CEPA

Disciplina: Imunologie i Enzimologie

Lp.3
REACTIA SE SEROAGLUTINARE
RAPIDA PE LAMA
 Antigenul se numeste anglutinogen

Anticorpii care determina aglutinarea se numesc

anticorpi aglutinanti sau aglutinine

Aglutininele apar n serul omului sau al

animalelor n cursul unei boli infecioase
sau n urma vaccinrii.

Dac antigenele sunt reprezentate de particule mari, CORPUSCULARE ( celule

bacteriene, celule sangvine) prin contactul cu anticorpii corespunztori apare
o aglomerare vizibil de celule numita AGLUTINARE

Din latin agglutinatio - ncleiere

 Aglutinarea - este posibil numai dac
anticorpii sunt cel puin bivaleni (adic au cel
puin dou situsuri de legare a antigenului)
 Ex- Dac antigenul este o particul mare
(bacterie), atunci aceasta posed mai muli
determinani antigenici i va fi capabil s lege
mai muli anticorpi diferii.

Ex. Dac anticorpul de tip IgG posed dou locuri de legare a antigenului,
antigenul poate lega mai multe molecule de anticorpi: astfel se vor forma
complexe antigen-anticop i apar retele.

Se pot observa macroscopic!

REACTIA DE SEROAGLUTINARE RAPID PE LAM

Principiu punerea n contact a serului sangvin cu un antigen

Aplicare- n laboratoarele de microbiologie alimentar se folosete pentru

tipizarea tulpinilor de Escherichia coli i Salmonella,
!! caz n care se pun n contact serurile cunoscute cu germenii necunoscui.

Materiale necesare:

-Lame de sticle curate, degresate

-Anse metalice calibrate, cu diametrul buceli de 3 mm
-Flacara pentru flambarea anselor
-Pipete Pasteur sau seringi de 1 ml pentru repartizarea antigenului pe lam
-Ap distilat sau ser fiziologic
-Antigenul ( suspensie de germeni bacterieni conservat corespunztor) sau
serul cu anticorpi specifici ( suspensie infiolat i conservat corespunztor)
Tehnica de lucru:
- se prepar extempore, n momentul executrii reaciei, dintr-o
cultur pe agar suspendat ntr-o pictur de soluie fiziologic
depus n prealabil pe lam
-Suspensia de germeni
- Suspensia trebuie s fie dens i omogen
Rezultatul reaciei:

- Reacia este pozitiv atunci cnd n serul de examinat se gsesc anticorpi

specifici care aglutineaz antigenul, fenomen ce se vizualizeaz prin apariia
unor particule mici, albicioase (aglutinarea de tip granular) sau a unor
particule mai mari albicioase (aglutinarea de tip floconos)

- Reacia este negativ atunci cnd serul de examinat nu se gsesc

anticorpi specifici i suspensia rmne omogen, la fel ca n pictura
de ser fiziologic.

Cnd aglutinarea este foarte discret se folosete un aprat

destinat acestui scop, cu un dispozitiv special , numit
aglutinoscop.
 L.P. 4
REACTIA DE SEROAGLUTINARE LENT
N TUBURI
R.S.A.L.
Principiul reactiei punerea n contact a suspensiei de antigen cu
diluii variabile de ser suspect i urmrirea rezultatului dup incubarea
la termostat timp de 24 ore, la 37C

Avantaj!
Permite stabilirea titrului de anticorpi
din serul de examinat

TITRUL AGLUTINANT DE ANTICORPI reprezint concentraia minim de

anticorpi ( exprimat prin diluia maxim) i este modul concret de apreciere
cantitativ a aglutininelor.
 Se aplic n- diagnosticul bolilor infecioase cum ar fi:
salmoneloza, bruceloza, morva, colibaciloza, etc

Modul de pregtire a antigenului i de executare a

!
diluiilor, difer n funcie de boal, conform protocolului de lucru.

