NADH şi NAD+.

Structură şi rol biologic

Nicotinamid adenin dinuecleotida(C21H27N7O14P2) , abreviată NAD +, este o

coenzima ce se gaseste in toate celulele vii. Compusul este o dinucleotidă,
deoarece constă din două nucleotide unite prin intermediul gruparilor de
fosfat, cu o nucleotida conţinând o bază adenina şi alta nicotinamida.
În metabolism, NAD + este implicat în reacţii redox, transportand electronii
de la o reacţie la alta. Coenzima este, prin urmare, găsită în două forme, în
celule: NAD + este un agent de oxidare - se acceptă electroni din alte
molecule şi se reduce. Această reacţie formeaza NADH, care pot fi apoi
utilizat ca agent de reducere pentru a dona electroni. Aceste reactii de
transfer de electroni sunt principala funcţie a NAD +. Cu toate acestea, este
de asemenea utilizat în alte procese celulare, cel mai notabil fiind un substrat
de enzime care adăuga sau elimina grupe chimice din proteine, în modificări
posttranslationale. Datorită importanţei acestor funcţii, enzimele implicate in
metabolismul NAD + sunt obiective pentru descoperirea de droguri.
În organisme, NAD + poate fi sintetizat de la simple blocuri de -construit (de
novo) din aminoacizii triptofan sau acid aspartic. Într-un mod alternativ, mai
multe componente complexe ale coenzimelor sunt preluate din alimente ca
vitamina numită niacină. Compuşi similari sunt eliberati de reacţii care
descompun structura NAD +. Aceste componente preformate apoi trec
printr-o cale de salvare care le reciclează înapoi în forma activă. O parte din
NAD + este, de asemenea, convertită în fosfat -nicotinamid adenin
dinucleotida (NADP +); chimia acestei coenzima inrudite este similară cu
cea a NAD +, dar are roluri diferite în metabolismul.

Fig1. Reactia redox NAD-NADH

Proprietăţi fizice şi chimice

Nicotinamid adenin nucleotida, la fel ca toate
dinucleotidele, constă din două nucleotide unite
printr-o pereche de punti de grupari fosfat.
Nucleotidele constau din inele de riboză, unul cu
adenina ataşată la primul atom de carbon
(pozitia numarul 1) şi celălalt cu nicotinamidă
în această poziţie. Jumătatea cu nicotinamidă poate fi ataşată în două
orientări în acest atom de carbon anomeric. Datorită acestor două structuri
posibile, compusul există sub forma a două diastereomeri. Este diastereomer
β-alta NAD +, care se găseşte în organisme. Aceste nucleotide sunt unite
printr-un pod de două gruparilor de fosfat prin al 5-lea atom de carbon.
In metabolism, compusul accepta sau doneaza electroniin reactii
redox.Astfel de reactii(rezumate in formula de mai jos) includ inlaturarea a
doi atomi de hidrogen din reactant(R), sub forma unui ion hidrura(H-) si unui
proton(H+). Protonul este eliberat in solutie, in timp ce reducatorul RH2 este
oxidat si NAD+ redus la NADH prin transferul hidrurii la inelul de
micotinamida.

RH2 + NAD+ → NADH + H+ + R

2
Din perechea de electroni din hidrura, un electron este transferat la azotul
incarcat pozitiv din inelul de nicotinamida al NAD+, iar al doilea atom de
hidrogen transferat la atomul de carbon C4 opus azotului. Potentialul de
mijloc al cuplului redox NAD+/NADH este de -0.32 volti, lucru ce face ca
NADH sa fie un agent reducator puternic. Reactia este usor reversibila, cand
NADH reduce alta molecula este re-oxidat la NAD+. Aceasta inseamna ca
coenzima poate repeta periodic ciclul intre formele NAD+ si NADH fara a fi
consumata.
In aparenta, toate formele coenzimei sunt pulberi albe amorfe ce sunt
higroscopice si solubile in apa. Solidele sunt stabile daca sunt depozitate in
loc uscat si intunecos. Solutiile de NAD+ sunt incolore si stabile pentru o
saptamana la 4°C si pH neutru, dar se descompun rapid in acizi sau
substante alcaline. Dupa descompunere, formeaza produsi ce sunt inhibitori
de enzime.
Atat NAD+ cat si NADH absorb puternic in ultraviolet datorita bazei
adenina. De exemplu maximul absorbtiei NAD+ este la 259 nm cu un
coeficient de extinctie de 16900M-1cm-1. NADH de asemenea absoarbe la
lungimi de unda inalte, cu un al doilea maxm in absorbtie UV de 339nm, si
coeficient de extinctie de 6220 M-1cm-1. Aceasta diferenta intre spectrele
de absorbtie in UV dintre forma oxidata si redusa a coenzimelor la lungimi
de unda mari face mai usor de masurat conversia intre cele doua forme in
teste enzimatice- prin masurarea absorbtiei UV la 340nm, folosind un
spectrofotometru.

