Controlul dăunătorilor în sistemul de

agricultură organica

Bacterii entomopatogene

Master Agricultura Organica 2022-2024

USAMV Cluj-Napoca

Autor Bologa Nicolae

Profesor dr. Horia Bunescu

1
 CUPRINS

1. Rezumat…………………………………………………………………3
2. Bacterii entomopatogene ..............................................................4
3. Caracteristici, clasificare și gazde dăunătoare..................................
4. Structura intestinală a insectelor……………………………………….
5. Mecanisme de acțiune a toxinelor bacteriene ..................................
6. Ingestia și activarea toxinelor ...........................................................
7. Difuzarea toxinelor și legarea la receptori specifici ..........................
8. Formarea de pori care duc la dezechilibru osmotic………………….
9. Bacillus thuringiensis……………………………………………………
10. Caracteristici ale B. thuringiensis......................................................
11. Descoperire ......................................................................................
12. Utilizarea B. thuringiensis ca bioinsecticid .......................................
13. Soiurile B. thuringiensis.....................................................................
14. Toxine produse de Bt, altele decât toxinele Cry ...............................
15. Generații de bioinsecticide pe bază de Bt ........................................
16. Avantajele si limitarile bioplagicidelor................................................
17. Culturi transgenice B. thuringiensis...................................................
18. Rezistenta insectelor la toxinele B. thuringiensis..............................
19. Concluzii ...........................................................................................
20. Observatii finale................................................................................
21. Referinte Bibliografice.......................................................................

2
 1. REZUMAT

Agricultura a reprezentat un progres major în dezvoltarea socială și economică a

omenirii. Dăunătorii au reprezentat o problemă majoră în întreținerea culturilor și au avut
efecte negative asupra aprovizionării cu alimente și economiei mondiale. Insecticidele
chimice au fost utilizate pentru a controla eficient dăunătorii, dar, ca urmare a utilizării lor
abuzive și a contaminării care a urmat, au un mare impact asupra ecosistemelor și a
sănătății umane. Ca o alternativă ecologică, biopesticidele au fost folosite pentru a le înlocui.
La nivel comercial, se remarcă biopesticidele de origine microbiană, în special cele bazate
pe bacteria entomopatogenă Bacillus thuringiensis (Bt), cel mai utilizat agent patogen în
biocontrolul insectelor. În această trecere în revistă a literaturii, vor fi discutate, printre altele,
diferite bacterii entomopatogene și gazdele lor, caracteristicile acestora și mecanismele de
acțiune ale toxinelor lor, cu accent special pe Bt.

Cuvinte-cheie: bacterii entomopatogene, insecte dăunătoare, Bacillus thuringiensis,

biopesticide, toxine.

3
 1. BACTERII ENTOMOPATOGENE

1.1. Caracteristici, clasificare și gazde dăunătoare

Bacteriile sunt microorganisme unicelulare procariote care nu au o membrană

nucleară și alte organite cu o membrană intracelulară definită (Glare, Jurat- Fuentes și
O'Callaghan, 2017). Bacteriile Gram-pozitive sunt omniprezente, au formă de cocci și bacili
și pot fi aerobe și anaerobe facultative sau strict. Unele dintre ele, în condiții nefavorabile,
sunt capabile să formeze spori de rezistență care le permit să rămână mai stabile în
procesele de producție, formulare și depozitare. Bacteriile Gram-negative sunt, de
asemenea, larg răspândite în mediul înconjurător, au formă de cocci și bacili, sunt aerobe și
anaerobe facultative; cu toate acestea, ele nu formează spori, ceea ce le face mai instabile
în procesele menționate mai sus (Grijalba et al., 2018).

Bacteriile entomopatogene disponibile în comerț produc toxine care sunt utilizate

pentru a combate dăunătorii. Unele dintre aceste bacterii își încheie ciclurile de viață în
interiorul insectei gazdă, în timp ce altele pot trăi și se pot dezvolta în afara gazdei. În plus,
există anumite bacterii care produc toxine care pot fi utilizate împotriva dăunătorilor fără a fi
nevoie să se utilizeze bacteriile vii în acest scop.

Majoritatea bacteriilor entomopatogene aparțin familiilor Bacillaceae,

Pseudomonadaceae, Enterobacteriaceae, Streptococcaceae și Microccaceae. Ultimele
două familii prezintă, de asemenea, activitate patogenă împotriva insectelor, dar într-o
măsură mai mică decât primele. Bacteriile cu cel mai mare succes comercial sunt bacteriile
Gram-pozitive din ordinul Bacillales, mai precis din genurile Bacillus, Paenibacillus și
Lysinibacillus, care formează toxine atunci când sporulează în condiții nefavorabile și care
pot fi asociate cu corpuri proteice parazitare (cristale). Biopesticidele pe bază de bacterii
care nu formează spori nu sunt la fel de frecvente, deoarece prezintă probleme de
instabilitate la depozitare (Glare et al., 2017; Kachhawa, 2017; Mampallil, Faizal și Anith,
2017).

