Raport de stagiu

În îndeplinirea parțială a cerințelor pentru gradul de

Licențiat în Microbiologie

Trimis de

Muhammad Attique (Nr. de înregistrare 15-F-AWKUM-GCM-BS-M BIO- 07)

Adnan Ali Shah (Nr. de înregistrare 15-F-AWKUM-GCM-BS-M BIO- 30)

Departamentul de Microbiolgie

Universitatea Abdul Wali Khan Mardan

Pakistan, 2019
 Dată_____________

APROBAREA FINALĂ
Se certifică faptul că am citit raportul de întreprindere al domnului Muhammad Attique (Reg No
15-F-AWKUM-GCM-BS-MBIO-07) și al domnului Adnan Ali Shah (Reg No 15-F-AWKUM-
GCM-BS-MBIO-30) și considerăm că acest proiect are un standard suficient pentru a justifica
acceptarea sa de către Abdul Wali Khan University Mardan pentru acordarea diplomei BS
(Hons) în microbiologie.

Comitetul de aprobare a tezei

Supraveghetor
Domnul Tahir Hussain
Lector
Departamentul de Microbiologie
Universitatea Abdul Wali Khan Mardan ______________

Examinator extern
Domnul Fazal jalil
Lector
Departamentul de Biotehnologie
Universitatea Abdul Wali Khan Mardan ______________

Președinte Departamentul de Microbiologie

Dr. Hazir Rahman
Conferențiar universitar
Universitatea Abdul Wali Khan Mardan
____________________
 Dedicat
Către
Părinți iubitori:
Sufletul bunătății noastre
 CUPRINS
Aprecieri................................................................................................................................................... 7
Introducere:....................................................................................................................................................
........ 8
Istoricul MMC..................................................................................................... 9 Flebotomie................. 10
Microbiologie................................16
Suporturi uzuale utilizate în mod
curent................................................................................................................. 17
Pregătirea și sterilizarea mediilor de cultură.................................................................................................
17
Colorarea gramului................................................................................................................19
Colorarea Zn.................................................................................22
Hematologie...................................................................................................................................................
........... 24
CBC..................................................................................................................................................................
........ 25
ESR................................................................................26
Test de
îmbolnăvire.....................................................................................................................................................
............ 27
Serologie.........................................................................................................................................................
........... 29
Grupa sanguină................................................................................................................................. 30
Meci încrucișat................................................................................................................................31
HBsAG................................................................................33
Febra denga................................................................34
VHC................................................................35
H pylori................................................................................36
Brucella...........................................................................................................................................................
.......... 37
Test de sarcină................................................................................38
Patologia
chimică................................................................................................................................................. 40
Analiza completă a urinei................................................................41 Test de
glucoză................................................51
Acid uric.................................................................................................................................................... 52
ALT................................................52
AST ................................................................................................................54
Patologia
moleculară................................................................................................................................................. 55
Extragerea ADN-ului prin metoda
chelex................................................................................................................. 56
PCR................................................................................56
Electroforeza în gel de agaroză.................................................................................................................57
 LISTA FIGURILOR
Figura 1: Flebotomie................................................................................................................................. 13

Figura 2 Componentele sanguine.................................................................................................................

13

Figura 3 Tuburi de colectare a

sângelui................................................................................................................. 16

Figura 4 Formula standard pentru cultură.................................................................................................

19

Figura 5 Autoclavizare.................................................................................................................................
20

Figura 6 Autoclavă cu reglaj de temperatură................................................................................. 20

Figura 7 Pregătirea suporturilor .................................................................................................................

21

Figura 8 Sterilizarea .................................................................................................................................

21

Figura 10 Sterilizarea.................................................................................................................... 22

Figura 11 Colorarea Gram ................................................................................................................. 24

Figura 12 Rezultatul colorării

gramului................................................................................................................. 24

Figura 13 Colorarea
Zn .................................................................................................................................... 25

Figura 14 Set de colorare Zn T.B................................................................. 25

Figura 15 Lama colorării cu Zn .................................................................................................................

26

Figura 16 Analizor hematologic .................................................................................................................

28

Figura 17 VSH prin metoda Westergren .................................................................................................

31

Figura 18 Procedura de potrivire

încrucișată ................................................................................................. 36

Figura 19 Kitul de testare HBsAG................................................. 37

Figura 20 Probă de prelevare a probelor de urină pentru teste fizice și alte
teste................................................. 46

Figura 21: Flacoane cu benzi de urină cu diagrame

etichetate ............................................................................ 47

Figura 22: Bandă de urină cu rezultate negative și pozitive................................. 49

Figura 23 RBC în urină sub obiectivul 40x ................................................................. 51

Figura 24 WBC observate în proba de urină sub obiectivele 40x....................................................... 51

Figura 25 Electroforeza în gel................................................................................................................. 59

 ABREVIERI
ZN Zeil Neilson

CBC Imagine completă a sângelui

HB Hemoglobină

TLC Numărul total de leucocite

TRBC Total celule roșii din sânge

PCV Volumul celulelor din pachet

HCT Hematocrit

MCH Hemoglobina medie corpusculară

MCHC Concentrația medie a hemoglobinei

corpusculare

ESR Viteza de sedimentare a eritrocitelor

HBSAG Antigenul de suprafață al hepatitei B

VHC virusul hepatitei C

H.PYLORI Helicobacter pylori

ALT Alanin aminotransferaze

AST Asparte aminotransferaze

PCR Reacția în lanț a polimerazei

HCG Gonadotropină corionică umană

 APRECIERI
Toate gloriile fie aduse lui Allah, Cel Preamilostiv și Binevoitor, care a creat Universul și
tot ce este în el și i-a dat omului capacitatea de a gândi și de a căuta. Care a poruncit omului să
caute și a învățat. Obligațiile noastre cele mai umile și mai profunde sunt datorate cu mare
onoare și stimă Sfântului Profet Hazrat Muhammad (pace fie asupra sa), care este o torță de
îndrumare și cunoaștere pentru întreaga umanitate.
Ce putem face doar pentru a ne exprima mulțumirile plăcute și aprecierea față de dulcele
nostru profesor și supraveghetor, domnul Tahir Hussain , lector, Departamentul de
Microbiologie, Universitatea Abdul Wali Khan Mardan, pentru supravegherea, sfatul și
îndrumarea sa încă din stadiul incipient al acestui stagiu, precum și pentru a ne oferi experiențe
extraordinare pe tot parcursul muncii mai presus de toate și cele mai necesare, El ne-a oferit
încurajare și sprijin neclintit în diferite moduri. El este o oază constantă de idei și pasiuni în
știință, care ne inspiră și ne îmbogățesc în mod excepțional creșterea ca student, cercetător și om
de știință doresc să fie. I-am îndatorat mai mult decât știe ea.
Suntem recunoscători în toate modurile posibile și sperăm să continuăm colaborarea
noastră în viitor. Suntem foarte recunoscători tuturor membrilor personalului Departamentului de
Microbiologie, Abdul Wali Khan University Mardan, în special Dr . Muhsin Jamal, Dr. Hazir
Rahman, Ms. Kanwal Mazhar, Dr. Ziaur Rahman, Mr. Sagheer Ahmad și Ms. Aliya Khalid
pentru bunătatea și sprijinul moral în timpul studiului nostru.
Dorim să ne exprimăm recunoștința față de toți membrii personalului MMC, pentru facilitarea
cercetării, experiența clinică și abordarea sistematică.
Suntem foarte recunoscători lui Zakir Ullah, Mansoor Ahmad, Haseeb Khan, Basit Ali khan și
Muhammad Junaid, mulțumim pentru prietenie și amintiri. Nu în ultimul rând, recunoștința
noastră cea mai profundă se îndreaptă către iubiții noștri tați și în special către mamele noastre,
precum și către unchii și surorile noastre pentru dragostea lor nesfârșită, sprijinul și nenumăratele
rugăciuni pentru succesul nostru de-a lungul vieții. Pentru cei care au contribuit indirect la
această cercetare, bunătatea voastră înseamnă foarte mult pentru noi. Îţi mulţumesc foarte mult.

