Validarea metodelor de

analiză
Parametrii de
performanță - 3
Parametrii de performanță
Cerință analitică Parametru de performanță Verificare / Validare
confirmare completă
Rezultat cantitativ, interferențe și influența Selectivitate / Specificitate nu da
acestora asupra rezultatului Sensibilitate nu da
Comparabilitate cu rezultatele altor Robustețe nu da
laboratoare
Identificarea analitului de interes și nivelul Domeniul de lucru da da
de concentrație Domeniul liniar da da
Limită de detecție da da
Limită de cuantificare da da
Comparație cu specificația, Acuratețe Precizie Repetabilitate da da
fidelitatea rezultatului Precizie da da
intermediară
Reproductibilitate da da
Justețe Bias da da
Recuperare da da
Comparație cu specificația Incertitudine de măsurare
11.04.2022
da da 2
Acuratețe (Exactitate) = Precizie + Justețe (1)
 Exactitate (acuratețe): grad de concordanță între rezultatul unei
încercări și valoarea de referință acceptată
 Precizie (fidelitate): grad de concordanță între rezultatele
independente ale unei încercări obținute în condiții prevăzute
 Justețe: grad de concordanță între valoarea medie a unui șir
mare de rezultate ale unei încercări și valoarea de referință
acceptată
 Validarea investighează acuratețea rezultatelor prin evaluarea
atât a efectelor sistematice, cât și a efectelor aleatorii asupra
rezultatelor unice
11.04.2022 3
Precizie vs acuratețe

Precizie slabă Precizie bună

Acuratețe slabă Acuratețe slabă

Precizie bună
Acuratețe bună
Precizie slabă
Acuratețe bună

11.04.2022 4
De ce lucrăm cu replicate

 Pentru estimarea cât mai sigură a preciziei (și a bias-ului)

 Pentru a lua în considerare cât mai multe dintre variațiile în
condițiile operaționale ale metodei verificate / validate, ce pot
apărea în utilizarea de rutină a metodei
 Scopul: determinarea variabilității maxime și nu minime de
operare!
 Câte replicate?
 EURACHEM: 10

11.04.2022 5
Acuratețe (Exactitate) = Precizie + Justețe (12)
Descriere
Tip de eroare Parametru cantitativă

Erori sistematice Justețe Bias

Incertitudine de
Erori totale Acuratețe măsurare

Repetabilitate
Precizie
Erori aleatorii Precizie intermediară
11.04.2022
Reproductibilitate 6
Precizie – repetabilitate (1)
 Repetabilitatea
 Definiție: fidelitate în condiții de repetabilitate (SR ISO 5725-1:1997,
punctul 3.13)
 obținerea celei mai mici variații a rezultatelor
 măsură a variabilității pe termen scurt
 măsurătorile se execută de același analist, în aceleași condiții de
echipament, calibrare, reactivi, într-un interval scurt de timp
 analiza probelor replicate ce conțin cantități cunoscute de analit:
același analist efectuează minim 10 măsurători repetate, pe o proba
reală de concentrație cunoscută, omogenă și stabilă sau pe un material
de referință, utilizând același echipament, într-o perioada scurtă de
timp 11.04.2022 7
Precizie – repetabilitate (2)
 se poate executa pe probe reale fortificate la nivele relevante de concentrație (LOQ,
1 x CMA, 1,5 x CMA, nivel de concentrație la care se face referire în datele de
fidelitate ale metodei standardizate, alte valori specificate în legislația conexă în
vigoare)
 Se exprimă în termeni de deviație standard (sr) sau deviație standard relativă (RSD)
∑𝒏𝒏 𝒙𝒙 𝟐𝟐
𝒊𝒊=𝟏𝟏 𝒙𝒙𝒊𝒊 −�
𝒔𝒔𝒓𝒓 = ;
𝒏𝒏−𝟏𝟏

𝑠𝑠𝑟𝑟
𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 = ;
𝑥𝑥̅

𝑠𝑠𝑟𝑟
𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 % = x100
𝑥𝑥̅

11.04.2022 8
 Limita de repetabilitate (r)
 Definiție: valoare sub care este situată, cu o probabilitate de 95%, valoarea
absolută a diferenței dintre două rezultate ale unei încercări în condiții de
repetabilitate (SR ISO 5725-1:1997, punctul 3.16)
 Limita de repetabilitate ”r”:
𝒓𝒓 = 𝒕𝒕 𝒙𝒙 𝟐𝟐 𝒙𝒙 𝒔𝒔𝒓𝒓 = 𝟏𝟏, 𝟗𝟗𝟗𝟗 𝒙𝒙 𝟐𝟐 𝒙𝒙 𝒔𝒔𝒓𝒓 = 𝟐𝟐, 𝟖𝟖 𝒙𝒙 𝒔𝒔𝒓𝒓
 n = numărul de măsurători repetate efectuate la nivelul de concentrație ales (n =
10).
 t = factorul Student bilateral pentru un număr specificat de grade de libertate și
un interval de încredere specificat. Pentru distribuție normală, un număr relativ
mare de grade de libertate și un nivel de încredere de 95%, t = 1,96 (ISO 5725-
6:2002, 4.1)

