Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
EDITURA PIM
Iaşi – 2008
Prefaţă
1
Cu puţine excepţii, cartea de faţă conţine numai informaţii de specialitate de uz comun
(publice şi bine-cunoscute, inclusiv conţinutul ilustraţiilor), care se regăsesc în diverse
forme în multe lucrări didactice (unde nu sunt citate studiile originale în cauză), un grad de
asemănare cu aceste lucrări fiind inevitabil. In limitele impuse de acurateţea informaţiei,
textul, tabelele şi figurile din volumul de faţă sunt originale sub aspectul formei,
asigurându-se astfel respectarea proprietăţii intelectuale (indicaţii bibliografice succinte au
fost introduse numai unde a fost cazul).
CUPRINS
1
Etimologia termenului fiziologie, introdus de Fernel în 1542, conduce spre înţelesul de
“ştiinţa principiilor vieţii”.
1
FIZIOLOGIE CELULARA
compoziţia sisteme
mediului intern funcţionale
2
FIZIOLOGIE CELULARA
mediu extern
inima stângă
aport O2
aparat respirator
eliminare CO2
inima dreaptă
celule
3
FIZIOLOGIE CELULARA
2. Organitele celulare
Celula este alcătuită din membrană, citoplasmă şi nucleu (fig. 3).
Componenta principală a membranei celulare este plasmalema, un bistrat
fosfolipidic în care se găsesc proteine periferice şi integrale, la care se
adaugă la exterior glicokalixul (cu compoziţie predominant glicoproteică),
iar la interior specializări citoplasmatice submembranre (citoscheletul sub-
membranar, reticulul endoplasmic superficial, etc.). Citoplasma e compar-
timentată prin sistemul de membrane fosfolipidice intracelulare. Organitele
delimitate de membrane sunt de tip vezicular-canalicular: mitocondriile,
veziculele de endocitoză, lizozomii, reticulul endoplasmic, aparatul Golgi,
veziculele de exocitoză. Alte organite (nedelimitate de membrane) pot fi
granulare, cum sunt ribozomii şi diverse incluziuni citoplasmatice, sau
fibrilare, grupate într-un ansamblu morfo-funcţional numit citoschelet.
4
FIZIOLOGIE CELULARA
2
Rolurile reticulului endoplasmic, lizozomilor şi aparatului Golgi în dinamica celulară a
membranelor fosfolipidice sunt descrise într-un capitol separat.
5
FIZIOLOGIE CELULARA
6
FIZIOLOGIE CELULARA
7
FIZIOLOGIE CELULARA
3
Detaliile chimice referitoare la metabolismul energetic şi intermediar sunt subiect clasic
de biochimie; aici sunt prezentate unele aspecte relevante din punct de vedere funcţional
8
FIZIOLOGIE CELULARA
NAD+ NADH
CICLUL
KREBS OXIDAZE Ö Ö H+
FAD FADH2 Ø
e-e
glicoliza Ø
citosolică lanţ Ø
Ö piruvat Ö Acetil-CoA
respirator Ø
Ø
O2 +4H++4e-
NAD+ NADH = H2 O
BETA
OXIDAREA ATP-sintaza
FAD FADH2
H+
Acil-CoA ADP + P
ATP
Fig. 5. Coenzimele respiratorii în stare redusă furnizează energia pentru
menţinerea pH-ului scăzut din spaţiul intermembranar (SIM). Gradientul
protonic asigură funcţionarea ATP-sintazei din membrana internă.
9
FIZIOLOGIE CELULARA
4
Detalii privind ciclul celular sunt prezentate separat (cap. 6).
5
Organismele unicelulare sunt eucariote sau procariote, după cum materialul genetic,
reprezentat de acidul dezoxiribonucleic (ADN), este sau nu delimitat de o membrană, adică
celula prezintă un nucleu tipic sau doar un nucleoid.
10
FIZIOLOGIE CELULARA
11
FIZIOLOGIE CELULARA
3. Ciclul celular
Ciclul celular reprezintă ciclul de viaţă al unei celule, din momentul în
care ea se formează prin diviziunea celulei progenitoare până când se divide
la rândul ei. Durata acestui ciclu variază de la 2-3 ore la organismele
unicelulare, precum bacterii sau fungi, până la aproximativ 24 ore la celulele
mamifere în cultură6. Cu cât gradul de diferenţiere al celulei devine mai
6
Există diferenţe semnificative între ciclul celular al celulelor procariote (fără nucleu
organizat) şi cel al eucariote (cu nucleu individualizat). Omul aparţinând celei din urmă
categorii, referinţele din acest text vor fi făcute exclusiv la ciclul celular al eucariotelor.
12
FIZIOLOGIE CELULARA
semnificativ, cu atât ciclul său vital este mai diferit. Organismele unicelulare
se divid fără oprire până când saturează spaţiul sau consumă toate resursele
din mediu, în vreme ce celulele diferenţiate ale organismelor superioare au
cicluri celulare ce variază de la câteva zile până la aproape un secol (la om).
De exemplu, celulele măduvei hematogene, celulele spermatice sau ale epi-
teliului digestiv se divid necontenit, în vreme ce neuronii, celulele miocar-
dice sau celulele fotosenzitive retiniene pot supravieţui de la începutul până
la sfârşitul vieţii individului.
Toate fenomenele care contribuie la creşterea şi dezvoltarea unei
celule, dublarea masei celulare, dublarea numărului de organite şi a
materialului genetic în vederea diviziunii, toate acestea sunt guvernate de
către genele ce controlează ciclul celular, controlând în final dezvoltarea
cantitativă şi calitativă a unui ţesut. Orice modificare în secvenţele ciclului
celular, orice dereglare a controlului temporal pe care îl exercită genele
ciclului celular duce la pierderea caracteristicilor celulare (neoplazie) şi la
proliferare necontrolată, cunoscută sub denumirea generică de cancer.
13
FIZIOLOGIE CELULARA
14
FIZIOLOGIE CELULARA
3.2. Faza G1
În celulele proliferante G1 este perioada dintre apariţia celulei şi
iniţierea sintezei de ADN. La vertebrate celulele în G1 au un număr diploid
de cromozomi (2n), câte unul moştenit de la fiecare părinte. După cito-
kineză, celulele sunt de obicei la jumătatea dimensiunilor celulei-mamă, şi
în timpul fazei G1, vor creşte până la dimensiunile normale. In această
perioadă cea mai mare parte a genelor implicate în progresia ciclului celular
sunt inactive. Dacă se primesc stimuli antiproliferativi, sau aportul de
nutrimente este deficitar, celulele vor evolua către diferenţiere terminală,
sau vor ieşi din ciclu pentru a intra în G0.
Tranziţia G0/G1 este dependentă de existenţa de semnale mitogene
exterioare şi de responsivitatea celulei la acestea. Cea mai comună cale de
transducţie a semnalului mitogen este calea protein-kinazei activate de
mitogeni (MAP-kinaza). MAPK va activa o cascadă enzimatică ce va duce
la activarea căii CDK (kinaze ciclin-dependente). Ciclinele sunt o serie de
subunităţi reglatoare ale protein-kinazelor heterotrimerice ce controlează
secvenţa evenimentelor ciclului celular. Ele se cuplează pe nişte subunităţi
catalitice numite kinaze ciclin-dependente (CDK-uri), care altfel nu au
activitate kinazică. Fiecare CDK se poate asocia cu mai multe cicline, iar
această asociere determină care din proteinele ciclului celular vor fi
fosforilate de acel complex anume.
15
FIZIOLOGIE CELULARA
16
FIZIOLOGIE CELULARA
INHIBIŢIE de
CONTACT CKI CDK4 MAPK Ras
inhibiţie
fosforilare RB+P
RB+
E2F-1
E2F-1
ADN
Fig. 9. Mecanismele de oprire a proliferării celulare în punctului de control R;
CKI - inhibitori de ciclin-kinaze; GF - factor de creştere; RB - proteina retinoblastom
3.3. Faza S
Faza S se numeşte astfel datorită fenomenelor de sinteză de ADN care
au loc în această perioadă. Este cea mai importantă fază a ciclului celular;
mitoza nu se poate realiza fără un număr corect şi complet de cromosomi.
17
FIZIOLOGIE CELULARA
18
FIZIOLOGIE CELULARA
ADENINA
ADN, ARN
(purinică)
GUANINA
(purinică) ADN, ARN
CITOZINA
ADN, ARN
(pirimidinică)
TIMINA
ADN
(pirimidinică)
URACIL
ARN
(pirimidinică)
19
FIZIOLOGIE CELULARA
numit lanţul 5` sau lanţul 3`, în funcţie de cuplarea fosfatului. Lanţurile sunt
antiparalele şi redundante. Sursa de nucleotide pentru sinteză este repre-
zentată de nucleotide libere din citosol, trifosforilate. Legăturile fosfat
macroergice din poziţiiile 5` şi 3` îşi transferă energia cu ajutorul poli-
merazei dedicate, pentru cuplarea bazei azotate la locul ei.
Replicarea lanţului se face pornind din puncte bine stabilite, numite
origini. Există multe puncte de origine pe ADN-ul uman. Din aceste puncte,
lanţul se desface sub acţiunea helicazei, ducând la „bifurcaţia de replicare”
(fig. 12), care se mişcă pe măsură ce lanţul este sintetizat şi apoi reasamblat.
Enzimele care sintetizează ADN se numesc
ADN-polimeraze. Acestea sunt capabile de a adăuga
noi baze azotate numai pe braţul 5` → 3`, în aşa fel
încât un braţ creşte continuu iar celălalt rămâne în
urmă, numit „lanţ rămas în urmă” (lagging strand),
pentru că polimerazele nu pot sintetiza ADN în
direcţie 3` → 5`. Ca urmare, se sintetizează bucăţi de
ADN, numite fragmente Okazaki, ce sunt completate
cu ARN, sunt întoarse şi cuplate la lanţul rămas în
urmă cu ajutorul unor enzime numite „ligaze”.
Această etapă este cea mai supusă riscului de defecte.
Fenomenul este mult mai complicat decât descrierea
de mai sus, întrucât intervin şi complicaţii sterice,
tendinţe de spiralizare prematură, apariţia de structuri
secundare etc. care se rezolvă cu ajutorul topoizo- Fig. 12. Bifurcaţie
de replicare
merazelor, proteinelor-pensă şi altele.
Deoarece un singur cromosom uman poate ajunge la 150 x 106 perechi
de baze, iar viteza medie de replicare este de 20 - 100 baze/secundă, pentru
a se replica un cromosom ar trebui o durată de minim 2000 de ore, în vreme
ce faza S la celulele umane durează în jur de 8 ore, ca urmare există mai
multe puncte de origine. Secvenţa dintre două puncte de origine vecine se
replicon. Există aproximativ 60.000 de origini în întregul genom uman.
Replicarea ADN nu este neapărat sincronă în totalitatea sa. Numai 10-15%
din replicani sunt activi la un moment dat din faza S şi există în genomul
uman ~1000 zone cu caractere temporale distincte în timpul fazei S.
La eucariote replicarea porneşte de la origini şi se opreşte când ajunge
la alt punct de origine. Dar, deoarece la mamifere cromosomii sunt liniari,
20
FIZIOLOGIE CELULARA
21
FIZIOLOGIE CELULARA
22
FIZIOLOGIE CELULARA
microtubuli
centrozom
Membrană
nucleară
Profaza
Incepe cu condensarea cromosomilor şi dispariţia nucleolului. Reţeaua
citoplasmică de microtubuli se transformă în două agregări radiale de
microtubuli de formă stelată, numite asteri (fig. 14). Deşi condensarea
cromosomială a fost observată cu mai
mult de un secol în urmă, mecanismul cromatide
biochimic nu este încă elucidat. Se
produce şi migrarea centrosomilor, ce
kinetocor
se mişcă în direcţia polilor opuşi ai
celulei. Există sute de proteine ce se
fosforilează în cascadă: histone, com-
plexe pentamerice numite condensine, Fig. 14. Condensarea cromosomilor
kinaza Aurora-B. La exteriorul nucle- şi apariţia asterilor
ului asterii se transformă în polii fusului mitotic. Microtubulii fusului
mitotic cresc prin adiţia de unităţi de tubulină. Aparatul Golgi şi reticulul
endoplasmic se fragmentează şi se veziculează în timpul profazei. Toate
celelalte fenomene membranare, precum endocitoza şi exocitoza, sortarea
intracelulară de componente sunt foarte mult reduse.
