BIOLOGIA MOLECULARA SI

EVOLUTIA GENELOR

bBILCEC IEPAN MARIA EMILIA

 ISTORIC
• 1950- molecula de ADN este detinatoarea
informatiei ereditare

•1953-Watson si Crick
descopera configuratia
helicoidala a moleculei de
ADN

• 1962-premiul Nobel
 STRUCTURA SI ORGANIZAREA
ADN-ULUI
• ADN este un polimer
• lungimea si greutatea moleculara sunt uriase, permitand
stocarea unei cantiati imense de infromatie ereditara
• 98%- nucleu
• 2%- citoplasma (mitocondrii)
• unitatea de baza este NUCLEOTIDUL
 STRUCTURA SI ORGANIZAREA
ADN-ULUI
Nucleotid= baza azotata+glucid+fosfat
In molecula de ADN exista 4 tipuri de
nucleotide care difera prin baza azotata

Baza azotata
Grupare
fosfat

Glucid
• Baza purinica=A (adenina) si G (guanina)
• Baza pirimidinica= T (timina) si C (citozina)
• Glucidul= dezoxiriboza
» Pentoza
» Gruparile hidroxil se leaga de gruparile fosfat formand
scheletul fosfoglucidic al moleculei de ADN
• molecula de ADN este bicatenara, fiind formata
din 2 catene polinucleotidice antiparalele legate prin
legaturi de hidrogen
• Structura primara-
secventializarea nucleotidelor intr-o
catena de ADN

• Structura secundara-configuratia spatiala

bicatenara

• Structura tertiara- organizarea tridimensionala

realizata de dublul helix in absenta legarii de
proteine

• Structura quaternara- plicaturarea helixului legat

de proteine
Structura secundara a ADN-ului

• Cele doua catene anti-paralele sunt infasurate una in

jurul celeilalte si in jurul unui ax central
in forma de dublu helix
• Forma cea mai frecventa: ADN rotit spre dreapta
• Scheletul fosfoglucidic – orientat spre exterior
• Bazele azotate
orientate spre interior
protejate de actiunea factorilor de
mediu
• Structura de dublu helix este mentinuta
stabila prin legaturile de hidrogen
Structura secundara a ADN-ului
 POLIMORFISMUL MOLECULEI DE ADN
• Molecula de ADN= molecula dinamica
• Trei forme de ADN care apar in mod
natural:
POLIMORFISMUL MOLECULEI DE
ADN
• Fiecare conformatie (B,Z,A) prezinta
parametrii specifici:

Diametrul helixului

Numarul de baze azotate/ pasul

spiralei

Distanta dintre planurile bazelor

azotate
FORMA B
• Cea mai frecventa forma
Majora
• Prevalenta in conditii fiziologice
• La suprafata helixului- 2 incizuri
Minora
 FORMA Z
• Intalnit in regiunile in care ADN este bogat in
G-C
• Se poate forma in vivo- functia necunoscuta
• O singura incizura
• Dublu helix-rotit spre stanga
 FORMA A
• Intalnita in regiunile in care hidratarea este scazuta
si concentratia de cationi este crescuta.
Majora- adanca, ingusta
• 2 incizuri - greu accesibila pentru proteine

Minora -lata
-accesibila pentru proteine
- continutul informational mai redus
decat in incizura majora

• Helixul este mai scurt si

mai lat .
 ORGANIZAREA ADN–ului
NUCLEAR
• ADN genomic- 3 miliarde de baze azotate

»in genomul uman exista~ 30.000

gene care codifica proteine
Tipuri de organizare a secventelor
nucleotidice din ADN-nuclear
• Functional :

• ADN codant
• ADN non-codant

• Ca preponderenta:

• ADN repetitiv

• ADN unic
 Secvente reglatoare ale
ADN- codant transcriptiei
INTRONI
10 % din genom
codifica proteine
structurale,
functionale
ADN-
NONCODANT
caractere fenotip
90% din genom

GENE PSEUDOGENE
 ADN-
• REPETITIV
o secventa nucleotidica se poate repeta de mai
multe ori in molecula de ADN a unei celule
• ADN repetitiv= secvente nucleotice care
se repeta de mai mult de 20 de ori/genom

• Elementele repetitive pot fi dispersate in

genom
dispuse in
tandem
• In functie de numarul de repetari al unei
secvente:
ADN-
inalt
repetitiv

ADN-
moderat
repetiv

ADN- UNIC
 ADN- ÎNALT REPETITIV
• Reprezentat de secvente de ADN foarte scurte
repetate in tandem
• Se gasesc in milioane de copii
• 10% din genom
• Rolul nu este deplin cunoscut
• Repetarile in tandem reprezinta repetari
adiacente ale unei secvente constituite
din doua sau mai multe nucleotide
• In functie de marimea acestor repetarii:

