Mecanisme biochimice ale genotoxicitatii

Teme abordate:
Structura acizilor nucleici, rol in utilizarea informatiei
genetice
Genotoxicitate
Mutageneza alterarea endogena a ADN
alterarea exogena a ADN
Cai de reparare a ADN
Aneugeneza, clastogeneza
Carcinogeneza

 Acizii nucleici: rol in utilizarea informatiei genetice

a. Dogma centrala a geneticii
b. Replicarea semiconservativ
- sinteza ADN pe matrita ADN
c. Transcriptia:
- formare de ARN transcript primar
- prelucrare ARN transcript primar in:
ARN mesager (mRNA) 2-4%
ARN de transfer (tRNA) 515%
ARN ribozomal (rARN)
Ribozime si snARN 1-10% - rol in
prelucrare transcript primar
d. Translaia:
- sinteza de proteine cu participarea
mRNA, tRNA si a ribozomilor
- prelucrare proteine posttranslatie

 Structura primara a ADN

 Structura secundara a ADN

Dublu helix ADN
- golden helix
- 2 lanturi rasucite anti-paralel
- ADN - molecula flexibila
- indoire, desperechere,
intinderemelting ADN
- structuri diferite A, Z, B
- str. majoritara B mai stabila
- ADN molecula reactiva
- centre nucleofile
- leg. duble instabile
- susceptibil la modificari chimice
- alterare proprietati codificatoare
- alterare ADN induce:
- citotoxicitate efect acut
- genotoxicitate efect in timp

 ADN si histone in perechi de cromozomi omologi si

cromozomi neomologi X si Y

cromatida
centromer

 Ciclul celular
2 faze interfaza - faze G1, S, G2
- mitoza
Faza G0 celule linistite, desfasoara activitate specifica

 Genotoxicitate
- alterare material genetic si a mecanismelor implicate in diviz. celulara
- reversibila sau ireversibila
- fara consecinte daca se manifesta in zone ce nu codifica
- poate induce cancer, boli ereditare
- mai multe tipuri de efecte: mutageneza, aneugeneza, clastogeneza
Mutageneza
- proces de a genera mutatii in genom
- cauza mutatiilor replicarea cu fidelitate limitata a ADN, alterare ADN
marirea flexibilitatii genomului
- baza evolutiei si adaptarii, a afectiunilor ereditare, cancerului
- mutatii neutre sau daunatoare
- fiziologic, diversitatea genelor pentru Ig rezultat al hipermutatiei
- alterari microgenomice mutatii punctuale, deletii mici, insertii mici
- modificari ADN modificari ale bazelor, rupere dublu-helix
- reparare ca nonhomologous end-joining
- alterari macrogenomice aberatii cromozomiale alterari numerice si
structurale

Mecanisme ale modificarii endogene a ADN

apare in absenta factorilor de mediu
proces inevitabil
contributie la dezvoltarea cancerului si bolilor ereditare

A. Inlocuire baze
imperechere gresita fara complementaritate
- sursa de eroare replicare gresita
scapa actiunii exonucleazice a polimerazei si repararii
- determina mutatii in urmatorul ciclu de replicare daca nu se repara
B. Eliminare baze azotate
prin hidroliza leg.N-glicozidice si formarea unui situs abazic
C. Dezaminare baze
- citozina uracil cea mai frecventa, mai ales in ADN monocatenar
- adenina hipoxantina, guanina xantina
- 500 resturi citozina dezaminate zilnic formeaza o baza minora
- alterare citire in runda urmatoare de replicare (U:A), det. mutatie C-T
- mutatii spontane, motiv pt. eliminare U din ADN
- accelerata de NaNO2, NaHSO3
D. Oxidare ADN mediata de radicalul HO. si peroxinitrit ONOO- potentata de metale bivalente
- produs major 8-hidroxiguanina 1000-2000 leziuni/zi
- alte produse 8-nitroguanina, timin-glicol etc.

E. Formarea de aducti peroxizi lipidici ADN

aducti cu acroleina, crotonaldehida, hidroxinonenal, malondialdehida
- 1000 leziuni/zi, potentata de acumularea de metale bivalente (Cu, Fe),
exces de acizi grasi -6

F. Metilare ADN
fiziologic - metilare la C5 in secventele CpG reglare genetica
- metilarea neenzimatica in alte pozitii alterare ADN
- agent de metilare S-adenozilmetionina 6000 leziuni 7-metilG
1200 leziuni 3-metilA/zi
G. Incorporare uracil in ADN
H. Incorporare nuleotid polifosfati modificati (8-oxo-dGTP)
I. Incorporare 8-oxoguanina in ADN

Mecanisme ale modificarii exogene a ADN

rezultat al expunerii celulei la factori externi ce reactioneaza cu ADN
proces evitabil
agenti de mediu inductori: fizici radiatii
chimici carcinogeni chimici
origine biologica
- produsi ai activitatii umane

A. Alterare indusa de radiatii ionizante

- surse iradiereradon, roci, sol, rad. cosmice, raze X utilizate in medicina
- ionizarea cauzeaza alterare ADN formare de radicali cationici
- rezultat al actiunii speciilor reactive
B. Alterare indusa de radiatii UV - cel mai important carcinogen
-spectrul UV: UVA-320-400nm
UVB-290-320nm
UVC-100-290nm cele mai daunatoare
- leziuni UV majore:
ciclobutan-dimeri de pirimidine
fotoprodusi

