Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
2
Neurotransmitorii pot fi mprii din punct de vedere structural n dou categorii:
neurotransmitori cu greutate molecular mic i coninut n azot i respectiv
neuropeptidele (Ex. endorfine).
3
I.2. Bariera Hematoencefalic
In vasele capilare ale majoritii esuturilor are loc un transfer rapid al moleculelor din
snge prin peretele endotelial al capilarelor n lichidul interstiial . Astfel, compoziia
lichidului interstiial este similar celei din snge i receptorii sau transportorii din
membranele celulelor pot interaciona direct cu nutrieni, hormoni sau ali compui din
snge .
Bariera ncepe cu celulele endoteliale , care spre deosebire de cele din alte organe , sunt
ataate intre ele prin jonciuni foarte nguste care nu permit trecerea moleculelor polare din
snge n lichidul interstiial ce scald neuronii . De asemenea sunt lipsite de mecanismul de
transport transendotelial ce include fenestrrile ( ferestre sau pori care traverseaz stratul
endotelial i permite trecerea rapid a moleculelor prin membrane ) sau transpinocitoz
( transport prin vezicule dintr-o parte a celulei endoteliale in cealalt ) . Celulele endoteliale
protejeaz creierul att pasiv ct i activ. Aceste celule conin un sistem enzimatic complex
de metabolizare al xenobioticelor, similar celui din ficat , cu ajutorul cruia pot metaboliza
neurotransmitorii i compui toxici, constituindu-se astfel ca o barier enzimatic
mpotriva intrrii substanelor toxice n creier . n plus ele pompeaz napoi n snge
( pomp de eflux ATP dependent ) moleculele hidrofobe ( xenobiotice, P- glicoproteine
etc.)ce trec prin membrana celular din snge n celula endotelial . Unele substane
lipofile, apa, oxigenul i dioxidul de carbon pot traversa bariera prin difuzie pasiv, dar
majoritatea depind de transportori specifici care transport i n ct i afar din creier
.Urmtorul nivel de protecie este reprezentat de o membran continu de colagen care
nconjoar complet stratul endotelial .Aceast membran este n contact direct cu
prelungirile astrocitelor .
Astfel un compus din snge trebuie s traverseze membranele celulelor endoteliale, bariera
enzimatic a celulelor endoteliale, membrana bazal i o barier suplimentar format din
astrocitele care fac contactul cu neuronii din creier .
4
Fig.1.Bariera hematoencefalica .Compuii din snge nu pot trece liber n creier .Acetia
trebuie s traverseze celula endotelial, membrana bazal i astrocitele, utiliznd
transportori specifici .Doar moleculele foarte lipofile pot realiza traversarea acestor
membrane n absena transportorilor .
5
Acizii monocarboxilici, ce includ L-lactat, acetat, piruvat precum i corpii cetonici
(acetoacetat i and beta-hidroxibutirat), sunt transportai de un sistem stereospecific
separate cu o vitez mai mic dect cea pentru transportul glucozei .
n perioada de foame, cnd nivelul corpilor cetonici este ridicat, acest tip de transport
se intensific . Corpii cetonici sunt o important surs energetic a creierului, att n
stadium adult ct i la nou-nscut, n perioadele de infometare prelungit ( mai mari de 48
de ore ) .
6
este aproximativ jumtate din nivelul glicemiei. Deficitul de GLUT1 se poate suspecta cnd
glicorahia este sczut sub 0,4 mg/dl, n absena unei tumori cerebrale sau infecii la
nivelul SNC - Ex. meningite bacteriene sau cu bacil Koch, situaiile cele mai frecvent
asociate cu scderea glicorahiei, dar care sunt uor de difereniat att clinic ct i prin
examinarea biochimic (proteinorahie, scderea clorurilor i a glicorahiei, prezena de
leucocite) i bacteriologic a LCR. Datorit nivelelor sczute de glucoz la nivelul
creierului, deficitul de GLUT1 determin producerea de convulsii, ntrziere n dezvoltare
precum i o serie de tulburri motorii complexe. n acest caz se recomand o diet
cetogenic (hiperlipidic, hipoglucidic). Corpii cetonici produi n exces sunt uor
transportai la nivelul SNC i vor fi utilizai pentru producerea de energie, economisind n
acest mod glucoza.
7
LCR i creierului, cu mbuntirea funciei cognitive. Aceast terapie este recomandat in
tratamentul fenilcetonuriei i a bolii urinii cu miros de sirop de arar .
Deficitele vitaminice pot afecta sistemul nervos . Deficitul de vitamina A afecteaz n
primul rnd retina i pielea . Componentele grului B de vitamine sunt eseniale pentru
dezvoltarea i funcionarea normal a esutului nervos . Sidromul Wernicke-Korsakoff
(comun la alcoolici ) se datoreaz deficitului de vitamin B1 ( tiamin ) i se manifest prin
afectarea mobilitii ochilor, pierderi de memorie, neuropatie periferic, necoordonare
cerebelar . Dac neuropatia periferic este unicul simptom al deficitului de tiamin, boala
se numete beriberi. Ameelile din copilrie depind i de deficitul de piridoxin (vitamin
B6) , ce pot corespunde la o anomalie congenital legat de un necesar ridicat de vitamin .
Deficitul de vitamin D poate duce la rahitism, dar i la afectarea sistemului nervos .
8
endorfinele se leag de receptorii opioizi i blocheaz semnalele de durere ) n timp ce
altele sunt eliberate n circulaie pentru a se lega de receptori specifici localizai n alte
organe ) GH sau TSH ) . Multe dintre neuropeptide sunt sintetizate dintr-un precursor cu
masa mai mare, care este scindat cu producerea mai multor peptide active cu mas
molecular mic .
Pn nu demult exista concepia c un neuron sintetizeaz i elibereaz un singur
tip de neurotransmitor . Recent , mai multe date experimentale au demostrat c un
neuron poate conine mai multe tipuri de neurotransmitori mici sau neuropeptide sau chiar
ambele categorii . Eliberarea difereniat a diferiilor neurotransmitori este rezultatul
modificrilor de frecven sau al tipului de transmisie .
9
I.3.2. Catecolaminele
10
MSR conine granule cromafine care sunt rspunztoare de biosinteza, stocarea i
secreia catecolaminelor. Catecolaminele intr n granule prin transport activ, apoi fiind
secretate prin exocitoz sub stimulare nervoas. Procesul este Ca 2+ dependent, fiind
stimulat de ageni colinergici i - adrenergici. Procesele se desfoar n diverse esuturi,
90% din producie fiind reprezentat de dopamin. La nivelul celulelor cromafine i ale SNV
simpatic se elibereaz noradrenalina iar doar la nivelul MSR are loc eliberarea adrenalinei.
11
TYR
COOH
PHE HO CH2 C NH2
H
FICAT
Enzima de ritm-OXIDOREDUCTAZICA
TIROZIN HIDROXILAZA Cofactor-TETRAHIDROPTERIDINA
DOPAMINA
(3,4 DIHIDROXIFENIL-ETILAMINA)
HO CH CH2 NH2
OH
NORADRENALINA
(3,4 DIHIDROXIFENIL-HIDROXIETILAMINA)
S-adenozil Met Localizare in citoplasma
FENILETANOLAMINA medulosuprarenalelor
N - METIL TRANSFERAZA Activare B12 (cobalamina)
S-adenozil
homo-Cis Activare glucocorticoizi care
vin prin sistemul intrasuprarenal
HO
HO CH CH2 NH
OH CH3
ADRENALINA
12
Fig. 3 Transportul catecolaminelor n veziculele de stocare. Este un transport activ
secundar bazat pe generarea unui gradient de protoni de-a lungul membranei veziculare.
NT+ = neurotransmitor ncrcat pozitiv (catecolamine); DBH = dopamin--hidroxilaza;
VMAT2 = transportor vezicular membranar de tip 2; V-ATPase = ATPaza vezicular
13
nivelul membranelor mitocondriale interne de la nivelul mai multor tipuri celulare i oxideaz
carbonul purttor al gruprii amino la o aldehid, cu eliberarea unui ion de amoniu. n
terminaiile presinaptice, MAO inactiveaz catecolaminele care nu sunt protejate prin
depozitarea n vezicule. n acest fel, medicamentele care depletizeaz veziculele,
determin indirect creterea degradrii catecolaminelor.
Exist dou izoforme ale MAO, cu specificiti de aciune diferite: MAO-A care
dezamineaz preferenial norepinefrina i serotonina, n timp ce MAO-B care acioneaz
asupra unui spectru larg de feniletilamine.