11.04.2022 9
Precizie - reproductibilitate

 Reproductibilitatea
 obținerea celei mai mari variații a rezultatelor

 o măsură a variabilității rezultatelor obținute între laboratoare diferite

 o măsură a variabilității pe termen lung

 grupurile de date obținute în condiții de repetabilitate sunt obținute în

laboratoare diferite, pe o perioadă extinsă de timp

∑𝒏𝒏 𝒙𝒙 𝟐𝟐
𝒊𝒊=𝟏𝟏 𝒙𝒙𝒊𝒊 −� 𝑠𝑠𝑅𝑅 𝑠𝑠𝑅𝑅
𝒔𝒔𝑹𝑹 = ; 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 = ; 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 % = x100
𝒏𝒏−𝟏𝟏 𝑥𝑥̅ 𝑥𝑥̅

Limita de reproductibilitate ”R”:

11.04.2022 10
Limita de reproductibilitate - R

 Definiție: valoare sub care este situată, cu o probabilitate de 95%,

valoarea absolută a diferenței dintre două rezultate ale unei încercări
în condiții de reproductibilitate (SR ISO 5725-1:1997, punctul 3.20).
 𝑹𝑹 = 𝒕𝒕 𝒙𝒙 𝟐𝟐 𝒙𝒙 𝒔𝒔𝑹𝑹 = 𝟏𝟏, 𝟗𝟗𝟗𝟗 𝒙𝒙 𝟐𝟐 𝒙𝒙 𝒔𝒔𝑹𝑹 = 𝟐𝟐, 𝟖𝟖 𝒙𝒙𝒔𝒔𝑹𝑹
 Informații despre 𝒔𝒔𝑹𝑹 și R
 Standardul de metodă (anexe)
 Studii ILC
 Scheme PT

11.04.2022 11
Precizie - precizie intermediară (1)
 precizia intermediară sau reproductibilitatea intra-laborator: este o măsură a
variabilității pe termen lung
 testele de repetabilitate pot supraestima precizia metodei analitice
 este necesară efectuarea de teste de precizie intermediară în cadrul aceluiași
laborator, dar în condiții extreme de repetabilitate
 10 măsurători repetate în duplicat, pe o proba reală de concentrație cunoscută,
omogenă și stabilă sau pe un material de referință utilizând:
 echipamente diferite (unde este posibil)

 analiști diferiți

 curbe de calibrare diferite

 o perioadă extinsă de timp

11.04.2022 12
Precizie - precizie intermediară (2)
 Alegerea nivelurilor de concentrație pentru probele reale
fortificate (unde este aplicabil):
 CMA
 1,5 x CMA
 Alt nivel, în funcție de cerințe specifice în laborator
 Limita de reproductibilitate intermediară:
 măsurarea situată între repetabilitate și reproductibilitate, când
operatorul și/sau echipamentul și/sau calibrarea pot varia, dar în
același laborator

11.04.2022 13
Precizie - precizie intermediară (2)
 estimarea preciziei intermediare: analiza de varianță unifactorială (ANOVA one-
way)
 Abordare:
 un set de date obținute în condiții de repetabilitate (N) pot fi grupate în funcție de
(p) grupuri: analist, echipament, ziua de lucru, etc.
 Varianța (dispersia) totală (SStot) a datelor obținute = suma dintre varianța inter-
grupuri (SSb) și varianța intra-grupuri (SSw)
Sursa Suma pătratelor Grade de Media pătratică Statistica p F critic
variației (SS) libertate (MS) testului F

Inter-grupuri SSb p-1 𝑆𝑆𝑆𝑆𝑏𝑏 𝑀𝑀𝑀𝑀𝑏𝑏

𝑀𝑀𝑀𝑀𝑏𝑏 =
𝑝𝑝 − 1 𝑀𝑀𝑀𝑀𝑤𝑤
Intra-grup SSw N-p 𝑆𝑆𝑆𝑆𝑤𝑤
𝑀𝑀𝑀𝑀𝑤𝑤 =
(reziduali) 𝑁𝑁 − 𝑝𝑝
Totală SStot = SSb + SSw N-1 11.04.2022 14
Precizie - precizie intermediară (3)

deviația standard de repetabilitate (sr) sau deviația standard intra-grup

𝒔𝒔𝒓𝒓 = 𝑴𝑴𝑴𝑴𝒘𝒘
contribuția dată de influența grupurilor asupra variației totale (sb) sau deviația
standard inter-grupuri
𝑴𝑴𝑴𝑴𝒃𝒃 − 𝑴𝑴𝑴𝑴𝒘𝒘
𝒔𝒔𝒃𝒃 =
𝒏𝒏
precizia intermediară (sl) reprezintă combinația dintre varianțele intra-grup și
inter-grupuri
𝒔𝒔𝒍𝒍 = 𝒔𝒔𝟐𝟐𝒓𝒓 + 𝒔𝒔𝟐𝟐𝒃𝒃

11.04.2022 15
Precizie - precizie intermediară (4)
Exemplu:
 se efectuează măsurători duplicate (n=2) pentru un nivel de concentrație specificat,
pe o perioadă de minim 10 zile (p=10), măsurătorile din fiecare zi făcându-se în
condiții de repetabilitate, dar variind analiștii și echipamentul (dacă este posibil, în
funcție de metodă)
 se obține un număr de N valori (N = n x p = 2 x 10 = 20), pe baza cărora, prin
intermediul analizei ANOVA unifactoriale se calculează valoarea preciziei
intermediare sl

11.04.2022 16