PROSPECTUL PRODUSULUI

LABScreen™
ID catalog Denumirea produsului
LS1PRA* LABScreen™ PRA Class I
LS2PRA* LABScreen™ PRA Class II
LS12PRA* LABScreen™ PRA Class I & II
LSM12* LABScreen™ Mixed Class I & II
LS1A04* LABScreen™ Single Antigen HLA Class I - Combi
LS1ASP01* LABScreen™ Single Antigen HLA Class I Supplement - Group 1
LS2A01* LABScreen™ Single Antigen HLA Class II - Group 1
LS2ASP01* LABScreen™ Single Antigen HLA Class II Supplement - Group 1
LS1AEX01* LABScreen™ Single Antigen HLA Class I ExPlex
LS2AEX01* LABScreen™ Single Antigen HLA Class II ExPlex
LSMICA001 LABScreen™ MICA Single Antigen - Group 1
LSPWABUF LABScreen™ Wash Buffer

A se utiliza pentru diagnostic in vitro

SCOPUL UTILIZĂRII
Produsele LABScreen sunt prevăzute pentru utilizare la detectarea anticorpului HLA, utilizând
tehnologia de citometrie în flux.

SUMAR ŞI EXPLICAŢIE
Produsele LabScreen utilizează microsfere acoperite cu antigene HLA purificate de clasă I sau de clasă II şi
reactivi optimizaţi în prealabil, pentru detectarea anticorpilor HLA de clasă I sau de clasă II, în serul uman.
Produsele LABScreen utilizează LABScan™ 100 (Luminex® 100/200) sau LABScan3D™ (Luminex® FLEXMAP
3D®) pentru analiza a cel mult 100 sau, respectiv, 500 regiuni cu bile, într-un singur test.
achiziţia şi analiza datelor.
Testul Mixed detectează prezenţa anticorpilor împotriva antigenelor HLA de clasă I şi/sau de clasă II. Testele
PRA pot detecta anticorpi şi specificităţile acestora împotriva antigenelor HLA în fiecare panel LABScreen®.
Testul cu antigen unic permite configurarea specificităţii anticorpilor, sugerată de un test PRA anterior, în timp ce
bilele individuale unice sunt utilizate pentru focalizarea asupra reacţiilor împotriva unuia sau câtorva antigene, de
exemplu pentru a compara reactivitatea diferitelor probe de ser de la acelaşi individ. Un ser de control negativ
este utilizat pentru a stabili valoarea de fond pentru fiecare bilă într-un lot de teste.

PRINCIPIU(II)
Serul testat este mai întâi incubat cu bilele LABScreen. Anticorpii anti-HLA prezenţi eventual în serul testat se
leagă de antigenele de pe bile şi apoi sunt marcaţi cu IgG antiumane de capră conjugate cu R-ficoeritritină (PE).
Analizorul (analizoarele) în flux LABScan™ 100 sau LABScan3D™ detectează simultan emisia fluorescentă de
PE şi urma colorantului din fiecare bilă, permiţând achiziţii de date aproape în timp real. Pentru a atribui
specificitatea PRA şi HLA, modelul de reacţie al serului testat este comparat cu fişa de lucru specifică lotului,
definind ordinea antigenelor.

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03
www.onelambda.com
Pagina 1 din 13
One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™
REACTIVI

A. Identificare
A se consulta tabelul de referinţă LABScreen pentru descrierea produsului.
B. Atenționări și precauții
1. Avertizare: Reactivii de testare LABScreen PRA conţin 0,1% azidă de sodiu (NAN3) ca şi
conservant. În condiţii acide, azida de sodiu eliberează acid hidrazoic, un compus extrem de
toxic. Înaintea eliminării, diluaţi reactivii care conţin azidă de sodiu în apă de la robinet, pentru a
evita formarea depozitelor în canalizări, unde se pot dezvolta condiţii explozive. (Consultaţi Fişa
tehnică de securitate pentru informaţii detaliate).
2. Avertizare: Toate produsele de sânge trebuie tratate ca potenţial infecţioase. Materialul din
care provine acest produs a dat rezultate negative când a fost testat în conformitate cu testele
curente necesare, conform FDA. Nicio metodă cunoscută de testare nu poate oferi garanţii cu
privire la faptul că produsele derivate din sânge uman nu vor transmite agenţi infecţioşi.

3. Atenţie: Pentru scuturarea manuală a plăcilor, efectuaţi o mişcare rapidă a braţului în jos fără să
răsuciţi articulaţia mâinii, pentru a preveni efectele mişcării repetitive.
4. Pentru informații detaliate consultați Fișa tehnică de securitate.

C. Prepararea reactivilor pentru utilizare

1. A se vedea mai jos „Instrucţiuni pentru utilizare”.
2. Dacă soluţia prezintă precipitate tampon saline în timpul transportului sau depozitării, dizolvaţi-o
din nou prin încălzire uşoară înaintea preparării diluţiei de lucru.

D. Instrucţiuni de păstrare
1. Produsele LABScreen sunt expediate la utilizatorul final pe gheaţă uscată. Întregul ambalaj
poate fi păstrat la un congelator la o temperatură de -65°C sau inferioară, până la prima utilizare,
până la data de expirare indicată pe etichetă.
2. NU RECONGELAŢI bilele după ce au fost dezgheţate. Păstraţi bilele la temperaturi cuprinse
între 2 - 8°C timp de cel mult trei luni sau până la data de expirare (dacă este precedentă).
3. După prima utilizare, păstraţi tamponul de spălare la temperaturi cuprinse între 2 - 8°C timp de
cel mult trei luni sau până la data de expirare (dacă este precedentă).