Muhammad Attique și Adnan Ali Shah

 INTRODUCERE
Stagiul este o parte integrantă a programului în medicina de laborator și este conceput pentru a
oferi studenților posibilitatea de a integra și aplica cunoștințele dobândite anterior și abilitățile
tehnice în setările clinice reale. Sub îndrumarea profesioniștilor cu experiență în laboratoarele
medicale și a altor profesioniști calificați din domeniul sănătății și a profesioniștilor din domeniul
sănătății, studenții învață mai multe despre procedurile de testare diagnostică, metodele de
control al calității și instrumentele din laboratorul clinic. Ei dobândesc, de asemenea, o înțelegere
a rolurilor și funcțiilor profesioniștilor din laboratoarele medicale.

Stagiul oferă experiențe de învățare aplicate în timpul cărora studentul ar trebui:

1. Dobândiți și practicați abilități clinice de laborator.

2. Exersați abilitățile de rezolvare a problemelor.

3. Efectuați proceduri de control al calității.

4. Adaptați-vă și învățați noi proceduri.

5. Operați diverse instrumente de laborator.

6. Înțelegeți responsabilitățile și funcțiile profesioniștilor din laboratoarele medicale

7. Raportați rezultate exacte și precise.

8. Aflați cum să corelați rezultatele testelor cu diagnosticul clinic al pacientului.

Programul de stagiu se desfășoară în laboratoarele spitalicești afiliate programului, unde studenții
învață prin participarea la volumul de muncă al unui tehnolog / specialist / consultant supervizor.
ISTORIA COMPLEXULUI MEDICAL MARDAN
Complexul Medical Mardan este un spital de îngrijire terțiară bine fascilat cu 520 de paturi, care
este cea mai mare unitate de îngrijire a sănătății din KPK. Are toate specialitățile necesare cu
diagnostic de ultimă generație (scaner CT, RMN) și servicii de susținere. A fost înființată în
1997, inițial a fost spital cu 420 de paturi. Mai târziu, după înființarea Colegiului Medical Bacha
Khan (BKMC), Complexul Medical Mardan a fost declarat spital didactic, iar numărul paturilor
a crescut la 520. Complexul medical Mardan a fost proiectat și construit folosind cea mai
avansată tehnologie medicală. Infrastructura spitalului și mediul liniștit sunt favorabile pentru o
recuperare mai rapidă, o sănătate mai bună și ajutor.

DEPARTAMENTELE MMC:
1. Patologia chimică
2. Hematologie
3. Histopatologie
4. Imunologie
5. Microbiologie
6. Virusologie
FLEBOTOMIE
1.FLEBOTOMIE
Colectarea probei de sânge se numește flebotomie, iar persoana care colectează sângele de la
pacient prin tehnică se numește flebotomist. În MMC recoltarea probelor s-a făcut în recepție.
Flebotomii au colectat probele de sânge de la pacienți. Probele au fost prelevate de flebotomist în
zona centrală de accesare unde au fost prelucrate, conectate la calculator și li s-a dat un număr de
specimen și apoi distribuite departamentelor pentru testare.

Figura 1: Flebotomie

TIPURI DE PROBE
1. Lichid aseptic
2. Lichid amniotic
3. Ser
4. Plasmă
5. Urină
6. CSF
PROCEDURĂ:

R: Înainte de inițierea flebotomiei în scopul prelevării de probe de sânge

1. Am verificat formularul de consimțământ semnat, datat aprobat, ordinele medicului

semnate și formularul completat de criterii de includere / excludere.
2. Ca sigur ID-ul pacientului, numele, data nașterii.
3. Explicați procedura pacientului.
4. Dezinfectant pentru mâini folosit pentru a elibera mâinile de orice tip de contaminare.
5. Pregătirea echipamentului pentru procedura de studiu se face.
B: Pregătiți echipamentul pentru procedura de studiu:

1. Inspectat integritatea echipamentului.

2. Seringă.

3. Set fluture, cel mai mare alezaj potrivit pentru venele pacientului
4. Suport pentru vacutinier
5. Tuburi de vid etichetate conform protocolului
6. Tampoane cu alcool
7. Mănuși curate
8. Garou

C. INIȚIEREA FLEBOTOMIEI:
1. Evaluați starea venelor pacientului prin palpare concentrat pe venele anti-cubitale
a) Turnichet aplicat până site-ul IV prevăzut.
b) Legați turniquetul în așa fel încât să permită eliberarea cu o singură mână..
2. Pregătirea locului de inserare:

a) Curățați pielea prin curățare cu tampon cu alcool folosind o tehnică

aseptică pornind din centrul locului propus și într-o mișcare circulară
departe de locul de amplasament timp de 30 de secunde.
b) Nu atingeți zona pregătită cu degetele. Dacă trebuie făcută o reevaluare
palpabilă a venei, re-pregătiți pielea înainte de venipunctură.

3. Ancorați vena ținând brațul pacientului și plasând un deget mare sub locul puncției venei.

4. Cereți pacientului să formeze un pumn, astfel încât venele să fie mai proeminente.
5. Intrați rapid în venă la un unghi de 30 de grade sau mai puțin și continuați să
introduceți acul de-a lungul venei la cel mai ușor unghi de intrare.

6. Odată ce a fost colectat suficient sânge, eliberați garoul înainte de a scoate acul.
7. Scoateți ușor acul și aplicați o presiune ușoară pe amplasament cu o tifon curat
sau o bilă uscată din vată de bumbac.
 Figura 3 Tuburi de colectare a sângelui

1.1. Următoarele specimene nu au putut fi testate:

 Etichetat a fost necompletat (nume, vârstă, sex, dată, ora colectării).

 Probă de sânge hemolizată.

 Sângele anticoagulat devine cheag prin lipsa amestecării după colectare.

 Specimenul este livrat la laborator în afara timpului specificat după colectare.

 Specimenul nu este depozitat corespunzător până în momentul testării.

 Probele colectate în anticoagulante nu au un raport anticoagulant sanguin adecvat.

MICROBIOLOGIE
2.1MEDII COMUNE ÎN UTILIZAREA DE RUTINĂ
I. CLED Agar (deficit de electrolit lactoză cisteină): este un mediu de placare
diferențială neselectivă pentru creșterea și enumerarea microorganismelor tractului
urinar.
II. Preparare: 36,0g de mediu se suspendă într-un litru de apă distilată, se încălzește
lent și se agită frecvent. Se fierbe timp de un minut și se sterilizează la 121 o C timp de15
minute și se toarnă în vase Petri. Plăcile au fost inversate atunci când au fost
solidificate în scopuri de depozitare și pentru a evita umiditatea

III. MacConkey Agar. Cel mai frecvent utilizat pentru enterobacteriaceae. Conține
agar, peptonă, clorură de sodiu, sare biliară, lactoză și roșu neutru. Este un mediu
selectiv:
IV. Selectiv: ca sare biliară nu inhibă creșterea enterobacteriaceae, dar inhibă creșterea
multor alte bacterii.
V. Indicator: Bacteria care fermentează lactoza capătă o culoare roz datorită producției
de acid. Acidul transformă indicatorul neutru roșu în roz. Aceste bacterii sunt numite
"fermentator de lactoză", de exemplu Escherichia coll. Colonie incoloră indică faptul
că lactoza nu este fermentată, adică bacteria este fermentator non-lactoză, de
exemplu Salmonella, Shigella.

a. Preparare: 50g de Agar a fost suspendat și măsurat într-un litru de apă

purificată și amestecat bine și a fost încălzit cu agitare frecventă, apoi fiert
timp de un minut pentru a dizolva complet pulberea. Agar a fost
autoclavizat la 121O C timp de15 minute.

VI. Agar de ciocolată :Se prepară prin încălzirea agar de sânge. Este folosit pentru
cultura meningococului, pneumococului, gonococului și Haemophilus.