Prometafaza
Incepe cu dezasamblarea membranei nucleare. Microtubulii care cresc
de la nivelul polilor fusului penetrează găuri în anvelopa nucleară, iau
contact cu cromosomii şi se ataşează de aceştia prin intermediul structurilor
23
FIZIOLOGIE CELULARA
24
FIZIOLOGIE CELULARA
Metafaza
Este faza cea mai stabilă şi mai organizată a
mitozei. Cromosomii sunt orientaţi către polii
celulari, iar kinetochorii îi ţin ancoraţi de fus,
adunaţi la ecuatorul celulei. Fusul metafazic este
alcătuit din 2 grupuri majore: filamentele ce conec-
tează cromatidele cu polii fusului şi cele care se
extind de la un pol la altul (fig. 16). Dacă o singură
cromatidă se detaşează de fus, acesta nu porneşte
migraţia anafazică fără aceasta. Toţi cromosomii
Fig. 16. Placa metafazică aşteaptă să fie aliniaţi pentru a începe anafaza .
Anafaza
Cea mai dramatică serie de evenimente este
separarea cromatidelor surori. Ele migrează către
polii fusali opuşi (Anafaza A) şi apoi polii se
îndepărtează (Anafaza B). In acelaşi timp, fusul
mitotic activează complexele proteice citosolice
pentru începerea citokinezei. Separarea cromo-
somilor în câte 2 cromatide surori (fig. 17) este
controlată de către cromosomii înşişi, nu de fusul
mitotic. Fenomenul este dependent de 3 factori:
Fig. 17. Segregare cromatide
complex de patru proteine numit coezină (fig.
18); acţionează ca un lanţ ce înconjoară cele 2 cromatide surori,
menţinându-le apropiate; o enzimă numită separază, ce rupe lanţul proteic al
coezinei; o proteină numită securină, care este un inhibitor de separază.
Când s-a depăşit punctul de control fusal, o serie de proteine de
control marchează securina cu o proteină numită ubiquitină, a cărei funcţie
este de a atrage proteosomii (vezicule cu enzime proteolitice). Aceste
proteaze distrug securina, ceea ce va elibera separaza, care rupe legăturile
dintre subunităţile coezinei, eliberând astfel cele 2 cromatide-surori.
25
FIZIOLOGIE CELULARA
coezină
cromatină
Fig. 18. Aspect schematic al mecanismului ce ţine legate filamentele de ADN ale
cromatidelor-surori de-a lungul întregii mitoze, până când coezina este lizată de
către separază şi cromatidele sunt tracţionate de către microtubulii fusali.
Telofaza
Este revenirea la normal a mai multor
evenimente: cromosomii se decondensează,
fusul se dezasamblează (fig. 19), membrana
nucleară reapare, se reasamblează şi aparatul
Golgi şi reticulul endoplasmic iar nucleolul
reapare. Fiecare nucleu conţine o copie
completă a genomului patern şi una a
genomului matern (diploidie).
Citokineza
Este procesul ce divide celula în 2
celule-fiică. Acest fenomen necesită apariţia Fig. 19. Reorganizarea nucleilor şi
unui „şanţ de clivare”, o bandă îngustă de retracţia fusului
26
FIZIOLOGIE CELULARA
27
FIZIOLOGIE CELULARA
3.7. Meioza
Denumită şi „diviziune reducţională”, meioza este un program special
de menţinere a numărului normal de cromosomi în timpul reproducţiei
sexuate la eucariote. Reproducerea sexuată implică cuplarea unor celule
germinale (gameţi) pentru a se produce o celulă ou (zigot) din care să se
dezvolte un nou organism. Reproducerea sexuată a apărut din necesitatea de
evoluţie a speciilor animale şi vegetale de pe planetă. Procariotele şi unele
eucariote primitive nu au decât diviziune simplă, mitotică, ceea ce înseamnă
că celulele fiică sunt copii identice ale celulelor progenitori, lucru ce face
evoluţia (apariţia unor caractere noi) foarte dificilă sau chiar imposibilă.
Pentru a se depăşi aceste dificultăţi, a apărut reproducerea sexuată, prin care
materialul genetic de la 2 organisme se combină pentru a apărea un
organism nou, diferit de progenitori. Prin dispersia materialului genetic
(spori, polen, spermatozoizi, etc) se realizează fertilizarea şi schimbul de
material genetic la distanţe mari, precum şi selectarea exemplarelor cele mai
bine dotate pentru supravieţuire (selecţie naturală).
Dacă pentru reproducerea sexuată s-ar folosi celule de tip somatic, cu
garnituri duble de cromosomi (diploide), atunci progenitura ar deveni
tetraploidă, celulele germinale ar fi tetraploide ce s-ar cupla rezultând
descendenţi cu număr crescând de garnituri cromozomale. Ca urmare,
numărul de cromosomi trebuie redus la jumătate, pentru ca din 2 gameţi
haploizi să se obţină un zigot diploid, care la rândul lui să producă gameţi
haploizi care să reia ciclul, s.a.m.d. acest deziderat se realizează cu ajutorul
meiozei sau diviziunii reducţionale.
Meioza este un proces alcătuit dintr-o serie de etape similare sau
diferite de mitoză:
G1, celula sintetizează proteinele şi enzimele pentru replicarea ADN
S, se produce sinteza şi replicarea materialului genetic
G2, ste absentă în meioză.
Meioza are 2 componente:
- meioza I, care constă în separarea arbitrară a perechilor de
cromosomi omologi în 2 celule: adică împărţirea numărului de cromosomi
la 2, cu apariţia a 2 celule haploide. Pentru că se reduce numărul de
cromosomi, meioza I se numeşte diviziune reducţională.
28
FIZIOLOGIE CELULARA
29
FIZIOLOGIE CELULARA
30
FIZIOLOGIE CELULARA
Caracteristicile meiozei la om
Soarta celulelor ce trec prin meioză diferă în mod semnificativ de la
un sex la altul. De-a lungul întregii vieţi, la bărbat se produc aproximativ
100 de milioane de spermatozoizi pe zi, printr-un proces numit
spermatogeneză. Celulele stem de la care porneşte spermatogeneza sunt
31
FIZIOLOGIE CELULARA
Aneuploidii
Deşi la om sunt destul de comune, ele nu sunt foarte frecvente în
populaţie, deoarece consecinţele lor sunt atât de grave pentru embrion încât
de obicei nu supravieţuieşte peste primul trimestru de sarcină. Cea mai
frecventă aberaţie o reprezintă triploidia (1-3% din sarcinile umane).
Aceasta se datorează fertilizării unui gamet normal cu unul nesegregat
(diploid). Embrionii triploizi se opresc în evoluţie în jurul săptămânii 3.
Majoritatea aberaţiilor cromosomiale sunt aneuploidii (trisomii, monosomii,
etc). Aneuploidiile bicromosomiale sunt avortate imediat, şi la ora actuală ca
60% din sarcinile avortate sunt datorate aneuploidiei fetale. Aneuploidii
comune sunt sindroamele Down (trisomia 21), Patau (trisomia 13), Edward
(trisomia 18), Klinefelter (XXY, XXXY, XXXXY).
32
FIZIOLOGIE CELULARA
4. Apoptoza
Un om la maturitate este alcătuit din aproximativ 3x1013 celule, toate
provenind dintr-un singur zigot. Dacă se respectă progresia geometrică ar fi
suficiente aproximativ 45 de diviziuni pentru a se atinge acest număr. In
realitate, cea mai mare parte a celulelor din corpul omenesc se divid în
permanenţă, în aşa fel încât aproximativ la fiecare 2 săptămâni se va genera
un număr complet de 30 de trilioane de celule. Dacă celulele nu ar muri într-
un fel sau altul, atunci fiecare organism ar creşte la infinit, până ar satura
mediul înconjurător. Astfel, proliferarea necontenită a celulelor din corpul
omenesc trebuie balansată de moartea unui număr echivalent de celule. Pe
de altă parte, de la embrion până la adult, organismul trece printr-o
multitudine de faze intermediare, ale căror caracteristici trebuie eliminate.
Astfel, am rămâne cu membrane interdigitale, coadă, sistemul imun ar ataca
propriile celule, iar creierul ar fi inundat de sinapse inutile.
Moartea celulară se produce în 2 modalităţi: moartea accidentală
datorită intervenţiei factorilor exteriori, şi moartea programată, atunci când
necesităţile organismului o cer.
Moartea accidentală, numită şi necroză, se datorează traumelor
mecanice şi chimice, expunerii la agenţi chimici şi fizici toxici, inaniţie şi
aşa mai departe. Este singura modalitate prin care organismele unicelulare
îşi sfârşesc ciclul vital. Ca urmare, ele sunt practic „nemuritoare”, deoarece
în condiţii optime nu au motive să moară. Pe de altă parte, nici nu-şi menţin
„individualitatea”, deoarece se divid în permanenţă, deci, în cazul orga-
nismelor unicelulare, imortalitatea este doar o caracteristică a speciei.
Pe de altă parte, odată cu diferenţierea celulară şi specializarea
diverselor tipuri de celule, intervine şi necesitatea îndepărtării unor celule
sau ţesuturi care au fost necesare până la un moment dat, după care îşi pierd
utilitatea sau devin chiar dăunătoare. Ca urmare, se implementează un
mecanism de îndepărtare a acestor celule care se numeşte „moarte celulară
programată” sau apoptoză. Termenul provine din limba greacă, în care
înseamnă cădere, eliminare, dar treptată şi netraumatică precum căderea
frunzelor dintr-un copac, toamna.
Indiferent de evenimentul declanşator, apoptoza se realizează prin
intermediul unei secvenţe moleculare comune. Acest fenomen se poate
realiza pe mai multe căi, sau se poate datora mai multor factori declanşatori.
1. Cea mai mare parte a celulelor umane au nevoie de semnale
33
FIZIOLOGIE CELULARA
34
FIZIOLOGIE CELULARA
35
FIZIOLOGIE CELULARA
36
FIZIOLOGIE CELULARA
7
Caspaze iniţiator (2 , 8, 9, 10), efector (3, 6, 7), non-apoptotice pro-inflamatorii (1, 4, 5,
11, 12, 14, 15)
37
FIZIOLOGIE CELULARA
38
FIZIOLOGIE CELULARA
39
FIZIOLOGIE CELULARA
40
FIZIOLOGIE CELULARA
41
FIZIOLOGIE CELULARA
42
FIZIOLOGIE CELULARA
43
FIZIOLOGIE CELULARA
44
FIZIOLOGIE CELULARA
45
FIZIOLOGIE CELULARA
46
FIZIOLOGIE CELULARA
47
FIZIOLOGIE CELULARA
48
FIZIOLOGIE CELULARA
cât temperatura este mai mare. Prin definiţie difuzia sau difuziunea este un
proces fizic prin care moleculele unei substanţe se împrăştie într-un “mediu
de difuzie”. Mai precis, difuzia este o dispersie moleculară termodepen-
dentă. Astfel, dacă soluţiile apoase a două substanţe vin în contact direct,
atât moleculele de apă cât şi cele ale substanţelor dizolvate se vor răspândi
unele printre altele rezultând o soluţie apoasă care conţine ambele substanţe
dizolvate distribuite în mod uniform în volumul soluţiei. Mai simplu,
amestecurile de gaze se formează de fapt printr-un proces de difuzie. Dacă
două compartimente lichidiene sunt separate printr-o membrană care
permite trecerea moleculelor respective avem de-a face cu fenomenul de
difuzie prin membrană. In oricare situaţie difuziunea este esenţialmente un
proces pasiv, dictat de gradiente chimice (sau electrochimice în cazul
ionilor). Viteza cu care se desfăşoară fenomenul fizic de difuzie prin
membrană se numeşte rată de difuzie şi este proporţională cu energia
potenţială de difuziune RTln(a/b), unde R este constanta generală a gazelor,
T este temperatura absolută, iar a şi b sunt valorile de concentraţie ale
substanţei respective în compartimentele între care are loc difuzia.
