Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:1 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
PROCEDURA SPECIFIC IDENTIFICAREA I TESTAREA SENSIBILITII GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDAT FARINGIAN, ANTIBIOGRAMA
COD: PE-03
Editia: 1 Revizia: 1 Data: 01.2013 Examplar nr: ELABORAT, DR. POPESCU LILIANA VERIFICAT, SEF LABORATOR DR. POPESCU LILIANA APROBAT, MANAGER DR. ENACHE DRAGOS Avertisment: Documentul de fata este proprietatea SC ELITE MEDICAL SRL CARACAL. Reproducerea integrala sau partiala a prezentului document, in orice publicatie si prin orice procedeu (electronic, mecanic, fotocopie, microfilm) este interzisa daca nu exista acordul scris al LABORATORULUI DE ANALIZE MEDICALE Copiile sunt numerotate si controlate
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:2 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
LISTA DIFUZARE
NR. EXEMPLAR MANUAL 1 2 3 EDITIA/ REVIZIA DESTINATAR (FUNCTIE SAU NUME) SEF LABORATOR RMC RENAR SEMNATURA DATA
1 / 1
1 / 1 1 / 1
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:3 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:4 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
CUPRINS NR. CAP. DENUMIRE CAPITOL PAGINA DE GARDA LISTA DE DIFUZARE PAGINA REVIZIILOR IN VIGOARE CUPRINS SCOP DOMENIU DE APLICARE DOCUMENTE DE REFERINTA DEFINITII SI ABREVIERI ECHIPAMENTE DE ANALIZA.MATERIALE DESCRIEREA ACTIVITATII-REGULI DE PROCEDURA RESPONSABILITATI INREGISTRARI ANEXE NR. PAG. 1 2 3 4 5 5 5 6 6 7 14 15 15
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:5 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
1.
SCOP
Procedura prezint modul de executare pentru: - Identificarea agenilor patogeni din exudatul faringian. -Testarea sensibilitii n vitro pentru bacteriile patogene izolate din exudatul faringian, prin efectuarea antibiogramei.
2. DOMENII DE APLICARE
Procedura va fi aplicat de ctre personalul responsabil de ncercare din cadrul compartimentului bacteriologie din cadrul Laboratorul de Analize Medicale SC ELITE MEDICAL. 3. DOCUMETE DE REFERIN
3.1. Metode de laborator de uz curent, Ed. Med., Vol.II , 1977, Ministerul Sntii, ACADEMIA DE tiine Medicale, pag. 16-29,85-93. 3.2. Tratat de Microbiologie Clinica Buiuc ,1999,Ed.Medicala,Bucuresti. 3.3. Instruciuni de folosire cu tabele de sensibilitate ale discurilor de antibiotice. 3.4. Instruciuni de folosire pentru mediile de cultur: geloz snge, AABTL, CLED, TSI, MIU, MILF,Citrat, Sabouraud, Chapman. 3.5. Instruciuni de folosire ale truselor de tipare a stafilococilor i a streptococilor. 3.6 .Instruciuni de folosire pentru kit-ul de coloraie Gramm.