MAO ofer protecie mpotriva aminelor biogene ingerate, ca de exemplu tiramina,
care se gsete n mai multe sortimente de brnz.
COMT se gsete de asemenea n multiple tipuri celulare, inclusiv eritrocite. Ele
acioneaz asupra unui spectru larg de catecoli extraneuronali i asupra acelora care au
difuzat n afara spaiului sinaptic. COMT transfer un grup metil de la S-adenozilmetionin
la grupul hidroxil al catecolaminelor sau produilor lor de degradare. Deoarece reacia de
inactivare necesit SAM, procesul este indirect dependent de vitamina B12 i folai.
Aciunile MAO i COMT pot aprea n aproape orice ordine, astfel c rezult un mare
numr de produi de degradare i intermediari care apar n urin.
Acidul homovanilmandelic (HVA) este un indicator al degradrii dopaminei.
Concentraia lui este sczut n creierul pacienilor cu boala Parkinson.
Tiramina este un produs de degradare a tirozinei i poate determina cefalee,
palpitaii, grea i vrsturi, creterea tensiunii arteriale. Tiramina exercit aciuni de tip
norepinefrin-like prin legarea la nivelul receptorilor norepinefrinici i stimulndu-i. Tiramina
este inactivat de MAO-A i de aceea pacienii tratai cu inhibitori MAO trebuie s evite
alimentele cu coninut crescut de tiramin (brnza, ciocolata neagr, vin rou). Dup ce a
fost descoperit faptul c MAO prezint cei doi izomeri, au fost sintetizai inhibitori selectivi
ireversibili, ca de exemplu clorgyline care inhib MAO-A i deprenyl pentru MAO-B.
Deprenylul a fost utilizat n tratarea bolii Parkinson (cauzat de deficitul de dopamin care
este de asemenea inhibat de MAO. Deprenylul nu este antidepresiv. Clorgyline este
antidepresiv dar induce i efectul tiraminic. Inhibitorii MAO de a treia generaie, ca de
exemplu moclobemide, sunt inhibitori reversibili ai MAO-A cu efect antidepresiv. Datorit
naturii reversibile, efectul tiraminic nu a fost observat, ntruct pe msur ce nivelele de
tiramin cresc, determin detaarea medicamentului de enzim i astfel tiramina n exces
va fi eficient inactivat.
14
Reglarea tirozin hidroxilazei
Mecanismele reglatorii eficiente coordoneaz sinteza de catecolamine cu rata
eliberrii acestora. Tirozin hidroxilaza, enzima limitant a cii, este reglat prin feedback
negativ declanat prin depolarizarea terminaiilor nervoase. Tirozin hidroxilaza este inhibat
de catecolaminele citosolice libere, care competiioneaz la nivelul situsului de legare al
enzimei pentru tetrahidrobiopterin. Depolarizarea terminaiilor nervoase activeaz tirozin
hidroxilaza. Depolarizarea activeaz de asemenea un numr de protein kinaze (protein
kinaza C, protein kinaza A i kinaza Ca 2+- calmodulin dependent) care fosforileaz tirozin
hidroxilaza. Ca urmare a acestor trepte de activare, rezult o enzim care leag mai
puternic tetrahidrobiopterina i care este mai puin sensibil la inhibarea prin produi finali
de reacie.
n plus fa de aceste mecanisme reglatorii pe termen scurt, pe termen lung este
implicat reglarea genomic. Astfel, cnd activitatea simpatic neuronal este crescut
pentru o perioad mai lung de timp, cantitile de ARNm ce codeaz pentru tirozin
hidroxilaz i dopamin -hidroxilaz sunt crescute la nivelul pericarionului. Creterea
transcripiei genice este rezultatul fosforilrii CREB de ctre protein-kinaza A sau alte
protein kinaze. CREB se leag apoi la CRE de la nivelul regiunii promotoare a genei.
Moleculele de enzim nou sintetizate sunt transportate de-a lungul axonului la terminaiile
nervoase. Concentraia dopamin decarboxilazei la nivelul terminaiilor nervoase nu pare s
se modifice ca rspuns la activitatea neuronal.
I.3.3. Serotonina
Sinteza serotoninei din triptofan este similar cu cea a adrenalinei din tirozin .
Prima enzim a cii, folosete un mechanism similar celui dintre tirozin i Phe hidroxilaz
la care particip BH4 pentru a hidroxila triptofanul .
15
Figura 4. Sinteza i catabolismul serotoninei.
16
Tot din triptofan se obine i melatonina la nivelul glandei pineale . Melatonina
convertete informaia lumin intuneric , organiznd ritmurile circadiene i sezoniere .
I.3.4. Histidina
17
Enzima histidin decarboxilaz necesit piridoxal fosfat iar mecanismul de reacie
este foarte asemntor cu cel al DOPA decarboxilazei .
Ca i ali neurotransmitori , histamine nou sintetizat este stocat n vezicule la
nivelul terminaiei nervoase . Depolarizarea terminaiei nervoase activeaz procesul de
eliberare prin exocitoz al histaminei, process voltaj dependent ori calciu dependent .
Odat eliberat din neuron, histamine activeaz att receptori sinaptici ct i postsinaptici .
n schimb, spre deosebire de ali neurotransmitori, histamine nu pare afi reciclat n
terminaiile presinaptice .Astrocitele au un sistem de captare a histaminei , fiind
considerate situsul major de inactivare i catabolizare a histaminei . Prima etap a
inactivrii este metilarea ciclului azotat cu obinerea de metal histamin, dup care, n a
doua treapt este oxidat de MAO B . n esuturile periferice, histamina este dezaminat
sub aciunea diamin oxidazei, apoi oxidat la acid carboxilic .
Histamina exercit multiple efecte pe esuturi diferite. Este un mediator major al
rspunsului alergic eliberat de mastocite, determinnd vasodilataie i creterea
permeabilitii vaselor sangvine, condiii fiziopatologice asociate cu rinita i conjunctivita
alergic, bronhospasm. La nivelul creierului, histamina este un neurotransmitor excitator.
Antihistaminicele administrate n alergii mpiedic legarea histaminei la nivelul receptorilor,
dar la nivel cerebral se asociaz cu somnolen. Antihistaminicele de generaie nou au
fost modificate astfel nct s nu poat depi bariera hemato-encefalic. n acest fel, sunt
meninute efectele asupra esuturilor periferice dar fr afectarea SNC.
I.3.5. Acetilcolina
18
metil de la S-adenozil metionin la segmentul de etanolamin al fosfatidiletanolaminei se
formeaz fosfatidilcolina ( procesul este dependent de vitaminele B6 i B12 ) .Aceasta este
ulterior hidrolizat cu producerea de colin sau fosfocolin . Aceasta transformare a
fosfatidiletanolaminei in fosfatidilcolin are loc in diferite esuturi, inclusiv n ficat i creier .
Gruparea acetil, necesar sintezei de acetil colin , provine din calea Embden-
Mayerhoff prin care glucoza se oxideaz aerob la acid piruvic, iar apoi sub actiunea piruvat
dehidrogenazei, acidul piruvic este oxidat la acetil CoA .Datorit faptului ca tesutul neuronal
are o capacitate limitat de utilizare a acizilor grai, oxidarea glucozei rmne sursa major
de obinere a gruprii acetil . Piruvat dehidrogenaza se gasete doar in mitocondrie, astfel
ca acetilul este transportat in citoplasma ca parte a citratului , iar aici este scindat in acetil
CoA i oxaloacetat .
Deoarece vitamina B12 i acidul folic sunt necesare pentru sinteza colinei, deficitul
acestor vitamine va fi asociat cu o serie de simptome neurologice. Pentru sinteza colinei,
gruprile metil sunt donate de ctre S-adenozilmetionin, care este convertit n S-
adenozilhomositeiun n cursul reaciei. Regenerarea S-adenozilmetioninei prin reciclarea
homocisteinei necesit att tetrahidrofolat i vitamina B12.
Colina este esenial la nivelul creierului pentru sinteza acetilcolinei i din acest
motiv se practic suplimentarea dietei cu lecitin la pacienii care sufer de diskinezii
neurologice (contracii involuntare ale musculaturii faciale i ale limbii).
19
Nou-nscutul are necesiti foarte crescute de colin pentru sinteza lipidelor
neuronale (fosfatidilcolina i sfingomielina) i a acetilcolinei. Nivelele crescute de
fosfatidilcolin din laptele matern precum i activitatea crescut a sistemelor de transport de
nalt afinitate pentru colin de la nivelul barierei hemato-encefalice favorizeaz meninerea
unor concentraii crescute de colin la nivelul SNC al nou-nscutului.