Trebuie subliniat aspectul fizic (termodinamic), al fenomenului de
difuziune, după cum urmează. Mişcarea fiecărei molecule este dezordonată,
lipsită de o anumită orientare spaţială, pe o traiectorie punctată de ciocniri
moleculare aleatorii, dar este mai mare probabilitatea ca în timp oricare
dintre molecule să se deplaseze spre zona în care concentraţia substanţei
respective este mai mică (pentru că ciocnirile sunt mai frecvente unde
concentraţia este mai mare). In cazul compartimentelor separate prin
membrană permeabilă pentru substanţa dizolvată se poate spune că “şansa”
fiecărei molecule de a străbate membrana este egală pentru cele două
sensuri opuse, dar “agitaţia moleculară” şi frecvenţa ciocnirii cu peretele vor
fi mai mari pe partea cu concentraţie mai mare, astefel că efectul net va fi de
difuzie către compartimentul mai diluat, până la egalarea concentraţiilor. In
acest caz transferul de molecule prin membrană nu încetează, deci feno-
menul de difuzie continuă să se producă, dar rata de trecere în cele două
sensuri este aceeaşi, astfel că nu se mai produce un transfer net de substanţă
în favoarea unuia din compartimente, adică se instalează o stare tipică de
echilibru dinamic.
Pe lângă diferenţa de concentraţie (gradient chimic), difuzia ionilor
este influenţată şi de câmpul electric (gradient electric), asfel că ea se
49
FIZIOLOGIE CELULARA
Difuziunea facilitată
rata de
Difuziunea facilitată nu este decât în difuzie
mică măsură similară cu difuzia simplă totală
prin membrană. O anumită substanţă
poate trece prin membrană prin ambele facilitată
mecanisme. Transportul este în ambele
cazuri pasiv, adică în sensul gradientului
electro-chimic şi fără consum energetic. simplă
Esenţa fenoemnului de facilitare constă în
existenţa unei structuri în cadrul mem- gradient
branei care pentru un gradient permite o
Fig. 32. Saturarea difuziei facilitate
rată de difuziune mai mare decât cea prin
difuziune simplă. Subliniem faptul că orice cale transmembranară hidrofilă
50
FIZIOLOGIE CELULARA
5.5. Osmoza
Aşa cum am precizat mai sus (vezi cap. 5.2.), difuziunea apei prin
membrane se numeşte osmoză. Tot acolo am definit toţi termenii importanţi
care se referă la fenomenul de osmoză. Osmoza este unul din procesele
fundamentale prin care se produce transferul apei între compartimentele
hidrice ale organismului, inclusiv între interiorul fiecărei celule şi mediul în
care aceasta se găseşte.
Practic osmoza desemnează cazul particular al fenomenului de
difuziune derivat din agitaţia termică a moleculelor de apă. Dacă membrana
care separă două compartimente ce conţin soluţii apoase este permeabilă
pentru apă are loc fenomenul de osmoză, la fel cum se produce difuziunea
prin membrană pentru substanţele solvite pentru care aceeaşi membrană este
permeabilă. Ca şi pentru difuziune, termenul de osmoză nu se referă pur şi
simplu la trecerea moleculelor de apă prin membrana respectivă în cele două
sensuri, ci la transportul net de apă care se realizează prin acest fenomen
într-unul din sensuri, ca însumare a ratei de difuzie a apei prin membrană în
cele două sensuri.
Subliniem faptul că osmoza se produce efectiv, ca transfer hidric net,
numai dacă unul din compartimente conţine un compus dizolvat care nu
difuzează prin membrană. Dacă unul din compartimente conţine o soluţie
mai concentrată, dar membrana este permeabilă pentru toate substanţele
dizovate, atunci difuziunea prin membrană a substanţelor dizolvate şi a apei
au loc în paralel până la egalizarea concentraţiilor. Cu alte cuvinte această
egalizare se produce în ultimă instanţă pe baza transferului net de substanţe
dizolvate, nu de apă. Dacă însă există solviţi nedifuzibili, aceştia practic vor
atrage apa (efect osmotic) în compartimentul în care se găsesc în
51
FIZIOLOGIE CELULARA
concentraţie mai mare, ducând la transferul net al unui volum de apă spre
compartimentul respectiv, adică la fenomenul de osmoză. Atunci când
membrana este permeabilă numai pentru apă ea se numeşte membrană
ideală8 şi permite desfăşurarea unui fenomen de osmoză pură (adică ne-
însoţit de difuziunea prin membrană a vreunei substanţe dizolvate).
Efectul osmotic este cu atât mai mare cu cât numărul particulelor
nedifuzibile este mai mare, indiferent de dimensiunile particulelor9.
Revenind asupra noţiunii de presiune osmotică, putem spune că ea exprimă
tendinţa de realizare a osmozei, ca o presiune suplimentară existentă în
compartimentul diluat, în timp ce efectul osmotic exprimă aceeaşi tendinţă
privită ca o sucţiune exercitată dinspre compartimentul cu soluţie concen-
trată. Oricum, aplicarea în acest compartiment a unei presiuni mecanice
egală cu presiunea osmotică va produce practic stoparea fenomenului de
osmoză. De fapt osmoza se produce spre compartimentul cu soluţie concen-
trată până când se acumulează o presiune statică capabilă să o contracareze.
Presiunea osmotică poate fi exprimată în unităţi de presiune (de ex.
mmHg), dar putem face referire directă la osmolaritatea care o determină;
pentru 1 Osmol efectul osmotic ideal are valoarea de 22,4 atm), cu
menţiunea că efectul osmotic este suma efectelor osmotice pentru fiecare
substanţă luată separat. Osmolaritatea se poate măsura cu osmometre, bazate
pe evaluarea punctului de îngheţ sau de fierbere (sau a presiunii de vapori).
Soluţiile care au aceeaşi presiune osmotică sunt denumite izotone (se
referă strict la efecte osmotice reale, ale solviţilor non-permeanţi prin
membrana respectivă), iar cele care au aceaşi osmolaritate sunt denumite
izoosmotice (se referă la osmolaritate, incluzând solviţii permeanţi prin
membrana în cauză, altfel spus se referă la efectul osmotic total şi la o
membrana ideală). Celulele sunt viabile şi funcţionează normal numai dacă
mediul în care se găsesc are aceeaşi presiune osmotică cu cel intracelular,
adică este izoton10. Dacă mediul este hipoton celula absoarbe apă prin
osmoză şi astfel volumul celular creşte şi presiunea osmotică intracelulară
scade, iar dacă mediul este hipoton osmoza se realizează în sens opus, spre
8
Epiteliul ramului ascendent al ansei Henle constituie o membrană aproape ideală ce separă
lichidul din lumenul tubular de lichidul interstiţial.
9
Atâta timp cât acestea sunt suficient de mici încât să respecte legile de mişcare la nivel
submicroscopic, ale agitaţiei termice a particulelor în sisteme disperse stabile.
10
In practica medicală se folosesc în anumite cazuri soluţii hipotone sau hipertone.
52
FIZIOLOGIE CELULARA
exteriorul celulei, având efecte inverse. Dacă mediul este izoton dar
hiperosmotic, solviţii permeanţi difuzează în gradient chimic spre interiorul
celulei, determinând hipertonie intracelulară, care duce la pătrunderea apei
prin osmoză, până când ea devine din nou izotonă cu mediul, dar şi
izoosmotică. Aceste exemple sunt teoretice (pentru explicarea fenomenelor)
şi pornesc de la modelul celulei plasate într-un mediu cu volum quasi-
infinit, situaţie foarte diferită de cea reală, în care interstiţiul are un volum
redus faţă de celule.
Osmolaritatea este un parametru de bază în homeostazia mediului
11
intern , adică este permanent controlată, astfel încât variază în limite foarte
strânse (0,280 - 0,303 Osmolar) în jurul valorii de referinţă (0,297 Osmolar).
Ca parte componentă a mecanismelor osmoreglatoare, în hipotalamus sunt
prezenţi neuroni ce funcţionează ca osmoreceptori specializaţi.
11
Osmolaritatea plasmei sanguine este deseori aproximată prin două formule de calcul,
după cum urmează. 2[Na+] + glicemia/18 + azot ureic/2.8, cu ultimele două concentraţii
exprimate în mg/dl. Sau 2[Na+] + 2[K+] + [uree] + [glucoză], cu toate concentraţiile
exprimate în mmol/l.
53
FIZIOLOGIE CELULARA
ioni pot trece prin porul acestor ansambluri proteice se datorează prezenţei
filtrului de selectivitate. Pe de altă parte, canalele ionice prezintă mecanisme
de control al fluxului de particule; se spune că sunt „dependente” sau
„operate” de anumiţi factori: potenţialul electric transmembranar (voltaj-
dependente), complexe ligand - receptor (receptor-operate, activate de
liganzi), etc. De fapt orice canal ionic prezintă fluctuaţii conformaţionale
spontane sau induse, extrem de rapide, între starea “închis” (inactiv) şi
starea “deschis” (activ), uneori fiind descrise şi alte stări particulare.
Diverşii factori “operatori” influenţează anumiţi parametri legaţi de aceste
transformări de stare, cum ar fi probabilitatea de producere a transformării
sau durata de menţinere a stării activate.
Clasificarea canalelor ionice este un subiect important, însă extrem de
dificil. Datorită faptului că în acest domeniu volumul de informaţii este
foarte mare şi în continuă creştere rapidă, există variate clasificări. In acest
sens, cu sprijinul celor mai importanţi cercetători, forul modial în domeniul
farmacologiei desfăşoară o acţiune permanentă pentru uniformitate în
nomenclatură şi clasificare, ca şi pentru sistematizarea informaţiei dispo-
nibile privind receptorii şi canalele ionice (http://www.iuphar-db.org).
Patch-clamp
Existenţa canalelor ionice membranare, ca bază moleculară a permea-
bilităţii selective şi variabile a plasmalemei pentru ioni, a fost dovedită prin
utilizarea unor tehnici avansate de electrofiziologie; metoda patch-clamp,
varianta de evaluare a curentului ionic printr-un singur canal (single-
channel). Deşi în prezent există numeroase alte mijloace de studiu
experimental al canalelor ionice, acestea sunt mai curând combinate cu
metodele electrofiziologice de mai sus, decât folosite în locul acestora.
La baza procedurilor patch-clamp stă tehnica potenţialului impus
(voltage-clamp)12. Dispozitivul se bazează pe un amplificator de mare
impedanţă pentru culegerea variaţiilor de potenţial şi pe un amplificator
operaţional. Acesta compară (cu frecvenţă foarte mare) valoarea de potenţial
electric înregistrată cu o valoare prestabilită de către utilizator şi compen-
sează diferenţa măsurată, prin injecţia de electroni în sistem. Practic se
12
Tehnica clasică de voltage clamp foloseşte doi electrozi, unul pentru măsurare şi unul
pentru compensare, dar în prezent majoritate studiilor folosesesc varianta modernă cu un
electrod care este folosit alternativ cu frecvenţă mare pentru cele două scopuri.
54
FIZIOLOGIE CELULARA
Ionoforii
Ionoforii sunt transportori de provenienţă exogenă (artificiali)15 care
măresc permeabilitatea membranară pentru anumiţi ioni, prin mecanisme
13
Soluţia din pipetă are compoziţie ionică similară cu mediul intracelular, dar pipeta este
mare faţă de celulă; după 10’ celula este “dializată” cu soluţia din pipetă; se produce treptat
scăderea concentraţiei pentru diverse substanţe, cu atât mai mult cu cât difuzează mai uşor.
14
O tehnică diferită constă în retragerea foarte lentă a electrodului după perforare, asfel
încât se formează la vârful pipetei o veziculă membranară inversată ce comunică cu
interiorul pipetei (outside-out patch).
