LUCRAREA NR.

6
Micoze Cele mai multe boli ale plantelor sunt produse de ciuperci i se numesc micoze. Ciupercile sunt plante inferioare, acidofile, lipsite de clorofil, ducnd o via heterotrof, saprofit sau parazit. Ele constituie ncrengtura Mycophyta, Fungi sau Eumycetes. n prezent se cunosc peste 100.000 de specii din care 8.000 produc boli ale plantelor. La noi n ar s-au descris peste 8.700 specii de ciuperci saprofite i parazite, din care cele mai multe sunt patogene ale plantelor (dup Severin i colab., 2001). Pentru recunoaterea sau caracterizarea lor ne vom referi ntotdeauna la caracterele aparatului vegetativ i al fructificaiilor rezultate n urma procesului de nmulire sexuat i asexuat. innd cont de aceste elemente ciupercile sunt grupate n clasele: Plasmodiophoromycetes, Chytridiomycetes, Oomycetes, Zygomycetes, Hemiascomycetes, Ascomycetes, Heterobasidiomycetes, Holobasidiomycetes, Deuteromycetes. Tipurile de aparat vegetativ i fructificaiile la ciupercile fitopatogene Tipurile de aparat vegetativ la ciupercile fitopatogene Aparatul vegetativ este un tal, constituit diferit n funcie de gradul de evoluie a ciupercii. Gimnoplastul este alctuit dintr-o mas citoplasmatic cu un nucleu, fr perete celular. Lipsa peretelui celular face ca forma gimnoplastului s varieze n funcie de spaiul care-l are la dispoziie. De cele mai multe ori gimnoplastul triete intracelular i se ntlnete la ciupercile din filumul Myxomycota, familiile Synchytriaceae i Olpidiaceae. Plasmodiul este alctuit dintr-o mas mai mare de citoplasm n care se afl mai muli nuclei. El se dezvolt intracelular i se ntlnete tot la ciupercile inferioare din filumul Myxomycota, familia Plasmodiophoraceae. Dermatoplastul este format dintr-o celul cu toate elementele constitutive ca: peretele celular, citoplasm i nucleu. Peretele celular imprim dermatoplastului o form anumit; este caracteristic drojdiilor (familia Saccharomytaceae). Sifonoplastul este format din filamente simple sau ramificate, continui, care conin citoplasm i mai muli nuclei. Acest tip de aparat vegetativ multinucleat mai este denumit i cenocitic i se ntlnete la ciupercile din clasa Oomycetes. Talul filamentos este alctuit din filamente simple sau ramificate, septate, cu numeroi perei transversali, fiecare compartiment reprezentnd o celul. Legtura dintre celulele vecine se realizeaz 55

prin intermediul poriunilor de citoplasm care strbat porii septelor. Talul filamentos se ntlnete la ciupercile din filum Ascomycota, a unora din filumul Basidiomycota i filumul Deuteromycota. Sifonoplastul i talul filamentos sunt denumite i miceliu, iar filamentele care l alctuiesc se numesc hife miceliene. Talul masiv este cel mai evoluat tip de aparat vegetativ, fiind alctuit din filamente ntreesute mai des sau mai lax, dnd natere la esuturi false numite plectenchime. Acest tip de aparat se ntlnete la scleroii unor ciuperci din filumul Ascomycota, precum i la macromicete. Fructificaiile la ciupercile fitopatogene n cele mai multe cazuri nmulirea asexuat se realizeaz fie prin transformarea ntregului corp vegetativ (holocarpic), fie numai a unei pri din corpul vegetativ (eucarpic) n organe de propagare numite spori. Sporii pot fi imobili - aplanospori, sau mobili - zoospori. Dup locul de formare, deosebim: 1. spori interni (endospori), care se formeaz n interiorul unor organe i care pot fi: a) aplanospori - care se formeaz n interiorul sporangiilor; b) zoospori - care se formeaz n zoosporangi (ei sunt lipsii de membran i sunt mobili, fiind prevzui cu 1 - 2 flageli); c) ascospori care se formeaz n asce i sunt caracteristici ciupercilor din clasa Ascomycetes. Formarea ascelor este precedat ntotdeauna de procesul sexual. Aceste formaiuni sunt localizate n ascofructe. Ascofructele pot fi deschise, n form de cup sau de disc, ca la Discomycetes, numite apotecii sau n form de pungi, prevzute cu un por de deschidere - peritecii sau complet nchise - cleistotecii. 2. spori externi (exospori), care se formeaz la exterior, pe suporturi speciale - conidiofori, sporofori sau basidii. Acetia pot fi: a) conidii care se formeaz pe suporturi speciale, denumite conidiofori. Conidiile propriu-zise sunt la ciupercile din Ascomycetes i Deuteromycetes (Fungi imperfeci), iar la Oomycetes ceea ce se cheam conidii, sunt de fapt sporangi caduci. b) basidiosporii care se formeaz pe organe speciale numite basidii, specifice ciupercilor din filumul Basidiomycota. Conidiile pot avea forme diferite, mono sau multicelulare, incolore sau colorate. Acestea se pot forma liber, pe suprafaa esuturilor afectate, n lagre acoperite la nceput cu cuticul - acervuli sau n pungi alctuite din hife ntreesute - picnidii, care conin picnospori. Conidioforii au de asemenea forme i dimensiuni variate, putnd fi simpli sau ramificai. Unii conidiofori formeaz fascicule compacte, numite coremii.