Ftul are de asemenea nevoi crescute de colin i de aceea aceste sisteme de
transport de nalt afinitate pentru colin sunt prezente i la nivelul placentei. Colina deriv
din dieta i depozitele materne precum i din sinteza primar n ficatul matern. Deoarece
sinteza colinei este dependent de vitamina B12 i folai, necesitile fetale crescute de
colin determin necesitatea suplimentrii acestor vitamine n cursul sarcinii.
Deficitul congenital de piruvat dehidrogenaz, deficitul de tiamin sau hipoxia
priveaz SNC de sursa de acetil CoA necesar sintezei de acetilcolin, precum i sintezei
de ATPn cadrul ciclului Krebs.
Acetilcolina este inactivat de ctre acetilcolinesteraz, care este o serinesteraz ce
formeaz legaturi covalente cu gruparea acetil .Enzima este inhibat de numeroi compui
( ageni farmacologici i neurotoxine ) care formeaz legturi covalente cu serina reactiv
din cadrul enzimei . Neurotoxinele cum ar fi Sarinul (gaz folosit ca substan de lupt )
acioneaz prin acest tip de mechanism .
Acetilcolina este neurotransmitorul principal la nivelul jonciunilor neuromusculare ;
in cazul in care exist defecte in procesul de inactivare al acesteia, are loc o activare
permanent a sinapselor nerv muchi, fenomen ce genereaz paralizie .
Acetilcolina este inactivat de ctre acetilcolinesteraz, o serin-esteraz care
formeaz o legtur covalent cu grupul acetil. Enzima este inhibat de o gam larg de
compui (farmacologici i neurotoxine) care formeaz o legtur covalent cu gruparea
reactiv a enzimei. Un exemplu n acest sens este gazul sarin utilizat n atacuri teroriste.
Acetilcolina fiind neurotransmitorul major la nivelul jonciunilor neuromusculare,
imposibilitatea de inactivare a acesteia determin o activare continu a sinapselor
neuromusculare cu inducerea de diferite grade de paralizie.
20
din sinteza de novo din glucoz, mai mult dect cel preluat din snge, deoarece
concentraia acestuia in plasma e relativ mic i traverseaz greu bariera HE .
Glutamatul se sintetizeaz din intermediarul ciclului Krebs, alfa cetoglutaratul.
Celulele ale pancreasului exprim de asemenea glutamat decarboxilaza (GAD) i
pacienii cu diabetul zaharat de tip I prezint autoanticorpi mpotriva GAD pancreatic.
Acest fapt a fost confirmat i pe modele animale (oareci), care au demonstrat c GAD
reprezint un autoantigen cheie n diabetul zaharat de tip I. Se poate astfel considera c
exist o relaie ntre expresia GAD pancreatice i cauza diabetului zaharat de tip I.
Medicamentul tlagabina inhib recaptarea GABA de la nivelul sinapsei i a fost
utilizat pentru tratamentul epilepsiei precum i a altor afeciuni convulsivante. Deoarece
GABA este un neurotransmitor cu efect inhibitor la nivelul creierului, prezena lui
prelungit poate bloca neurotransmisia exercitat de ctre ali ageni, reducnd astfel
frecvena convulsiilor.
21
Figura .7. Sinteza acidului glutamic i a acidului gama aminobutiric . GDH glutamate
dehidrogenaz . PLP piridoxal fosfat .
I.3.7. GABA
GABA (acidul alfa aminobutiric) este neurotransmitorul majoritar cu aciune
inhibitoare din SNC.
GABA este sintetizat prin decarboxilarea acidului glutamic ntr-o singur etap
catalizat de enzima decarboxilaza acidului glutamic (GAD). GABA este recirculat n cadrul
sistemului nervos printr-o serie de reacii ce constituie untul GABA , care conserv att
glutamatul ct i GABA . Majoritatea ieirii de GABA are loc n celulele gliale . untul
GABA la nivelul celulelor gliale produce glutamat, care este apoi convertit la glutamin i
transportat afar din celulele gliale in neuroni, unde este transformat napoi n glutamat .
Aici glutamina funcioneaz ca transportor de glutamat ntre celulele din SNC . Celulele
gliale, fiind lipsite de decarboxilaza acidului glutamic nu pot sintetiza GABA.
22
I.3.8. Acidul aspartic
I.3.9. Glicina
I.3.10.Monoxidul de azot ( NO )
Fig 8 Aciunea NO
23
NO sintaza se gsete sub dou forme, in funcie de esutul de localizare . Forma
prezent n macrofageb este responsabil de supraproducia de NO, generatoare de aciuni
toxice asupra paraziilor sau a celulelor tumorale . enzima prezent n esutul nervos,
endoteliu vascular, trombocite i alte esuturi , este responsabil de transmisia neural i
vasodilataie . Fiind gaz, monoxidul de carbon traverseaz membrane celular i ca
urmare efectul nu este limitat doar la neuronal care l sintetizeaz . Este demonstrat de
asemenea c NO poate funciona ca transmitor retrograd care poate influena eliberarea
neurotransmitorului din terminaia presinaptic dup difuzia din neuronul postsinaptic,
unde a fost sintetizat . Acest rol de semnal retrograd poate fi jucat de asemenea de
monoxidul de carbon ( CO ) i acidul arahidonic n SNC .
24
Figura10. NO mesager retrograd. Celula A elibereaz un neuromediator care stimuleaz
celula C s produc NO. NO, fiind un gaz, poate difuza napoi i s regleze producerea i
eliberarea de mediatori n celula A. NO poate de asemenea s difuzeze i n celula B cu
producerea de mediatori care influeneaz celula D. NT = neuromediator
25
I.4.1. Receptorul nicotinic colinergic
Canalul receptorului nicotinic colinergic se deschide ca rspuns la aciunea
neurotransmitorului acetilcolin (i al nicotinei). Acest receptor se gsete n membrana
postsinaptic a neuronilor de la nivelul anumitor sinapse i n fibrele musculare (miocite) de
la nivelul jonciunilor neuromusculare.
Acetilcolina eliberat de ctre un neuron depolarizat difuzeaz pe o distan de
civa micrometri de-a lungul fantei sinaptice sau jonciunii neuromusculare unde
interacioneaz cu receptorul pentru acetilcolin i determin depolarizarea celulei
receptoare. Receptorul pentru acetilcolina este o protein alosteric care prezint 2 situsuri
de legare (subuniti ) cu afinitate crescut pentru acetilcolin. Legarea acetilcolinei
produce modificarea conformaiei receptorului din deschis n nchis. Cnd celula
presinaptic elibereaz acetlcolina, ambele situsuri ale receptorului celulei postsinaptice vor
fi ocupate i canalul ionic se deschide. Influxul de Na + sau Ca2+ va depolariza membrane
plasmatic, iniiind efecte specifice care variaz n funcie de tipul de esut (potenialul de
aciune la nivelul neuronului postsinaptic sau depolarizarea fibrei musculare la nivelul
jonciunii neuromusculare cu declanarea consecutiv a contraciei musculare).
n mod normal, concentraia acetilcolinei la nivelul fantei sinaptice va fi redus rapid
de ctre enzima acetilcolinesteraz, prezent la nivelul sinapsei. Cnd nivelul acetilcolinei
rmne crescut pentru mai mult de cteva milisecunde, receptorul este desensibilizat,
canalul ionic este nchis i acetilcolina este puternic legat.
Neurotransmitorii, cum ar fi 5-hidroxitriptamina (serotonina), glutamat i glicin i
pot exercita aciunea prin intermediul canalelor receptor care au o structur asemntoare
cu cea a receptorului acetilcolinei. Canalele cationice conin resturi de Glu i Asp, ncrcate
negativ. n cazul n care aceti aminoacizi acizi sunt sunt nlocuii cu aminoacizi bazici,
canalul cationic este transformat n canal anionic.
n funcie de ionul care trece printr-un canal, ligandul (neurotransmitorul) pentru
acel canal fie depolarizeaz fie hiperpolarizeaz celula int.
Iniial, membrana plasmatic a neuronului presinaptic este polarizat (ncrcat
negativ n interior) prin aciunea ATP-azei Na +K+ care determin efluxul a 3 Na+ consecutiv
influxului a 2 K+.
(1) Un stimul care acioneaz asupra neuronului determin declanarea potenialului
de aciune care se deplaseaz de-a lungul axonului (sgeata alb). Deschiderea unui canal
de Na+ voltaj-dependent permite influxul de Na +, iar depolarizarea local astfel rezultat
determin deschiderea canalelor de Na + adiacente. Procesul se repet n mod similar.
