TEST COOMBS

PRINCIPIU

Atc de tip incomplet (Ig G) sau complet (Ig A, Ig

M),precum si fractiuni de complement(C3, C4,C5),
fixati in vivo pe suprafata Atg eritrocitare,pot fi pusi
in evidenta prin fenomenul de aglutinare cu
ajutorul unui ser antiglobulinic polispecific sau
monospecific obtinut pe animale.
TCD se executa pe eritrocitele bolnavului care sunt
invelite cu Atc sau fractiuni de complement, in vivo.
 Principiu

 Atc aglutinanti sunt Atc care aglutineaza Er in ser fiziologic.

 Atc aglutinanti sunt Ig M, iar neaglutinanti sunt Ig G.
 Atc neaglutinanti pot fi pusi in evidenta prin tehnici de
aglutinare artificiala (test Coombs).
 Testul Coombs are la baza antigenitatea moleculelor de Ig.
 Autoanticorpii Ig G fixati pe Er prin fragmentul Fab, expun
situsurile antigenice ale fragmentului Fc.
 Adaugarea reactivului antiglobulina umana la Er acoperite
cu Atc Ig G(neaglutinanti) declanseaza aglutinarea Er.
 Principiu

Reactivul antiglobulina umana este obtinut prin

imunizarea animalelor(iepuri ).
In functie de fractiunea plasmatica injectata se
obtine un reactiv antiglobulinic:
 Polispecific care contine la un loc Atc anti-
IgG,anti-IgA,anti-IgM si anti-C3.
 Monospecific:anti-IgG; Anti-IgM;anti-IgA;anti-
C3( anti-C3b si C3d) si anti-C4.
 Material

Eritrocite bolnav.
 -recoltare pe anticoagulant(EDTA-K3 sau
citrat de sodiu).
Ser antiglobulinic polispecific sau monospecific
( anti-Ig G,anti-IgA,anti-Ig M,anti-C).
Ser fiziologic.
 Tehnica de lucru

Eritrocitele se spala de 3 ori cu ser fiziologic.

Se efectuaza o hemaglutinare pe lama.
1 picatura Ser antiglobulinic polispecific si 1
picatura Er bolnav, se omogenizeaza.
Citirea se face dupa 10 min.(macroscopic si
microscopic).
TCD pozitiv= aparitia aglutinarii.
TCD pozitiv
TCD pozitiv
TCD negativ
TCD negativ
 TCD pozitiv

Densitatea moleculelor Ig pe Er este > 200.

TCD pozitiv cu reactiv polispecific necesita
precizarea tipului de proteina responsabila de
sensibilizarea Er.( se efectueaza TCD cu reactiv
monospecific anti-Ig G si anti-C3).
 TCD pozitiv cu reactiv monospecific

Anti-Ig G - Er sunt invelite numai cu Ig G(Ig G1 si

Ig G3, rar Ig G2 ;Ig G4 nu da hemoliza).
Anti-Ig G si Anti-C3 - Er sunt invelite cu Ig G si C3
in acelasi timp.
Anti-C3 - Er sunt invelite numai cu C3.
Anti-Ig A sau Anti-Ig M - ft rar.
Tipuri de pozitivitate TCD
 Semnificatie diagnostica

Valoare diagnostica.
Valoare prognostica.
Urmarirea evolutiei pacientului.
Urmarirea eficacitatii tratamentului.
 TCD pozitiv in:

 AHAI cu Atc la cald( inclusiv AHAI medicamentoase) unde TCD

este de tip Ig G si/sau C3d,C4.
 AHAI cu Atc la rece ,unde TCD este de tip C3d si/sau C4.
 Transfuzie de sange incompatibil cu TCD tip Ig G si/sau C3d, C4.
 BHNN cu TCD tip Ig G (rar C3d si/sau C4).
 Diferite boli ca: hepatita infect, pneumonia virala,MN,An
megaloblastica,LES,neoplazii,bolnavi cu dializa renala prelungita,
bolnavi cu interventie pe cord deschis.
 Sensibilizare in vitro a Er cu complement.
 La persoane sanatoase( 1 la 3000-10000).
 Sensibilizarea Er prin medicamente: penicilina poate da TCD tip
Ig G,rifampicina poate da TCD tip C3.
 TCD negativ

