelor pozitive cu tehnici analitice de confirmare. Analiza Bioraspuns combin dou procese, recunoa terea biologice ini ierea unui efect biologic, i analize chimice. Componentele biomoleculare sunt folosite ca tinte pentru substan ele active. De i este posibil s se aplice, de exemplu, teste obligatorii care asigur efecte echivalente, informa ii cu privire la contaminan i responsabili sunt accesibile doar prin analiz chimic . Prin urmare, o etap ulterioar este furnizata de analiza chimic a substan elor care sunt legate de biorecunoasterea componentelor i care sunt, prin urmare, bio-eficiente. Biosenzorii sunt de obicei clasificati fie n func ie de elementul transductor (de exemplu: electrochimic, piezoelectric, optic sau termic), fie n conformitate cu principiul de biorecunoastere (enzimatic, recunoa terea imunoafinitatii, senzori ntregi, sau ADN) (a se vedea figura 1).
Principalele avantaje ale biosenzorilor sunt: timpul scurt de analiza , teste cu cost scazut i portabilitatea, m sur tori n timp real i control de la distan . Aceste noi tehnologii au fost aplicate n mod egal analizei cantitative a analitilor int i n m sur tori ecotoxicologice. n prezent, biomonitorizarea este un instrument esen ial pentru punerea n aplicare a directivelor UE, cum ar fi Directiva Cadru privind Apa (DCA), precum i Directiva Cadru privind strategia pentru mediul marin. Cu toate acestea, multe dintre aceste noi tehnologii sunt nc n curs de dezvoltate i se bazeaz pe eforturi combinate din diverse domenii tiin ifice. n Europa, Comisia European (CE) a fost deschiz torul de drumuri pentru dezvoltarea acestor noi tehnologii n analiza de mediu. Sub Programele Cadru 3,4,5 si 6 (PC), un num r mare de proiecte de cercetare finan ate au fost dedicate pentru dezvoltarea de noi instrumente analitice, i mai mult de 300 de proiecte au fost efectuate pe senzori, biosenzori i tehnici biologice.
4
Mai multe revizuiri pe biosenzori, senzori optici pentru diferite domenii de analiz , sau tehnici biologice pentru analiza de mediu au fost publicate n ultimii ani. Aici ne propunem s prezent m principiile, avantajele i limit rile tehnologiei biosenzorilor pentru monitorizarea mediului, i s rezumam progresele ob inute n acest domeniu n conformitate cu sprijinul acordat de institu iile publice.
In timpul primelor programe-cadru UE, finan area a fost dedicat sus inerii proiectelor de cercetare legate de determinarea pesticidelor n ap , n sprijinul Directivei privin apa potabila din cadrul Uniunii Europene (98/83/CE). Mai recent, n Europa sub Programul-Cadru 6 o parte de finan are a fost destinat direct biosenzorilor pentru monitorizarea mediului; cu toate acestea, alte domenii importante legate de dezvoltarea biosensingului de mediu au fost stimulate, cum ar fi nanotehnologia. Cteva exemple de proiecte de cercetare finan ate n aceast perioad sunt BIONANOSWITCH, BIOMED-nano, OPTANANOGEN, TASNANO, DINAMICS i ISAMCO, cele mai multe dintre ele fiind legate de domeniul nanotehnologiei i de progresele tiin ei materialelor. De exemplu, BIONANO-SWITCH este nc n curs de desf urare, iar scopul principal este dezvoltarea unui nanoactuator / sistem biosensor. n Europa, al 7-lea Program Cadru prezint un domeniu tematic pe nano tiin e, nanotehnologii, materiale i noi tehnologii de produc ie. De asemenea, n cadrul Programului Cadru 7, au fost incluse fonduri pentru proiecte de dezvoltare a senzorilor i platforme de biosenzori pentru monitorizarea mediului de la distan . Ultima tendin n Europa este aceea a platformelor de cercetare autonome capabile s func ioneze on-line n mod autonom.
3. Biosenzori
Biosenzorii pot fi definiti ca un dispozitiv integrat al receptorilor-traductor, care sunt capabili s ofere informatii analitice selective cantitative sau semi-analitice folosind un element de recunoa tere biologic. Un biosenzor transform un eveniment biologic ntr-un semnal detectabil prin ac iunea unui traductor i a unui procesor. Automatizarea i miniaturizarea tehnicilor biologice analitice, precum i dezvoltarea de echipamente de m surare de la distan online, pot fi realizate prin tehnologia biosenzorilor. n ultimii ani, un num r tot mai mare de aplicatii de biosenzor au fost dezvoltate pentru analiza de mediu, pentru analize tinta i pentru monitorizarea tuturor efectelor biologice, cum ar fi toxicitatea.