VII. Preparare: 2 litri de apă distilată au fost adăugați la 144g pulbere de agar.
Autoclavizarea a fost făcută la 121O C timp de 15 minute și răcită până la 45 O C,
apoi s-a adăugat 5% sânge defribrinat. Se încălzește încet și uniform la 65 ° C, se
răcește până la45°C și se toarnă în plăci

VI. Agarul de sânge: Este folosit cel mai frecvent. Pentru prepararea agar de sânge 5-
 10% sânge de oaie defribrinat este amestecat cu agar topit la 45-50 ° C. Sângele
funcționează ca material de îmbogățire și, de asemenea, acționează ca un indicator.
Bacteriile, atunci când sunt cultivate în agar de sânge, produc hemoliză în jurul
coloniilor lor în creștere. Unele bacterii nu produc hemoliză. Tipuri de modificări:
a) Beta hemoliză, Există o zonă clară în jurul coloniei bacteriene de hemoliză
completă, de exemplu, Streptococcus pyogenes este un streptococ hemolitic beta.
b) Hemoliza alfa, Când există o decolorare verzuie în jurul coloniei de colonii
bacteriene din cauza formării de biliverdin, de exemplu Viridans streptococi.
c) Hemoliză gamma, sau, Fără hemoliză. Nu există nici o schimbare în mediul din
apropierea coloniei bacteriene.
2.2 PREGĂTIREA ȘI STERILIZAREA MEDIILOR DE CULTURĂ:
Mediile de cultură sunt disponibile comercial sub formă de pulbere; Acestea necesită doar
adăugarea de apă. Mediul nutritiv este un preparat de uz general pentru cultivarea
microorganismelor care nu sunt pretențioase din punct de vedere nutrițional.

Figura 4 Formula standard pentru cultură

Agarul preparat are aceeași compoziție. PH-ul final al ambelor medii este de 7,4.
AUTOCLAVARE

Figura 5 Autoclavizare

Autoclavarea este un proces care utilizează căldură și presiune umedă, astfel încât toate părțile
materialului care trebuie sterilizat să atingă 121 de grade Celsius timp de 15 minute. O autoclavă
este, în esență, o oală sub presiune mare; o cameră care poate fi izolată de aerul înconjurător.

Figura 6: autoclavă cu setarea temperaturii

Obiectiv:
Pentru a prepara agar nutritiv steril pentru cultivarea microorganismelor.

MATERIAL ȘI REACTIVI:
Agar nutritiv comercial, Echilibru, Apă distilată, Sticle Scott, Cilindru gradat Pahar, Forceps,
Sticle universale

PROCEDURĂ
1. Cantitatea adecvată de pulbere de bulion (cu agar) se cântărește în sticle Scott și se
dizolvă cu apă distilată. Ele sunt amestecate bine.

Figura 7 Pregătirea suporturilor

2. Sticlele sunt recapitulate și puse deoparte pentru sterilizare.

3. Figura 8 sterilizare
4. Toate mediile sunt sterilizate la 121 de grade Celsius timp de 15 minute.

5. După autoclavare, suportul este îndepărtat. Preparatul de bulion este lăsat să se

răcească și capacul fiecărei sticle este strâns.
2.3 COLORAREA GRAMULUI:
Este cea mai importantă și utilizată tehnică de colorare diferențială microbiologică. A fost
dezvoltat de Dr. Christian Gram în 1884 și diferențiază bacteriile în funcție de caracterul lor
Gram (Gram pozitiv sau Gram negativ). În plus, această pată ajută, de asemenea, la determinarea
morfologiei, dimensiunii și aranjamentului celular.
Principiu
Bacteria este colorată cu pata primară Crystal Violet și fixată de mordant, anumite bacterii sunt
capabile să rețină cristalul violet, iar altele spălate de alcool. Peretele celular al bacteriilor gram
pozitive are un strat gros de complexe proteină-zahăr cunoscute sub numele de peptidoglican.
Acțiunea decoloratorului determină deshidratarea peretelui celular al celulei, determinând
micșorarea porilor din peretele celular și împiedică pata să iasă din celulă. Deci, etanolul nu
poate elimina complexul cristal violet-iod care este legat de stratul gros de peptidoglican al
bacteriilor gram pozitive și are ca rezultat aspectul albastru sau violet al celulei.
În cazul bacteriilor gram negative, peretele celular preia și complexul CV-iod, dar datorită
stratului subțire de peptidoglican și a stratului exterior gros format din lipide, complexul CV-iod
se spală. Când sunt expuse la alcool, decoloratorul dizolvă lipidele din pereții celulari, ceea ce
permite complexului cristal violet-iod să se scurgă din celule. Apoi, când sunt din nou pătate cu
safranină, iau pata și apar de culoare roșie.
PREGĂTIREA URECHII
1. Luați un tobogan uscat.
2. Sterilizați bucla de inoculare pe flacăra arzătorului Bunsen.
3. Transferați cultura (sau specimenul) prin buclă sterilă și faceți un frotiu în centru.
4. Uscați frotiul la aer.
5. Frotiul uscat prin flacără în așa fel încât partea frotiului să fie orientată în sus.
PROCEDURĂ
1. Așezați lamelele deasupra tijei de colorare.
2. Acoperiți frotiul cu pată C-V și lăsați-l timp de 1 minut.
3. Spălați-l cu apă de la robinet.
4. Aplicați soluția de iod Gram pe smera și lăsați-o timp de 1 minut.
5. Spălați din nou toboganul cu jet de apă de la robinet.
6. Inundați diapozitivul cu agentul de decolorare, apoi așteptați 20-30 de secunde. Acest lucru se
poate face și prin adăugarea unei picături cu picătură la diapozitiv până când agentul de
decolorare care rulează din diapozitive este clar.
7. Spălați toboganul curgând apă de la robinet și scurgeți complet.
8. Colorați cu safranin și așteptați 30 de secunde până la 1 minut.
9. Spălați, glisați prin jet indirect de apă de la robinet până când nu apare nicio culoare în efluent
și apoi uscați cu hârtie absorbantă.
10. Observați lamela sub microscop (imersie în ulei 100x) folosind un microscop cu câmp

luminos.

Figura 10 Colorarea Gram

REZULTAT

Rezultatele colorării colorației gram sunt următoarele:

• Gram pozitiv : Apare violet închis

• Gram negativ : Apare palid până la roșu închis

• Drojdii : Apare violet închis

• Celule epiteliale :Apare roșu pal

Figura 11 Rezultatul colorării gram

EXAMINAREA SPUTEI PRIN COLORARE ZN:
PRINCIPIU
Această procedură este utilizată pentru a colora mycobacterium tuberculosis și mycobacterium
leprae. Aceste bacterii sunt, de asemenea, numite bacili rapizi acizi. Se pătează cu carbol fuschin,
care este un colorant roșu. Ei păstrează colorantul atunci când sunt tratați cu acid, care se
datorează prezenței acidului micolic în peretele celular.

Figura 12 Colorarea Zn
REACTIVI:
• Carbol fuschin (colorant de bază)

• 20% acid sulfuric (decolorant)

• Albastru de metilen (contra pată) sau verde malachit

Figura 13 Set de pete Zn T.B

PROCEDURĂ
1. Răspândiți sputa uniform pe zona centrală a diapozitivului folosind o mișcare de rotație
continuă. Dimensiunea recomandată a frotiului este de aproximativ 20 mm până la 10
mm.
2. Așezați diapozitivele pe uscător cu suprafața pătată în sus și uscați la aer timp de
aproximativ 30 de minute Fig. Fixarea termică a frotiului (Superior: folosind încălzitor
electric, inferior: folosind arzător)
3. Se încălzește frotiu uscat.
4. Acoperiți frotiul cu pată de carbol fuchsin.
5. Se încălzește frotiul până când vaporii încep să crească (adică aproximativ 60 de grade
Celsius). Nu supraîncălziți (fierbeți sau uscați). Adăugați o pată suplimentară, dacă este
necesar. Lăsați pata încălzită să rămână pe tobogan timp de 5 minute.
6. Spălați pata cu apă curată.
7. Acoperiți frotiul cu alcool acid 3% v / v timp de 2-5 minute (sau 20% acid sulfuric) sau
până când frotiul este suficient decolorat.
8. Spălați bine cu apă curată
9. Acoperiți pata cu pată verde malachit timp de 1-2 minute
10. Spălați pata cu apă curată
11. Ștergeți partea din spate a lamei curată și așezați-o într-un suport de scurgere pentru a se
usca la aer Examinați frotiul microscopic, folosind obiectivul de imersie în ulei 100x
(piesa oculară 10X pentru o mărire totală de 1000X) și scanați frotiul sistematic .

