1.

Monitorizarea
aerului si sanitatiei
in industria
alimentara

Irina Nistor
Account Manager
Merck Romania SRL
Monitorizarea aerului

Microaeroflora este compusa din drojdii,

mucegaiuri si bacterii din genurile Staphylococcus,
Pseudomonas, Bacillus, Corynebacterium,
provenite din diverse surse: piele, apa, sol, mediu
inconjurator.

Modalitati de prelevare aer

- Prelevare pasiva
- Prelevare activa

2 Inovatie in microbiologie | 2016

Sisteme MAS 100 si RCS pentru prelevarea activa a aerului

MAS-100 NT® MAS-100 CG Ex® MAS-100 ECO® RCS HighFlowTouch

MAS-100 NT EX RCS compressed gas adapter

The New Members

MAS-100 Iso NT® MAS-100 Iso MH® MAS-100 VF®

3 Inovatie in microbiologie | 2016
Sisteme MAS 100 si RCS – principiu de functionare

 Sistemele Mas 100 – functioneaza pe principiul  Sisteme RCS – functioneaza pe principiul

impactarii (Andersen) centrifugarii

 Sistem deschis – poate fi folosit cu palci de 90  Sistem inchis – se foloseste numai cu strip-uri
mm – indifferent de producator de agar Merck

 Sistem Mas 100 + placi Heipha – validat  Sistem RCS + strip-uri – validat cf. ISO
cf. ISO 14698 14698

 Senzor de masa – pentru compensarea variatiei  Fara sensor de masa

fluxului de aer: grosime strat agar, orificii  Fara corectie statistica
infundate, variatii de temperatura
 Corectie statistica a rezultatelor (CFU/m3 aer) –
tabel Feller
4 Title of Presentation| DD.MM.YYYY
MAS-100®NT, MAS-100®Eco, MAS-100 VF
Sisteme
Monitorizarea microbiologica a aerului deschise!

Avantaje:

▪ Debit impact 100 l/min conform ISO 14698

▪ deviatie de numai 2.5% datorita senzorului integrat pentru compensare flux de aer
▪ posibilitate prelevare de la 1L pana la 1000 de litri in cazul MAS 100 ECO, VF si 2000 litri in cazul MAS
100 NT.
▪ MAS 100 VF– control electronic al vitezei de prelevare ce asigura un debit precis, operare touch-screen,
soft integrat
▪ Timpul de functionare cu acumulatori – 7.5 ore(Baterii NiMH), Conexiune PC
▪ Calibrarea se face usor cu anemometru DA 100 NT, software permite reamintirea datei de calibrare
▪ Consumabile - placi Petri standard 90mm Settle Plates

MAS-100 NT® MAS-100 VF®

5 MAS-100 ECO®
Ce medii trebuie sa utilizam?
Monitorizarea microbiologica a aerului

Numar total de germeni: Plate-Count Agar

Tryptic Soy Agar

Drojdii si mucegaiuri: Sabouraud 4%-Dextrose Agar

DG 18 Agar
Rose Bengal Chloramphenicol Agar

Settle Plates (90 mm)

Contact Plates (55 mm)

 Prelevare activa (sisteme deschise MAS)

 Prelevare pasiva

6 Title of Presentation| DD.MM.YYYY

 RCS® High Flow Touch - Hycon NOU!
Sistem portabil pentru prelevare aer

Prelevator de aer portabil – principiu forta centrifuga

Sistem inchis, in conformitate cu ISO 14698

Microorganismele din aer sunt aspirate cu ajutorul

fortei centrifuge si distribuite pe stripul
cu agar de pe rotor; rotor autoclavabil

Aerul filtrat este eliberat paralel

cu sistemul

Adaptor pentru masurare gaz comprimat

(interval presiune 0,1 – 7 bar)

Consumabile: benzi cu agar gata turnate

7
HYCON® Agar Strips - consumabile RCS High Flow Touch

Agar Strips – Beneficii:

 Usor de folosit
 Ambalate individual, cu slide de protectie
 Se depoziteaza la temperature camerei (15-25 grade Celsius)
 Termen de valabilitate: 6-7 luni de la data fabricatiei

