UNIVERSITATEA DIN PITETI

FACULTATEA DE TIINE
SPECIALIZAREA: CHIMIE

LUCRARE DE LICEN

Coordonator,
conf. univ. dr. Topal Carmen Mihaela
Student,
Gleeanu Maria Rodica

PITETI
2015
1

UNIVERSITATEA DIN PITETI

FACULTATEA DE TIINE
SPECIALIZARE: CHIMIE

Compui organici din Melissa officinalis

Coordonator,
conf. univ. dr. Topal Carmen Mihaela
Student,
Gleeanu Maria Rodica

PITETI
2015

Cuprins
Introducere ...... 1
1. Date generale ..... 2
2. Compoziia chimic a uleiurilor eseniale .......... 5
2.1 Terpeni i terpenoide ... 8
2.2 Sesquiterpeni i sesquiterpenoidele . 10
2.2 Taninuri ... 11
2.3 Glucide .... 11
2.4 Mucilagii vegetale ... 12
2.5 Steroli .. 12
2.6 Acizi ............ 13
2.7 Agliconi i glicozidele flavonice . 15
3. Principiile active din planta Melissa officinalis ...................................................... 17
4. Metode de extracii ................................................................................................... 22
4.1 Distilarea .. 22
4.2 Antrenarea cu vapori de ap 22
4.2.1 Antrenarea la foc direct . 23
4.2.2 Antrenarea n curent de vapori .. 24
4.2.3 Antrenarea cu aburi sub presiune .. 24
4.2.4 Antrenarea la presiune redus ... 25
4.3 Extracia ... 26
4.3.1 Extracia cu solveni .. 27
4.4 Extracia cu fluide supercritice 29
4.5 Hidrodistilarea . 36
4.6 Extracia cu microunde ... 40
4.7 HPLC .. 41
5. Proprieti oxidative .46
6. Parte experimental . 51
6.1 Antrenarea cu vapori a Melissei officinalis . 51
6.2 Hidrodistilarea Melissei oficinalis ... 52
6.3 Extracia uleiului esenial cu fuide supercritice ... 54
6.4 Analiza extractului FTIR . 55
6.5 Utilizrile extractului n cosmetic .. 59
6.5.1 Utilizri n parfumurie al uleiului volatil ... 59
6.5.2 Utilizri n spunerie al uleiului volatil . 60
Concluzii 63
Bibliografie 64
3

Introducere
n lucrarea ,,Compui organici din Melissa officinalis sunt prezentate principiile active din
Melissa officinalis (denumirea popular fiind roinia), metodele folosite pentru extracia uleiului
esenial, identificarea componenilor prezeni n ulei i proprietile oxidative ale plantei.
Obiectivele lucrrii au fost de a extrage uleiul esenial de roini, au fost efectuate analize
calitative asupra uleiul i utilizarea lui n cosmetic, respectiv n spunerie.
Lucrarea este structurat n ase capitole.
n primul capitol sunt prezentate date generale despre roini, aceasta crescnd doar n anumite
zone care i ofer un mediu de via prielnic pentru a se putea dezvolta. Uleiul volatil al plantei
poate fi folosit n diferite industrii, cum ar fi industria alimentar, industria farmaceutic, dar i n
cosmetic.
Al doilea capital prezint compoziia chimic a uleiului esenial. Se observ c cea mai mare
cantitate de ulei se obine nainte de nflorire. Compuii uleiului esenial din frunze au fost mpri i
n dou grupe principale: monoterpene (80%) i sesquiterpene (20%). Clasele de componeni care se
gsesc n uleiul esenial sunt urmtoarele: terpeni i terpenoide, sesquiterpene i sesquiterpenoide,
taninuri, glucide, mucilagii vegetale, steroli, acizi, agliconi i glicozidele flavonice.
Urmtorul capitol se refer la principiile active ale plantei, acestea au un scop bine definit:
efectul terapeutic. Proprietile principale ale principiilor active sunt: aciune hemostatic,
corectarea gustului neplcut al unor medicamente, aciune laxativ, aciune electiv asupra inimii,
aciune emetic, aciune expectorant, mrirea poftei de mncare.
n capitolul urmtor sunt prezentate diferite metode de extracie a uleiului esenial. Fiecare
metod are o scurt prezentare care conine: modul de aplicare, aparatura i sticlria de laborator.
Capitolul cinci prezint proprietiile oxidative ale roiniei. Utilizrile tiinifice raportate sunt:
antioxidant, sedativ, antiinflamator, hepatoprotector, digestiv, anti-bacterian, antifungic, antiviral,
antihistaminic, antikinetic, anxiolitic i eficace n controlul luminii pentru cazurile uoare de
Alzheimer. A fost demonstrat activitatea inhibitorie mpotriva virusului herpes simplex tip 1 (HSV1) i virusul herpes simplex tip 2 (HSV-2). Uleiul esenial de roini a fost testat in vitro pe celule de
rinichi de maimu utiliznd un test de reducere a celulelor infectate.
n ultimul capitol este prezentat partea experimental. Uleiul esenial a fost extras cu ajutorul a
trei metode de extracie: antrrenarea cu vapori, extracia cu microunde i extracia cu solvent
supercritic. Au fost realizate analize calitative pentru uleiul esenial de roini extras din frunzele
proaspete. Uleiului de roini a fost folosit pentru prepararea spunului.

Melissa officinalis L.
Melissa officinalis roin
1. Date generale
1.1 Istoric
Roinia. Lemon balm sau Melissa officinalis (figura 1.1.) este una dintre cele mai vechi plante
medicinale care se cultiv pe suprafee reduse nc din antichitate.
Planta are un miros plcut, crete prin pduri, n tufiuri i locuri pietroase, mai ales n zonele
din sudul rii. n prezent se cultiv prin grdini i n cultur mare pentru prepararea ceaiurilor, iar n
unele locuri ca plant melifer.
Planta n afara calitilor medicale este o surs important de ulei volatil mult ntrebuinat n
diferite industrii: cosmetic, alimentar i farmaceutic [1].

Figura 1.1. Melissa officinalis

1.2 Descrierea botanic

Melissa officinalis este o plant peren stufoas, ierboas din familia Labiaceae, prezint un
miros plcut, aromatic asemntor cu cel de lmie care dispare dup o pstrare mai ndelungat.
ntregul sistem radicular se compune din numeroase rdcini adventive fibroase care pornesc de
pe rizomul subteran. Rizomul este lung de circa 25-30 cm, colorat n brun-glbui, lignificat. Pe
rizom se formeaz stoloni ascendeni care dau natere la tulpini.
Tulpina ierboas are o nlime de 60-120 cm i grosime de 3-5 mm, larg la baz i proas n
partea superioar. Pe acelai rizom apar mai multe tulpini formnd o tuf compact.
Frunzele sunt opuse i au un peiol lung de 2-4 cm. Limbul frunzei este lung de 3-6 cm i lat de
2-5 cm, are o form oval, cu vrful obtuz i marginile crenat-serate. Frunzele sunt acoperite cu peri
i glande oleifere tipice labiatelor, n special pe nervuri.
Florile, scurt pedicelate, sunt grupate cte 10-20 n verticile aezate la noduri, sub bractee.
Floarea are caliciul pros, lung de 6-8 mm, pe care se observ 13 nervuri proeminente, labiul
superior terminal prin 3 dini scuri i lai, iar cel inferior cu 2 dini aristai. Corola cu lungimea de 812 mm, este alb-glbuie, alb sau liliachie, cu labiul superior convex, emarginat i labiul inferior
trilobat. Staminele sunt n numr de 4 i sunt arcuite, 2 stamine inferioare sunt lungi de 3-4 mm i 2
stamine superioare mici de 1-1,5 mm. Ovarul superior este aezat pe o gland oleifer. nflorete n
lunile iunie-iulie-august.
Fructele sunt nucule, colorate n brun lucitor i la baz au o pat alb, sunt grupate cte 4 n
caliciul persistent, au lungimea de 1,5-2 mm i limea de 0,7-1 mm, sunt alungit ovalate, slab
trimuchiate. Greutatea a 1000 de semine variaz ntre 0,52 i 0,68 g [2].

1.3 Particulariti biologice

Roinia este o specie iubitoare de cldur i lumin. Solul influeneaz calitatea i producia,
planta prefernd terenuri nivelate, permeabile i afnate, dar prezint un sistem radicular puternic
dezvoltat fiind rezistent la secet. Substanele nutritive joac un rol deosebit n realizarea cantitii
i calitii produciei de Melissa officinalis. Timpul noroios influeneaz negativ creterea plantei i
acumularea uleiului volatil. Iarna rezist bine la temperaturi sczute de minus 20-250C, dac este
acoperit cu zpad. La temperaturi mai sczute i repetate sufer i sub zpad, n special tufele
btrne.
Plantele pot crete rapid la temperatura de la 150C la 350C i necesit 500-600 mm precipitaii
distribuite pe toat suprafaa de pmnt, n caz contrar ar trebui s fie irigate.

1.4 Rspndire
Melissa officinalis este o specie mediteranean care crete mai ales n prile sudice ale Europei,
vestul Asiei i nordul Africii, prin locuri uscate, n pduri de stejar, n tufriuri i locuri pietroase.
Se recomand cultivarea plantei n zona viei de vie. n ara noastr planta se gsete n flora
spontan din zonele sudice i vestice, unde crete masiv pe locuri calcaroase, luminiurile pdurilor
de stejar.
n grdinile trneti nmulirea se face prin semine sau prin mprirea tufelor btrne, cnd
plantaia se rrete i nu mai este rentabil. ngrijirea plantaiei cont n meninerea ei curat, fr
buruieni i cu solul afnat. Dup fiecare recoltare solul se prete i se ngras toamna sau
primvara.

1.5 Recoltarea
nc din timpul nfloririi se aleg cele mai vigurease tufe, cu frunze ct mai mari. ntruct
seminele se maturizeaz neuniform, recoltarea lor trebuie fcut pe msura coacerii, se mai poate
recolta i prin treierat, seminele trecndu-se printr-un frector i se cur prin vnturare i sitare.
Pentru a obine un produs de calitate se recolteaz manual frunzele i vrfurile, nainte de nceperea
nglbenirii, aceast operaie se poate realiza de dou ori pe an n decursul verii, pe vreme uscat
nsorit.
6

Herba sau vrfurile, frunzele se mai pot recolta prin cosit sau secerat. Frunzele se recolteaz pe
timp clduros i umezeal suficient de 2-3 ori pe var, herba se recolteaz la nceputul nfloririi, iar
vrfurile se recolteaz la nflorire de dou ori pe an. La recoltarea frunzelor se acord o mare atenie:
materialul nu va fi apsat, strivit sau inut mult timp n grmezi, deoarece se nclzete foarte repede
i se nnegrete. Este bine ca depozitul s fie prin apropiere, iar materialul s fie dus ct mai repede
cu coul n care a fost recoltat. Uscarea se va face repede. Primele frunze recoltate din lunile iunie i
august se pot usca ntinse n straturi subiri n camere bine nclzite. Ultima recolt din luna
septembrie nu mai are ns condiii bune de uscare pe cale natural. n usctoriile nclzite,
temperatura va fi la nceput de 200C dup care se va ridica pn la 300C, spre sfritul uscrii
temperatura trebuie din nou sczut.
Dac cultura este destinat producerii de ulei esenial este mai bine s se distile herba sau
vrfurile n stare prospt [3].

1.6 Aciune farmacodinamic

Extractele au aciune calmant, antimicrobian, antihistaminic i de reducere a presiunii
sanguine. Coninutul n polifenoli al extractelor favorizeaz tratarea herpesului, gutei i ntepturilor
de insecte. Se utilizeaz de asemenea pentru inhibarea activitii hormonilor tiroidieni.
Uleiul volatil care conine citral i citronelool au aciune calmant asupra sistemului nervos
central i antispasmatic, n general uleiul volatil are proprieti digestive, carminative, coleretice,
regleaz digestia stomacului, tonice, sedative.

1.7 Indicaii terapeutice i utilizri

n medicina popular uleiul volatil se recomand n boli de ficat, astm, anemie, balonri,
indigestie, nepturi de albine, viespi, slbirea memoriei, boli de plmni, maladia Parkinson,
ameeli.

1.8 Produse
sub forma de ceai (infuzie) n tratarea: cancerului de tiroid, reumatismului (aciune
antiinflamatoare articular), boli digestive (colon iritabil, colon spastic i enterit), litiazei biliare,
herpesului de tip I i II;
se utilizeaz sub form de tinctur n tratarea: problemelor sistemului nervos (pe termen lung
contra bolii Alzheimer), depresiei, anorexiei psihice;

tablete: utilizate n stri de hiperexcitabilitate nervoas;

intr n compoziia ceaiurilor laxative i anticolitice, efect sedativ, calmeaz palpitaiile pe
fond nervos, tulburrile nervoase, durerile de cap, indispoziiile, insomniile i alte neurastenii.

2. Compoziia chimic a uleiurilor eseniale

Principalii componeni chimici identificai sunt: uleiurile volatile (pn la 0,15% substan
proaspt). Componenii uleiului volatil depind de locul din care a fost recoltat planta:
- Melissa officinalis provenit din Finlanda conine o proporie mai mare de carvon (15,70%) i
de cariofilen oxid (7,70%); o alt proveni din aceeai ar a avut un coninut mai mare de
cariofilen oxid (12,30%), metil-chavicol (6,30%) i anetol (6,10%),
- Melissa officinalis provenit din Spania a avut un coninut mai mare de geraniol (45,00%) i
nerol (35,00%),
- Melissa officinalis provenit din Germania are un coninut mai mare de citronelal (36,20%),
germacrene D (13,50%) i -cariofilen (10,90%).
Ali compui sunt: taninurile (3-6% catechina), glucidele (zaharoza, planteoza), mucilagiile
(12%), rezinele, sterolii (-sitosterol, campesterol), triterpenele (acid ursolic, acid oleanolic), acizii
polifenolcarboxilici si derivaii (acid cafeic, acid clorogenic, acid protocatechic, acidul rozmarinic),
agliconii i glicozidele flavonice (quercetina, ramnocitrina, apigenin-7-glucozida, kempferol,
luteolina, luteolin-7-glucozida i ramnazina) [web 1].
Uleiurile volatile sunt denumite i eterice sau eseniale, deoarece sunt considerate ca fiind
rspunztoare de mirosul i gustul produselor vegetale. Uleiurile volatile difer prin compoziie, ct
i prin proprieti de uleiurile grase. Ueiurile volatile sunt amestecuri complexe de diferii compui
chimici n stare solid sau lichid, dizolvai unul n altul, fomnd soluii omogene. n plantele tinere
se gsesc uleiuri volatile bogate n hidrocarburi terpeice i compui cu legtur mai simpl, organele
de reproducere conin uleiuri mai bogate i compui oxigenai. Izolarea uleiurilor eterice const n
distilarea plantelor sau prilor din plante cu vapori de ap [4].
n familia Lamiaceae uleiurile eseniale sunt produse, n principal, n structurile de secretaie
cunoscute sub numele de trachoma glandular, din care exist dou tipuri principale: peltate i
capitate. n acest sens Melissa officinalis nu este o excepie [5].
Cantitatea de uleiuri eseniale fabricate sunt direct conectate cu numrul i fiziologia structurilor
de secreie. n Melissa officinalis, glandele peltate sunt foarte slab distribuite pe frunz, mai ales
odat ce frunzele au crescut la 4 mm n dimensiune, modelul glandular este pe deplin dezvoltat i
numrul de glande peltate nu mai crete. Acest lucru poate fi un motiv fiziologic pentru randamentul
sczut de ulei volatil.
Uleiul esenial obinut din florile proaspete sau uscate, frunzele i ramurile acestei plante prin
distilare cu vapori de ap sau extracie chimic, este caracteristic unui miros ascuit, proaspt de
lmie, iar culoarea galben deschis.
Uleiul esenial de roini (Melissa officinalis subsp. oficinalis i Melissa officinalis subsp.
inodora) poate fi utilizat ca antioxidant i are o mare capacitate antimicrobian. Acesta mai poate fi
folosit ca un agent antitumoral, un potenial remediu pentru cancer sau de prevenire a lui. De
asemenea poate fi utilizat ca un agent antivirus i antiherpes. Uleiurile eseniale au o utilizare larg
i variat n multe industrii, cum ar fi cosmetic i parfumurie, buturi i ngheat, produse de
patiserie i produse alimentare, pentru parfumarea i aromarea produselor finite.
Uleiurile eseniale sunt amestecuri de compui naturali, la concentraii destul de diferite.
Uleiurile eseniale sunt formate din trei elemente aproape exclusive: carbon, hidrogen i oxigen. De
departe cea mai frecvent clas de componeni sunt terpenele. Terpenele sunt realizate din
combinarea mai multor uniti de 5-carbon-baz numite izopren. Terpenele pot forma blocuri prin
unirea unitilor de izopren pentru a forma monoterpene, sesquiterpene, diterpene i secvene mai
mari. Factorii care determin compoziia i randamentul uleiului esenial obinut sunt numeroi.
Uneori este dificil de a separa aceti factori unul de altul, deoarece muli sunt interdependeni i se
influeneaz reciproc unul pe altul. Aceste variabile pot include variaiile sezoniere i maturitatea,
8

originea geografic, variaie genetic, etapele de cretere, o parte din echipamentele utilizate,
recoltarea, uscarea i depozitarea [6].
n tabel 2.1. sunt prezentate date despre componenii eseniali ai Melissei officinalis din frunze n
diferite stadii de cretere.
Tabel 2.1. Componenii eseniali
ai Melissei officinalis din frunze, n diferite stadii
Componeni
Cariofilen
Cariofilen oxid
Carvacrol
Geraniol
Acetat geranil
Heptan
Hexenal (E-2)
Iso menthol
Linalool
Metil citronelate
Metil docanate

nainte de nflorire
2,17
8,75
2,04
25,03
5,41
4,82
0,22
1,15
0,83
0,98
0,60

nflorire
4,65
7,55
2,75
24,97
2,53
5,11
0,61
1,41
0,18
0,33
0,85

Dup nflorire
5,50
0,95
37,62
4,58
5,82
3,35
0,10
2,35
0,72
32,34
0,64

Uleiul esenial obinut din frunze naintea stadiului de nflorire conine 37 de compui, dintre
aceti compui avem: decadienal (29,38%) i genariol (25,3%), alte componente prezente cu
coninut apreciabil au fost: cariofilen oxid (8,75% ), acetat genaril (5,41%), geranil (3,15%),
cariofilen E (2,17%), carvacrol (2,04%) i linalool (0,1%).
Uleiul esenial obinut din frunze pe timpul nfloririi au fost identificai 36 de compui.
Compuii majori sunt: decadienal (28,04%) i genariol (24,97%), ali compui sunt: cariofilen oxid
(7,55%), cariofilen E (4,65%), geranil (3,15%), carvacrol(2,75%), acetat genaril (2,53%), acetat
neril (2,31%) i linalool (0,2%).
Uleiul esenial obinut din frunze dup stadiul de nflorire au fost identificai 16 componeni.
Componenii majori au fost carvacrol (37,62%) i metil citronelalul (32,34%), ali compui au fost
de acetat de geranil (5,82%), cariofilen (5,50%), geraniol (4,58%), heptan (3,35%) i linalool
(0,72%).
Cel mai mare coninut de ulei esenial a fost obinut nainte de nflorire i cea mai mic
cantitate a fost obinut dup nflorirea plantei. Uleiul esenial din frunzele plantei a fost n scdere
dup stadiului de nflorire.
Compuii uleiului esenial din frunze au fost mprii n dou grupe principale: monoterpene i
sesquiterpene. Monoterpenele au dovedit a fi grupul principal de compui. Monoterpenele au
reprezentat 80%, iar sesquiterpenele la 20% din volum de ulei obinut din frunze. Uleiurile eseniale
din frunze nainte de nflorire i la stadiului de nflorire, au fost bogate n monoterpene. n
monoterpene, componenii monoterpenici oxigenai au fost cei mai muli nainte de nflorire, n
raport cu stadiul de nflorire.