REZULTATE ȘI INTERPRETARE:
BACILI RAPIZI ACIZI:Acestea sunt tije roșii, drepte sau curbate, care apar singure
sau în grupuri mici.
CELULE: Apar verde (verde malachit) sau albastru (albastru de metilen)
FOND:Apare ca verde (verde malachit) sau albastru (albastru de metilen).
Figura 14 Lama colorării cu Zn
HEMATOLOGIE
2.1 HEMOLEUCOGRAMA COMPLETĂ (CBC):
Prin analizorul hematologic TLC s-au efectuat trombocite, reticuri, DLC, TRBC, MCV, MCH,
MPS și MCHC. Toate aceste teste sunt denumite colectiv hemoleucogramă completă sau
imagine completă. Acest test a fost efectuat de sângele integral care nu a fost coagulat. Testul CP
a fost efectuat de analizorul de hematologie care a aspirat automat sângele și a afișat rezultatul
într-un minut pe ecranul computerului.

Numărul total de sânge este, de asemenea, numit imagine completă. În laboratorul MMC CP a
fost efectuat pe analizorul de hematologie. Analizorul de hematologie era un instrument prin care
se număra toate celulele prezente în sânge. De asemenea, a fost numărat numărul diferențial de
leucocite. Acesta numără toate celulele din sânge într-un minut cu intervale de referință și
rezultatele au fost afișate pe sistemul informatic.
 Figura 15 analizor hematologic

Raportul PC a fost computerizat. În CP au fost efectuate următoarele teste

Tabelul 1 Raportul CBC
Testa Interval de referință

Hb Masculi: 14 - 18 g/dl
Feminin: 11 - 16 g/dl

RBC 4.0 - 6.0 mil/cmm

HCT Bărbați: 42 - 50 %
Femei: 37 - 57 %

MCV 76 - 96 FL

MCH 27 - 32 pagini

MCHC 30 - 35 g/dl

WBC 4000 - 11000 /cmmm

Neutrofile 40 - 75 %

Limfocite 20 - 45 %

Eozinofile 1-4%

Monocite 2-6%

Bazofile 0-1%

Trombocite 150.000 - 400.000 /cmm

2.2 TESTE MANUALE ÎN LABORATORUL DE HEMATOLOGIE. VITEZA DE
SEDIMENTARE A ERITROCITELOR (VSH):

Rata de sedimentare a eritrocitelor (VSH) este un test hematologic comun pentru detectarea
inflamației nespecifice cauzate de infecții sau de cancere și anumite boli autoimune.

Principiu:

Sângele anticoagulat este lăsat să stea într-un tub vertical de sticlă, nederanjat de ceva timp,
RBC-urile se așează din plasmă. Viteza de depunere a acestora se măsoară ca numărul de
milimetri de plasmă limpede prezenți în partea superioară a coloanei după o oră (mm/oră). Acest
mecanism implică trei etape:

I. Agregare: Aceasta este prima fază în care are loc acumularea de eritrocite. Fenomenul
este cunoscut sub numele de formarea Rouleaux. Este nevoie de 10-15 minute.
II. Sedimentare: Aceasta este a doua fază în care căderea efectivă a eritrocitelor are loc la o
rată constantă. Acest lucru se întâmplă în 30-40 de minute de 1 oră.
III. Ambalare: Aceasta este faza finală și este, de asemenea, cunoscută sub numele de fază
staționară. În acest sens, există o rată mai lentă de cădere în timpul căreia are loc
ambalarea RBC-urilor sedimentate în coloană din cauza supraaglomerării. Apare în
ultimele 10 minute în 1 oră.
METODA WESTERGREN
Tubul Westregren are două capete deschise. Lungimea sa este de 30cm, iar diametrul este de 2.5mm.
Acesta conține aproximativ 2 ml de sânge.

CERINȚE
• Sânge anticoagulat (0,4 ml soluție de citrat trisodic 3,13% + 1,6 ml sânge)

• Tubul Westergren

• Standul Westergren
• Bec de cauciuc (fraier)
PROCEDURĂ
1. Se amestecă sângele anticoagulat.
 2. Trageți sângele în tub până la marcajul 0.
3. Ștergeți sângele din fundul tubului cu bumbac.
4. Așezați tubul în poziție verticală în suport.
5. Lăsați tubul nederanjat timp de 1 oră.
6. Citiți rezultatul la sfârșitul a 1 oră.
VALOAREA NORMALĂ
• Pentru masculi : 0-10 mm / oră
• Pentru femele : 0-15 mm / oră

Figura 16 VSH prin metoda Westergren

2.2 TESTUL DE SECERARE:
Este un test de sânge utilizat pentru a determina dacă aveți siclemie sau trăsătură de celule
secerătoare. Boala celulelor secera (SCD) este un grup de tulburari mostenite ale celulelor rosii
din sange. Persoanele care au această boală au celule roșii din sânge cu formă anormală. În loc să
arate ca niște gogoși ca celulele roșii normale din sânge, ele au forma unei semiluni.

PRINCIPIU:
Meta-bisulfatul de sodiu reduce tensiunea oxigenului care induce celula tipică secerătoare.

CERINȚE:

• Fișa de acoperire
 • Ceară
• Microscop
• Diapozitive din sticlă
• Meta-bisulfat de sodiu

• Apă distilată

Colectarea și pregătirea probelor:

1. Probele de sânge proaspăt pot fi colectate dintr-o puncție cu degetul.

2. Utilizați sânge integral anticoagulat, celule ambalate, segmente de bănci de sânge

care conțin sânge integral sau celule ambalate cu soluții aditive. Nu utilizați
niciodată sânge coagulat.
3. Probele de sânge păstrate la 1° până la 10° C timp de până la 45 de zile pot fi utilizate
pentru testare.

Procedură:

1. 0,2 grame de meta-bisulfat de sodiu se dizolvă în 10 ml apă distală.

2. 5 picături din această soluție și 1 picătură de sânge, apoi amestecați-o bine.
3. Puneți picătura acestui amestec pe diapozitivul de sticlă, așezați alunecarea capacului pe
picătură în așa fel încât să evitați formarea bulelor
4. Acoperiți marginea cu amestec de ceară / vaselină. Se lasă să stea la temperatura camerei
timp de 1 până la 4 ore.
5. Examinați-l sub microscop.
INTERPRETARE
1. În probele pozitive vor apărea celulele roșii tipice în formă de seceră din sânge (Fig. 2.4).
Ocazional, preparatul poate fi necesar să stea până la 24 oC. În acest caz, puneți
diapozitivele într-un vas Petri umed.
2. Rezultatele fals negative pot fi obținute dacă meta-bisulfitul s-a deteriorat sau dacă
alunecarea capacului nu este sigilată corespunzător.
3. Un test pozitiv nu distinge trăsătura celulelor secerătoare de siclemie. Este important să
examinați cu atenție preparatul și, în special, în apropierea marginii alunecării capacului.
SEROLOGIE
3.1 GRUPA SANGUINĂ
Principiu:
Este o reacție antigen-anticorp. În principal, există 3 tipuri de antiseruri pentru ABO și 1
antiseruri pentru Rh D. Acestea sunt anticorpi specifici, de tip IgM. Dacă un tip de antiseruri este
amestecat cu eritrocite dă aglutinare, înseamnă că antigenul corespunzător este prezent pe
suprafețele RBC. Cu anti-A dă aglutinare cu celule roșii înseamnă că grupul este A. Când
aglutinarea dă în amestec anti-B RBC, apoi grupul B. Nici o reacție pe A sau B numit O. Dacă
reacția este pozitivă atât pe A, cât și pe B, grupul este AB. Celulele Rh pozitive se vor aglutina
cu antiseruri anti-D. În mod normal, testul tubului se face în băncile de sânge. Test invers
efectuat, de asemenea, pentru a confirma grupul ABO.
Cerințe:
• Antiseruri A
• Antiseruri B
• Antiseruri C
• Eprubete
• Diapozitive
Gruparea înainte

• Metoda tubului
• Metoda plăcilor
• Metoda diapozitivului

Procedură:

1. Puneți o picătură de antiseră A, antisera B și antisera D pe trei diferite pe un diapozitiv.

2. Și 1 picătură de sânge și se amestecă cu baston steril.
3. Observați pentru aglutinare.
INTERPRETARE
TASTAREA ABO
Dacă celulele sanguine se lipesc împreună atunci când sunt amestecate cu:
• Ser anti-A, aveți sânge de tip A
• Ser anti-B, aveți sânge de tip B
• Atât serurile anti-A, cât și cele anti-B, aveți sânge de tip AB
 • Dacă celulele sanguine nu se lipesc împreună atunci când se adaugă anti-A și anti-B,
aveți sânge de tip O.