Se folosesc metode omologate de ctre Institutul de

Diagnostic i Sntate Animal prin Comitetul Tehnic
pentru Omologarea Metodelor i Metodologiilor de
Diagnostic Medical veterinar, aprobate de ctre
Ministerul Agriculturii, prin ord. Nr. 120807-1997,
nr.154769-2002 ( Manual of Diagnostic Tests and
Vaccines for terrestrial Animals OIE-2008)
 REACTIA DE SEROAGLUTINARE LENT N TUBURI PENTRU
DIAGNOSTICUL SALMONELOZEI LA PASRI

-Antigen Salmoral P utilizat pentru detecia de anticorpi anti Salmonella

gallinarum-pullorum din ser si sange

Materiale necesare:
-Tuburi Wassermann
-Pipete gradate sau micropipete
-Ser fiziologic fenolat 0,5%

-Se realizeaz conform tehnicii uzuale.

-Diluia probei de ser realizndu-se direct n antigenul diluat 1/50 (tubul 1
din scara Mc Farland)
-Se repartizeaz n 6 tuburi, antigen diluat 1/50
aglutinare lipsa aglutinrii
Citirea reaciei se face prin compararea tuburilor tuburilor n serie cu tubul martor.

Criteriile de apreciere a reaciei

de seroaglutinare lent n tuburi

-Gradul de claritate sau de turbiditate a lichidului supernatant

-Prezena sau absena depozitului
In funcie de aceste elemente, rezultatul reaciei se noteaz astfel:
++++ - supernatantul clarificat n totalitate i depozit mare, umbreliform, depus pe
fundul tubului, cu marginile franjurate (aglutinare a 100% a antigenului).
+++ - supernatantul cu turbiditate uoar i depozit asemntor cazului de mai sus,
ceva mai redus ( presupune aglutinarea a 75% din antigen)
++ - supernatantul cu turbiditate potrivit si depozit umbreliform, dar mai mic
( aglutinare a 50% din antigen)
+ - supernatantul cu turbiditate intens, aproape ca la tubul martor, iar depozitul
foarte mic ( aglutinare a 25% din antigen)
- - supernatantul are turbiditate identifc cu a tubului martor iar depozitul este
inexistent
Schema dup Kathleen Park Talaro,
Fenomene nespecifice:

Unele seruri, n concentraii La intrepretarea reaciei nu se

In acest caz:
mari, pot avea aciune iau n condiderare primele
aglutinant nespecific, datorit tuburi n care serul este nc n
unor proteine serice. concentraie mare

Fenomenul de zon - posibilitatea aciunii inhibante a unor proteine serice i care

se manifest tot n tuburile cu concentraii mari de ser.
 REACTIA DE SEROAGLUTINARE LENT N TUBURI PENTRU DIAGNOSTICUL
BRUCELOZEI - REACIA WRIGHT

Antigenul brucelic - se dilueaz 1/40 n soluie cloruro-sodic izotonic (8,5% NaCl), perfect neutr

Pentru evitarea infectrii, n cursul reaciei, se adaug 3-5% fenol la antigenul astfel diluat.

Pentru efectuarea reaciei se fac diluii: 1/25, 1/50, 1/100, 1/200, 1/400, 1/800

Incubare
la 37 C,
timp de
24 ore.
 Rezultatele reaciei se exprim n U.A.I.
( unitati aglutinante internationale).

! Probele POZITIVE se supun retestrii, pentru a fi exclus o eventual

eroare de lucru sau spre a se evita eventuale aglutinri nespecifice.

Examinarea se repet dup aceeai tehnic, concomitent cu unul din

urmtoarele teste:

a. Inactivarea serului la 56-58 C, timp de 30 minute i efectuarea reaciei

ca la 37 C
b. Executarea reaciei dup tehnica obinuit i incubaia n baie de ap la
56 C, timp de 18 ore.
 Lp.5
REACII SEROLOGICE DE
AGLUTINARE: REACIA INELAR
(RAI)
 Este o tehnic prin care se pun n eviden
anticorpii aglutinani care se elimin prin lapte;
Se utilizeaza pentru diagnosticul infeciilor
brucelice;
Pentru efectuarea reaciei se parcurg dou
etape:
Etapa I-se desfoar n fermele de vaci
Etapa a II-a se desfoar n laborator
Recoltarea laptelui din ferm:

1. Se identific vacile cu mamit, vacile nrcate sau cele n perioada

colostral - laptele acestora nu se folosete pentru reacie
2. Toi recipienii ( bidoane, palete, eprubete) se spal, se usuc i se
pstreaz la temp.22-24 C
3. Vasele n care se recolteaz laptele primesc numere de ordine,
pentru a se identifica sursa laptelui.
4. Se folosete doar lapte proaspt, nefiert, nedegresat.
5. nainte de prelevarea probei, laptele din bidon se omogenizeaz cu o
palet, efectndu-se micri lente, circulare
6. Testul inelar trebuie s fie efectuat pe eantioane reprezentative ale
coninutului fiecrui recipient de lapte i ale fiecrui rezervor de
exploatare din ferm.
 Reageni: 1. Antigen
2. Martor pozitiv (0,01% azid de sodiu)
3. Martor negativ

Antigenul reprezint o suspensie bacterian de Brucella n soluie de

fenol-salin [NaCl 0,85 % (m/v) i fenol la 0,5 % (v/v)]colorat cu
hematoxilin. Antigenul trebuie s fie stocat la o temperatur de 4 C. Nu
se congeleaz.

Sensibilitatea antigenului trebuie s fie

standardizat n raport cu serul OIEISS, astfel
nct antigenul s produc o reacie pozitiv
cu o diluie de 1/500 a serului OIEISS n lapte
negativ i o reacie negativ ntr-o diluie de
1/1 000
Eantioanele de lapte nu trebuie s fi fost
congelate, nclzite sau agitate violent
Reacia propriu-zis:
-Se preleveaz o prob de 2 ml lapte ntr-un tub Wassermann,
-Se identific proba,
-Se adaug cteva 2-3 picturi de antigen brucelic
-Proba se tine 1 or, la 37C sau 2-4 ore la temperatura camerei

Rezultatele reaciei:

-+++ - inel bine colorat, coloana de lapte alba

-++ - inel bine colorat, coloana de lapte slab colorata
-+ - inel bine colorat, coloana de lapte bine colorata
- - inel mai putin colorat sau de culoare identica cu
coloana de lapte
- = inel de grasime alb sau slab colorat, coloana de
lapte colorata
 L.P. 6
REACTIA DE SEROPRECIPITARE
REACTIA DE SEROPRECIPITARE IN
MEDIUL LICHID- REACTIA ASCOLI
 REACTIA DE SEROPRECIPITARE
GENERALITI

Principiu: precipitarea antigenlui sub aciunea anticorpilor

Elementele reaciei:
- antigenul (precipitinogenul)- extract microbian, toxina, suspensie de
virus etc.
- se prezint sub fom unui lichid limpede
- anticorpii ( precipitine) prezent n ser i apar mai gre n ser dect
aglutininele.
- electrolii

Utilizare: identificarea i tipizarea diferitelor specii bacteriene , diagnosticul

bolilor infecioase.
 T1- prepararea precipitinogenului

Reacia de
T2- executarea propriu zis- punerea n contact a
seroprecipitare
precipitinogenului cu serul precipitant

3 tehnici principale:

Tehnica precipitrii Tehnica precipitrii n Tehnica precipitrii n

sub form de disc toat masa lichidului gel de agar
sau tehnica floculrii
 REACIA ASCOLI
SEROPRECIPITAREA IN MEDIUL LICHID

Prepararea antigenului Executarea reaciei

-Organe mrunite
-Suspendarea acestora n ser fiziologic (1/3)
-Extracia la cldur, n baia de ap, timp de
10-15 min /100 C
-Filtrarea prin vat de azbest= limpede
-Filtratul reprezint precipitinogenul
-Repartizarea de 1-2 ml antigen
-Adaugarea cu o pipeta Pasteur bine efilat, o
cantitate egala de ser precipitant anticrbunos
-Adagarea se face foarte ncet, far s se
amestece cele dou lichide.

Interpretarea reaciei:
-Reacie pozitiv- 2-3 min de la efectuarea reaciei, la
zona de separare dintre ser i antigen, un precipitat
alb, sub forma unui inel sau disc

-Reacia negativ- nu se formeaz inelul de precipitare

 L.P. 7
Reacii serologice de precipitare.
REACIA DE SEROFLOCULARE
 Este o tehnic care - ofer posibilitatea unei aprecieri cantitative
- folosit pentru tipizarea unor toxine bacteriene sau a
unor seruri antitoxice ( antitoxine)

Principiul reaciei:
- are la baz proporionalitatea direct dinte viteza de producere a
reaciei i raportul dintre antigen i anticorp.
- reacia se produce cu att mai repede cu ct cantitatea de
anticorpi din ser neutralizeaz perfect antigenul i cu ct acesta din urm se
gsete n cantitate corespunztoare celei de anticorpi din ser.