Figura 2.1. Compoziia monoterpenelor n uleiul esenial de Melissa officinalis din frunze
n diferite stadii de cretere a plantei
n compoziia uleiului volatil din frunzele Melissei officinalis, au fost gsii componeni n
diferite stadii de cretere ce au fost prezentati n tabelul 2.1. n total 11 componeni din uleiul
esenial au fost observai n cele trei etape de cretere ale plantei (nainte de nflorire, nflorire i
dup nflorire). Componenta major gsit n uleiul esenial din frunze n cele trei etape a fost
geraniolul, coninutul acestui component avnd concentraii diferite: 25,03% (nainte de nflorire),
27,97% (nflorire) i 4,58% (dup nflorire).
Cantitatea i compoziia uleiului esenial sunt puternic dependente de stadiul de dezvoltare a
plantei i, prin urmare, timpul de recoltare este unul dintre cei mai importani factori care
influeneaz calitatea uleiului de roini.
Recoltarea culturii prea devreme sau prea trziu a dus la un randament sczut de frunze, precum
i coninutul de ulei esenial. Rata uleiului esenial din plantele medicinale variaz ntre 0,02% i
0,30%, ceea ce este destul de mic n comparaie cu alt membru al familiei Labiatae. Acesta este
motivul pentru care costul de producie i preul uleiului esenial al Melissei officinalis este foarte
mare pe pia. Principalii constitueni ai uleiului volatil din Melissa officinalis sunt: citral (geranial
i neral), citronelal, geraniol, -cariofilen care cuprind 96% din ingredientele uleiului.
Randamentul uleiului esenial variaz considerabil de la lun la lun i a fost influenat de micromediul n care planta s-a dezvoltat (soare sau umbra). Temperatura, metodele de recoltare i
metodele de uscare influeneaz i ele concentraia uleiului esenial. Studierea factorilor, prezentai
mai sus, pe un timp mai ndelungat au determinat caracteristicile compoziiei chimice al uleiului
esenial din aceast plant [7].

10

Componenii uleiului volatil din Melissa officinalis sunt:

2.1. Terpeni i terpenoide

Carvona
Carvona face parte din clasa monoterpenoidelor, este un ulei puin vscos, cu miros de chimen.
O

Metil-chavicol
Este un component ce face parte din eterii fenolici ai uleiurilor eseniale.
CH2 CH

CH2

OCH3

Anetol
Anetolul face parte din eterii fenolici, se gsete n cantitate mic n uleiul esenial [4].
HC

CH

CH3

OCH3

Geraniol
Geraniolul sau citral a face parte din clasa monoterpenoidelor. A fost identificat n sute de
uleiuri, inclusiv n Melissa officinalis, este o component uzual a uleiurilor volatile n proporie de
93-94% faa de citralul b care se gsete n proporie de 6-7%.
Geraniolul este o component odorant foarte mult utilizat. n parfumerie intr n compoziiile
florale de trandafir. Este stabil i n spunuri, n compoziii de aromatizare se folosete pentru
buchetarea notelor citrice n concentraii de 1-10 ppm.
CH2OH

CH2OH
H

11

 Nerol
Nerolul sau citral b face parte din monoterpenoide, este o form izomer cis a geraniolului,
care apare n uleiurile volatile n proporie de 6-7% din totalitatea geraniolului. Nerolul se obine din
geraniol prin nclzire cu etoxid de sodiu, mirosul este dulceag, floral de trandafir [8].

CH2OH

CH2OH

Citronelal
Citronelalul este o aldehid monoterpenic aciclic, ce se gsete n uleiurile eterice. Este puin
solubil n ap, este solubil n etanol apos 1:2 (etanol 70%) miscibili cu solveni organici. Are un
miros prospt de trandafir.

O
C

Carvacrolul
Este un principal fenol din uleiurile eterice.
OH

Acidul ursolic
Acidul ursolic este un triterpenoid oxigenat cu scheletul format din 6 uniti izoprenice (C 5H8)6
rezult C30H48. A fost cunoscut nc mai demult sub denumirea de urson, apoi acid ursolic, dar
structura sa a fost stabilit mai trziu.
H3C
H
COOH

HO

12

 Acid oleanolic
Se prezint sub form de cristale fine n etanol.

H
COOH

HO

2.2 Sesquiterpeni i sesquiterpenoide

Cariofilen oxid
Cariofilenul face parte din categoria sesquiterpenoidelor. Suspus oxidrii, cariofilenul este
transformat n acizi dicarboxilici, n primul rnd n acid cariofilenic i (+)-trans-nor-cariofilenic.
Este un lichid incolor, cu miros slab aromat, care se rezinific n aer. Structura sa a fost dedus
din reacii de degradare i de sintez.
H

COOH

+
H

COOH

-cariofilenul
Este format dintr-un ciclu cu nou atomi de carbon, este un sesquiterpenoid foarte rspndit n
uleiurile volatile, este un lichid incolor, cu miros slab aromat care se rezinific la aer.
O

Acidul geranic
Face parte din clasa sesquiterpenoidelor.

COOH

13

2.3 Taninurile
Taninurile pot fi considerate ca derivai de la polifenoli i de la acizii fenolici.
Unele taninuri sunt esteri ai unor monoglucide sau ai unor derivai ai monoglucidelor cu acid
galic sau ali acizi fenolici care deriv de la acidul galic. O alt grup de taninuri, n cazul Melissei
officinalis, sunt produii de condensare ai unor derivai ai flavanului, cum este de exemplu
catechina. Aceti derivai ai flavanului se nrudesc cu antocianidinele, pigmeni din grupa
flavonoidelor.
Caracteristic pentru toate taninurile este prezena n molecul a unor elemente structurale
polifenolice.
Majoritatea taninurilor sunt substane amorfe, de culoare alb sau glbuie. Gustul astrigent este
dat de organelor vegetale bogate n taninuri, n cazul Melissei officinalis taninurile se gsesc la
nivelul frunzelor.
Catechina este un derivat pentahidroxilat al flavanului i anume un hidroxiflavanol (3, 5, 7, 3,
4-pentahidroxiflavan).
Catechina dispune de doi atomi de carbon asimetrici (C2 i C3, n pozi diastereoizomeri), ceea ce
determin existena a dou perechi de anti (-)-catechin, (+) i (-)-epicatechin i a doi racenai, ()catechin i ()-epicatechin.
Toi izomerii optici ai catechinei sunt substane cristaline (ace sau plci din ap), incolore,
solubile n ap cald, alcool, aceton i greu solubile n eter.
OH
O

HO

H2
H2

flavan

OH

H2

OH

catechin

2.4 Glucide
Glucidele constituie o mare familie de substane naturale, rspndite n regnul vegetal i animal.
n locul denumirii mai noi, glucide, se folosesc i denumirile de hidrai de carbon sau zaharuri.
Glucidele particip n proporie de peste 50% din materia uscat, la construcia majoritii
organismelor vegetale superioare, ocupnd din punct de vedere cantitativ locul de frunte printre
substanele organice din lumea vegetal. Importana lor fiziologic vegetal este de asemenea
deosebit de mare. n comparaie cu organismele vegetale, cantitatea glucidelor din organismele
animale este mic, totui pentru om i animale importana lor fiziologic este foarte mare [4].
Zaharoza
Zaharoza este o diglucid format din resturi de D-glucoza i D-fructoz, este cea mai rspndit
diglucid din regnul vegetal, ntr-o cantitate mai mare sau mai mic.
Zaharoza este un compus solid, cristalin, incolor, avnd temperatura de topire 160 0C. Mojarat
este o pulbere alb, fr miros, cu gust dulce. nclzirea zaharozei la o temperatur apropiat topirii
conduce la o mas lipicioas, maronie, numit caramel. La o temperatur mai mare de 160 0C,
zaharoza se nchide i mai mult la culoare i ncepe s se descompun n CO 2, H2O i degaj un
miros caracteristic de zahr ars. Zaharoza este un compus foarte rspndit. n cazul Melissei
14

officinalis se gsete n sucul florilor. Este foarte solubil n ap i foarte puin solubil n alcool
[10].
CH2OH
O

O
OH
OH

HO

OH

OH

CH2OH

Planteoza
Alturi de glucidul de baz (zaharoza), cu gust dulce pronunat, se gsete ntr-o cantitate mai
mic planteoza.
OH

O CH2
O
OH OH
HO
OH

CH2OH
O
OH

O
OH

OH

2.5 Mucilagii vegetale

Mucilagiile vegetale sunt poliglucide complexe, rspndite n majoritatea organelor vegetale.
Mucilagiile se gsesc n cantiti mai mari n semine, dau natere la soluii coloidale extrem de
vscoase, care la aer se ntresc. Mucilagiile vegetale se obin din materialul vegetal prin extragere
cu ap i precipitare cu alcool sau cu sulfat de amoniu. Mucilagiile cu apa formeaz soluii vscoase
i cleioase [4].
H
HO
HO
H

COOH
OH
H
H
OH
COOH

acid mucic

2.6 Steroli
Sterolii din regnul vegetal, numii i fitosteroli, se gsesc n organele vegetale n deosebi n flori.
Sterolii sunt alcooli cristalizai care se gsesc att liberi ct i esterificai cu acizi grai superiori n
lipidele tuturor plantelor i se izoleaz din poriunea nesaponificabil a acestora.

15

 -sitosterolul
-sitosterolul este un component al sitosterolului, fiind cel mai rspndit fitosterol din plantele
superioare. Prin aplicarea unor metode speciale de purificare se poate obine din materialul vegetal
-sitosterol n stare cristalin.

HO

Campesterolul
Campesterolul-(24) este un fitosterol ce se gsete n plantele superioare, se mai numete i
campestein, are configuraia C24 i i lipsete dubla legtur din catena alifatic [10].

HO

HO

campesterolul

- campesterol

2.7 Acizi
Acizii liberi se gsesc de obicei numai n cantitate mic n uleiurile eterice. Prezena lor se
datoreaz, probabil, hidrolizei esterilor. Numai n cazuri rare se gsesc acizi liberi n cantitate mai
mare.
Cel mai frecvent se ntlnesc n uleiuri eterice, acizi alifatici saturai i nesaturai precum i acizi
aromatici, toi monobazici. Mai rare sunt cazurile cnd apar acizi bibazici.

16

 Acidul clorogenic
Acidul clorogenic (acidul heliantic) are structura unui ester format din acid cafeic i acid chinic,
dup cum rezult din hidroliza alcalin a acidului clorogenic.
HO
OH

HC CH

CO

C6H7 (OH)3

COOH

Acidul cafeic
Acidul cafeic, acid 3,4-dihidroxicinamic, este mult rspndit n natur. Este o component a
acidului clorogenic a crei sare de potasiu apare sub forma unei combinaii moleculare cu cafeina.
Acizii hidroxicinamici, n special acidul cafeic, sunt cunoscui pentru proprietile lor
antimicrobiene. Aceti acizi fenolici au in vitro o aciune toxic asupra unui numr mare de
microorganisme [8].
OH
OH

CH

CH COOH

Acidul rozmarinic
Acidul rozmarinic este un ester al acidului cafeic. Acesta are un numr de activit i biologice
interesante, de exemplu, antiviral, antibacterian, antiinflamator i antioxidant. Prezena acidului
rozmarinic n plantele medicinale, ierburi i condimente are efecte benefice i de promovare a
sntii. La plante, acidul rozmarinic se presupune c acioneaz ca un compus de aprare [9] .
O
HO

OH

COOH
H
O

OH

HO

17

 Acidul protocatehic
Acidul protocatehic, acid 3,4-dihidroxibenzoic este unul dintre principalii proinhibatori din
plante. Proinhibatorii sunt compui chimici care alctuiesc o barier primar ce inhib in vitro
germinaia i creterea agenilor fitopatogenici [8].
HO
OH

COOH

2.8 Agliconi i glicozidele flavonice

Flavonoidele reprezint o clas de substane fenolice rar rspndite mai ales sub form de
glicozizi. Multe flavonoide sunt colorate, constituind unii din principalii pigmeni vegetali, cum sunt
antocianidinele i flavonele. n cazul Melissei officinalis gsim flavonele.
Flavonele sunt pigmeni galbeni care se gsesc n flori, fructe i frunze sub form de glicozizi.
Flavonele sunt substane cristalizate colorate n galben. Glicozidele flavonice cristalizeaz bine,
fiind solubile n ap, metanol i etanol.
n frunze flavonele au rolul de a absorbi razele ultraviolete i deci apra plasma i clorofila.
Glicozidele flavonice sunt construite din urmtoarele glucidele: D-glucoz, L-ramnoz, Larabinoz, D-xiloz i acidul D-glucuronic. Aceste glucide pot participa i sub form de diglucide
sau triglucide, cum sunt: rutinoza, apioza, robinoza i altele [4].
Glicozidele flavonice gsite n Mellisa officinalis sunt urmtoarele:
Quercetin: are ace mici galbene din ap sau etanol diluat;
OH
O

HO

OH

HO

OH

OH

Ramnocitrin: foie galbene din etanol;

O

OH
OH

OH

Apigenin-7-glucozid (cosmassin);
O

HO

OH

OH

18

 Camferol (Kempferol);
O

HO

OH

OH
OH

Luteolin (digitoflavon);
OH
O

HO

OH

OH

Luteolin 7-apiozo-glucozid (Graveobiozid A);

OH
O

OH

OH

Ramnazin
OH
O

HO

OH
OH

OH

19

3. Principiile active din planta Melissa officinalis

Produsele brute medicamentoase de origine vegetal sau drogurile vegetale se ntrebuineaz n
scopuri terapeutice datorit substanelor pe care le conin. Majoritatea produselor sunt folosite
pentru aciunea lor terapeutic datorit unor principii active.
Din punct de vedere farmacodinamic, respectiv terapeutic, rolul principiile active poate fi jucat
de o singur substan sau de un complex de substane. Principiul sau principiile active pot fi
extrase, respectiv izolate, din produsul vegetal i ntrebuinate ca substane chimice pure.
Principiile terapeutice active fac parte din compoziia chimic a plantelor medicinale i
aromatice. Cele dou noiuni, cea de principiu activ i cea de compoziie chimic nu se suprapun. n
Melissa officinalis se gsete un numr foarte mare de compui chimici dintre care ns numai unii
prezint interes terapeutic.
Principiul sau principiile active pot fi extrase din plante ca substane chimice pure (indivizi
chimici) sau sub forma unui complex de substae (diferite tipuri de extracte).
Prin sinteze organice s-a ajuns la obinerea pe cale industrial a unui numr nsemnat de principii
active. n unele cazuri aceti compui de sintez au nlocuit ntr-o msur mai mic sau mai mare
produsul vegetal, de exemplu majoritatea vitaminelor. n alte cazuri ntrebuinarea produsului
natural continu s fie mai rentabil din punct de vedere economic, dect obinerea pe cale sintetic
a principiilor active, de exemplu majoritatea alcaloizilor. Utilizarea produsului vegetal poate fi
preferat fa de substana chimic pur i din punct de vedere terapeutic. n acest caz produsele
vegetale se prefer pentru complexitatea aciunii, asigurat de sinergismul diferiilor compui.
Din momentul n care s-a ajuns la cunoaterea structuri chimice a principiilor active s-au lrgit
posibilitile de valorificare a acestora prin:
ntrebuinarea unor preparate farmaceutice, numite i galenice (infuzii, decocturi, tincturi,
extracte etc), obinute dintr-un drog vegetal de preferin cu un coninut prevzut (titrat) pe principii
active;
ntrebuinarea unui complex de principii active, obinut prin ndeprtarea substanelor inactive,
numite substane balast;
ntrebuinarea unui singur component, considerat ca cel mai important dintre principiile active
ale produsului respectiv;
ntrebuinarea unui principiu activ obinut prin sintez.
Produsele vegetale pot fi grupate dup natura principiilor active pe care le conin. Dat fiind c n
acelai produs se gsesc substane care pot aparine diferitelor categorii de principii active, gruparea
se face dup compusul sau compuii principali crora se datoreaz aciunea.
Principiile farmacodinamice active din produsele vegetale, dei pot fi substane foarte rspndite
n tot regnul vegetal, totui ele se formeaz ntr-o cantitate mult mai mare numai n anumite specii.
Procentul la care ajung principiile active n diferitele organe ale aceleai plante variaz ntre
limite largi. Unii compui se gsesc practic n toate esuturile plantei respective, alii sunt localizai
aproape n ntregime n anumite organe sau esuturi.
Prezena diferiilor compui se poate identifica prin metode microchimice adaptate la nivelul
celulelor sau al esuturilor (metode citochimice i histochimice). Studiul structurii microscopice i al
localizrii principiilor active intr n domeniul cercetrilor de farmacognozie.
O mare parte a principiilor active sunt considerate ca substane secundare care se formeaz n
cursul proceselor de disimilaie. Fiecare celul vie poate s elaboreze diferite substane de acest gen.
n multe cazuri ns producerea masiv a acestora are loc n celule difereniate n acest scop, care se
cunosc sub numele de celule, respectiv esuturi de secreie.
3.1 Pectinele i mucilagiile sunt compui de natur glucidic care, spre deosebire de amidon i
de celuloz, conin nu numai un singur fel de manoz, ci diferii compui glucidici cu 5-6 atomi de
20

carbon (pentoze, hexoze). Moleculele lor conin de obicei i produi de condensare a acizilor
uronici. Proprietatea lor comun este c n contact cu apa pot forma soluii coloidale, vscoase.
Pectinele se gsesc n membrana celular alturi de celuloz, de care se deosebesc n primul rnd
prin solubilitatea lor n ap la rece sau la cald, ele fiind substane tampon i de cimentare. Pectinele
prezint dou proprieti terapeutice: aciunea hemostatic mrind viteza de coagulare a sngelui
putnd fi ntrebuinate n acest scop n terapeutic i aciunea antidiareic se datoreaz prezenei
pectinelor nsoite de substane fenolice cu aciune dezinfectant.
Mucilagiile se gsesc n cantitate mare n membrana celular a produselor vegetale, formnd un
strat gros, care n mediu apos se umfl repede. Acesta este cazul seminelor care devin
mucilaginoase n contact cu apa. Mucilagiile pot juca rolul de substane de rezerv. n Melissa
officinalis mucilagiile iau natere o dat cu scderea coninutului n amidon. Substanele
mucilaginoase formeaz soluii vscoase i prezint proprieti emoliente protejnd mucoasele fa
de agenii externi. Produsele vegetale bogate n substane mucilaginoase sunt ntrebuinate n
tratamentul inflamaiilor cilor respiratorii superioare, mai ales n bronite.
3.2 Uleiurile eseniale (uleiurile volatile, uleiurile eterice) sunt amestecuri de diferii compui
chimici care n totalitatea lor prezint anumite caractere fizico-chimice comune: sunt volatile, au
miros aromatic caracteristic i sunt de regul solubile n alcool etilic. Spre deosebire de uleiurile
grase (uleiurile fixe), pata translucid pe care o prezint o pictur de ulei esenial pe hrtie dispare
n scurt timp.
Uleiul esenial se afl n topul clasamentului general, putnd fiind obinut prin distilare cu
vaporide ap. Aceast categorie de extracte a fost zona central a cercetrilor privind extracia cu
fluide supercritice de biomas natural din anul 2000, deoarece include uleiuri valoroase. Dei
randamentele de extracie obinute prin dioxid de carbon supercritic sunt destul de flexibile.
Prezena compuilor bioactivi face uleiurile eseniale interesante pentru numeroase aplicaii. n ceea
ce privete relevana lor comercial, ele sunt aplicate pe o scar larg de segmente, cum ar fi: arome,
parfumuri, ingrediente alimentare, nutriionale, fitofarmaceutice i cosmetice.
n componena uleiurilor eseniale intr diferite hidrocarburi alifatice i ciclice, saturate i
nesaturate, precum i derivaii lor oxidani (cetone, oxizi, lactone, alcooli, aldehide, acizi carbonici).
Hidrocarburile cu formula C10H16 poart numele de terpeni. Pe lng acestea, n compoziia
diferitelor uleiuri eseniale intr i sesquiterpenele, cu formula C15H24.
Pe lng hidrocarburi i derivaii lor, n compoziia uleiurilor eseniale pot intra i compui
aromatici, respectiv fenolici. Att compuii terpenici, ct i cei fenolici se pot afla n stare liber sau
n combinaii cu alcooli (eteri), respectiv cu acizi (esteri).
Uleiurile eseniale se formeaz n celule sau esuturi speciale. De regul aceste substane sunt
secretate de structuri, care iau natere la suprafaa organelor aeriene.
Majoritatea uleiurilor eseniale se gsesc n plante ca atare i imprim acestora mirosul lor
caracteristic. Unele uleiuri eseniale se afla ns n combinaii cu glucide, sub forma unor glicozide
inodore i sunt puse n libertate numai n urma unei hidrolize enzimatice sau acide (glicozide
cardiotonice i glicozide antrachinonice).
Uleiurile eseniale prezint diferite forme farmacodinamice n funcie de compoziia lor. Multe
uleiuri eseniale sunt apreciate datorit aciunii antiseptice, carminative, antispastice, colagoge sau
diuretice pe care o reprezint. Unele uleiuri eseniale arat o aciune bactericid. S-au obinut
rezultate promitoare i n tratamentul unor afeciuni renale. Uleiurile eseniale ct i anumite
substane din compoziia lor sunt mult mai apreciate n parfumerie.
Uleiurile eseniale se pot obine din plantele aromatice prin mai multe procedee dintre care
distilarea i antrenarea cu vapori de ap sunt cel mai frecvent utilizate.Produsul obinut poate fi apoi
rafinat sau rectificat prin tratare cu diferite substane i distilare fracionat.
Uleiurile volatile nu sunt solubile n ap, nu sunt miscibile cu apa, dar n proporii mici pot ceda
unele substane fazei apoase. Pe aceast proprietate se bazeaz prepararea apelor aromatice i se
21