substan ele chimice interac ioneaz cu o suprafata sensibila a electrodului de detectare. Schimb rile electrice se pot baza pe o schimbare n tensiunea m surat ntre electrozi (poten iometric ), o schimbare n curentul m surat la o tensiune aplicat data (ampermetrica), sau o schimbare n capacitatea materialului sensibil la transport (conductometrica ). Astfel de efecte pot fi stimulate electric sau pot rezulta in urma unei interac iuni spontane la starea de curent-zero.Senzori de gaze cu electrolit solid care se disting sunt: voltmetrice, ampermetrice si potentiometrice Principiul de func ionare al biosenzorilor ampermetrici este definit de un poten ial constant aplicat ntre un electrod lucru i un electrod de referin . Poten ialul impus promoveaz o reac ie redox, care produce un curent. Amploarea acestui curent este propor ional cu concentra ia de specii electro active prezente n solu ie. Biosenzorii poten iometrici se bazeaz pe monitorizarea poten ialului la un electrod de lucru, cu privire la un electrod de referin .
Traductoarele optice se bazeaz pe diferite tehnologii de fenomene optice, care sunt rezultatul unei interac iuni a unui analit cu partea receptorului. Transduc ia optica poate implica fenomene optice liniare, inclusiv adsorb ie, fluorescen , fosforescen , polarizare, rota ie, interferen a, etc, sau fenomene neliniare, cum ar fi generarea armonicii a doua. Tehnicile reflectometricele se bazeaz pe o lumina alba incidenta care trece la interfa a, dintre indici de refrac ie diferiti, care se vor reflecta n parte. Aceste reflectii se suprapun i vor construi un spectru caracteristic de interferen e. Legarea unui receptor biologic, cum ar fi anticorpii la suprafa a schimb grosimea stratului de comutare, care produce o schimbare n spectrul de reflexie (fig. 2).
utilizata pentru dezvoltarea biosenzorului. Dispozitivele piezoelectrice i dispozitive acustice de unda de suprafata pot fi grupate n aceast categorie. Vibra iile cristalelor piezoelectrice produc un cmp electric oscilant n care frecven a de rezonan a cristalului depinde de natura sa chimica, de dimensiunea, forma i masa sa. Aceste cristale pot fi f cute s vibreze la o anumit frecven de oscila ie, care este dependent de frecven a electrica. Frecven a de oscila ie este, prin urmare, dependenta de frecven a electrica aplicata cristalului, precum i de masa cristalului. n cazul n care masa cre te, din cauza legarii analitilor, frecven a de oscila ie a modific rilor cristalului si schimbarea pot fi m surate. Ecua ia general a cristalului poate fi rezumata dup cum urmeaz n cazul n care schimbarea de mas (m) este foarte mica n compara ie cu masa total de cristal: f= Cf2 m/A, unde -f este frecven a de vibra ie a cristalului n circuit; -A este zona electrodului; -C este o constant determinat de materialul cristalului i grosime. Cristale piezoelectrice, uneori men ionate ca si microcristale de cuart (QCM), sunt de obicei f cute din cuar i opereaz la frecven e ntre 1 i 10MHz. Aceste dispozitive pot func iona n lichide, cu o limit de determinare de frecven de 0.1Hz; Dispozitive cu unde acustice, realizate din materiale piezoelectrice, sunt cei mai comuni senzori, care se ndoaie atunci cnd este aplicat o tensiune de cristal. Senzori cu unde acustice sunt operati prin aplicarea unei tensiuni oscilante la frecven a de rezonan a cristalului. Limit rile pentru aceast metod implica formatul i cerin ele de calibrare, care sunt consumatoare de timp.
3.2.
Urm toarele sec iuni discuta biosenzorii dezvoltati i aplicate n monitorizarea mediului, clasificati n func ie de elementul de recunoa tere biologic.
Enzimele utilizate de obicei n biosenzorii amperometrici sunt oxidazele. Principalul avantaj al acestei clase de traductori este costul scazut; sunt, de asemenea, foarte reproductibile i o mare varietate de electrozi de unic folosin sunt adesea disponibili.
9
Instrumentarul este, de asemenea, foarte u or de ob inut i poate fi ieftin i compact, acest lucru permitand posibilitatea executarii de m sur tori la fa a locului. Limit ri pentru m sur torile amperometrice includ interfe ele poten iale n cazul n care compu ii electroactivi sunt prezenti n e antion, deoarece acestea pot genera valori false actuale. Cele mai multe dintre recentele progrese n biosenzori electrochimici s-au bazat pe nanotehnologie. Interesul major n nanomateriale este determinat de propriet ile lor. n special, capacitatea de a adapta dimensiunea i structura i, prin urmare propriet ile nanomaterialelor ofer perspective excelente pentru proiectarea de noi sisteme de detec ie i cre terea performan ei a testului bioanalitic. O provocare extrem de importanta n electrozii ampermetrici de tip enzime este stabilirea unei comunicari electrice satisf c toare ntre site-ul activ al enzimei i suprafa a electrodului. Centrul redox a celor mai multe oxidoreductaze este izolat electric printr-o membrana de proteine. Din cauza acestui invelis, enzima nu poate fi oxidata sau redus la niciun poten ial. n general, este nevoie de co-substraturi sau mediatori pentru a realiza transduc ia eficient a biorecunosterii evenimentului. Nanotuburi de carbon aliniate (CNT), preg tite pentru asamblare, pot ac iona ca fire moleculare pentru a permite comunicarea electrica ntre electrod de baza si proteinele redox.