!!!! Un exces de antigene sau de

anticorpi poate provoca o reacie
ntrziat, care este cu att mai mare
cu ct disproporia dintre cele dou
elemente este mai accentuat

Astfel, se poate determina:

- fie titrul serurilor antitoxice folosind ca antigen o toxin cu titrul cunoscut
- fie titrul unei toxine cu ajutorul unui ser antitoxic cunoscut
 Tehnica de lucru:
-Antigenul ( sau toxina), elementul pe care l cunoatem, se repartizeaz n tuburi
Wassermann ct 1-5 ml
-Se adaug, diluii crescnde din elementul necunoscut (serul antitoxic) realizndu-se
diluiile 1/4; 1/8; 1/16; 1/32; etc
-Tuburile se agit i se las apoi n repaus i se urmrete momentul n care are loc
flocularea.
-Se noteaz primul tub n care are loc flocularea.

Cu ct raportul dintre Atg si Atc este mai aproape de valoarea 1( vezi dil. 1-16) cu
att seroflocularea (neutralizarea toxinei) se produce mai repede (15 min).
Se trage concluzia c, serul antitoxic care se
titreaz conine, n diluia unde a aprut mai
nti flocularea, un numr de uniti
antitoxice, corespunztor numrului de
uniti toxice din volumul de toxin care a
fost repartizat iniial n toate tuburile (titrul
toxinelor i a antitoxinelor se exprim n
uniti i nu n diluii).
 L.P. 8
REACII SEROLOGICE DE PRECIPITARE N MEDII
SEMISOLIDE.
IMUNODIFUZIA.
DIFUZIA VERTICAL SIMPLA (OUDIN), DIFUZIA
VERTICAL DUBL ( OAKLEY I FULTHROPE)
 -Descriu precipitarea antigen anticorp ntr-un
Bechold (1905) mediu semisolid
Oudin (1945) -Dau reaciei o aplicaie practic
Ouchterlony si Elek (1948) -Demonstreaz faptul c aceast reacie permite
identificarea fraciunilor antigenice dintr-un
complex

Principiu:realizarea reaciilor antigen-anticorp n urma difuzrii acestor doi

reageni i formulrii, de precipitate vizibile

Difuziune radial simpl (Oudin)

Pe baza nr. de elemente
care difuzeaz Difuziune radial dubl(Ouchterlony)
Clasificarea
reaciilor de
imunodifuzie: Difuziune vertical
Pe baza direciei de
difuziene
Difuziune orizontal
GENERALITI:

Cele mai utilizate tehnici de precipitare n gel de agar i gel de agaroz:

1. Dubla difuziune Ouchterlony

(metoda calitativ)-Antigenul i
anticorpul (serul) plasate n dou
godeuri decupate n gel, DACA SUNT
SPECIFICE, difuzeaz unul ctre
cellalt i precipit la locul de
ntlnire sub forma unei linii de
precipitare,

2. Imunodifuzia radial Mancini

-este o metod cantitativ n care
serul monospecific se nglobeaz n agar iar
antigenul se introduce ntr-un godeu efectuat
n acest agar. n jurul godeului apare un INEL
DE PRECIPITARE, a crui mrime este
proporional cu cantitatea de antigen
depus n godeu
3. Imunoelectroforeza
-este o metod cantitativ ce
combin elecroforeza cu precipitarea n gel
de agar i permite vizualizarea n arcuri de
precipitare a unui mare numr de fraciuni
proteice din ser i alte lichide biologice

4. Electroimunodifuzia Laurell (metod calitativ)

este o variant a metodei Mancini n cmp electric, aceasta
accelereaz migrarea antigenului i apariia precipitatului

5.Contraimunoelectroforeza (metod calitativ)

este o variant a metodei Ouchterlony efectuat n cmp electric,
aceasta accelereaz migrarea reactanilor i apariia precipitatului
Pregtirea materialelor utilizate la efectuarea reaciilor de seroprecipitare n
medii semisolide

Tamponul:
-este acelai pentru toatele tehnicile n gel de agar i gel de agaroz
- contine:veronal acid, veronal sodic, ap distilat, pH 8,6

Agarul: se folosete pentru imunodifuzia radial Mancini, electroforez i imunoelectroforez