E. Purificarea sau tratamentul necesar pentru utilizare

A se vedea mai jos „Instrucţiuni pentru utilizare”.
F. Indicaţii cu privire la instabilitate
Nu există

CERINŢE PRIVIND INSTRUMENTUL

A. Echipamentul necesar
 Analizor în flux LABScan™ 100 (Luminex® 100/200) cu platformă Luminex® XY (pentru achiziţii automate
de date cu 96 probe) şi sistem de distribuţie cu lichid de protecţie (sheath fluid) (OLI Cat. # LABSCNXS3)
SAU analizorul în flux LABScan3D™ (Luminex® FLEXMAP 3D®) cu platformă XY şi sistem de distribuţie
cu lichid de protecţie (OLI Cat. # LABSCNXS4)
 Centrifugă
 Rotor pentru eprubeta de microcentrifugă, de 1,5 ml (9.300 g) sau un rotor cu recipient rotativ pentru
microplacă, cu 96 godeuri (1.300 g).
 Agitator de tip Vortex
 Agitator de placă sau platformă rotativă

Pentru opţiunea cu placă filtrantă:

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 2 din 13

One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™

 Colector de vacuum cu 96 godeuri (Millipore Cat. #MAVM0960R sau echivalent)

 Pompă de vid cu presiune sub 100 mm Hg
 Agitator de placă sau platformă rotativă
B. Calibrarea aparatului
Urmaţi instrucţiunile producătorului pentru calibrarea analizorului în flux LABScan™ 100 or LABScan3D™
C. Software-ul recomandat
HLA Fusion™ (OLI Cat. #FUSPGR)

RECOLTAREA MOSTRELOR ŞI PREPARAREA

 Mostrele de sânge nedeschise trebuie păstrate la temperatura camerei timp de cel mult 4 zile. Serurile
separate (din probele coagulate) sau plasma (în ACD sau K-EDTA) pot fi păstrate la frigider timp de până
la 7 zile, sau alicotele pot fi congelate la temperaturi de -20°C sau mai joase şi decongelate imediat înaintea
testării. Agregatele trebuie îndepărtate din serul de testat/plasmă prin centrifugare (8000 – 10000 g timp de
10 minute) sau prin filtrare (0,2 µm), înaintea testării. Orice agregate în ser sau contaminarea probei pot
determina apariţia unor rezultate care nu sunt valide.
 Probele pot fi tratate sau diluate pentru a reduce fondul nespecific sau pentru a îndepărtat factorul inhibitor -
vezi paragraful privind limitele.
Notă:
 Serul sau plasma de testare nu trebuie inactivate prin căldură, deoarece aceasta poate produce un
fond înalt în test.
 În general se utilizează ser sau plasmă nediluate pentru testare. Cu toate acestea, dacă pentru acest
test se diluează o probă de ser cu fond înalt, serul de control negativ trebuie testat la aceeaşi diluţie.

PROCEDURĂ
A. Materiale furnizate
1. A se vedea Tabelul de referinţă LABScreen în documentaţia produsului pe website-ul One Lambda,
Inc. pentru lista materialelor furnizate pentru fiecare produs.
2. Volumele furnizate au depăşit cantitatea necesară pentru testare printr-o cantitate mică pentru a
permite pierderile prin pipetare.
B. Materiale necesare, dar care nu sunt furnizate
1. IgG antiumane de capră, conjugate cu PE (număr de catalog OLI Cat #LS-AB2)
2. PBS, filtrat [USA Scientific Cat. # 9242 (500 ml 10X) sau echivalent]
3. Eprubetă pentru microcentrifugă 1,5 ml (USA Scientific Cat. # 1415-2500 sau echivalent)
4. Vârfuri de pipete (Rainin GPS)
5. Ser pentru control negativ, care nu conţine anticorpi HLA când se testează prin metoda LABScreen
(OLI Cat. #LS-NC sau equivalent).
Dacă testul este efectuat pe microplaca cu 96 godeuri:
1. Microplacă cu 96 godeuri, 250 µl, suprafaţă netratată ((Whatman Cat. # 7701-3250 sau echivalent)
2. Sigiliu de acoperire a plăcii (număr de catalog OLI Cat. #SSPSEA300 sau echivalent)
Pentru opţiunea cu placă filtrantă:
1. Placă filtrantă (Multiscreen-BV, Număr de catalog Millipore MABVN1210, sau echivalent)
C. Instrucţiuni pentru utilizare
Note:
 Aveţi o grijă deosebită în procesul de alicotare. Nerespectarea paşilor descrişi mai jos poate duce la
pierderi de reactiv.

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 3 din 13

One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™

 Secţiunile de la A la C indică volumul de reactivi necesar pentru testarea unui singur grup de bile. Dacă
efectuaţi un test combinat, a se vedea Paragraful D înaintea continuării.
 Porniţi analizorul în flux LABScan™ 100 sau LABScan3D™ cu cel puţin 30 minute înaintea începerii
testării.
 Creaţi un nume de fişier şi o foaie cu codul probei pentru fiecare placă de test.