26
Direcia deplasrii potenialului de aciune este meninut de o perioad refractar scurt
care se instaleaz n urma deschiderii fiecrui canal de Na + voltaj-dependent.
(2) Cnd unda de depolarizare ajunge la captul distal al axonului, canalele de Ca 2+
voltaj-dependente se deschid, permind influxul de Ca 2+ n poriunea presinaptic a
neuronului.
(3) Concentraia intraneuronal crescut de Ca 2+ favorizeaz eliberarea, prin
exocitoz, a neurotransmitorului acetilcolin n fanta sinaptic.
(4) Acetilcolina se leag de un receptor de la nivelul neuronului postsinaptic,
stimulnd astfel deschiderea canalului ionic ligand-dependent.
(5) Ionii de Na+ i Ca2+ extracelulari intr prin acest canal, depolariznd neuronul
postsinaptic. Astfel, semnalul electric a ptruns n corpul neuronului postsinaptic i se va
deplasa de-a lungul axonului acestuia, prin aceleai mecanisme, spre un al treilea neuron.
27
I. 5 . Encefalopatii metabolice i neuropatii
Creierul are o dependen absolut de snge n ceea ce privete furnizarea de
glucoz i oxigen. El utilizeaz 20% din totalul de oxigen furnizat organismului. n
perioadele de dezvoltare i n cazul foamei prelungite, corpii cetonici pot fi utilizai ca i
surse de energie, dar totui nu pot substitui glucoza n totalitate. Glucoza este convertit la
piruvat n cursul glicolizei, iar piruvatul este oxidat n cadrul ciclului Krebs. Glicoliza
anaerob care produce doar 2 molecule de ATP/molecul de glucoz, nu poate susine
necesarul de ATP al creierului, care poate fi satisfcut doar prin oxidarea complet a
glucozei la CO2, care conduce la 32 molecule de ATP/molecul de glucoz. Oricum, n
perioadele de hipoglicemie sau hipoxie uoare, scderea sintezei de mediatori contribuie n
aceeai msur dac nu mai mult la dezvoltarea simptomatologiei dect deficitul de ATP.
I.5.1. Encefalopatia hipoglicemic
Hipoglicemia poate aprea n situaii patologice diverse, ca de exemplu tumori
maligne productoare de insulin, factori de cretere insulin-like sau n alcoolismul cronic.
Simptomele clinice precoce asociate cu hipoglicemia reflect declanarea mecanismelor
fiziologice protective iniiate de nucleii senzoriali hipotalamici, ca de exemplu transpiraii,
palpitaii, anxietate i foame. Dac n aceast faz hipoglicemia nu este rezolvat,
simptomele vor progresa cu obnubilare pn la letargie, convulsii i n final coma.
Hipoglicemia prelungit determin afectri cerebrale ireversibile. Cnd nivelul glicemiei
scade sub 2,5 mM (45 mg/dl), creierul va utiliza substraturile interne, adic glutamatul i
intermediarii ciclului acizilor tricarboxilici ca i surse de energie. Deoarece rezervele acestor
substane sunt reduse, ele sunt rapid epuizate. n cazul n care glicemia continu s scad
sub 1 mM (18 mg/dl), sinteza de ATP nceteaz.
Pe msur ce glicemia scade de la 45 la 36 mg/dl (nainte s apar modificri EEG),
simptomele aprute se datoreaz mai ales sintezei sczute de neuro-mediatori dect
deficitului energetic.
Cnd hipoglicemia progreseaz la nivele de sub 18 mg/dl, iar rezervele de fosfai
macroergici sunt depletizate, EEG (electroencefalograma) devine izolelectric, iar moartea
neuronilor este eminent. Ca i n cazul altor encefalopatii metabolice, moartea celulelor
nervoase nu este global; unele structuri cerebrale, n particular hipocampul i structurile
corticale sunt mai vulnerabile la hipoglicemie. Mecanismele patofiziologice responsabile de
moartea celulelor neuronale n hipoglicemie includ excito-toxicitatea glutamatului, care
apare atunci cnd rezervele energetice celulare sunt depletizate. Insuficiena pompelor de
recaptare energo-dependente determin creterea nivelelor de glutamat n spaiile
28
sinaptice, cu suprastimularea receptorilor glutamici postsinaptici. Activarea prelungit a
receptorilor glutamici conduce la deschiderea prelungit a canalelor ionice cu un influx letal
de ioni de Ca2+, care activeaz cile citotoxice intracelulare de la nivelul neuronului
postsinaptic.
I.5.2.Encefalopatia hipoxic
Studiile pe voluntari au demonstrat c metabolismul energetic cerebral rmne
normal n hipoxiile uoare pn la moderate (presiunea parial a oxigenului de 25 40
mmHg) cu toate c exist severe disfuncii cognitive. Diminuarea funciei cognitive pare s
nu se datoreze n aceste cazuri hipoxiei, ci diminurii sintezei de mediatori. n hipoxia
uoar, fluxul sanguin cerebral este crescut pentru suplinirea furnizrii de oxigen. n plus,
glicoliza anaerob este accelerat pentru suplinirea deficitului de ATP, ceea ce va
determina creterea produciei de lactat i scderea pH-ului. Hipoxia acut (PaO 2 = 20
mmHg) conduce la com.
29
Hipoxia poate aprea prin insuficienta oxigenare a sngelui (de exemplu la
altitudine), anemie sever, sau prin afectarea direct a capacitii creierului de a utiliza
oxigenul (Ex. otrvire cu cianuri, care inhib transportul de electroni n lanul respirator prin
blocarea complexului IV). Indiferent de mecanismul prin care apar, toate formele de hipoxie
determin diminuarea sintezei de neurotransmitori. Inhibarea piruvat dehidrogenazei,
foarte sensibil la hipoxie, determin diminuarea sintezei de acetilcolin. Sinteza de
glutamat i GABA, care depind de funcionarea ciclului Krebs, sunt i ele sczute de
nivelele crescute de NADH, care inhib enzimele ciclului. Nivelele de NADH sunt crescute
deoarece lipsete oxigenul acceptor de electroni n cadrul lanului respirator, iar NADH nu
mai poate fi convertit napoi la NAD +. Sinteza mediatorilor catecolaminici este de asemenea
deficitar, deoarece hidroxilaza necesit O 2.
30
I.6. SINTEZA LIPIDELOR LA NIVELUL SNC I SNP
O serie de caracteristici difereniaz sinteza i degradarea lipidelor la nivelul
sistemului nervos fa de celelalte esuturi. Astfel:
1. Membrana neuronal implicat n transmiterea sinaptic are un rol unic i o
compoziie unic. La nivelul terminaiei presinaptice, compoziia lipidic este n continu
schimbare, deoarece veziculele ce conin neuromediatorii fuzioneaz cu membrana
celular i i elibereaz coninutul. Poriuni ale membranei sunt de asemenea pierdute prin
transformare n vezicule endocitare. La nivelul terminaiei postsinaptice, membrana conine
receptori ai neuromediatorilor ct i concentraii crescute de molecule implicate n cile de
semnalizare, ca de exemplu fosfatidilinozitol.
2. A doua caracteristic important este faptul c bariera hemato-encefalic
restricioneaz ptrunderea acizilor grai neeseniali, ca de exemplu palmitat, care este
eliberat de la nivelul esutului adipos sau provine din diet. n schimb, acizii grai eseniali
sunt preluai de ctre creier. Datorit acestor considerente, creierul sintetizeaz constant
acele lipide (colesterol, acizi grai, glicosfingolipide i fosfolipide), de care are nevoie pentru
variatele funcii neurologice. Semnalizarea neuronal necesit sinteza mielinei (membran
multistratificat care nconjur axonii multor neuroni) de ctre celulele gliale non-neuronale.
Mielina este foarte bogat n n lipide i are o compoziie lipidic diferit fa de cea a
membranelor neuronale. Materia alb a creierului conine semnificativ mai mult mielin
dect materia cenuie, prezena tecii de mielin fiind responsabil de diferenele de culoare
care exist ntre cele dou tipuri de esut cerebral.
