Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Cluj-Napoca 2010
CUPRINSUL TEZEI DE DOCTORAT
INTRODUCERE .......................................................................................................................................... 3
PARTEA I STADIUL ACTUAL AL CUNOAŞTERII................................................................................ 4
Capitolul 1. Levurile din genul Candida......................................................................................................... 5
1.1 Istoric........................................................................................................................................................ 5
1.2 Taxonomie şi clasificare............................................................................................................................ 5
1.3 Caractere generale..................................................................................................................................... 9
Capitolul 2. Patogenitate .............................................................................................................................. 11
2.1 Factori de patogenitate ai Candida şi factori de apărare ai gazdei............................................................. 12
2.2. Factori de risc asociaţi infecţiei cu Candida............................................................................................ 17
Capitolul 3. Infecţii determinate de Candida ................................................................................................ 19
Capitolul 4. Identificarea speciilor de Candida ............................................................................................. 24
4.1 Examenul microscopic direct................................................................................................................... 24
4.2 Teste fiziologice...................................................................................................................................... 25
4.3 Cultivarea pe medii ................................................................................................................................. 26
4.4 Teste biochimice ..................................................................................................................................... 29
4.5 Teste rapide de identificare a unor specii de Candida............................................................................... 30
4.6 Tehnici moleculare.................................................................................................................................. 32
Capitolul 5. Metodele utilizate pentru testarea sensibilităţii la antifungice a speciilor de Candida ................. 32
5.1 Metoda microdiluţiilor M27-A ............................................................................................................... 34
5.2 Metoda difuzimetrică M44-A .................................................................................................................. 38
5.4 Metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs® .................................................................................................... 41
5.3 E-Test® (AB Biodisk, Solna, Suedia)..................................................................................................... 42
5.5 Alte metode comercializate, nestandardizate, pentru testarea sensibilităţii la antifungice a Candida spp... 47
PARTEA A II-A CERCETĂRI PERSONALE.......................................................................................... 54
Studiul I: Distribuţia şi testarea sensibilităţii la antifungice a speciilor de Candida din Cluj-Napoca, România
şi Grenoble, Franţa........................................................................................................................................ 55
Capitolul 6. Ipoteze, scop şi obiective .......................................................................................................... 55
6.1 Ipoteza cercetării ..................................................................................................................................... 55
6.2 Scopul cercetării...................................................................................................................................... 55
6.3 Obiectivele cercetării............................................................................................................................... 56
Capitolul 7. Material şi metodă .................................................................................................................... 56
7.1 Tulpinile studiate .................................................................................................................................... 56
7.2 Testarea sensibilităţii la antifungice a tulpinilor de Candida spp. izolate .................................................. 69
7.3 Metodele de analiză statistică utilizate ..................................................................................................... 82
Capitolul 8. Rezultate................................................................................................................................... 84
I. Speciile de Candida izolate........................................................................................................................ 84
8.1 Speciile de Candida izolate din diverse produse patologice ..................................................................... 84
8.2 Speciile de Candida izolate de la pacienţi din diferite grupe de risc ......................................................... 98
II. Testarea sensibilităţii la antifungice........................................................................................................ 108
8.3 Testarea sensibilităţii la Fluconazol şi compararea profilului de sensibilitate la Fluconazol a tulpinilor
de Candida izolate din Cluj-Napoca şi Grenoble ......................................................................................... 108
8.4 Testarea sensibilităţii la Voriconazol şi compararea profilului de sensibilitate la Voriconazol a tulpinilor
de Candida izolate din Cluj-Napoca şi Grenoble ......................................................................................... 115
8.5 Testarea sensibilităţii la Caspofungină şi compararea profilului de sensibilitate la Caspofungină a tulpinilor
de Candida izolate din Cluj-Napoca şi Grenoble ......................................................................................... 132
8.6 Testarea sensibilităţii la Amfotericină B a tulpinilor de Candida spp. .................................................... 140
8.7 Testarea sensibilităţii la Itraconazol a tulpinilor de C.krusei................................................................... 143
Capitolul 9. Discuţii................................................................................................................................... 144
Capitolul 10. Concluzii .............................................................................................................................. 157
Studiul II: Compararea a două metode, E-test® şi metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs®, pentru testarea
sensibilităţii la antifungice a speciilor de Candida ....................................................................................... 159
Capitolul 11. Ipoteze, scop şi obiective ...................................................................................................... 159
11.1 Ipoteza cercetării ................................................................................................................................. 160
11.2 Scopul cercetării.................................................................................................................................. 160
11.3 Obiectivele cercetării........................................................................................................................... 160
Capitolul 12. Material şi metodă ................................................................................................................ 161
12.1 Tulpinile studiate................................................................................................................................. 161
12.2 Metodele utilizate pentru testarea sensibilităţii la antifungice a tulpinilor de Candida .......................... 161
12.3 Metodele de analiză statistică utilizate ................................................................................................. 168
Capitolul 13. Rezultate............................................................................................................................... 169
13.1 Rezultatele testării sensibilităţii la antifungice a tulpinilor de Candida prin E-test® şi metoda
difuzimetrică Neo-Sensitabs® ...................................................................................................................... 169
13.2 Rezultatele testării sensibilităţii la Amfotericină B a tulpinilor de Candida spp. prin E-test® şi metoda
difuzimetrică Neo-Sensitabs® ...................................................................................................................... 170
13.3 Rezultatele testării sensibilităţii la Fluconazol a tulpinilor de Candida spp. prin E-test® şi metoda
difuzimetrică Neo-Sensitabs® ...................................................................................................................... 172
13.4 Rezultatele testării sensibilităţii la Voriconazol a tulpinilor de Candida spp. prin E-test® şi metoda
difuzimetrică Neo-Sensitabs® ...................................................................................................................... 174
13.5 Rezultatele testării sensibilităţii la Caspofungină a tulpinilor de Candida spp. prin E-test® şi metoda
difuzimetrică Neo-Sensitabs® ...................................................................................................................... 179
Capitolul 14. Discuţii ................................................................................................................................. 184
Capitolul 15. Concluzii .............................................................................................................................. 187
CONCLUZII GENERALE....................................................................................................................... 188
REFERINŢE............................................................................................................................................. 189
CUVINTE CHEIE
Candida, infecţii fungice, factori de risc,
antifungice: Fluconazol, Voriconazol, Caspofungină, Amfotericină B, Itraconazol,
E-test®, metoda difuzimetrică M44-A, metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs®.
Introducere
Infecţiile oportuniste de etiologie micotică se constituie într-o nouă provocare medicală la început de secol 21.
Infecţiile fungice sunt de obicei oportuniste, asociate cu disfuncţii imune şi cu prezenţa unor factori de risc (ex.
utilizarea antibioticelor cu spectru larg). Numărul pacienţilor cu disfuncţii imune a crescut dramatic datorită pandemiei
SIDA, creşterii numărului pacienţilor transplantaţi, chimioterapiei agresive antineoplazice. Fungii sunt de asemenea
recunoscuţi ca importanţi agenţi etiologici ai infecţiilor nosocomiale, determinând infecţii severe la pacienţii
imunodeprimaţi: pacienţi cu arsuri extinse, cateterizaţi, hemodializaţi, pacienţi aflaţi la vârste extreme.