explic de ce drogurile aromatice cedeaz principiile lor active la obinerea soluiilor extractive
apoase (ceaiuri medicinale i respectiv infuzii). Cel mai bun solvent al uleiurilor volatile este
alcoolul etilic.
3.3 Rezinele sunt amestecuri de substane n care predomin compuii hidrociclici i aromatici,
asemntoare acelora care se gsesc n componena uleiurilor eseniale. Rezinele conin de obicei i
compui politerpenici. Sunt substane amorfe, practic insolubile n ap, n majoritatea cazurilor
solubile n alcool etilic, eter, uleiurile eseniale etc.
3.4 Glicozidele (heterozidele) sunt produi de condensare a unui component glucidic cu o
molecul de alt natur, numit aglicon sau genin. Partea glucidic poate s fie format din una sau
mai multe molecule monozaharide, care la rndul lor pot aparine pentozelor sau hexozelor,
respectiv aldozelor sau cetozelor. Cea mai frecvent ntlnit monozaharid din compoziia
glicozidelor este glucoza. n cazul n care aceast manoz reprezint compusul glucidic al
heterozidei se folosete denumirea generic de glucozid. Dac componentul glucidic nu este
glucoza, ci un alt reprezentant al grupei, se folosete denumirea de glicozid. Cnd componentul
glucidic este reprezentat de un singur tip de manoz, numele glicozidei poate fi derivat din numele
acestuia. Astfel, se poate vorbi de fructozide, galactozide, ramnozide etc. Structura moleculei fiind
eterogen, glicozidele sunt numite i heterozide fa de holozidele compuse numai din molecule de
glucide. Natura chimic a acestor compui poate fi exprimat prin sufixul -ozid.
Glicozidele sunt compui caracteristici plantelor. Glicozidele nu se gsesc ns n toate plantele,
prezena lor este caracteristic numai unor uniti sistematice. Glucozidele se gsesc numai ca
urme n unele produse vegetale, dar coninutul lor poate s ajung pna la 10% i mai mult n alte
produse vegetale.
Din momentul recoltrii i pn la uscarea complet, glicozidele pot fi decompuse sub aciunea
enzimelor, iar valoarea terapeutic a produsului poate s scad sau s dispar complet. Pentru
prevenirea acestei descompuneri, organele vegetale se usuc ct se poate de repede, n vederea
scurtrii timpului de aciune a enzimelor. Se poate recurge la stabilizarea produsului, prin
suspendarea activitii enzimatice. Stabilizarea se face prin nclzirea organelor detaate la
temperatura de 90-1050C, timp de o or, continundu-se uscarea la temperatura cuprins ntre 40600C, pn ce se realizeaz coninutul de umiditate admis. Stabilizarea se poate realiza i cu vapori
de alcool etilic n autoclav.
n Melissa officinalis se gsesc urmtoarele glicozide: glicozidele antrachinonice i glicozidele
sterolice sau cardiotonice.
Glicozidele antrachinonice conin n molecula lor un aglicon cu nucleu antracenic oxidat
(antrachinonic) i grupri metilice grafate pe nucleu. Compuii din aceast grup au culoarea
galben, portocalie sau roie i se coloreaz n rou intens n contact cu soluii alcaline. Sunt
rspndite mai ales n familia Liliaceae. Aciunea lor laxativ se datoreaz efectului excitant asupra
intestinului gros.
Glicozidele sterolice sau cardiotonice conin n molecula lor un aglicon cu nucleu steroidic de
care este legat un heterociclu lactonic format din cinci atomi (grupa glicozidelor cardenolide) sau
din 6 atomi (grupa glicozidelor bufanolide). n ceea ce privete compusul glucidic, n Melissa
officinalis se gsete zaharoza i planteoza. n cursul uscrii sau al prelucrrii produselor vegetale
moleculele glicozidelor pot scinda succesiv sub aciunea enzimelor, dnd natere la glicozide
secundare sau teriare. n majoritatea cazurilor glicozidele primare sunt mai valoroase din punct de
vedere terapeutic, dect glicozidele secundare sau teriare.
Din punct de vedere farmacodinamic, aceste glicozide se caracterizeaz prin aciunea lor electiv
asupra inimii. n terapeutic sunt utilizate n insuficiena cardiac. Sub aciunea acestor glicozide se
normalizeaz tonicitatea miocardului, implicit fora sa de contracie, n consecin cordul execut un
travaliu mai mare, crete debitul cardiac, n felul acesta se mbuntete circulaia sanguin, dispar
edemele. Unele glicozide din aceast grup se administreaz pe cale oral i au o aciune prelungit
22

(cumulativ). Altele, care se administreaz sub form de injecii au o aciune mai rapid, dar de
durat mai scurt.
3.5 Materiile tanante (taninurile) alctuiesc o grup de principii active unitare mai mult din
punct de vedere al proprietilor tehnologice dect din punct de vedere chimic. Sunt substane care
pot fi utilizate la tbcirea pielii. Prezint proprietatea comun de a precipita proteinele, acetatul de
plumb, alcaloizii din soluiile apoase motiv pentru care pot fi folosite ca antidot n intoxicaiile cu
alcaloizi. Gustul lor este astringent.
Din punct de vedere chimic materiile tanante aparin grupei polifenolilor i pot fi de dou feluri:
compui formai din fenoli prin esterificare, n multe cazuri n combinaie cu glucide i compui cu
nucleu condensat sau glucide. Substanele din prima categorie pot fi hidrolizate prin fierbere.
Substanele din a doua categorie conin nuclee flavonoide, sunt nrudite cu catechinele si
antocianinele, spre deosebire de substanele din grupa precedent, nu pot fi hidrolizate cu acizi. n
urma nclzirii uscate primele dau pirogalol, iar ultimele dau pirocatechin.
Datorit gruprilor fenolice pe care le conin, materiile tanante produc reacii de culoare cu
srurile metalelor grele, n prezena clorurii ferice materiile tanante hidrolizabile dau de regul o
coloraie sau un precipitat albastru pn la negru, iar cele cu nucleu condensat dau o coloraie verde.
Combinaiile polifenolice sunt foarte rspndite n regnul vegetal. Organele vegetale n care se
acumuleaz n cantiti mai mari (peste 5-10%) sunt utilizate n scopuri industriale i farmaceutice.
Materiile tanante se formeaz prin combinarea, respectiv condensarea unor combinaii cu greutate
molecular mai mic, localizate la nceput n sucul celular, apoi absorbite de ctre membrana
celular pe care produii de oxidare ai materiilor tanante le pot colora n brun, rou etc. S-a emis
ipoteza formrii unor taninuri din leucoantocianide.
Materiile tanante acioneaz asupra mucoaselor, coaguleaz proteinele i n consecin prezint o
aciune hemostatic. Sunt folosite n tratamentul rnilor, mai ales pentru oprirea sngerrii, sunt
apreciate n tratamentul stomatitelor i al gingivitelor.
3.6 Principiile amare formeaz o grup n care pot fi ncadrai diferii compui datorit unei
singure proprieti organoleptice comune i anume al gustului lor amar, chiar n diluaii mari. Din
punct de vedere farmacodinamic, proprietatea comun a acestor substane este mrirea poftei de
mncare, respectiv a secreiei gastrice n cazul cnd sunt administrate cu 15-30 de minute nainte de
mese.
Molecula lor conine, de cele mai multe ori grupri lactonice i respectiv cetonice, dar structura
de baz poate s fie diferit. Produsele amare se mpart n amare pure, amare mucilaginoase i
amare aromatice, acestea din urm coninnd i ulei volatil.
3.7 Alcaloizii sunt compui naturali de diferite structuri, care prezint ns anumite caractere
comune i anume: conin azot n molecula lor, au o reacie alcalin i prezint de regul o aciune
puternic asupra organismului uman. Majoritatea alcaloizilor conin oxigen n molecula lor.
Dup proprietile fizice, alcaloizii pot fi mbuntii n compui cristalini i n compui lichizi.
Alcaloizii sunt solubili n solveni organici, iar combinaiile lor cu acizii minerali sau organici
(srurile alcaloizilor) sunt solubile i n ap. Alcaloizii se gsesc n plante sub forma de sruri.
ntr-o plant se gsesc de obicei mai muli alcaloizi dintre care unul se afl n cantiti mari i
joac rolul cel mai nsemnat din punct de vedere terapeutic (alcaloidul principal). Biosinteza
majoritii alcaloizilor studiai are loc n rdcin, de unde migreaz apoi n organele aeriene.
Utilizarea alcaloizilor n scopuri terapeutice este stric condiionat de doz, iar folosirea lor se
face numai sub supraveghere medical.
3.8 Coloranii vegetali sunt substane naturale care, datorit absorbiei caracteristice a razelor
de diferite lungimi de und apar n faa ochilor notri ca substane colorate. Cel mai rspndit
colorant de pe globul pmntesc este clorofila, singurul pigment verde din plante, iar Melissa
officinalis (figura 3.1.) nu este o excepie. Clorofila se gsete n toate produsele vegetale care
23

conin frunze sau tulpini aeriene tinere. Clorofila solubil n alcool etilic i clorofilinele obinute din
clorofil, de regul solubile i n ap, sunt substane medicamentoase cu diferite nsuiri valoroase.
Clorofila este nsoit ntotdeauna de caroteinode de culoare galben, portocalie sau roie.
Carotenoidele sunt liposolubile, azi se cunosc peste 100 de substane din aceast clas.
De culoare galben sunt i derivaii flavonici prezeni n plantele superioare att n stare liber,
ct i sub form de glicozide flavonice, numite flavonozide [2].

Figura 3.1. Melissa officinalis

24

4. Metode de extracii
4.1 Distilarea
Distilarea este o operaie cunoscut nc din antichitate, a rmas pn n prezent una dintre
metodele cele mai importante de separare a compuilor organici. Utilizat pe scar larg n industria
chimic i petrochimic, distilarea se poate realiza i n laboratoarele de chimie organic [11].
Prin distilare se nelege trecerea unei substane lichide n stare de vapori, urmat apoi de
condensarea vaporilor pentru a reveni n stare lichid.
Operaia de distilare este folosit fie pentru identificarea unei substane pure, care se poate distila
la temperatur constant, fie pentru a purifica o substan de impuriti volatile, fie pentru a
concentra componenii mai volatili din amestecul iniial.
Distilarea se poate utiliza pentru:
separarea componenilor unui amestec pe baza punctelor lor de fierbere;
separarea solvenilor de compui solizi dizolvai;
purificarea unui compus de sintez de ali compui care l nsoesc.
Distilarea se poate realiza ca mijloc de purificare numai cu condiia ca substana supus distilrii
s nu se descompun la punctul de fierbere.
Prin distilare se obin dou fraciuni: distilatul care este fraciunea evaporat, apoi condensat i
reziduul care este reprezentat de fraciunea neevaporat. Produsul principal al distilrii este distilatul
[web 2].
Pentru distilare n bune condiii a unui compus, se adaug la nceput n balonul de distilare
coninnd lichidul, cteva granule de porelan poros (numite n limbaj curent ,,pietricele ). Acestea
au rolul de a uniformiza fierberea, prin formarea unor jerbe din mici bule de aer, nclzirea lichidului
trebuie fcut n mod lent, gradat, evitndu-se orice supranclzirea care poate provoca spargerea
instalaiei i deteriorarea calitii uleiului esenial [12].
La o presiune dat substanele pure au temperaturi de fierbere care coincid cu temperaturile de
condensare a vaporilor specifici fiecrei substane. n cazul amestecurilor de lichide la o presiune
dat pentru fiecare compoziie a amestecului lichid, corespunde o temperatur de fierbere i una de
condensare.
Operaia de distilare este reprezentat de trecerea unei substane lichide n vapori i condensarea
vaporilor obinui cu ajutorul unui sistem de rcire (refrigerent). Fiind vorba de micarea unei
singure faze (vapori) se vorbete de distilare n echicurent. Dac o parte din condensat se introduce
n balon, deci se mic n sens contrar cu vaporii, se vorbete de distilare n contracurent. Acest fel
de distilare se realizeaza n coloane de distilare i poart numele de rectificare.
Dup natura sistemului supus distilrii se deosebesc amestecuri total micibile (soluii); parial
micibile (ntre anumite proporii i anumite valori de temperatur) i sisteme nemicibile.
O substan obinut pe diferite ci de sintez este pur, dac prezint ntotdeauna un punct de
fierbere constant (la o presiune constant). Substana intr n fierbere atunci cnd tensiunea ei de
vapori egaleaz presiunea atmosferic sau presiunea mediului n care se face distilarea, aceasta se
ntmpl atunci cnd n urma acumulrii de energie caloric i agitaie termic a moleculelor vecine.
Pe parcursul fierberii temperatura rmne constant. n timpul distilrii unei substane pure
compoziia vaporilor i a lichidului din balonul de distilare este aceeai.
4.2 Antrenarea cu vapori de ap.
Domeniul de distilare a existat timp de milenii i a evoluat de la cele mai simple extracii a
alcoolului i a parfumului, din antichitate, la unele dintre cele mai mari piese de echipament modern
pentru diferiii compui ai plantelor. Pentru unele separri, fierberea amestecului de plante, la fel ca
n standardul distilrii, trebuie evitat deoarece componenii ar putea fi distrui, iar pentru acetia,
25

calea cea mai scurt de distilare este folosit n industrie. Scara de utilizare a distilarii n industrie
este n continu cretere i a dus la rezulate din ce n ce mai bune pentru distilarea pe coloan.
Antrenarea cu vapori de ap este o operaie folosit n practica chimiei organice pentru
efectuarea distilrii unor substane ce nu pot fi distilate fr descompunere la presiunea atmosferic
sau pentru a realiza separarea substanelor dintr-un amestec din care o substan este antrenabil cu
vapori de ap. Majoritatea uleiurilor volatile produse industrial, se obin prin antrenarea cu vapori de
ap.
Toate componentele unui ulei volatil au punct de fierbere superioare celui al apei, dar au
volatiliti ridicate la temperaturi inferioare temperaturii de fierbere. Insolubilitatea uleiurilor
volatile n ap i densitatea acestora faciliteaz separarea apei de componeni fiind neantrenabile.
Antrenarea uleiului volatil este precedat de difuzia lui din celulele vegetale la suprafa. Ca i
n cazul uleiurilor vegetale, durata acestui proces depinde de natura materiei prime i este
determinant pentru durata ntregului proces. Difuzia are loc mai uor din plantele verzi dect din
cele uscate, din flori dect din rdcini, semine sau lemn. Pentru a uura extracia, materiile prime
sunt n prealabil tocate, zdrobite sau mcinate.
Cea mai mare parte dintre plantele aromatice se prelucreaz n stare proaspta. Uscarea duce la o
evaporare parial a uleiului volatil. Plantele trebuie prelucrate ntr-un timp ct mai scurt dup
recoltare ntruct procesele fermentative s nu influeneaz negativ calitatea uleiului. Materiile
prime vegetale: seminele, unele fructe, rdcini care au un coninutul sczut de ap se pot pstra un
timp mai ndelungat nainte de prelucrare, fr a afecta calitatea uleiului volatil.
Instalaia de antrenare cu vapori cuprinde urmtoarele:
- generator de vapori, care poate fi un balon cu fund plat prevzut cu un tub ndoit i un tub de
siguran;
- balon cu fund rotund, n care se introduce substana de antrenat. Acesta este prevzut cu un tub de
sticl lung prin care vin vaporii de ap cu substana antrenat care trec spre refrigerent;
- refrigerentul descendent, acesta se mai numete refrigerent Liebig, este rcit cu ap, care
condenseaz amestecul de vapori de ap i substana ce se antreneaz;
- un vas de culegere a distilatului, care poate fi un pahar Erlenmayer.
Efectuarea distilrii: se rup frunzele plantei, amestecul ce urmeaz s fie supus antrenrii i se
introduc n balonul cu fund rotund.
Din cauza temperaturii de condensare mari a apei, aparatul trebuie prevzut cu un refrigerent
foarte eficace. Distilarea se continu pn ce distilatul nu se mai separ n dou faze.
n vasul de colectare amestecul obinut este sub form de emulsie.
n funcie de condiiile de lucru se cunosc patru variante de antrenare cu vapori de ap: la foc
direct, n curent de vapori, cu abur sub presiune i la presiune redus.
4.2.1 Antrenarea la foc direct
Antrenarea la foc direct este cel mai vechi procedeu de extragere a uleiurilor volatile, care este
aplicat i astzi. Acesta coexista cu procedeele moderne deoarece ofer, n anumite cazuri, unele
avantaje.
Instalaia are ca i component principal un recipient metalic al crui capac curbat face corp
comun cu conducta de evacuare a vaporilor. La cealalt extremitate a gtului de lebd se cupleaz o
serpentin rcit cu ap, condensul colectandu-se ntr-un vas Florentin (separator de faze). Conducta
are o form aparte i o poriune care se micoreaz pe msur ce se ndeprteaz de capac, ceea ce a
fcut s fie numit gt de lebd.
Dup ce materialul vegetal a fost introdus n cazan, se acoper cu ap i se monteaz capacul. Se
nclzete pn la fierbere, drept combustibil folosindu-se i deeurile vegetale uscate rezultate din
extraciile anterioare. Vaporii de ap i uleiul volatil se rcesc parial n gtul de lebd i se
condenseaz n serpentina de rcire. Condensul se acumuleaz n vasul Florentin unde uleiul volatil
26

se separ deasupra sau dedesubtul stratului apos, dup cum densitatea lui este mai mic sau mai
mare ca a apei. n vas se menine un nivel constant de lichid, excesul de ap condensat evacundu-se
printr-un tub lateral. n timpul antrenrii tubul de golire este nchis. De obicei apa obinut din
condensare conine cantiti mai mari sau mai mici de ulei dizolvat i pentru a micora pierderile de
substan apa se recircul n cazan la o noua arj.
Procedeul are o serie de dezavantaje printre care:
operaiile de ncrcare i descrcare a materiei prime se fac manual;
contactul direct al materialului vegetal cu pereii supranclzii ai recipientului duce la o degradare
parial a uleiului volatil;
timp ndelungat pentru atingerea temperaturii de fierbere a apei;
pe peretele cazanului se depun sruri (din ap) reducndu-se coeficientul de transfer termic.
Aceste inconveniente pot fi diminuate fie prin ncrcarea materiei vegetale n couri metalice
perforate, fie prin introducerea n interiorul cazanului a unei plci perforate care susine ncrctura.
4.2.2 Antrenarea n curent de vapori
Antrenarea n curent de vapori este cel mai utilizat procedeu de obinere a uleiurilor volatile n
care aburul este generat ntr-o instalaie anex. Se asigur astfel o temperatur uniform i
posibilitatea unui control eficient al debitului de vapori. Simultan se evit degradarea uleiului volatil
datorit contactului direct al plantei cu pereii supranclzii ai extractorului.
Materialul vegetal este dispus la partea superioar a antrenorului fiind susinut fie de un fund
perforat, fie de un co metalic perforat. Antrenarea n curent de vapori se poate efectua att cu abur
direct (mai rar) ct i cu abur indirect. Aburul direct se introduce la partea inferioar a recipientului
printr-un distribuitor (spiral perforat). La nclzirea cu aburul indirect, agentul termic circul ntr-o
manta i asigur vaporizarea unei cantiti de ap ce se introduce n vasul de antrenare odat cu
materia prim. Materialul vegetal intr n contact numai cu vaporii de ap generai n antrenor ceea
ce asigur o nclzire treptat. Separarea se realizeaz cu vase Florentine modificate pentru a
prelungi timpul de staionare i a asigura o separare mai bun a uleiului volatil.
Pentru a diminua pierderile cauzate de dizolvarea parial a uleiului volatil n apa de antrenare,
n cele mai multe cazuri, se recircul n antrenor apa separndu-se n vasele Florentine.
4.2.3 Antrenarea cu abur sub presiune
Procedeul este o variant a antrenrii cu abur direct, n care aburul este introdus n antrenor la o
presiune mai mare dect cea atmosferic. De obicei, nu se depete o presiune de 0.25 MPa.
Condensatorul este dimensionat pentru un debit mai mare de vapori. Printr-un montaj special al
coului interior se asigur trecerea aburului prin materia prim vegetal.
Dei acest procedeu prezint unele avantaje, cum ar fi scurtarea timpului de antrenare, extracia
avansat a uleiului volatil, inclusiv a componenilor mai greu antrenabili i economie de energie,
aplicarea lui este limitat la anumite tipuri de uleiuri, foarte stabile termic, care suport aciunea
sever a aburului sub presiune. Este avantajos n cazul unor uleiuri srace n hidrocarburi
monoterpenice i compui uor volatili, dar bogate n sesquiterpenoide, cum ar fi uleiurile din lemn,
scoar, rdcini i anumite ierburi uscate, cci n aceste cazuri, fr s se degradeze compoziia
uleiului, se poate scurta considerabil durata procesului.