În cadrul familiei Bacillaceae se numără, de exemplu, speciile Bacillus thuringiensis

(Bt), Lysinibacillus sphaericus, Brevibacillus laterosporus și Paenibacillus popilliae (Mampallil
et al., 2017) și Bacillus moritai (brevetul SUA nr. 3,632,747, 1972). În familia
Pseudomonadaceae se numără Pseudomonas protegens (Kupferschmied, Pèchy-Tarr,
Imperiali, Maurhofer și Keel, 2014), Pseudomonas fluorescens (Mampallil et al., 2017) și
Pseudomonas entomophila (Dieppois, Opota, Lalucat și Lemaitre, 2015), printre altele.
Familia Enterobacteriaceae include, de exemplu, Serratia marcescens, Serratia entomophila
(Ruiu, 2015), Yersinia entomophaga și Yersinia enterocolitica (Glare et al., 2017). În plus, se
remarcă și familia Clostridiaceae, în care se găsește bacteria Clostridium bifermentans
(Castagnola & Stock, 2014).

Un alt grup de bacterii entomopatogene poate fi găsit, de asemenea, trăind în

endosimbioză cu nematode insecticide, și anume cele aparținând genurilor Xenorhabdus și
Photorhabdus. Aceste bacterii, împreună cu nematodele, generează anumiți metaboliți care
le permit să colonizeze și să se reproducă în interiorul insectei gazdă (Sindhu, Sehrawat,
Sharma și Khandelwal, 2017). Aceste genuri includ bacteriile Photorhabdus luminescens și
Xenorhabdus nematophila (Kim, Ji, Cho, & Park, 2005).

4
 Toxinele pe care le produc și insectele-țintă asupra cărora acționează sunt
prezentate în tabelul următor Tabel 1.
t

1.2. Structura intestinală a insectelor și strategiile bacteriene de depășire a mijloacelor de

Este important să se înțeleagă anatomia și fiziologia normală a intestinului insectelor,

unde are loc toxicitatea. Deși poate părea un simplu tub lung și flexibil care se întinde de la
gură până la anus, acesta este un organ structurat în regiuni care îndeplinesc funcții
specifice (Lee, Lee, & Lee, 2017; Whalon & Wingerd, 2003). Intestinul este împărțit în trei
părți bine definite (figura 1): intestinul anterior (stomodeum), intestinul mijlociu sau
mezenterul și intestinul posterior (proctodeum) (Medel, Molina, Seguel, Rebolledo, & Quiroz,
2013). Intestinul anterior și cel posterior sunt acoperite de o cuticulă, în timp ce intestinul
mijlociu nu este acoperit, având în schimb un strat epitelial înconjurat de o membrană
peritrofică care creează o barieră între acest strat epitelial și lumenul intestinului mijlociu.
și lumenul intestinului mijlociu (Vallet-Gely, Lemaitre și Boccard, 2008). Între această
membrană și epiteliu se află un strat de mucus care contribuie la protecția insectei împotriva
pătrunderii agenților patogeni și a substanțelor toxice (Lee et al., 2017).

5
 Bacteriile entomopatogene au evoluat diverse strategii pentru a interacționa cu
insectele și a le ucide. Multe dintre acestea implică sisteme de secreție specializate care
transportă proteine din citoplasma bacteriei la suprafața acesteia, în mediul insectei gazdă
sau în celulele insectei gazdă. Aceste proteine sunt responsabile pentru virulența
bacteriană, permițând evitarea sistemului de apărare al insectei, a intoxicației și a
nutrienților. Aceste sisteme de secreție pot fi exprimate ca răspuns la recunoașterea
anumitor receptori prezenți în insecte sau la anumite semnale din mediul gazdă (McQuade &
Stock, 2018).

Figura1.Reprezentare grafică a intestinului unui model de insectă care arată părțile în care
este împărțit.