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:6 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
4 . DEFINIII I ABREVIERI:
-flor microbian saprofit = flor microbian normal sau populaii bacteriene complexe, autohtone, adaptate la condiiile gazdei umane, care populeaz repere anatomice din primele ore de existen ale organismului uman -flor microbian patogen. Patogenitatea este capacitatea real sau potenial a unei bacterii de a determina natural sau n condiii experimentale, un proces infecios i este atributul unei specii microbiene, n raport cu o gazd aflat ntr-o stare convenional de rezisten. -microorganisme condiionat patogene (oportuniste) aparin microbiogenozei normale a tegumentelor i mucoaselor, n mod normal nepatogene, devin patogene prin surprinderea gazdei n momente de scdere general a rezistenei antiinfecioase sau prin introducerea lor accidental n numr mare n anumite teritorii ale organismului , n mod normal sterile. -Mediul MH mediul Muller-Hinton, cu valoare nutritiv, care permite dezvoltarea optim a unei mari varieti de germeni i nu conine inhibitori ai aciunii unor substane antimicrobiene. -Mediul AABTL (agar, albastru de brom-timol, lactoz) = mediul diferenial favorit n diagnosticul enterobacteriaceelor, recomandndu-se pentru replicare de colonii, izolate de pe medii selective. -Mediul MC (Mac Conkey agar) mediu folosit pentru izolarea i diferenierea enterobacteriilor pe baza capacitii fermentative asupra lactozei (mediu slab selectiv). -Mediul geloz-snge se folosete snge defibrinat de berbec 7-10%, este folosit pentru izolare i diferenierea patogenilor pe baza caracterului de cultivabilitate i a hemolizei. -Mediul Chapaman hiperclorurat folosit pentru izolarea i diferenierea stafilococilor patogeni pe baza caracterului de cultivabilitate i fermentarea manozei: stafilococi manito-pozitivi. -TSI (agar triplu zaharat, sulfat feros) = mediu politrop recomandat pentru replicare de colonii de pe medii selective i diferenial ca mediu test pentru producerea de H2S, aprecierea capacitii fermentative asupra glucozei (cu sau fr producere de gaz), lactozei i zaharozei. -MIU (mobilitate, indol, uree)= mediu recomandat n asociere cu TSI. MILF (mobilitate, indol, lizindecarboxilaza, fenilalanindezaminaza)=mediu recomandat pentru triajul biochimic al enterobacteriaceelor prin testarea mobilitatii, producerea de indol, de lizindecarboxilaza si de fenilalandezaminaza. -Mediul Simmons cu citrat- se foloseste pentru diferentirerea enterobacteriaceelor. -Mediul Bila-Esculina se foloseste pentru identificarea enterococilor si streptococilor de gr. D -Mediul II solid tip Sabouraud-se foloseste pentru cultivarea levurilor.
5.
ECHIPAMENTE DE ANALIZ.MATERIALE:
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:7 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
- autoclav, -termostat, -hot cu flux laminar vertical, -anse de nsmnare, -bec de gaz Bunsen, -placi Petri, -eprubete i stative, -standard McFarland.
6.
Recoltarea probelor
Exudatul faringian se preleva inainte sau dupa 4 ore de la toaleta cavitatii bucale sau ingestia de alimente sau lichide , fara periaj dentar. a) n interiorul laboratorului n spaii special amenajate, b) n exteriorul laboratorului: cabinete de ORL,etc.
Prelevatul clinic:
-s fie recoltat nainte de nceperea terapiei antibiotice, -recipiente sterile adecvate , -continut corespunzator solicitarii
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:8 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
Etichetarea recipienilor:
-proba biologic i cererea de analize se preiau de ctre compartimentul recepie-registratur, - nume, prenume, data naterii, adres, tipul prelevatului, solicitarea de examen, tratamentul cu antibiotice anterior i actual, -data i ora recoltrii, -data i ora recepionrii probei, -se eticheteaz probele cu numele i numrul din registru de intrare, -se transport rapid n laborator n compartimentul microbiologie.
Etape de lucru I). Microscopia direct a exudatului faringian pe frotiu colorat Gram nu este uzual
recomandata din cauza abundenei strptococilor viridans din microbiota indigen de la acest nivel.
II) nsmnri
-pe mediile : geloza - snge, A.A.B.T.L, Sabouraud.
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:9 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
-dup incubare 24 ore la 37 C, n cazul culturilor pozitive, se noteaz aspectele macroscopice ale coloniilor si se procedeaz la identificarea genului si speciei prin teste biochimice pentru bacili Gram (-) si serologice pentru coci (Stafilococ, Streptococ ).