Tastarea RH:
• Dacă celulele sanguine se lipesc împreună atunci când sunt amestecate cu ser anti-Rh,
aveți sânge de tip Rh pozitiv.
• Dacă sângele nu se coagulează atunci când este amestecat cu ser anti-Rh, aveți sânge de
tip Rh negativ.
• Potrivirea încrucișată se face înainte de transfuzia de sânge pentru a determina dacă
sângele donatorului este compatibil (sau incompatibil) cu sângele primitorului.
Compatibilitatea este determinată prin potrivirea diferitelor sisteme de grupe sanguine,
dintre care cele mai importante sunt sistemul ABO și Rh.
Procedură

1. Pregătiți proba de sânge a donatorului și a primitorului.

2. Pentru Major Crossmatch luăm globulele roșii ale donatorului și serul sau plasma
destinatarului
3. Pregătiți 3 – 5% suspensii celulare de celule roșii Etichetați o eprubetă. Se adaugă 2
picături de ser pentru pacient și 1 picătură de suspensie de celule donatoare.
4. Se amestecă ambele tuburi și se incubează la 37 ° C timp de 45 de minute.
5. Adăugați 2 picături de AHG (globulină antiumană) și amestecați-l.
6. Centrifugați tubul timp de 1 minut la 1500 rpm
7. Citiți-l la microscop și cu ochiul liber și înregistrați rezultatele.

INTERPRETARE:
• Aglutinare = incompatibil
• Fără aglutinare = compatibil
 Figura 17 Procedura meciului încrucișat

3.3 HBsAG:
PRINCIPIU:
Este un imunotest calitativ cu flux lateral pentru detectarea HBsAG în ser sau plasmă. Membrana
este pre-acoperită cu anticorpi anti-HBsAG pe regiunea liniei de testare a testului. În timpul
testării, proba de ser sau plasmă reacționează cu particula acoperită cu anticorp anti-HBsAG.
Amestecul migrează în sus pe membrană cromatografic prin acțiune capilară pentru a reacționa
cu anticorpii anti-HBsAG de pe membrană și pentru a genera o linie colorată. Prezența acestei
linii colorate în regiunea de testare indică un rezultat pozitiv, în timp ce absența acesteia indică
un rezultat negativ. Pentru a servi drept control procedural, în regiunea liniei de control va apărea
întotdeauna o linie colorată, indicând faptul că a fost adăugat volumul corespunzător de
specimen și că s-a produs fitilul membranar.

Figura 18 Kit de testare HBsAG

INTERPRETAREA TESTULUI:
• Banda de culori a apărut în secțiunea stângă a ferestrei de rezultate pentru a arăta că testul
funcționează corect. Această bandă era o bandă de control.
• În secțiunea dreaptă a rezultatelor au fost indicate rezultatele testelor. Când a apărut o altă
bandă de culoare în secțiunea dreaptă a ferestrei de rezultate, acea bandă a fost banda de
testare.
• Rezultat negativ: Prezența unei singure benzi purpurii.
• Rezultat pozitiv: Prezența a două benzi.
• Rezultat nevalid: După efectuarea testului, nu a fost vizibilă nicio bandă de culoare
 violet în fereastra de rezultate, rezultatul fiind considerat invalid.
Rezultate (așa cum se arată în figură)

Figura 24: Rezultatele HBsAG

3.4 Febra dengue
Principiu:
Testul rapid este un imunotest imunografic cromatografic în flux lateral. Testul poate fi utilizat
fie cu serul și utilizează o proteină de legare a anticorpilor conjugată cu o particulă de aur
coloidal și o combinație unică de antigene Dengue imobilizate pe membrană. Odată ce proba este
adăugată la caseta de testare, amestecul trece prin complexul de legare a anticorpilor/aur, care
apoi leagă imunoglobulinele din probă. Pe măsură ce acest complex trece peste antigenele
imobilizate de pe membrană, dacă sunt prezenți anticorpi împotriva febrei dengue (IgG sau
IgM), antigenii îi captează la rândul lor. Aceasta produce o bandă roz/violet în zona T (Test) a
benzii de testare. Complexul rămas continuă să migreze într-o zonă de control din banda de
testare și produce o bandă roz/violet în zona C. Această bandă de control indică faptul că testul a
fost efectuat corect.

Procedură:

1. Aduceți punga sigilată la temperatura camerei, deschideți punga . Odată deschis,

dispozitivul trebuie utilizat imediat.
2. Se distribuie două picături (50 μl) de probă de ser în godeul probei "S".
3. La sfârșitul celor cincisprezece minute citiți rezultatele.
Interpretare:

1. Dacă ar fi fost prezentă doar banda C și banda G și M ar fi absentă, rezultatul a fost

considerat negativ.
2. Dacă banda M a fost prezentă, astfel încât paradengue IgM prezente în specimen și testul
IgM au fost pozitive.
3. Dacă banda G a fost prezentă, astfel încât paradengue IgG prezent în specimen și testul
IgG a fost pozitiv.
4. Rezultat invalid observat atunci când banda C a fost absentă și nicio altă bandă nu
produce.

Figura 25: Rezultatele testului pentru febra denga

3.5 VHC:
Principiu:
A fost un test calitativ pentru detectarea VHC în ser. Membrana este preacoperită cu antigene
anti-HCV pe regiunea liniei de testare a testului. În timpul testării, serul reacționează cu particule
acoperite cu antigene anti-HCV. Prezența liniei colorate în regiunea de testare a indicat rezultatul
pozitiv, în timp ce absența a indicat rezultatul negativ.
• Diluant de testare
• Dropper
• Cronometru
• Serul pacientului
• Dispozitiv HCV
Procedură:

1. Folosind picurătorul de plastic pentru probă, puneți 1 picătură (10μl) de ser sau plasmă în
godeul circular al probei de pe cardul de testare (marcat cu "S"), conform figurii.
2. Adăugați 2 picături de diluant de probă în godeul diluantului (marcat cu "D"), după
adăugarea specimenului, din flaconul diluant cu vârf de picurător.
3. Notați rezultatele testelor la 15 minute.
INTERPRETAREA TESTULUI:
• Banda de culori a apărut în partea stângă a ferestrei de rezultate pentru a arăta că testul
funcționează corect. Această bandă era o bandă de control.
• În secțiunea dreaptă a rezultatelor au fost indicate rezultatele testelor. Când a apărut o altă
bandă de culoare în secțiunea dreaptă a ferestrei de rezultate, acea bandă a fost banda de
testare
• Rezultat negativ: Prezența unei singure benzi purpurii.
• Rezultat pozitiv: Prezența a două benzi.
• Rezultat nevalid: După efectuarea testului și nu a fost vizibilă nicio bandă de culoare
violet în fereastra de rezultate, rezultatul a fost considerat invalid.

Figura 26: Dispozitiv VHC

3.2 H.PYLORI
PRINCIPIU:
Dispozitivul de testare rapidă H.pylori (plasma serică din sângele integral) detectează anticorpi
specifici Helicobacter pylori prin interpretarea vizuală a dezvoltării culorii pe banda internă.
Antigenul H pylori este imobilizat pe regiunea de testare a membranei. În timpul testului,
specimenul reacționează cu antigenul h pylori conjugat cu particule colorate și preacoperit pe
tamponul de probă al testului. Amestecul migrează apoi prin membrană prin acțiune capilară și
interacționează cu reactivii din membrană. Dacă există suficient anticorp la Helicobacter pylori
în specimen, se formează o linie colorată în regiunea de testare a membranei. Prezența acestei
linii colorate indică un rezultat pozitiv al testului, în timp ce absența acesteia indică un rezultat
negativ al testului. Apariția unei linii colorate pe regiunea de control servește drept control
procedural, indicând faptul că a fost adăugat volumul corespunzător de specimen și că s-a produs
fitilul membranei.

