CE-IMMUNDIAGNOSTIKA GmbH

Am Seerain 13
Germany, 74927 Eschelbronn
Tel: 06226-42100 / Fax: 06226-42012
www.ce-immundiagnostika.com
Instructiuni de utilizare
Doar pentru uz profesional 0535
Teste per ml: max. 20
Revizie: 01/02-2012
Nume produs: Cod produs:
D-mono-blend-TH
Anti-D blend
TH-28/MS-26
monoclonal (IgM/IgG uman)
Reactiv pentru detectia specifica a antigenului D. Reactiv pentru testarea grupelor de teste pentru slide/placa, tuburi, microplaca si tehnici
indirecte cu antiglobuline. Doar pentru diagnostic in laborator in-vitro. Pastrati la + 2 – 8 °C cand nu utilizati.

Scopul utilizarii: Anti-D este un reactiv monoclonal uman IgM/IgG pentru grupele de sange (liniile celulare TH-28/MS-26) care
detecteaza antigenii cand se testeaza pe slide, tuburi, microplaca si tehnici indirecte cu antiglobuline.
Introducere: Sistemul Rh al grupelor de sange: Observatiile lui Levine si Statson in 1939 si ale lui Landsteiner si Weiner in
1940 au asigurat baza pentru intelegerea actuala a semnficatiilor clinice si de laborator pentru detectia Anti-
D.Aproximativ 15% dintre Caucazieni nu au antigenul RhD si sunt usor stimulati sa produca Anti-D de o sarcina
RhD pozitiva sau o transfuzie sanguina. Aceasta poate cauza boala hemolitica a nou-nascutului sau reactie
hemolitica transfuzionala severa.
Expresia slaba a Termenul colectiv Du este larg folosit pentru a descrie eritrocitele care au o expresie mai slaba a antigenului D
antigenului RhD: decat normalul. Termenul D slab denota indivizii cu un numar redus de situri antigen D per eritrocit. Termenul D
partial denota indivizii cu epitopi D lipsa. D categoria VI este categoria partiala D careia ii lipsesc majoritatea
epitopilor D. Acest reactiv va detecta antigenul D partial, incluzand categoria de celule D VI (cum este cerut de
catre UKBTS si BCSH Guidelines). Reactivul este ideal pentru testarea pacientilor si donatorilor.
Principiul reactivului: Reactivul pentru grupele sangvine Anti-D monoclonal uman IgM/IgG contine anticorpi din liniile celulare TH-
28/MS-26. Utilizat conform tehnicilor de testare recomandate, acest reactiv va cauza aglutinarea eritrocitelor care
prezinta antigenul specific (test pozitiv). Lipsa aglutinarii eritrocitelor demonstreaza absenta antigenului specific
(test negativ).
Acesti reactivi au fost optimizati pentru utilizarea cu tehnicile recomandate fara dilutie suplimentara sau aditii.
Produsul este livrat filtrat steril la 0,22 um.
Materiale: Reactivul pentru grupele sangvine Anti-D (liniile celulare TH-28/MS-26) este compus din anticorpi monoclonali
IgM/IgG intr-o solutie tampon care contine potentiatori macromoleculari chimici. Acesti reactivi contin impreuna
< 0,1% (w/v) azida de sodiu si material bovin. Fiecare flacon (10ml) contine suficient material pentru
aproximativ 250 de teste.
Precautii: 1. Toate produsele sangvine trebuie tratate ca fiind posibil infectioase. Donatorul uman al liniei
celulare folosite la producrea reactivilor a fost testat si gasit negativ pentru Anti-HIV , Anti-HCV,
Anti-HbsAg, EBV si virusi Mouse Antibody Production (MAP). Nu este cunoscuta o metoda care sa
poata garanta in totalitate ca un produs derivat din sangele uman este incapabil de transmiterea
unor agenti infectiosi. Lucrati cu atentie in folosirea si manipularea containerului de deseuri si a
continutului acestuia
2. Reactivul contine 0.1% (w/v) azida de sodiu. Azida de sodiu poate conduce la formarea de
compusi explozivi, la contactul cu plumbul sau cuprul. Cand aruncati lasati sa curga multa apa.
3. Acest produs ar trebui sa fie clar. Tulburarea poate indica o contaminare bacteriana. Nu trebuie
folosit daca sunt prezente precipitat, gel de fibrina sau particule.
4. Acest reactiv este doar pentru diagnostic in vitro.
5. Acest reactiv contine material bovin obtinut din sursa aprobata de USDA libera de Encefalopatii
Spongiforme Transmisibile (EST).
6. Acest produs trebuie aruncat ori prin imersare o noapte in dezinfectanti la concentratii potrivite ori
prin autoclavare.
Sfaturi pentru Este recomandat sa se efectueze un control pozitiv si unul negativ in paralel cu fiecare lot de teste. Testele
utilizatori: trebuie considerate invalide daca controalele nu arata reactiile asteptate. Nu este necesar sa se foloseasca un
reactiv de control in paralel cu toate testele care folosesc acest reactiv. Este recomandata utilizarea unui reactiv
de control doar la scrierea eritrocitelor pacientilor cunoscuti sa aiba auto anticorpi sau anormalitati proteice.
Acestia trebuie testati in paralel cu reactivul.
Reactivul a fost caracterizat de procedura recomandata in acest prospect, potrivirea acesteia sau utilizarea in alte
tehnici trebuie determinata de utilizator. In cazul in care apar schimbari in performanta analitica a dispozitivului
sau degradari ale ambalajului, va rugam contactati Departamentul de Asigurare a Calitatii producatorului la CE-
IMMUNDIAGNOSTIKA GmbH.
Depozitati produsul deschis/inchis la 2-8 °C pana la data de expirare inscrisa pe eticheta produsului. Erorile la
Depozitare: depozitarea produsului la temperatura corecta, de exemplu, depozitarea la temperaturi mai inalte sau congelari
repetate si decongelari pot rezulta in pierderea accelerata a activitatii reactivului.