I. Pentru fiecare lot de teste, trebuie testat un ser negativ de control (număr de catalog OLI Cat. #LS-NC
sau echivalent), pentru a stabili valorile de fond. Pentru a completa un test în eprubeta de 1,5 ml
pentru microcentrifugă:
1. Amestecaţi bine bilele LABScreen prin agitare uşoară în vortex sau prin pipetare în sus şi în jos de câteva
ori, înaintea utilizării.
2. Incubaţi 5 µl de bile LABScreen cu 20 µl de ser de test, în eprubete separate de microcentrifugă de 1,5 ml,
la întuneric, timp de 30 minute la 20 - 25º C, cu agitare uşoară.
3. Diluaţi tampon de spălare 10X (număr de catalog Cat. OLI #LSPWABUF) în apă distilată, pentru a obţine
soluţia de spălare 1X.
4. Adăugaţi 1 ml de tampon de spălare 1X în fiecare eprubetă soluţie de ser/bilă şi agitaţi în vortex.
Centrifugaţi la 9.300 g timp de 2 minute. Aspiraţi şi aruncaţi supernatantul.
5. Repetaţi pasul 4 de două ori.
6. Diluaţi 1 µl pentru fiecare test de IgG antiumane conjugate cu PE 1000X (număr de catalog OLI #LS-AB2)
cu 99 µl de tampon de spălare 1X, pentru a obţine o soluţie 1X.
7. Adăugaţi în fiecare eprubetă, 100 µl de IgG antiumană conjugată cu PE 1X. Agitaţi din nou în vortex şi
incubaţi timp de 30 minute la întuneric, la 20 - 25°C, scuturând uşor.
8. Repetaţi pasul 4 de două ori.
9. Adăugaţi 80 µl 1X PBS în fiecare eprubetă. Continuaţi cu achiziţia datelor şi analiza sau păstraţi tăviţa la
2 - 8º C la întuneric, timp de cel mult 24 ore, înaintea analizei.
II. Pentru a completa un test în placa cu 96 godeuri:
Atenţie: Sigilaţi placa cu 96 godeuri atent şi complet, pentru a preveni contaminarea probei de la placă la
placă, apăsând sigiliul pe fiecare margine a celor 96 godeuri. Nu reutilizaţi etichetele adezive de sigilare a
plăcii. Utilizaţi un nou sigiliu pentru fiecare etapă care necesită aplicarea unui sigiliu de placă.
1. Amestecaţi bine bilele LABScreen prin agitare uşoară în vortex sau prin pipetare în sus şi în jos de câteva
ori, înaintea utilizării.
2. Adăugați 5 µl de bile LABScreen cu 20 µl de ser de test, în fiecare godeu al plăcii cu 96 godeuri, sigilați
place și incubați timp de 30 minute la 20 - 25º C, agitând uşor.
3. Diluaţi tampon de spălare 10X (număr de catalog Cat. #LSPWABUF) în apă distilată, pentru a obţine
soluţia de spălare 1X.
4. După incubare, îndepărtați sigiliul și adăugaţi 150 µl tampon de spălare 1X în fiecare godeu al plăcii.
Acoperiţi cu sigiliu de acoperire a plăcii (număr de catalog OLI Cat. # SSPSEA300 sau echivalent) și
agitați în vortex. Centrifugaţi la 1300 g timp de 5 minute.
5. Îndepărtaţi tamponul de spălare din godeurile plăcii prin scuturare uşoară sau cu un aspirator cu vid
(vacuum).
6. Adăugaţi 200 µl tampon de spălare 1X în fiecare godeu al plăcii. Acoperiţi cu un nou sigiliu de placă şi
agitaţi în vortex. Centrifugaţi la 1.300 g timp de 5 minute.
7. Îndepărtaţi supernatantul din godeurile plăcii prin scuturare uşoară sau cu un aspirator cu vid (vacuum).
8. Repetaţi paşii 6 şi 7.
9. Diluaţi 1 µl pentru fiecare test de IgG antiumane conjugate cu PE 1000X (număr de catalog OLI #LS-AB2)
cu 99 µl de tampon de spălare 1X, pentru a obţine o soluţie 1X.

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 4 din 13

One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™
10. Adăugaţi în fiecare godeu, 100 µl de IgG antiumană conjugată cu PE 1X. Acoperiţi cu sigiliu de acoperire
a plăcii şi agitaţi în vortex. Incubaţi timp de 30 minute la întuneric, la 20 - 25°C, scuturând uşor.
11. Centrifugaţi la 1.300 g timp de 5 minute.
12. Îndepărtaţi supernatantul din godeurile plăcii prin scuturare uşoară sau cu un aspirator cu vid (vacuum).
13. Repetaţi paşii 6 şi 7 de două ori.
14. Adăugaţi 80 µl 1X PBS în fiecare godeu. Acoperiţi cu un nou sigiliu de placă şi agitaţi în vortex.
Continuaţi cu achiziţia datelor şi analiza sau păstraţi tăviţa la 2 - 8º C la întuneric, timp de cel mult 24 ore,
înaintea analizei.
III. Pentru a completa un test în placa de filtrare cu 96 godeuri:
1. Amestecaţi bine bilele LABScreen prin agitare uşoară în vortex sau prin pipetare în sus şi în jos de câteva
ori, înaintea utilizării.
2. Diluaţi tampon de spălare 10X (număr de catalog Cat. OLI #LSPWABUF) în apă distilată, pentru a obţine
soluţia de spălare 1X (aproximativ 3,2 ml/tavă/spălare).
3. Acoperiţi oricare dintre godeurile plăcii, care vor rămâne neutilizate în timpul testului, pentru a vă asigura
că aceste godeuri neutilizate vor rămâne uscate. Umectaţi în prealabil placa de filtru, distribuind 300 µl
tampon de spălare numai în acele godeuri care vor fi utilizate pentru testare.
4. Incubaţi placa timp de 10 minute pe un agitator de plăci de viteză redusă.
5. Aspiraţi toate tampoanele de spălare din godeuri, utilizând colectorul de vacuum Millipore. Presiunea de
vid nu trebuie să depăşească 100 mm Hg!
6. Adăugaţi 5 µl de bile LABScreen şi 20 µl de ser de test pentru fiecare godeu de testare.
Notă: În timpul etapelor de distribuţie a bilelor şi probei, apăsaţi uşor vârfurile pipetelor de godeurile plăcii
de filtru, pentru a evita ruperea filtrelor.
7. Incubaţi placa timp de 30 minute la întuneric, la 20 - 25°C, scuturând uşor.
8. Adăugaţi 175 µl tampon de spălare per godeu.
9. Porniţi pompa de vid. Apăsaţi placa cu putere pe colectorul de vacuum. Asiguraţi-vă că lichidul este
drenat lent. Înainte de a continua, asiguraţi-vă că tot lichidul a fost drenat din godeuri.