8 Title of Presentation| DD.MM.YYYY

2. Monitorizarea
igienei suprafetelor
Monitorizarea igienei
Teste de sanitatie – portofoliu Merck pentru clientii F&B
Sanitatia clasica si teste rapide:

Clasic

Heipha Merck contact

Millipore Dip & Hycon contact DCM – for own Merck CULTURA
contact plates slides
Swab Tester slides media Mini Incubator
preparation for contact
slides

Rapid

Flash Protein
… rapid MVP ICON rapid methods incl. ATP
HyRiSE cleaning HyLiTE ATP
testing
NAD-based test verificarea system for
AND…
stripes proteinei surface and liquid
Chemical Concentration
reziduale samples
Conductivity
pH
10 Inovatie in microbiologie | 2016 Temperature
Cum alegem testele de sanitatie?
Sanitatia clasica

Envirocheck Dip Dip and Swab RT Contact Plates Contact Slides

Slides Tester

Mediu agar Agar standard Agar deshidratat Agar standard Agar standard
Aplicatii Suprafete plane & Sampler: Lichide Suprafete plane Suprafete plane si
Lichide +Swab: Suprafete curbate
greu accesibile
Detectie 2 Parametri intr-un 1 Parametru/test 1 Parametru/test 1 Parametru/test
Parametri singur test
Termen 6-8 luni 18 luni 6-9 luni 6-7 luni
Valabilitate
Conditii de < 15 °C 15-25°C 15-25°C 15-25°C
depozitare

11 Title of Presentation| DD.MM.YYYY

Monitorizarea suprafetelor si personalului
Contact Plates si Contact slides
Contact Plates
▪ Placi cu agar cu diametrul de 55 mm ( suprafata
de recoltare approx. 25 cm2)
▪ Disponibile in varianta blocare si non-blocare
▪ Se depoziteaza la temperature camerei (15-
25°C)
▪ Risc redus de formare a condensului
▪ Usor de folosit
12
Contact Slides
▪ Forma rectangulara (25 cm2)
▪ Ambalate individual, non-iradiate
▪ Sunt flexibile pentru recoltare probe de pe
suprafete curbate din zonele de productie
▪ Se depoziteaza la temperature camerei (15-
25°C)
▪ Dispozitiv de acoperire dupa recoltare (Cover
Slide)
Monitorizarea suprafetelor si personalului
Contact Plates – modalitate de recoltare

Guidance for Use of Contact plates is given for

example by ISO 14698:1

3-10
sec.
13
Monitorizarea suprafetelor si personalului
Contact Slides – cum prelevam proba?

(1) Se deschide testul si se ia

slid-ul fara a atinge suprafata cu
1. Deschide agar

2. Contact

(2) Se amprenteaza suprafata de

2. Recoltare testat, apasand usor testul, fara
a crea presiune mare

3. Incubare (3) Testul se pune inapoi in

suportul din plastic si se acopera
cu capacul protector, apoi se
incubeaza
14
 Monitorizarea igienei suprafetelor si lichidelor
Envirocheck® Contact Slides
Lamele de contact impregnate cu agar

Avantaje :
Sunt usor si convenabil de folosit
Nu necesita laborator microbiologic
Exista teste pentru:
Controlul dezinfectiei - DC
Numar total de germeni - TVC
Drojdii si mucegaiuri – Y+M
Enterobacterii - E
Coliformi totali / E. coli - C

15
Envirocheck® Contact Slides

16
Monitorizarea suprafetelor si lichidelor
Dip & Swab Test Kits

Pentru testarea Suprafetelor & Lichidelor

Sampler-ul – un pad impregnat cu mediu deshidratat si membrana neagra,

gridata din MCE (exceptie fac cele albastre (Coli-Count) care au membrana
alba) intr-un recipient transparent

Swab-uri sterile cu solutie buffer – un recipient transparent ce contine

apa sterila pentru prelevare de pe suprafete

Temperatura de stocare: 15-30 C

Valabilitate: - 12 – 18 de luni (HPC)