27

4.2.4 Antrenarea la presiune redus

Uneori la antrenarea n curent de vapori au loc modificri chimice ale uleiului volatil. Este cazul
uleiurilor care conin compui labil termic sau care hidrolizeaz n prezena apei. n aceste cazuri se
prefer operarea la presiune redus i la temperaturi mai sczute.
Procedeul este o variant a antrenrii n curent de vapori cu abur indirect. n sistem se realizeaz
un vid slab de ordinul a ctorva sute de mmHg, care face ca apa din antrenor s se vaporizeze la
temperaturi inferioare, temperaturii normale de fierbere. Depresiunea din vasul de antrenare se
coreleaz cu natura materiei prime prelucrate.
Avantajele procesului sunt urmtoarele:
economie de energie;
antrenarea are loc fr contact cu aerul, evitndu-se astfel eventualele procese oxidative;
separarea integral a componenilor din uleiul volatil, la presiune normal duce la descompuneri
pariale sau totale.
Dei ntre procedeele de antrenare a uleiurilor volatile nu sunt diferene semnificative, aplicarea
lor difereniat conduce la randamente sporite, dar i la o calitate superioar a uleiului volatil.
Prezena apei, a aerului i temperatura de operare influeneaz n mai mic sau mai mare msura,
calitatea produselor. Factorii care ntrein procesele de hidrodifuzie, hidroliz, oxidare, polimerizare
i descompunere sunt prezente n toate procedeele de antrenare aplicate, ns ponderea acestora
difer de la procedeu la procedeu.
Atunci cnd aburul se genereaz ,,in situ n vasul de antrenare se introduce ap, ca urmare
poate avea loc o dizolvare total a uleiului volatil n apa introdus sau numai a unei pri n aceasta
componenii cu solubilizare. Solubilizarea este favorizat de operarea la temperaturi nalte. O
limitare a hidrodifuziei se obine prin antrenarea cu abur direct n vase cu izolaie termic bun, n
care condensarea vaporilor n interiorul vasului de antrenare este redus la minim.
Hidroliza afecteaz n primul rnd uleiurile volatile bogate n esteri care n prezena apei i la
temperaturi ridicate se scindeaz n acizi i alcooli. Acest proces poate avea loc la antrenare n
prezena apei, n timp ce n procedeele de antrenare n curent de vapori, cu abur direct i cu abur sub
presiune, acest proces este diminuat ca urmare a reducerii timpului de contact.
Procesele de oxidare, polimerizare i descompunere sunt favorizate de prezena aerului i de o
temperatur ridicat a aburului. n general sunt supuse acestor modificri hidrocarburile nesaturate
monoterpenice.
O nclzire treptat a materialului vegetal, prin mrirea treptat a debitului de abur sau a
presiunii, asigur antrenarea acestor compui la temperaturi suficient de joase pentru a evita
descompunerea lor termic sau prin procese de oxidare i polimerizare.
Procesele chimice distructive sunt diminuate considerabil n antrenarea la presiune redus.
Exist cazuri cnd antrenarea uleiului esenial este precedat de un proces fermentativ sau cnd
antrenarea se efectueaz ntr-un mediu slab acid, pentru a asigura eliberarea unor componeni ai
acestuia din compuii neantrenabili (glicozide) care i conin.

28

4.3 Extracia
Extracia este operaia prin care unul sau mai muli componeni dintr-o faz (lichid sau solid)
sunt transferai ntr-o alt faz lichid nemiscibil (sau parial nemiscibil) adus n contact cu
prima.
Operaia se bazeaz pe diferena de solubilitate a acestor componeni ntr-un solvent
corespunztor sau n doi solveni nemicibili. n funcie de starea fizic a fazei care conine
componeni interesani, extracia poate fi solid-lichid, lichid-lichid sau gaz-lichid.
Faza care conine iniial componenii interesani se numete faza de extras, iar faza cu care
aceasta se aduce n contact, faza extractoare sau solvent. Faza care a preluat componenii se numete
extract, iar faza rmas dup extracie se numete rafinat.
Rafinarea cu solvent selectiv se poate face discontinuu, pe arj, sau continuu, n regim staionar.
Pentru cantiti mici de material este preferabil operaia discontinu. Pentru aceasta se agit
amestecul iniial cu solventul i dup sedimentare, se separ extractul i rafinatul, din care se
recupereaz apoi solventul (de obicei prin distilare) pentru a fi refolosit.
n majoritatea cazurilor o singur modalitate de extracie este insuficient pentru a se ajunge la
un rafinat de puritate avansat, de aceea rafinatul rezultat n prima operaie este tratat cu o nou
cantitate de solvent; operaia se repet pn cnd se obine un rafinat de puritate dorit. O folosire
mai raional a solventului se realizeaz n instalaii continue cu contracurentul.
Solubilitatea unei substane depinde de natura solventului ct i de natura substanei. Se observ
o variaie din acest punct de vedere. Unii compui se dizolv n orice proporie n anumii dizolvani,
alii sunt parial solubili sau practic insolubili. Diferena de solubilitate a anumitor dizolvani
constituie criteriul care st la baza separrii componenilor unui amestec.
Ca urmare amestecul se trateaz ca un dizolvant n care se solvateaz una din componentele
amestecului. Dac amestecul este solid se separ prin filtre. n cazul n care amestecul este dizolvat
n ap, extragerea se face cu un dizolvant nemicibil cu apa n care substana pe care dorim s o
extragem este mult mai solubil dect n ap. De obicei n acest caz se utilizeaz eterul, cloroformul,
benzenul, benzina etc.
n general realizarea economic a procesului de extracie depinde de alegerea solventului,
suprafaa de contact a materialului de extras, temperatura, presiunea i durata de extracie.
Indiferent de natura amestecului supus extraciei, solventul trebuie s ndeplineasc urmtoarele
condiii:
s fie selectiv, adic s se extrag din amestec dect substana util;
s fie pur;
s fie omogen (n cazul unui amestec);
s aib o temperatur de fierbere ct mai sczut i o cldur de vaporizare ct mai mic, pentru a
consuma o cantitate mic de cldur la recuperare (distilare);
s aib putere mare de extracie, adic cu puin solvent s se extrag mult substan util;
s nu fie inflamabil;
s nu fie coroziv;
s nu fie toxic;
s aib un pre de cost ct mai redus.
Practic, nu se gsesc solveni care sa ndeplineasc toate aceste condiii i atunci se caut
solveni care s rspund la ct mai multe dintre ele. La scar industrial se folosesc urmtorii
solveni: benzina de extracie, benzenul, alcoolul etilic, alcoolul metilic, acetona, acetatul de metil,
tetraclorura de carbon.
Deoarece cantitatea de substa extras crete cu creterea suprafeei de contact dintre materialul
extras i solvent, la extracia lichid-lichid se folosesc agitatoare sau coloane cu umplutur, iar la
29

extracia solid-lichid se mrunete materialul supus extraciei pn la dimensiunile potrivite

(particulele cu dimensiuni prea mici ar produce ,,nmol care ar nfunda spaiile dintre particulele
mai mari i ar opri trecerea solventului).
Dei creterea presiunii (prin care se poate realiza i o ridicare a temperaturii) mrete
randamentul extraciei, datorit unui contact ntre faze, frecvent se lucreaz la presiunea atmosferic,
deoarece meninerea unei presiuni mai ridicate necesit consum de energie i investiii mai mari.
Durata de extracie depinde cu siguran de natura solventului i a materialului supus extraciei, dar
s-a constatat c intensitatea extraciei scade n timp.
Aparatele folosite pentru extracie se numesc extractoare. La un extractor se pot distinge
urmtoarele trei pri principale: partea n care se produce contactul ntre material i solvent, partea
n care se produce separarea fazelor (care poate fi aceeai cu prima la extractoarele discontinue) i
partea n care se recupereaz solventul.
Tehnicile metodelor de extragere continu sunt aplicate pe sursele naturale pentru a obine un
randament mai mare. Principalele metode de extracie sunt:
macerarea;
digestia;
percolarea.
Macerarea const n amestecarea fazei solide cu solventul, urmat de filtrarea soluiei obinute.
n scopul mririi randamentului se vor efectua macerri repetate cu cantiti mici de solvent proaspt
n loc de o singur macerare cu ntreaga cantitate de solvent.
Digerarea este operaia de macerare executat la cald.
Percolarea este procesul prin care se extrage substana n faza solid la rece, folosind solvent n
contracurent [web 2].
4.3.1 Extracia cu solveni
Extracia cu solvent este cunoscut i sub numele de extracie lichid-lichid, este o metod pentru
a separa compui pe baza solubilitii lor relative n dou lichide diferite nemiscibile, de obicei apa
i un solvent organic. Este o extracie a unei substane de la o faz lichid ntr-o alt faz lichid.
Este o tehnic de baz n industria chimic, unde se realizeaz utiliznd o plnie de separare. Cu alte
cuvinte, aceasta este separarea unei substane dintr-un amestec de dizolvarea a unei substane ntr-un
solvent adecvat. Solventul de extracie poate fi utilizat analitic pentru concentrare sau respingerea
unei substane sau pentru separarea amestecurilor. Acest proces de obicei separ un compus solubil
de un compus insolubil. Extracia cu solvent este utilizat n prelucrarea nuclear, prelucrarea
minereurilor, producia de compui organici fini, prelucrarea parfumurilor i n alte industrii. Metoda
poate fi utilizat pentru extracia unei game largi de specii care nu sunt volatile sau semivolatile din
ap cu ajutorul unor echipamente de laborator, utilizarea sa este n scdere n majoritatea situaiilor,
deoarece solvenii de puritatea cerut tind s fie costisitori i pot provoca probleme cu eliminarea
lor [13].
Prin extracia cu solveni se ntelege separarea unuia sau mai muli componeni dintr-un material
solid sau lichid cu ajutorul solvenilor.
Operaia se bazeaz pe diferena de solubilitate a acestor substane dintr-un dizolvant
corespunztor.
Extracia poate fi folosit la purificarea i separarea substanelor lichide dintr-un amestec de
substane parial miscibile i separarea unor substane solide din amestecuri.
Aceast operaie, separarea unor substane solide dintr-un amestec, are numeroase aplicaii
printre care i aceea de obinere a unor componeni din produi animalici cu ajutorul unui dizolvant
corespunztor.

30

Extracia se face cu un solvent, care dizolv numai substana dorit i nu influenteaz celelalte
componente ale amestecului. Pentru extracie se folosesc n majoritatea cazurilor: solveni organici
(eter, alcool, acetona, benzen) din care unii sunt aplicabili nu numai extraciei substanelor organice,
dar i substanelor anorganice dizolvate.
Pentru extracie se folosesc urmtoarele aparate:
- plnii de separare;
- aparate Soxhlet;
- extractoare speciale.
n figura 4.1. sunt prezentate schiele unor extractoare continue solid-lichid, aceste extractoare
sunt alctuite din urmtoarele pri componente:
1 - corpul extractorului;
2 - refrigerent de reflux;
3 - cartu din material poros;
4 - solid supus extraciei;
5 - balon de distilare;
6 - tub pentru introducerea solventului utilizarat.

Figura 4.1. Extractoare de tip solid-lichid

Solventul din balon se evapora ncet, iar condensatul picur ntr-un tub n care se gsete
substana pentru extracie, dup care curge napoi n balon realizdu-se astfel o concentrare a
solventului cu substana extras.
Compusul solid (4) se introduce ntr-un cartu (3) confecionat din carton poros, hrtie de filtru
etc; vaporii de solvent produi prin fierbere n balon (5) se ridic prin tubul larg (7) i sunt
condensai n refrigerent (2); picturile de solvent strbat solidul i se scurg prin tub (6) napoi n
balon (5). Se observ c aparatul schiat n figura 4.1.b. numit percolator difer de cel schiat n
figura 4.1.a. prin aceea ca solventul S umple mai nti spaiul n care se gsete cartuul cu substana
solid i numai dup depsirea nivelului se scurge napoi n balon (5) prin tub (6).
Normal, aparatele de acest tip necesit cantiti mai mari de solvent S ns eficiena extraciei
este mai mare deoarece ntreaga cantitate de solid se afl n continuu scufundat n lichid. La lucrul
cu percolatorul se va urmri ca patronul cu solid s depeasc n nlime stratul de lichid din
corpul aparatului, deoarece cartuul (figura 4.3.) joac i rol de filtru.
Dac tubul (6) din figura 4.1.b. se nlocuiete cu un sifon se obine schema de principiu a
extractorului de tip Soxhlet (figura 4.2.) cu care se efectueaz o extracie simpl cu contact multiplu.
31

Aparatul Soxhlet propriu-zis se compune din:

- corpul extractorului;
- refrigerent de reflux;
- cartu (patron) din material poros;
- solid expus extraciei;
- balon de distilare;
- tub pentru ntoarcerea solventului;
- tub pentru vapori [web 2].

Figura 4.2. Aparat Soxhlet

Figura 4.3. Pahar de hrtie pentru extracie

4.4 Extracia cu fluide supercritice (SFE)

Extracia cu fluide supercritice este modul cel mai eficient i eficace pentru a extrage
constituenii vegetali. Supercritic Fluid Extraction (SFE) este procesul de separare a unui component
(extracie) de altul (matricea) folosind fluide supercritice, cel mai utilizat fiind CO 2 ca solvent de
extracie pentru plante. Condiiile de extracie pentru emisiile de CO2 supercritic sunt: temperatura
critic de 31C i presiunea critic de 74 bari.
Fluidele supercritice sunt gaze foarte comprimate care au combinate proprietile de gaze i
lichide. Fluidele supercritice pot duce la reacii, care sunt dificile sau chiar imposibil de realizat n
solveni convenionali. Este un proces rapid care poate ine de la 10 minute pn la 60 minute. Un
fluid supercritic nu las nici o urm la separare i se obine un reziduu pur.
Extracia poate fi definit ca ndeprtarea materialului solubil de la un insolubil reziduu, fie
lichid sau solid, prin tratare cu un solvent lichid. Prin urmare, este un proces care depinde de
fenomenele de transfer de mas. Factorul de control al ratei de extracie este n mod normal viteza
de difuzie a substanei dizolvate prin stratul limit al lichidului de interfa.
Extracia implic separarea poriunilor active ale plantelor sau esuturilor animale din
componentele inactive sau inerte utiliznd solveni selectivi n procesele standard. Produsele astfel
32

obinute din plante sunt lichide relativ impure, semisolide sau pulberi destinate numai pentru uz oral
sau extern. Extracia continu este folosit n scopul de a obine randamente mbunt ite de droguri
derivate din surse vegetale i animale.
Adesea analiza materialelor complexe necesit o etap preliminar, separarea analitului sau
analiilor dintr-o matrice eantion. n mod ideal metoda ar trebui s fie rapid, simpl i ieftin; ar
trebui s dea recuperarea cantitativ a analiilor fr pierderi sau degradare; ar trebui s produc o
soluie de analit care este suficient de concentrat pentru a permite msurarea final efectuat fr a
fi nevoie de concentrare; ar trebui s genereze deeuri de laborator puine sau deloc care trebuie
eliminate.
n timp ce multe extracii i componeni puri ale acestor specii sunt deja n uz, n scopuri
nutriionale i de sntate uman, alii reprezint potenial de noi aplicaii care implic plante ale
cror cunotine, n cele mai multe cazuri, au fost empiric stabilite sau nu au nc o acoperire
tiinific.
Interesul remarcabil al comunitii tiinifice pe aceast tehnologie a fost condus de dioxidul de
carbon (CO2), solventul cel mai utilizat n stare supercritic, ale crui proprieti pot fi reglate pentru
a oferi extracte cu compoziii dorite (mbuntirile selectivitii), n timp ce asigur un proces de
separare inofensiv att pentru sntatea uman, ct i pentru mediu. Ali solveni (de exemplu: etan,
propan) au fost, de asemenea obiect de cercetare, dar utilizarea lor nu este la fel de rspndit ca i
dioxidul de carbon, iar din acest motiv accentul acestei analize este pe dioxidul de carbon supercritic
(SC-CO2 ).
Uleiul esenial din plante se afl n topul clasamentului general obinut prin distilarea cu vapori
de ap. Aceast categorie de extracte a fost zona central a cercetrii privind SFE de biomas
natural din anul 2000, deoarece include uleiuri de specialitate valoroase. Dei randamentul de
extracie obinut prin angajarea de SC-CO 2 este destul de flexibil, este comun pentru a stabili uleiuri
eseniale ca un grup de extracte naturale care conin pn la 5% din materia uscat vegetal.
Prezena compuilor bioactivi face ca uleiurile eseniale s fie interesante pentru numeroase
aplicaii. n ceea ce privete relevana lor comercial, ele sunt aplicate pe o scar larg de segmente,
cum ar fi: arome, parfumuri, ingrediente alimentare, nutriionale, fitofarmaceutice i cosmetice.
Diferite abordri pot fi gsite n literatura de specialitate cu privire la SFE pentru uleiurile
eseniale:
- pentru speciile noi sau neobinuite de plante, SFE este uneori folosit pur i simplu ca o metod de
explorare care ofer noi extracte;
- pentru speciile a cror extracte i compui bioactivi sunt cunoscui, avantajele SFE-ului ar fi o
tehnologie alternativ, fcndu-se comparaii cu alte metode (extracii cu solveni organici sau
distilare);
-sporirea concentraiei de bioactiv sau compui nrudii n extractele prin fracionare supercritic
[13].
Timp de muli ani, una dintre cele mai frecvente metode de efectuare a separrilor analitice pe
probe de mediu, farmaceutice, produse alimentare i petrol complexe au fost bazate pe extragerea
eantionului global cu hidrocarburi clorurate sau solveni organici cu ajutorul unui extractor Soxhlet.
Extracia lichid, frecvent, nu reuete s ndeplineasc mai multe criteriile ideale. Aceasta are
nevoie de obicei de mai multe ore sau mai mult timp pentru a realiza satisfctor recuperarea de
substane de analizat i chiar , uneori, nu reuete s o fac. Costurile de solvent sunt adesea mari.
Soluiile de analizat de multe ori se dilueaz astfel nct se pierd pn ajunge s se realizeze
extracia.
Fluidele supercritice au fost utilizate pentru separarea analiilor din matrice din mai multe probe
pentru industrie i agenii guvernamentale deoarece utilizarea de reactivi de acest tip au ca scop
evitarea multor problemele ale extractaniilor cu lichizi organici.
33

Fluidele supercritice au fost folosite din secolul trecut cu ajutorul toluenului supercritic n petrol
i n rafinarea petrolului de ist. Apa supercritic este investigat ca mijloc de distrugere a de eurilor
toxice i ca mediu de sintez neobinuit. Cel mai mare interes de cercetare pentru ultimul deceniu a
fost CO2 supercritic, deoarece are temperatur critic (31 0C), astfel materialele biologice pot fi
prelucrate la temperaturi n jur de 350C. Densitatea CO2 supercritic la aproximativ 200 bari presiune
este aproape de cel al hexanului, iar caracteristicile de solvatare sunt asemntoare tot cu ale
hexanului, acionnd ca un solvent nepolar. n jurul regiunii supercritice, CO 2 poate dizolva
trigliceridele la concentraii de pn la 1% n mas. Avantajul major este c o mic reducere a
temperaturii sau o reducere ceva mai mare a tensiunii, va duce la aproape ntreaga substan
dizolvat de precipitare n condiii supercritice.
Fluidele supercritice pot produce un produs fr reziduuri de solvent. Exemple de produse la
scar de producie includ: decofeinizarea cafelei, carnea sczut n grsimi, ulei de ficat de rechin
etc. Caracteristicile de solvatare ale CO2 supercritic pot fi modificate prin adugarea unui agent de
antrenare, cum ar fi etanolul, ns un agent de antrenare rmne un rest de solvent n produs,
anulnd unele dintre avantajele extraciei.
SFE este definit n mod tradiional ca o tehnologie de nalt presiune (P) i aceast variabil este
o importan suprem pentru multe aspecte tehnice i economice ale acestui proces. Proprietatea cea
mai direct predispus s fie afectat de variaiile de presiune este densitatea ( ), care poate fi
folosit pentru a percepe ct de aproape SC-CO 2 ajunge la o putere solvent lichid. Studiul influenei
densitii asupra comportamentului SFE-ului (strns legate de solvent), presiunea este o variabil,
deoarece ofer marje de manipulare considerabile mai mari dect temperatur. De fapt, n timp ce
presiunea variaz de pn la 8 sau 10 ori, valorile minime uzuale investigate n experimente (circa
100 bari), temperatura este de multe ori restrns, adic de pn la 3 ori mai sczut de 40C.
n experimente apar densitile maxime i minime studiate i au fost reprezentate grafic n P-T
coordonate, se observ c se concentrez n mod obinuit la presiunea de 100-400 bari i se ia ca
valoare temperatura considerat, densitatea poate varia ntre 200900 kgm3. Interdependena dintre
presiune i densitate apare foarte des n experimente: de exemplu, o interrelaie sensibil este
vizibil la presiuni joase (de exemplu: 100 bari), unde densitile pot oscila pn la 70% la 40C la
100C, n timp ce la presiunile mai mari (de exemplu: 400 bari) oscilaiile corespunztoare ating
doar un maxim de 20%.
Aplicarea de cosolveni n experimentele de SFE a fost dominat de etanol, care a fost ales n
53% din lucrrile care implic ageni de antrenare. Etanolul este un solvent inofensiv att pentru
sntatea uman ct i pentru nivelul mediului (cum ar fi SC-CO 2), iar acest lucru este un avantaj
puternic comparativ cu n-hexan sau chiar metanol, n special atunci cnd SFE este dedicat
aplicaiilor n alimentaie, cosmetic sau industria farmaceutic. Pe lng avantajele menionate,
etanolul este substanial polar ceea ce nseamn c adugarea de cantiti mici poate crete n mod
expresiv polaritatea solventului supercritic. n plus, metanolul vine al doilea, cu o pondere de 21%,
i este urmat de ap i diclormetan, cu 5% i 3%. n ciuda faptului ca etanolul este mai polar,
metanolul ridic probleme pentru sntatea uman, un fapt care descurajeaz utilizarea pe scar
larg a acesteia. De fapt, acesta este abandonat progresiv n zilele noastre [14].
Un fluid supercritic este orice substan care poate ajunge la o temperatur i presiune aproape
de punctul critic. Se poate difuza prin solide cum ar fi un gazul i poate dizolva materiale cum ar fi
un lichid. n plus, aproape de punctul critic, se produc mici modificri n urma presiunii sau
temperaturii i schimbri mari n densitate, permind multor proprieti ale unui fluid supercritic s
fie ,,perfecionate. Fluidele supercritice sunt potrivite ca un substitut pentru solvenii organici ntr-o
gam industrial i proceduri de laborator. Dioxidul de carbon i apa sunt cele mai frecvent utilizate
fluide supercritice, fiind utilizate pentru decafeinizarea, respectiv generarea de energie.