Precauţie: Presiunea de vid nu trebuie să depăşească 100 mm Hg Un vid rapid poate provoca
pierderea bilelor, datorită încastrării în porii hârtiei de filtru.
10. Repetaţi paşii 8 şi 9 de mai sus, de patru ori.
11. Adăugaţi în fiecare godeu, 100 µl de IgG antiumană conjugată cu PE 1X.
12. Incubaţi timp de 30 minute la întuneric, la 20 - 25°C, scuturând uşor.
13. Repetaţi paşii 8 ş 9 de cinci ori.
14. Adăugaţi 80 µl 1X PBS în fiecare godeu.
15. Citiţi proba la analizorul în flux LABScan™ 100 sau LABScan3D™ , ajustând înălţimea sondei, dacă
este necesar.
Notă: Produsele ExPlex LABScreen Single Antigen HLA de Clasă I și de Clasă II pot fi utilizate numai cu
analizorul în flux LABScan3D.

IV. este combinate

Pentru anumite produse LABScreen, oricare dintre protocoalele de mai sus pot fi utilizate pentru un test
combinat.
2. Pentru combinaţii de lot LS12PRA acceptabile a se vedea www.onelambda.com (Detecţie
anticorpi>LABScreen>LABScreen PRA/ Documentaţie privind produsul: LABScreen Bead Combo –
Multiple IDs DataSheet).
3. A nu se combina seturile LABScreen Single Antigen Clasa I Combi şi Clasa II (ID-urile bilelor s-ar
putea suprapune).
TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 5 din 13
One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™
1. Amestecaţi volume egale de bile. Apoi distribuiţi cantitatea adecvată de agregat (10 sau 15 µl) de
amestec de bile per test.
2. Opţiunile pentru combinaţiile de bile şi cantităţile care trebuie distribuite sunt prezentate în tabelul de
mai jos.
ID Catalog Volumul bilei per Bile de control Ser de testare Instrument
test (NC/PC) per test
LS12PRA (bile CI şi CII) 5 µl + 5 µl Incluse 40 µl LABScan 100 sau
LABScan3D
LS1A04 + LS1AEX01 5 µl + 5 µl Incluse 40 µl LABScan3D
LS2A01 + LS2AEX01 5 µl + 5 µl Incluse 40 µl LABScan3D
LS1A04 5 µl Incluse 20 µl LABScan 100 sau
LABScan3D