CERINȚE

• Solvent
• Pipetă
• Serul pacientului sau sângele total
• Dispozitiv TIC H.pyori

PROCEDURĂ

1. Scoateți dispozitivul de testare din folie; Așezați dispozitivul pe o suprafață plană.

2. Se transferă 10 μl de 20 μl de sânge integral (ser sau plasmă) în godeul (godeurile) probei
de pe dispozitivul de testare, apoi se adaugă 3 picături de diluanți de testare și se pornește
cronometrul.
3. Pe măsură ce testul începe să funcționeze, culoarea violet se deplasează pe fereastra de
testare din centrul dispozitivului de testare.
4. Interpretați rezultatul după 10 minute, un rezultat pozitiv nu se va schimba odată ce a fost
stabilit în 10 minute, cu toate acestea, pentru a preveni rezultatul incorect, rezultatul nu
va fi citit după 10 minute.

INTERPRETAREA TESTULUI

1. Rezultat negativ: Prezența unei singure benzi purpurii.

2. Rezultat pozitiv: Prezența a două benzi.
3. Rezultat nevalid: După efectuarea testului și nu a fost vizibilă nicio bandă de culoare
violet în fereastra de rezultate, rezultatul a fost considerat invalid.
3.7 BRUCELĂ: (TEST DE SCREENING PE LAME PENTRU ANTICORPI ÎMPOTRIVA
BRUCELEI)
Bruceloza a fost diagnosticată pentru prima dată printr-un test serologic de către Wright și Smith
în 1897, folosind un test simplu de aglutinare tubulară.
PRINCIPIU:
O suspensie de antigen BRUCEL-RB netedă, ucisă, este amestecată cu serul pacientului.
Anticorpi specifici la antigeni Brucella, dacă sunt prezenți în concentrație specifică anticorpilor
la Brucella.
CERINȚE:
• Sânge (ser)
• Mașină de centrifugare
• Pipetă
• Brucella Abortus Regent
• Brucella Melitensis Regent
PROCEDURĂ:
1. Luați sânge și centrifugați-l.
2. Acum luați serul de 10ul și adăugați o picătură de reactiv Brucella Abortus și Brucella
Melitensis în fiecare picătură de ser 10ul și amestecați-le timp de aproximativ 3 minute.
3. Acum examinați proba și vedeți agregarea celulelor, care arată prezența Brucella.
TEST DE SARCINĂ
Testul de sarcină este un simplu test de urină care confirmă dacă o femeie este însărcinată. În
acest test verificăm un hormon numit gonadotropină corionică umană (HCG). HCG este eliberat
atunci când un ovul fertilizat se atașează la mucoasa uterului.
PRINCIPIU:
Testul HCG urmează principiul imunocromatografiei, un test unic imunologic cu două situsuri
pe o membrană. Pe măsură ce proba de testare curge prin ansamblul membranei din dispozitivul
de testare, conjugatul de aur coloidal colorat anti-HCG se leagă de HCG din probă. Acest
complex se deplasează mai departe pe membrană în regiunea de testare, unde este imobilizat de
anti-hCG acoperit pe membrană, ceea ce duce la formarea unei linii de culoare roz care confirmă
un rezultat pozitiv al testului. Absența acestei linii colorate în regiunea de testare indică un
rezultat negativ al testului. Conjugatul nereacționat și complexul nelegat formează o linie roz,
dacă se mișcă mai departe pe membrană și sunt
ulterior imobilizați de anticorpii anti-șoarece acoperiți pe membrană în regiunea de control.
Această linie de control servește la validarea rezultatelor testelor.

CERINȚE PRIVIND SPECIMENELE:

VOLUMUL NECESAR:
Probele de dimineață devreme sunt cele mai bune, deoarece sunt mai concentrate, urina foarte
diluată trebuie evitată.

DEPOZITARE:

Eșantioanele pot fi depozitate într-un recipient, fără aditivi, refrigerate la 2--8 ° C timp
de 2 zile sau mai mult, congelate. Eșantioanele trebuie aduse la temperatura camerei și
amestecate înainte de testare.

PROCEDURĂ:

1. Verificați dacă atât proba, cât și trusa sunt la temperatura camerei, dacă au fost refrigerate
anterior.
2. Verificați dacă proba de urină este complet etichetată cu identificarea pacientului.
3. Scoateți dispozitivul din punga sigilată.
4. Etichetați dispozitivul cu informații de identificare a pacientului.
5. Așezați dispozitivul pe o suprafață plană curată.
6. Folosind pipeta de transfer furnizată împreună cu punga, transferați 3 picături complete
de urină (100ul) în godeul probei (S).
7. Citiți rezultatul testului la 3 minute după aplicarea probei de urină, nu înainte

INTERPRETARE:

• Pozitiv Apar două linii colorate, una în regiunea de control (C) și una în
regiunea de testare (T). Vă rugăm să rețineți că dacă linia de testare (T) este
slabă, acesta este încă un rezultat pozitiv.
• Negativ O linie colorată apare în regiunea de control (C) și nu apare nicio linie
în regiunea de testare (T).
• Invalid Nu apare nicio linie în regiunea de control (C). Abandonați caseta și
retestați, indiferent dacă apare sau nu o linie în regiunea de testare.
PATOLOGIE CHIMICĂ
4.1 ANALIZA COMPLETĂ a URINEI:
De obicei, o analiză completă a urinei implică o examinare a caracteristicilor fizice ale urinei, o
analiză chimică și o examinare microscopică a sedimentului urinar. Urina trebuie colectată într-
un recipient curat, depozitată într-un loc răcoros și testată cât mai curând posibil
CARACTERISTICILE FIZICE ALE URINEI:
Caracteristicile fizice ale urinei includ observații și măsurători ale culorii, turbidității, mirosului,
greutății specifice, pH-ului și volumului. Observarea vizuală a unei probe de urină poate oferi
indicii importante cu privire la dovezile patologiei.
CULOARE:
Culoarea urinei normale este de obicei galben deschis până la chihlimbar. În general, cu cât
volumul solutului este mai mare, cu atât culoarea este mai profundă. Culoarea galbenă a urinei se
datorează prezenței unui pigment galben, urocrom. Abaterile de la culoarea normală pot fi
cauzate de anumite medicamente și diverse legume, cum ar fi morcovii, sfecla și rubarba.
VOLUM:
Urina medie eliminată de adult în 24 de ore a fost de 1200 până la 1500 ml. În timpul nopții,
cantitatea de urină nu a fost niciodată mai mare de 400 ml.
MIROS:
Acesta a fost înregistrat numai în proba de urină proaspătă. Mirosul de urină era fructat în
prezența corpilor cetonici.
În prezența anumitor bacterii, urina avea miros amonic.
TURBIDITATE:
Urina normală este transparentă sau clară; devine tulbure când stați în picioare. Urina tulbure
poate fi o dovadă a fosfaților, uraților, mucusului, bacteriilor, celulelor epiteliale sau leucocitelor.

Figura 19 Probă de colectare a probei de urină pentru teste fizice și alte teste.
EXAMINAREA CHIMICĂ:
Pentru a efectua examinarea chimică, majoritatea laboratoarelor clinice folosesc benzi pregătite
comercial cu tampoane de testare care au substanțe chimice impregnate în ele. Scufundăm banda
în urină, reacțiile chimice schimbă culorile tampoanelor în câteva secunde până la minute și
determinăm rezultatul pentru fiecare test.
Gradul de schimbare a culorii pe un tampon de testare poate oferi o estimare a cantității de
substanță prezentă. De exemplu, o ușoară schimbare de culoare în tamponul de testare pentru
proteine poate indica o cantitate mică de proteine prezentă în urină, în timp ce o schimbare
profundă a culorii poate indica o cantitate mare.
Cele mai frecvente teste chimice efectuate folosind benzi de testare cu reactivi sunt:
• Greutate specifică (SG)
• Ph
• Proteină
• Glucoză
• Cetone
• Sânge (hemoglobină) și mioglobină
• Esterază de leucocite
• Nitrit
• Bilirubinei
• Urobilinogen

PH-ul urinei:

• În mod normal, a fost acid (pH 6,0).