1.2. Mecanismele de acțiune ale toxinelor bacteriene

Multe specii de bacterii entomopatogene au în comun un mod similar de a provoca

boli și daune, caracterizat prin producerea de diverși factori de virulență, printre care
diferitele toxine produse de fiecare specie au o mare importanță. Bacteriile entomopatogene
disponibile în comerț provoacă infecții atunci când sunt introduse pe cale orală în insecte (de
Bortoli & Jurat-Fuentes, 2019).
Toxinele Cry sunt cele mai studiate și caracterizate toxine insecticide (Glare et al.,
2017). Acestea se acumulează sub formă de incluziuni cristaline (cristale parasporale), care
se găsesc în interiorul sporangiului și, de obicei, în afara exosporului sporului, reprezentând
20-30 % din greutatea uscată a celulei mamă sporulante, servind astfel drept protecție
împotriva degradării proteolitice premature în intestinul insectei gazdă. Deși pot fi împărțite
în mai multe grupe, în funcție de secvențele lor, există
patru clase principale de toxine Cry denumite Cry I (specifice lepidopterelor), Cry II
(specifice lepidopterelor și dipterelor), Cry III (specifice coleopterelor) și Cry IV (specifice
dipterelor). Structura sa se bazează pe trei domenii (domeniul I, domeniul II și domeniul III)
conectate prin legături simple, extensia C-terminală fiind esențială pentru toxicitate (figura 2)
(Bravo, Gill și Soberón, 2007; Chattopadhyay, Bhatnagar și Bhatnagar, 2004; Sauka și
Benintende, 2008).

6
 1.3. Ingestia și activarea toxinelor

Insecta ingerează toxina sub forma unei incluziuni parasporale solubile care se
dizolvă în intestinul mijlociu, iar proteinele sunt eliberate sub formă de protoxine inactiv.
Aceste protoxine sunt compuși pe structura toxinei atașată la o secvență N-terminală
și o secvență C-terminală.
Pentru toxicitate față de toxicitatea să apară la insecte, este necesar ca protoxina
trebuie să fie procesată și activată prin acțiunea proteaze (digestive enzime) în intestinul
mijlociu, care sunt responsabile pentru digestie in partea N-terminală și C-terminală.
Secvențele N-terminale și C-terminale secvențe în locuri specifice și eliberând, în
acest fel solubilizarea acestor cristale este, de asemenea, afectată de gradul de aciditate al
toxinei Cry, care este rezistentă la aceste enzime (Chattopadhyay et al., 2004; Whalon &
Wingerd, 2003). Solubilizarea acestor cristale este, de asemenea, afectată de gradul de
aciditate a intestinului, deoarece pH-ul trebuie să fie alcalin pentru ca acestea să se dizolve
(Sanchis, 2011). Acest proces este favorizat deoarece intestinul mijlociu la lepidoptere este
un mediu destul de alcalin, atingând valori între 10 și 11 pe scara pH-ului (Whalon &
Wingerd, 2003).

7
figura 2

8
 1.4. Difuzarea toxinelor și legarea la receptorii specifici

Odată activate, toxinele difuzează din lumenul intestinal al membranei periplasmatice

în spațiul endoperiplasmatic, unde pot avea acces la membrana epitelială (Whalon &
Wingerd, 2003). În veziculele membranare ale microvililor apicali ai celulelor intestinale se
găsesc receptori specifici, care sunt recunoscuți de cătretoxine și unde ajung acestea să se
lege. Receptorii includ cadherine, N-aminopeptidaze (APN), fosfataze alcaline și proteine de
210 kDa (Portela-Dusán, Chaparro-Giraldo, & López-Pazos, 2007).
Legătura dintre toxina activată și receptori are loc în două faze:
- Faza reversibilă: Aceasta are loc atunci când toxina interacționează cu situsul de legare a
receptorului. În acest proces, acționează domeniile II și III.
- Faza ireversibilă: Proteina se leagă de proteina receptoare a insectei și se introduce în
membrană. Elicele care alcătuiesc domeniul I se deschid, se inserează în membrană, iar
domeniul III se plasează pe suprafața membranei peste elice (Portela-Dusán,
Chaparro-Giraldo și López-Pazos, 2007; Whalon și Wingerd, 2003).