REZULTATE
A. Achiziţia datelor
1. Stabiliţi analizorul în flux LABScan™ 100 sau LABScan3D™ pentru achiziţia probei şi calibrare, în
conformitate cu manualul utilizatorului Luminex1.
2. Alegeţi un model (şablon) în confomitate cu ID-ul de catalog al setului produsului şi cu numărul de lot.
a. Modelele de achiziţie sunt disponibile de la OLI pe CD sau se pot descărca de pe site-ul nostru web.
b. Pentru a crea propriul dumneavoastră model (şablon) de achiziţie, urmaţi instrucţiunile din capitolul
Achiziţii al manualului utilizatorului Luminex.
c. Trebuie utilizate versiunile software Luminex - LABScan™ 100 (xPONENT 3.1 sau mai recentă);
LABScan 3D™ (xPONENT 4.2 sau mai recentă).
3. Creaţi un nume de fişier pentru probele care trebuie analizate.
4. Asiguraţi-vă că setările şablonului sunt corecte. Specificaţiile modelului (şablonului) sunt:
a. Configuraţi volumul probei la 50 µl.
b. Configuraţi timpul de expirare (time-out) al probei la 80 secunde.
c. Configuraţi sincronizarea discriminatorului de duplicate (doublet discriminator gate) la 8.000 (limita
inferioară) şi 16.000 (limita superioară).
d. Configuraţi numărul şi ID-urile bilelor selecţionate în funcţie de fişa de lucru specifică produsului,
furnizată împreună cu acesta.
e. Configuraţi numărul minim de evenimente realizate, la 100 pentru fiecare bilă.
5. Introduceţi ID-urile probei (dacă aceeaşi probă este testată de mai multe ori, atribuiţi un ID diferit).
6. Încărcaţi placa pe platforma XY şi umpleţi rezervorul cu lichidul respectiv (sheath fluid).
7. Apăsaţi pe butonul START pentru a iniţia sesiunea. După ce s-a terminat analiza probelor, datele
generate trebuie salvate într-un fişier .csv.
8. La sfârşitul sesiunii, spălaţi aparatul de 2 ori cu lichid de protecţie (sheath fluid).
B. Analiza datelor
1. Reactivitatea probei de testare se calculează din valorile „brute” (neprelucrate) ale fluorescenţei,
înregistrate prin dispozitivul LABScan™ (fişierul .csv) pentru fiecare bilă acoperită HLA.
2. Calculaţi reactivitatea serului anti-HLA pentru a corecta legarea nespecifică la bila de control negativ şi
valorile de fond (obţinute prin testare cu ser de control negativ (OLI Cat. # LS-NC) pentru a determina
raportul de fond normalizat (raportul NBG). A se vedea calculele de mai jos.
3. Pentru LABScreen PRA sau LABScreen antigen unic, valoarea fluorescentă normalizată pentru fiecare
bilă acoperită cu HLA este egală cu valoarea bilei respective, divizată la valoarea bilei NC. (Pentru
LABScreen Mixed, semnalul fluorescenţei normalizae este gal cu valoarea bilelor acoperite de clasă I sau
de clasă II minus valoarea bilei NC.)
TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 6 din 13
One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™
Notă: Semnalul fluorescent (valoarea) poate fi media compensată sau valoarea mediană.
C. Calcule
1. Abrevierile utilizate în această secţiune sunt definite mai jos:
Raportul Raportul de fond normalizat utilizat pentru a atribui intensitatea fiecărei reacţii anti-HLA
NBG
S#N Valoarea fluorescentă specifică probei pentru bila #N
Bila SNC Valoarea fluorescentă specifică probei pentru bila de control negativ
BG#N Valoarea fluorescenţei de fond a serului NC pentru bila #N
Bila BGNC Valoarea fluorescenţei de fond a serului NC pentru bila de control negativ
Serul NC Serul de control negativ (număr de catalog OLI # LS-NC) validat pentru un anumit lot
bilele LABScreen

2. Pentru LABScreen® PRA sau LABScreen® antigen unic:

Bila S#N / SNC
Raportul NBG =
Bila BG#N / BGN

Pentru LABScreen® Mixed:

S#N – Bila SNC
Raportul NBG =
BG#N – Bila BGNC

Notă: Dacă (BG#N-bila BGNC) <50, atunci utilizaţi 50 ca valoare prag predefinită.

D. Determinarea valorilor de referinţă (cut-off) pozitive-negative

1. Pentru LABScreen PRA şi LABScreen Mixed:
a. Selectaţi raportul NBG care determină o deplasare semnificativă faţă de valoarea fluorescenţei de
fond, când valoarea de fond este obţinută prin utilizarea serului de control negativ în 3-5 teste
duplicate. Dacă preferaţi, testaţi 5-10 probe de ser de la donatori bărbaţi care nu au fost supuşi unor
transfuzii sau transplanturi, pentru a obţine o valoare medie de fond.
b. Validaţi valoarea de referinţă (cut-off) utilizând 5-10 probe de aloseruri cu specificitate definită a
anticorpilor anti-HLA. Valorile raportului NBG pentru reacţiile antigenice pozitive anticipate trebuie să
fie mai mari decât valoarea de referinţă.
c. Se pot observa reacţii suplimentare pozitive/negative. Dacă este necesar, ajustaţi valoarea de
referinţă (cut-off) LABScreen pentru a corespunde cu sensibilitatea testului de detectare a anticorpilor
acceptat anterior.
d. Pentru seruri cu valori PRA înalte, antigenul(ele) propriu(ii) pacientului poate(pot) prezenta reacţii
slab pozitive. Pentru asemenea cazuri, valoarea fluorescenţei pentru antigenul propriu pacientului
poate fi utilizată ca punct de referinţă (cut-off).
2. Pentru LABScreen SingleAntigen:
a. Testaţi serul de control negativ sau mai multe probe de ser negativ (vezi 1a de mai sus).
b. Definiţi intervalul de lucru:
Interval de lucru = Raportul NBG maxim – raportul NBG minim
c. Definiţi valoarea de referinţă (cut-off) în cadrul intervalului de lucru:
Valoarea de referinţă a raportului relativ NBG = X% (interval de lucru) + raport minim NBG, unde X%
= punct de referinţă procentual definit de utilizator în cadrul intervalului de lucru pentru negativ (1),
zonă gri (2), slab pozitiv (4) şi intens pozitiv (8).
d. Configuraţi criteriile de reacţii pozitive şi negative, de exemplu:
(1) Dacă [raportul NBG max/raportul NBG min] >8, aplicaţi calculul în 2c.
(2) Dacă [raportul NBG max/raportul NBG min] <8 ŞI

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 7 din 13

One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™
(a) Raportul NBG max >5, atunci raportul NBG min trebuie ajustat la jumătate din raportul NBG
max iar valoarea de referinţă a raportului NBG relativ trebuie recalculată (ca la 2c) pe baza
raportului NBG min ajustat. Reacţia este apoi calculată ca mai sus.
(b) Raportul NBG max <5, atunci reacţia serului de testare cu bila respectivă este negativă.
Atribuiţi scorul “1".
e. Testaţi mai multe aloseruri de referinţă ca la punctul 1b de mai sus, utilizând raportul NBG relativ
pentru a valida valoarea de referinţă (cut-off).
(1) Stabiliţi o valoare de referinţă pentru reactivitatea intensă şi slabă pe baza performanţelor
aloserurilor de referinţă, legate de analiza stabilită.
(2) Poate fi utilă reprezentarea valorilor raportului NBG într-o histogramă pentru vizualizarea
modelului de reactivitate HLA al fiecărui ser.
3. Prin ajustarea valorii de referinţă se pot obţine valori mai mari sau mai joase ale sensibilităţii testului.
4. Analiză opţională – Software-ul HLA Fusion™.