17
Monitorizarea suprafetelor si lichidelor
Swab Test Kits

Galben – pentru drojdii si mucegaiuri

- contine mediu m-Green

Rosu – pentru bacterii aerobe “stresate”

- contine mediu m-HPC

Albastru – pentru bacterii coliforme

- contine mediu Coli-Count™

18
Pentru testatrea suprafetelor si personalului
Dip & Swab Test Kits
Description Color Qty/PK Shelf Life Storage Incubate Ordering
Samplers
HPC Total Count Red 25 tests 18 mon 15-30°C 48-72h, 25-35°C MHPC 10025
Coli Count Blue 25 tests 18 mon 15-30°C 22-24h, 35°C MCOO 10025

Yeast & Mold Yellow 25 tests 18 mon 15-30°C 48-72h, 28-32°C MYOO 10025

Swabs

Swabs in PBS - 25 tests 18 month 15-30°C MMSB 10025

Test Kits (25 Samplers and 25 Swabs)

HPC Total Count Red 25 tests 18 mon 15-30°C 48-72h, 25-35°C MSSK 10025

Coli Count Blue 25 tests 18 mon 15-30°C 22-24h, 35°C MCSK 10025

Yeast & Mold Yellow 25 tests 18 mon 15-30°C 48-72h, 28-32°C MYSK 10025

19 RtU Culture Media for EM - Anne Klees - 2016

Teste de sanitatie rapida pentru suprafete si lichide de clatire
HY-LiTE® and MVP ICON System – principiu

NOU!

Evidentierea ATP – ului Total inseamna detectia tuturor surselor posibile de contaminare:
celule somatice, germeni, resturi celulare...

20
Teste de sanitatie rapida
HY-LiTE® System – Protocolul de lucru

21
Teste de sanitatie rapida
HY-LiTE® System - Beneficii

Beneficiile PEN-urilor Beneficiile sistemului Hy-Lite

Reproductibilitate Compensarea automata a temperaturii

Rezultate cantitative corecte la orice
temperature, exprimate in RLU
Elimina interferentele - concentratia mare a
enzimei permite dilutia intr-o singura etapa Standard intern
Calibrare automata la pornire si la
inchidere
Pot fi testate lichide, suprafete, combustibil
Manipulare usoara
Intuitiv, numai cinci butoane
Swab –uri sterile
Complet echipat
PC-connection

Software care permite pregatirea si instalarea

usoara a planurilor HACCP pentru intreaga
intreprindere
22
HY-LiTE® System – exemple de client si rezultate

Mediu de productie Pass Fail

Lapte proaspat 100 300
Carne proaspata/Peste/Oua 300 1000
Vegetale proaspete/Fructe 500 1500
Lapte procesat/Lactate 70 200
Carne procesata/Peste/Oua 70 200
Vegetale procesate/Fructe 200 600
Catering aerian 500 1500
Bauturi racoritoare 30 100
Bauturi fermentate 30 100
Apa clatire/reziduala CIP 80 100

23
MVP ICON® Sistem de sanitatie rapid monitorizare conform
programului HACCP

➢ Sistem multiparametru include detectia: ATP -lui,

concentratiei, conductivitatii, pH-lui si temperaturii.

➢ MVP ICON® Software care permite pregatirea si instalarea

usoara a planurilor HACCP pentru intreaga intreprindere.

➢ Posibilitatea intocmirii de rapoarte de management si

HACCP pentru ședințele de audit sau de conducere.

➢ Ecran touch screen usor de utilizat chiar daca operatorul

poarta manusi.

➢ Calibrare On-site pentru toti parametrii, incluzand ATP,

pentru asigurarea acuratetii masuratorilor, conform normelor
HACCP and GMP.

➢ Meniu intuitiv si usor de folosit

➢ Memorie – poate stoca 10.000 rezultate

24
MVP ICON® instrument portabil

ATP
Chemical Concentration
Conductivity
pH
Temperature

25
Protocol de lucru – ATP suprafete

26
MVP ICON® Sistem portabil - rezultate

27
MVP ICON® System - Validarea Curățeniei si Sanitizării

Utilizează o gamă unică de zone de curățenie Zones of Cleanliness® stabilite și validate

prin teste extinse de laborator și teren - +30.000 de puncte de prelevare, într-o varietate de
suprafețe de contact cu alimente și facilități de procesare a alimentelor;
S-a ajuns la un nivel de încredere de 99,5% pentru „curat”

Zona de Pass range (0- 2.5) corespunde cu 35 RLUs.