Se impune necesitatea cunoaşterii epidemiologiei (cunoaşterea speciilor implicate), patogeniei (ex. izolarea
Candida nu înseamnă întotdeauna infecţie), formelor clinice şi cunoaşterea aspectelor terapeutice a infecţiilor micotice.
Pentru aceasta, izolarea şi identificarea agentului etiologic precum şi determinarea profilului de sensibilitate la
antifungice sunt esenţiale.
Ajutorul laboratorului în alegerea terapiei este hotărâtor prin precizarea sensibilităţii tulpinii de Candida la
antifungicul utilizat. Astfel, determinarea printr-o metodă standardizată a sensibilităţii la antifungice a Candida spp. este
deosebit de importantă, mai ales în contextul emergenţei speciilor şi tulpinilor de Candida rezistente la antifungice.
Scopul cercetărilor prezentate în teza de faţă l-a constituit determinarea distribuţiei speciilor de Candida
implicate în patologia umană din Cluj-Napoca şi a sensibilităţii acestor specii la antifungice comparativ cu speciile de
Candida izolate din Grenoble, Franţa, precum şi evaluarea unei metode difuzimetrice, uşor de realizat, fiabile şi ieftine
pentru testarea in vitro a sensibilităţii la antifungice a speciilor de Candida.
Cercetări personale
Prezentarea contribuţiilor personale a fost structurată în două părţi distincte, corespunzătoare celor două studii
realizate.
Studiul I: Distribuţia şi testarea sensibilităţii la antifungice a speciilor de Candida din Cluj-Napoca, România şi
Grenoble, Franţa, cuprinde capitolele 6-10.
Capitolul 6 expune ipotezele, scopul şi obiectivele studiului. Scopul cercetării a fost determinarea distribuţiei
speciilor de Candida implicate în patologia umană din Cluj-Napoca şi a sensibilităţii acestor specii la antifungice
comparativ cu speciile de Candida izolate din Grenoble, Franţa.
Capitolul 7 prezintă tulpinile de Candida spp. studiate: în perioada iulie 2007- decembrie 2008 s-a realizat
identificarea şi testarea sensibilităţii la antifungice a speciilor de Candida izolate din diverse produse patologice
provenite de la pacienţi spitalizaţi în Clinica de Boli Infecţioase din Cluj-Napoca şi de la pacienţi spitalizaţi în Spitalul
Clinic Universitar din Grenoble, Franţa. Probele prelucrate în laboratorul Clinicii de Boli Infecţioase din Cluj-Napoca
au provenit atât de la pacienţi internaţi în această clinică cât şi de la pacienţi internaţi în alte clinici din Cluj-Napoca,
pacienţi internaţi în secţii chirurgicale, de terapie intensivă, pediatrie sau medicale.
Au fost descrise metodele utilizate pentru testarea sensibilităţii tulpinilor izolate de Candida spp. la antifungice:
pentru Fluconazol şi Voriconazol metoda difuzimetrică M44-A şi E-test®, pentru Caspofungină, Amfotericină B şi
Itraconazol E-test®.
Metodele de analiză statistică a datelor au fost:
- testul Chi-pătrat, testul exact al lui Fisher;
- testul U al lui Mann-Whitney;
- coeficientul de corelaţie (R) al lui Pearson;
Pentru realizarea analizelor statistice şi a modelelor de regresie s-a utilizat programul SPSS 13.0.
Capitolul 8 prezintă rezultatele obţinute în studiul I.
Speciile de Candida izolate
Din Cluj-Napoca s-au identificat 249 tulpini de Candida spp.: C.albicans (45%), C.glabrata (26,1%), C.krusei
(10,04%), C.parapsilosis (5,62%), C.tropicalis (4,82%), C.famata (2,41%), C.guilliermondii (2,01%), C.pelliculosa
(0,8%), C.lipolytica (0,8%), C.kefyr (0,8%), C.sake (0,4%), C.lusitaniae (0,4%), C.inconspicua (0,4%), C.curvata
(0,4%).
Din Grenoble s-au identificat 813 tulpini de Candida spp.: C.albicans (51,91%), C.glabrata (20,66%), C.tropicalis
(6,40%), C.parapsilosis (5,78%), C.krusei (5,41%), C.kefyr (4,43%), C.inconspicua (1,85%), C.lusitaniae (1,72%),
C.guilliermondii (0,98%), C.utilis (0,37%), C.catenulata (0,12%), C.lipolytica (0,12%), C.pulcherima (0,12%).
Din hemoculturi, în Cluj-Napoca, principalele specii izolate a fost C.albicans, C.parapsilosis, C.glabrata,
C.tropicalis, iar în Grenoble C.albicans, C.glabrata, C.parapsilosis şi C.tropicalis. În Cluj-Napoca, din urini,
principala specie izolată a fost C.glabrata. Din Grenoble, din urini, principala specie izolată a fost C.albicans.
În Cluj-Napoca, de la pacienţi internaţi în secţii chirurgicale, pe primul loc ca frecvenţă a izolării s-a situat
C.glabrata, în secţii de boli infecţioase după C.albicans s-a situat C.krusei, iar în secţii de pediatrie după C.albicans s-a
situat C.parapsilosis.
Testarea sensibilităţii la antifungice şi compararea profilului de sensibilitate la antifungice a tulpinilor de Candida
izolate din Cluj-Napoca şi Grenoble
Rezultatele testării sensibilităţii la Fluconazol sunt reprezentate grafic în figurile 83 şi 84.
Nu au fost testate la Fluconazol tulpinile de C.krusei (C.krusei fiind rezistentă la Fluconazol).
În Cluj-Napoca, toate tulpinile testate de C.kefyr, C.lusitaniae, C.lipolytica, C.guilliermondii, C.inconspicua şi
C.curvata au fost sensibile la Fluconazol.
În Grenoble, toate tulpinile de C.tropicalis, C.kefyr, C.guilliermondii, C.utilis, C.lipolytica, C.pelliculosa, C.pulcherima
şi C.catenulata au fost sensibile la Fluconazol.
Diferenţa de sensibilitate la Fluconazol a tulpinilor de Candida spp. izolate din Cluj-Napoca şi din Grenoble a
fost semnificativă statistic (p <<0.001, testul chi-pătrat şi testul Fisher exact).
Riscul relativ (RR) ca o tulpină de Candida spp. izolată din Cluj-Napoca să fie mai rezistentă la Fluconazol decât o
tulpină de Candida spp. izolată din Grenoble a fost 4,038, cu un interval de încredere 95% de [2,191 – 7,444].
100%
100%
93.69% 92.31% 91.67%
99.53% 100% 100%
83.33% 100% 97.87%
80%
78.57%
80%
74.40%
57.81%
60%
60%
R 50%
40% S
SDD 40%
25% 35.71%
ns ta is lis at
a
ak
e
a
os
ns
ae
fyr
a
l is
ra
is
ca ica
cu
R
at
os
sil m .s
ca
ca
i b
ni
br
.fa
pi
op
.k
lb la
a
sil
pi
C
i
p
lb
la
ns
si t
S
C
.a .g .tr
tr o
p
a C
.a
.g
ar
.lu
ra
co
C C
C.