Colectarea Nu este necesara nicio pregatire speciala a pacientului inainte de colectare. Sangele trebuie colectat printr-o
specimenelor: tehnica de flebotomie aprobata. Specimenul trebuie testat cat mai curand posibil dupa colectare. Daca apare o
intarziere in testare, pastrati proba la 2-8 °C. Specimenele care prezinta hemoliza abundenta sau contaminare
microbiala nu trebie testate cu acest reactiv. Incapacitatea de a stoca specimenul la temperatura optima, de
exemplu, depozitare la temperaturi mai mari sau congelari repetate si decongelari pot rezulta in rezultate fals
pozitive sau fals negative.
Materiale necesare, dar Tehnica pe slide: Slide-uri de microscop, timer, solutie salina izotonica, plasma/ser compatibil
nelivrate: Tehnica tuburi: Test tube, centrifuga (1000 crf), solutie salina izotonica, timer, incubator la 37°C
Tehnica indirecta cu antiglobuline pentru expresia slaba a antigenului D: Test tube, incubator la 37°C,
reactiv Anti-Human-Globulin, centrifuga (1000 crf), eritrocite sensibilizate IgG (celule de control Coombs), solutie
salina izotonica, timer
Tehnica cu microplaca: Microplplaci, Shaker pentru microplaci, Centrifuga, Solutie salina izotonica, Timer

Rev. 01/2010 page 1 of 2

 CE-IMMUNDIAGNOSTIKA GmbH
Am Seerain 13
74927 Eschelbronn, Germany
Tel: 06226-42100 / Fax: 06226-42012
www.ce-immundiagnostika.com
Instructiuni de utilizare
Doar pentru uz profesional 0535
Teste per ml: max. 20
Revizie: 01/02-2012
Nume produs: Cod produs:
D-mono-blend-TH
Anti-D blend
TH-28/MS-26
monoclonal (IgM/IgG uman)
Reactiv pentru detectia specifica a antigenului D. Reactiv pentru testarea grupelor de teste pentru slide/placa, tuburi, microplaca si tehnici
indirecte cu antiglobuline. Doar pentru diagnostic in laborator in-vitro. Pastrati la + 2 – 8 °C cand nu utilizati.

Tehnici Recomandate:
Slide-test / test pe
placa:
1. Este recomandat sa spalati celulele de la pacient sau donator.
2. Adaugati o picatura de reactiv (aprox. 50 µl) pe un slide de sticla sau plastic curat sau pe o placa.
3. Adaugati o picatura de sange integral (resp. 35-45% suspensie de eritrocite) pe slide-uri sau 10%
suspensie de eitrocite in solutie salina izotonica 0.9% respectiv sange integral pe placi utilizand o
pipeta de transfer sau un stick aplicator.
4. Nu plasati slide-urile sau placile pe suprafete iluminate incalzite.
5. Amestecati sangele cu reactivul. Pe slide-urile de sticla, utilizati un aplicator curat pentru a amesteca
fiecare amestec de reactiv/celule pe o arie cu diametru de aprox. 20 mm. Pe slide-urile din plastic,
urmati instructiunile producatorului.
6. Observati aglutinarea macroscopica si inregistrati rezultatele. Trebuie acordata o atentie sporita pentru
a nu confunda uscarea periferica sau fibrele de fibrina cu aglutinare.