Zona de Warn range (2.5 – 3.0) este intre 35 – 85 RLUs.
Zona de Fail ( > 3.0) este >85 RLUs.

28
Swab-urile pentru suprafete/lichide contin toti reactivii necesari intr-
un singur dispozitiv de prelevare
Design superior al Swab-ului:

➢ Stocare la temperature camerei

➢ Swab-ul nu se agită dupa prelevare
➢ ATP colectat eliberat uniform din tampon, prin spalare
➢ Rezultate exacte, indiferent de testare înainte sau
după igienizare
➢ Reacția bioluminiscentă are loc în soluție
➢ Neutralizarea tamponului elimină potențialele
interferențe din substanțe chimice
➢ Minimizează impactul variabilității (operator,
tehnică de eșantionare, poziția tamponului)
➢ Tampoanele prelevate sunt viabile timp de 1 oră
înainte de activare; Tampoanele activate sunt
viabile timp de 2 min
➢ Termen de valabilitate - 12 luni

• Surface Sampling Device – detectie ATP de pe suprafete

• Liquid Sampling Device – detectie ATP in Clean in Place (CIP) apa de clatire sau alte probe lichide

• ATP Positive Control – o forma liofilizată și stabilă a unei concentrații cunoscute de ATP pentru verificarea
29
de rutină a performanței sistemului ICON
Teste de sanitatie rapida
HY-RISE

Masoara NAD – NADH (Nicotinamide adenine dinucleotide) si NADP-NADPH (Nicotinamide

adenine dinucleotide phosphate) - 2 coenzime implicate in reactiile de oxido-reducere din
orice celula vie

Mult mai sensibil decat testul pentru proteine

Cuprinde 50 de strip-uri ambalate individual si 3 reactivi: solutia de umectare, enzima si

substratul

Rezultat rapid: dupa 4-5 minute la intuneric

30
FLASH® - Total Protein Visual - test rapid verificarea
curateniei (rezultat prezent/absent)
▪ Detectează rapid reziduurile de proteine rămase
pe suprafețele de contact cu produsele alimentare
după curățare;
▪ FLASH trebuie utilizat după curățare, dar înainte
de igienizare

▪ Majoritatea alergenilor alimentari sunt pe bază de

proteine;

▪ Vârful pre-umectat al swab-lui poate fi utilizat

pentru testarea suprafețelor uscate și umede

▪ Rezultate rapide pe baza de culoare

▪ Termen de valabilitate - 18 luni

31 FLASH is NOT an allergen test

3. Prepararea
probei
Dilutor automat - pentru clienti care fac peste 20 de dilutii/zi
DiluCult
 DiluCult
 cat.no. 5427530001 : 3000 g

 DiluCult 2
 cat.no. 5427600001 : 5000 g

 DiluCult este un dilutor gravimetric

automat care cântărește eșantionul
de proba și adaugă masa
corespunzătoare de diluent
(lichide, agar, etc)
 DiluCult oferă o gamă de rate de
diluție: de la 1/2 la 1/99

DiluCult DiluCult 2  Punga + proba + diluentul nu trebuie să

depășească greutatea stabilită pe platforma
de cântărire
 Certificat de conformite (online sau
33 printat)
Omogenizator cu palete
Enrichment Sample Homogenizer (ESH)

 ESH
 cat.no. 5427650001
 Volumul maxim nu trebuie
sa depaseasca 400ml

 Certificat de conformitate
(online sau printat)
 Quality certificate by Merck QC

34 PAT Training | 07 03 2015

4. Analiza apei
metoda
filtrarii prin
membrana
Standard apa potabila - Metoda filtrarii prin membrana pentru apele cu
continut scazut de bacterii (< 100 UFC).
Medii de cultura in functie de parametri analizati
Directiva europeana a apei 98/83/EC EC 2015 1787 amendment of EC 98 83