1.5. Formarea de pori care duc la dezechilibru osmotic

După legare, are loc o cascadă de semnalizare dependentă de Mg2+ , care

promovează exocitoza cadherinei din veziculele intracelulare către membrana celulară
apicală, crește numărul de receptori specifici toxinei și generează o amplificare a semnalului
inițial. Acest lucru duce la agregarea proteinelor Cry inserate și creează pori citolitici sau
canale de scurgere în epiteliul midgut (Chattopadhyay et al., 2004; Sauka & Benintende,
2008). Acești pori formează un canal selectiv de ioni K+ care provoacă două modificări
fiziologice negative în organismul insectei. În primul rând, gradientul de K+ din epiteliul
intestinal este rupt și, astfel, concentrația de K+ din hemolimfa artropodului crește. În al
doilea rând, în lumenul intestinului mijlociu, pH-ul scade, în timp ce în hemolimfă acesta
crește, deoarece gradientul ionic este oprit (Whalon & Wingerd, 2003). În cele din urmă,
permeabilitatea selectivă a membranei se pierde și apa, anionii, cationii și moleculele cu o
greutate moleculară mai mare încep să pătrundă, ceea ce are ca rezultat turgescența
celulară și incapacitatea de a regla presiunea osmotică (Chattopadhyay et al., 2004;
Portela-Dusán et al., 2007). În consecință, organele celulare, cum ar fi nucleele, ribozomii,
mitocondriile și reticulul endoplasmatic sunt alterate, iar celulele care alcătuiesc epiteliul sunt
distruse în urma unui proces de liză osmotică coloidală, lăsând să iasă tot conținutul lor
(Chattopadhyay et al., 2004).

9
 1.. Moartea insectei

După liza celulară, sporii pot germina în mediul aproape neutru care a fost generat,
care conține toți nutrienții din celulele rupte (Whalon & Wingerd, 2003). În plus, intestinul
mijlociu este paralizat, iar sporii invadează țesuturile adiacente, ceea ce face ca insecta să
înceteze să se hrănească și să moară în decurs de 12 ore până la 5 zile de la ingerarea
cristalelor de parazpori.
Porii și canalele ionice permit trecerea în hemolimfă a noilor celule vegetative, care
s-au dezvoltat după migrarea sporilor, agravând în cele din urmă intoxicația. Bacteriemia
acută și septicemia apar deoarece, pe măsură ce epiteliul intestinal este deteriorat, bacteriile
din propriul intestin al insectei se pot deplasa în hemocoel și pot contamina hemolimfa,
accelerând procesul de moarte (Chattopadhyay et al., 2004; Sauka & Benintende, 2008).
Bacteriile aparținând genurilor Photorhabdus și Xenorhabdus, care trăiesc în
simbioză cu nematodele entomopatogene în intestin, sunt folosite de aceste animale pentru
a invada larvele unor insecte pe cale orală, anală sau traheală. În interiorul gazdei, bacteriile
sunt eliberate de nematode și ucid gazda în aproximativ 48 de ore (Sheets & Aktories,
2016).
Pentru a dezvolta un insecticid bacterian dezirabil din punct de vedere comercial,
este important ca acesta să împiedice rapid insecta să ingurgiteze culturile și să provoace
moartea acesteia într-o perioadă foarte scurtă de timp, astfel încât pierderile de recoltă să fie
mai mici. Creșterea bacteriană în timpul infecției insectei gazdă prezintă cele trei faze
caracteristice unei culturi bacteriene. Faza de latență are loc atunci când celulele vegetative
se adaptează la condițiile gazdei și proliferează prin fisiune binară. Faza exponențială sau
logaritmică are loc în hemocoelă, când apare septicemia și moartea ulterioară a insectei. În
cele din urmă, faza staționară are loc atunci când metaboliții secundari ai noi celule
vegetative și pe măsură ce substanțele nutritive se epuizează. Acest lucru poate duce la un
nou proces de sporulație (Glare et al., 2017).

10
 2. THURINGIENS BACILLUSIS

Genul Bacillus este vândut pe scară largă ca biopesticid în comerțul mondial datorită
capacității sale largi de a genera produse utile care sunt solicitate de industria alimentară,
farmaceutică, de mediu și agricolă, deoarece sunt foarte necesare în anumite activități
antropice. Indivizii din acest gen sunt considerați ca fiind mici fabrici capabile să producă
multe molecule biologic active (Sansinenea, 2019).
Bacillus thuringiensis este cea mai cunoscută și mai bine studiată bacterie
entomopatogenă (Sansinenea, 2019) și, în plus, este prezentată ca fiind insecticidul de
origine biologică cu cea mai mare cotă de piață (Soberón & Bravo, 2008), reprezentând
aproximativ 90% din pesticidele microbiene disponibile (de Bortoli & Jurat-Fuentes, 2019).