C. Alterare indusa de chimicale

- altereaza bazele azotate, induc mutatii
- carcinogeni directi - nu necesita bioactivare
- carcinogeni indirecti necesita bioactivare
1. Carcinogeni directi agenti ce induc stres oxidativ peroxizi, OsO4,
cisplatin-like crosslinking intracatenar
agenti de alchilare simpli (metansulfonati etc)
2. Carcinogeni indirecti agenti alchilanti tip clorambucil, ciclofosfamida
- efecte mai slabe in celulele ce contin
aldehid dehidrogenaza hematotoxicitate
si toxicitate gastrointestinale reduse

- Hidrocarburi policiclice poluanti din mediu, ardere alimente

agenti activi dihidrodiol epoxizi - aducti
- Chinone ciclu redox ce form.
radicali liberi

 Clastogeneza
inducere aberatii cromozomiale rezultate prin pierdere, aditie, rearanjare
cromozomi, producere de fragmente (cromozomi acentrici, dicentrici,
micronuclei, etc.)
- expunere in faza G1, cu replicare in S o singura cromatida afectata
- expunere in S sau G2 afectarea ambelor cromatide
Aneugeneza
achizitia sau pierderea de cromozomi aneuploidie
- interfera cu mitoza alterare fus de diviziune
colchicina
antitumorale paclitaxel, podofilotoxina
antibiotice griseofulvina
- interfera cu meioza
- prezenta cromozomi nedisjuncti efecte ulterioare

 Reparare ADN presupune:

- recunoasterea alterarii
- indepartarea defectului
- repararea ADN
- unirea fragmentelor reparate
- muntatia depinde de rata de reparare, corectitudinea repararii
1. Antioxidanti neenzimatici si enzimatici
2. Excizie de baze mai multe enzime
glicozilaze hidroliza bazei situs abazic
liaza/endonucleaza indeparteaza deoxiriboza
ADN polimeraza - reparare
ADN ligaza leaga capetele
3. Excizie de nucleotide eliminare aducti liganzi-nucleotide
recunoastere defect
scindare fragment defect (25-30 nucleotide)
inlocuire sub actiunea ADN-polimerazei
unire capete cu ADN ligaza

4. Eliminare resturi alchil metil guanin ADN metiltransferaza

protectie fata de ag. alchilanti

5. Reparare lanturi fragmentate recombinare omoloaga

recombinare neomoloaga

A. Recombinare omoloaga unire cromatide surori

- dupa replicare, inainte de diviziune
- nu apare in faza G1
- act. exonucleaza producere cap 3
- invadare cromatida sora
- elongare capat scindat ADN polimeraza
- separare cromatide surori
- imperechere catene cromatida afectata
- elongarea catenei, refacere helix - ligaza
B. Recombinare neomoloaga nu necesita matrita cromatidica
apare in faza G1
- producere cap 3 - act. exonucleaza
- unire capete scindate
- elongarea catenei, refacere helix - ligaza

 Carcinogeneza
- posibilitate ca efectele mutagene sa determine dezvoltarea cancerului
- exista agenti mutageni ce nu au efect carcinogen si reversul
- cancerproliferare necontrolata, maligna a celulei somatice tumora

- cretere celular excesiv - celulele produc factori de cretere

care determin o stimulare autocrin/paracrin
- funcionare anormal a sistemelor reglatoare
- pierderea semnalelor inhibitoare (i.e. inhibitia de contact)
- invazivitate abilitatea de a invada esutul adiacent
- capacitate de metastazare mprtiere n locaii noi
-pierdere inhibiie contact celul-celul
- produc enzime litice
- circul prin snge pn la esutul int
- difereniere defectuoas i imortalitate - nu sufer apoptoza
- angiogeneza intensificata cresc noi capilare ce irig tumora
- instabilitate genetic material genetic mai puin stabil
- frecven mare a mutaiilor
- mutaii n protooncogene i gene supresie tumoral

Initiere, promovare, progresie tumorala

 Faza G0 a ciclului celular

G0 reprezinta:
- absenta semnalelor pentru mitoza
- represarea genelor necesare
celulele normale prsesc temporar
sau permanent ciclul
ies n G1, intr n G0
sunt celule linitite
rata metabolica redusa
nivel scazut al sintezei proteice
indeplinesc doar funciile specifice
multe celule difereniate, nu mai
reiau ciclul, funcioneaz pn mor
alte celule, dup G0 reintr n ciclu
i se divid
celulele cancerigene nu intra in G0
destinate repetarii ciclului nedefinit

Efectele carcinogenilor
Apariia de tumori neobisnuite
Cresterea incidentei aparitiei de tumori obisnuite
Cresterea multiplicarii

Tipuri de carcinogeni
- Carcinogeni ce afecteaza ADN - agenti genotoxici/mutageni
- carcinogeni direct, procarcinogeni,
compusi anorganici
- Carcinogeni epigenetici promotori tumorali, agenti mitogeni
hormoni estrogeni
solizi azbest
- Substante cu actiune imunosupresiva
- Agenti ce favorizeaza dezvoltarea cancerului
- Virusuri