ADN- SATELIT ADN- miniSATELIT ADN- microSATELIT

 ADN- ÎNALT REPETITIV
ADN-SATELIT
5-10% din genom
Regiuni heterocromatice
Pericentromeric-atasarea
cromatidelor la fusul de diviziune
Telomeric-rol in replicare
ADN-microSATELIT
Secventa1-6 nucleotide Frecvent-
repetari de 2 nucleotide
(CACACA….)
Rar- repetari de 3
nucleotide
(rol in patologie)
CAG- Boala Huntigton
ADN- miniSATELIT
(secvente hipervariabile)
•Secvente 14-100 P.B.
•Regiunea telomerica
•rol nu este bine cunoscut
•reprezinta locurile unde au loc
cu predilectie recombinari
omoloage in celule
ADN-TELOMERIC
•fam. de ADN-minisatelit
•format din repatari in
tandem de 6 nucleotide
•repetarile responsabile de
functiile telomerelor
• ADN-SATELIT

ADNα-satelit

•subtip de ADN-satelit

•format din 171 p.b

•este ADN-ul de legatura

al heterocromatinei
centromerice
 ADN-Moderat repetitiv
(elemente transpozabile)
• Este reprezentat de secvente scurte de ADN, care
se gasesc in nr.de sute de mii in genom
• 35% din genom
• Se gaseste in :

• Elemente scurte intercalare

SINEs

• Elemente lungi intercalare

LINEs

• Genele care codifica ARNr si ARNt

Elemente scurte intercalare-SINEs
-short interspersed repeated sequences-
• Formate din 100-400 pb
• Reprezinta 14 % din genom
• Nu codifica proteine si nu sunt autonome
• Secventele Alu
» 10 % din genom
» Specifice primatelor
» Se afla in introni
» Rol:initierea replicarii in diferite puncte ale ADN
» Actioneaza ca elemente transpozabile
» Prin modificarea pozitiei in genom se pot integra
intr-o gena structurala importanta, modificand astfel
functionalitatea genei.

Insertia unui element Alu in gena NF1 (cromosom17)

Tablou clinic din neurofibromatoza

Consecinta clinica a insertiei
secventei Alu in cadrul genei NF1
Gena LDLR contine secvente ALU in introni,
recombinarea intre doua secvente ALU
determina formarea unei gene cu mutatie,o
proteina receptor defectiva
Insertia secventei ALU in cadrul genei care specifica
R-LDL

Alterararea fuctiei
genei

HIPERCOLESTEROLEMIE
FAMILIALA
 Elemente lungi intercalare- LINEs
long interspersed repeated sequences
LINE 1-rol activ ca element
• Formate din 5-7 kb transpozabil
• 21 % din genom -cel mai important element
transpozabil din genomul
• Consta din 3 familii uman

LINE 2

LINE 3

• insertia secventei LINEs intr-o gena

modifica functionalitatea genei

stare patologica

(ex:Hemofilia A, B; Miodistrofia Duchenne)

 Importanta repetarilor nuclotidice in
studiile genomice umane
• Datorita faptului ca aceste elemente sunt inalt
conservate, polimorfe si se gasesc in
intregul genom, ele sunt utile studiilor genetice
in:
Identificarea persoanelor

Antropologie si evolutionism

Studii populationale si de filiatie

Studii de lincaj genetic

Studii de cartografiere genica

 ADN-UNIC (nerepetitiv)
• Reprezentat de secvente care nu se
repeta in genom

• La nivel cromozomial se gaseste in benzi

eucromatice

• La nivel genic se gaseste in :

Exoni (portiunile codante ale genelor)-2%
Introni Functia nu este
Regiunile care separa genele cunoscuta la acest
nivel
 ADN-MITOCONDRIAL
• Mitocondriile contin genom autonom
• ADN-mitocondrial- 16569 nucleotide
• 1 celula

sute de mitocondrii

o mitocondrie-2-20 molecule
ADN-dublu catenar circular
 DIFERENTE INTRE ADN-NUCLEAR SI
ADN-MITOCONDRIAL
• nu este asociat cu proteine
• nu contine ADN-repetitiv
• nu contine promotori individualizati
• gene din ADN-mt au structura continua (fara
introni)
eretici)
• din 64 de codoni, 4 au alta semnificatie
• modul de transmitere-exclusiv matern
• (codoni
In aceasi celula: ADNmt normal
ADNmt cu
mutatie

determina scaderea
energiei in celula
 BOLI DETERMINATE DE MUTATII ALE
ADN-mt

tablou clinic complex

Implica:
• Neuronii (afectare
neurologica severa)
• Sistemul muscular

Afectiuni determinate
de mutatii ale genelor
ADNmt:

Neuropatia
optica ereditara
Leber