• A fost măsurată cu banda de hârtie cu forceps.
• PH-ul normal al urinei:, pH = 5,0 până la 7,0
• pH-ul acid 4,5 până la 5,5 a apărut în diabetul zaharat, moleculele obosite etc.
• pH-ul alcalin 7,8 până la 8,0 a fost observat în UTI.
 Figura 20: Flacoane cu benzi de urină cu diagrame etichetate
Glucoză:
În mod normal, glucoza nu este prezentă în urină. Când glucoza este prezentă, afecțiunea se
numește glucozurie.
• Glucoza a fost detectată prin metoda benzii.
• A fost examinată schimbarea culorii amestecului.

Tabelul 2 Interpretarea glucozei

Culoare Rezultat %
Albastru Negativ
Verde O urmă
Verde cu precipitații galbene + 0.5%
Galben până la verde închis ++ 1%
Portocală +++ 1.5%
Caramida rosie ++++ 2%

Proteină:
Tamponul de testare a proteinelor oferă o estimare aproximativă a cantității de albumină din
urină. Albumina reprezintă aproximativ 60% din proteina totală din sânge. În mod normal, nu va
exista proteine sau o cantitate mică de proteine în urină. Când proteina din urină este crescută, o
persoană are o afecțiune numită proteinurie.
• Proteina a fost detectată de bandă.
• Prin schimbarea culorii benzii tulburarea a fost arătată proteina (albumina).
Tabelul 3 Interpretarea proteinelor în urină
Nebulozitatea Rezultat
Fără nebulozitate Negativ

Ușor tulbure +
Moderat tulbure ++

Nebulozitate abundentă +++ și mai sus, exprimate ca ++++

Pigmenți biliari:

• Pigmenții biliari au fost detectați prin metoda benzii de imersie.

• Producția de culoare indica pigmenții biliari.
Tabelul 4 Interpretarea pigmentului biliar în urină
Testa Culoarea produsă
Test negativ Culoare galben deschis

Slab pozitiv Culoare verde pal +

Test pozitiv Culoare verde intens ++

Săruri biliare:

• Prin producerea culorii s-a observat prezența sărurilor biliare.

• Culoarea a fost schimbată prin amestecarea nitroprusiatului de sodiu în tubul de urină.
• După dizolvare, au fost prezente săruri biliare.a produs culoarea dacă:

Figura 21: Bandă de urină cu rezultate negative și pozitive

Test negativ Nici o schimbare de culoare.

Inel purpuriu la joncțiunea a două straturi.

Test pozitiv:

CORPURI CETONE:

Cetonele nu se găsesc în mod normal în urină. Ele sunt produse intermediare ale metabolismului
grăsimilor. Acestea sunt produse în indisponibilitatea glucozei la celulele organismului ca sursă
de energie. Acestea se pot forma atunci când o persoană nu mănâncă suficienți carbohidrați (de
exemplu, în cazurile de post, înfometare sau diete bogate în proteine) sau când corpul unei
persoane nu poate folosi carbohidrații în mod corespunzător.
 • A fost detectat de bandă.
Culoarea produsă Rezultat
Fără culoare Negativ
Grație +
Roz deschis ++
Purpuriu +++

Sânge în urină:
Acest test este utilizat pentru a detecta hemoglobina în urină (hemoglobinurie). Hemoglobina
este proteina implicată în transferul oxigenului găsit în interiorul celulelor roșii din sânge (RBC).
Prezența sa în urină indică sânge în urină (cunoscută sub numele de hematurie). Sângele din
urină a fost detectat prin schimbarea culorii benzii.

Tabelul 5 Interpretarea sângelui în urină

Culoarea produsă
Rezultat
Galben Negativ

Culoare galbenă cu granule +

Verde ++

Verde închis +++

Examinarea microscopică
Examenul microscopic se efectuează pe sediment de urină – urină care a fost centrifugată pentru
a concentra substanțele din acesta pe fundul unui tub la aproximativ 1500 rpm timp de 5 minute.
Fluidul din partea superioară a tubului este aruncat și picăturile de lichid rămase sunt examinate
la microscop. Celulele, cristalele și alte substanțe sunt numărate și raportate fie ca număr
observat "pe câmp de putere redusă" (LPF), fie "pe câmp de mare putere" (HPF). În plus, unele
entități, dacă sunt prezente, sunt estimate ca "puține", "moderate" sau "multe", cum ar fi celulele
epiteliale , bacteriile și cristalele. Celulele și alte substanțe care pot fi văzute includ următoarele:
• Celule epiteliale
 • Bacterii, drojdii și paraziți
• Celulele roșii din sânge (RBC)
• Celulele albe din sânge (WBC)
• Trichomonas
• Aruncă
• Cristale
RBC-uri:
În mod normal, câteva eritrocite sunt prezente în sedimentele urinare (0-5 RBC pe câmp de mare
putere, HPF). O creștere a numărului de eritrocite observate la microscop indică faptul că există
sânge în urină. care a fost văzut ca
• Disc mic gălbui, care era mai întunecat la margine cu diametrul de aproximativ 8 μ.

Figura 22 RBC în urină sub obiectivul 40x

WBC:
Numărul de leucocite din sedimentele urinare este în mod normal scăzut (0-5 leucocite pe câmp
de mare putere, HPF). WBC pot fi un contaminant, cum ar fi cele din secrețiile vaginale. Un
număr crescut de leucocite observate în urină la microscop poate indica o infecție inflamatorie
sau undeva în tractul urinar. Dacă sunt observate și cu bacterii (vezi mai jos), acestea indică o
infecție probabilă a tractului urinar. care a fost văzută ca:

• Discul granular transparent se afla în WBC-urile intacte.

• Forma mai puțin granulară, micșorată și distorsionată a fost în WBC degenerate.

• Aglomerări de multe celule degenerate au fost în caz de puroi.

• Prezența multor WBC a fost în aglomerări infecție medie a UTI.

 Figura 23 WBC observate în proba de urină sub obiectivul 40x
Celule epiteliale
Celulele epiteliale sunt de obicei raportate ca "puține", "moderate" sau "multe" prezente pe câmp
de putere redusă (LPF). În mod normal, la bărbați și femei, câteva celule epiteliale pot fi găsite în
sedimentul urinar. În afecțiunile tractului urinar, cum ar fi infecțiile, inflamația și malignitățile,
este prezent un număr crescut de celule epiteliale

Bacterii, drojdii și paraziți

La persoanele sănătoase, tractul urinar este steril și, dacă proba de urină este colectată ca probă "curată",
nu vor exista microbi văzuți în sedimentul urinar sub microscop.

4.1 METODA GODPAP TEST DE GLUCOZĂ

Determinarea concentrației de glucoză este importantă în diagnosticul și tratamentul tulburărilor
metabolismului carbohidraților. Valorile mai mari sau mai mici decât referința au semnificație
diagnostică. Nivelurile sunt crescute în diabetul zaharat, hipertiroidismul și hiperactivitatea
glandei pituitare. Niveluri scăzute sunt observate în cazurile de supraproducție a insulinei de
către pancreas, cu tumori ale pancreasului, precum și cu hipofuncția organelor implicate în
sinteza glucozei și metabolismul carbohidraților.

PRINCIPIU:
Pentru a determina glucoza după oxidarea enzimatică de către glucoză oxidază. Indicatorul
colorimetric este chinomina, care este generată din 4-aminoantipirină și fenol de peroxidul de
hidrogen sub acțiunea catalitică a peroxidului.

Glucoză + O2 DUMNEZEU Acid gluconic + H2O2

2H2O2 + aminoantipirină + fenol POD chinoneimină + 4H2

MATERIAL DE PROBĂ:

Plasma serică heparinizată sau EDTA.

PROCEDURĂ:

• Luați 100 μl de reactiv într-un tub de sticlă.

• Apoi, se adaugă 10 μl de ser și se incubează timp de 5 minute la 37 °C.
• Eprubeta este apoi încărcată pe analizor după setarea programului necesar pentru glucoză.
Rezultatele sunt afișate pe ecran.

ACID URIC (PUNCT FINAL):

PRINCIPIU:

Acidul uric este oxidat la uricaz, la alantoină cu formarea de peroxid de hidrogen. În prezența
peroxidazei (POD), un amestec de sulfat de diclorfenol (DCPS) și 4aminoantipirină 4-(AA) este
oxidat de peroxidul de hidrogen pentru a forma un colorant quioneimine proporțional cu
concentrația de acid uric din probă.