3.2.2 Imunosenzori
Elementele de recunoa tere sunt interac iunile imunochimice ntre anticorpi i antigene. Acest tip de dispozitiv combina principiile de imunodozare in faza solida, cu elemente de transduc ie fizico-chimice. Deoarece cei mai mici poluan i organici cu greutate molecular mic n mediu au cteva caracteristici distinctive optice sau electrochimice, detectarea legarii stoechiometrice al acestor compu i de anticorpi este de obicei realizata prin utilizarea unor formate competitive obligatorii. Limitarea principal a acestor tehnici este detectarea electrochimica a immunoreactiilor, deoarece este necesar s se folosesca enzime care vor genera compusi activi electrochimic. Imunosenzorii electrochimici au fost utilizati pe scar larg pentru analiza de mediu n configura ii amperometrice, potentiometrice i conductimetrice. Imunosenzorii amperometrici m soara curentul generat de oxidarea sau reducerea substan elor redox la suprafata electrodului, care are loc la un potential electric adecvat.
biosenzori bazati pe ADN pentru a efectua teste genotoxice, sau de testare rapid a poluan ilor pentru activit ii mutagene i cancerigene Biosenzorii electrochimici pe baza de ADN imobilizat, au o specificitate mare de biomolecule. Aceasta reduce consumul ADN-ului i duce la dezvoltarea unor metode moderne de analiz a efectorilor de ADN. Dezvoltarea biosenzorilor electrici hibrizi pe baza de ADN a atras eforturi considerabile de cercetare. Astfel de aplicatii ale senzorului pe baza de necesit sensibilitate ridicat prin transduc ia amplificata a interac iunii oligonucleotidelor.. Mai multe procese de amplificare pot fi utilizate pentru a mbun t i dramatic sensibilitatea testelor de particule bazate pe bioelectronice.
3.3.
O re ea de senzori f r fir este o re ea f r fir constnd din dispozitive autonome spa ial distribuite folosind senzori i / sau biosenzori pentru monitorizarea condi iilor fizice
11
sau de mediu, cum ar fi temperatura, presiunea, salinitatea, mi carea sau poluan ii, n loca ii diferite (Fig. 3).
Aceast abordare ar putea fi ntr-un viitor apropiat unul din principalele progrese realizat pentru monitorizarea continua a mediului, precum i pentru punerea n aplicare a noilor directive UE, n special n medii dificile de monitorizat, cum ar fi zonele de coast i n largul m rii. Astazi, evenimente moleculare i biologice pot fi monitorizate i traduse n semnale digitale prin intermediul biosenzorilor i, acest fapt, deschide o fereastr nou n producerea de dispozitive analitice. Aceast nou abordare ar putea o revolu ie n viitorul monitorizarii mediului. Cu toate acestea, costul de dispozitive de biosensing autonome de ncredere este nc mult prea mare pentru implementari masive. Unele dintre neajunsurile care ar trebui s fie dep ite sunt: complexitatea proceselor de biosensing, nevoia de etalon ri periodice, care ar trebui s fie reduse la minimum, iar nevoia pentru reactivi cat mai stabili biologic, costurile energetice i de produc ie ar trebui s fie, de asemenea, reduse la minimum In ultimii ani au fost facute progrese considerabile n hardware i software pentru construirea de re ele de biosensor wireless. Cu toate acestea, pentru a asigura colectarea eficient a datelor de c tre re elele de biosenzor pentru monitorizarea mediilor de la distan , r mn urm toarele probleme: Reactivitate: capacitatea re elei de a reac iona la mediul s u i s furnizeze numai date relevante pentru utilizatori; Robustete: capacitatea nodurilor de re ea s func ioneze corect n medii dure; Durata de re ea: maximizarea duratei de timp n care re eaua este capabila s furnizeze date nainte ca bateria de noduri sa se epuizeze.
12
Primul pas n re elele de senzori wireless este dezvoltarea de blocuri autonome de tip platforme sensibile. Un nod senzor este cea mai mic component a unei re ele de senzori, care are integrate capacitati de detectare i de comunicare.
13
BIBLIOGRAFIE
14