Fig2. Spectrul de emisie UV NAD si NADH

NAD+ si NADH de asemenea difera in ceea ce

priveste flourescenta. NADH in solutie are un maxim de emisie de 460nm si
un timp de flourescenta de 0.4nanosecunde, in timp ce forma oxidata a
coenzimei nu este flourescenta. Proprietatile semnalului flourescent se
schimba cand NADH se leaga de proteine, deci aceste schimbari pot fi
folosite pentru a masura constantele de disociere, care sunt utile in studiul
cineticii enzimatice. Aceste schimbari in flourescenta sunt de asemenea

3
folosite pentru a masura diferente in starea redox a celulelor vii, prin
mocroscopie flourescenta.
In ficatul de sobolan, cantitatea totala de NAD+si NADH este de aproximativ
1μmol per gram de masa umeda, de aproximativ 10 ori concentratia NADP+
in aceleasi celule. Concentratia actuala de NAD+ in citosolul celulei este mai
greu de masurat, cu estimari recente in celule animale de 0.3nM, si
aproximativ 1.0-2.0mM in drojdie. Totusi, mai mult de 80% din NADH
mitocondrial este legat de proteine, deci concentratia in solutie este mult mai
mica.
Date pentru alte compartimente in celula sunt limitate, desi, in mitocondrie
concentratia de NAD+ este similara cu cea din citosol. Acest NAD+este carat
in mitocondrie cu ajutorul unei proteine membranare specifice de transport,
intrucat coenzima nu poate difuza prin membrane.
Echilibrul dintre formele oxidata si redusa ale nicotinamid-adenin-
nucleotidei se numeste raportul NAD+/NADH. Acest raport este un
component important component a ceea ce se numeste starea redox a unei
celule, o masuratoare ce reflecta atat activitatile metabolice si santatea
celulei. Efectele raportului NAD+/NADH sunt complexe, controland
activitatea catorva enzime cheie, inclusiv gligeraldehid 3-fosfat
dehiidrogenaza si piruvat dehidrogenaza. In tesuturile sanatoase de
mamifere, estimari ale raporului dintre NAD+ liber si NADH in citoplasma
sunt de obicei in jur de 700; raportul este deci favorabil pentru reactiile de
oxidare. Raportul de NAD+/NADH total este mult mai mic, variind intre
0.05 si 4. In contrast, raportul NADP+/NADPH este normal cam 0.005, deci
NADPH este forma dominanta a aceste coenzime. Aceste raporturi diferite
sunt cheia pentru rolurile diferite metabolice ale NADH si NADPH.

Biosinteza
NAD + este sintetizat prin două căi metabolice. Acesta este produs fie printr-
o cale de novo din aminoacizi sau în căi de salvare prin reciclarea
componentelor preformate, cum ar fi cu nicotinamidă înapoi la NAD

Producţia de novo
Cele mai multe organisme sintetizează NAD + din componente simple.
Seturile specifice de reactii diferă intre organisme, dar o caracteristică
comună este generarea de acid quinolinic (QA) din un aminoacid - fie
triptofan (TRP) în animale şi unele bacterii, sau acid aspartic în unele
bacterii şi plante. Acidul quinolinic este convertit la acid nicotinic

4
mononucleotide (NaMN) prin transfer unei fracţiuni de fosforiboza.
Molecula de adenilat este apoi transferată, pentru a forma acid nicotinic
adenin dinucleotid (NaAD). În cele din urmă, fracţiunea de acid nicotinic în
NaAD este amidată la o molecula de nicotinamidă (Nam), formând
nicotinamid adenin dinucleotidă. În continuare o parte din NAD + este
convertită în NADP + de + NAD kinaza, care fosforileaza NAD+. În
organisme, această enzimă utilizează ATP ca sursă de grupare fosfat, deşi
mai multe bacterii, cum ar fi Mycobacterium tuberculosis şi o
hyperthermophilic archaeon horikoshii Pyrococcus, utilizează polifosfat
anorganic ca un donator de fosforil alternativ.