C
a
SDD
.i n
C
.p
.p
C
C
C
Figura 83. Sensibilitatea la Fluconazol a speciilor de Figura 84. Sensibilitatea la Fluconazol a speciilor de
Candida din Cluj-Napoca Candida din Grenoble
60% R
60%
R S
S SDD
40%
40%
SDD
17,5% 20%
20% 15%
10% 11.11%
5.48% 5% 8.33% 5.35% 2.27%
0.24% 2.98%
0%
0%
ns ta lis is s ei fy
r
ca ra ica os e
ns
ta
e
is
ru
is
se
i b il .k
ak
l
ra
os
.k
ca
ica
lb la op ps
ru
C
.s
b
.a .g C
sil
.tr
i
.k
ra
op
la
lb
C C
p
C
a
.g
.a
C
.tr
ra
.p
C
C
a
C
.p
C
Figura 90. Sensibilitatea la Voriconazol a speciilor Figura 91. Sensibilitatea la Voriconazol a speciilor
de Candida din Cluj-Napoca de Candida din Grenoble
Diferenţa de sensibilitate la Voriconazol a tulpinilor de Candida spp. izolate din Cluj-Napoca şi din Grenoble a
fost semnificativă statistic (p <<0.001, testul chi-pătrat şi testul Fisher exact).
Riscul relativ (RR) ca o tulpină de Candida spp. izolată din Cluj-Napoca să fie mai rezistentă la Voriconazol decât o
tulpină de Candida spp. izolată din Grenoble a fost 6,295, cu un interval de încredere 95% de [3,033 – 13,064].
Caspofungină
Toate tulpinile de Candida testate din Cluj-Napoca au fost sensibile la Caspofungină, cu excepţia unei tulpini de
C.parapsilosis care a fost non-sensibilă la Caspofungină, CMI-ul obţinut pentru această tulpină a fost de 2 µg/ml. Toate
tulpinile de Candida izolate din Grenoble au fost sensibile la Caspofungină.
Diferenţa de sensibilitate la Caspofungină a tulpinilor de Candida spp. izolate din Cluj-Napoca şi din Grenoble fost
nesemnificativă statistic (p = 0.139, testul Fisher exact).
S-a constat că există o diferenţă înalt semnificativă statistic (p<<0.001, testul Mann-Whitney) între CMI-urile
la Caspofungină obţinute pentru tulpinile de Candida spp. izolate din Cluj-Napoca şi Grenoble. CMI-urile obţinute în
Cluj-Napoca s-au încadrat în intervalul 0,032 -2 µg/ml, cu o mediană de 0,25 µg/ml, iar CMI-urile obţinute în Grenoble
la Caspofungină pentru tulpinile testate de Candida spp. s-au încadrat în intervalul 0,004 - 1µg/ml, cu o mediană de
0,064 µg/ml (figura 105).
Rezultatele testării sensibilităţii la Amfotericină B a tulpinilor de Candida spp. (figura 110)
Toate tulpinile de C.albicans, C.inconspicua, C.lusitaniae, C.guilliermondii, C.utilis, C.lipolytica, C.pelliculosa,
C.pulcherima şi C.catenulata testate în Grenoble au fost sensibile la Amfotericină B.
Rezultatele testării sensibilităţii la Itraconazol a celor 32 tulpini de C.krusei izolate din Grenoble: 11 tulpini au
fost rezistente (46,87%) şi 14 SDD (43,75%).
Figura 105. CMI-urile pentru Caspofungină obţinute pentru tulpinile de Candida din Cluj-Napoca şi Grenoble
60%
40%
R
20% S
9,1% I
1,2% 1.92% 4.26% 4.54% 2.78%
0,6%
0%
ns ta lis sis ei yr
ca ra ca lo ru
s ef
lb
i
la
b pi si .k .k
o C
C
.a
C
.g .tr r ap C
C a
.p
C
Capitolul 9 interpretează şi discută rezultatele acestei prime părţi a cercetării, prin raportare la cercetări
asemănătoare.
Capitolul 10 prezintă concluziile primei părţi a cercetării. Dintre acestea, menţionez în continuare următoarele:
1. Principalele specii de Candida izolate din Cluj-Napoca şi Grenoble au fost Candida albicans şi Candida glabrata. În
Cluj-Napoca pe locul 3 ca frecvenţă a izolării s-a situat Candida krusei (specie rezistentă la Fluconazol), în Grenoble
situându-se pe locul 5, după Candida tropicalis şi Candida parapsilosis.
2. Tulpinile de Candida spp. izolate din Cluj-Napoca au fost mai rezistente la Fluconazol şi Voriconazol decât tulpinile
de Candida izolate din Grenoble.
3. Valorile concentraţiilor minime inhibitorii la Caspofungină obţinute pentru tulpinile de Candida spp. testate la Cluj-
Napoca au fost mai mari decât cele obţinute la Grenoble.
4. În iniţierea unui tratament antifungic empiric este esenţială cunoaşterea speciilor de Candida dintr-un anumit areal
geografic, respectiv spital şi profilul lor de sensibilitate la antifungice.
5. Diferenţele observate între Cluj-Napoca şi Grenoble subliniază importanţa şi necesitatea unor protocoale pentru
depistarea şi supravegherea pacienţilor la risc, pentru stabilirea diagnosticului etiologic micologic, finalizate cu testarea
sensibilităţii la antifungice.
Studiul II: Compararea a două metode, E-test® şi metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs®, pentru testarea
sensibilităţii la antifungice a speciilor de Candida, cuprinde capitolele 11-15.
Capitolul 11 expune ipotezele, scopul şi obiectivele. Scopul cercetării a fost evaluarea unei metode
difuzimetrice, uşor de realizat, fiabile, ieftine pentru testarea in vitro a sensibilităţii la antifungice a speciilor de
Candida. Obiectivul studiului a fost realizarea unei comparaţii între două metode de testare a sensibilităţii la antifungice
a speciilor de Candida: E-test® (AB Biodisk, Solna, Suedia) şi metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs® (Rosco
Diagnostica, Taastrup, Denmark) cu tablete de 9 mm diametru. E-test®-ul este o metodă de testare a sensibilităţii
Candida la antifungice standardizată, uşor de realizat dar al cărui principal dezavantaj îl constituie costul ridicat (10
euro/bandeletă), ceea ce îl face inaccesibil pentru majoritatea laboratoarelor clinice, impunându-se astfel găsirea unei
metode care să păstreze avantajele E-test®-ului dar care să fie mai ieftină.
Capitolul 12 prezintă materialul şi metodele utilizate pentru realizarea acestui studiu.
S-a realizat identificarea şi testarea sensibilităţii la antifungice prin E-test® şi prin metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs®
a 93 de tulpini de Candida spp. izolate din diverse produse patologice provenite de la pacienţi din Spitalul Clinic
Universitar din Grenoble, Franţa în perioada februarie – aprilie 2009.