-conine: 2,5 g Agar Noble, 100 ml ap distilat, 100 ml tampon, 0,02 g Na-mertiolat
Agaroza: se folosete pentru metoda Ouchterlony, contraimunoelectroforez
-agaroza conine: 1,6 g agaroy, 100 ml ap distilat, 100 ml tampon veronal medinal, 0,02 g Na-mertiolat

Antiserurile:
- pentru tehnicile de imunochimie- seruri antiprotein
- sunt liofilizate i se reconstituie ntr-un ml de ap distilat

Serul de cercetat:
- se folosete proaspt sau conservat ntr-un ml Na-azid pentru 1 ml ser.

Aparatura:
- aparat de electroforez (pentru tehnicile imunochimice n cmp electric)
 DIFUZIUNEA VERTICAL SIMPL (OUDIN)

Tehnica de lucru:
- ntr-un tub de reacie se introduce serul inclus n gel de agar 2%
- peste acesta, se toarn antigenul n stare lichid
- antigenul difuzeaz n gelul cu ser nglobat, n care vor apare liniile de precipitare

http://www.authorstream.com/Presentation/doct
orrao-1133052-antigen-and-antibody-reactions/
 DIFUZIUNEA VERTICAL DUBL ( OAKLEY si FULTHROPE)

Tehnica de lucru:
-diferena fa de tehnica Oudin const n interpunerea, ntre serul inclus n geloz
2% i antigenul lichid, a unui strat intermediar de geloz moale 1%
- ambele elemente difuzeaz n stratul intermediar de geloz n care apar linii de
precipitare.
 L.P. 9
REACII SEROLOGICE DE PRECIPITARE N MEDII
SEMISOLIDE.
IMUNODIFUZIA.
DIFUZIA ORIZONTAL SIMPLA (MANCINI),
DIFUZIA OROZONTAL DUBL (OUCHTERLONY)
 DIFUZIUNEA ORIZONTAL SIMPLA (MANCINI)

Principiu: difuziunea unuia din elemente (antigen sau anticorp) n mediul de

gel de agar, n care este ncorporat cellalt element.

UZUAL- soluia de anticorpi inclus n gelul de agar

- antigenul repartizat n godeuri

Metod permite determinri cantitative- DAC SE UTILIZEAZ DILUII DIN ELEMENTUL

DE TESTAT REPARTIZATE N GODEURI

Cea mai frecvent utilizare este pentru DOZAREA IMUNOGLOBULINELOR

 METODA RADIAL MANCINI - DOZAREA IMUNOGLOBULINELOR ( ANTICORPILOR)

Imunograma valorile IgG, IgA, IgM

Materiale necesare:
-Plci Petri
-Tub pentru tanarea godeurilor ( diametrul de 3 mm)
-Dispozitiv de repartizare- micropipet
-Colorani- uneori se recomand colorarea agarului din plci
-Monoseruri
-Ser de referin se pot folosi: -ser standard (hemotest) cu IgG, IgM, IgA U.I/ml
-ser standard Behring cu coninut cunoscut n diverse proteine
(mg/100 ml)
Ser- amestec de seruri normale
Se fac diluii n SF.
Tuburile cu diluiile standard, se pstreaz la 4C, un an de zile

Se fac 3 diluii martor: IgG dil 1/10, 1/20, 1/50

IgA dil 1/10
Monoser IgM dil 1/1, , 1/4
Pentru imunogram sunt cuprinse 6 tuburi cu urmtoarele diluii: 1/1 1/10 1/20 1/50

ETAPELE DE LUCRU

1. Notarea plcii Petri

2. Turnarea agarului
3. Stantarea godeurilor
4. Diluarea serurilor de cercetat
5. Umplerea godeurilor
6. Durata imunodifuziei
7. Intrirea inelelor de precipitare
8. Citirea rezukltatelor
9. Calculul
10. Rezultatul
 METODA RADIAL DUBL OUCHTERLONY - DECELAREA PROTEINELOR
-Este o metod imunochimic
Tehnica de lucru:

-Se toarn n plac Petri agaroz

-Se taneaz godeurile (2 mm)
-Notarea godeurilor cele periferice se noteaz de la 1 la 6 pentru fiecare rozet
- si sunt pentru serurile de cercetat
- godeul 1 i 4 pentru serul martor pozitiv
( astfel fiecare ser de cercetat se invecineaz cu serul martor pozitiv)