Negativitatea testului nu semnifica absenta

autoanticorpilor.
Exista AHAI cu serologie negativa.
Negativitate se poate explica prin:
 Natura moleculara a Atc (Ig A).
 Dispozitia particulara a Atc pe mb Er(TCD anti-lt usoare k sau
λ).
 Densitatea Atc pe Er prea slaba ptr pragul se sensibilitate al
tehnicii.( <200 molecule)
 Dozarea aglutininelor la rece

 PRINCIPIU

Autoanticopii de tip la rece sunt Ig M care se pun in

evidenta prin fenomenul de aglutinarea, in mediu
salin, fata de propriile Er sau izogrup normale, la
temperatura de +4°C.
Atc Ig M sunt macromolecule fixatoare de C si care
au specificiate anti-I, mai rar anti-i,anti-Pr.
 Material

Recoltarea se face cu tot materialul incalzit.

 Ser de bolnav:
 1 vacutainer fara anticoagulant.Se tine la termostat pana la
formarea cheagului.Imediat se separa serul.
Eritrocite de bolnav:
 1 vacutainer cu anticoagulant.(EDTA-K3/citrat Na)
Eritrocite de grup O/izogrup cu bolnavul.
Ser fiziologic.
 Tehnica de lucru

 Se spala Er de bolnav si Er de grup O cu SF tinut la termostat

( 37°C).
 Se fac suspensii 2v/100 SF din Er de bolnav si Er de grup O.
 Intr-un stativ se pun 2 randuri de eprubete de hemoliza.
 Se repartizeaza in fiecare eprubeta 0,2 ml SF.
 In prima eprubeta a celor 2 randuri se adauga 0,2 ml ser de bolnav.
 In fiecare rand de eprubete se fac dilutii binare.
 In primul rand ,se adauga in fiecare eprubeta 1 picatura din
suspensia de Er de bolnav.
 In al doilea rand ,se adauga in fiecare eprubeta 1 picatura din
suspensia de Er de grup 0.
 Se agita stativul si se pune la frigider ptr 60 min.
 Tehnica de lucru

Nr.tuburi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
SF 0,2 0,2 O,2 O,2 O,2 O,2 O,2 O,2 O,2 O,2
Ran Ser 0,2
d boln
1
Er 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic
boln
SF 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Ran
d2 Ser 0,2
boln
Er 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic 1 pic
grup
O
Dilutia 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/ 1/ 1/ 1/
binara 128 256 512 1024
 Citire

Se face macroscopic prin rotire usoara a eprubetei.

Se observa fenomenul de aglutinare.
Titrul aglutininelor la rece reprezinta dilutia
maxima la care se mai observa fenomenul de
aglutinare.
Titrul patologic>1/16.
Titrul fata de propriile Er este mai mare decat titrul fata
de Er de grup 0/izogrup.
Daca titrul este crescut urmarim si amplitudinea
termica a aglutininelor( temperatura la care Atc se
desprind de pe Er).
 Interpretare

In plasma persoanelor sanatoase se pot gasi titruri

mici de aglutinine la rece(<1/16) cu amplitudine
termica scazuta.
Aglutininele patologice au o amplitudine termica
ridicata(>25°C) ceea ce permite atasarea C in vivo
( optim la 20-25°C)si convietuirea pe Er a Atc si C
suficient de mult ptr a se ajunge la activarea lui C3.
 Interpretare

Amplitudine termica este mai importanta ptr

aprecierea prognostica decat titrul Atc.
Autoanticorpii de tip la rece se intilnesc in BAR
forma idiopatica(10%) sau forma secundara
(90%)ce insoteste unele infectii( MN si pneumonia
cu Mycoplasma),neoplasme limfoide( LLC,LMNH,B.
Waldenstrom),LES.