56

n urma nmulirii sexuate se formeaz zigotul care poart diferite denumiri n funcie de clasele de ciuperci. Astfel, la ciupercile ce aparin clasei Oomycetes se numete oospor, la cele din clasa Ascomycetes, ascospori iar la cele din clasele Heterobasidiomycetes i Holobasidiomycetes, bazidiospor.

Lucrarea 7

Tehnica de lucru pentru observarea la microscop a ciupercilor fitopatogene Examinarea la microscop a ciupercilor fitopatogene (aparat vegetativ, fructificaii asexuate i sexuate), este important i absolut necesar pentru diagnosticarea cu precizie a micozelor. Materialul de examinat se pregtete sub form de preparate microscopice, care pot fi temporare sau de durat (preparate fixe sau semipermanente). Preparatele microscopice mai uor de executat sunt cele temporare, care se monteaz n picatura de ap pe lama de sticl pentru microscopie, fiind acoperite cu lamele. Dup observare aceste preparate se spal. Spre deosebire de primele, preparatele fixe se monteaz n pictura de lacto-fenol, glicerin etc. Lamela este fixat de lam printr-un lut special care mpiedic evaporarea lichidului. Preparatele fixe se pot pstra n cutii un timp ndelungat, ns cnd se formeaz bule de aer ntre lam i lamel preparatele nu mai sunt bune i se desfiineaz. Modul de execuie a preparatului microscopic este diferit, dup locul de dezvoltare a patogenului. Ori de cte ori ciuperca se dezvolt i formeaz fructificaii n interiorul esuturilor (intracelular sau intercelular) sunt necesare seciuni transversale prin esutul atacat. Cnd ns fructificaiile ciupercilor ies la suprafaa organelor atacate prin osteolele stomatelor sau cnd ele se formeaz direct la exterior pe hifele ectoparazite se execut preparate simple din aceste fructificaii. Seciunea transversal prin esuturile atacate se efectueaz cu un brici anatomic sau cu un microtom de mn. Din materialul de secionat (poriuni din rdcini, tulpini, frunze sau fructe atacate) se taie cu bisturiul un fragment de 2 - 3 mm i se aeaz ntre dou jumti de mduv de soc (care servete drept suport) n aa fel nct suprafaa de seciune s fie orizontal i nu oblic. Cu ajutorul briciului bine ascuit se secioneaz paralel cu suprafaa socului, executnd o singur micare continu, prelungit. Se repet operaia de secionare obinndu-se mai multe seciuni care se iau cu un ac ascuit de pe lama briciului i se trec n pictura de ap deja pregtit pe lama de sticl; poriunile de soc secionate se ndeprteaz. Preparatul astfel executat se acoper cu lamela (bine tears) avnd grij s nu se formeze bule de aer, lamela se aeaz uor atingnd nti cu o muchie pictura de ap i apoi va 57

fi lsat n ntregime s ating lama. Seciuni mai subiri i uniforme ca grosime se pot obine cu microtomul de mn. Acesta este alctuit dintr-un cilindru metalic, prevzut la un capt cu o msu rotund , care are n centru o deschidere circular n care se ntoarce socul cu fragmentul ce trebuie secionat, fixndu-se cu ajutorul unui clete interior. Cletele cu socul este ridicat cu 5 - 10 m de un piston acionat de un urub micrometric. Seciunile se efectueaz folosind un brici anatomic cu o fa plan, n felul urmtor: n mna stng se ine microtomul sprijinindu-i msua pe degetul mare i arttor, iar cu mna dreapt se ine briciul cu partea plan sprijinit de msua microtomului. Se trage briciul oblic de la plsele spre vrf, printr-o micare continu i se obine prima seciune. Dup acionarea urubului micrometric se repet operaia pn la completa consumare a fragmentului de secionat, obinndu-se numeroase seciuni, care se trec cu acul n pictura de ap. Preparatul microscopic simplu, executat din miceliu i fructificaiile aflate la suprafaa esuturilor atacate Acest preparat se execut cu ajutorul bisturiului sau cu un ac ascuit sau spatulat i const n desprinderea unei poriuni mici de mucegai, puf sau pulbere etc. i trecerea acesteia n picatura de ap. Pentru dispersarea filamentelor miceliene i a fructificaiilor nainte de a pune lamela, materialul trebuie s fie bine destrmat (nu tiat sau tocat). Aceast operaie se efectueaz fixnd materialul cu vrful bisturiului din mna stng, iar cu un ac ascuit, inut n mna dreapt, se destram uor n toate direciile. La nevoie preparatele se pot colora cu bleu cotton n lacto-fenol care se adaug n lichidul de montare. Examinarea preparatelor la microscop Pentru examinarea la microscop a preparatelor sunt necesare urmtoarele operaii: - nainte de folosirea microscopului se terg ocularele, obiectivele, condensatorul cu crp uscat; - microscoapele electrice se conexeaz la transformator i acestea la rndul lor la priza de la mas sau de la perete; - se examineaz mai nti cu obiectivul mai mic (putere de mrire slab), parcurgnd toat lamela; - se alege poriunea din preparat care trebuie analizat n amnunt i se fixeaz exact n centrul cmpului microscopic i numai dup aceea se schimb obiectivul cu putere de mrire mai mare; - cnd se examineaz cu obiectivul mare, condensatorul trebuie apropiat de msua microscopului pentru a avea cmpul microscopic mai luminat, clarificarea imaginii efectundu-se cu viza micrometric.

58

59