I.6.1. Sinteza i oxidarea lipidelor la nivel cerebral
Deoarece bariera hemato-encefalic inhib semnificativ ptrunderea a o serie de
acizi grai i lipide la nivelul creierului, virtual toate lipidele existente la acest nivel trebuie
sintetizate de ctre SNC. Excepia o reprezint acizii grai eseniali (linoleic i linolenic)
care pot traversa bariera hemato-encefalic, fiind ulterior elongai sau desaturai. Captarea
acizilor grai este ns insuficient pentru satisfacerea necesitilor energetice ale SNC; de
aici necesitatea metabolismului aerob al glucozei. Astfel, colesterolul, glicerolul,
sfingolipidele, glicosfingolipidele i cerebrozidele sunt toate sintetizate folosind cile
metabolice discutate anterior. O semnificaie particular o reprezint faptul c acizii grai cu
lan foarte lung sunt sintetizai la nivel cerebral, unde ndeplinesc un rol major n sinteza
mielinei.
n ceea ce privete oxidarea lipidelor la nivelul creierului, o importan particular o
reprezint oxidarea acizilor grai la nivelul peroxizomilor, deoarece la acest nivel se
31
oxideaz (-oxidare) acizii grai cu lan foarte lung (n cantitate mare n SNC) i acidul
fitanic (din diet). Astfel, afeciunile care implic biogeneza peroxizomilor (boala Refsum)
afecteaz sever celulele cerebrale datorit inabilitii de a metaboliza att acizii grai cu lan
lung ct i acizii grai ramificai. n cazul n care exist deficiene n metabolizarea
glicosfingolipidelor sau mucopolizaharidelor, lizozomii de la nivelul creierului sunt degradai,
conducnd la grade variate de disfuncii neurologice.
I.6.2. Sinteza mielinei
Conducerea rapid a impulsului nervos la nivelul SNC i SNP depinde de sinteza
mieline, o structur lipoproteic multistratificat sintetizat din membrana plasmatic a
celulelor gliale.
n sistemul nervos periferic (SNP), celula Schwann este responsabil de procesul de
sinteza a mielinei. Ea mielinizeaz n acelai timp doar o poriune a unui singur axon dintr-
un singur nerv. n acest scop, celula Schwann se rsucete de mai multe ori n jurul
axonului, formndu-se n acest fel teaca de mielin multistratificat. n SNC, mielinizarea o
realizeaz oligodendrocitul. Spre deosebire de celula Schwann, oligodendrocitele
mielinizeaz poriuni din numeroi axoni (pn la 40) prin extinderea unor prelungiri fine
care se rsucesc de multiple ori n jurul axonului. Astfel, axonii din SNC sunt nconjurai
doar de membrana oligodendrocitelor, n timp ce axonii din SNP sunt nconjurai de toat
celula Schwann.
O imagine de ansamblu a procesului de mielinizare este prezentat n figura
14.Pentru meninerea structurii mielinei, oligodendrocitul sintetizeaz o cantitate de lipide
egal cu de 4 ori propria greutate.
32
Figura.14. Diagram ce reprezint celula Schwann rsucit n jurul unui axon, cu
formarea tecii de mielin. Expansiunile reprezint o poriune a tecii de mielin. Este
reprezentat mielina SNC. Mielina SNP este similar, cu excepia proteinei Po care
nlocuiete PLP (proteina proteolipidic de la nivelul SNC). De remarcat c exist multiple
straturi de mielin ce nconjur axonul; PLP protruzioneaz la nivelul spaiului extracelular
contribuind la compactarea membranelor prin interaciuni hidrofobe. MBP (proteina bazic a
mielinei) contribuie la stabilizarea structurii interne membranare.
33
neutre, formeaz legturi hidrofobe puternice, permind o strns mpachetare a tecii de
mielin. Coninutul membranar crescut n colesterol contribuie de asemenea la
compactarea strns, dar proteinele mielinei sunt i ele necesare la acest proces de
compactare strns.
I.6.2.2. Proteinele structurale ale mielinei
Straturile mielinei sunt meninute mpreun prin interaciuni proteine/lipide i
proteine/proteine i orice ntrerupere poate conduce la demielinizare. Cu toate c att n
SNC ct i n SNP se gsesc numeroase proteine, vom descrie doar proteinele majore.
Diferite n SNC fa de SNP.
La nivelul SNC se gsesc dou proteine majore, care constituie 60-80% din totalul
de proteine i anume proteina proteolipidic (PLP) i proteina bazic mielinic (MBP).
PLP este o protein foarte hidrofobic care formeaz agregate mari n soluie
apoas i este relativ rezistent la proteoliz. Are o greutate molecular de 30.000 D. PLP
prezint o secven nalt conservat n cadrul speciilor. Se crede c rolul su const n
iniierea formrii i stabilizrii structurii multistratificate a mielinei.
Proteinele bazice ale mielinei reprezint de fapt o familie de proteine. Spre deosebire
de PLP, MBP sunt uor extrase din membran i sunt solubile n soluie apoas. Nu
prezint structur teriar i are o greutate molecular de 15.000 D. MBP este localizat la
nivelul feei citoplasmatice a membranelor mielinei. Anticorpii direcionai mpotriva MBP pot
determina, n mod experimental encefalomielita alergic, care a devenit un model
experimental pentru nelegerea sclerozei multiple, cea mai cunoscut afeciune
demielinizant.
n SNP, proteina major a mielinei este Po, o glicoprotein care reprezint mai mult
de 50% din coninutul proteic al mielinei SNP. Are o greutate molecular de 30.000 D, la fel
ca i PLP. Se crede c Po joac acelai rol structural, de meninere a structurii mielinei, ca
i PLP n SNC. SNP conine i el proteine bazice ale mielinei, cu unele similariti dar i
diferene fa de MBP din SNC. n SNP, proteina major asemntoare MBP a fost
denumit P2.
34
cheie. Cauza SM nu este cunoscut cu exactitate nc, dar se presupune c este un
eveniment ce induce producerea de autoanticorpi direcionai mpotriva tecii de mielin.
Este interesant distribuia geografic a bolii, pacienii fiind concentrai n regiunile nordice
i sudice ale globului, incidena fiind aproape nul la ecuator.
Formele clinice sunt variabile, de la foarte uoare i inaparente la foarte grave, rapid
progresive i letale. Cea mai cunoscut este forma clinic caracterizat prin alternarea
perioadelor de acutizare i remisiune. n timp, alterrile acumulate de-a lungul anilor nu mai
pot fi reparate, iar remisiunile se produc din ce n ce mai rar. Tratamentele existente intesc
aceast form de boal.
Injuria primar n SM este reprezentat de distrugerea mielinei din materia alb a
SNC, fapt ce interfer cu transmiterea impulsurilor nervoase de-a lungul ariei demielinizate
(stratul izolator este pierdut). SNC compenseaz prin stimularea oligodendrocitelor s
remielinizeze axonii afectai. Dup ce axonii sunt remielinizai, apare remisiunea. Frecvent,
remielinizarea determin ncetinirea conducerii nervoase datorit reducerii grosimii tecii de
mielin (viteza este proporional cu grosimea tecii de mielin) sau scurtrii distanelor
internodale (potenialul de aciune trebuie s se propage de mai multe ori). Eventual, cnd
devine prea dificil remielinizarea unor arii prea largi, neuronul se adapteaz prin
modularea pompelor ionice de-a lungul membranelor, favoriznd astfel conducerea
nervoas de-a lungul axonilor demielinizai. Cnd i aceast adaptare devine ineficient,
boala progreseaz.
Tratamentul SM se bazeaz pe blocarea aciunii sistemului imunitar. Deoarece
anticorpii direcionai mpotriva componentelor celulare par s fie responsabili de progresia
bolii (indiferent de factorul care a declanat producerea de autoanticorpi), agenii care
interfer cu rspunsul imun par s aib diferite rate de succes n inducerea i meninerea
remisiunii.
Exist i alte boli demielinizante, relativ rare, a cror cauz este mai bine cunoscut.
Mutaii motenite genetic cu transmitere autozomal dominant (expresia unei singure alele
mutante conduce la manifestarea bolii) ale Po (proteina mielinic major a SNP) conduce la
o variant a polineuropatiei Charcot-Marie-Tooth. Mutaii ale PLP (proteina mielinic major
n SNC) determin boala Pelizaeus-Merzbacher i paraplegia spastic de tip 2, X-linkat.
Aceste mutaii induc o gam variat de fenotipuri, de la absena dezvoltrii motorii i moarte
precoce pn la tulburri uoare ale mersului. Manifestarea unui anumit fenotip depinde de
localizarea precis a mutaiei n cadrul secvenei proteice. Alterarea funciei fie a Po, fie a
PLP determin demielinizare, cu manifestrile clinice subsecvente.