Cai de salvare
Pe langa asamblarea NAD+ de novo din simpli precursori de aminoacizi,
celulele mai si salveaza compusi preformati continand nicotinamida. Desi
alti percursori sunt cunoscuti, cei trei compusi naturali ce contin inel de
nicotinamida si sunt folositi in aceste cai metabolice de salvare sunt acid
nicotinic(Na), nicotinamida(Nam) si nicotinamid riboza(NR0. Precursorii
sunt alimentati in calea biosintetica de NAD(P)+, aratata mai sus, prin reactii
de adenilare si fosforibolizare. Acesti compusi pot si asimilati din dieta,
unde amestecul de acid nicotinic si nicotinazmida se numeste vitamina B3
sau niacin. Totusi, acesti compusi sunt de asemenea produsi in celule, unde
moleculele de nicotinamida sunt eliberate din NAD+ in reactii de transfer
ADP-riboza. Intradevar, enzimele implicate in aceste cai de salvare par sa fie
concentrate in nucleul celulelor, ceea ce poate compensa pentru nivelul mare
de reactii ce consuma NAD+ in acest organit unicelular. Celulele pot de
asemenea prelua NAD+ extracelular din imprejurimi.
In ciuda presentei caii de novo, caile de salvare sunt esentiale in oameni; o
lipsa de niacin in dieta poate cauza deficienta de vitamine numita pelagra.

Functii

Nicotinamid adenin dinucleotida are mai multe roluri esenţiale

în metabolism. Aceasta acţionează ca o coenzima in reactii redox, ca un
donator de molecule ADP-riboză în reacţiile ADP-ribosilare, ca un
precursor al celei de-a doua molecule mesager ce inconjoara ADP-riboza,
precum şi acţionând ca un substrat pentru ADN-ului bacterian ligaza şi un
grup de enzime numite sirtuins care utilizează NAD + pentru a elimina

5
 grupurile acetil din proteine.

Oxidoreductaza
Rolul principal al NAD + în metabolism este transferul de electronii de la o
moleculă la alta. Reacţiile de acest tip sunt catalizate de către un grup mare
de enzime numite oxidoreducctaze. Numele corect pentru aceste enzime
conţine numele a celor două substraturi:
pentru exemplu NADH-ubiquinona
oxidoreductaza catalizeaza oxidarea NADH
de coenzima Q. Cu toate acestea, aceste
enzime sunt, de asemenea,
menţionate ca dehidrogenaze sau reductaze,
cu oxidoreductaza NADH-ubiquinona de
obicei fiind numita NADH dehidrogenază
sau uneori, coenzima Q reductază.
Când sunt legate de o proteină, NAD+ si
NADH au loc de obicei într-un motiv Fig3. Rossmann fold in part of the lactate
structural cunoscut ca pliseul Rossman. dehydrogenase of Cryptosporidium
Rossmann fold inMotivul
part of the lactate
este numit după Michael parvum, showing NAD+ in red, beta
dehydrogenase of Cryptosporidium sheets in yellow, and alpha helices in
parvum, showingRossmann,
NAD+ in red, beta
sheets in yellow, care a fost
and alpha primul
helices in om de ştiinţă care a
purple. observat
modul în care această structură comună este
în
proteine nucleotid-legate. Această cuta conţine
trei sau mai multe beta toroane legate paralel
prin doua elice alfa în ordinea beta-alfa-beta-alfa-beta. Aceasta formează o
foaie beta flancata de un strat de elice alfa pe fiecare parte. Deoarece fiecare
cuta Rossman leaga o nucleotida, domeniile de legatura pentru dinucleotid
NAD + constă din două cute Rossmann, cu fiecare cuta legand o nucleotide
de cofactor. Cu toate acestea, aceasta impaturire nu este universala printre
enzimele NAD-dependente, deoarece o clasa de enzime bacteriene implicate
in metabolismul aminoacizilor au fost recent descoperit, care leagă
coenzima, dar le lipseste acest acest motiv.
Atunci când legat în site-ul activ al unei oxidoreductaze, inelul de
nicotinamida al coenzimei este poziţionat astfel încât să poată accepta o
hidrură de la alt substrat. Din moment ce carbonul C4 ce acceptă hidrogenul
este prochiral, acest lucru poate fi exploatat în cinetica enzimă pentru a oferi
informaţii despre mecanismul enzimei. Acest lucru se realizează prin
amestecarea unei enzime cu un substrat care are atomi de deuteriu înlocuind