2.1. Caracteristici ale B. thuringiensis

B. thuringiensis este o bacterie Gram-pozitivă, anaerobă facultativă, în formă de

bacil, cu o lungime de 3-5 μm și o lățime de 1-1,2 μm și omniprezentă, deoarece poate fi
găsită oriunde pe planetă și în diferite medii, cum ar fi solul, apa, frunzele plantelor etc. Are
două faze diferite în ciclul său de viață: creșterea vegetativă, în care bacteria se dublează
prin bipartiție, și sporularea, în care are loc diferențierea bacteriei într-un spor (Castañet &
Moreno, 2016; Hollensteiner et al., 2017; Soberón & Bravo, 2008).
B. thuringiensis are anumite caracteristici particulare care o diferențiază de alte
bacterii din genul său, cum ar fi capacitatea de a trăi în mediul înconjurător în mod liber și
independent de alți bacili Gram-pozitivi formatori de spori, formarea de cristale parasporale
compuse din proteine insecticide și capacitatea sa de a supraviețui într-o nișă de mediu
unică, cum ar fi intestinul mijlociu și hemocoelul insectelor (Ibrahim, Griko, Junker, & Bulla,
2010).

2.2. Caracteristici ale B. thuringiensis

B. thuringiensis este o bacterie Gram-pozitivă, anaerobă facultativă, în formă de

bacil, cu o lungime de 3-5 μm și o lățime de 1-1,2 μm și omniprezentă, deoarece poate fi
găsită oriunde pe planetă și în diferite medii, cum ar fi solul, apa, frunzele plantelor etc. Are
două faze diferite în ciclul său de viață: creșterea vegetativă, în care bacteria se dublează
prin bipartiție, și sporularea, în care are loc diferențierea bacteriei într-un spor (Castañet &
Moreno, 2016; Hollensteiner et al., 2017; Soberón & Bravo, 2008).
Bt are anumite caracteristici particulare care o diferențiază de alte bacterii din genul
său, cum ar fi capacitatea de a trăi în mediul înconjurător în mod liber și independent de alți
bacili Gram-pozitivi formatori de spori, formarea de cristale parasporale compuse din
proteine insecticide și capacitatea sa de a supraviețui într-o nișă de mediu unică, cum ar fi
intestinul mijlociu și hemocoelul insectelor (Ibrahim, Griko, Junker, & Bulla, 2010).

11
 2.3 Descoperire B. thuringiensis

Baccilus t a fost izolat pentru prima dată în 1901 de către bacteriologul japonez
Ishawata Shigetane, în timp ce cerceta cauza unei boli cu moarte subită la larvele viermilor
de mătase (Bombyx mori). El a observat că culturile bacteriene în creștere activă nu erau
patogene pentru larve, în timp ce culturile aflate în proces de sporulație erau dăunătoare
pentru acestea. Abia în 1915 a fost descrisă pe deplin de către omul de știință german Ernst
Berliner, care a investigat larvele bolnave de molie mediteraneană (Ephestia kuehniella).
Denumirea "thuringiensis" se datorează faptului că aceste larve au fost găsite în Thuringia
(landul german). Acest om de știință a observat un corp prezent în bacteriile sporulante
formate de cristale, dar nu l-a legat de intoxicarea insectelor (Osman et al., 2015).
În 1953, Thomas Angus a atribuit prezența acestor cristale patogenității la insecte, iar
denumirea de "cristale parasporale" a fost stabilită de Christopher Hannay. În cele din urmă,
în 1955, Hannay și Philip Fitz-James au descoperit că aceste cristale sunt formate de
proteine (Ibrahim et al., 2010).
6.3. Utilizarea B. thuringiensis ca bioinsecticid
În anii 1950, a fost studiată cultivarea pe scară largă a culturilor de Bt și s-a constatat
că este destul de ieftină. Ca urmare, a fost utilizat ca insecticid în Statele Unite începând cu
1958, deși primul insecticid pe bază de Bt, Sporoine, a fost comercializat în Franța încă din
1938 pentru a controla moliile făinii. În 1961 a fost înregistrat pentru prima dată de către
Agenția pentru Protecția Mediului din SUA (Ibrahim et al., 2010; Osman et al., 2015).
De atunci, studiile s-au concentrat pe creșterea eficacității produselor comercializate
pe baza acestei bacterii și pe creșterea toxicității sale intrinseci (Osman et al., 2015).

2.4. Utilizarea B. thuringiensis ca bioinsecticid

În anii 1950, s-a studiat cultivarea pe scară largă a culturilor de Bt, care s-a dovedit a fi
destul de ieftină. Ca urmare, a fost utilizat ca insecticid în Statele Unite începând cu 1958,
deși primul insecticid pe bază de Bt, Sporoine, a fost comercializat în Franța încă din 1938
pentru a controla moliile de făină. În 1961 a fost înregistrat pentru prima dată de către
Agenția pentru Protecția Mediului din SUA (Ibrahim et al., 2010; Osman et al., 2015).
De atunci, studiile s-au concentrat pe creșterea eficacității produselor comercializate pe
baza acestei bacterii și pe creșterea toxicității sale intrinseci (Osman et al., 2015).