S-a determinat procentul concordanţelor calitative dintre rezultatele obţinute prin E-test® şi cele obţinute prin metoda
difuzimetrică Neo-Sensitabs®. Au fost identificate următoarele discordanţe: foarte mari - când o tulpină a fost rezistentă
(R) prin E-test® şi sensibilă (S) cu Neo-Sensitabs®, mari - când o tulpină a fost S prin E-test® şi R cu Neo-Sensitabs®,
minore – când o tulpină a fost S sau SDD printr-o metodă şi SDD sau R prin cealaltă.
Analiza statistică a datelor s-a realizat utilizând modele de regresie liniară şi calculul coeficientului de corelaţie Pearson
(R) dintre valorile liniarizate prin logaritmare ale CMI (exprimate în µg/ml) şi diametrele zonelor de inhibiţie
(exprimate în milimetri) obţinute pentru antifungicele testate, interpretându-se pentru fiecare regresie în parte
coeficientul de corelaţie R al lui Pearson şi nivelul său de semnificaţie statistică. Pentru realizarea modelelor de regresie
s-a utilizat programul SPSS 13.0.
Capitolul 13 prezintă rezultatele obţinute în studiul II.
Pentru Amfotericină B procentul de concordanţă obţinut între E-test® şi metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs®
a fost de 90,32%. S-au constatat 6 discordanţe minore (pentru 5 tulpini de C.glabrata şi 1 tulpină de C.albicans) şi 3
discordanţe foarte mari (pentru 2 tulpini de C.glabrata şi 1 tulpină de C.krusei). Coeficientul de corelaţie R, dintre
Log2CMI Amfotericină B şi diametrul zonei de inhibiţie a fost -0,622 (figura 121).
Pentru Fluconazol procentul de concordanţă obţinut între E-test® şi metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs® a
fost de 100%. Coeficientul de corelaţie R, dintre Log2CMI Fluconazol şi diametrul zonei de inhibiţie, a fost de -0,654.
Pentru Voriconazol procentul de concordanţă obţinut între E-test® şi metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs® a
fost de 100%. Coeficientul de corelaţie R, dintre Log2CMI Voriconazol şi diametrul zonei de inhibiţie, a fost -0,620.
Figura 121. Amfotericină B – reprezentarea grafică Figura 128. Caspofungină – reprezentarea grafică
a relaţiei dintre Log2CMI (E-test®) şi diametrul a relaţiei dintre Log2CMI (E-test®) şi diametrul
zonei de inhibiţie (Neo-Sensitabs®). zonei de inhibiţie (Neo-Sensitabs ®)
Pentru Caspofungină procentul de concordanţă obţinut între E-test® şi metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs® a
fost de 98,92%. S-a constatat 1 discordanţă mare (pentru 1 tulpină de C.krusei). Coeficientul de corelaţie R, dintre
Log2CMI Caspofungină şi diametrul zonei de inhibiţie, a fost de -0,679 (figura 128).
Valoarea tuturor coeficienţilor de corelaţie R a prezentat o înaltă semnificaţie statistică (p<<0,001).
Capitolul 14 - interpretează şi discută rezultatele celui de-al II-lea studiu din contribuţiile personale, prin
raportare la cercetări asemănătoare, subliniind punctele forte, dar totodată şi limitările inerente oricărui studiu.
Capitolul 15 prezintă concluziile celei de-a doua părţi a cercetării personale. Dintre acestea menţionez în
continuare următoarele:
1. E-test® -ul este o metodă de testare a sensibilităţii la antifungice a speciilor de Candida standardizată, uşor de utilizat
în practică, dar valorile concentraţiilor minime inhibitorii (µg/ml) sunt uneori dificil de citit mai ales pentru azoli,
datorită fenomenului de creştere reziduală. Un alt dezavantaj al E-test®-ului este costul ridicat.
2. Zonele de inhibiţie obţinute prin metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs® au fost bine delimitate şi măsurarea
diametrului zonelor de inhibiţie s-a realizat cu uşurinţă, fiind unul din principalale avantaje ale metodei. De asemenea,
această metodă este uşor de utilizat în laboratoarele clinice, costul fiind mult mai scăzut decât al E-test®-ului.
3. S-a obţinut o excelentă concordanţă între rezultatele E-test®-ului şi Neo-Sensitabs® pentru Fluconazol, Voriconazol şi
Caspofungină, un nivel mai scăzut de concordanţă obţinându-se pentru Amfotericină B.
CONCLUZII GENERALE
1. Infecţiile fungice rămân afecţiuni grave şi frecvenţa lor a crescut considerabil în ultimii ani. Creşterea numărului de
pacienţi imunodeprimaţi şi explozia intervenţiilor medico-chirurgicale invazive au contribuit în mare măsură la
emergenţa acestei patologii. În faţa acestei modificări epidemiologice posibilităţile terapeutice s-au îmbunătăţit,
cuprinzând Amfotericina B, azolii şi echinocandinele.
2. În iniţierea unui tratament antifungic empiric este esenţială cunoaşterea speciilor de Candida dintr-un anumit areal
geografic, respectiv spital şi profilul lor de sensibilitate la antifungice.
3. Diferenţele observate între Cluj-Napoca şi Grenoble subliniază importanţa şi necesitatea unor protocoale pentru
depistarea şi supravegherea pacienţilor la risc, pentru stabilirea diagnosticului etiologic micologic, finalizate cu
testarea sensibilităţii la antifungice.
4. Cunoaşterea speciilor de Candida implicate în patologie, a distribuţiei acestora şi a sensibilităţii lor la antifungice
este esenţială pentru iniţierea unei terapii optime cât mai precoce, administrarea corectă a antifungicelor după
rezultatul antifungigramei limitând tratamentul empiric al infecţiilor fungice, prevenind selectarea tulpinilor de
Candida rezistente şi eşecul terapeutic.
5. Comparaţia efectuată între metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs® şi E-test® pentru testarea sensibilităţii la
antifungice a Candida spp. este al doilea studiu care evaluează performanţele Neo-Sensitabs® pentru Amfotericină
B şi Caspofungină comparativ cu metoda E-test® şi primul studiu care evaluează performanţele Neo-Sensitabs®
pentru Fluconazol şi Voriconazol comparativ cu metoda E-test®.
6. S-a obţinut o excelentă concordanţă între rezultatele E-test®-ului şi Neo-Sensitabs® pentru Fluconazol, Voriconazol
şi Caspofungină.
7. Metoda difuzimetrică Neo-Sensitabs® pentru testarea sensibilităţii la Fluconazol şi Voriconazol a Candida spp.
prezintă multiple similitudini cu metoda standardizată M44-A, putând reprezenta o alternativă uşor de utilizat în
laboratoarele clinice şi mai ieftină decât E-test®-ul, existând posibilitatea unei predicţii a CMI în funcţie de
diametrul zonei de inhibiţie prin realizarea de modele de regresie liniară.
Bibliografie selectivă
1. White TC. Mechanism of resistance to antifungal agents. In Murray PR, editor. Manual of Clinical Microbiology. 8th
ed. Washington D.C (USA): ASM PRESS; 2003:p.1869-79.
Pfaller MA. Nosocomial candidiasis: emerging species, reservoirs and mode of transmission. Clin Infect Dis
1996;22(suppl.2):89-94.
2. Espinel-Ingroff A, Barchiesi F, Hazen KC, Martinez-Suarez JV, Scalise G. Standardisation of susceptibility testing
and clinical relevance. Med Mycol 1998;36:68-78.