Tube test: 1. Preparati o suspensie de celule rosii 2-3% in solutie salina izotonica.
2. Adaugati o picatura de reactiv anti-D intr-un tub etichetat corespunzator.
3. Adaugati o picatura din suspensia de eritrocite.
4. Amestecati si centrifugati pentru 1 minut la 400 rcf. (aproape 1500 UpM) sau timp de 20 de secunde
la 1.000 rcf (aproape 2.400 UpM) respectiv pentru un timp corespunzator care sa produca reactiile
cele mai puternice.
5. Amestecati usor fiecare tub pentru resuspendarea eritrocitelor si examinati pentru aglutinare.
6. Incubati toate testele negative sau slab pozitive la 37 °C pentru 5 minute si repetati pasul 4 si 5.
Acest mod poate spori taria reactiei in scrierea eritrocitelor din fenotipuri rare.

Tehnica indirecta cu 1. Preparati o suspensie de eritrocite 2-3% in solutie salina izotonica (eritrocitele trebuie spalate inainte
antiglobuline pentru cel putin o data).
expresia slaba a 2. Adaugati o picatura de reactiv anti-D in tuburi de test corect etichetate.
antigenului D: 3. Adaugati o picatura de suspensie eritrocitara.
4. Amestecati si incubati la 37°C timp de 15 minute.
5. Spalati celulele o data cu solutie salina izotonica, decantand bine solutia salina.
6. Adaugati 2 picaturi de reactiv Anti-Human-Globulin, amestecati si centrifugati testele la 1000 rcf timp
de 20 de secunde.
7. Agitati bland tuburile pentru a resuspenda eritrocitele. Examinati macroscopic pentru aglutinare.
8. Pentru a confirma ca un test negativ este valid, adaugati eritrocite sensibilizate cu IgG (celule de
control Coombs), repetati centrifugarea si examinati aglutinarea. Daca nicio aglutinare nu se observa,
testul este invalid si trebuie repetat.
Tehnica pe microplaci: 1. Preparati o suspensie de eritrocite de testat 2-3% in solutie salina izotonica. (Recomandare 2%)
2. Adaugati o picatura de reactiv anti-D (30-50μl) intr-un godeu corespunzator de pe microplaca.
3. Adaugati un volum egal din suspensia de celule pentru testat in godeurile corespunzatoare.
4. Amestecati continutul fiecarui godeu prin tehnici manuale sau folosind un shaker. (30 sec.)
5. Nu este necesar timp de incubare decat in cazul titrarilor sau intaririi fenotipurilor slabe.
6. Centrifugati microplaca la 1.500 UpM pentru 60 de secunde sau la un alt timp si UpM
corespunzator.
7. Resuspendati eritrocitele utilizand shakerul pentru microplaci.
8. Cititi testele macroscopic sau cu un cititor automat. Utilizarea unui cititor de placa automat trebuie
validata de client. Folosirea remediilor vizuale aditionale precum oglinda sau lupa pot usura citirea.
Limitari: Eritrocitele care au testul antiglobulina direct (TAD) pozitiv pot produce rezultate pozitive false. Este recomandata
utilizarea unui Reactiv de Control monoclonal CE-IMMUNODIAGNOSTIKA pentru detectia acestor rezultate
pozitive false. Microplacile ridice din polistiren sunt de preferat in schimbul celor fabricate din PVC. Fiecare lor de
microplaci trebuie evaluat in sistemul utilizatorului inainte de acordul ca sunt corespunzatoare pentru folosirea de
rutina. Rezultate fals pozitive sau fals negative pot proveni din cauza contaminarii materialelor de testat sau din
cauza oricarei deviatii de la tehnica recomandata.
Caracteristici Reactivii pentru grupele sangvine Anti-D (linii celulare TH-28/MS-26) monoclonal uman au fost testati prin
performanta: tehnicile recomandate cu specimen de la donator, specimen clinic si specimen neonatal. Aceste specimene au fost
colectate pe EDTA sau ACD. Populatia de probe reprezinta toate fenotipurile majore RhD.

Referinte: 1. Widmann F.K. ed Technical Manual 10th Ed Washington DC, American Association of blood Banks 1990, Chapter 11.
2. Race R.R. and Sanger R. Blood Groups in Man, 6th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers 1975:178
3. Issit P.D. and Anstee, D.J. Applied Blood Group Serology 4 th Edition, Montgomery Scientific Publications, Miami, Florida,
USA, 1998, Chapter 12. Giudelines for the blood Transfusion services in the UK 5 th Edition 2001. The Stationary Box.

Rev. 01/2010 page 2 of 2