34

Exist 2 tipuri de extracie cu CO2:

extracie la rece de presiune joas: implic CO2 rcit la 35-550F i pompat printr-un materialul
vegetal ntre 800-1500 ;
extracia supercritic: aceasta implic nclzirea CO2 mai sus de 870F i pomparea mai sus de
1100 . De obicei, acest lucru este ntre 6000 la 10000 . CO2, fluid supercritic, poate fi cel mai
bine descris ca o cea dens atunci cnd CO2 este folosit n stare lichid dens.
CO2 de joas presiune este de multe ori cea mai bun metod pentru producerea de extracte din
plante de nalt calitate. Rata de ncrcare de CO2 n aceast stare nseamn a avea mai mult CO 2
pompat prin plant. Rata de ncrcare este de obicei 10-40 de volume. Din acest motiv este
important de a avea CO2 pompat, care este mult mai rapid. Rata de ncrcare este de 2-10 volume i
o gam larg de utilizri.
Proprietile fluidelor supercritice sunt urmtoarele:
fluidele supercritice sunt gaze foarte comprimate, care combin proprieti de gaze i lichide;
fluidele supercritice pot duce la reacii, care sunt dificil sau chiar imposibil de realizat n solven i
convenionali;
fluidele supercritice au o putere de solvent similar cu hidrocarburile uoare, pentru o mai mare
dizolvare a substanelor. Cu toate acestea, compui fluorurai sunt adesea mai solubili n CO 2
supercritic dect n hidrocarburi; aceast solubilitate crescut este important pentru polimerizare;
solubilitatea crete odat cu creterea densitii (creterea presiunii). Expansiunea rapid a
soluiilor supercritice conduc la precipitarea unui solid fin divizat. Aceasta este o caracteristic
esenial a reactoarelor;
fluidele sunt de obicei permanent miscibile cu gazele (de exemplu: N 2 sau H2), iar acest lucru duce
la concentraii mult mai mari de gaze dizolvate dect poate fi realizate n solvenii convenionali.
n termeni generali, fluidele supercritice au proprieti ntre cele ale unui gaz i ale unui lichid
(tabel 4.1. i tabel 4.2.).
Tabel 4.1. Proprietile critice pentru anumite componente utilizate n mod obinuit ca fluid
supercritic

Solvent
Dioxidul de carbon
(CO2)
Apa (H2O)
Metan (CH4)
Etan (C2H6)
Propan (C3H8)
Etilena (C2H4)
Propilena (C3H6)
Metanol (CH3OH)
Etanol (C2H5OH)
Acetona (C3H6O)

Proprietile critice ale diverilor solveni

Greutatea
Temperatura
Presiunea
moleculei
critic
critic
44,01
304,1
7,38 (72,8)
18,015

647,096

16,04
30,07
44,09
28,05
42,08
32,04
46,07
58,08

190,4
305,3
369,8
282,4
364,9
512,6
513,9
508,1
35

22,064
(217,755)
4,60 (45,4)
4,87 (48,1)
4,25 (41,9)
5,04 (49,7)
4,60 (45,4)
8,09 (79,8)
6,14 (60,6)
4,70 (46,4)

Densitatea
critic
0,469
0,322
0,162
0,203
0,217
0,215
0,232
0,272
0,276
0,278

Tabel 4.2. Densitatea, difuziunea i vscozitatea diferitelor lichide, gaze i fluide supercritice

Gaze
Fluide
supercritice
Lichide

Compararea gazelor, fluidelor supercritice i lichidelor

Densitatea (kg/m3)
Vscozitatea (Pas)
Difuziunea (mm3/s)
1
10
1-10
100-1000
50-100
0,01-0,1
1000

500-1000

0,001

Diagrama de faz

Figura 4.2. Diagrama de faz temperatur-presiune pentru dioxidul de carbon

36

Figura 4.3. Diagrama de faz densitate-presiune pentru dioxidul de carbon

Figurile 4.2. i 4.3. prezint proieciile de diagrame de faze. n diagrama de faz, pentru
presiune-temperatur (figura 4.2.) fierberea separ regiunea de gaz i lichid i se termin n punctul
critic, n care lichidul i gazul dispar pentru a deveni o singur faz supercritic. Acest lucru poate fi
observat n diagrama de faz densitate-presiune pentru dioxidul de carbon (figura 4.3.). Mult sub
temperatura critic, de exemplu 280 K, pe msur ce crete presiunea, gazele comprimate i n cele
din urm (la peste 40 bar) condenseaz ntr-un lichid mult mai dens ce rezult din discontinuitatea
liniei (linia punctat vertical). Sistemul este format din dou faze n echilibru, un lichid dens i un
gaz de joas densitate. Deoarece temperatura critic este abordat (300 K) densitatea gazului la
echilibru devine mai dens, iar cea a lichidului inferior. La punctul critic (304,1 K i 7,38 Mpa - 73,8
bar) nu exist nici o diferen de densitate, iar cele dou faze devin o faz fluid. Astfel, peste
temperatura critic, un gaz nu poate fi lichefiat prin presiune. La puin peste temperatura critic (310
K) n imediata apropiere a presiunii critice, linia este aproape vertical. O mic cre tere a presiunii
provoac o cretere mare n densitatea fazei supercritice. Multe alte proprieti fizice arat, de
asemenea, gradieni mari cu presiune n apropierea punctului critic, de exemplu: vscozitate,
permitivitatea relativ i tria solventului, care sunt strns legate de densitate. La temperaturi mai
ridicate lichidul ncepe s se comporte ca un gaz, aa cum se poate observa n figura 4.3. Pentru
dioxidul de carbon la 400 K, densitatea crete aproape liniar cu presiune [13].
Aparatul trebuie s conin o pomp pentru CO2, o celul de presiune care conine proba, un
mijloc de meninere a presiunii n sistem i un vas de colectare. Lichidul este pompat ntr-o zon de
nclzire care se realizeaz la condiii supercritice. Apoi trece n vasul de extracie, unde difuzeaz
rapid n matricea solid i dizolv materialul ce va fi extras. Materialul dizolvat, din celula de
extracie, este trimis ntr-un separator la presiune mai mic i se stabilizeaz afar din separator. CO 2
poate fi apoi rcit, recomprimat i reciclat sau evacuat n atmosfer.
Dioxidul de carbon este, de obicei, sub form de lichid pompat sub 5C i o presiune de
aproximativ 50 bari. Solventul este pompat sub forma unui lichid aproape incompresibil. n timpul
traseului o mare parte din fluidul supercritic va fi ,,consumat n comprimarea lui, dect n
pomparea sa. Pentru extracii la scar mic (pn la cteva grame/minut) sunt folosite adesea pompe
37

cu piston sau seringi. Pentru extraciile la scar mai mare sunt folosite pompe cu diafragm.
Capetele pompei vor necesita rcire,iar dioxidul de carbon va fi rcit nainte de intrare n pomp.
Recipientele sub presiune pot varia de la un tub simplu pn la recipiente mai complexe cu
accesorii de eliberare rapid. Presiunea minim care poate fi folosit este de 74 bari, cele mai multe
extracii sunt efectuate la mai puin de 350 bari. Uneori sunt necesare presiunile mai mari pentru
extraciile uleiurilor vegetale, presiunea este de 800 bari, pentru miscibilitatea complet a celor dou
faze.
Recipientul trebuie s prezinte un mijloc de nclzire Acesta poate fi plasat n interiorul unui
cuptor pentru recipiente mici sau ulei sau sculei nclzii electric pentru recipiente mai mari.
Recipientele care sunt prevzute cu garnituri de cauciuc nu se folosesc pentru c CO 2 umfl, dizolv
sau rupe cauciucul la depresurizare.
ntr-un sistem mai mic (pn la aproximativ 10 ml/min) poate fi utilizat un restrictor simplu,
acesta poate fi un tub capilar sau o supap cu ac care poate fi ajustat pentru a men ine presiunea la
debite diferite. ntr-un sistem mai mare este folosit un regulator de contrapresiune, acesta menine
presiunea n amonte prin intermediul unui arc, aer comprimat sau supap condus electric. Oricare
metod este folosit, nclzirea trebuie s fie furnizat n calitatea de extindere adiabatic a
rezultatelor de CO2 din rcire. Acest lucru ridic o problem dac apa sau alte materiale extrase din
probe sunt prezente n eantioane, n limitator sau supap deoarece pot nghea i pot provoca
blocaje.
Solventul supercritic este trecut ntr-un vas la o presiune mai mic dect recipientele de
extracie. Densitatea i puterea de dizolvare ale fluidelor supercritice variaz puternic cu presiune i
solubilitatea din CO2. Este posibil s se fracioneze materialul dizolvat folosind o serie de recipiente
pentru reducerea presiunii. Pentru extracia fluidelor supercritice analitice, presiunea este de obicei
sczut i CO2 gazos este barbotat prin solvent pentru a capta componenii principali.
Fluidul este rcit nainte de pompare pentru a menine condiiile lichidului i apoi nclzit dup
presurizare. Pe msur ce fluidul este expandat n separator, recipientul trebuie s fie nclzit pentru
a evita rcirea excesiv. Pentru extraciile de mici dimensiuni (figura 4.4) cum ar fi cele de analiz,
este suficient de a prenclzi fluidul pe toat lungimea tubului ntr-un cuptor care conine celula de
extracie. Limitatorul este nclzit electric. Pentru sistemele mai mari, energia necesar n timpul
fiecrei etape a procesului poate fi calculat utiliznd proprietile termodinamice ale fluidului
supercritic [15].
Exist dou etape eseniale pentru SFE:
transportul de la particulele solide la suprafa (transportul se poate face prin difuzie);
dizolvarea n fluidul supercritic.

Figura 4.4. Schema de aparat SFE

38

Amestecul optim va depinde de scopul extraciei. Analiza extraciei determin coninutul

antioxidant dintr-un polimer, apoi factorii eseniali ale extracie complete n cel mai scurt timp. Cu
toate acestea, pentru producerea unui extras al uleiului esenial de la o plant, cantitatea de CO 2
folosit va avea un cost semnificativ, dar nu obligatoriu, un randament de 70-80% poate fi suficient
pentru a asigura rentabilitatea economic. ntr-un alt caz, selectivitatea poate fi mai important i o
rata de extracie va fi mai sczut.
n general, presiunea mai mare va crete solubilitatea. Temperatura sczut duce la punctul
critic, creterea temperaturii determin o scdere a densitii, n consecin a puterii de dizolvare. La
presiunea aflat mult peste punctul critic, solubilitatea poate crete odat cu temperatura. Adugarea
de niveluri sczute de modificatori (uneori numite entrainers), cum ar fi metanolul i etanolul, poate
de asemenea s creasc solubilitatea, n special a compuilor polari [16].
Debitul de CO2 trebuie s fie msurat n termen de flux de mas dect n volum, deoarece
densitatea CO2 se schimb n raport cu temperatura, naintea introducerii lichidului la capetele de
pomp i n timpul compresie. Debitmetrele Coriolis sunt cele mai utilizate pentru a realiza astfel de
fluxuri. Pentru a maximiza rata de extragere, debitul trebuie s fie suficient de mare pentru ca
extragerea s fie complet limitat difuziunii. Pentru a minimiza cantitatea de solvent utilizat,
extracia ar trebui s fie complet limitat solubilitii. Prin urmare, se determin n funcie de diferii
factorii: constante de timp, costurile solvenilor, costurile de capital ale pompelor, radiatoarelor i
schimbtoarelor de cldur. Rata optim de curgere trebuie s se situeze n regiunea n care
solubilitatea i difuziunea sunt factori semnificativi.
Avantajele exraciei cu fluide supercritice sunt urmtoarele:
mbuntirea mediului i contaminarea redus a produsului;
SFE este o alternativ pentru extracia lichid-lichid utiliznd solveni, cum ar fi hexanul sau
diclormetanul. Vor exista unii solveni reziduali lsai n extract i matrice, va mai exista i un nivel
de contaminare a mediului din utilizarea lor. n schimb, dioxidul de carbon este u or de ndeprtat,
pur i simplu, prin reducerea presiunii, lsnd aproape nici o urm i este inofensiv asupra mediului.
Utilizarea de SFE cu CO2 este aprobat de ctre Soil Association pentru produsele ecologice. CO 2
este utilizat n mare msur n procesele industriale, iar utilizarea sa n SFE nu produce emisii
suplimentare.
Puterea unui fluid supercritic poate varia prin schimbarea presiunii i ntr-o mic msur prin
temperatur. De exemplu, uleiurile volatile pot fi extrase dintr-o plant cu presiuni sczute (100
bari), n timp ce extracia cu lichid ar elimina lipidele. Lipidele pot fi ndeprtate folosind CO 2 pur la
presiune mai mare, iar apoi fosfolipide pot fi ndeprtate prin adugarea de etanol n solvent.
Viteza este un proces rapid i finalizat de la 10 pn la 60 minute. Difuziunile sunt mult mai
rapide n fluide supercritice dect n lichide, de aceea extraciile se realizeaz mai repede. De
asemenea, nu exist nici o tensiune superficial i vscozitile sunt mult mai mici dect n lichide,
astfel nct solventul poate ptrunde prin porii mici din matrice, acetia fiind inaccesibili lichidelor.
Un fluid supercritic poate fi separat de analit prin presiune simpl de eliberare. Fluide
supercritice sunt ieftine, inert i netoxice, astfel ele sunt uor eliminate [14].
4.5 Hidrodistilarea (HD)
Diferite metode care pot fi utilizate pentru extracia compuilor volatili din plante includ tehnici,
cum ar fi spaiul superior de eantionare static-headspace (SHS), de eliminare i capturare (P & T)
i microextracie n faz solid (SPME). Monoterpenele pot fi sensibile la modificrile chimice sub
distilarea cu abur i chiar extracia cu solvent convenional n timpul ndeprtrii solventului prin
distilare. Pe partea superioar static (SHS) i tehnicile de eliminare i capturare (P & T) sunt mai
simple, mai rapide i fr solvent. SHS a fost aplicat pe scar larg pentru analiza compu ilor
39

volatili deoarece faza de extracie (aer, heliu sau azot) este compatibil cu cromatografia de gaze. Cu
toate acestea SHS are unele limitri, cum ar fi sensibilitatea sczut i risc de contaminare
ncruciat.
O alternativ la eantionarea n spaiul superior tradiional este SPME care este o tehnic rapid,
simpl, ieftin i fr solveni, foarte stabil pentru analiza compuilor volatili, semivolatili n
diferite tipuri de probe. SPME a fost utilizat cu succes pentru analiza calitativ a diferitelor produse
alimentare i arome. Eficiena extraciei i reproductibilitatea prin tehnica SPME sunt afectate prin
modificarea matricei, extraciei, timpului de desorbie, temperaturii de incubare, volumului de probe
i alte tratamente la care este supus prob.
SPME permite multe posibiliti n analiza aromei. Aceasta a fost folosit cu succes pentru
analiza chimic a diferitelor materiale vegetale, cum ar fi: condimente, fructe, flori, cafea, poluani
din probe de mediu i produse farmaceutice [17].
Melissa officinalis L. este cultivat ca o plant medicinal. Uleiul volatil deine poziia nalt
ntre o diversitate de plante aromatice cultivate n ntreaga lume. Acesta a fost folosit n Grecia i
Roma Antic ca un tratament topic pentru rni. n Evul Mediu a fost folosit ca un sedativ i n
secolul al XVII-lea s-a pretins c ar putea mbunti starea de spirit i de a stimula gndirea
limpede. Uleiul esenial este listat n Farmacopeea European pentru efectele: carminativ, digestiv,
stimulatoar, calmant, antiseptic, antimicrobian, antioxidant, inhib activitatea tiroidei i activiti
sudorifice.
Roinia a fost gsit ca prezentnd activitate de receptor de acetilcolin CNS, cu att cu ct
proprietile nicotinice i muscarinice sunt prezente. Testarea in vitro a identificat anti-HIV, o
activitate mpotriva HIV-1, mpotriva activiti antitumoral i transcriptazei inverse. Pe plan extern,
este folosit pentru a trata herpesul, rni, gut, mucturi de insecte i ca insecticid [18].
Mai mult dect att, frunzele sunt utilizate n medicina tradiional pentru prepararea ceaiurilor
cu efecte calmante i spasmolitice nervoase. n practic uleiul de melis este adesea prescris n
asociere cu alte medicamente, fcnd astfel dificil determinarea eficacitii acestei plante
individual.
Investigaia fitochimic a plantei a relevat prezena de flavonoide ( quercetina, ramnocitrina,
apigenin-7-glucozida, kempferol, luteolina, luteolin-7-glucozida, ramnazina), terpene i acizi
triterpenici (ursolic i acid oleanolic), acid cafeic i acidul rozmarinic, mono- i sesquiterpene,
substane fenolice i taninuri.
A fost raport compoziia uleiului esenial din Melissa officinalis (frunze) folosind tehnica HDSPME i rezultatele analizei chimice obinute au fost comparate cu cele obinute prin hidrodistilarea
convenional [19].
A fost utilizat Melissa officinalis colectat de la Banca de gene de III M. Srinagar, unde este
cultivat ca o plant medicinal. Dup identificarea corect, a fost depus n Herbarul de la Institutul
Indian de Medicina Integrativ, Srinagar. Frunze proaspete de Melissa officinalis au fost supuse timp
de 3 ore hidrodistilrii, utiliznd un aparat de tip Clevenger modificat.
Frunzele proaspete ale plantei au fost supuse chemoprofilingului folosind spaiul de nceput n
faza solid microextracie (HD-SPME) cuplat cu gaz-cromatograf i mas-spectrometru (GC-MS).
Proba (2 g) a fost plasat ntr-un flacon de 30 ml, apoi a fost sigilat cu un vrf care con ine un sept
cptuit cu teflon cu dop filetat. Fibra a fost apoi retras i introdus n injectorul cromatografului de
gaze cuplat cu spectrometrul de mas. Desorbie a fost efectuat timp de 5 min cu injectorul la
250C i n modul nedivizat.
Rezultatele analizei chimice obinute cu ajutorul hidrodistilrii i HS-SPME sunt prezentate n
tabelul 4.3.