15
Nu au fost identificaţi ionofori membranari naturali la om
55
FIZIOLOGIE CELULARA
56
FIZIOLOGIE CELULARA
α
β2 β1
57
FIZIOLOGIE CELULARA
58
FIZIOLOGIE CELULARA
59
FIZIOLOGIE CELULARA
60
FIZIOLOGIE CELULARA
61
FIZIOLOGIE CELULARA
16
La bacterii există o formă aparte de transport activ, folosită la preluarea monozaridelor
din mediu, care nu se sprijină pe ATP ci pe fosfo-enol-piruvat (PEP) şi se numeşte
translocaţie de grup (PEP group translocation; phoshotransferase system; PTS),
62
FIZIOLOGIE CELULARA
SINPORT ANTIPORT
+
Fig. 35. Pe baza gradientului de Na funcţionează sisteme majore de cotransport
Mecanismele proceselor de transport activ secundar sunt diferite faţă
de transportul activ primar. Diferenţa majoră constă în faptul că în cazul
transportului activ secundar energia este furnizată de gradientul de
concentraţie. Gradientul electrochimic al ionului de sodiu între exteriorul
celulei şi interiorul acesteia, realizat prin procesul de transport activ primar
al acestui ion (pompa Na/K) reprezintă un mijloc de înmagazinare de
energie care poate fi utilizată pentru funcţionarea sistemelor de transport
activ secundar. In acest sens este de subliniat faptul că inhibarea producerii
de ATP (ouabaina) într-o celulă determină într-o primă fază oprirea
63
FIZIOLOGIE CELULARA
64
FIZIOLOGIE CELULARA
65
FIZIOLOGIE CELULARA
66
FIZIOLOGIE CELULARA
67
FIZIOLOGIE CELULARA
68
FIZIOLOGIE CELULARA
69
FIZIOLOGIE CELULARA
70
FIZIOLOGIE CELULARA
71
FIZIOLOGIE CELULARA
72
FIZIOLOGIE CELULARA
Membranele celulare, deşi foarte subţiri (3-6 nm), sunt practic imper-
meabile pentru ioni şi molecule polare. Deşi ionii de K+ ating echilibrul
difuzional pe aceeaşi distanţă de apă în cca. 5 ms, ar avea nevoie de ~12 zile
(128 h) pentru a face acelaşi lucru prin intermediul unei membrane lipidice.
Acest lucru este valabil şi pentru moleculele hidrosolubile, chiar de mici
dimensiuni, cum ar fi ureea, pentru care permeabilitatea unei membrane
lipidice similare cu plasmalema este de 100 ori mai mică decât pentru apă.
Ca urmare adrenalina, acetilcolina, hormonii hidrosolubili cunoscuţi, nu au
nici o şansă de a trece prin membrană pentru a influenţa în vreun fel celula.
Ca urmare, este nevoie de un mecanism de transducţie a semnalului.
Termenul de transducţie a început să fie folosit în lumea biomedicală în
jurul anilor 1970, provenind din transducere (lat.), ce înseamnă „a ajuta să
traversezi un râu”, a „duce pe partea cealaltă”, concept de unde a provenit şi
celălalt cuvânt modern, „traducere”, în sensul de a purta un text dintr-o
limbă în altă limbă. Ca atare, sistemele de transducţie celulară preiau
semnalele de pe partea externă a membranei şi le transformă în informaţii
interpretabile pentru sistemele de răspuns ale celulei.
Pentru a percepe semnalele extracelulare celulele folosesc receptori,
adică molecule membranare care vin în contact cu exteriorul celulei şi care
interacţionează cu moleculele-semnal ale substanţelor hidrosolubile bio-
active, furnizând energia necesară pentru iniţierea unei căi de semnalizare
intracelulară. Câteva tipuri de stimuli, precum lumina, gazele, hormonii
liposolubili sunt capabile de a traversa membrana liber şi de a interacţiona
cu structurile responsive, producând răspunsuri. Dar cea mai mare parte a
substanţelor bioactive nu poate trece prin membrane şi deci trebuie să
interacţioneze cu un receptor membranar. Se cunosc mai mult de 20 de
familii de receptori, fiecare cuplat cu un sistem de transducţie aparte
(http://www.iuphar-db.org). Adăugându-se la acest număr şi nenumăratele
variante şi izoforme de receptori şi proteine implicate în lanţurile de
transducţie, numărul de sisteme receptoare poate urca la câteva mii.
Comunicarea în sistemele celulare are câţiva paşi comuni:
• sinteza de molecule-semnal,
• eliberarea de molecule-semnal,
• transportul semnalului către celula receptoare,
• cuplarea moleculei-semnal pe sistemul de recunoaştere celulară,
• iniţierea uneia sau mai multor căi de semnalizare intracelulară,
73
FIZIOLOGIE CELULARA
74
FIZIOLOGIE CELULARA
cultură pot secreta factori care să le regleze propria creştere). Acest fenomen
se numeşte semnalizare autocrină. Unele celulele pot produce molecule-
semnal care acţionează aberant sau anormal, sau care nu fac parte din
secreţia normală a acestor celule. Fenomenul are loc cel mai frecvent în
cazul celulelor tumorale şi se numeşte paracrinie.
Mecanisme de semnalizare
Transducţia semnalului înseamnă conversia unui anume semnal
(stimul, mesager primar) în alt semnal (mesager secund), care acţionează
asupra uneia sau mai multor mecanisme de răspuns intracelular. Unul din
avantajele acestui sistem este fenomenul de amplificare. Doar câteva
molecule, sau chiar una, care acţionează asupra unui receptor, pot induce un
răspuns celular complet. Numărul mesagerilor extracelulari (de ordinul I)
este foarte mare, în schimb posibilităţile de traducere a impactului dintre
aceştia şi celule sunt relativ reduse numeric şi de aceea diverşi mesageri
extracelulari folosesc acelaşi sistem de transducţie pentru generarea
răspunsului celular.
Multe modalităţi de semnalizare implică producerea sau modificarea
concentraţiei unor molecule mai mici, difuzibile, în citoplasma celulei-ţintă.
In cadrul semnalizării intracelulare, numai astfel de substanţe sunt corect
numite mesageri secunzi sau de ordinul II. Frecvent utilizate în acest scop
sunt nucelotidele ciclice de tip adenozin-monofosfat ciclic (AMPc) şi
guanozin-monofosfat ciclic (GMPc), lipide mici derivate din membranele
celulare, de tip inozitol-trifosfat (IP3) sau diacil-glicerol (DAG), precum şi
ionii de calciu.
Este foarte dificilă investigarea căilor de semnalizare, din mai multe
motive. In primul rând, de multe ori concentraţiile de semnal, sau mesager
primar, sunt atât de mici încât scapă detecţiei biochimice. In al doilea rând,
celulele folosesc simultan sute de căi de semnalizare diferite, care pot fi
separate sau parţial suprapuse, implicând sute sau mii de proteine
intermediare. Fiecare dintre aceste căi poate evolua în mai multe direcţii,
întrucât rareori există o singură cale directă, liniară, de semnalizare. De cele
mai multe ori, aceste căi sunt divergente, multe dintre etape sunt noduri de
control sau de amplificare, anse de feedback, etc. Toate aceste variaţii au
raţiuni reglatorii şi de control, dar sunt dificil de urmărit, cu atât mai mult cu
cât de obicei, evenimentele de semnalizare sunt evenimente tranzitorii, care
75
FIZIOLOGIE CELULARA
Receptori membranari
Cea mai mare parte a receptorilor membranari sunt proteine
membranare integrale, ce detectează şi răspund la stimuli. Cel mai frecvent
stimulii sunt chimici; substanţele ce acţionează asupra receptorilor se
numesc liganzi. Câteva tipuri de stimuli chimic, precum mediatorul gazos
difuzibil monoxid de azot („oxid nitric”) şi o serie de hormoni liposolubili,
trec prin membrană şi acţionează asupra unor sisteme de recepţie
intracelulară. Nu se poate prezice efectul unui ligand din natura sa chimică.
Acetilcolina, de exemplu, poate acţiona ca neuromediator sau inhibitor al
activităţii celulare, prin cuplarea cu diverse tipuri de receptori. Poate activa
contracţia musculară sau sinapsele neuro-neuronale prin cuplarea cu un
canal ionic receptor-dependent, dar se cuplează şi cu receptori cu şapte
domenii transmembranare ce activează căi de semnalizare GTP-dependente.
Există două strategii de transfer a energiei de la cuplarea ligandului
până la nivelul structurii ce activează semnalele intracelulare: modificări
conformaţionale ale receptorului (sistem folosit la receptorii cu şapte
domenii transmembranare) şi agregarea de subunităţi inactive pentru a
76
FIZIOLOGIE CELULARA
77
FIZIOLOGIE CELULARA
78
FIZIOLOGIE CELULARA
79
FIZIOLOGIE CELULARA
80
FIZIOLOGIE CELULARA
protein).17, energia eliberată aici fiind de fapt cea care asigură transducţia
semnalului. Ulterior α-GDP se reasociază cu complexul βγ şi proteina G
poate relua ciclul sub o nouă acţiune de tip GEF exercitată de un GPCR
activat, oricare ar fi el. In concluzie, subunitatea α este o GTP-ază care
poate să-şi manifeste această activitate numai în cadrul ciclului descris (fig.
43), în care legarea GTP în locul GDP este condiţionată de interacţiunea
ansamblului α-βγ cu receptorul activat (*), iar hidroliza GTP este
condiţionată de interacţiunea α cu efectoru (**)l.
3-
4
17
Există şi GAP specializate, care ar putea limita spaţial şi/sau ca amploare transducţia
81
FIZIOLOGIE CELULARA
82
FIZIOLOGIE CELULARA
83
FIZIOLOGIE CELULARA
84
FIZIOLOGIE CELULARA
85
FIZIOLOGIE CELULARA
86
FIZIOLOGIE CELULARA
87
FIZIOLOGIE CELULARA
88
FIZIOLOGIE CELULARA
89
FIZIOLOGIE CELULARA
αs-GTP
ATP citosolic
adenilat
ciclaza
90
FIZIOLOGIE CELULARA
GMPciclic
Un alt nucleotid ciclic cu rol de mesager secund pentru anumite
semnale din mediul extern este GMPc. Existà diverse procese implicate în
activarea guanilatciclazei în vederea sintezei GMPc cu rol de mesager
secund, Guanilatciclaza nu se află în întregime în constituţia membranei
celulare, activarea acestei enzime putându-se realiza pe multiple căi. Unele
semnale extracelulare care determină creşterea concentraţiei intracelulare de
GMPc, determină în acelaşi timp şi creşterea concentraţiei Ca++ în
citoplasmă şi astfel ionii de calciu ar putea activa indirect guanilatciclaza
91
FIZIOLOGIE CELULARA
18
Numit după iniţialele primelor trei proteine în care a fost identificat, domeniul PAS este
un sensor prezent în diverse proteine, care în funcţie de gruparea prostetică asociată este
sensibil la lumină, stres oxidativ, gaze diatomice; gruparea hem determină sensibilitatea la
monoxid de azot
19
cu 2 izoforme de realipire alternativă, diferite prin sensibilitatea faţă de cGMP
92
FIZIOLOGIE CELULARA
93
FIZIOLOGIE CELULARA
94
FIZIOLOGIE CELULARA
95
FIZIOLOGIE CELULARA
96
FIZIOLOGIE CELULARA
97
FIZIOLOGIE CELULARA
98
FIZIOLOGIE CELULARA
99
FIZIOLOGIE CELULARA
100
FIZIOLOGIE CELULARA
101
FIZIOLOGIE CELULARA
102
FIZIOLOGIE CELULARA
103
FIZIOLOGIE CELULARA
104
FIZIOLOGIE CELULARA
Schimb
20
Pentru clasificarea actualizată vezi http://www.iuphar-db.org.
105
FIZIOLOGIE CELULARA
106
FIZIOLOGIE CELULARA
Fig. 57. Activarea canalelor de calciu operate de rezerve (după Bolotina V. M.)
http://jp.physoc.org/cgi/content/full/586/13/3035
canale plasmalemale activate de CIF prin intermediul unei fosfolipaze
submembranare inhibate de calmodulină (iPLA2β). Ambele mecanisme de
influx capacitiv sunt rezultatul activării de către GPCR a căii PLC, cu
eliberarea IP3-dependentă a calciului din reticul, iar varianta a doua
presupune un grad de scădere a rezervelor reticulare (depleţie).