Parametri Standarde Medii Standarde actuale Medii

Coliform and E.coli EN ISO 9308-1:2000 Lactose TTC Agar EN ISO 9308-1:2014 CCA

Slanetz and Slanetz and Bartley

Enterecoccus EN ISO 7899-2 EN ISO 7899-2
Bartley Agar Agar

Colony Count @22°C EN ISO 6222 Yeast Extract Agar EN ISO 6222 Yeast Extract Agar

Colony Count @ 36°C EN ISO 6222 Yeast Extract Agar EN ISO 6222 Yeast Extract Agar

Pseudomas aeuriginosa EN ISO 12780 CN Agar EN ISO 16266 CN Agar

Clostridium perfringens --- M-CP Agar EN ISO 14189 TSC Agar

Medii deshidratate granulate - beneficii

Medii de cultura granulate

Manipularea mai ușoară și mai convenabilă (proprietăți de curgere, dizolvare rapidă etc.)
Mai puțină răspândire a prafului (risc scăzut de contaminare încrucișată, riscuri mai scăzute
pentru sănătate prin substanțe toxice și alergenice)
Calitate constantă (fără risc de descompunere care conduce la variații ale proprietăților
media în același lot / cutie)

Standarde de cea mai înaltă calitate

Conformitate cu ISO 11133 și QC (controlul calitatii)
Certificate ISO 17025 acreditarea procedurilor QC conform ISO 11133
Standard ridicat în selecția materiilor prime, în special calitatea peptonelor
Servicii complete de asigurare a calității privid materia prima (Certificat BSE/TSE – grupa C
de risc = fara risc de infectiozitate)

Denumirea noua:
BPW GranuCult™

Buffered Peptone Water acc. ISO 6579, ISO 21528, ISO 22964, FDA-BAM and EP

Antibiotice incluse
Page 37
Economii substanțiale (ascunse) de costuri
ReadyPlate Family – medii gata preparate

ReadyPlate™ ReadyPlate™CHROM ReadyPlate™CT ReadyPlate™55

ReadyPlate™55 KIT

Placi de 90mm Medii cromogene in Medii in placi de 55 mm. Medii in placi de 55mm .
placi de 90mm
Diferite medii pentru Diferite medii pentru Gama variata de medii Contin mediu pana in
analiză, de exemplu, analiza cromogene partea se sus a placutei
MYP, BPA
Aplicatii: standard Aplicatii: standard Aplicatii: Contact Plate Applicatii: Filtrarea
microbiologice microbiologice pentru monitorizarea prin membrana
mediului
Sistem complet de filtrare prin membrana
Gama EZ-Fit Manifold

EZ-Fit Manifold EZ-Pak dispenser Curve EZ-Stream Pump

39
Ez-Pak Dispenser Curve

- Dispenser automat de membrane

- Reducerea ratei rezultatelor false
- Operare fara atingere – sensor IR

Ez-Stream Pump

- Conexiune directa
- Nivel redus de zgomot
- ISO 8199/2005 nivelul de vacuum (700 mbar)
- Salveaza timp si spatiu in laborator

40 Title of Presentation| DD.MM.YYYY Conexiune directa

Consumabile Microfil
Palnii polipropilena
▪ Pre-sterilizate, detasabile, gradate si autoclavabile
▪ Capacitate 100 & 250 ml
▪ Disponibile doar cu membrane S-Pak sau EZ-Pak
Membrane S-Pak ambalate individual

▪ Membrane sterile, gridate din esteri de celuloza

▪ 4 cutii cu 150 membrane/set
▪ Certificat de Calitate
▪ Detalii cod produs: dimensiunea porilor,culoarea,
diametru membranei, numarul de bucati/cutie.