40

Tabelul 4.3. Compoziia pe clase a compuilor din HS-SPME (SA) i hidrodistilare (HD) a
uleiului esenial din frunzele Melissei officinalis
Nr.
Clase ale compuilor
Zona de vrf % Zona de vrf %
Crt.
(HD-SPME)
(HD)
1
Alcooli
2,0
1,1
2
Cetone
0,4
3,7
3
Monoterpene hidrocarburi
3,3
5,8
4
Monoterpene oxigenate
78,5
57,8
5
Sesquiterpene hidrocarburi
14,9
29,7
6
Total %
99,1
98,1
Analiza HD-SPME a condus la identificarea a 22 de componeni volatili reprezentnd 99,1% din
totalul componenilor identificai. Compoziia chimic a Melissei officinalis (frunze) este prezentat
de: monoterpene (78,5%) i sesquiterpene (14,9%). Componentele majore identificate n extractul
HS-SPME au fost: citronelal (31,1%), citronelool (18,3%), -cariofilen (12,0%), (E) -citral (11,9%),
(Z) -citral (9,6%) , geraniol (3,6%), (Z) --ocimene (3,1%) i l-octen-3-ol (2,0%) (fig.4.5.). Aburul
uleiului esenial distilat a condus la identificarea a 24 constitueni volatili care reprezint 98,1% din
totalul compuilor identificai. Compoziia chimic a uleiului esenial format n principal din
monoterpene (57,8%) i sesquiterpene (29,7%). Principalele componente ale uleiului esenial sunt:
(Z)-citral (19,6%), -cariofilen (13,2%), (E)-citral (11,2%), citronelal (10,2%), germacrene-D
(8,3%), -3-carene (5,0%), 6-metil-5-hepten-2-on (3,7%) i acetat de citronelil (3,7%).

Figura 4.5. Distribuia pe clase a compuilor din HS-SPME (SA) i hidrodistilare

(HD) a uleiului esenial din frunzele Melissei officinalis

41

Hidrodistilarea este cea mai popular i utilizat pe scar larg, dar costurile metodei pentru
extragerea uleiurilor eseniale are anumite dezavantaje serioase. Uleiurile eseniale cu ap au o mare
solubilitate i sensibilitate la temperaturi. Unele dintre elementele constitutive fragile i
termosensibile se pot descompune i rezult resturi din cauza nclzirii. Exist de asemenea un risc
de a le obine carbonizate i astfel determinnd un miros nedorit (not de ars) al uleiul esen ial.
Aciunea prelungit a apei fierbinte poate cauza hidroliza unor entiti chimice importante ale
uleiului esenial. Una dintre principalele dezavantaje ale hidrodistilrii este c metoda necesit mult
timp i cantitate mare de material vegetal.
Deoarece uleiul esenial este bogat n monoterpene, care sunt vulnerabile la schimbrile chimice,
la condiiile de distilare cu abur sau chiar extracie cu solvent, poate pierde din compu i volatili n
timpul ndeprtrii solventului. Exist dovezi directe de pierdere a unor constitueni chimici majori
i farmacologici minori din uleiul esenial obinut prin hidrodistilare n comparaie cu cei ob inu i cu
ajutorul HD-SPME. La analiza comparativ a Melissei officinalis (frunze), uleiul esenial obinut
prin HD-SPME i hidrodistilarea, se observ c cele dou chemoprofile arat diferene calitative,
precum i diferene cantitative. Spre deosebire de abur, distilarea probei de melis la HD-SPME a
fost bogat n citronelool (18,3%) i prezint n plus fa de elementele constitutive minore: oxid
limonen, trans-trandafir-oxid, -bergamoten i izoceton. Pe de alt parte, cum ar fi componentele
-3-carene, 3-octanol, cis-verbenol, mirtenol, acetat geranil, -cadinene i -copaene au fost gsite
n aburul distilarii probei, regsindu-se n clasele de compui din tabelul 4.3. [20].
Rapoartele anterioare arat c uleiul esenial din roini este format din compui importani, cum
ar fi E-cariofilen i oxid-cariofilen n plus fa de elementele constitutive majore, cum ar fi
citronelal, neral i geranial. Literatura arat c uleiul esenial de Melissa officinalis subsp.
Officinalis conine cantiti semnificative de citral sau citronelal, n timp ce Melissa officinalis
subps. Altissima conine numai urme. Au fost identificate principalele componente ale uleiurilor din
frunzele de cultur a Melissei officinalis subsp. Altissima de origine greac, cum ar fi -cariofilena
(7,27-12,66%), germacren-D (34,79-51,50%), sabiena (0,91-14,68%) i -pinen (0,52-8,03%).
Aceti compui au fost de asemenea detectai ca fiind constituenii principali din studiile prezente,
cu excepia sabinenului.
Raportul privind compoziia chimic a uleiului esenial de Melissa officinalis a fost determinat
utiliznd dou tehnici diferite i anume, hidrodistilarea i HD-SPME. Din cele dou tehnici
(hidrodistilarea i HD-SPME) se concluzioneaz c componentele volatile ale Melissei officinalis
arat diferenele att calitativ ct i cantitative. Pe de o parte hidrodistilare a condus la identificarea a
24 de constitueni volatili i pe de alt parte s-au identificat doar 22 constitueni folosind tehnica
HD-SPME. Variaia compoziiei chimice poate fi atribuit formrii de urme n timpul hidrodistilrii.
Raportul profilului chimic din uleiul esenial de Melissa officinalis ofer informaii suplimentare
despre aprofundarea chimic divers n compoziia chimic a uleiului esenial. De asemenea, HDSPME este o metod rapid, simpl i ecologic pentru ecranizarea uleiului esenial din plantele
aromatice. Acest proces nou poate produce ulei esenial sub form concentrat, liber de orice
reziduu al solvenilor contaminani sau urme [21].

42

4.6 Extracia cu microunde (SFME)

Extracia cu microunde fr solveni (SFME) a fost propus ca ,,metod verde pentru
extragerea uleiului esenial din plantele aromatice, care sunt folosite pe scar larg n diferite
industrii. Aceast tehnic este o combinaie de nclzire cu microunde i distilare uscat realizat la
presiune atmosferic, fr a adauga ap sau solvent. Izolarea i concentraia de compui volatili se
efectueaz ntr-un singur mecanism.
Mecanismul extraciei se bazeaz pe capacitatea uleiurilor volatile de a se dizolva n ap. De
fapt, solubilizarea este o etap limitat i solubilitatea devine parametrul esenial n procesul de
extracie selectiv. Uleiurile eseniale conin compui organici care absorb puternic energia
microundelor [22].
Extracia cu microunde fr solveni a fost dezvoltat n 2004, fiind bazat pe un principiu
relativ simplu, acest procedeu const n distilarea uscat asistat cu microunde a unei matrice de
plant proaspt, fr adugare de ap sau orice solvent organic. nclzirea selectiv a coninutului
vegetal determin umflarea esuturilor i glandele secretoare ale materialului vegetal care se sparg.
Acest proces a fost aplicat mai multor tipuri de plante proaspete i uscate, cum ar fi condimentele
(chimen indian, chimen i anason stelat), ierburi aromatice (busuioc, ment i roini), citrice [23].
Solventul liber al extraciei cu microunde i hidrodistilarii furnizeaz extracte cu compoziii
chimice care sunt similare calitativ. Cu toate acestea, cantitile substaniale mai mari de compu i
oxigenai i cantitile mai mici de monoterpene sunt prezente n extractul SFME. Monoterpenele
sunt mai puin valoroase dect compuii oxigenai (terpenoide) si acetia aduc numai o contribuie
minor la parfumul uleiului esenial. Scurtarea timpului de extracie i cantitatea de ap sczut n
metoda SFME reduce deteriorarea componenilor (hidroliz, esterificare sau oxidare) i formarea
produilor secundari [24].
Extracia este realizat ntr-un cuptor cu microunde. Acesta este un reactor cu microunde
multimod 2,45 GHz cu puterea maxim de 900W livrat treptat n 10W. Pe parcursul experimentului
timpul, temperatura, presiunea i puterea sunt controlate cu ajutorul unui soft.
Operaia SFME este realizat la presiune atmosferic, materialul vegetal proaspt este nclzit
cu ajutorul unei puteri fixe de 150W fr s fie adugat solvent sau ap. Uleiul esenial i apa
aromatic au fost pur i simplu separate prin decantare. Uleiul esenial este colectat, uscat cu sulfat
de sodiu anhidru i se depoziteaz la 4C pn la analiza ulterioar.
Microundele reprezint radiaia electromagnetic n domeniul de frecven situat ntre 0,3 i 300
GHz (corespunztoare lungimiilor de und ntre 0,1 i 100 cm -1). Acestea se situeaz ntre
frecvenele radio i infrarou. Microundele pot fi utilizate pentru nclzirea materialelor, principiu
bazat pe absorbia radiaiei i disiparea cldurii dezvoltate n interiorul materialului. Iniial, acest
procedeu bazat pe microunde a fost utilizat pentru dezagregarea probelor solide cu scopul
ndeprtrii constituenilor organici [25].
Aplicarea microundelor n procesele de separare i de extracie au demonstrat eficiena lor n
obinerea uleiurilor eseniale. Progresele n extracia cu microunde asistat au dus la dezvoltarea mai
multor tehnici, cum ar fi distilare cu microunde cu aer comprimat, cuptor cu microunde cu
hidrodistilare n vid, cuptor cu microunde pentru hidrodistilare, extracie cu microunde fr solven i,
cuptor cu microunde de distilare cu abur accelerat, cuptor cu microunde prin hidrodifuzie i
gravitate [26].
Metoda propus, extracia cu microunde fr solveni, este o combinaie ndrznea de nclzire
cu microunde i distilare uscat, aceasta conducnd la uleiuri eseniale mai valoroase. n plus,
metoda SFME ofer avantaje importante fa de metodele tradiionale, i anume: timpul de extrac ie
mai scurt (30 min pentru extracia cu microunde, iar 3 h pentru hidrodistilare), economisirea
substanial de energie, precum i o sarcin de mediu redus (mai puin CO 2 eliberat n atmosfer).
Toate aceste avantaje fac SFME o alternativ bun pentru extracia uleiului esenial din plantele
aromatice [27].
43

n tabelul 4.4. avem o comparare ntre uleiul esenial de roini obinut de la extracia cu
microunde i de la hidrodistilare. Se observ c extracia cu microunde este mult mai eficient dect
hidrodistilarea.
Tabel 4.4. Extracia de uleiuri eseniale din roini: microunde vs. Hidrodistilare [28]
Mas verde (grame)
Timp (minute)
Ulei esenial (%)

Microunde
500
15
0,330,09%

Hidrodistilare
500
180
0,340,07%

4.7 HPLC
HPLC este o metod de a evalua coerena calitativ a plantei medicinale comerciale. O metod
simpl HPLC cu detector UV-VIS este dezvoltat pentru analiza de amprent digital i
cuantificarea unor constitueni farmacologici activi (compui de marcare).
Melissa officinalis L. a fost aleas pentru acest studiu, deoarece acesta este utilizat pe scar
larg ca un remediu aromat, culinar i medicinal. Descrierea celor 50 peak-uri au fost gsite n
fiecare cromatogram a unui extract de ulei esenial, inclusiv 12 peak-uri caracteristice satisfctor.
Valorile de similitudine i rezultatele analizei componenilor principali au dezvluit c toate probele
au fost puternic corelate cu amprenta digital de referin i poate fi clasificat cu precizie n raport
cu consistena lor calitativ. Apoi, a fost realizat o cuantificare a acizilor fenolici selectai din
probele studiate. Rezultatele au artat c nivelurile de acizi fenolici, adic protocatehic, clorogenic,
cafeic i rozmarinic au fost urmtoarele (mg/g de greutate uscat): 0,001-0,067; 0,010-0,333; 0,0070,553; 0,047 0,705; 0,006-1,589 i 0,158-48,608. Analiza statistic a indicat c acidul rozmarinic
se gsete n Melissa officinalis la cel mai nalt nivel, n timp ce acidul protocatehic are cel mai mic
nivel. O inspecie detaliat a acestor date a artat c amprentele digitale de referin cromatografic
combinat cu cuantificarea constituenilor activi farmacologici ale plantei pot fi folosii ca o
strategie eficient pentru monitorizarea calitii uleiului volatil de roini [29].
Melissa officinalis are o compoziie chimic complex. Acesta conine acizi hidroxicinamici
(pn la 6% acid rozmarinic, acizi cafeic) i pn la 0,37% dintr-un ulei esenial compus din mai
mult de 40% din monoterpene i mai mult de 35% din sesquiterpene. Printre cele mai importante
terpenoidele exist citral, citronelal, geraniol, nerol, linalool i -cariofilen. Exist i ali
constitueni, de exemplu flavonoidele glicozide: luteolina, quercetina, apigenina i kamferol, precum
i taninuri i triterpene acide (ursulic i oleanolic).
Unele proprieti farmacologice au fost atribuite componenilor principali. Uleiul esenial este
considerat ca fi un principiu terapeutic responsabil pentru cele mai multe dintre activit ile
biologice: spasmolitic, antimicrobian, antitumorale i antioxidant. Probele de plante provenite de la
speciile Melissa officinalis L. sunt de asemenea folosite n medicina tradiional pentru tratarea
diferitelor afeciuni: cefalee, flatulen, colici, indigestie, anemie, nervozitate, vertij, stare de ru,
astm, bronit, sincop, amenoree, insuficien cardiac, insomnie, epilepsie, depresie, psihoz,
isterie, ulcere i rni. Prin urmare, extractele sale apoase i alcoolice sunt folosite n mod tradiional
pentru aciunea spasmolitic, sedativ nervoas, antiviral i activitte antioxidant.
Acizii fenolici sunt metabolii secundari, care creeaz un grup mare de compui naturali, au un
spectru larg de activiti biologice, acetia sunt constitueni bioactivi importanti ai plantei. Printre
acestea acizii rozmarinic, cafeic, clorogenic i protocatehic sunt deosebii de interesani. O analiz a
literaturii arta c acidul rozmarinic prezint proprieti antiinflamatoare, antibacteriene i activiti
44

antivirale, reduce dermatita i previne boala Alzheimer. Acidul procatehic are antioxidani puternici,
antimicrobini, antiinflamatori, antitrombotici i activiti anticancer. Acidul clorogenic prezint
proprieti antiinflamatorii, antibacteriene, i antiobezitate, n timp ce acidul cafeic are proprieti
antiinflamatorii i antioxidante [30].
Evaluarea chimic a medicamentelor pe baz de plante de calitate ar trebui s conin dou
aspecte:
primul este identificarea i cuantificarea unuia sau mai muli constitueni care au avut loc n
cantitile ridicate;
cellalt este dezvoltarea amprentei digitale chimice, care a fost introdus i acceptat de ctre
Organizaia Mondial a Sntii i de alte autoriti ca o strategie de evaluare a calit ii
medicamentelor pe baz de plante.
Dintre metodele de separare, care au fost recunoscute ca mijloace rapide i fiabile pentru
identificarea i cuantificarea elementelor constitutive de medicamente pe baz de plante, HPLC este
cea mai popular metod i este utilizat pe scar larg n analiza amprento-digital.
Pn n prezent, din datele coerente lipsete despre evaluarea calitii medicamentelor probele de
plante prime de Melissa officinalis L. obinute din diferite produse fabricate n Polonia. Prin urmare,
acest studiu este dezvoltat pe baza amprentei HPLC pentru cuantificarea compuilor fenolici
selectai i pentru a evalua coerena ntre calitate-produs [31].
Nousprezece probe de Melissa officinalis L. (prezentate n tabelul 4.4.) au fost obinute de la
diferite produse fabricate n Polonia. Probele au fost luate de pe teren, se omogenizeaz la 20C
timp 20 de secunde ntr-o zni rcit cu ap. nainte de analiz, probele au fost pstrate n
recipiente de plastic nchise la culoare. Compuii de referin: acizii procatehic, clorogenic, cafeic i
rozmarinic, au fost achiziionai de la ChromaDex (Santa Ana, CA, USA). Acidul trifluoroacetic
(TFA) a fost obinut de la Sigma-Aldrich (Munchen, Germania). Acetonitril i metanolul au fost
etichetai ca reactivi de grad HPLC cu gradient, au fost adui de la Poch (Gliwice, Polan). Apa
redistilat a fost preparat prin tripla distilare a apei ntr-un sistem Destamat Bi018 (Heraeus
Quarz-Glas, Hanau, Germania).
Analizele HPLC au fost realizate cu ajutorul unui dispozitiv Merck-Hitachi LaChrome echipat
cu un detector UV-VIS 7420, autosampler i termostat L-7360. Date cromatografice au fost colectate
cu ajutorul unui D-700 HPLC System Manager, versiunea 3.1. Faza mobil este constituit din
0,05% TFA n soluii de metanol (A) i n ap (B). Un program de gradient a fost ales astfel: 0-25
min, gradient liniar 15-75% A; 25-30 min, izocratic 75% A; i 30-35 min, gradient linear 75-15% A.
Viteza de curgere a fazei mobile a fost de 1,0 ml/min, absorbana a fost monitorizat la 254 nm, iar
volumul de prob injectat i soluia standard au fost de 10 L.

45

Tabelul 4.4. Caracterizarea general a Melissa officinalis L. probe si valorile lor de similitudine
Numr

Apariia probei

Productor

Similitudine

Parte din
plant
Planta ntreag

verde, zdrobit

Natur-Vit/Pinczow

0,9765

2
3
4
5
6
7

Frunz
Frunz
Frunz
Planta nteag
Frunz
Frunz

maro, zdrobit
brun-verzui, zdrobit
verde, zdrobit
maro, zdrobit
verde, zdrobit
verde nchis,
zdrobit

Herbapol/Pruszkow
Kawon/Gostyn
Kawon/Gostyn
Herbapol/Lublin
Herbapol/Lublin
Herbapol/krakow

0,8939
0,9823
0,9286
0,9937
0,9701
0,9872

Frunz

Herbapol/krakow

0,9985

9
10

Frunz
Frunz

Herbapol/krakow
Dary Natury/Koryciny

0,9464
0,9659

11
12
13
14
15
16

Frunz
Frunz
Frunz
Planta ntreag
Planta ntreag
Frunz

Dary Natury/Koryciny
Flos/Mokrsko
Flos/Mokrsko
Bastek/Karwie
Bastek/Karwie
Elanda/Rozprza

0,9631
0,9634
0,9332
0,9364
0,9631
0,9803

17

Frunz

PhytoPharm/Kleka

0,9808

18

Frunz
Frunz

Agmatr Gosp.
Zielarskie/Unislaw
Labofarm/Starogard
Gdansk

0,9293

19

verde nchis,
zdrobit
verde, zdrobit
verde nchis,
zdrobit
verde, zdrobit
verde, zdrobit
gri-maro, zdrobit
gri-maro, zdrobit
brun-verzui, zdrobit
verde nchis,
zdrobit
verde, frunze
ntregi
verde, frunze
ntregi
verde, frunze
ntregi

0,9697

O prob de pulbere (0,5 g) obinut din Melissa officinalis L. a fost cntrit ntr-un dispozitiv
Sonic 3 cu 4 ml dintr-un amestec de metanol n ap (80:20 v/v) pentru precizie se las 30 min la
temperatura ambiant. Suspensia a fost centrifugat ntr-o centrifug EBA-20S timp de 10 minute la
20000 rpm i supernatantul a fost transferat ntr-un balon cotat de 25 ml. Aceast procedur a fost
repetat de dou ori, extractele obinute au fost combinate i diluate pn la 25 ml cu amestec de
metanol n ap. Analiza HPLC a fost continuat prin filtrarea extractului printr-un filtru cu
membran de 0,2 pm din nailon.
Toate calculele statistice au fost realizate cu ajutorul Matlab 9.1 i Statistica 7.1 software.
Amprentele cromatografice au fost dezvoltate pentru 19 probe de Melissa officinalis obinute n
peste 12 producii poloneze. Descrierea a 50 peak-uri au fost gsite n fiecare cromatogram a
extractului din probe, inclusiv 12 peak-uri caracteristice satisfctor. O amprent cromatografic de
referin a fost calculat prin software Matlab 9.1 ca urmare a analizei tuturor celor 19 probe.
Coeficienii de corelaie ntre diferite modele de cromatografie a Melissei officinalis i referina
amprentei cromatografice au fost calculate. Pentru a genera aria proiecie care ofer o determinare
46

vizual a similitudinii ntre probele amprentei digitale i analiza componenilor principali (PCA) au
fost efectuate cu ajutorul software Statistica 7.1.
Condiiile pentru pretratarea eantioanelor au fost mai nti optimizate prin investigarea timpului
de solvent (metanol, etanol), concentraia solventului n ap (40, 60, 80 i 100% v/v) i timpul de
extracie (30, 60, 90 i 120 min). Efectul compoziiei solventului asupra eficienei extraciei este
prezentat n figura 4.6. Printre compoziiile de solvent, un amestec de metanol cu ap (80:20 v/v), a
dovedit a fi cele mai eficient pentru extragerea acizilor fenolici analizai din probele de Melissa
officinalis [29].
Un studiu privind influena timpului de extracie asupra eficienei extraciei a artat c to i
compuii de marcare (acizi fenolici) au fost extrai cu cel mai bun randament n termen de 30 min.
Durata peste 30 min nu a crescut n mod semnificativ cantitatea de acizi fenolici din extrac ii (figura
4.6.).