IV. ) Prezentam criterii minimale necesare identificrii principalelor specii sau genuri
bacteriene ce pot exista n exudatul faringian : cel mai frecvent implicat este Streptococcus pyogenis( Strptococul beta hemolitic de grup A), bacterii gram pozitive aerobe: coci gram pozitivi (stafilococ auriu, streptococi piogeni grup C, G), arcanobacterium haemolyticum, chlamydia pneumoniae, mycoplasma pneumoniae,neisseria gonorrhoeae, corynebacterium diphteriae, cresterea predominanta si in cantitate mare a bacililor gram negativi, levurilor (candida albicans) are semnificatie clinica la anumite categori de pacienti.
b)caractere biochimice:
-n cazul enterobacteriilor, identificarea are la baza determinarea caracterelor biochimice prin utilizarea mediilor politrope: T.S.I., M.l.U, Simmons citrat - conform caracterelor fermentative ale Enterobacteriaceaelor. -n cazul cocilor patogeni se efectueaz teste serologice pentru certificarea identitii unor microorganisme (stafilococ, streptococ), teste tipare staph, -testul catalazei, -testul oxidazei, -testul coagulazei, -S.pyogenes poate fi identificat prezumtiv prin: testul la bacitracina, testul PYR, testul SXT, testul CAMP,testul Voges Proskauer, identificarea definitiva se face folosind diverse teste, cele mai folosite fiind testele serologice( teste de aglutinare pe lama latex aglutinarea). Intruct Streptococul beta hemolitic de grup A si-a pastrat sensibilitatea naturala la penicilin, antibiograma in cazul lui se efectueaza doar n cazul cererii exprese a medicului, n cazul alergiei la penicillin, n cazul celorlatii agentii etiologici afectundu-se antibiograma difuzimetrica standard.
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:10 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
PRINCIPUIUL METODEI
O cantitate de substanta antimicrobiana este depusa pe suprafata unui mediu de cultura agarizat, preinsamantat cu bacteria testata. Concomitent se produc doua fenomene: difuzarea substantei antimicrobiene si cresterea bacteriei. In zonele in care substanta antimicrobiana realizeaza concentratii mai mari decat concentratia minima inhibitoare, bacteria nu creste.
INDICATII
Metoda este indicata pentru laboratoarele care testeaza un numar relativ mic de tulpini bacteriene cu crestere rapida la 35 -37 0C, fara diferente semnificative, de la tulpina la tulpina, a ratei de crestere (Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Staphylococcus, Enterococcus).
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:11 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
multiplicarea unui agent patogen intr-un organism care, la un moment dat, nu poate realiza el insusi aceasta sau o face insuficient. Optiunea, orientarea si controlul terapiei antimicrobiene sunt decizii bazate pe triada formata de: subtilitatea rationamentului clinic; cunoasterea farmacologiei substantelor antimicrobiene;rezultatul testelor de laborator; Pentru necesitatile terapeutice curente definim o tulpina microbiana In raport cu un medicament antimicrobian ca:- sensibila: in situatia in care concentratia minima inhibitoare (CMI) este de minimum 2-4 ori mai mica decat nivelul medicamentului in ser sau alte umori, in conditiile administrarii unor doze mici sau repetate, normale. In aceste conditii, efectul terapeutic este posibil. - rezistenta: daca CMI este mai mare decat nivelul medicamentului in ser sau alte umori. In acest caz medicamentul este toxic pentru pacient inainte de a fi toxic pentru germenul respectiv.- intermediara, sau moderat sensibila: daca CMI este apropiata de nivelul medicamentului din sange sau alte umori. in acest ultim caz, efectul terapeutic este intermediar sau imprevizibil, cu exceptia situatiilor in care se pot administra doze foarte mari si medicamentul se concentreaza in focarul de infectie, sau poate fi administrat local. Dintre multiplele metode, procedee si variante de antibiograme existente, pentru Laboratorul Clinic se recomanda metoda difuzimetrica. Aceasta este mai usor de executat, mai economica si asigura o reproductibilitate de aproximativ 90% daca se respecta strict toate conditiile de lucru.