2.5. Toxine produse de B. thuringiensis altele decât toxinele Cry

Fiecare tulpină de B. thuringiensis poate produce una sau mai multe toxine, toxine care
determină specificitatea gazdei (de Maagd, 2015). Prin intermediul Utilizând diferite tehnici
de detectare și identificare, aproximativ 950 de gene de toxine diferite au fost clasificate în
74 de grupe Cry, 3 grupe Cyt și 4 grupe de proteine Vip (Bravo et al., 2017; Chakroun,
Banyuls, Bel, Escriche, & Ferré, 2016).

12
 2.6. Generații de bioinsecticide pe bază de Bt

S-au efectuat numeroase cercetări cu scopul de a dezvolta și îmbunătăți produsele

bazate pe acest agent de biocontrol. Din cauza specificității sale ridicate, este necesar să se
studieze și să se selecteze cele mai bune ingrediente pentru a optimiza formularea unor
astfel de bioinsecticide și, astfel, pentru a crește succesul controlului. Aceste produse se
bazează în principal pe un amestec de cristale și spori obținuți din culturi bacteriene
(Rosas-Garcia, 2008) și pot fi clasificate în:
(a) Produse de primă generație: acestea sunt toate acele bioinsecticide care includ
cristale și spori de B. thuringiensis. Acestea reprezintă majoritatea produselor insecticide
comercializate pe piața mondială, deoarece utilizarea lor prezintă un risc mai mic de
dezvoltare a rezistenței la insecte în comparație cu insecticidele chimice; în plus, politicile
naționale privind utilizarea acestor pesticide convenționale și costurile ridicate în dezvoltarea
de noi insecticide chimice au motivat utilizarea acestor biopesticide (Sauka & Benintende,
2008).
Cu toate acestea, există unele dezavantaje, cum ar fi: o gamă îngustă de activitate atunci
când există mai mulți dăunători asupra cărora trebuie să se acționeze, slăbiciune față de
radiațiile solare atunci când se află în mediul înconjurător și o gamă inexistentă atunci când
este vorba de insecte care atacă rădăcinile sau părțile interne ale plantei (Portela-Dusán et
al., 2007).
b) Produse de a doua generație: aceste biopesticide sunt compuse tot din spori și
cristale, dar se folosește o tulpină modificată genetic de B. thuringiensis prin transferul de
gene cry de la alte tulpini, lărgind astfel spectrul de acțiune și/sau crescând toxicitatea
inerentă tulpinii într-o manieră aditivă și reducând, de asemenea, probabilitatea de a genera
rezistență la gazdă. Această manipulare genetică se realizează prin transformare,
transducție, conjugare, recombinare sau crearea de proteine Cry hibride, printre altele
(Sauka & Benintende, 2008).
c) Produse de a treia generație: aceste produse sunt alcătuite din bacterii
recombinante, cum ar fi Pseudomonas fluorescens, care este capabilă să ajungă în
țesuturile plantelor și să se dezvolte în rădăcini, modificate genetic cu gene Cry, sau de
tulpini Bt modificate cu alte gene care codifică factori de virulență diferiți de proteinele Cry
(Portela-Dusán et al., 2007; Sauka & Benintende, 2008).
Cu aceste noi bioinsecticide, produsele din primele generații ar fi îmbunătățite și s-ar obține
insecticide mai ecologice, mai puțin dăunătoare pentru ecosisteme și care ar putea concura
în mod optim pe piață cu cele de origine chimică.

13
 3. BENEFICIILE ȘI LIMITELE BIOPESTICIDELOR

Contribuția la protejarea culturilor într-un mod mai durabil necesită alternative mai
ecologice. Bioinsecticidele microbiene au fost utilizate din ce în ce mai mult în acest scop,
deoarece oferă numeroase avantaje față de insecticidele convenționale , după cum se arată
-avantaje
✔ Eficace chiar și în cantități mici
✔ Foarte biodegradabil (descompunere rapidă)
✔ Mai puțină generare de deșeuri
✔ Risc redus de toxicitate pentru sănătatea umană și pentru mediu ✔ Foarte biodegradabil
(descompunere rapidă) ✔ Cea mai mică generare de reziduuri mediu
✔ Gama țintă specifică
✔ Posibilă utilizare combinată cu pesticide convenționale
✔ Specificitatea gazdei, mod de acțiune și proprietăți de acțiune și biodegradabilitate
cunoscută proprietăți biodegradabile cunoscute
✔ Costuri de dezvoltare mai mici decât cele ale insecticidelor chimice ✔ Costuri de
dezvoltare mai mici decât cele ale insecticidelor chimice
insecticide chimice