Figura 4.6. Influena compoziiei solvenilor asupra eficienei extraciei de acizi fenolici
Optimizarea condiiilor de separare pentru analiza HPLC a fost realizat inclusiv pentru
compoziia fazei mobile, lungimea de und a temperaturii pe coloan. Investigarea efectului de faz
mobil, la separarea cromatografic a acizilor fenolici a artat c amestecul binar de ap i metanol
sau acetonitril nu a influenat semnificativ procesul de separare a constituenilor din prob. Astfel
lund n considerare toxicitatea ridicat i costul acetonitril, a fost ales un amestec de metanol cu
ap. Mai mult, adugarea de TFA la o concentraie de 0,05% (v/v) a dus la mbuntirea formei de
peak. Separare satisfctoare a fost atins la 35 de min prin eluia gradientului folosind condi iile
HPLC.
Lungimile de und detectate 280, 254 i 320 de nm au fost selectate pentru a compara numrul
peak-uri i separarea lor. Cromatogramele HPLC monitorizate la 254 nm au relevat mai multe peakuri dect cele la 280 i 320 nm. Prin urmare, lungimea de und selectat pentru separarea ulterioar
i cuantificarea acizilor fenolici studiai au fost de 254 nm. Efectul temperaturilor de coloane: 200C,
250C i 300C, procesul de separare au fost de asemenea testate. S-a constatat c la 30C peak-urile
din cromatogram au avut rezoluii bune. Din aceste motive temperatura coloanei de 30C a fost
aleas pentru analiza de amprent.

47

Figura 4.7. Amprenta cromatografic de referin pentru extractele de uleiul esenial.

Timpii de retenie pentru acizii fenolici au fost dup cum urmeaz: 10,23 (acidul clorogenic);
11,77 (acidul cafeic); 5,44 (acidul protocatehic, vrf nr. 2) i 18,50 (acid rozmarinic, vrf nr. 8)
Metoda HPLC optimizat cu detecie UV-VIS a fost folosit pentru separarea, identificarea i
cuantificarea a patru acizi fenolici coninui de planta medicinala studiat. Figura 4.7. reprezint o
amprent cromatografic tipic pentru HPLC, ea a fost realizat pe baza rezultatelor obinute din
cele 19 probe de Melissa officinalis. S-a artat c au existat aproximativ 50 de peak-uri n
cromatograma extractului de roini, iar majoritatea acestor peak-uri au fost soluionate n mod
satisfctor. Peak-ul 8 a fost identificat ca fiind cauza acidul rozmarinic, care este una din cele mai
importante componente active ale roiniei cu un coninut constant ridicat. Acest peak a fost ales
pentru a fi calculat timpul de retenie relativ (RRT) i peak-ul de retenie relativ (RPA), cele 12
peak-uri caracteristice apar n toate extractele din uleiul volatil. Valorile mediilor RRT si RPA pentru
cele 19 probe de Melissa officinalis sunt prezentate n tabelul 4.5.
Tabelul 4.5. Timpii de retenie relativi (RRT) i zonele de peak-uric relative (RPA) pentru
12 peak-uri caracteristice aprue n cromatogramele probelor la plantele de analizat [32]
Nr. peak
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12

RRT CV% RPA CV%

0,794 1,05 0,148 22,27
0,871 0,08 0,107 21,86
0,883 0,90 0,091 0,26
0,894 1,13 0,103 23,12
0,932 0,73 0,117 38,46
0.962 0,28 0,101 19,52
1,079 0,16 0,270 22,19
1,118 0,17 0,107 59,30
1,152 1,09 0,052 37,16
1,206 0,16 0,065 25,77
1,224 0,96 0,257 3,03
1,486 1,12 0,030 51,13

48

5.Proprieti oxidative
nregistrrile privind uleiul esenial de roini dateaz de peste 2000 de ani. Medicamentul bazat
pe uleiul esenial utilizat de-a lungul acestei epoci, este recomandat de Paracelsus (1493-1541), are
la baz principiul ,,toate durerile ar trebui s porneasc de la o stare dezordonat a sistemului
nervos.
Componentele roiniei, cele mai utilizate sunt frunzele uscate care de multe ori prezint flori la
vrfuri. Utilizrile tiinifice raportate sunt: antioxidant, sedativ, antiinflamator, hepatoprotector,
digestiv, anti-bacterian, antifungic, antiviral, antihistaminic, antikinetic, antilipidaemic, anxiolitic i
eficace n controlul luminii pentru cazurile uoare de Alzheimer [33].
Stresul oxidativ este asociat cu diferite boli, n special cele legate de sistemul nervos central,
cum ar fi boala Alzheimer. A fost investigat compoziia chimic i activitatea antioxidant a roiniei
i s-a observat c aceat plant prezint anumite beneficii.
Fraciunile i compuii izolai din plant ar trebui s fie luate n considerare n studiile viitoare
pentru a determina fezabilitatea lor ca potenial n medicina alternativ pentru diferite tratamente
[34].
Extractele i uleiurile eseniale ale plantelor medicinale sunt din ce n ce mai importante n
calitatea medicamentelor noi de ageni antimicrobieni i antivirali, deoarece virusul herpes simplex
(HSV) ar putea dezvolta rezistena la agenii antivirali folosii frecvent.
Uleiul esenial din Melissa officinalis a fost analizat fitochimic de GC-MS, principalele sale
structuri au fost identificate ca monoterpenele aldehide: citral a, citral b i citronelal. Efectul
antiviral al uleiului esenial de Melissa officinalis a fost examinat pe virul herpesului simplex.
Activitatea inhibitorie mpotriva virusului herpes simplex tip 1 (HSV-1) i virusul herpes simplex tip
2 (HSV-2) a fost testat in vitro pe celule de rinichi de maimu, utiliznd un test de reducere a
celulelor infectate. Formarea concentraiei inhibitoare 50% (IC50) de ulei esenial pentru celulele
virusului herpes simplex a fost determinat la diluii mari de 0,0004% pentru HSV-1 i 0,00008%
pentru HSV-2. La concentraii netoxic ale uleiului, celulele infectate au fost reduse semnificativ cu
98,8% pentru HSV-1 i 97,2% pentru HSV-2, concentraiile mai mari de ulei esenial suprim
aproape complet infecia viral. Pentru a determina modul de aciune antiviral al acestui ulei
esenial s-au efectuat teste de timp-pe-plus. Ambele virusuri herpetice au fost inhibate semnificativ
de pretratamentul cu ulei esenial nainte de infectarea celulelor. Aceste rezultate indic faptul c
uleiul de Melissa officinalis apr celule de virusul herpesului simplex, dar nu mai acioneaz dup
ptrunderea virusului n celule, astfel uleiul esenial este capabil de a exercita un efect antiviral
direct asupra virusului herpesului. Avnd n vedere natura lipofil a uleiului esenial i permite s
penetreze pielea i un indice de selectivitate mare, uleiul de Melissa officinalis ar putea fi potrivit
pentru tratamentul topic al infeciilor herpetice [35].
Pentru analiza modului de aciune antiviral, celulele i virusurile au fost incubate mpreun n
timpul adsorbiei, celulele au fost pretratate cu ulei esenial naintea infeciei virale, virusurile au
fost incubate cu uleiul esenial nainte de infectarea cu celule sau dup penetrarea virusului n
celulele gazd (figura 5.2.). Dup 3 zile de incubare monostraturile au fost fixate cu 10% formalin,
colorate cu 1% violet cristal i celulele au fost numrate. Uleiul esenial a fost utilizat n
concentraiile sale maxime netoxic. n toate experimentele celulele infectate de virusul netratat au
fost utilizate ca martor. Numrul de celule i virui tratai au fost comparai cu martorul pentru a
calcula gradul de reducere a celulelor, iar aciclovirul a fost utilizat ca martor pozitiv n toate testele.
Martori netratai conin ntotdeauna 1% etanol pentru a nu avea efect asupra celulelor sau viruilor.

49

Figura 5.1. Imaginile testului timp-pe-plus n timpul ciclului de replicare a virusului herpes
simplex. Celulele au fost pretratate cu uleiul esenial nainte de infectare cu virusul herpes simplex
(celule de pretratare); virusurile au fost pretratate nainte de infectare (virusul pretratament); uleiul
esenial a fost adugat n timpul perioadei de adsorbie (adsorbie); uleiul esenial a fost adugat
dup penetrarea virusurilor n celulele (replicare intracelular ).
Studiile fitochimice realizate cu Melissa officinalis au demonstrat apariia multor clase de
constitueni, inclusiv compuii polifenolici (acid rozmarinic, acidul cafeic i acidul
protocatechimic), uleiurile eseniale (citral), dar i monoterpene, sesquiterpene, flavonoide i
taninuri. n plus, acidul rozmarinic este componentul principal al Melissei officinalis n concentraii
ntre 2 i 5%. Aceast substan are activiti antivirale i antioxidante, acidul rozmarinic protejeaz
celulele mpotriva neurotoxicitii provocate de -amiloid peptid [36].
Lund n considerare activitile biologice ale roinei, este surprinztor faptul c niciun studiu
farmacologic nu s-a efectuat cu privire la posibilele efecte antinociceptive ale extractului pn acum.
Au fost realizate cteva studii pentru aciunea antinociceptiv a extractului n modelele chimice ale
nocicepiei la oareci. Au fost fcute ncercri de a investiga n continuare cteva dintre posibilele
mecanisme care stau la baza aciunii antinociceptive a extractului. A fost luat n vedere posibilul
efect antinociceptiv a acidului rozmarinic prezent n aceast plant.
Experimente au fost efectuate folosind oareci Swiss (25-35 g) de ambele sexe, adpostii la 22
2C n 12 de ore ciclu lumin/ntuneric (lumina aprins la 6:00), cu acces la hran i ap la
discreie. Animale (oareci masculi i femele distribuite omogen ntre grupuri) au fost aclimatiza i n
laborator timp de cel puin 1 or nainte de testare i s-au folosit doar o singur dat de-a lungul
experimentelor. Numrul de animale i intensitate a stimulilor nocivi utiliza i au fost minimul
necesar pentru a demonstra efectele consistente ale tratamentului medicamentos.
Au fost utilizate frunzele uscate de Melissa officinalis sub form de pulbere (1,9 kg),uleiul
esenial a fost extras prin macerare la temperatura camerei (24 3C) utiliznd etanol ca solvent, iar
eliminarea solventului s-a realizat sub vid la temperatur mai mic de 40C, extractul etanolic a fost
obinut (13% randament) i depozitat la 18C pn la utilizare.
Analiza HPLC a artat o faz mobil ce const ntr-un sistem de solvent gradient de solu ie
apoas de acid formic 0,1% (figura 5.2.A.) i acetonitril cu 0,1% acid formic (figura 5.2.B.).
Identificarea peak-urilor n raport cu acidul rozmarinic a fost stabilit prin compararea timpului de
retenie i spectre UV-VIS. O analiz cantitativ a fost realizat prin metoda standard extern,
reprezentarea grafic a curbele de calibrare n fazele mobile.

50

Figura 5.2. A) Cromatograma obinut pentru extractul etanolic de Melissa officinalis.

Timpul de retenie al acidului rozmarinic a fost de 18,59 min, = 330 nm. B) Cromatograma
obinut pentru soluia standard de acid rozmarinic (270 pg / ml). Timpul de retenie a fost 18,59
min, = 330 nm
Extractul din Melissa officinalis administrat pe cale oral a fost eficace n inhibarea fazelor
(neurogene i inflamatorii) a indus formol nocicepia.
Faza neurogen este determinat de activarea direct a terminalelor nociceptive, pe de alt parte
faza inflamatorie este mediat printr-o combinaie de mecanisme periferice i centrale.
Rezultatele au artat ca administrarea extractului produce o inhibare semnificativ i dependent
de doz a rspunsului nociceptiv cauzate de injectare intraplantar de glutamat n laba posterioar a
oarecelui. Acest rspuns nociceptiv cauzat de glutamat pare s implice situri periferice, spinale, iar
aciunea sa este mediat de receptorii NMDA, precum i prin eliberarea de oxid nitric sau
nitroderivai. Mai multe studii au demonstrat c receptorii stimulatori de aminoacizi sunt implicai n
transmiterea aferent primar nociceptiv n dezvoltarea i ntreinerea rspunsului dureros. Astfel,
suprimarea indus de glutamat nocicepiei prin tratarea extractului poate fi asociat cu interaciunea
sistemului de glutamatergic sau inhibarea produciei de oxid nitric.
51

Rezultatul confirm c oxidul L-nitric-arginin este implicat n antinocicepia cauzat de extract.

Aceast concluzie deriv din faptul c pretratamentul orecelui cu o doz de substratul de sintetaz a
oxidului L-nitric-arginin sau L-NOARG (un cunoscut inhibitor de oxid de azot) a produs un efect
semnificativ asupra durerii induse de glutamat.
Rezultatele studiului au demonstrat pentru prima dat c extractul de Melissa officinalis produce
aciune dependent de doz antinociceptiv n industria chimic pentru modele de nocicepie la
oareci (indus de acidul acetic sau de glutamat). Efectele extractului aveau legtur cu un handicap
de a rspunde la stimul, deoarece nu au modificat activitatea locomotorie a animalelor. Mecanismele
exacte prin care extractul exercit aciune asupra organismului sunt n prezent n curs de investigare.
Acidul rozmarinic coninut n frunzele Melissei officinalis contribuie la explicarea proprietilor
antinociceptive raportate pentru extract [37].
Activitatea antioxidant a melisei a fost evaluat pentru a nelege mecanismul proprietilor sale
farmacologice, precum i potenialele efecte genotoxice i citotoxice din leucocitele umane.
Rezultatele obinute sugereaz c melisa este o potenial surs de antioxidani naturali i ar
putea fi relevante pentru gestionarea stresului oxidativ.
Roinia exercit proprietile sale antioxidante, inhibarea degradrii dezoxiribozei i puterea
reductoare a extractului poate contribui n mod semnificativ fa de efectul antioxidant observat. n
parte, aceste efecte pot fi legate de coninutul de fenoli i de flavonoide. Melissa officinalis are o
relevan semnificativ n investigaia farmacologic pentru tratamentul tulburrilor
neurodegenerative cum ar fi bolile Parkinson i Alzheimer. Cu toate acestea, roinia ar putea fi o
potenial surs de antioxidani naturali. Mai mult dect att, extractul etanolic din frunze de roini
nu a fost nici genotoxic i nici citotoxic pentru leucocitele umane. Cu toate acestea, studiile in vitro,
trebuie s se efectueze pentru a avea certitudine cu privire la sigurana acestui extract din plant.
Au fost realizate i alte studii pe patru mostre diferite de melis: un eantion cultivat, un eantion
obinut prin cultur in vitro i dou probe comerciale disponibile n scule i sub form de granule
(figura 5.1.).
Nu exist foarte multe rapoarte tiinifice privind cultivarea plantelor in vitro, aceste studii pot fi
foarte utile pentru a explora posibilitile plantelor care au aplicaii industriale.
Scopul principal a fost de a compara nutraceuticele i potenialul antioxidant pentru plantele de
cultur, in vitro i comercial (disponibil n dou forme diferite: scule i granulat) pe cele patru
eantioane de roini.

Figura 5.1. (A) melisa crescut in vitro; mostre comerciale de melisa: scule (B) i
granulat (C)

52

Infuziile de roini in vitro au demonstrat un potenial antioxidant mai mare dect extractele n
etanol.
Probele comerciale prezint un nivel mai mic de acizi dect proba cultivat i proba in vitro.
n studiile realizare pe melisa cultivat in vitro au artat ca substanele nutritiv i nutraceutice
sunt mai aproape de eantioanele cultivate n grdin, dect de cele dou eantioane comerciale
(scule sau granulat). Aceasta a prezentat cele mai nalte niveluri de proteine i cenu i cea mai
mic valoare energetic fa de melisa cultivat n grdin, avnd un nivel de proteine i cenu mic,
dar valoarea energetic mare.
Rezultatele activitii antioxidante realizate ntre cele patru mostre de roini au artat c
potenialul antioxidanilor este diferit. n funcie de condiiile experimentelor probele de testare pot
demonstra aciunea antioxidant sau activitate pro-oxidant. Prin urmare, nici un singur test nu
reflect cu exactitate mecanismul de aciune al tuturor surselor de antioxidani ntr-un sistem
complex [38].

53

6. Parte experimental
Materiale i aparatur
Materia prim (frunze de Melissa officinalis) a fost procurat de la Staiunea Stefneti.
Extracia s-a desfurat prin trei metode: antrenarea cu vapori, extracia cu fluide supercritice i
extracie cu microunde.
Antrenarea cu vapori a fost realizat n laboratorul de Chimie Organic al Universitii din
Piteti.
Extracia cu microunde a fost realizat cu ajutorul aparatului Milestone NEOSGR la firma
Global Step S.R.L Piteti.
Extracia cu fluid supercritic a fost realizat n laboratorul de Chimie organic al Universitii
din Piteti, utiliznd un extractor JASCO (Japan Spectroscopic Co.), cu o coloan de extracie 250x
20 mm, coloan JASCO CO-2060, pomp de presiune ridicat (JASCO-PU-2080-CO 2), regulator de
presiune (JASCO BP-2080).
Au mai fost utilizate uleiuri eseniale de lemongrass i lemon balm de la Solaris, melisa de la
Cozac Plant, n vederea comparrii datelor spectrale.
Spectrele FT-IR au fost nregistrate cu un aparat FT-IR 6300 Jasco, n domeniul 4000400 cm -1,
funcia de apodizare Cosine, rezoluie 4 cm-1. Controlul aparatului i achiziia datelor s-au realizat
cu ajutorul softului Spectra Manager II. Spectrele au fost efectuate prin tehnica transmisiei prin ATR
(reflexie total atenuat) utiliznd FT-IR Gladi-ATR cu o singur reflexie pe cristal de diamant.

6.1 Antrenarea cu vapori a Melissei officinalis

Antrenarea cu vapori a fost realizat la Universitatea din Piteti n laboratorul de chimie. Probele
de antrenat au fost frunzele, acestea au fost mrunite pentru un randament mai bun.
Instalaia de antrenare cu vapori (figura 6.1.), cu ajutorul creia am extras uleiul esenial de
roini, este format din urmtoarele componente:
-generator de vapori de ap;
-barbotor;
-balon de antrenare;
-refrigerent descendent;
-vas de colectat.

54

Figura 6.1. Instalaia de antrenare cu vapori pentru Melissa officinalis

Frunzele de roini au fost mrunite, apoi introduse n balonul de antrenare, care se nchide cu
dopul dublu prin care trece un tub de sticl lung, acesta se scufund n amestecul de antrenat, la care
se ataeaz refrigerentul. La captul refrigerentului se fixeaz un balon mic care se numete colector.
Generatorul de vapori se umple cu ap pn la jumtate, se ncepe nclzirea apei pn la apariia
vaporilor. Cnd au aprut vaporii de ap se face legtura ntre generatorul de vapori i tubul de sticl
al balonului de antrenare. La nceput vaporii trec n balonul de antrenare dup care, treptat, ncepe
antrenarea frunzelor de melis n curentul vaporilor de ap ce ies spre refrigerent, unde condenseaz
i se colecteaz n vas.
Antrenarea se oprete atunci cnd la captul refrigerentului se colecteaz numai ap, se ntrerupe
nclzirea, iar colectorul se ndeprteaz de la instalaie.
Extractul apos obinut a fost supus separrii. S-a folosit o plnie de separare. Uleiul separat a
fost analizat cu ajutorul spectroscopiei FTIR.
Din 1000 g de frunze proaspete s-au obinut prin antrenare (5 operaii) aproximativ 8 ml ulei.

6.2 Extracia cu microunde a uleiului esenial din Melissa officinalis

Extracia cu microunde a avut loc la firma Global Step S.R.L Piteti, cu ajutorul aparatului
Milestone NEOSGR, operaia a fost monitorizat cu ajutorul unui Wattmetru.
Cuptorul cu microunde a fost operat la nivelul de putere de 200W n primele 3 minute, iar n
urmtoarele 25 de minute la nivelul de putere de 400W, la temperatura de 110C, n figura 6.2. este
prezentat aparatul.

55

Figura 6.2. Instalaia cu microunde

Frunzele de roini au fost cntrite: 400 g, apoi au fost mrunite la moara tietoare timp de 20
secunde i introduse n aparat pentru extracia uleiului volatil. Au fost folosite frunze uscate.
Timpul de 45 de minute a fost suficient pentru a extrage uleiul esenial. Pe parcursul ultimelor 30
de minute, uleiul esenial colectat a fost decantat din condensat n intervale de 1 minut (figura 6.3.).