107
FIZIOLOGIE CELULARA
Antiportul sodiu/calciu
Na/Ca (de fapt 3Na/Ca) este bidirecţional (cu ciclu de tip consecutiv),
cu afinitatea Ca2+ mai mare pentru situsul expus intracelular şi inactivare
Na+-dependentă. Na/Ca funcţionează predominant în mod direct, cu
expulzarea calciului din citosol, dar poate funcţiona şi în mod revers, vând
concentraţia submembranară de sodiu este mare. Proteina antiporter izolată
din miocard este prototipul acestei familii, NCX1: 970 aminoacizi, N-t
extracelular glicozilat, 9 domenii TM grupate în 2 seturi legate printr-un
lung domeniu citosolic. Na/Ca aparţine genic primei familii din 4 ale unei
superfamilii, în care se regăsesc cele 3 NCX prezente la mamifere. Si a doua
familie (NCKX) cuprinde 2 proteine prezente la mamifere, similare cu
transportorul 4Na/CaK clonat din ţesut retinian. Prin mutaţii punctuale s-a
evidenţiat importanţa Ser110, Glu113 şi a repetiţiilor pentru funcţia de
transport, precum şi a domeniului TM 2 (Thr103) pentru selectivitate. Din
multiplii factori ce reglează Na/Ca se disting Na+, Ca2+, PIP2 şi
fosforilararea. Na/Ca prezintă un situs intern reglator cu afinitate mare
pentru Ca2+, absolut necesar pentru funcţia de transport. Agenţii ce
stimulează PLC pot să inducă creşteri de Cac şi prin inhibarea Na/Ca.
Inhibarea de către mesageri primari poate fi mediată de PKA, PKC, kinaza
calmodulin dependentă (CaMK), cGMP (în cazul NO). Stimularea Na/Ca
prin fosforilare Ca2+-dependentă implică creşteri de afinitate pentru Ca2+
citosolic şi pentru Na+ extracelular.
108
FIZIOLOGIE CELULARA
109
FIZIOLOGIE CELULARA
110
FIZIOLOGIE CELULARA
111
FIZIOLOGIE CELULARA
112
FIZIOLOGIE CELULARA
Fibrele de colagen
Colagenul este cea mai abundentă proteină din
corpul uman. Există mai mult de 20 de variante de
colagen; caracteristica generală este alcătuirea dintr-un
triplu helix polipeptidic, rezultând fibrile în lungime de
până la 500 de nm. Aceste molecule se asociază pentru a
forma agregate (fig. 58). Unele agregate sunt longitu-
dinale, formând filamente ce formează tendoane şi liga-
mente, altele se aranjează într-o reţea bidimensională,
formând „foiţe” (ce se vor regăsi în membranele bio-
logice) iar altele în reţea tridimensională, pe care se
Fig. 58. Asamblarea
depun proteoglicani (cartilaje) sau săruri minerale tri-fibrilară a
(substanţa fundamentală a osului). colagenului
Fibrele elastice
Fibrele elastice sunt un material compozit, ce are capacitatea de a se
alungi şi deforma în funcţie de forţele aplicate asupra lor, revenind la
formele şi dimensiunile iniţiale, după ce forţele au încetat. Se găsesc în
piele, cartilaje, ţesut subcutanat, peretele arterial şi venos. Sunt alcătuite
dintr-o reţea de microfibrile, dintr-o proteină numită fibrilină încorporată
într-un sistem de subunităţi de elastină, legate între ele de o a treia proteină,
numită fibulină. Fibrele elastice sunt sintetizate numai în copilărie şi
adolescenţă, iar turnoverul lor la adult este foarte limitat.
Glucozaminoglicanii
Se numeau înainte mucopolizaharide şi sunt polizaharide lungi,
alcătuite din unităţi dizaharidice (de obicei acid hexaminic şi hexozamină)
113
FIZIOLOGIE CELULARA
Glicoproteinele de adeziune
Sunt moleculele ce realizează „cleiul” intercelular. Dintre acestea,
două sunt de importanţă majoră. Fibronectina este o proteină mare,
organizată sub forma literei V. Se găseşte sub formă de fibronectină tisulară,
ce leagă diversele molecule de adeziune între ele, şi fibronectină plasmatică
solubilă. Tenascina este o proteină – gigant cu şase braţe, ce poate fi găsită
doar la vertebrate, în embrioni, plăgi în curs de reparaţie şi tumori. Funcţiile
ei nu sunt pe deplin cunoscute.
114
FIZIOLOGIE CELULARA
115
FIZIOLOGIE CELULARA
116
FIZIOLOGIE CELULARA
Desmozomii
Sunt organite ce leagă celulele între ele, mai ales între celulele
epiteliale şi musculare. La microscopul electronic arată ca nişte suduri în
puncte. Adeziunea celulară se realizează prin interacţiuni homofile între 2
familii de proteine, numite desmogleine şi desmocolline. Domeniile
intracelulare ale acestor proteine se cuplează prin intermediul unei proteine
numite plakoglobină pe filamentele intermediare ale citoscheletului.
Joncţiunile aderente
Se realizează prin interacţiuni homofile între caderine. Acestea sunt
ranforsate citoscheletic de filamente de actină, pe care se prind prin
intermediul unor proteine de legătura. Joncţiunile aderente sunt primele care
se dezvoltă între diversele foiţe epiteliale chiar din viaţa embrionară.
Joncţiunile strânse
Se mai numesc şi zonula occludens. Se distribuie ca o centură în jurul
polilor celulari apicali în epiteliile impermeabile, astfel reducând atât
difuziunea paracelulară a fluidelor cât şi mişcările celulelor de o parte şi de
alta a barierei. Proteinele care formează aceste joncţiuni realizează inte-
racţiuni homofile între moleculele de occludină şi claudină .
117
FIZIOLOGIE CELULARA
Aparatul Golgi
Este parte a sistemului
endomembranar; la acest nivel
este locul modificării şi sortării
proteinelor. Este constituit din
discuri cu funcţii şi proprietăţi
membranare diferite; principala
modalitate de mişcare între
discuri este prin vezicule.
Fig. 63. Organizarea aparatului Golgi Aparatul Golgi este alcătuit din
118
FIZIOLOGIE CELULARA
119
FIZIOLOGIE CELULARA
120
FIZIOLOGIE CELULARA
121
FIZIOLOGIE CELULARA
21
Proteina asociată sinaptozomului (synaptosome-associated protein, SNAP); Proteina de
fuziune sensibilă la N-etilmaleimidă (N-ethylmaleimide sensitive fusion protein)
122
FIZIOLOGIE CELULARA
6. Transmiterea sinaptică
Sinapsele chimice sunt structuri specializate ce asigură transmiterea de
mesaje între celule învecinate. Aşa-zisele sinapse electrice sunt de fapt
bazate pe joncţiunea celulară comunicantă (nexus, gap-junction), structură
proteică transmembranară ce delimitează un por care străbate două
membrane adiacente. Ele permit difuzia ionilor de la o celulă la cealaltă,
asigurând astfel direct propagarea potenţialului de acţiune.
123
FIZIOLOGIE CELULARA
124
FIZIOLOGIE CELULARA
125
FIZIOLOGIE CELULARA
126
FIZIOLOGIE CELULARA
127
FIZIOLOGIE CELULARA
1 Ca2+
Sinaptotagmină 2
PIP2
sinaptobrevină
SNAP-25
sintaxină 4 3
128
FIZIOLOGIE CELULARA
Acetilcolină
ADH
Colecistokinină
Dopamină
GABA
Glutamat
Aspartat
Glicină
Histamină
Neurotensină
Noradrenalină
Adrenalină
Neuropeptid Y
Peptide opioide
Ocitocină
Purine
Serotonină
Somatostatin
Tahikinină
(tradus şi adaptat după Despopoulos A., Color Atlas of Physiology, Thieme, 2003)
129
FIZIOLOGIE CELULARA
130
FIZIOLOGIE CELULARA
131
FIZIOLOGIE CELULARA
132
FIZIOLOGIE CELULARA
133
FIZIOLOGIE CELULARA
134
FIZIOLOGIE CELULARA
135
FIZIOLOGIE CELULARA
136
FIZIOLOGIE CELULARA
137
FIZIOLOGIE CELULARA
138
FIZIOLOGIE CELULARA
Oboseala musculară
Oboseala este o stare indusă de efortul susţinut şi prelungit, asociată
cu scăderea excitabilităţii, forţei şi duratei contracţiei musculare. Aceasta se
explică prin scăderea numărului de unităţi motorii antrenate în actul motor.
Scade şi capacitatea de scurtare a fiecărei fibre. In timpul unei contracţii
maximale susţinute, când toate unităţile motorii sunt folosite, rata influxului
nervos este maximă, având ca efect acumularea K+ extracelular şi reducerea
potenţialului fibrei musculare. In aceste condiţii scade abilitatea de a se
produce potentialul de acţiune, dar oboseala durează puţin timp. După circa
un minut tensiunea maximă poate fi produsă din nou, revenind capacitatea
de producere a potenţialului de acţiune.
Oboseala din timpul exerciţiilor moderate cu contracţii ritmice se
produce datorită faptului că fibrele lente nu mai au rezerve de glicogen. In
aceasta situaţie sunt recrutate din ce în ce mai multe fibre rapide. Acestea
obţinând energia necesară prin metabolism anaerob, prin conversia glucozei
în acid lactic, scade pH-ul intracelular. Aceste efecte la rândul lor inhibă
activitatea unor enzime glicolitice cheie, astfel încât rata de producere a
ATP este redusă. Scăderea ATP duce la oboseală din cauza interferenţei cu
cuplul excitaţie-contracţie (cu cantităţi insuficiente de Ca2+ în reticulul
sarcoplasmic, cuplarea excitaţie-contracţie nu poate fi realizată). Acesta pare
a fi un mecanism de protecţie, iar dacă ATP ar fi semnificativ scăzut
muşchiul ar intra într-o stare de tip rigor mortis.
In timpul unui antrenament susţinut, preluarea maximă de oxigen este
de 50 ml/min/kg la barbaţi, iar la femei cu 20% mai puţin. La atleţii de
performanţă preluarea maximă de oxigen este superioară, în jurul valorii de
85 ml/min/kg. La nivele relativ mici de efort, cu consum de oxigen sub 50%
din valoarea maximă, energia pentru contracţia musculară este obţinută mai
ales prin metabolism aerob. Metabolismul anaerob, cu producere ulterioară
de acid lactic, contribuie la realizarea energiei necesare creşterii
performanţei fizice. Tipul de fibre musculare este determinat de inervaţie, de
aceea prin antrenament tipul de fibră musculară nu se poate schimba. Fibrele
se pot adapta prin antrenament, sporindu-şi cantitatea de mioglobină şi de
enzime aerobice respiratorii; preluarea oxigenului poate fi crescută cu 20%.
Fibrele îşi sporesc şi conţinutul de trigliceride, o sursă alternativă de
energie, pentru a salva stocurile de glicogen.
139
FIZIOLOGIE CELULARA
140
FIZIOLOGIE CELULARA
141
FIZIOLOGIE CELULARA
integrină
paxilină
placă densă actinină
α-actină vinculină
leiomodină miozină
tropomiozină
desmină
α- actinină
caldesmon
corp dens
142
FIZIOLOGIE CELULARA
143
FIZIOLOGIE CELULARA
144
FIZIOLOGIE CELULARA
145
FIZIOLOGIE CELULARA
146
FIZIOLOGIE CELULARA
pentru IP3, care sunt şi canale de calciu. DAG activează protein kinaza C
(PKC), calciu-fosfolipid-dependentă. In cele mai multe cazuri PKC are
efecte de favorizare a contracţiei, prin fosforilarea canalelor de tip L sau a
unor proteine care reglează ciclarea punţilor acto-miozinice.
147
FIZIOLOGIE CELULARA
148
FIZIOLOGIE CELULARA
149
FIZIOLOGIE CELULARA
150
FIZIOLOGIE CELULARA
151
FIZIOLOGIA SANGELUI
1
Celulele din corpul uman funcţionează într-un mediu care în majoritatea cazurilor este
asemănător de la un organ la altul privind ionii majori, osmolaritatea, etc. Există însă şi
diferenţe extreme, dictate de necesităţi funcţionale, cum este cazul celulelor de la vârful
piramidelor renale, care suportă permanent o osmolaritate foarte mare.