LIMITĂRILE PROCEDURII
 Probele de ser sau de plasmă care conţin contaminanţi sau agregate pot bloca analizorul în flux LABScan™
şi pot genera date inexacte. Agregatele din mostra testată trebuie îndepărtate prin centrifugarea sau filtrarea
serului, înaintea testării.
 Prezenţa unui complex imun IgG-IgM poate provoca inhibiţia unor probe ale pacienţilor. Probele trebuie
tratate pentru a reduce această prezenţă, în conformitate cu protocoalele determinate de către laborator; cu
toate acestea, probele nu trebuie tratate prin căldură deoarece pot determina un fond nespecific– pentru mai
multe informaţii consultaţi secţiunea privind bibliografia.7,8,9,10,11.
 Temperatura ambiantă poate afecta performanţa LABScan™ 100 şi LABScan3D™. Dacă temperatura
ambiantă se schimbă, aparatul poate necesita recalibrare. Pentru mai multe informaţii, consultaţi manualul
fabricantului.
 Analizoarele în flux LABScan™ 100 şi LABScan3D™ trebuie calibrate şi menţinute corespunzător. Dacă sunt
spălate insuficient, agregatele probei pot provoca blocarea aparatului şi genera date incorecte.
 Alocarea specificităţii anticorpice este limitată la antigenele HLA prezente în fiecare panel de bile (vezi foaia
de lucru specifică lotului).
 Regiunea cu bile utilizată pentru fiecare antigen şi compoziţia antigenică a panoului se pot modifica de la un
lot de produse la altul (vezi foaia de lucru specifică lotului).
 Datorită complexităţii definiţiilor alelelor HLA, un specialist sau un tehnician certificat HLA trebuie să verifice şi
să interpreteze datele şi să atribuie tipizarea HLA.
 Acest test nu trebuie utilizat ca bază unică pentru efectuarea unei decizii clinice.

VALORILE PREVĂZUTE
A. LABSCREEN PRA CLASA I SAU CLASA II
 Intensitatea reactivităţii unui ser de testare pentru fiecare bilă poate fi comparat pentru diferenţierea
reacţiilor intens pozitive, slab pozitive şi negative. Raporturile de reactivitate pot fi clasificate după criterii
diferite, dacă se doreşte un sistem de punctaj.
 Datele noastre demonstrează că raporturile NBGs > 1,5 în testul LABScreen PRA (utilizând LABScan™
100) sunt bine corelate cu reacţiile pozitive în testul FlowPRA
 Pentru calculul procentului PRA (Anticorpi reactivi la panel), împărţiţi numărul reacţiilor pozitive la numărul
reacţiilor valide pentru acest ser de testare.
 Pentru a determina specificitatea anticorpului HLA, introduceţi punctajul de reacţie în fişa de lucru
specifică lotului şi analizaţi modelul reacţiei.
B. LABScreen Mixed
TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 8 din 13
One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™

 Calculaţi separat scorul reacţiilor HLA de clasă I şi II, în fncţie de intensitatea reactivităţii serului pentru
fiecare set de bile.
 Dacă fiecare bilă în textul mixt este pozitivă, rezultatul trebuie considerat pozitiv.
 Datele noastre demonstrează că raporturile NBGs > 2,2 în testul LABScreen Mixed (utilizând LABScan™
100) sunt bine corelate cu reacţiile pozitive în testul LAT™ Mixed.
C. LABScreen antigen unic
 Aloserurile pot produce raporturi semnal/de fond mult mai mari decât cele obţinute în analiza PRA.
Stabilirea valorii(valorilor) de referinţă (cut-off) ale testului utilizând raportul relativ NBG este o metodă de
normalizare a datelor (a se vedea Rezultate, Secţiunea D-2c).
 Datele noastre demonstrează că o valoare de referinţă (cut-off) pozitivă/negativă sau un raport relativ
NBG >15% din raportul NBG al intervalului de lucru calculat pentru fiecare ser de testare (utilizând
LABScan™ 100) va determina rezultate comparabile cu testul LABScreen PRA.
D. Îndrumări generale
 Fiecare număr de bile trebuie să depăşească 50. Un număr mai mic de bile se poate datora pierderilor de
probă în timpul fazelor de spălare. Acest lucru se poate datora de asemenea calibării inadecvate sau
colmatării analizoarelor în flux LABScan™ 100 sau LABScan3D™ sau bilelor decolorate de lumină,
căzute din regiunea cartografiată.
 Valorile semnal sunt reprezentate de intensitatea fluorescenţei în fiecare set de bile comparativ cu serul
testat. Un ser de control negativ trebuie testat cu acelaşi lot de probe pentru a stabili valoarea (valorile)
de fond pentru testul respectiv.
 Serul de control negativ (număr de catalog OLI #LS-NC sau equivalent) este recomandat. Utilizarea
oricărui alt ser de control negativ poate necesita ajustarea valorilor de referinţă (cut-off).
 Bilele de control negativ (Ag ID = NC) nu sunt acoperite cu antigen HLA. Valoarea fluorescenţei poate
varia între diferitele seruri datorită legării nespecifice a serurilor sau spălării insuficiente. Valoarea NC
este de obicei inferioară, cu excepţia probelor de ser cu fond înalt. Acesta trebuie să fie întotdeauna sub
1500 şi mai mic decât sau egal cu jumătate din valoarea PC.
 Bilele de control pozitiv sunt acoperite cu IgG umană purificată, care trebuie să se lege de anticorpii
secundari pentru a produce un semnal pozitiv. Valorile PC trebuie să fie de peste 500 şi cel puţin duble
faţă de valoarea NC.
E. Validarea testului
 Valoarea de referinţă (cut-off) a semnalului de fond trebuie validată dacă se utilizează un nou ser de
control negativ.
 Pentru un ser dat, valoarea PC/NC trebuie să fie mai mare de 2. O valoarea mai mică se poate datora
unei valori de fond extrem de înalte a bilei NC pentru serul testat, unui semnal înalt al bilei HLA pentru
controlul NS, sau unui semna scăzut din partea anticorpului secundar sau instrumentului analizoarelor în
flux LABScan™ 100 100 şi LABScan3D™. În acest caz, este posibil ca datele să trebuiască să fie
confirmate.
 Fiecare utilizator trebuie să evalueze performanţa testului în propriul laborator pentru a valida
valoarea(valorile) de referinţă (cut-off) selectate.
 Probele de plasmă pot determina valori FI mai mici sau valori de fond mai mari decât serul. Este posibil
ca utilizatorul să dorească să normalizeze datele când se compară rezultatele între probele de ser şi cele
de plasmă (a se vedea referinţa 5) pentru subiecţi cu teste identice sau similare.