6
hidrogenul, astfel ca enzima va reduce NAD + prin transferarea deuteriului,
mai degrabă decât hidrogen. În acest caz, o enzimă poate produce una dintre
cei doi stereoizomeri de NADH. În unele enzime hidrogenul este transferat
de deasupra planului inelului nicotinamida, acestea sunt numite de
oxidoreductaze de clasa A, în timp ce enzimele din clasa B transfera atomii
de mai jos.
În ciuda similitudinii în modul în care proteinele leagă cele două coenzime,
enzimele arată aproape întotdeauna un nivel ridicat despecificitate fie pentru
NAD + sau NADP +. Această caracteristică reflectă rolurile distincte
metabolice al respectivelor coenzime, şi este rezultatul unor seturi distincte
de aminoacizi în cele două tipuri de cavitati ce leaga conezime. . Pentru
exemplu, pe site-ul activ al enzimelor NADP dependente, o legătură ionică
se formează între un lant lateral de aminoacizi de şi grupul acid fosfat al
NADP +. In mod contrar, în enzimele NAD dependente încarcatura in
aceasta cavitate este inversată, prevenind NADP + sa se lege. Cu toate
acestea, există câteva excepţii de la această regulă generală,şi enzime, cum
ar fi aldoza reductaza, glucozo-6-fosfat, pot folosi ambele coenzime in unele
specii.

Rol în metabolismul redox

O descriere simplificată a metabolismului redox,
arătând cum NAD + şi NADH leaga ciclul acidului
citric şi fosforilarea oxidativă.Reacţiile redox
catalizate de oxidoreductaze
sunt vitale în toate părţile metabolismului, dar un
domeniu special important în care aceste reacţii apar
este eliberarea de energie din nutrienţi. Aici, compuşi
redusi, cum ar fi glucoza sunt oxidati, astfel
eliberând energie. Aceasta energie este
transferata la NAD +prin reducere la NADH,
ca parte a glicolizei şi ciclului acidului citric.
În eucariote electronii transportati de către
NADH, care este produs în citoplasmă de către Fig 4. A simplified outline of redox
glicoliza sunt transferaţi în mitocondrii metabolism, showing how NAD+ and
(pentru a reduce NAD + mitocondrial), NADH link the citric acid cycle and
prin suveici mitocondriale, cum ar fi transferul oxidative
de malat-aspartat. NADH-ul
phosphorylation.
mitocondrial este oxidat apoi la rândul său, de către lanţ de transport de
electroni, care pompeaza protoni de peste o
membrană şi generează ATP prin fosforilare oxidativă.
Din moment ce ambele forme oxidată şi redusă de nicotinamid adenin

7
dinucleotidă sunt utilizate în aceste seturi legate de reacţii, celula menţine
concentraţii semnificative atât de NAD + şi NADH, cu un raport mare de
NAD + / NADH care să permită acestei coenzime să acţioneze atât ca
oxidant şi un agent de reducere. În schimb, principala funcţie a
NADPH este ca un agent de reducere în anabolism, cu această coenzimă
fiind implicată în căi, cum ar fi sinteza si fotosinteza de acizi graşi. Deoarece
NADPH este necesar pentru a conduce reacţii redox ca un puternic agent de
reducere, NADP + / raportul NADPH este menţinut foarte scăzut.
Deşi este important si în catabolism, NADH-ul este, de asemenea, utilizat în
reacţiile anabolice, cum ar fi gluconeogeneză. Aceastănevoie de NADH-ul si
în anabolism reprezintă o problemă pentru procariotele ce cresc pe nutrienti
care elibereaza doar o cantitate mică de energie. De exemplu, bacteriile
nitrificatoare cum ar fi Nitrobacter oxidează nitriţi la nitrat, care elibereaza
suficientă energie pentru a pompa protonii şi de a
genera ATP, dar nu suficient pentru a produce
NADH-ul direct. După cum NADH-ul este încă
necesar pentru reacţii anabolice, aceste bacterii
utilizeaza un azotit oxidoreductaza pentru a
produce o cantitate suficienta forta de protoni-
motrice pentru a a rula o parte
a lanţului de transport de electroni în sens invers.