- dezavantajele
✘ În comparație cu pesticidele chimice, are o acțiune mai lentă.
✘ Uneori are o stabilitate scăzută
✘ Termen de valabilitate mai scurt
✘ Probleme juridice în unele țări
✘ Potențial de profit scăzut din cauza caracterul foarte selectiv

Cel mai important avantaj este siguranța pe care o oferă. Deoarece toxicitatea lor
este specifică unui singur grup sau specie de insecte, acestea nu afectează în mod direct
alte posibile insecte benefice, inclusiv prădători sau paraziți ai dăunătorilor, care se află în
aceeași zonă care a fost expusă acțiunii acestor bioinsecticide.
Nu este cazul insecticidelor chimice, a căror utilizare poate fi dăunătoare nu numai
pentru dăunătorii vizați, ci și pentru oameni, care sunt expuși involuntar atât în casă, prin
consumul de alimente care conțin reziduuri ale acestor pesticide, cât și prin contactul sau
inhalarea aerului contaminat de acestea, chiar dacă nivelul de expunere este foarte scăzut,
copiii fiind cei mai vulnerabili la efectele lor.
Printre cele mai notabile dezavantaje ale utilizării biopesticidelor se numără
capacitatea limitată a acestora de a afecta doar anumiți dăunători. Odată cu utilizarea lor,
alte tipuri de dăunători care nu sunt afectați de toxicitatea pesticidului vor putea supraviețui
și vor continua să dăuneze și să distrugă culturile. În plus, toleranța scăzută la temperaturi
ridicate, la desecare și la expunerea la radiații UV reduce considerabil eficacitatea anumitor
bioinsecticide. Ca o consecință a acestor două dezavantaje, este foarte important să se
cunoască procedura de aplicare a produsului în mod corespunzător și la momentul potrivit
(K. H. Kim et al., 2017; Mnif & Ghribi, 2015).

14
 4. REZISTENȚA INSECTELOR LA TOXINELE BT

Rezistența la toxinele Bt apare atunci când se generează anumite variații genetice la

anumiți indivizi de dăunători țintă care îi fac rezistenți la toxinele Bt (Chattopadhyay et al.,
2004). Utilizarea Bt ca agent de biocontrol a generat un proces de presiune evolutivă care a
favorizat apariția rezistenței insectelor.
În 1985, primul caz de rezistență la Bt a fost raportat la specia Plodia interpunctella
(molia indiană a făinii) (Lacey et al., 2015; Sanchis, 2011). De atunci, alte cazuri de
rezistență atât împotriva bioinsecticidelor, cât și a culturilor pe bază de Bt au fost raportate în
unele țări din America Centrală, Spania, Australia și Africa de Sud (Melo, Soccol, & Soccol,
2014).
Rezistența poate fi dobândită prin mutații la insecte care influențează modul de
acțiune al toxinelor și s-a demonstrat că există mai multe mecanisme de dezvoltare a
rezistenței, printre care se numără sechestrarea toxinelor Cry de către esteraze sau
lipoforine din cauza unui răspuns imunitar puternic și modificarea atât a activării toxinelor
Cry, cât și a receptorilor de toxine Cry.
Aceasta are ca rezultat o mai mică legare în membrana epitelială a intestinului
mijlociu al insectei.
Strategiile posibile de combatere a acestei probleme sunt:
- Plantarea de culturi nemodificate genetic în apropierea culturilor modificate cu gene
Bt, permițând astfel prevalența insectelor sensibile la efectele toxinelor. În acest fel, este
posibilă reproducerea între indivizi rezistenți și sensibili, generând urmași sensibili datorită
recesivității alelelor generatoare de rezistență.
- Utilizarea unui set de gene care codifică diferite toxine Cry cu mecanisme diferite în
aceeași tulpină de plantă (Bravo et al., 2011).