CARACTERISTICI SPECIFICE DE PERFORMANŢĂ

A. Utilizând valorile de referinţă (cut-off) ale testului, prezentate la Valori prevăzute, deasupra, testele
LABScreen au determinat rezultate comparabile cu cele din testele One Lambda FlowPRA® şi LAT™. Cu
toate acestea, modelele de anticorpi HLA pot fi destul de complexe. Un anumit test poate conţine mai multe
specificităţi ale anticorpilor HLA de clasa I şi de clasa II, fiecare cu o aviditate diferită; cu toate acestea, nu
toate specificităţile vor fi recunoscute în teste cu sensibilitate mai mică. Prin urmare, fiecare laborator trebuie
să stabilească şi să valideze valorile de referinţă (cut-off) pentru propria utilizare, pe baza experienţei lor în

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 9 din 13

One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™
recunoaşterea anticorpilor HLA CREH şi o evaluare a performanţei testului, utilizând aloseruri HLA cu
specificităţi sau titruri definite.
B. Comparaţiile între ser şi plasmă pentru 1000 donatori de sânge în studiul NIHLBI REDS-II (5) au arătat o
corelaţie bună în intervalul de lucru al testului. Pentru anticorpii anti-HLA CI şi CII, valorile R2 au fost 0,88 şi
respectiv 0,91. Cu toate acestea, raportul NBG a fost în general de 1,3 ori mai mare pentru probele de ser.
C. Dacă se observă un fond înalt, acesta poate indica o spălare inadecvată în timpul protocolului de testare. Un
fond înalt de control negativ poate determina valori MFI normalizate inadecvat.
D. Testarea performanţei clinice a fost efectuată pentru produse LABScreen la trei centre clinice diferite,
utilizând 240 probe aleatorii – Vezi Tabelul A. Performanţa clinică.
E. Testarea reproductibilităţii clinice a fost efectuată pentru produsele LABScreen la trei centre clinice diferite
utilizând 16 (LS1PRA, LS2PRA, LS1A04) şi 32 (LSM12) probe, fiecare constând din 10 cicluri, în triplicat –
vezi Tabelul B. Reproductibilitate clinică.
F. Testarea clinică utilizând o valoare de referinţă (cut-off) prestabilită, cu punctaj >4 a fost considerată pozitivă.

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 10 din 13

One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™

Tabelul A – Performanţa clinică

LSM12 LABScan 3D™ LS2PRA LABScan 3D™

+ - + -

+ 573 11 + 939 57
LABScan™ 100 LABScan™ 100
- 4 119 - 187 7781

Nedefinit 40 Total 8964

Definit total 707

Concordanţă Concordanţă
globală globală
Concordanţă Concordanţă Concordanţă Concordanţă Concordanţă
(cu excepţia (incluzând
pozitivă negativă pozitivă negativă globală
cazurilor cazurile
nedefinite) nedefinite)
Estimare Estimare
98% 97% 98% 93% 94% 98% 97%
punctuală punctuală
Limita
Limita
inferioară
inferioară
unilaterală de 97% 93% 97% 91% 93% 97% 97%
unilaterală de
încredere
încredere 95%
95%

LS1PRA LABScan 3D™ LS1A04 LABScan 3D™

+ - + -

+ 2060 260 + 3245 214

- 446 16905 - 682 12062

Total 19671 Total 16203

Concordanţă Concordanţă Concordanţă Concordanţă Concordanţă Concordanţă

pozitivă negativă globală pozitivă pozitivă globală
Estimare Estimare
89% 97% 96% 94% 95% 94%
punctuală punctuală
Limita Limita
inferioară inferioară
unilaterală de 88% 96% 96% unilaterală de 93% 94% 94%
încredere încredere 95%
95%