3. Pfaller MA. Nosocomial candidiasis: emerging species, reservoirs and mode of transmission. Clin Infect Dis
1996;22(suppl.2):89-94.
4. Mares M, Bazgan O. Diagnosticul de laborator al infecţiilor produse de fungi. În Buiuc D, Neguţ M. Tratat de
microbiologie clinică. Ed.Medicală, Bucureşti; 2008. p.953-6.
5. Espinel-Ingroff A, Canton A, Gibbs D, Wang A. Correlation of Neo-Sensitabs tablet diffusion assay results on three
different agar media with broth microdilution M27-A2 and disk diffusion M44-A results for testing susceptibilities of
Candida spp. and Cryptococcus neoformans to Amphotericin B, Caspofungin, Fluconazole, Itraconazole and
Voriconazole. J Clin Microbiol 2007;45(3):858-64.
6. Espinel-Ingroff A, Canton E. Antifungal susceptibility testing of yeasts. In Antimicrobial susceptibility testing
protocols. Edited by Schwalbe R, Steele-Moore L, Goodwin AC. CRC Press, Taylor & Francis Group 2007.
7. Pappas PG, Kauffman CA, Andes D, Benjamin DK Jr, Calandra TF, Edwards JE Jr, Filler SG, Fisher JF, Kullberg
BJ, Ostrosky-Zeichner L, Reboli AC, Rex JH, Walsh TJ, Sobel JD; Infectious Diseases Society of America. Clinical
practice guidelines for the management of candidiasis: 2009 update by the Infectious Diseases Society of America. Clin
Infect Dis 2009;48(5):503-35.
8. Pfaller MA, Boyken L, Hollis RJ, Messer SA, Tendolkar S, Diekema DJ. In vitro susceptibilities of Candida spp. to
caspofungin: four years of global surveillance. J Clin Microbiol 2006;44(3):760-3.
9. Thompson GR, Wiederhold NP, Vallor AC, Villareal NC, Lewis JS, Patterson TF. Development of caspofungin
resistance following prolonged therapy for invasive candidiasis secondary to Candida glabrata infection. Antimicrob
Agents Chemother 2008;52(10):3783-85.
10. Pfaller MA, Diekema DJ. Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem. Clin Microbiol
Reviews 2007;20(1):133–63.
11. Ostrosky-Zeichner L, Rex JH, Pappas PG, Hamill RJ, Larsen RA, Horowitz HW, Powderly WG, Hyslop N,
Kauffman CA, Cleary J, Mangino JE, Lee J. Antifungal susceptibility survey of 2,000 bloodstream Candida isolates in
the United States. Antimicrob Agents Chemother 2003;47(10):3149-54.
12. Pfaller MA, Diekema DJ, Gibbs DL, Newell VA, Meis JF, Gould IM, Fu W, Colombo AL, Rodriguez-Noriega E;
Global Antifungal Surveillance Study. Results from the ARTEMIS DISK Global Antifungal Surveillance study, 1997 to
2005: an 8.5-year analysis of susceptibilities of Candida species and other yeast species to fluconazole and voriconazole
determined by CLSI standardized disk diffusion testing. J Clin Microbiol 2007;45(6):1735-45.
Dr. Ioana Alina COLOSI
Asistent universitar
Universitatea de Medicină şi Farmacie “Iuliu Haţieganu” Cluj-Napoca, România
Catedra de Microbiologie
Str. Louis Pasteur nr. 6, cod 400349, Cluj-Napoca, România
Email: ioana.colosi@gmail.com
CURRICULUM VITAE
ACTIVITATE ŞTIINŢIFICĂ:
Lucrări publicate in extenso
1. Colosi I, Faure O, Lebeau B, Colosi H, Junie M, Pelloux H. Comparison of two methods, E-test® and Neo-
Sensitabs® tablet diffusion assay, for testing susceptibility of 93 Candida strains to amphotericin B, fluconazole,
voriconazole, and caspofungin. Sc Parasit 2009:1-2:112-22.
2. Colosi I, Costache C, Junie M. Patogenia infecţiilor cu Candida: factorii de patogenitate şi factorii de risc ai
infecţiilor cu fungi din genul Candida. Clujul Medical 2009;82(1):30-4.
3. Colosi I, Costache C, Junie M. Rezistenţa biofilmelor de Candida la antifungice. Fungi &Mycotoxins
2009;1(3):242-9.
4. Costache C, Colosi IA, Colosi HA. Immunochromatography versus microscopy for the identification of Giardia
lamblia and Cryptosporidium parvum in human feces. Sc Parasit 2009:1-2:26-31.
5. Colosi I. Methods of studying biofilms and hipermutability. Sc Parasit 2008;1:22-4.
6. Christofidou M, Spiliopoulou A, Vamvacopoulou S, Stamoulis V, Dimitracopoulos G, Anastassiou E, Junie LM,
Costache C, Colosi I, Ciobanca PT. Species distribution and antifungal susceptibility of Candida isolates collected
from hospitalized patients in Romania and Greece. Sc Parasit, 2008;1:61-7.
7. Costache C, Colosi I, Junie M. Specii de Candida izolate din infecţiile micotice. Sc Parasit 2008;1:68-73.
8. Costache C, Colosi I. Metoda difuzimetrică în testarea sensibilităţii la antifungice. Sc Parasit 2008;1:74-8.
9. Costache C, Junie M, Colosi I, Minica F. Incidenţa parazitozelor la pacienţii din Spitalul Clinic Judeţean de
Urgenţă şi Clinica de Boli Infecţioase. Sc Parasitol 2007;8(1):39-44.
ACTIVITATE DIDACTICĂ
Colaborator la cursurile postuniversitare ale Catedrei de Microbiologie: Micologie medicală şi Parazitologie
medicală.
Lucrari practice de Microbiologie cu studenţii Facultăţii de Medicină Generală anul II, III, VI, secţia română şi linia
engleză, studenţii Facultăţii de Medicină Dentară anul II, secţia română şi linia engleză, studenţii Facultăţii de
Farmacie anul II secţia română.
Experienţa acumulată în programe/proiecte naţionale/internaţionale:
TO ANTIFUNGAL AGENTS
Cluj-Napoca 2010
Keywords
Candida, fungal infections, risk factors,
Antifungal drugs: fluconazole, voriconazole, caspofungin, amphotericin B, itraconazole,
E-test®, standardized disk diffusion method M44-A, disk diffusion method Neo-Sensitabs®.
Introduction
Opportunistic fungal infections represent a new medical challenge at the beginning of the 21st century.
Fungal infections are usually associated with immune dysfunctions and the presence of risk factors (eg, use of
broad spectrum antibiotics). The number of patients with immune disorders has increased dramatically due to AIDS
pandemic, increasing number of transplant patients, aggressive cancer chemotherapy. Fungi are also known as
important etiologic agents of nosocomial infections, causing severe infections in immunosuppressed patients:
neutropenic patients, patients with extensive burns, patients with indwelling catheters, patients at extreme ages.
There is a need of knowledge regarding epidemiology (species involved), pathogenesis (e.g. Candida
isolation does not always mean infection), clinical forms and knowledge of therapeutic aspects of fungal infections.