35
I. 7. BIOCHIMIA LICHIDULUI CEFALO-RAHIDIAN
Sistemul nervos central (SNC) este aprat de cele 3 nveliuri meningiene: pia mater
i arahnoida, cu cele dou foie parietal i visceral i dura mater. Pia mater mpreun
cu arahnoida formeaz leptomeningele, iar dura mater, pahimeningele. Leptomeningele
prezint formaiuni vascularizate cu rol n secreia i absorbia LCR (lichidul cefalo-rahidian
sau cerebro-spinal). La nivelul ventriculilor laterali se gsesc plexurile coroide, unde are loc
elaborarea i secreia LCR, iar la nivelul foiei parietale a arahnoidei, se gsesc vilii
arahnoidieni, prin care LCR se resoarbe prin sinusurile venoase, mai ales la nivel
paravertebral. ntre pia mater i arahnoid se constituie spaiul subarahnoidian ocupat de
LCR. Acest spaiu nu este uniform, formnd 2 cisterne sau lacuri: cisterna mare la baza
craniului, locul de elecie pentru puncia suboccipital i cisterna medular inferioar, nivel
la care se practic puncia lombar.
Astfel, LCR este elaborat la nivel central (plexurile coroide din ventriculii laterali, mai
puin din ventriculii III i IV) printr-un proces complex de secreie activ, nefiind un simplu
ultrafiltrat plasmatic i se reabsoarbe la nivel periferic, prin intermediul vilozitilor
arahnoidiene din sinusurile venoase durale, paravertebrale, printr-un flux unidirecional,
vilozitile acionnd ca i valve. Acest sens unic al circulaiei LCR explic slaba eficien a
inoculrii intrarahidiene a antibioticelor.
I.7.1. Rolul fiziologic al LCR
- mecanic: de amortuzarea ocurilor i lubrifiere medular
- metabolic: rol nutritiv slab precum i de eliminare a produilor de catabolism
cerebral
- datorit barierei hematoencefalice, spaiul subarahnoidian devine un adevrat
sanctuar, care se comport independent de restul mediului intern (n condiii
normale, n absena inflamaiilor severe, nu penetreaz proteinele, anticorpii
circulani, celule sangvine, etc). Medicamentele pot penetra acest spaiu n mod
difereniat, ptrunderi mai bune obinndu-se n cazul meningelui inflamat i
antibioticelor liposolubile i cu grad mai redus de cuplare cu proteinele
plasmatice. Aa de exemplu o bun penetrabilitate prezint: cloramfenicolul,
cotrimoxazolul, rifampicina, tuberculostaticele n general, acyclovirul,
fluconazolul, vidarabina, moxalactamul, etc. Doar prin meningele inflamat pot
ptrunde cefalosporinele de generaia a IIIa i a IVa, imipenem, piperacilina,
ticarcilina, ampiciline, penicilina administrat n doze mari vancomicin,
fluorchinolone. Nu ptrund cefalosporinele de generaia Ia i aIIa, macrolidele,
36
aminoglicozidele, clindamicina, lincomicina. Pentru creterea penetrabilitii,
antibioticele se folosesc n doze mari.
- O alt particularitate const n faptul c spaiul subarahnoidian constituie un
teritoriu cu slab rezisten fa de germeni, activitatea opsonic, antibacterian
la nivelul LCR fiind foarte redus; n LCR imunoglobulinele sunt n concentraii
reduse, iar activitatea complementului sczut.
37
- glucoza (glicorahia) reprezint aproximativ jumtate din valoarea glicemiei, n
general 40 60 mg/dl. Valorile glicorahiei urmeaz valorilor glicemiei, hiperglicemia fiind
nsoit de hiperglicorahie i respectiv hipoglicemia se nsoete de hipoglicorahie. n
absena hipoglicemiei, hipoglicorahia semnific procese patologice locale
(meningoencefalite bacteriene, tuberculoase, procese maligne cerebrale).
- cloruri 700 mg/dl (110-130 mmol/l); Na+ 149 mEq/l; clorurorahia este sczut n
meningitele bacteriene i mult sczut n meningitele TBC.
- pH 7,29-7,33, inferior celui sanguin
- acid lactic 0,99-2,88 mEq/l, crescut n meningite bacteriene,TBC, procese maligne
- acid piruvic 0,087-0,143 mEq/l
Ci de abord. Extragerea unei mici cantiti de LCR n scop diagnostic se realizeaz
n principal prin puncie lombar, procedeu introdus de Quincke n 1890 i folosit i astzi,
n special pentru diagnosticul meningoencefalitelor. LCR coboar pn la nivelul S2, n timp
ce mduva spinrii se oprete la L2, de aceea pentru o siguran deplin, puncia lombar
se practic la nivelul spaiilor intervertebrale L4-L5. n acest scop, cu bolnavul n poziie
eznd sau decubit lateral, dup iodarea regiunii lombare i a minilor, n condiii de
asepsie perfect, se ptrunde cu acul de puncie (cu mandren) n spaiul dintre vertebrele
L4-L5 (sau L3-L4), avnd ca i reper crestele iliace; se strbate perpendicular pielea pe
linia median, imediat deasupra apofizei spinoase a vertebrei inferioare, apoi se ndreapt
acul puin oblic n sus i se penetreaz esutul subcutanat i ligamentele, ajungndu-se la
spaiul epidural, unde se ntlnete rezistena durei mater, dup care se ptrunde n spaiul
subarahnoidian; se ndeprteaz mandrenul i LCR se scurge pictur cu pictur, pe ac,
n eprubete sterile (minim 3) care se trimit laboratorului pentru investigaii biochimice,
citologice, bacteriologice. Odat puncia terminat, se retrage acul, se iodeaz locul
punciei i se recomand pacientului s rmn n decubit ventral, cu capul pe pern,
minim 1 or, pentru evitarea sindromului postpuncional (menigism).
n condiii de cloazonare a LCR i obturarea gurilor comunicante se poate practica
puncia suboccipital, puncia transfotanelar (la nou nscut) sau puncia ventricular n
neurochirurgie.
38
Investigarea LCR include examinarea:
- macroscopic
- biochimic
- imunologic
- citologic (identificarea celularitii LCR prin: numrare celule, identificare tipuri
celulare prezente)
- bacteriologic
- virusologic
39
Fractiunea electroforetic Valori normale (limite) (%)
Prealbumine 2-10
Albumine 45-71
Alfa-1-globuline 2-7
Alfa-2-globuline 2-9
Beta-1-globuline 4-16
Beta-2-globuline 1,5-11
Gama-globuline 5-14
- Imuno-electroforeza LCR/ser
o n mod normal raportul este de 1/200 ntre imunoglobulinele din LCR i
sangvine
o n cazul IgG serice pasante n LCR benzile de imunoglobuline sunt
uniforme
o n cazul sintezei intratecale avem benzi oligoclonale de IgG
o identificarea LDH (imuno-electroforez cu anticorpi anti-LDH)
1-2-5-6-7: LDH 4,5 crescute n cazul meningitelor bacteriene sau
carcinomatozelor
3-4: normal sau meningit decapitat prin antibioterapie
Reacie fals pozitiv n cazul hemoglobinei > 1 mg/l n LCR
40
- Analiza imunitii intratecale prin calculul sintezei intratecale (SIT)
o Transudat: creterea pasajului proteinelor serice prin alterarea barierelor
(HTA, arterite, etc). Cu ct alterarea este mai pronunat, cu att n
transudat apar proteine cu greutate molecular mai mare.
o Sinteza intratecal: producia local de proteine ale imunitii (anticorpi,
complement)de ctre loimfocite, macrofage i celule gliale.