152
FIZIOLOGIA SANGELUI
2
Sângele asigură şi accesul medicamentelor la celule (cu excepţia aplicării locale), precum
şi îndepărtarea lor, ca şi a unor substanţe străine pătrunse accidental în mediul intern.
153
FIZIOLOGIA SANGELUI
154
FIZIOLOGIA SANGELUI
155
FIZIOLOGIA SANGELUI
3
Logaritmul cu semn schimbat a concentraţiei ionilor de hidrogen
156
FIZIOLOGIA SANGELUI
157
FIZIOLOGIA SANGELUI
biliare (vezi cap. “Secreţia biliară”); o mică parte este utilizat la formarea
hormonilor corticosuprarenalieni şi gonadali.
Trigliceridele sunt principalii constituienţi ai chilomicronilor; provin
din alimentaţie sau din transformarea glucidelor şi proteinelor în acetil-CoA.
Concentraţia trigliceridelor în plasmă este 125 – 150 mg/dl.
Fosfolipidele sunt reprezentate de lecitine, cefaline şi sfingomieline;
au rol în formarea şi transportul lipoproteinelor. Concentraţia plasmatică
este de aproximativ 280 mg/dl.
158
FIZIOLOGIA SANGELUI
4
Expunerea repetată la un antigen stimulează puternic sinteza de imunoglobuline ca urmare
a cooperării dintre mai multe tipuri de limfocite (vezi cap. 5.6.).
159
FIZIOLOGIA SANGELUI
5
Informaţii conexe sunt prezentate în alte capitole: “Absorbţia fierului”, “Catabolismul
hemoglobinei”, “Pigmenţii biliari”. Anumite proteine cu mare specificitate de legare sunt
descrise în capitole referitoare la substanţele transportate (de ex. “Hormonii tiroidieni”).
160
FIZIOLOGIA SANGELUI
are loc înainte ca transferina să preia fierul şi să-l transporte prin plasmă.
Concentraţia plasmatică este 30 mg/dl. Estrogenii reacţionează cu receptorii
steroizi de pe hepatocite şi stimulează sinteza de ceruloplasmină; nivelele
cresc în sarcină sau în tratamentul cu contraceptive orale ce conţin estrogen.
161
FIZIOLOGIA SANGELUI
162
FIZIOLOGIA SANGELUI
9. Hematopoeza
Toate elementele figurate provin dintr-o singură clasă de celule
primitive numite celule stem pluripotente (fig. 80). Hematopoeza are loc
încă din viaţa intrauterină, mai întâi în ficat şi splină şi apoi în măduva
hematogenă (din a 20-a săptămână a vieţii embrionare). Către sfârşitul vieţii
fetale hematopoeza se realizează predominant în măduva hematogenă şi mai
puţin la nivel hepatic şi splenic, iar după naştere elementele figurate sunt
produse numai în măduva hematogenă, cu excepţia limfocitelor, care se
maturează şi proliferează înafara măduvei hematogene (în timus şi ţesuturile
limfoide periferice). La copii, măduva hematogenă activă hematopoetic se
găseşte în oasele late (oase craniene, coaste, stern, vertebre şi pelvis),
precum şi în epifizele oaselor lungi, iar la adult în oasele late şi epifizele
proximale ale femurului şi humerusului.
Fig. 4. Hematopoeza
163
FIZIOLOGIA SANGELUI
164
FIZIOLOGIA SANGELUI
165
FIZIOLOGIA SANGELUI
Aceste colonii pot conţine o linie de celule sau combinaţii de mai multe linii
celulare; se pot găsi atât în măduva hematogenă cât şi în sângele circulant.
9.3. Eritropoeza
Procesul de producere al hematiilor (eritropoeza) începe la făt în sacul
embrionar şi se continuă în ficat, splină şi ganglionii limfatici. Către
sfârşitul sarcinii şi după naştere procesul are loc numai în măduva
hematogenă. Eritropoeza necesită prezenţa, în micromediul medular normal,
a unei populaţii normale de celule stem hematopoetice; acestea se
diferenţiază şi se maturează sub influenţa eritropoetinei şi necesită prezenţa
vitaminei B12, acidului folic şi a fierului.
Folatul şi cobalamina
Folatul (acidul folic şi derivaţi ai săi) şi cobalamina participă la reacţii
care fac disponibilă generarea de metil necesară conversiei deoxiuridilatului
în deoximidilat în procesul de sinteză a ADN (în ADN, baza pirimidinică
tiamină, care este 5-metiluracil, înlocuieşte în molecula de ARN uracilul).
166
FIZIOLOGIA SANGELUI
167
FIZIOLOGIA SANGELUI
Fierul
Fierul se găseşte în hem, în hematii şi în celulele musculare; este
stocat sub formă de feritină sau hemosiderină la nivelul fagocitelor
mononucleare şi în celulele parenchimatoase hepatice. La un adult de 70 kg
se găsesc aproximativ 2,5 mg de fier în hemoglobină, aproximativ 150 mg
în mioglobină, aproximativ 15 mg la nivelul enzimelor tisulare şi
aproximativ 1 g de fier este stocat. O cantitate foarte mică de fier
(aproximativ 3 g) este prezentă în plasmă legată de transferină. La femei,
rezerva de fier este mai redusă decât a bărbaţilor datorită pierderilor prin
sângerarea menstruală şi sarcină (pierderea de fier în timpul sarcinii este de
aprox. 500 mg, de aceea trebuie suplimentat medicamentos). Zilnic, fierul se
pierde prin fecale, urină şi transpiraţie în cantitate mai mică de 1 mg. In
timpul lactaţiei se pierd 0,5 - 1 mg/zi. Spre deosebire de aceste pierderi
minore, hemoragia (sângerarea) produce pierderi substanţiale de fier. Un
gram de hemoglobină conţine 3,4 mg de fier; la un individ normal cu 15
mg/dl hemoglobină, 100 ml de sânge conţine ~ 50 mg de fier.
Fierul din carne este mai rapid absorbit decât cel din alte alimente
(ouă, grâu); este absorbit la nivelul porţiunii superioare a intestinului
subţire. Cantitatea absorbită depinde nu numai de conţinutul în fier al dietei
6
Absenţa unui aport alimentar adecvat duce uşor la forma clinică de anemie pernicioasă.
Reversibilă prin dietă sau vitaminoterapie, afecţiunea poate determina sechele neurologice.
168
FIZIOLOGIA SANGELUI
Etapele eritropoezei
Formarea eritrocitelor, plecând de la celula stem pluripotentă,
parcurge următoarele etape: pronormoblast; normoblast bazofil, normoblast
policromatofil, normoblast ortocromatic, reticulocit şi eritrocit matur. Cea
mai tânără celulă a seriei eritrocitare este pronormoblastul. In măduva
hematogenă, pronormoblastul apare ca o celulă de mărime variabilă, cu
nucleu rotund ce ocupă cea mai mare parte din celulă, nucleoli coloraţi în
albastru şi citoplasmă bazofilă. In cursul maturaţiei, mai întâi dispar
nucleolii, rezultând normoblastul. Apoi dimensiunea normoblastului scade
progresiv, nucleul regresează într-o masă picnotică care în final este
expulzată, iar citoplasma îşi modifică culoarea din albastru în roz-
portocaliu. In decursul maturării creşte cantitatea de hemoglobină
sintetizată. Diviziunea celulară se opreşte la stadiul de normoblast; ultimul
stadiu de diviziune este reprezentat de reticulocit, care se găseşte şi în sânge.
Sinteza de hemoglobină necesită trei condiţii:
- cantităţi adecvate de ARNm pentru lanţurile polipeptidice de globină
care trebuie sintetizate;
- celula trebuie să sintetizeze cantităţi suficiente de protoporfirină;
- fierul trebuie să fie disponibil pentru încorporarea în protoporfirină
cu formarea hemului.
Transferina plasmatică transportă fierul la celulele eritroide în
creştere, care prezintă pe suprafaţa lor receptori membranari pentru aceasta.
Reticulocitul este o celulă nucleată, mult mai mare decât eritrocitul
adult, care prezintă tot echipamentul pentru sinteza de hemoglobină (ARN
citoplasmatic, mitocondrii, receptori de suprafaţă pentru transferină).
169
FIZIOLOGIA SANGELUI
Reglarea eritropoezei
Eritropoetina este un factor major de reglare al eritropoezei. Ea este
secretată de celulele juxtaglomerulare renale care sunt extrem de sensibile la
hipoxia tisulară. Hipoxia tisulară poate avea următoarele cauze: scăderea
conţinutului sanguin de hemoglobină (anemie); o încărcare deficitară a
hemoglobinei cu oxigen la nivel pulmonar (boli pulmonare, boli congenitale
de cord, altitudine); o eliberare deficitară a oxigenului de pe hemoglobină
(în cazul concentraţiilor crescute de monoxid de carbon). Eritropoeza
normală necesită un nivel bazal de stimulare a celulelor progenitoare
eritroide prin eritropoetină. Eritropoeza poate fi estimată prin numărul de
celule nucleate din seria roşie care se observă în proba de măduvă
hematogenă. Eritropoeza efectivă (eritropoeza producătoare de celule roşii
circulante) poate fi estimată prin numărul de reticulocite circulante.
9.4. Leucopoeza
Producţia de granulocite şi monocite-macrofage
Cea mai tânără celulă a seriei granulocitare identificabilă morfologic
este mieloblastul. Acesta este o celulă mare, nucleată cu 1-5 nucleoli;
citoplasma este colorată în albastru şi nu conţine granulaţii. Până la stadiul
de celulă matură nucleul va condensa şi, în final se va segmenta; citoplasma
va prezenta trei tipuri de granulaţii: granulaţii mari, azurofile, care apar
primele şi care apoi sunt înlocuite de granulaţii specifice. Aproximativ 1/2
din granulocite sunt circulante (granulocitele tocmai eliberate din măduva
hematogenă se constituie ca granulocite circulante pentru numai câteva ore),
restul sunt aderente de peretele vascular sau cantonate la nivel tisular.
Migrarea granulocitelor spre ţesuturi depinde de concentraţia de
chemoatractanţi proces numit chemotaxie; odată ajunse în ţesuturi,
granulocitele nu se mai reîntorc în circulaţie. Durata de viaţă în sânge este
de trei ore. La nivelul măduvei hematogene granulocitele se găsesc în două
compartimente: un compartiment mitotic care conţine celule care se divid
(precursorii granulocitari suferă 4-5 diviziuni în acest compartiment) şi un
compartiment postmitotic sau de maturaţie (până la stadiul de metamielocit
170
FIZIOLOGIA SANGELUI
171
FIZIOLOGIA SANGELUI
9.5. Trombopoeza
Plachetele derivă din celule gigante din măduva hematogenă care se
numesc megakariocite, caracterizate prin dimensiunile lor mari, nucleul
polilobat şi citoplasma abundentă. Megakariocitele rezultă dintr-o populaţie
celulară numită megakarioblaşti. Maturarea megakariocitelor este
caracterizată prin dezvoltarea granulelor şi mitocondriilor precum şi o
creştere a masei membranei celulare sub formă de tubuli şi cisterne care
comunică cu exteriorul celulei. Megakariocitele mature sunt celule
ameboidale care întind pseudopode printre celulele endoteliale care
tapetează sinusoidele medulare; pseudopodele apoi se fragmentează
formând plachete. Plachetele rămân în spaţiul intravascular, dar în orice
moment aproximativ 1/3 din ele este adunat într-un anumit loc (pulpa roşie
a splinei). Timpul de viaţă al plachetelor sanguine este de 3 zile. Când
numărul plachetelor circulante scade sub numărul normal este eliberată în
plasmă o substanţă numită trombopoetină care va interveni în maturarea
plachetară. In plus, la nivelul granulelor plachetare se găseşte TGF- β cu rol
de a inhiba creşterea coloniilor megakariocitare.