Therefore, isolation, identification of etiologic agent, and determining the antifungal susceptibility profile of
Candida are essential.
Laboratory assistance for the choice of therapy is crucial by specifying the susceptibility of Candida strains
to antifungal drugs. Thus, a standardized method to determine the antifungal susceptibility of Candida spp. is very
important, especially in the context of the emergence of Candida strains and species resistant to antifungal drugs.
The aim of research presented in the thesis was to determine the distribution of Candida species involved in
human pathology in Cluj-Napoca, their antifungal susceptibility compared to Candida species isolated in Grenoble,
France, and the evaluation of a tablet diffusion assay, as a reliable and affordable in vitro testing method for
antifungal susceptibility of Candida species.
Literature review
The literature review was structured in 5 chapters (Chapters 1-5) and outlines a synthesis of current
knowledge regarding Candida species, synthesis achieved by studying national and international literature (232
references, up to January 2010).
Personal contributions
Original research was structured into two distinct parts, corresponding to the two studies.
The first study: Distribution and antifungal susceptibility testing of Candida species in Cluj-Napoca, Romania and
Grenoble, France, includes chapters 6-10.
Chapter 6 points out the key assumptions, study aim, and objectives. Research aim was to determine the
distribution of Candida species involved in human pathology in Cluj-Napoca and the antifungal susceptibility of
these species compared to Candida species isolated in Grenoble, France.
Chapter 7 presents the studied Candida spp. strains between July 2007-December 2008. We identified and
performed the antifungal susceptibility testing of Candida species isolated from different pathological products of
patients hospitalized in the Infectious Diseases Clinic from Cluj-Napoca and of patients hospitalized in the
University Hospital of Grenoble, France. Samples processed in the laboratory of Infectious Diseases Clinic of Cluj-
Napoca came from both patients hospitalized in the clinic and patients hospitalized in other clinics of Cluj-Napoca,
patients hospitalized in surgical wards, intensive care units, pediatric units and medical departments.
The methods used for susceptibility testing of isolates of Candida spp. to antifungal agents were also
described: for fluconazole and voriconazole - disk diffusion method M44-A and E-test®, for caspofungin,
amphotericin B, and itraconazole - E-test®.
The following methods of data analysis were used:
- Chi-square test, Fisher's exact test;
- Mann-Whitney U test
- Pearson’s correlation coefficient (R values).
To perform statistical analysis and regression models we used SPSS 13.0.
Chapter 8 describes the results obtained in the first study.
Isolated Candida species
In Cluj-Napoca we identified 249 strains of Candida spp.: C.albicans (45%), C.glabrata (26,1%), C.krusei
(10,04%), C.parapsilosis (5,62%), C.tropicalis (4,82%), C.famata (2,41%), C.guilliermondii (2,01%), C.pelliculosa
(0,8%), C.lipolytica (0,8%), C.kefyr (0,8%), C.sake (0,4%), C.lusitaniae (0,4%), C.inconspicua (0,4%), C.curvata
(0,4%).
In Grenoble we identified 813 strains of Candida spp.: C.albicans (51,91%), C.glabrata (20,66%), C.tropicalis
(6,40%), C.parapsilosis (5,78%), C.krusei (5,41%), C.kefyr (4,43%), C.inconspicua (1,85%), C.lusitaniae (1,72%),
C.guilliermondii (0,98%), C.utilis (0,37%), C.catenulata (0,12%), C.lipolytica (0,12%), C.pulcherima (0,12%).
The main Candida species isolated from blood cultures in Cluj-Napoca were C.albicans, C.parapsilosis,
C.glabrata, C.tropicalis, and in Grenoble the main candida species were: C.albicans, C.glabrata, C.parapsilosis,
and C.tropicalis.
The main Candida species isolated from urine in Cluj-Napoca was C.glabrata, and in Grenoble - C.albicans.
In Cluj-Napoca, the main Candida species isolated from patients hospitalized in surgical wards was C.glabrata,
from patients hospitalised in departments of infectious diseases - C.albicans followed by C.krusei, and from patients
hospitalized in pediatric department - C.albicans followed by C. parapsilosis.
Antifungal susceptibility testing and comparing the antifungal susceptibility profile of Candida strains isolated in
Cluj-Napoca and Grenoble
Fluconazole susceptibility testing results are plotted in figures 1 and 2. C.krusei strains were not tested against
fluconazole (C.krusei is resistant to fluconazole).
In Cluj-Napoca, all tested strains of C.kefyr, C.lusitaniae, C.lipolytica, C.guilliermondii, C.curvata, and
C.inconspicua were susceptible to fluconazole.
In Grenoble, all tested strains of C.tropicalis, C.kefyr, C.guilliermondii, C.utilis, C.lipolytica, C.pelliculosa,
C.pulcherima, and C.catenulata were susceptible to fluconazole.
The susceptibility difference to fluconazole of Candida spp. strains isolated from Cluj-Napoca and Grenoble was
statistically significant (p <<0.001, chi-square and Fisher exact test). The relative risk (RR) of a Candida spp. strain
isolated from Cluj-Napoca to be more resistant to fluconazole than a Candida spp. strain isolated from Grenoble
was 4.038, with a 95% confidence interval [2.191 - 7.444].
100%
100%
93.69% 92.31% 91.67% 100% 100%
99.53% 97.87%
100%
83.33%
80%
78.57%
80%
74.40%
57.81%
60%
60%
R 50%
40% S
40%
25% SDD 35.71%
ns ta is lis at
a ke
a
s
ae
r
a
is
ra os
is
ca
fy
ca
an
a
cu
R
at
al
os
sil m .s
ni
ke
i b pi
br
pic
ic
pi
lb la .fa
ita
sil
C.
C
alb
gla
ns
.a .g ap o S
.tr
tro
lus
C
ra
co
ar
C.
C.
C C
C.
C.
C SDD
.in
.p
.p
C
C
C
60% R
60%
S
R
SDD
S 40%
40%
SDD
17,5% 20%
20% 15%
10% 8.33% 11.11% 5.35% 2.98%
5.48% 5% 0.24% 2.27%
0%
0%
ns
ei
r
ta
lis
sis
fy
s
s
ke
ra
ei
ta
is
ca
ca
sis
e
ru
n
o
l
.k
s
ra
b
ca
ca
sil
pi
i
.k
ru
lb
la
C
.s
b
o
sil
ap
pi
C
i
.k
.a
.g
lb
la
.tr
o
p
C
C
.a
.g
ar
.tr
C
ra
C
.p
C
a
C
.p
C
The susceptibility difference to voriconazole of Candida spp. strains isolated from Cluj-Napoca and Grenoble
was statistically significant (p <<0.001, chi-square and Fisher exact test). The relative risk (RR) for a strain of
Candida spp. isolated from Cluj-Napoca to be more resistant to voriconazole than a strain of Candida spp. isolated
from Grenoble was 6.295, with a 95% confidence interval [3.033-13.064].
Caspofungin susceptibility testing and comparing the pattern of susceptibility to caspofungin between
Candida strains isolated in Cluj-Napoca and Grenoble
In Cluj-Napoca, all tested Candida strains were susceptible to caspofungin, except for 1 strain of
C.parapsilosis which was non-susceptible to caspofungin. The MIC obtained for this strain was 2 mg/ml.