o Calculul se face n funcie de nivelele serice, nivelele n LCR, greutatea
molecular
- Ex.: (IgG n LCR) [30 + ((Albumine n LCR 210) x (IgG serice))] / 60
Exemplu de imonodozaje
Proteine Limite Proteine Limite
normale normale
(mg/l) (mg/l)
Prealbumine 10-20 1-transferina 10-20
Albumine 126-294 C`3 2-4
1-antitripsina 5-15 C`4 1-2
1-glicoproteina acid 3-8 C3 proactivator 0,5-1
Apolipoproteina A1 2-4 IgA 1-3
Apolipoproteina A2 2-4 IgM 0,2-0,4
Fibronectina 2-4 IgG 15-30
2-ceruloplasmina 1-3 C1q 0,2-0,4
2-macroglobulina 1-3 Proteina C- 0,1-0,4
reactiv
41
Meningoencefalit Opalescent/ Aprox. >1000 PMN Sczut Sczut Transudat
bacterian purulent 1,5 2g/l inflamator
cu IgG
policlonale
Meningoencefalit Clar/ Mult 500 limfocite Mult Mult Crescut,
xantocrom crescuta monomorfe sczut sczut oligloclonal
TBC (glbui) 1-5 g/l
Procese maligne Clar/ Crescut Crescut Sczut Normal crescut
hemoragic (Mononucleare, oligloclonal
celule sau
carcinimatoase monoclonal
)
Scleroz n plci Clar Moderat Moderat Normal Normal IgG crescute
(uneori IgA
sau IgM),
profil
oligoclonal
Milioane de oameni sufera de boli mintale sau boli neurodegenerative cum ar fi boala
Parkinson (PD), Alzheimer, schizofrenie, depresie, dependenta, autism, dislexie si
dizabilitati de invatare. Acestea, pe langa alte boli, au nevoie de imbunatatirea
tratamentelor. Din pacate, intelegerea curenta a acestor dereglari este limitata. Este
probabil ca aceste dereglari(tulburari) sa fie rezultatul unei conglomerari de entitati, care
trebuie inca definite. Desi s-a inregistrat un progres in tratamentul tulburarilor phisiatrice,
multi pacienti nu raspund la terapiile curente. De asemenea, nu se poate prezice care
pacient va raspunde la care tratament. Aceasta variabilitate inerenta cuplata cu diferente
intrinsece din farmacologie, este factorul de baza care afecteaza incapacitatea de a prezice
felul in care un anumit pacient va raspunde la o terapie selectata. Aceasta incertitudine este
stresanta pentru pacienti, familie si clinicieni din cauza necesitatii schimbariilor repetate a
medicamentatiei. De aici deriva necesitatea urgenta a unor biomarkeri validati, care sa
42
stabileasca diagnosticul, sa indrume alegerea medicamentatiei, si sa prezica cu incredere
raspunsul la tratament.
Pentru a intelege functionarea si complexitatea creierului, sunt necesare noi idei, noi
abordari si noi tehnologii. Genomica, incluzand genomica comparativa, expresia genelor,
proteomica, monitorizarea activitatii neuronilor individuali prin inregistrare cu electrozi
multiplii, reprezinta abordari puternice la studiul dereglarilor neurologice. Metabolomica,
cea mai noua abordare omica, ofera mijloace de stabilire a perturbatiilor cailor matabolice
sau anumitor retele, in diferite boli umane. Metabolomul defineste starea metabolica ca
fiind dirijata de interactiuni nete intre gene si mediu, si ofera informatii care fac legatura intre
genotip si fenotip. Metabolomica ofera piesa lipsa a sistemului de abordare a studiului
tulburarilor sistemului nervos central (SNC). Semnaturile metabolice ale tulburarilor SNC
contribuie la identificarea biomarkerilor pentru diferite boli, progresiei bolilor sau raspunsului
la diverse terapii. Aditional, metabolomica ofera mijloace importante utilizate in procesul de
descoperire si dezvoltare a medicamentelor, prin oferirea de aspecte biochimice detaliate
despre mecanismul de actiune, potentialul terapeutic si efectele secundare ale
medicamentelor.
43
I.8.2. METABOLOMICA : CONCEPT, MIJLOACE SI PROCESE
44
(MND-motor neuron disease), depresie, schizofrenie, Alzheimer, boli cardiovasculare si boli
ale arterelor coronare, hipertensiune, hemoragie subarahnoida, preeclampsie, diabet de tip
2, cancer hepatic, cancer ovarian, cancer mamar si HD (Huntington Disease). Aceste
semnaturi sunt alcatuite din zeci de dereglari ale metabolitilor, ale caror concentratii ce se
modifica in starea patologica sau in urma expunerii medicamentoase. Ca rezultat, analiza
acestor semnaturi si componentii acesteia, pot da informatii referitoare la patofiziologia bolii.
Alegerea instrumentelor analitice metabolomice si a soft-urilor este specifica
obiectivului, deoarece fiecare instrument are roluri specifice. De exemplu, cromatografia de
lichide, urmata de detectie coulometrica array se utilizeaza la identificarea semnaturilor
metabolice in ALS, si recent PD. Este excelenta pentru reprezentarea cailor
neurotransmitatorilor ( de exemplu dopamina si serotonina) si a cailor implicate in stresul
oxidativ. Gaz-cromatografia cuplata cu spectroscopia de masa este des utilizata in analiza
subseturilor de lipidelor. Cromatografia de lichide si spectroscopia de masa sunt tehnici
sensibile, ce pot fi utilizate pentru caracterizarea, identificarea si cuantificarea unui numar
mare de compusi din probele biologice, iar concentratia metabolitilor poate oferi un numar
mare de informatii referitoare la patofiziologia bolilor. RMN este folosita pentru determinarea
structurii metabolitilor, fiind folosita cu succes in studiile toxicologice. Aplicatiile RMN
furnizeaza schite (harti) detaliate ale retelelor sau ale cailor biochimice.
Probele de interes (plasma, lichidul cefalo-rahidian, biopsie) se colecteaza, apoi
moleculele mici sunt extrase din proba si sunt analizate folosind tehnici care separa si
cuantifica moleculele de interes asa cum s-a mentionat mai sus. Aceste tehnici se pot
combina in vederea imbunatatirii separarii si extinderii informatiilor colectate despre analit.
Aceste seturi de date trebuie apoi colectate si organizate, apoi sunt analizate de unul sau
mai multe softuri proiectate pentru studiul seturilor de date, care sunt mult prea extinse
pentru evaluarea umana. Este generata apoi o baza de date pentru pacientii bolnavi si alta
pentru control, sau pentru aceeasi pacienti inainte sau dupa terapia medicamentoasa.
Aceste baze de date includ nivele ale metabolitilor detectabili si identitatile (sau o descriere
a proprietatilor) metabolitilor (potential de oxido-reducere, raport masa/sarcina).
Utilizarea softurilor pentru analiza informatiilor continute intr-o baza de date poate:
(1) identifica semnatura unei boli (compusi care evidentiaza stadiul unei boli); (2) prezice
clasa (patologic sau control, pre sau post medicamentatie ); (3) identifica grupuri
nerecunoscute in date; (4) identifica interactii intre variabile; (5) plasa aceste variabile in cai
biochimice cunoscute.
45
In ultima jumatate a secolului, neurochimistii au identificat o serie de molecule in
creier, care au importante functii de transmitere, cum ar fi dopamina (DA), epinefrina,
norepinefrina (NE), serotonina, acetilcolina (Ach), acidul -amino-butiric (GABA), substanta
P si multe altele. Identificarea acestor molecule au necesitat experimente tehnice dificile, si
odata identificati acesti produsi, cercetarea a trecut la intelegerea mecanismelor lor de
reglare, sinteza si eliberarea lor, precum si caile care le-au generat. Astazi metabolomica
ofera mijloace noi si puternice pentru studiul simultan si cuantitativ al sute de astfel de
molecule cheie. Acum putem investiga aproape in intregime caile neurotransmitatorilor
cheie, cum ar fi dopamina si serotonina, care ne permit a analiza mai detaliata a implicatiilor
acestor cai in tulburarile SNC si pentru a schita mai clar mecanismul de actiune al
medicamentelor in aceste cai.
Este evident ca perturbatiile cailor metabolice contribuie la patogeneza tulburarilor
SNC. Metabolomica, prin mijloacele sale, ofera detaliile acestor perturbatii si implicarea
acestora in patogeneza bolii si raspunsul la terapie. Aplicatiile metabolomicii in studiul
tulburarilor SNC includ: (1) informatii suplimentare despre mecanismul bolii; (2)
indentificarea prognosticului, diagnosticului si markeri surogat pentru un anumit stadiu al
bolii; (3) abilitatea de subclasificare a bolilor , bazata pe profilul metabolic; (4) identificarea
biomarkerilor pentru stabilirea raspunsului fenotipic la medicament si stabilirea efectelor
metabolice secundare (farmacometabolomica); (5) mijloace suplimentare utilizate in
procesele de descoperire si dezvoltare a medicamentelor
Psihiatria si neurologia au intampinat dificultati la dezvoltarea de biomarkeri. Initial
studiile de biomarkeri s-au bazat pe markeri trombocitari, metaboliti din lichidul
cefalorahidian, tesuturi prelevate la autopsia victimelor de suicid sau care au decedat de
cauze naturale, sau pe tehnici cum ar fi EEG, CT, MRI, MRS si PET. Toate aceste tehnici
sunt limitate, in special datorita faptului ca sistemele de clasificare ale bolilor au evoluat si
s-au dezvoltat de-a lungul anilor. Desi s-au realizat studii ale metabolitilor lichidului
cefalorahidian, la ora actuala nu exista un nivel de referinta standard pentru acesti
metaboliti. Aceasta se datoreaza faptului ca studiile individuale pot masura doar cativa
metaboliti simultan si masuratorile sunt realizate doar la indivizii bolnavi si se studiaza doar
un numar relativ mic de pacienti control. Astfel, exista o variatie larga a valorilor normale
de la studiu la studiu. Metabolitii LCR ventriculari si LCR lombari nu sunt identici si nu este
clar care se coreleaza mai bine cu biochimia creierului. Pentru multi astfel de metaboliti
corelatiile dintre plasma si LCR nu au fost bine stabilite. In plus, complexitatea marita a
46
creierului (in comparatie, de exemplu cu muschii sau inima) face dificila identificarea unor
biomarkerilor de incredere. Astfel este necesar un studiu sistematic corelativ al metabolitilor
plasmei si LCR, utilizand o tehnologie cum ar fi metabolomica care permite estimarea
globala a semnaturilor metabolitilor.