Se noteaz numrul liniilor de precipitare care corespund unor fraciuni

antigenice cu vitezp i coeficiente de difuziune diferit.
 L.P. 10
METODA IMUNODIFUZIEI ORIZONTAL DUBL
Ag-Ac N EVIDENIEREA SPECIEI DE
APARTENE A CRNII PROASPETE
 Examene de laborator
pentru determinarea speciei
de la care provine carnea

Examene imunologice Examene fizico-chimice

-sunt mai sensibile dect metodele chimice

Reactia de Metoda
-Simpl, rapid i fiabil
seroprecipitare imunodifuziei
-Cea mai utilizat
Ulenhuth in gel de agar

-Atg- proteinele din carne

Atc. -se folosesc seruri precipitante anti-bou, anti-
oaie, anti-porc, anti-cal, etc.
 METODA IMUNODIFUZIEI IN GEL DE AGAR

! Vezi tehnica imunodifuziei orizontale de la l.p. 9

Ser cu anticorpi anti- Antigene

specie (cunoscut) cunoscute

Extractul de
cercetat
(necunoscut)
 Plcile se menin n spaii nchise, cu atmosfer umed,
Citirea reaciei se face dup 18 - 24 ore
Interpretare:
Negativ- dac ntre anticorpii din antiser i antigenele din extract nu
exist compatibilitate
Pozitiv dac ntre anticorpii din antiser i antigenele din extract, apar
linii de precipitare
Dac sunt compatibile- apar linii de precipitare care se
ntreptrund n totalitate cu cele ale antigenului omolog
antiserului i asezat n godeurile alturate extractului.
Dac sunt nrudite- apar numai unele din liniile de precipitare
DETERMINAREA CU ANALIZATORI AUTOMATI A
UNOR ANTICORPI MARCATI MINIVIDAS
DETECIA ENTEROTOXINEI STAFILOCOCICE
Enterotoxinele stafilococice sunt:
- sunt secreii produse de unele tulpini de stafilococi
- proteinele simple, constituite dintr-un lan polipeptidic, de la care, prin
hidroliz, s-au obinut 18 aminoacizi (cei mai frecveni fiind: lizina, asparagina, acidul
glutamic si tirozina)
- masa lor molecular variaz ntre 28.000 i 35.000 daltoni,
- sunt rezistente la enzimele digestive i la temperaturi pn n 117 C,
-distrugerea florei intestinale prin antibioticoterapie le poteneaz efectul,
- sunt 6 variante antogenice: A,B,C,C1, D,E
-cauza toxiinfeciilor alimentare (enterotoxinele A i D)
Enterotoxigeneza- are loc ntre limite largi de temperatur (-6,7 C i 45,5 C)
- influenat favorabil de condiia de anaerobioz
- nu este inhibat de acidifierea mediului

Identificarea serologic a enterotoxinelor se poate realiza prin :

- seroprecipitare n tub
-imunodifuyie n gel de agar
- ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay- reacie imunoenzimatic)
- PCR (Polymerase Chain Reaction = Reacie de Polimerizare n Lan)
Pentru a nelege mai bine tehnica de lucru, va recomand s
urmariti acest film de prezentare al firmei productoare!

http://www.biomerieux-industry.com/video/637/player

Sau
http://www.youtube.com/watch?v=ZFRuJYynLwk
 LP:12

DETERMINAREA CU ANALIZATORI AUTOMATI A UNOR

ANTICORPI MARCATI MINIVIDAS DETECIA PREZENEI
GENULUI SALMONELLA SPP. DIN PRODUSELE
ALIMENTARE
n laboratoarele Judetele Sanitar Veterinare au fost autorizate i acreditate metodele alternative de detecie a
tulpinilor de Salmonella i Listeria monocytogenes , utiliznd sistemul miniVIDAS.

Urmarim filmul de prezentare pentru detecia tulpinilor de Salmonella.

http://www.youtube.com/watch?v=VkehUBD802k
 LP.13
DETERMINAREA CU ANALIZATORI AUTOMATI A UNOR ANTICORPI MARCATI
MINIVIDAS DETECIA PREZENEI GENULUI LISTERIA MONOCYTOGENES DIN
PRODUSELE ALIMENTARE