172
FIZIOLOGIA SANGELUI
173
FIZIOLOGIA SANGELUI
174
FIZIOLOGIA SANGELUI
10.2. Hemoglobina
Producţia de hemoglobină este un proces complex care necesită
sinteza coordonată a diferitelor lanţuri de peptide (care constituie globina) şi
sinteza hemului. Sinteza de hemoglobină începe în măduva hematogenă, la
nivelul eritrocitelor nucleate, se continuă la un nivel redus, timp de 1-2 zile
la nivelul reticulocitelor, iar la nivelul eritrocitelor mature sinteza de
hemoglobină este sistată.
10.2.1. Hemul
Hemul (fig. 85), protoporfirina
IX feroasă, este sintetizat într-o serie
de etape care încep la nivel
mitocondrial cu condensarea glicinei
şi succinil coenzimei A cu formarea
acidului aminolevulinic (ALA).
Această reacţie este catalizată de δ -
aminolevulinat sintetaza şi necesită
prezenţa piridoxal fosfatului.
Următoarele etape au loc în
citoplasmă unde, catalizat de o
dehidrază specifică, două molecule de
Fig. 85. Structura hemului
ALA vor condensa şi vor forma
porfobilinogen. Patru molecule de porfobilinogen vor condensa pentru a
forma tetrapirol linear, care apoi va cicliza. O parte din lanţurile inelului
tetrapirolic vor fi succesiv reduse prin reacţii enzimatice suplimentare
rezultând protoporfirina IX. La nivel mitocondrial, Fe+2 este inserat în inelul
protoporfirinic, reacţie catalizată de o enzimă numită ferochelatază.
Produsul, hemul este oprit prin sinteza primei enzime a acestui proces - δ
175
FIZIOLOGIA SANGELUI
176
FIZIOLOGIA SANGELUI
10.2.4. Methemoglobina
Fierul din structura hemului normal este în formă feroasă, în timpul
legării reversibile a oxigenului fierul rămâne în stare feroasă. Când fierul
feros din hem este oxidat la fier feric are loc formarea methemoglobinei care
nu este capabilă prea mult timp să reacţioneze cu oxigenul. In soluţii acide,
locul de legare a oxigenului este ocupat de apă, iar în soluţii alcaline este
ocupat de grupări hidroxil. Methemoglobinemia apare în următoarele
circumstanţe:
177
FIZIOLOGIA SANGELUI
10.2.5. Carboxihemoglobina
Monoxidul de carbon (CO), ca şi oxigenul, se leagă de fierul din hem,
dar afinitatea hemoglobinei pentru CO este de 200 ori mai mare decât pentru
oxigen; CO interferă cu transportul de oxigen pe următoarele două căi:
CO poate ocupa fierul din toate moleculele de hem ale tetramerului şi
astfel acesta nu mai poate lega oxigen. Simptomele toxicităţii cu CO apare
la un nivel de 5-10% carboxihemoglobină; la 40% apare pierderea
cunostinţei până la moarte.
Afinitatea mare a CO pentru hemoglobină se datorează ratei reduse de
disociere a CO de hem. Timpul de înjumătăţire a dispariţiei CO la un
individ cu funcţie ventilatorie normală este de aproximativ 4 ore;
administrarea de oxigen pur poate scurta timpul de înjumătăţire la 1 oră.
178
FIZIOLOGIA SANGELUI
179
FIZIOLOGIA SANGELUI
180
FIZIOLOGIA SANGELUI
181
FIZIOLOGIA SANGELUI
182
FIZIOLOGIA SANGELUI
10.5.2. Factorul Rh
Ca şi sistemul AB0, sistemul Rh prezintă o importanţă clinică majoră.
Factorul Rh, numit după maimuţa Rhesus deoarece a fost pentru prima dată
studiat pe sângele acestui animal, este un sistem compus din mai mulţi
antigeni. Pe hematiile umane se găsesc trei antigene Rh (C, D şi E);
antigenul D este cel mai important; numele de Rh pozitiv înseamnă că
persoana respectivă prezintă aglutinogenul D pe hematii (85% din
populaţie), iar Rh negativ sunt persoanele care nu au acest antigen (15% din
populaţie). Transmiterea antigenului D se face dominant astfel încât
genotipurile Dd sau DD vor determina Rh pozitiv.
Un primitor Rh negativ poate prezenta un răspuns imun împotriva
unui sânge Rh pozitiv transfuzat; dar, spre deosebire de aglutininele din
sistemul AB0, în plasma persoanelor Rh negative nu se găsesc anticorpi
anti-Rh. Aşadar, la un prim contact cu sânge Rh pozitiv nu are loc
aglutinarea hematiilor primitorului, dar această expunere sensibilizează
sistemul imun la antigenul Rh şi la o nouă transfuzie cu sânge Rh pozitiv
apare aglutinare şi hemoliză. Sensibilizarea Rh are loc şi când mama Rh
negativă dă naştere unui copil Rh pozitiv (factorul Rh se transmite de la
tată). Eritrocitele fetale, separate în mod normal de circulaţia maternă prin
placentă, pot intra în circulaţia maternă în timpul în timpul naşterii când
placenta este îndepărtată de pe peretele uterin. Aceasta va determina o
producţie crescută de anticorpi anti-Rh de către mamă şi la o nouă sarcină
aceşti anticorpi (de clasă Ig G) trec în circulaţia fetală determinând hemoliza
hematiilor fetale, care stă la baza bolii hemolitice a nou-născutului (eritro-
blastoza fetală). Dacă hemoliza e severă copilul poate muri in utero sau
poate dezvolta anemie, icter sever şi edem cerebral (hidrops fetal).
Boala hemolitică a nou-născutului apare la aproximativ 17% din feţii
Rh pozitivi născuţi de mame Rh negative care au mai avut sarcini
anterioare. Acest fenomen poate fi prevenit prin administrarea de anticorpi
anti-D sub formă de globulină umană imediat după naştere. Hematiile D
pozitive circulante sunt “învelite” cu anticorpi exogeni şi sunt distruse
înainte ca ele să poată stimula sistemul imun matern. Această imunizare
pasivă temporară (conferită de Ig G injectate) nu este dăunătoare pentru
mamă şi va preveni formarea de anticorpi activi la mamă.
183
FIZIOLOGIA SANGELUI
11.1. Neutrofilele
Neutrofilele sunt celule care prezintă o citoplasmă de culoare7 roz
“neutru”, granulaţii roşii şi un nucleu cu 2 - 5 lobi. O parte din neutrofilele
circulante prezintă un nucleu nelobat şi sunt descrise ca fiind celule tinere.
Granulaţiile neutrofilelor pot fi primare, care conţin diverse enzime printre
care lizozim (digeră peretele bacterian) şi peroxidază (cu rol reducător al
apei oxigenate) şi granulaţii secundare sau granulaţii specifice care, pe lângă
enzimele prezente în granulaţiile primare mai conţin lactoferină, substanţe
bactericide cationice şi proteine care leagă vitamina B12. Toate aceste
substanţe proteice din componenţa granulaţiilor neutrofilelor interferă cu
metabolismul bacterian având drept consecinţă distrugerea bacteriilor. La
~12 ore de la producerea lor de către măduva hematogenă, neutrofilele
migrează în ţesuturile extravasculare unde trăiesc 4 - 5 zile. Ele sunt atrase
la locul leziunii extravasculare de agenţii chemotactici; aceşti agenţi
chemotactici sunt eliberaţi de către microorganisme, ţesuturi lezate,
macrofage şi chiar de către granulocitele prezente deja la locul leziunii.
Fenomenele de bază implicate în funcţia neutrofilelor în cadrul sistemului
de apărare împotriva micro-organismelor (diapedeza, fagocitoza) sunt
detaliate mai jos (cap. 12).
11.2. Eozinofilele
Aceste celule au cel mai adesea nucleul bilobat, citoplasma lor conţine
granulaţii mari de culoare roşu strălucitor. După ce sunt eliberate în
circulaţie, eozinofilele migrează în ~30 minute în ţesuturile extravasculare
7
Descrierile de culoare din acest capitol se referă strict la apectul dat de coloraţia standard
hematoxilină-eozină
184
FIZIOLOGIA SANGELUI
11.3. Bazofilele
Bazofilele sunt celule cu nucleu polilobat, iar în citoplasmă prezintă
granulaţii de culoare albastră. Ca şi neutrofilele şi eozinofilele, bazofilele
sunt celule mobile cu proprietăţi fagocitare. Ele migrează în ţesuturile
extravasculare unde sunt stimulate de complexele antigenice. Aceste
complexe reacţionează cu receptorii specifici pentru IgG de pe suprafaţa
bazofilelor determinând eliberarea din granulaţiile lor specifice a
mediatorului chimic (histamina). Histamina este răspunzătoare de apariţia
unui răspuns anafilactic sistemic puternic sau de apariţia unei vasodilataţii
locale şi creşterea permeabilităţii vasculare (edemul local).
11.4. Monocitele
Monocitele sunt cele mai mari leucocite (diametrul lor este de 15 – 20
μm). Ele prezintă un nucleu reniform şi granulaţii citoplasmatice fine de
culoare roz. Monocitele sunt eliberate în circulaţie din măduva hematogenă
atunci când sunt mature şi apoi migrează în ţesuturi (ficat, splină, noduli
limfatici, plămân) unde pot sta zile sau chiar ani, intrând în componenţa
sistemului reticulo-endotelial. Altfel spus, macrofagele fac parte dintr-un
ansamblu circulant denumit complex monocite-macrofage; celulele acestui
complex prezintă particularităţi în funcţie de ţesutul în care ajung şi
acţionează. Monocitele sunt celule mobile; ele putând fagocita micro-
organisme, celule lezate sau moarte precum şi proteine denaturate.
Monocitele mai participă şi la elaborarea răspunsurilor imune prin ingerarea
antigenelor şi sunt stimulate să secrete IL-1 care declanşează proliferarea şi
185
FIZIOLOGIA SANGELUI
11.5. Limfocitele
Limfocitele reprezintă un grup heterogen de celule care au nuclei
mari, iar citoplasma este lipsită de granulaţii. Limfocitele B sunt
recunoscute prin prezenţa imunoglobulinelor de pe suprafaţa lor; prin
stimulare cu antigen ele sunt transformate în plasmocite care sintetizează şi
secretă anticorpi specifici (imunoglobuline). Limfocitele T pot fi identificate
deoarece au pe suprafaţa lor receptori pentru eritrocitele de oaie. Ele
participă la răspunsurile imune mediate celular şi nu depind de prezenţa
anticorpilor circulanţi. Limfocitele T helper sau celulele supresoare,
stimulează sau inhibă transformarea limfocitelor B în celule producătoare de
anticorpi. Limfocitele citotoxice produc liza celulară când sunt sensibilizate
de antigenele de pe suprafaţa celulelor participând la fenomenele de rejet a
grefei tisulare incompatibile cu cele ale gazdei. Limfocitele killer sunt
capabile să distrugă diverse celule tumorale sau celule infectate viral. Sunt
celule asemănătoare limfocitelor cu granulaţii în citoplasmă. Mecanismul nu
este specific vreunui virus particular sau unui anumit tip de tumoră;
expunerea antigenică anterioară nu este necesară.
8
macrofagele asociate cu capilarele sinusoide din ficat, splină şi măduva hematogenă
186
FIZIOLOGIA SANGELUI
12.1. Inflamaţia
Urmare a prezenţei ţesuturilor distruse, inflamaţia reprezintă un
ansamblu de răspunsuri celulare şi vasculare care au drept scop accelerarea
distrucţiei celulare şi îndepărtarea micro-organismelor răspunzătoare de
acest fenomen.
O primă etapă a procesului inflamator este migrarea macrofagelor
tisulare adiacente, a neutrofilelor şi a monocitelor la locul invaziei
bacteriene ca urmare a substanţelor eliberate de ţesuturile lezate şi celulele
infectate (chemotaxine).
Neutrofilele şi monocitele
se dispun pe un singur rând
lângă endoteliul capilar din
zona afectată (marginalizare), şi
apoi trec prin peretele capilar
(diapedeză) prin mişcări ami-
boidale, ajungând la locul
invaziei bacteriene (fig. 86).