MATERIAL DE PROBĂ:
ser fără hemoliză, EDTA sau plasmă heparinizată și urină.
PROCEDURĂ:
• 1000μl de monreactiv este luat într-o eprubetă de sticlă și se adaugă 10μl de ser.
• Se incubează timp de 5 minute la 37c.
• Eprubeta este apoi încărcată pe analizor după setarea programului necesar pentru acidul
uric.
• Rezultatele sunt afișate pe ecran.
4.4 TESTUL ALANIN AMINOTRANSFERAZEI:
ALT este o enzimă citoplasmatică. Este localizat în principal în hepatocite. Acesta este eliberat în sânge
în timpul deteriorării celulelor. Determinarea activității ALT în ser este utilizată în principal pentru
evaluarea afectării hepatice.

PRINCIPIU
L-alanină + α-ketoglutarat L-glutamat + piruvat (În prezența ALT)
Piruvat + NADH + H Lactat + NAD (În prezența LDH)
Alanin aminotransferaza (ALT) catalizează transferul grupării amino de la L-alanină la α-
ketoglutarat, are ca rezultat formarea piruvatului și L-glutamatului.Lactoză dehidrogenaza
(LDH) catalizează reducerea piruvatului și oxidarea simultană a NADH + la NAD. Rata rezultată
de scădere a absorbanței la 340 nm este direct proporțională cu activitatea ALT.

MATERIAL DE PROBĂ:
Ser non-hemolizat, plasmă heparinizată sau EDTA.
PROCEDURĂ:
• Luați bine reactivul 500ul din reactiv, Așezați eprubeta timp de 2 minute la 37C.
• Adăugați serul de 50ul luat din centrifugare în tubul de reactiv și amestecați și sorbiți
mașina în 3-4 sec.
• Notați citirea de la mașină.
CERINȚE:
INTERVAL DE REFERINȚĂ:
Adulți Femei;31U/ML

Bărbații adulților; 41 U/L

4.1 TESTUL ASPARTAT AMINOTRANSFERAZEI

Aspartat aminotransferaza sunt enzime găsite în ficat, dar se găsesc și în RBC roșu, celule
cardiace, țesut muscular și alte organe, rinichi și pancreas. Acesta poate fi utilizat în combinație
cu alte enzime pentru a monitoriza cursul diferitelor tulburări hepatice. Când țesutul corpului sau
un organ, cum ar fi ficatul sau inima, este bolnav, AST suplimentar este eliberat în sânge,
determinând creșterea nivelului enzimei. Prin urmare, cantitatea de AST și ALT din sânge este
direct legată de amploarea leziunilor tisulare. După leziuni severe, nivelurile AST cresc de 10
până la 20 de ori peste normal, în timp ce ALT poate atinge niveluri mai ridicate (de până la 50
de ori mai mari decât în mod normal).

PRINCIPIU:
Aspartat aminotransferaza poate fi analizată spectrofotometric într-o reacție cuplată cu malat
dehidrogenază în prezența NADH. O unitate oxidează un micromol de NADH pe minut la 25 ° C
și pH 7,4 în condițiile specificate.
Procedură:
Se reglează spectrofotometrul la 340 nm și 25 °C. Se pipetează 2,9 ml din amestecul de reactiv în
cuvă și se introduce în spectrofotometru. Se incubează timp de 3-4 minute pentru a ajunge la
echilibrul temperaturii și se stabilește viteza martor, dacă există. La momentul zero, se adaugă
0,1 ml de enzimă diluată corespunzător și se înregistrează scăderea în A 340 timp de 4 - 5
minute. Se calculează ΔA 340 /minut pornind de la porțiunea liniară inițială a curbei.

INTERVAL NORMAL:

Concentrațiile normale în sânge sunt cuprinse între 5 și 40 UI / L pentru AST

BIOLOGIE
MOLECULARĂ
5.1 EXTRAGEREA ADN-ului:

CERINȚE:
• Reactiv Chelex
• Tuburi Ependorf
• Centrifugă
• Vârtej
• bloc termic
PROCEDURĂ
• Faceți 5-7% soluție de chelex.
• Aliquot 300uL solutie in tub ependorf 15ml.
• Luați 300uL sânge și 3 ml apă distilată sau soluție de liză RBC.
• Centrifugați la 5000 rpm timp de 2 minute.
• Repetați pasul de lizare.
• Se adaugă 300uL 5-7% soluție chelex.
• Vortex timp de 15-20 de secunde.
• Puneți tubul în blocul de încălzire la 95C timp de 20 de minute.
• Vortex timp de 15-20 de secunde.
• Centrifugați la 10.000 rpm timp de 2 minute.
• Se transferă supernatantul în tubul ependorf și se utilizează ca sursă de ADN.
PREPARAREA AMESTECULUI PRINCIPAL PENTRU PCR:
1. Se asamblează toate componentele de reacție pe gheață și se prepară amestecul principal
conform tabelului următor:
2. Amestecați ușor reacția. Colectați tot lichidul pe fundul tubului printr-o rotire rapidă,
dacă este necesar.
3. Acoperiți corect tuburile PCR.
4. Tuburi PCR de la gheață la o mașină PCR cu blocul preîncălzit la 95 ° C și începe
termociclarea.
5. Produsul PCR se obține după o reacție completă (aprox. 2 ore).
6. Produsul PCR se obține după o reacție completă (aprox. 2 ore).
7. Produsul PCR este pregătit pentru electroforeza în gel pentru a examina benzile
amplificate ale ADN-ului.
Tabelul 6 Componenta PCR
Componentă Reacție de 25 μl Reacție de 50 μl
10X Standard Taq Reaction Buffer 2,5 μl 5 μl
10 mM dNTP 0,5 μl 1 μl
Grund înainte de 10 μM 0,5 μl 1 μl
Grund invers de 10 μM 0,5 μl 1 μl
ADN-ul șablonului Variabil Variabil
Taq ADN polimerază 0,125 μl 0,25 μl
Apă fără nuclează până la 25 μl până la 50 μl

Condiții de termociclare:

Tabelul 7 Starea termociclului

TREAPTĂ TEMP ORĂ
Denaturarea inițială 95°C 30 secunde
30 cicluri 95°C 15-30secunde
65-68°C 1 minut/kb
Prelungirea finală 65-68°C 5 minute
Ține 4-10°C

5.1 Electroforeza gelului de agaroză

1. Se adaugă colorant de încărcare la probele de ADN (produs PCR) care urmează să fie
separate.
2. Programați alimentarea la tensiunea dorită (1-5 v / cm între electrozi).
3. Adăugați suficient tampon de rulare pentru a acoperi suprafața gelului. Este important să
utilizați același tampon de funcționare ca cel utilizat pentru prepararea gelului.
4. Atașați cablurile cutiei de gel la sursa de alimentare. Porniți sursa de alimentare și
verificați dacă funcționează atât cutia cu gel, cât și sursa de alimentare.
5. Scoateți capacul. Încărcați încet și cu atenție probele de ADN în gel.
6. Un marker adecvat al dimensiunii ADN-ului ar trebui să fie întotdeauna încărcat
împreună cu probele experimentale.
7. Înlocuiți capacul în cutia de gel. Catodul (cablurile negre) ar trebui să fie mai aproape de
puțuri decât anodul (cabluri roșii). Verificați de două ori dacă electrozii sunt conectați la
sloturile corecte din sursa de alimentare.
8. Porniți alimentarea. Rulați gelul până când colorantul a migrat la o distanță adecvată.
9. Când electroforeza s-a finalizat, opriți sursa de alimentare și scoateți capacul cutiei de
 gel.
10. Scoateți gelul din cutia de gel, scurgeți excesul de tampon de pe suprafața gelului.
Așezați tava de gel pe prosoape de hârtie pentru a absorbi tamponul suplimentar de
rulare.
11. Expuneți gelul la lumina UV utilizând un sistem de documentare a gelului. Benzile ADN
ar trebui să apară ca benzi fluorescente. Faceți o fotografie a gelului.
12. Aruncați corect gelul și tamponul de funcționare conform reglementărilor instituției.

Figura 24 Electroforeza în gel