In Grenoble, all tested Candida strains were susceptible to caspofungin.
The susceptibility difference to caspofungin of Candida spp. strains isolated from Cluj-Napoca and Grenoble
was statistically insignificant (p = 0.139, Fisher exact test).
A highly significant difference (p <<0.001, Mann-Whitney test) was found between the MICs obtained at
caspofungin for Candida spp. strains isolated from Cluj-Napoca and Grenoble. In Cluj-Napoca, the MICs obtained
at caspofungin for the tested Candida spp. strains were within the range 0.032 -2 mg/ml, with a median of 0.25
mg/ml. In Grenoble, the MICs obtained to caspofungin ranged between 0.004 - 1µg/ml, with a median of 0.064 mg /
ml (figure 5).
Figure 5. The MIC’s to caspofungin obtained for Candida spp. strains in Cluj-Napoca and Grenoble.
Amphotericin B susceptibility testing results for Candida spp. strains are plotted in figure 6.
60%
40%
R
20% S
9,1% I
1,2% 1.92% 4.26% 4.54% 2.78%
0,6%
0%
s ta lis sis ei yr
an ra ica o ru
s ef
ic ab sil .k .k
.a
lb gl op ap C C
C C
. .tr ar
C .p
C
The second study, Comparison of two methods, E-test® and Neo-Sensitabs® tablet diffusion assay, for
susceptibility testing of Candida strains to amphotericin B, fluconazole, voriconazole, and caspofungin, includes
chapters 11 through 15.
Chapter 11 points out the assumptions, study aim, and objective. Research aim was to evaluate a tablet diffusion
method, easy to perform, reliable, affordable to test in vitro antifungal susceptibility of Candida species. The
objective was to perform a comparison between two methods of antifungal susceptibility testing of Candida species
to antifungal drugs: E-test® (AB Biodisk, Solna, Sweden) and Neo-Sensitabs® tablet diffusion assay (Rosco,
Denmark). E-test® is a standardized method for testing antifungal susceptibility of Candida, easy to perform, but
whose main disadvantage is the high cost, making it inaccessible for most clinical laboratories, so it is important to
find a cheaper alternative with similar advantages.
Chapter 12 presents the material and methods used to achieve the above goals. Ninety-three strains of Candida
isolated from clinical samples from Grenoble (France) Hospital inpatients were identified and evaluated by E-test®
and Neo-Sensitabs® tablet diffusion assay between February and April 2009.
We determined categorical agreement levels between E-test® MICs and tablet end-points, using the
following disagreement parameters: very major discrepancies - R to E-test® and S to tablet; major discrepancies - S
to E-test® and R to tablet; minor discrepancies - shifts between S and SDD or SDD and R.
Statistical analysis was performed using linear regression analysis and Pearson’s correlation coefficients (R values)
between the log transforms of MICs and the inhibition zone diameters of the antifungal agents. Regression models
were obtained using SPSS 13.0 for Windows.
Chapter 13 describes the results obtained in the second study.
For amphotericin B the categorical agreement between E-test® and Neo-Sensitabs® assay was 90.32%. Six minor
disagreements (5 strains of C.glabrata and 1 strain of C.albicans), and 3 very major discrepancies (2 strains of
C.glabrata and 1 strain of C.krusei) were observed. The correlation coefficient R between Log2 MICs and the
inhibition zone diameters was -0.622 (figure 7).
For fluconazole, categorical agreement found between E-test® and Neo-Sensitabs® was 100%. The
correlation coefficient R between Log2 MICs and the inhibition zone diameters was -0.654.
For voriconazole, the percentage of categorical agreement between E-test® and Neo-Sensitabs® was 100%.
The correlation coefficient R between MICs and inhibition zone diameters was -0.62.
For caspofungin, the percentage of categorical agreement between E-test® and Neo-Sensitabs® was 98.92%.
One major discrepancy was found (1 strain of C.krusei S by E test® and R by the tablet method). One strain of
Candida glabrata was R (non-susceptible) by both methods, with a MIC> 32 mg/ml respectively, an inhibition zone
diameter of 0 mm. The correlation coefficient R between MICs and inhibition zone diameters was -0.679 (figure 8).
In all above cases the computed R-values exhibited a high statistical significance (p<<0.001).
Chapter 14 interprets and discusses the results of the second part of personal research, by comparison with similar
studies. Advantages as well as inherent limitations of our study were highlighted and discussed.
Chapter 15 presents the main conclusions for the second part of personal contributions, of which here I will only
mention the following three:
1. E-test® is a standardized, easy to use method for testing susceptibility of Candida to antifungal drugs. MIC
values (µg/ml) are sometimes difficult to read (due to the phenomenon of residual growth observed for azoles) and
the method is expensive.
2. The diameters of the inhibition zones obtained using Neo-Sensitabs® are well defined and easy to read, proving
this method to be easy to use. Also, the cost of Neo-Sensitabs® is lower than for E-tests®.
3. Categorical agreement obtained between Neo-Sensitabs® and E-test® for voriconazole, fluconazole, and
caspofungin was excellent, a lower categorical agreement with E-test® was found for amphotericin B.
GENERAL CONCLUSIONS
1. Fungal infections remain a serious threat and their frequency has increased considerably in recent years.
Increasing number of immunocompromised patients and invasive medical or surgical interventions have contributed
to the emergence of this pathology. Faced with these epidemiological changes, therapeutic possibilities were
improved, including amphotericin B, azoles and echinocandins.
2. The knowledge of Candida species involved in fungal infections in a given geographical area, or hospital and
their susceptibility profile to antifungal drugs are essential for the initiation of empirical antifungal treatment.
3. The differences observed between Cluj-Napoca and Grenoble underline the importance and need for screening
and surveillance protocols in patients at risk for fungal infections, for an accurate mycological diagnosis, completed
with antifungal susceptibility testing.
4. The knowledge of Candida species involved in pathology, their distribution and their susceptibility to antifungal
drugs is essential in order to initiate an early and efficient therapy .
5. Comparison between Neo-Sensitabs® tablet diffusion assay and E-test® for antifungal susceptibility testing of
Candida strains is, to our knowledge, the second study which evaluates the performance of caspofungin and
amphotericin B Neo-Sensitabs® tablet method versus E-test®, and it is the first study to evaluate the performance of
fluconazole and voriconazole Neo-Sensitabs® tablet method versus E-test®.
6. Categorical agreement obtained between Neo-Sensitabs® and E-test® for voriconazole, fluconazole, and
caspofungin was excellent, a lower categorical agreement with E-test® was found for amphotericin B.
7. Neo-Sensitabs® tablet diffusion assay for testing susceptibility of Candida strains to fluconazole and voriconazole
presents many similaryties with standard method M44-A and may represent a cost-effective and simple alternative
to E-tests® in clinical laboratories.
8. Based on the diameter of the inhibition zone, there is a possibility of MIC prediction by carrying out linear
regression models.
Selective bibliography
1. White TC. Mechanism of resistance to antifungal agents. In Murray PR, editor. Manual of Clinical
Microbiology. 8th ed. Washington D.C (USA): ASM PRESS; 2003:p.1869-79.