Membrane EZ-Pak inseriate, pentru dispenser

▪ Ambalate inseriat, sterile, gridate din esteri de celuloza
▪ 4 cutii cu 150 membrane /set
▪ Numar catalog, numar lot , dimensiunea porilor
precizate pe fiecare protectie de membrana
41
Detectie rapida – EZ-
Fluo
Microbiologia rapida in industria bauturilor
EZ-Fluo System – sistem de detectie rapida a microorganismelor

Segmente de piata:
Toti producatorii din industria bauturilor care vor sa obtina
rezultate rapide, incubare 1/3 din timpul total.
Destinat pentru producatorii de vin, bauturi energizante,
apa minerala.
Principiu - Fluorescenta

Aplicatii:
Teste rapide de microbiologie (e.g. Total Count, Y+M) in
industria bauturilor pentru analiza:
- Testarea materiei prime (inclusiv apa)
- Testari pe linia de productie
- Testarea produsului final
Beneficii:
- Rezultate rapide 18 – 48 ore
- Metoda non-disctructiva, faciliteaza validarea
43
EZ-Fluo Sistem de detectie rapida – Protocol

Transferul membranei pe Transferul membranei pe placa

placa petri cu mediu solid petri cu pad impregnat cu reactiv
de fluorescenta

Filtrare proba Incubare Incubare

1/3 din timpul total pentru 30 minutes at 32.5 ± 2.5°C
Solutia de colorare cliveaza
membrana microorganismelor

Numararea
Re-incubarea Microorganismelor fluorescente cu cititorul
In placa Petri cu mediu pentru si camera (optional)
identificare
Ez-Fluo – metoda non-distructiva, faciliteaza validarea
Comparabila cu metoda traditionala

Rezultat dupa colorare Aceeasi membrana

dupa re-incubare

Membrana in interiorul reader- CFUs vizibile cu ochiul liber

ului
Staphilococcus aureus
16 ore 5 zile
 Metoda
alternativa
analiza apei

46
Metoda alternativa – US EPA
Rezultat calitativ – present/absent

Readycult 50
Readycult
Readycult 100
Aventaj
❖ Rezultat present/absent pentru total coliformi si
E.coli
Aplicatii
❖ Apa potabila si apa de suprafata

Un singur pas
Snap pack
❖ Mediu gata preparat, deshidratat si granulat in
ambalaj iradiat – snap pack.
Legislatie
❖ Produs aprobat conform US EPA.

47
Metoda alternativa – determinare coliformi
Readycult – Procedura de lucru
1. Se pune Nici o 1. Expunere la 1. Se adauga
Readycult in modifcare lampa UV 2.5ml de
proba de apa de culoare 366nm. KOVACS
(-) indole
2. Incubare 2. E.coli va fi reagent
fluorescent
3. Citirea 2. Pozitiv:
rezultatelor INELUL
ROSU

Albastru
Verde (+)

48
Informatii de comanda

Catalogue
Product Description Format Packaging Size
Number

1.01295.0001 Readycult® Coliforms 50 Snap pack 20pcs

1.01298.0001 Readycult® Coliforms 100 Snap pack 20pcs

Fluorocult® LMX Broth acc to MANAFI

1.10620.0500 DCM 500g
and OSSMER

49
Metoda alternativa – determinare Enterococci
Readycult – Procedura de lucru

Catalogue
Product Description Format Packaging Size
Number

1.01299.0001 Readycult® Coliforms 100 Snap pack 20pcs

50 Title of Presentation | DD.MM.YYYY

MC-Media Pads – metoda alternativa
medii de cultura gata preparate impregnate pe pad

• Medii de cultură convenabile pentru

enumerarea rapidă a contaminării microbiene în
produsele alimentare și băuturi
• Conforme cu standardele internaționale AOAC și
contrul calității ISO 11133
• Termen mare de valabilitate – 3 ani
• Metoda de lucru rapida
• Culoare clară pentru o diferențiere ușoară a
parametrilor de lucru
• Faciliteaza spatiul in incubator
Protocol - 4 pasi simpli pentru un test de rutina

1 2 3 4

Dupa inoculare, Inchideti filmul de Numarati.

Deschideți în
proba difuzeaza protectie si incubati
diagonală filmul de
automat pe toata
acoperire, apoi
sufrafata pad-ului
inoculați proba pe
pad
MC-Media Pad – Informatii pentru comanda
Va multumesc pentru atentie!