Acest proces de concentrare a
leucocitelor în ţesutul inflamat
este accelerat de creşterea
debitului sanguin prin vaso-
Fig. 86. Marginaţia şi diapedeza
dilataţie locală.
Modificările vasculare apar ca urmare a producerii de substanţe
vasodilatatoare de către ţesuturile lezate (kinine, amine, prostaglandine).
Kininele activează cascada enzimelor proteolitice cunoscute ca sistemul
kinină-kalicreină cu producere de kinine vasoactive, în special bradikinină.
Bazofilele şi celulele mastocitare eliberează vasodilatotori cum ar fi
serotonina, histamina precum şi un anticoagulant (histamina). Prosta-
glandinele amplifică reacţiile inflamatorii. In inflamaţia acută sosesc la locul
inflamaţiei întâi granulocitele şi apoi macrofagele.
187
FIZIOLOGIA SANGELUI
188
FIZIOLOGIA SANGELUI
12.2. Fagocitoza
Rolul major al neutrofilelor este de apărare (nespecifică) împotriva
infecţiilor prin înglobarea şi apoi distrugerea microorganismelor; acest
proces se numeşte fagocitoză. Distrugerea bacteriilor de către neutrofile
începe prin ataşarea lor la suprafaţa neutrofilului; proces care se datorează
proteinelor de adeziune (în special fibronectina), precum şi anticorpilor şi
opsonine care se găsesc pe suprafaţa bacteriei.
Neutrofilele emit pseu-
dopode care vor încercui
bacteriile care sunt ataşate de
neutrofile şi va avea loc
includerea bacteriei într-o
vacuolă numită fagozom.
Bacteria este distrusă în
interiorul fagozomului prin
acţiunea enzimelor eliberate
de granulaţiile neutrofilelor.
Aceste enzime sunt repre-
zentate de lizozim, care este
Fig. 87. Fagocitoza
răspunzător de ruperea mem-
branei externe a bacteriei precum şi de enzime care induc o creştere a
consumului de oxigen de către neutrofil cu consecinţă imediată în
producerea de apă oxigenată, ioni superoxid şi radicali hidroxil (fig. 87).
Dintre aceste specii, principalul agent bactericid este apa oxigenată
care oxidează componentele bacteriene prin generarea de acid hipocloros ca
urmare a interacţiunii ionilor de clor cu mieloperoxidaza (o enzimă eliberată
de granulaţiile primare). Lactoferina contribuie la distrugerea bacteriilor
prin legarea fierului utilizat de bacterii şi generarea de radicali hidroxil. In
acest proces de fagocitoză are loc şi eliberarea enzimelor de la nivelul
neutrofilelor precum şi a metaboliţilor oxigenului, ca urmare a distrugerii
neutrofilelor, în mediul înconjurător care vor determina modificări tisulare
însoţite de reacţii inflamatorii. Creşterea numărului de neutrofile circulante
(neutrofilie) reprezintă răspunsul caracteristic la infecţia cu diverse
189
FIZIOLOGIA SANGELUI
190
FIZIOLOGIA SANGELUI
191
FIZIOLOGIA SANGELUI
192
FIZIOLOGIA SANGELUI
12.6. Limfocitele T
Precursorii celulei T migrează din măduva osoasă în cortexul timic
unde celulele suferă o diviziune celulară cu un ritm extrem de mare. Marea
majoritate a acestor timocite tinere mor în interiorul cotexului timic. O mică
parte din limfocitele provenite din locul de diviziune de la nivelul cortexului
timic migrează la nivelul medularei timice unde vor suferi diferenţieri
ulterioare. Celulele T care trăiesc la acest nivel posedă pe suprafaţa lor un
receptor cu proprietăţi de recunoaştere:
- receptorul face distincţia între proteinele CMH străine (altele decât
moleculele de clasă I şi II) şi proteinele CMH proprii; el reacţionează cu
primele şi le tolerează pe ultimele;
- cu toate că receptorul nu reacţionează cu proteinele CMH proprii,
acesta recunoaşte şi reacţionează cu un complex formând un peptid derivat
din antigen legat de proteina CMH proprie;
- receptorul de la fiecare celulă T va fi clonotipic; de exemplu, va
recunoaşte numai un singur determinant imunogenic specific (epitop) a
peptidului derivat din antigenul legat de o proteină CMH.
Receptorul antigenic al celulei T este un complex cu multe subunităţi
(fig. 90); în aproximativ 95% din celulele T complexul receptor conţine
lanţuri polipeptidice legate prin punţi disulfidice numite lanţuri α şi β, care
mediază recunoaşterea antigenului. Aceste lanţuri sunt legate necovalent la
5 lanţuri invariabile (α, δ, ε şi
două lanţuri γ) care sunt impli-
cate în transducerea semnalului;
se trimite un semnal spre interi-
orul celulei al cărui receptor este
ocupat. Anticorpii monoclonali
funcţionează pentru recunoaş-
terea unui antigen cu lanţuri
Fig. 90. Limfocit T invariabile a complexului; acest
antigen este numit şi CD3, iar
193
FIZIOLOGIA SANGELUI
194
FIZIOLOGIA SANGELUI
12.7. Limfocitele B
Diferenţierea celulei B de la precursorul primar până la plasmocit are
loc în două faze. Prima fază (se referă la faza ne-antigenică) are loc în
195
FIZIOLOGIA SANGELUI
196
FIZIOLOGIA SANGELUI
197
FIZIOLOGIA SANGELUI
198
FIZIOLOGIA SANGELUI
199
FIZIOLOGIA SANGELUI
200
FIZIOLOGIA SANGELUI
boală la om pot produce boli fatale atunci când răspunsurile mediate celular
sunt absente.
201
FIZIOLOGIA SANGELUI
202
FIZIOLOGIA SANGELUI
203
FIZIOLOGIA SANGELUI
Reacţia vasculară
Reacţia vasculară hemostatică cuprinde constricţia vaselor lezate;
spasm miogen şi vasoconstricţie reflexă simpatică; mediatorii implicaţi în
acest proces sunt histamina (5HT), tromboxanul A2, adrenalina,
fibrinopeptidul B (FPB), la care se adaugă şi vasodilataţia în teritoriile
învecinate. Spasmul este mai puternic cu cât aria lezată este mai întinsă. In
cazul acumulării interstiţiale a sângelui creşterea presiunii tisulare are şi ea
efect hemostatic.
204
FIZIOLOGIA SANGELUI
205
FIZIOLOGIA SANGELUI
206
FIZIOLOGIA SANGELUI
207
FIZIOLOGIA SANGELUI
208
FIZIOLOGIA SANGELUI
209
FIZIOLOGIA SANGELUI
210
FIZIOLOGIA SANGELUI
211
FIZIOLOGIA SANGELUI
212
FIZIOLOGIA SANGELUI
Formarea trombinei are loc astfel: factorul Stuart activat (factor Xa;
fie pe calea intrinsecă fie pe cea extrinsecă a coagulării), împreună cu ionii
de calciu se leagă de reziduurile de acid glutamic ale fragmentului 1 de
protrombină (fig. 99), determinând scindarea lentă a protrombinei în două
locuri (între fragmentul 2 şi pretrombina 2 şi în interiorul buclei disulfidice
interne a pretrombinei 2). Această a doua scindare transformă pretrombina 2
în trombină. Trombina formată acţionează asupra proaccelerinei (factor V),
scindând lanţul polipeptidic al acesteia. In stare nativă, proaccelerina nu are
proprietăţi coagulante; forma sa activată (factor Va) se ataşează de frag-
mentul 2 al moleculei de protrombină acţionând ca un accelerator al
producţiei de trombină. Rolul esenţial al trombinei este de a transforma
fibrinogenul în monomeri de fibrină; de asemenea, activează factorul
stabilizator al fibrinei (factor XIII), factorul VII şi proteina C; determină
agregarea plachetară.
213
FIZIOLOGIA SANGELUI
13.2.4. Fibrinoliza
Agentul responsabil pentru disoluţia fibrinei este plasmina, o protează
care reprezintă forma activată a plasminogenului. Plasminogenul este un
polipeptid sintetizat la nivel hepatic; este transformat în plasmină de către
mai mulţi factori (nu toţi fiziologici). Activatori ai plasminogenului se
găsesc în plasmă, lapte, lacrimi, salivă, lichid seminal; de asemenea mai
poate fi produs de către celule endoteliale, monocite sau celele tumorale.
Streptokinaza, o proteină produsă de către streptococul β-hemolitic,
prezintă un interes particular ca activator al plasminogenului deoarece este
utilizată în clinică pentru dizolvarea trombilor. Streptokinaza se combină
stoikiometric cu plasminogenul şi formează un complex care transformă
plasminogenul în plasmină prin scindare la nivelul unei bucle disulfidice
interne. Stafilococul sintetizează şi el un activator al plasminogenului numit
stafilokinază. Urina normală conţine o protează serică produsă şi excretată
de către rinichi numită urokinază; aceasta transformă plasminogenul în
plasmină prin aceeaşi secvenţă de reacţii ca şi streptokinaza.
Plasma însăşi poate transforma plasminogenul în plasmină “spontan”
prin unul sau mai mulţi factori: kalicreina plasmatică, factorul XIa şi
factorul Hageman activat (factor XIIa); astfel, activarea căii intrinseci de
formare a trombinei iniţiază reacţii care conduc şi la fibrinoliză.
214
FIZIOLOGIA SANGELUI
215
FIZIOLOGIA SANGELUI
litice. Cea mai mare parte din aceşti inhibitori fac parte din categoria
serpinelor, cu excepţia α2 – macroglobulinei.
Antitrombina III este principalul inhibitor al trombinei şi al factorului
Stuart activat (factor Xa). Proprietăţile inhibitorii ale antitrombinei III sunt
puternic potenţate de heparină cu care formează complexe. Heparina este un
polizaharid sulfatat încărcat negativ care este sintetizat în principal la nivelul
mastocitelor; se mai găseşte şi multe ţesuturi cum ar fi plămâni; ficat,
mucoasa intestinală şi nu este un component normal al plasmei. In absenţa
antitrombinei III heparina nu îşi manifestă acţiunea sa anticoagulantă. In
plasmă se găsesc co-factori cu acţiune inhibitoare secundară asupra
trombinei prin heparină numiţ co-factorul II heparinic şi co-factorul A
heparinic a căror acţiune nu implică participarea altor proteaze.
Inhibitorul α2-plasminic reprezintă inhibitorul major al plasminei;
plasmina se combină stoichiometric şi covalent cu acesta formând o legătură
ireversibilă blocând astfel acţiunile plasminei. De asemenea, inhibitorul α2-
plasminic mai inhibă şi adsorbţia plasminogenului la fibrină inhibând
suplimentar fibrinoliza. Activatorii plasminogenului tisular sunt inhibaţi de
către trei componenţi plasmatici: inhibitorul 1 al activatorului
plasminogenului tisular şi inhibitorul 2 al activatorului plasminogenului
tisular (sintetizat de către placentă). Glicoproteina bogată în histidină este o
proteină plasmatică care circulă cuplată cu plasminogenul; ea inhibă
activitatea plasminogenului prin reducerea legării sale la fibrină şi
neutralizează proprietăţile anticoagulante ale heparinei. α2-Macroglobulina
este o proteină plasmatică care inactivează lent proprietăţile proteolitice ale
plasminei, trombinei, kalicreinei şi a activatorului plasminogenului tisular.
Ea se leagă de inhibitor şi îl scindează parţial astfel încât enzima este
modificat`a şi capacitatea ei de a acţiona asupra substratului proteic este
mult redusă. α1-Antitripsina este o glicoproteină sintetizată de către ficat; are
rolul de a inactiva proteina C, trombina şi kalicreina plasmatică.
Proteina C este o pro-enzimă plasmatică dependentă de vitamina K
care se transformă într-o formă activă enzimatic prin acţiunea trombinei sau
factorului Stuart activat (factor Xa). Activarea prin trombină este puternic
accelerată, de către proaccelerina activată (factor Va), la suprafaţa celulelor
endoteliale care secretă trombomodulina cu rol de legare a trombinei la
suprafaţa celulară (fig. 101). Proteinei C activată inhibă proprietăţile
216
FIZIOLOGIA SANGELUI
217