Roluri non-redox
Coenzima NAD + este, de asemenea, consumată
în reacţii de transfer ADP-riboză. De exemplu,
enzime numite ADP-riboziltransferaze adăuga
fracţiunea de ADP-riboză a acestei molecule in
proteine , într-o modificare posttranslationala
numită ADP-ribozilare. NAD + poate fi, de
asemenea, adăugat pe ARN celular ca o
modificare de bază.
ADP -ribozilarea implică fie adăugarea unei
singure fracţiuni de ADP-riboză, în mono-ADP-
ribozilare, sau transferul de ADP-riboza la
proteine din lanţuri lungi ramificate, care se
numeşte poli (ADP-ribozil) are.
Mono-ADP-ribozilarea a fost identificata pentru
prima ca mecanism al unei grup de toxine
bacteriene, în special toxina holerei, dar este de
asemenea implicat în semnalizarea celulelor

8
normală. Poli (ADP-ribosyl) area este efectuată de către poli (ADP-
riboză)polimeraze. Structura poli (ADP-riboză) este implicata în reglarea
mai multor evenimente celulare şi este cea mai importantă în nucleul celulei,
si în procese cum ar fi repararea ADN-ului şi întreţinerea telomerilor. În plus
faţă pentru a
aceste funcţii în cadrul celulei, un grup de ADP-ribosiltransferaze
extracelulare a fost recent descoperit, dar funcţiilor lor rămân obscure.
O altă funcţie a acestei coenzime în semnalizarea celulelor este ca un
precursor al ADP-ribozei ciclice, care este produsă de la NAD + prin ADP-
ribozil cyclases, ca parte a unui sistem mesager secund. [66] Această
moleculă acţionează în calciu semnalizarea prin eliberarea de calciu din
magazine intracelulare/ Ea face acest lucru prin legarea şi deschiderea unei
clase de canale de calciu numite receptori de rianodina, care se află în
membranele organitelor organite, cum ar fi reticulul endoplasmic.
NAD + este, de asemenea, consumat de către sirtuine, care sunt deacetilaze
NAD-dependente, cum ar fi Sir2. Aceste enzime acţionează către
transferarea unui grup acetil din substrat lor de proteine la moleculele de
ADP-riboză ale NAD +; aceasta scindează
Coenzima şi eliberează nicotinamid şi O-acetil-ADP-riboză . Sirtuina în
principal, pare să fie implicată în reglementarea transcrierii prin deacetilarea
histonelor şi modificarea structurii nucleozomilor. Cu toate acestea,
proteinele non-histone pot fi dezacetilate de sirtuina, de asemenea. Aceste
activităţi al sirtuinei sunt deosebit de interesante, din cauza
importanţei lor în reglementarea imbatranire
Alte enzime NAD dependente includ ADN ligaze bacteriene, care unesc cele
două capete ale ADN-ului prin utilizarea NAD + ca un substrat donator de
fracţiuni de adenozin monofosfat (AMP), la fosfat 5 'al unui capat al ADN
-ului Acest intermediar este apoi atacat de către grupul de 3 'hidroxil de la
celalalt sfarsit al ADN-ului, formând o legătură fosfodiester nouă . Acest
lucru contrastează cu ligazele ADN eucariote, care utilizează ATP la forma
ADN-AMP intermediar

Farmacologie si utilizari medicale

Enzimele care fac si folosesc NAD+ si NADH sunt importante atat in
farmacologia curenta cat si in cercetarea pentru tratamente viitoare pentru
boli. Fabricarea de medicamente exploateaza NAD+ in trei feluri: ca o tinta
directa pentru medicamente, prim creearea inhibitorilor sau activatorilor de
enzime bazati pe structura ei ce modifica activitatea enzimelor NAD-
dependente, si prin incercarea de a inhiba biosinteza NAD+.

9
Coenzima NAD+ nu este folosita ca tratament pentru nicio boala. Totusi, este
potential utilizabila in terapia bolilor neurodegenerativem cum ar fi
Alzheimer si Parkinson. Dovezile folosirii NAD+ in neurodegenerare este
mixta. Studiile pe soareci sunt promitatoare, in timp ce un experiment clinic
controlat placebo a intarziat sa dea rezultate. NAD+ este de asemenea o tinta
directa a medicamentelor cu izoniazida, care este folosit in tratamentul
tuberculozei, infectie cauzata de Mycobacterium tuberculosis.
Studii au fost tinute asupra ciclistilor profesionisti si cei ce alearga pe
distante lungi. Atletii au aratat: Cantitate mai mare oxigen absorbita, timp
mai mic de reactie, minunata acuitate mentala, 7% mai multa energie
musculara, cresterea nivelului de dioxid de carbon expirat, performanta
cognitiva imbunatatita, rezistenta fizica marita.

10