Figura 6.3. Uleiul de roini obinut cu ajutorul extraciei cu microunde

Din 400 g frunze proaspete mrunite au fost obinute 4,8 ml ulei esenial.

6.3 Extracia uleiului esenial cu fluid supercritic (CO2)

56

Extracia cu fluid supercritic a fost realizat n laboratorul de Chimie organic al Universitii

din Piteti, utiliznd un extractor JASCO (Japan Spectroscopic Co.), cu o coloan de extracie 250x
20 mm, coloan JASCO CO-2060, pomp de presiune ridicat (JASCO-PU-2080-CO2), regulator
de presiune (JASCO BP-2080). Extracia s-a realizat la 40C i la presiunea de 10 MPa. Debitul
solventului a fost timp de 1 or la 1ml/min, iar apoi a fost modificat la 2ml/min. Proba de 6,50 g de
frunze de roini mrunite au fost plasate n extractor. Extractele au fost colectate ntr-un tub de-a
lungul a 180 min, iar randamentul a fost calculat (1,70%).
n figura 6.4. este prezentat instalaia cu ajutorul creia am extras uleiul volatil de roini.

Figura 6.4. Instalaia extraciei cu fluide supercritice cu CO2

n figura 6.5. avem prezentat uleiul obinut cu ajutorul fluidului supercritic, CO2.

Figura 6.5. Ulei esenial de roini obinut cu ajutorul instalaiei SFE

n tabelul 6.1. sunt prezentate datele cu privire la rezultatele randamentelor obinute pentru cele
trei metode de extracie folosite. Cele trei metode folosite sunt: antrenarea cu vapori de ap,
extracia cu vapori de ap i extracia cu fluide supercritice.
57

Tabel 6.1. Randamentul obinut pentru cele trei metode de extracie

Simbol

Antrenarea cu
vapori de ap

Extracia cu
microunde

Extracia cu fluide
supercritice

%
timp (min)

0,8 %
240 min

1,2%
45 min

1,7%
180 min

Din tabel reiese c cea mai eficient metod este extracia cu fluide supercritice, aceasta are un
timp scurt, fa de antrenarea cu vapori i randamentul mult mai mare dect celelalte dou metode
(1,7%). Urmtoarea metod cu un randament bun i timp foarte mic este extracia cu microunde
(1,2%). O alt metod folosit este antrenarea cu vapori de ap, aceasta are un timp destul de mare i
un randament mic, se obine astfel cea mai mic cantitate de ulei volatil.

6.4 Analiza extractului FTIR

Aa cum este artat n tabelul 2.1. principalii componeni ai uleiului esenial de melisa, obinut
din frunze n luna iulie, dup perioada de nflorire sunt:
OH

OH
OCOCH3
OH

carvacrol
5-izopropil-2-metil
fenol

geraniol
(trans)-3,7,dimetil-2,6octadien-1-ol

acetat de geraniol

izomentol
2-izopropil-5-metilciclohexanol

OH
O
O

H2C

OH

cariofilen

citronelat de metil

linalool
3,7-dimetil-octa1,6-dien-3-ol

timol
2-metil-5-izopropil fenol

Tabelul 6.2. prezint benzile caracteristice ale unor uleiuri eseniale din compoziia Melissei
officinalis [39].
Tabelul 6.2. Atribuiile componenilor eseniali n uleiul de Melissa officinalis
Compus

Atribuie
58

ATR-IR [cm-1]

Carvacrol
Cariofilen

(C-H)
(CH2)

Timol

(C-H)

811
885
875
804

n tabelul 6.3. sunt prezentate principalele atribuii ale componenilor uleiurilor eseniale n
spectrul FTIR [40].
Tabelul 6.3. Atribuiile grupelor funcionale ale componenilor din uleiurile eseniale
Simbol

Vibraia

(OH)

Numrul de und
[cm-1]
3420

Atribuia (scurt comentariu)

grupe OH polimerice, band

larg
B
3050-3030
Aromatici
(C-H)
C
2930/2860
grupe metil i metilenice
(C-H)
D
3000-2500
legturi de hidrogen ale acizilor
(OH)
carboxilici
E
1700-1680
Carbonil
(C=O)
F
1640
grupe carbonil conjugate
(C=O), (C=C)
G
1610, 1580, 1517
vibraii de schelet aromatice
(C=C)
H
1440
grupe metil i metilenice
(C-H)
I
1380-1350
grupe metil
(C-H)
J
1270
eteri alchil-arilici, alcooli
(C-O), (OH)
K
1200
Esteri
(C-O)
L
1165
esteri metilici ai acizilor alifatici,
(C-O)
eteri
M
1110
eteri alifatici, alcooli secundari
(C-O)
N
1010
Eteri
(C-O)
O
830
aromatici cu doi H vecini
(C-H)
P
720
catene alifatice cu n > 4
(CH2)
n figurile de mai jos (figura 6.6. i figura 6.7.) sunt prezentate spectrele ATR-FTIR al uleiului
de Melissa officinalis obinut prin extracia cu microunde.

59

Figura 6.6. Spectrul ATR-FTIR al uleiului de Melissa officinalis obinut prin extracie cu
microunde

Figura 6.7. Spectrul ATR-FTIR al uleiului de Melissa officinalis obinut prin extracie cu
microunde (verde punctat) i de la Cozac Plant (albastru)
Cantiti semnificative de alcooli terpenici au fost identificai n uleiul esenial de echinacee i
anume: 4-terpineol, -terpineol, -cardinol, T-cadinol i T-muurolol, mpreun cu cis-hex-3-en-1-ol.
60

Parfumul uleiului esenial este prospt i lemnos (de exemplu pinul), cu note de vrf florale (de
exemplu trandafir), datorit terpenelor, terpineolului i hexenolului. Uleiul nu conine geraniol, neral
sau citronelal de obicei gsite n Melissa officinalis L. subsp. Officinalis (figura 6.8).

Figura 6.8. Spectrele FTIR de Melissa officinalis. Extract metanolic (A) i

extract apos liofilizat (B)
Figura 6.9 prezint o comparaie ntre spectrul FTIR al Echinaceei species i Melissa officinalis
pentru diferitele clase de compui [41].

Echinaceea species

Melissa officinalis

Figura 6.9. Comparaie ntre spectrul FTIR al Echinaceei species i Melissa officinalis

6.5 Utilizrile extractului n cosmetic

61

6.5.1 Utilizri n parfumerie a uleiului volatil

Melissa officinalis crete n cantiti considerale n flora spontan din ara noastr. Din planta
prospt se obine 0,01% 0,1% ulei volatil, iar din cea uscat 0,1% - 0, 25%.
Uleiul volatil de roini are o densitate relativ de 0,894 0,924 la 20 0C i o culoare glbuie.
Reacia sa este slab acid.
Acest ulei datorit randamentului su foarte sczut are un pre ridicat. De astfel uleiul este foarte
valoros, fiind aproape n ntregime compus din citral i citronelal.
Uleiul de roini este rareori utilizat ca atare, datorit preului su ridicat. Sub numele de melis
citrat se comercializeaz uleiul de codistilare, mpreun cu alte plante ce produc uleiuri cu not
citrat. Sub aceast form se utilizeaz n parfumerie, n compoziii cu not citrat dominant,
compoziii aldehidice, ape de colonie etc.
Are o arom foarte fin, fapt pentru care n strintate se folosete i pentru a fi amestecat cu
uleiul de lmie, fiind redistilat din planta de melis, i mbunteste calitate.
Componente din uleiului esenial de Melissei officinalis folosite n parfumerie sunt urmtoarele:
carvona: se folosete n parfumerie n note florale de trandafir i de iasomie;
anetolul: se utilizeaz limitat n parfumeri n prezena notelor lemnoase, florale, fougre i n
sintez;
carvacrolul: are un miros fenolic, medicamentos, cald, penetrant i uscat, puternic, cu o nuan
ierboas i de condimente. Are o utilizare restrns n parfumeria industrial i spunerie;
geraniolul: mirosul este dulce, floral, cald i uscat cu note variabile n funcie de provenien, fiind
folosit cu succes n industria parfumeriei n compoziiile florale de trandafir, iar gustul amar;
nerolul: mirosul este dulceag, floral de trandafir, cu o nuan prospt, verde i gustul este amar,
dulce floral la concentraii sub 10 ppm. La parfumuri se folosete pentru a da o not prospt;
citronelalul: are un miros prospt de trandafir;
-cariofilenul: are gust uscat lemnos, picant i tenace [42].

6.5.2 Utilizri n spunerie al uleiului volatil

62

O mare parte din uleiul eseniat obinut a fost folosit pentru prepararea spunului. Aceast
aplicaie a avut loc la Universitatea din Piteti n laboratorul de chimie.
Reacia de saponificare a avut loc prin tratarea unui amestec de uleiuri: msline, palmier i
roini cu NaOH, la rece, dup ecuaia reaciei chimice:
CH2

CO

CH

CO R'

CH2 O

CO

R
NaOH

R''

CH2

OH

CH

OH

CH2

OH

R
+

R'
R''

_
+
COO Na
_
+
COO Na
_ +
COO Na

R, R', R'' - radical acizi grasi

Pentru prepararea spunului au fost utilizate urmtoarele:

- NaOH;
- ap distilat;
- ulei de palmier;
- ulei de msline;
- ulei esenial de roini;
- ulei esenial de patchouli.
Au fost amestecate NaOH i ap distilat la temperatur sczut, se amestec pn cnd se rcete,
reacia fiind exoterm (figura 6.10.).

Figura 6.10. Amestecarea NaOH cu apa distilat.

63

Au fost cntrite uleiul de palmier (252 g) i uleiul de msline (273 g), a fost adugat apa
distilat n care a fost dizolvat NaOH, iar apoi se omogenizeaz (figura 6.11.).

Figura 6.11. Amestecul format din uleiul de palmier, uleiul de msline i apa distilat
n care a fost dizolvat NaOH
Amestecul obinut a fost pus n forme de silicon (figura 6.12.), iar peste cteva zile a fost scos
din forme (figura 6.13.a. i figura 6.13.b.).

Figura 6.12. Spunul din ulei de melisa n forme de silicon

64

Figura 6.13.a. Spun cu ulei de roini

Figura 6.13.b. Spun cu ulei de roini

65

Concluzii
Uleiul esenial de roini a fost obinut cu ajutorul a trei metode de extracie:
- antrenarea cu vapori de ap;
- extracia cu microunde;
- extracia cu fluide supercritice.
Din punctul meu de vedere cea mai bun metod este extracia cu microunde, aceast metod are
un timp foarte scurt n obinerea uleiului esenial i un randamnet destul de bun. Cel mai bun
randament a fost obinut cu ajutorul extraciei cu fluide supercritice, dar acesta are dezavantajul c
timpul este mare. Cea mai dezavantajoas metod este antrenarea cu vapori deoarece prezint un
timp foarte mare, un consum de energie ridicat i un randament foarte mic.
Uleiul proaspt extras a fost caracterizat spectral ATR-FTIR. Spectroscopia ATR-FTIR constituie
o metod eficient, adecvat i rapid pentru caracterizarea, respectiv controlul calitii uleiurilor
eseniale. Cele mai importante componente ale uleiului de roini au fost: carvacrolul avnd banda n
spectru la 811 cm-1, urmat de cariofilen avnd dou benzi spectrale 885 cm-1, respectiv 875 cm-1.

66

Bibliografie
[1] Buturug, V., Enciclopedie de etnobotanic romneasc, Editura Stiinific i enciclopedic,
Bucureti, 1979, 200-201
[2] Coiciu, E., Plante medicinale i aromatice, Editura Academiei Republicii Populare Romne,
1982, 19-406
[3] Aristide, A., Plante medicinale i aromatice, Editura Ceres, Bucureti, 1975, pag. 183, 184, 185
[4]Bodea, C., Tratat de biochimie vegetal, Partea I fitochimie, Volumul II, Editura Academiei
Republicii Socialiste Romnia, 1965, 773-1766
[5] Werker, J., Function of oil secreting glandular hairs in aromatic plants of the Lamiaceae A
review, J. Flav Fragr 1993, 8, 249-255
[6] Anwar, F., Changes in composition and antioxidant and antimicrobial activities of essential oil of
fennel (Foeniculum vulgare Mill.) fruit at different stages of maturity. J Herbs Spices & Med Plant
2009, 15, 1-16
[7] Saeb, K., Gholamrezaee, S., Variation of essential oil composition of Melissa officinalis L.
leaves during stags of plant growth, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 2012, 547-549
[8] Topal, C., Stereochimie. Funciuni mixte. Compui naturali. Note de curs Editura Universitii
din Piteti, Piteti, 2005, 65-202
[9] Petersen, M., Rosmarinic acid, Phytochemistry, Volume 62, Issue 2, January 2003, 121125
[10] Bodea, C., Tratat de biochimie vegetal, Partea I fitochimie, Volumul I, Editura Academiei
Republicii Socialiste Romnia, 1965, 89- 371
[11] Pogany, I., Banciu, M., Tehnic experimental n chimia organic, Editura tiinific i
enciclopedic, Bucureti, 1977, 242
[12] Mironescu, M., Tutoveanu, A., Tehnica lucrrilor de laborator, Bucureti, Editura tehnica, 1967,
232
[13] Melo, M., M., R., Silvestre, A., J., D., Silva, C., M., Supercritical fluid extraction of vegetable
matrices: Applications, trends and future perspectives of a convincing green technology, Journal of
Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2013, 83, 215 220
[14] Sapkale, G., N., Patil, S., M., Surwase, U., S., Bhatbhage, P., K., Supercritical fluid extraction,
Int. J. Sci., 2010, 8(2), 729-743
[15] Supercritical Fluid Extraction, Density Considerations, http://eng.ege.edu.tr/ ~otles/
Supercritical Fluids Science And Technology/ Wc488d76f2c655.htm. Retrieved, 2007, 11-20
[16] Supercritical Fluid Extraction, Density Considerations, http://eng.ege.edu.tr/~otles/
Supercritical Fluids Science and Technology/ Wc488d76f2c655.htm. Retrieved, 2008, 01-04
[17] Kusakabe, T., Saito, T., Tateichi, S., Solid-phase microextraction and gas chromatography-mass
spectrometry analysis of p, p'-DDE in biological samples, 2001, 761, 93-98
[18] Braun, L., Cohen, M., Herbs and Natural Supplements: An Evidence-Based Guide. Elsevier,
Australia, 2007, 777-785
[19] Herodez, S.S., Halodin, M., Skerget, M., Knez, Z., Solvent extraction study of antioxidants
from balm (Melissa officinalis L.) leaves. Food Chem., 2003, 80, 275-282
[20] Presti, M., L., Ragusa, S., Trozzi, A., Dugo, P., Visinoni, F., Fazio, A., A comparison between
different techniques for the isolation of rosemary essential oil. J. Sep. Sci., 2005, 28, 273-280
[21] Nabil, B., Vian- Abert, M., Ferhat, M. A., Petitcolas, E., Meklati, B., Y., Chemat, F.,
Comparison of two isolation methods for essential oil from rosemary leaves: Hydrodistillation and
microwave hydrodiffusion and gravity. Food Chemistry, 2009, 114, 355362
[22] Szumny, A., Figiel, A., Gutirrez-ortiz, A., Carbonell-Barrachina., Angel A. Composition of
rosemary essential oil (Rosmarinus officinalis) as affected by drying method. Journal of food
engineering, 2010, 97, 253260
67

[23] Ma, C., Liu, T., Yang, L., Zu, Y., Chen, X., Zhang, L., et al. Ionic liquid-based microwaveassisted extraction of essential oil and biphenyl cyclooctene lignans from Schisandra chinensis Baill
fruits. Journal of the chromatography A, 2011, 1218, 85738580
[24] Filly, A., Fernandez, X., Minuti, M., Visinoni, F., Cravotto, G., Chemat, F., Solvent-free
microwave extraction of essential oil from aromatic herbs: From laboratory to pilot and industrial
scale, Food Chemistry, 2014, 150, 193198
[25] Vinatoru, M., An overview of the ultrasonically assisted extraction of bioactive principles from
herbs, Ultrasonics Sonochemistry, 2001, 8, 303-313
[26] Bale, A.,S., Shinde, N., H., Microwave assisted extraction of essential oil from lemon leaves,
International Journal of Recent Scientific Research Vol. 4, Issue, 9, September, 2013, pp.1414- 1417
[27] Marie E. Lucchesi, M., E., Chemat, F., Smadja, J, Solvent-free microwave extraction of
essential oil from aromatic herbs: comparison with conventional hydro-distillation, Journal of
Chromatography A, 2004, 1043, 323327
[28] Chemat, F., Abert-Vian, M., Huma, Z., Comparison of two isolation methods for essential oil
from lemon leaves: Hydrodistillation and microwave hydrodiff usion and gravity, Food Chemistry,
2009, 114, 355-362.
[29] Shakeel-u- R, Latief, R., Khursheed, A., B., Mohammad, A., B., Mohammad, A., K., Abdul, S.,
Shawl, S., C., Comparative analysis of the aroma chemicals of Melissa officinalis using
Hydrodistillation and HS-SPME techniques, Arabian Journal of Chemistry, 2013, 1-6
[30] Miroliaei, M., Khazaei, S., Moshkelgosha, S., Shirvani, M., Inhibitory effets of lemon balm
(Melissa officinalis L.) extract on the formation of advanced glycation and products, Food Chem.,
2011, 129, 267-271
[31] Lin, J., T., Chen, Y., C., Lee, Y., C., Hou, C., W., R., Chen, F., L., Yang, D., J., Antioxidant antiproliferative and cyclooxygenase-2 inhibitory activities of ethanolic extracts from lemon balm
(Melissa officinalis L.) leaves, LWT Food Sci. Technol., 2012, 49, 1-7
[32] Coran, S., A., Mulas, S., Mulinacci, N., Crucial aspects of high performance thin layer
chromatography quantitative validation. The case of determination of rosmarinic acid in different
matrices, J. Chromatogr. A 1220, 2012, 156-161
[33] Sun, L., Guo, Y., Fu, C., Li, J., Li, Z., Simultaneous separation and purification of
totalpolyphenols, chlorogenic acid and phlorizin from thinned young apples, FoodChem., 2013, 136,
10221029
[34] Arceusz, A., Wesolowski, M., Quality consistency evaluation of Melissa officinalis L.
commercial herbs by HPLCfingerprint and quantitation of selected phenolic acids, Journal of
Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2013, 83, 215 220
[35] Guginski ,G., Luiz, A., P., Duarte, M., S., Massaro, M., Martins, D., F., Chaves, J., Mattos, R.,
W., Damaris, S., Vnia, M., M., F., Calixto, J., B., Santos, A., R., S., Mechanisms involved in the
antinociception caused by ethanolic extract obtained from the leaves of Melissa officinalis (lemon
balm) in mice, Pharmacology, Biochemistry and Behavior, 2009, 93, 1016
[36] Pereira, P., R., Boligon, A., A., Appel, A., S., Fachinetto, R., Ceron, C., S., Santos, J., E., T.,
Athayde, M., L., Rocha, B., T., Chemical composition, antioxidant and anticholinesterase activity of
Melissa officinalis, Industrial Crops and Products, 2014, 53, 34-45
[37] Schnitzler, P., Schuhmacher, A., Astani, A., Reichling, J., Melissa officinalis oil affects
infectivity of enveloped herpesviruses, Phytomedicine, 2008, 15, 734740
[38] Dias, M., I., Barros, L., Sousa, M., J., Ferreira, I., C., F., R., Systematic comparison of
nutraceuticals and antioxidant potential of cultivated, in vitro cultured and commercial Melissa
officinalis sample, Food and Chemical Toxicology, 2012, 50, 1866-1873
[39] Schultz, H., zkan, G., Baranska, M., Krger, zkan, M., Characterization of essential oil plant
from Turkey by IR and Raman Spectroscopy, Vibrational Spectroscopy, 2005, 39, 249-256
68

[40] Wilmesmeier, S., Steuernegel, S., Wiermann, R., Comparative FTIR and 13C CP/MAS NMR
Spectroscopic Investigations on Sporopollenin of Different Systematic Origib, Z. Naturforsch 48C,
1993, 697-701
[41] Bernard S. W. Dawson, Robert, A., Franich, M., R., Essential oil of Melissa officinalis L. subsp.
altissima (Sibthr. et Smith) Arcang, Flavour and Fragrance Journal, Volume 3, Issue 4, pages 167
170, December 1988
[42] Ceauescu V. E., Rdoia G., Cdariu T., Odorante i aromatizante, Chimie, Tehnologie,
Aplicaii, Editura Tehnica, Bucureti, 1988, pag. 58-119
[web 1] https://ro.scribd.com/doc/105563546/Fitoterapie
[web 2] http://agro.afacereamea.ro/wp-content/uploads/floricultura/Metode-de-Obtinere-Si-dePrelucrare-a-Uleiurilor-Volatile.pdf

69