Tabelul B – Reproductibilitatea clinică

Concordanţă Concordanţă
globală globală
Concordanţă Concordanţă Concordanţă
LSM12 (cu excepţia (incluzând LS1PRA LS2PRA LS1A04
globală globală globală
cazurilor cazurile
nedefinite) nedefinite)
Estimare Estimare Estimare Estimare
98% 93% 99% 99% 98%
punctuală punctuală punctuală punctuală
Limita Limita inferioară Limita Limita
inferioară unilaterală de inferioară inferioară
97% 93% 99% 99% 98%
unilaterală de încredere 95% unilaterală de unilaterală de
încredere 95% încredere 95% încredere 95%

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 11 din 13

One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™

BIBLIOGRAFIE
1. Luminex 100 or 200 User’s Manual, Luminex Corporation, PN 89-00002-00-005 or PN 89-00002-00-109
2. Luminex® FLEXMAP 3D® Hardware User Manual, Luminex Corporation PN 89-00002-00-187 Rev. B
3. R Pei, J-H Lee, T Chen, S Rojo, and PI Terasaki. Flow cytometric detection of HLA antibodies using a
spectrum of microbeads. Human Immunology 60, 1293-1302 (1999)
4. R Pei, G Wang, C Tarsitani, S Rojo, T Chen, S Takemura, A Liu, and J-H Lee. Simultaneous HLA Class I and
Class II antibodies screening with flow cytometry. Human Immunology 59, 313-322 (1998)
5. RA Bray, DA Sinclair, L Wimoth-Hosey, C Lyons, P Chapman and J Holcomb. Significance of the flow
cytometric PRA in the evaluation of patients awaiting renal transplantation. Department of Pathology, Emory
University, Atlanta, GA. ASHI abstract (1998)
6. PJ Norris, J-H Lee, DM Carrick, JL Gottschall, M Lebedeva, BR De Castro, SH Kleinman, and MP Busch.
Long-term in vitro reactivity for HLA antibodies and comparison of detection using serum vs. plasma.
Transfusion 49(2), 243-251 (2008)
7. Tambur et al., Assessing Antibody Strength: Comparison of MFI, C1q, and Titer Information, Am J Transplant.
2015; 15: 2421-30
8. J. Visentin et al., Deciphering Complement Interference in Anti-Human Leukocyte Antigen Antibody Detection
With Flow Beads Assays, Transplantation 2014;98: 625-631
9. G. Guidicelli et al., The complement interference phenomenon as a cause for sharp fluctuations of serum anti-
HLA antibody strength in kidney transplant patients, Transplant Immunology 2013; 29: 17–21
10. J. Visentin et al., Deciphering IgM interference in IgG anti-HLA antibody detection with flow beads assays,
Hum. Immunol. 2016, http://dx.doi.org/10.1016/j.humimm.2016.02.008
11. C. Breitenbach et al., Pretreatment of patient serum with fetal bovine serum (FBS) reduces non-specific
background and enhances HLA antibody detection in bead and cell based assays. Human Immunology.
2013; 74: 57

MĂRCI ÎNREGISTRATE ŞI PRECIZĂRI LEGALE

LABScan™, LABScan3D™, HLA Fusion, Lambda Antigen Tray şi LAT sunt mărci înregistrate ale One Lambda,
Inc.
™
FlowPRA şi LABScreen sunt mărci comerciale înregistrate ale One Lambda, Inc.
®
Luminex şi FLEXMAP 3D sunt mărci comerciale înregistrate ale Luminex Corporation.
Toate produsele One Lambda sunt concepute pentru a asista personalul de laborator cu experienţă în analiza
HLA, prin sugerarea rezultatelor tipizării sau alocării anticorpilor. Toate rezultatele testelor trebuie verificare cu
atenţie de către personalul de laborator pentru a asigura exactitatea.

REPREZENTANT EUROPEAN AUTORIZAT

MDSS GmbH, Schiffgraben 41, D-30175, Hannover, Germania

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 12 din 13

One Lambda, Inc. | Prospectul produsului: LABScreen ™
EXPLICAȚII ȘI SIMBOLURI
Symbol Descriere

Număr de catalog
Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro

Consultați instrucțiunile de utilizare

Atenție, consultați documentele însoțitoare

Riscuri biologice

Limită de temperatură

Producător

Reprezentant autorizat în Comunitatea Europeană

ISTORICUL REVIZIEI
Revizie Data Descrierea reviziei
01 04/08/2019 S-a actualizat sistemul de control intern al documentului. Nu s-au efectuat
modificări privind conținutul documentului.
Modificați desemnarea software-ului xPONENT pentru a cuprinde versiunea
actuală și viitoare a software-ului
02 09/20/2019
S-au actualizat informațiile de contact și adresa pentru a reflecta schimbarea
locului de fabricație legal.
S-au actualizat Informațiile privind produsul LABScreen pentru a include informații
privind Antigen unic ExPlex de Clasă I și de Clasă II LABScreen (LS1AEX01 and
LS2AEX01).
03 Actual
S-a clarificat pasul privind sigilarea în Secțiunea II, Pasul 2.
S-a actualizat tabelul din Secțiunea IV pentru a include specificațiile dispozitivului.

*
*0197 este valabil numai pentru produsele din Lista B Anexa II

TDX-OLI-DMR-PS-3040, Rev. 03 Pagina 13 din 13