15
 5. CONCLUZII

1. Apariția dăunătorilor are un impact negativ asupra agriculturii, economiei și

sănătății umane. Pentru combaterea acestor dăunători au fost utilizate insecticide chimice
care, deși prezintă anumite avantaje, cum ar fi costul redus și ușurința de preparare, au
generat în timp probleme de toxicitate și poluare a mediului.
2. Ca alternativă ecologică, s-a optat pentru dezvoltarea bioinsecticidelor, ale căror
avantaje cele mai notabile în comparație cu insecticidele convenționale sunt
biodegradabilitatea și acțiunea specifică împotriva dăunătorilor țintă.
3. Dintre bioinsecticide, predomină cele de origine microbiană, bazate în general pe
bacterii entomopatogene cu spori care generează proteine toxice împotriva anumitor ordine
de insecte-gazdă și care, după ce sunt ingerate în mod normal pe cale orală, sunt activate în
intestinul mijlociu al acestora datorită pH-ului alcalin din interiorul lor, unde, în urma unei
legături specifice cu receptorii prezenți în membrana epitelială, ajung să genereze pori și să
provoace în final moartea prin septicemie și bacteriemie.
4. Bacteriile gram-pozitive aparținând ordinului Bacillales și, în special, specia
Bacillus thuringiensis, cunoscută și sub numele de Bt, sunt cele mai utilizate în lume. De la
descoperirea Bt, au fost efectuate numeroase studii privind mecanismul de acțiune al
acestuia și diferitele sale toxine prin urmare, este o bacterie bine caracterizată, care a fost
capabilă să genereze îmbunătățiri ale produselor bazate pe aceasta. În plus, începând cu
1970, au fost descoperite diferite tulpini de Bt care au permis extinderea gamei de insecte
gazdă.
5. Deși utilizarea acestei bacterii prezintă avantaje enorme, inclusiv inserarea
genelor Bt cry în plante pentru a obține culturi transgenice rezistente la dăunători, ea
prezintă, de asemenea, anumite probleme, cum ar fi posibila generare a unei rezistențe la
unele insecte care pot continua să dăuneze culturilor și să cauzeze probleme agricole și
economice semnificative.
6. Deși este adevărat că bioinsecticidele și culturile modificate genetic sunt
comercializate în întreaga lume, acestea nu sunt pe deplin acceptate în anumite zone, cum
ar fi Europa, din cauza presupuselor riscuri legate de utilizarea lor. A fost necesar să se
efectueze studii pentru a corobora siguranța și eficacitatea acestora în încercarea de a
crește acceptarea lor la nivel mondial.

16
 6. REFERINȚE BIBLIOGRAFICE

Adang, M. J., Crickmore, N., & Jurat-fuentes, J. L. (2014). Diversitatea toxinelor de cristal ale
Bacillus thuringiensis și mecanismul de acțiune.

Bravo, A., Gill, S. S., & Soberón, M. (2007). Mode of action of Bacillus thuringiensis Cry and
Cyt toxins and their potential for insect control.

Bravo, A., Pacheco, S., Gómez, I., García-Gómez, B., Onofre, J., & Soberón, M. (2017).
Insecticidal Proteins from Bacillus thuringiensis and Their Mechanism of Action

Castagnola, A., & Stock, S. P. (2014). Factori de virulență comuni și ținte tisulare ale
bacteriilor entomopatogene pentru controlul biologic al dăunătorilor lepidopterelor.

Chakroun, M., Banyuls, N., Bel, Y., Escriche, B., & Ferré, J. (2016). Bacterial Vegetative
Insecticidal Proteins (Vip) from Entomopathogenic Bacteria. Microbiology and Molecular
Biology Reviews,

Chattopadhyay, A., Bhatnagar, N. B., & Bhatnagar, R. (2004). Bacterial insecticidal toxins.
Critical Reviews in Microbiology,

de Bortoli, C. P., & Jurat-Fuentes, J. L. (2019). Mecanisme de rezistență la bacteriile

entomopatogene relevante din punct de vedere comercial.

de Maagd, R. A. (2015). Produse pe bază de Bacillus thuringiensis pentru combaterea

insectelor dăunătoare. En B. Lugtenberg (Ed.), Principles of Plant-Microbe Interactions:
Microbes for Sustainable Agriculture

de Maagd, R. A., Bravo, A., Berry, C., Crickmore, N., & Schnepf, H. E. (2003). Structure,
Diversity, and Evolution of Protein Toxins from Spore-Forming Entomopathogenic Bacteria.
Annual Review of Genetics,

Dhaliwal, G. S., Jindal, V., & Dhawan, A. K. (2010). Insect Pest Problems and Crop Losses :
Changing Trends (Problemele cauzate de insecte dăunătoare și pierderile de recolte

Dieppois, G., Opota, O., Lalucat, J., & Lemaitre, B. (2015). Pseudomonas entomophila : O
bacterie versatilă cu proprietăți entomopatogene. În J. Ramos (Ed.), Pseudomonas

Glare, T. R., Jurat-Fuentes, J. L., & O'Callaghan, M. (2017). Basic and Applied Research:
Entomopathogenic Bacteria. În Microbial Control of Insect and Mite Pests (Controlul
microbian al insectelor și acarienilor dăunători)

Henry, L. M., Maiden, M. C. J., Ferrari, J., & Godfray, H. C. J. J. (2015). Istoria vieții
insectelor și evoluția mutualismului bacterian.

17