MODUL DE LUCRU
Insamantarea. Se imerseaza tamponul de vata steril in suspensia bacteriana etalonata. Se scurge excesul de lichid prin rotirea tamponului pe peretii eprubetei. Se descarca tamponul in striuri paralele pe toata suprafata mediului, succesiv in trei directii, prin rotirea placii cu 600. Insamantarea se poate realiza si prin inundare, urmata de eliminarea lichidului in exces. Placile insamantate se lasa la uscat pentru absorbtia inoculului, prin mentinerea la temperatura camerei 5 -15 minute pana la depunerea discurilor. Discurile se vor aseza in placa numai atunci cand nu mai exista lichid pe suprafata mediului. Se depun discurile cu substante antimicrobiene la distanta de minimum 15 mm de marginea placii si de 30 mm intre centrele a doua discuri vecine. Dupa repartizarea discurilor, placile se incubeaza imediat, la 370 C, timp de 16-18 ore.
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:12 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:13 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
Arhivarea rezultatelor
Registrele de analiz din sectorul bacteriologic se arhiveaz pe o perioad de cinci ani fiind stocate pe hard-disk, pentru o perioad de cinci ani n serverul din departamentul informatic al laboratorului.
Protecia personalului
n timpul lucrului personalul poart mnui de unic folosin i va purta echipamentul de protecie. De asemenea se vor respecta dispoziiile standard i instruciunile de protecia muncii. Astfel: - personalul va purta echipament de protecie corespunztor -recoltarea se va realiza n spaii cu geamuri nchise -manevrarea mijloacelor de ncercare i a probelor recoltate se va face cu atenie -deeurile se vor colecta n containere speciale -splarea minilor se va face dup fiecare recoltare -se vor decontamina suprafeele de lucru -recipientele se manevreaz cu atenie fiind plasat pe o suprafa orizontal n zona de lucru; -splarea minilor i dezinfectarea lor -respectarea precauiunilor standard i a instruciunilor privind securitatea muncii
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:14 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
7.
Responsabilitati
Asistenii din serviciul recoltare: -recolteaz probele i completeaz Registru de Recoltare, -nmneaz probele asistentului care transport probele n condiii standardizate ctre compartimentul microbiologie Asistentul medical din cadrul compartimentului microbiologiede din cadrul laboratorului de analize medicale al SC ELITE MEDICAL : -face recepia probelor aduse de asistent, -atribuie cererii un numr de registru n laborator, eticheteaz probele pe care scrie numele prenumele i codul numeri al pacientului, -scrie caietele de lucru. Medicul responsabil de activitatea din cadrul sectorului bacteorologie: -verific numrul de registru i corespondena lor cu probele de lucru, -examineaz nregistrrile, dispune repetarea unor determinri daca observa valori neconcordante, -executa determinarile biologice, -elaboreaza prezenta procedura. Seful de laborator: -verifica si valideaz (semneaz si parafeaz) Buletinul de investigaii paraclinice. -adauga comentarii generale, dac este cazul. -dispune repetarea unor determinri daca observa valori neconcordante. -verifica si participa la elaborarea prezentei proceduri.
Directorul General:
-aproba prezenta procedura.
PROCEDURA EXAMINARE
Cod:PE-03
Editia:1 Revizia:1 IDENTIFICAREA SI TESTAREA SENSIBILITATII Pagina:15 GERMENILOR PATOGENI DIN EXUDATUL FARINGIAN,ANTIBIOGRAMA
8. INREGISTRARI -Tabel catagrafie- autocontrol aeromicroflora cod FL-5.17-01 - Tabel catagrafie- autocontrol suprafete cod FL-5.17-02 -Caietele de lucru ale sectorului bacterologie CL- 03 -Caietul de control al sterilizarii si autoclavarii FL.5.7.4 -Caietul de control intern al mediilor de cultura si al discurilor de antibiograma CLCI 0301,respectiv CLCI 03-02
9. ANEXE
Prezenta produra nu are anexe