Microscopul Optic

Biologia celulara = stiinta fundamentala care se ocupa cu studiul celulei ca unitate structurala si
functionala a oricarui organism viu

 Microscopul optic = dispozitiv cu ajutorul caruia se pot examina structuri cu dimensiuni mult sub
puterea de rezol 12212t1921m utie a ochiului uman

Componenete microscop optic :

 1. SURSĂ DE LUMINA

 2. CONDENSOR

 3. DIAFRAGMĂ

 4. MASA

 5. DISPOZITIV DE DEPLASARE A LAMEI

 6. REVOLVER

 7. OBIECTIVE

 8. SISTEM DE PRISME

 9. OCULAR

 10. MACROVIZA

 11 MICROVIZA

Modul de formare al imaginii la MO :

 Obiectivul formeaza o imagine marita , reala si rasturnata a obiectului

 Ocularul- are ca obiect imaginea data de obiectiv si va forma imaginea finala mult marita ,
rasturnata si virtuala , la infinit deci nu necesita efort de acomodare

Performantele MO sunt :

 Puterea de marire

 Puterea de rezolutie

PUTEREA DE MARIRE :

 Puterea de marire = produsul dintre puterea de marire a obiectivului si cea a ocularului

  Puterea de marire maxima x1500 ori

 Puterea de marire - ×4, ×10 ;- ×20, ×40 – diagnostic histologic ;- ×60, ×100 – diagnostic citologic

PUTEREA DE REZOLUTIE =Cea mai mica distanta dintre doua puncte la care acestea pot fii
percepute distinct

 De ea depinde claritatea si bogatia în detalii a imaginii

 Depinde de lentila obiectivului

 FORMULA LUI ABBÉ :

 d=l/ n sinα

 l= lungimea de unda a radiatiei electromagnetice ( 0,55 µm)

 n= indicele de refractie al mediului dintre preparat si obiectiv

 a= ½ din aperura unghiulara a obiectivului

Limitarile puterii de rezolutie a

microscopului optic in practica

 l este o constanta naturala ce nu poate fi influentata (0,55)

 Mediul dintre preparat si obiectiv este de obicei aer (n = 1)

 Obiectivul cu imersie – intre obiectiv si preparat se interpune o picatura de lichid cu un indice de

refractie supraunitar, cum este uleiul de cedru (n=1,51)

 Apertura unghiulara maxima teoretica este 180 , deci a=90, limita teoretica maxima a sin a=1

Rezolutia maxima a microscopului optic= 0,2m

STUDIUL CELULELOR VII NECOLORATE

 1.MICROSCOP CU CÂMP ÎNTUNECAT

 2. M. CU CONTRAST DE FAZĂ

 3. M. CU INTERFERENŢĂ

 4. M. TIP NOMARSKI

 5. MICROSCOPUL RANVERSAT

 1.MICROSCOP CU CÂMP ÎNTUNECAT

 PRINCIPIU – exista un diafragm in condensor care selecteaza doar lumina laterala iar imaginea
finala este formata de catre razele reflectate de componentele din preparat

 2. M. CU CONTRAST DE FAZĂ

 PRINCIPIU

 - lumina care trece prin medii cu indici de refractie diferiti îsi modifica directia si viteza

 - micoscopul transforma aceste diferente în diferente de intensitate luminoasa

 3. M. CU INTERFERENŢĂ

 PRINCIPIU

 - mai foloseste înca o raza de lumina care nu traverseaza tesutul analizat ,dar interfera cu raza
provenita de la sursa de lumina

 - ofera informatii despre densitatea obiectului analizei

4. M. TIP NOMARSKI

 Un tip modificat al microscopului cu contrast de faza, oferind imagini aparent tridimensionale

 5. MICROSCOPUL RANVERSAT

 - pentru examinarea celulelor din flacoane sau placi Petri

 - obiective sub masuta

 - sursa de lumina deasupra

MICROSCOPUL CU FLOURESCENTA

LUMINISCENTA = proprietatea unor substante de a emite lumina atunci cand sunt stimulate
luminos =FOTOLUMINISCENTA

 FLUORESCENTA – proprietatea unei substante de a emite radiatii lumioase doar in timpul

stimularii

 FOSFORESCENTA –proprietatea unei substante de a emite radiatii lumioase si dupa incetarea

stimularii

TERMOFLUORESCENTA = proprietatea unor substante de a emite lumina atunci cand sunt

stimulate termic.

Aplicatii practice MICROSCOP CU FLOURESCENTA:

 1.AUTOFLUORESCENŢA

capacitatea tesuturilor vii de a absorbi radiatii luminoase cu o anumita lungime de unda si de a o

emite ulterior alte radiatii, cu o alta lungime de unda, mai mare

2. FLUORESCENTA SECUNDARA – dupa marcare cu compusi fluorescenti :

 a. Acridine orange – ADN-verde/ ARN-rosu

 b. Quinacrina – cromozomi = bandare

MICROSOPUL CU FLORESCENTA

IMUNOFLUORESCENŢA : punerea în evidenta a diferitilor antigeni cu ajutorul unor anticorpi

specifici marcati cu un compus fluorescent IZOTIOCIANAT DE FLUORESCEINA (FITC)

-2 tipuri: directa si indirecta

IMUNOFLOUESCENTA DIRECTA=Ag + Ac specific marcat

IMUNOFLOURESCENTA INDIRECTA Ag + Ac specific + Ac sec. marcat

- are o sensibilitate mai mare ca metoda a—se foloseste in cazul in care antigenele se gasesc in
cantitate mica in tesut

 4.SONDE FLUORESCENTE , molecule care detecteaza concentratia i.c. a ionilor , a rad. liberi ,
a variatiilor de pH i.c. si isi modifica proprietatile in functie de valorilor acestora.