Pfaller MA. Nosocomial candidiasis: emerging species, reservoirs and mode of transmission. Clin Infect Dis
1996;22(suppl.2):89-94.
2. Espinel-Ingroff A, Barchiesi F, Hazen KC, Martinez-Suarez JV, Scalise G. Standardisation of susceptibility
testing and clinical relevance. Med Mycol 1998;36:68-78.
3. Pfaller MA. Nosocomial candidiasis: emerging species, reservoirs and mode of transmission. Clin Infect Dis
1996;22(suppl.2):89-94.
4. Mares M, Bazgan O. Diagnosticul de laborator al infecţiilor produse de fungi. În Buiuc D, Neguţ M. Tratat de
microbiologie clinică. Ed.Medicală, Bucureşti; 2008. p.953-6.
5. Espinel-Ingroff A, Canton A, Gibbs D, Wang A. Correlation of Neo-Sensitabs tablet diffusion assay results on
three different agar media with broth microdilution M27-A2 and disk diffusion M44-A results for testing
susceptibilities of Candida spp. and Cryptococcus neoformans to Amphotericin B, Caspofungin, Fluconazole,
Itraconazole and Voriconazole. J Clin Microbiol 2007;45(3):858-64.
6. Espinel-Ingroff A, Canton E. Antifungal susceptibility testing of yeasts. In Antimicrobial susceptibility testing
protocols. Edited by Schwalbe R, Steele-Moore L, Goodwin AC. CRC Press, Taylor & Francis Group 2007.
7. Pappas PG, Kauffman CA, Andes D, Benjamin DK Jr, Calandra TF, Edwards JE Jr, Filler SG, Fisher JF,
Kullberg BJ, Ostrosky-Zeichner L, Reboli AC, Rex JH, Walsh TJ, Sobel JD; Infectious Diseases Society of
America. Clinical practice guidelines for the management of candidiasis: 2009 update by the Infectious Diseases
Society of America. Clin Infect Dis 2009;48(5):503-35.
8. Pfaller MA, Boyken L, Hollis RJ, Messer SA, Tendolkar S, Diekema DJ. In vitro susceptibilities of Candida spp.
to caspofungin: four years of global surveillance. J Clin Microbiol 2006;44(3):760-3.
9. Thompson GR, Wiederhold NP, Vallor AC, Villareal NC, Lewis JS, Patterson TF. Development of caspofungin
resistance following prolonged therapy for invasive candidiasis secondary to Candida glabrata infection. Antimicrob
Agents Chemother 2008;52(10):3783-85.
10. Pfaller MA, Diekema DJ. Epidemiology of invasive candidiasis: a persistent public health problem. Clin
Microbiol Reviews 2007;20(1):133–63.
11. Ostrosky-Zeichner L, Rex JH, Pappas PG, Hamill RJ, Larsen RA, Horowitz HW, Powderly WG, Hyslop N,
Kauffman CA, Cleary J, Mangino JE, Lee J. Antifungal susceptibility survey of 2,000 bloodstream Candida isolates
in the United States. Antimicrob Agents Chemother 2003;47(10):3149-54.
12. Pfaller MA, Diekema DJ, Gibbs DL, Newell VA, Meis JF, Gould IM, Fu W, Colombo AL, Rodriguez-Noriega
E; Global Antifungal Surveillance Study. Results from the ARTEMIS DISK Global Antifungal Surveillance study,
1997 to 2005: an 8.5-year analysis of susceptibilities of Candida species and other yeast species to fluconazole and
voriconazole determined by CLSI standardized disk diffusion testing. J Clin Microbiol 2007;45(6):1735-45.
Dr. Ioana Alina COLOSI
Teaching Assistant
University of Medicine and Pharmacy “Iuliu Haţieganu” Cluj-Napoca, Romania
Microbiology Department
Str. Louis Pasteur nr. 6, zip code 400349, Cluj-Napoca, Romania
Email: ioana.colosi@gmail.com
CURRICULUM VITAE
SCIENTIFIC ACTIVITY:
Papers published in full text
1. Colosi I, Faure O, Lebeau B, Colosi H, Junie M, Pelloux H. Comparison of two methods, E-test® and Neo-
Sensitabs® tablet diffusion assay, for testing susceptibility of 93 Candida strains to amphotericin B, fluconazole,
voriconazole, and caspofungin. Sc Parasit 2009:1-2:112-22.
2. Colosi I, Costache C, Junie M. The pathogenicity of Candida infections: pathogenic factors and risk factors of
infections with Candida species. Clujul Medical 2009;82(1):30-4.
3. Colosi I, Costache C, Junie M. Candida biofilm resistance to antifungal drugs. Fungi &Mycotoxins
2009;1(3):242-9.
4. Costache C, Colosi IA, Colosi HA. Immunochromatography versus microscopy for the identification of Giardia
lamblia and Cryptosporidium parvum in human feces. Sc Parasit 2009:1-2:26-31.
5. Colosi I. Methods of studying biofilms and hipermutability. Sc Parasit 2008;1:22-4.
6. Christofidou M, Spiliopoulou A, Vamvacopoulou S, Stamoulis V, Dimitracopoulos G, Anastassiou E, Junie LM,
Costache C, Colosi I, Ciobanca PT. Species distribution and antifungal susceptibility of Candida isolates collected
from hospitalized patients in Romania and Greece. Sc Parasit, 2008;1:61-7.
7. Costache C, Colosi I, Junie M. Candida species isolated from fungal infections. Sc Parasit 2008;1:68-73.
8. Costache C, Colosi I. Disk diffusion method for antifungal susceptibility testing. Sc Parasit 2008;1:74-8.
9. Costache C, Junie M, Colosi I, Minica F. Incidence of parasitosis in patients from the Emergency County
Hospital and Infectious Diseases Clinic from Cluj-Napoca. Sc Parasitol 2007;8(1):39-44.
TEACHING ACTIVITY
Collaborator in postgraduate courses of the Department of Microbiology: Medical Mycology and Medical
Parasitology.
Practical activities of Microbiology with students of the Faculty of Medicine IInd and IIIrd year, Romanian section
and English study-line, students of the Faculty of Dentistry IInd year, Romanian section and English study-line,
students of the Faculty of Pharmacy IInd year, Romanian section.
CEEX – 78 Formation of a national network for study of parasitic zoonoses and Member 2006-2008
their implications for food safety.
CEEX – 99 TRICHID Interdisciplinary evaluation and optimization of Member 2006-2008
screening methods, diagnosis and treatment of human and animal trichinellosis
and cystic echinococcosis in central and northwestern Romania.
CEEX - 151 Formation of a national networks for research of dermatophytosis Member 2006-2008
in humans and animals.
CEEX- 98/01.08.2006 Biological, biochemical, and bio productiv study of a Member 2006-2008
wild species of the genus Epilobium (fam. Onagraceae) in Transylvania, in
order to obtain pharmaceutical extracts used in treating prostate adenoma.
CNMP-PN2-contract nr. 51013 TOXANOM Member 2007-2010
Optimizing the surveillance of Toxoplasma gondii infection in some species of
animals and humans, as public health problem in central and western Romania.