Crearea unor banci de creier prin proceduri rapide de autopsie, la diferite centre, a
facut posibila, la ora actuala, disponibilitaea probelor tisulare, care pot fi analizate , in cazul
unor boli ca Alzheimer, depresii majore, schizofrenie, dementa cu corpi Lewy, dementa
fronto temporala. Multe experimente clinice psihiatrice colecteaza probe de la pacienti bine-
caracterizati, inainte si dupa tratament medicamentos sau placebo. Este interesant de
remarcat ca metabolomica poate oferi mijloace de studiu a variatiei profilelor metabolice in
randul pacientilor si are ca rezultat subclasificarea mai eficienta a pacientilor si asigura
fenotipuri intermediare bine-definite ce pot descrie fenotipuri clinice observate de clinicieni.
Aceasta poate avea un impact semnificant asupra designului experimentelor clinice si
rezultatelor deoarece se poate incepe evaluarea felului in care subpopulatiile de pacienti
raspund la terapie, si se pot selecta medicamentele care sunt mai eficiente pentru fiecare
grup. Semnaturile metabolice a antidepresivelor (clasa SSRI) sunt catalogate in rspunsuri
bune sau nu, pentru a obtine informatii care sa conduca la o intelegere mai profunda a
cailor implicate in raspunsul si variatia raspunsului la aceste terapii. Asocierea semnaturilor
cu raspunsul la tratament, si asocierea semnaturilor cu dezvoltarea unor fenomene
metabolice adverse, poate conduce la dezvoltarea de biomarkeri folositori care ajuta la
selectarea medicamentului corect pentru fiecare pacient, deci conducand la terapii
personalizate. Intr-adevar, iese la iveala un nou domeniu, denumit farmacometabolomica
(sau farmacometabonomica) care completeaza domeniul farmacogenomicii.
47
Un studiu recent a urmarit identificarea de biomarkeri in plasma, utilizati in diagnosticul PD.
Metabolitii 8-OHdG si glutationul prezinta valori ridicate la pacientii PD in timp ce valorile
acidului uric sunt semnificativ scazute. Atat glutationul cat si acidul uric sunt cunoscuti ca si
antioxidanti. Cu cat nivelul acidului uric este mai ridicat, cu atat riscul pentru PD si progresia
bolii sunt mai scazute. Nivelul glutationului este mai redus in substanta neagra din tesutul
cerebral post mortem al pacientilor PD. In plasma pacientilor PD, s-a gasit un nivel crescut
al formei oxidate a glutationului. Modificarea concentratiilor si raportului intre forma oxidata
si cea redusa a glutationului reflecta probabil un raspuns la distrugerea oxidativa.
Trebuie observat faptul ca medicamentele folosite in tratamentul PD, Sinemet,
agonisti ai receptorilor dopaminergici, sau combinatii ale acestora induc o schimbare
partiala a profilului metabolic, la pacientii PD, deoarece devin mai asemanatori cu controlii.
O mare importanta ar avea-o identificarea timpurie a unor modificari biochimice si a
unor semnaturi unice pentru pacientii aflati in stadiul incipient al bolii sau chiar identificarea
presimptomatica. S-ar realiza astfel screeningul rudelor de gradul I, pacientilor cu anosmie
si pacientilor purtatori ai factorilor de risc genetic. Daca acesti pacienti ar putea fi identificati
din timp, s-ar putea incepe incercarile de prevenire a bolii.
S-au utilizat abordari metabolomice tinta sau aleatoare pentru studiul tulburarilor psihice.
Sunt testate ipotezele despre dereglarea cailor neurotransmitatorilor cum ar fi dopamina
sau serotonina, a cailor lipidelor si apar noi ipoteze despre cai ce pot fi implicate in boala
sau progresia bolii. In continuare sunt prezentate astfel de studii.
48
observata intre pacientii recuperati si cei bolnavi a constituit-o marirea concentratiei acidului
3-hidroxi-butanoic.
Aceste descoperiri sugereaza ca starea de depresie se poate asocia cu modificari
ale metabolismului lipidelor, neurotransmitatorilor, si ca tratamentul cu antidepresive
ajusteaza anumite cai metabolice (modificate in caz de boala), lucru demonstrat prin faptul
ca pacientii aflati in recuperare prezinta un profil metabolic similar cu cel al controlilor, si nu
cu cel al pacientilor cu depresie.
Recent, s-au realizat cateva studii metabolomice, cu scopul de a contura mai bine
caile modificate in schizofrenie, si a gasi un tratament pentru aceasta. S-au masurat peste
300 de metaboliti lipidici polari si nepolari (lipide cu rol structural sau energetic) pentru
evaluarea globala a modificarilor survenite in metabolismul lipidic in schizofrenie, inainte si
dupa tratament cu trei antipsihotice comune: olanzapina, risperidona si aripiprazol.
Lipidomica este o ramura a metabolomicii care se focalizeaza pe evaluarea
comprehensiva a biochimiei lipidelor. In acest studiu s-au determinat profilele lipidelor
pentru 50 de pacienti suferind de schizofrenie, inainte si dupa 2-3 saptamani de tratament
cu olanzapina, risperidona si aripiprazol.
Inaintea tratamentului cu medicamente, modificari majore au fost observate in doua
clase fosfolipidice, si anume fosfatidiletanolamine (PE) si fosfatidilcoline (PC), sugerand
faptul ca in cazul pacientilor suferind de schizofrenie, se modifica fosfolipidele implicate in
structura si functiile membranei. (figura 7). Aceasta a confirmat afirmatiile anterioare dar
ofera aspecte biochimice suplimentare ale perturbarilor. Au fost observate perturbatii
biochimice la subclasele -3 si -6 ale PE si PC. De asemenea s-au observat si schimburi
intre acizi grasi saturati si polinesaturati.
Efectele a trei medicamente antipsihotice, olanzapina, risperidona si aripiprazol
asupra cailor metabolice ale lipidelor au fost evaluate prin compararea profilelor metabolice
initiale si post-tratament. Este interesant de remarcat faptul ca fiecare medicament analizat
a prezentat o semnatura unica, sugerand faptul ca desi aceste medicamente au in comun
anumite efecte, alte efecte sunt specifice pentru fiecare medicament in parte. Concentratiile
PE care au fost suprimate initial la pacientii cu schizofrenie au fost evaluate dupa
tratamentul cu toate cele trei medicamente. In orice caz, olanzapina si risperidona au
afectat o gama mai larga de clase lipidice decat aripiprazolul (concentratiile a 50 de lipide s-
au marit in urma administrarii acestor medicamente, dar nu si in cazul terapiei cu
aripiprazol). Aripirazolul a indus modificari minime in lipidom, prezentand efecte secundare
limitate. Terapia cu olanzapina si risperidona au dus la cresteri ale concentratiilor
49
triacilglicerolilor si descresteri ale concentratiilor acizilor grasi, modificari neinregistrate in
urma terapiei cu aripirazol.
50
sunt reprezentate cu rosu iar cele cu valori scazute cu verde. In (b) si (c), valorile crescute
ale metabolitilor in timpul tratamentului sunt reprezentate cu rosu iar cele scazute cu verde.
Intensitatea fiecarei culori corespunde diferentelor aparute: cu cat intensitaea este mai mica
(culoare mai deschisa) cu atat diferentele sunt mai mari. Figura prezentata cu acordul
Molecular Psychiatry.Kaddurah-Daouk et al, 2007
Metabolomica in dependenta
51