DOGMA CENTRALĂ

Materialul genetic la
eucariote

ARN

ADN
 Materialul genetic la procariote

ADN bacterian
• ADN este sub forma circulara
– cromosomul unic

• ADN plasmidic - plasmidele

contin 3 – 200 gene optionale
ADN plasmidic
 Importanta plasmidelor
• Vehicule pentru ADN in tehnologia ADN-ului
recombinant
• Proteine obtinute
– Interferonii sunt proteine secretate de celule infectate
de virusuri, eliberate in mediul inconjurator apara alte
celule de invazia virala
– Insulina umana
– Hormonii de crestere umana
– Proteina antihemofilica
– Eritropoetina
• In plasmide sunt gene care dau rezistenta la
antibiotice
 Esenta replicarii ADN
• O gena are intre cateva sute pana la
cateva mii nucleotide

• Nucleotidul ?
rest de acid fosforic

nucleotid
Pentoza (dezoxiriboza)

baza azotata

Purinica - adenina
Pirimidinica - timina
- guanina
- citozina
Molecula de ADN
Replicarea ADN
Replicarea
la procariote
 2. Particularitati ale replicarii la
eucariote
• Originea furcilor de replicare apar grupe
de 20 – 80
• Grupele se numesc:
– Unitate de replicare (replicon); repliconii se
activeaza treptat in faza S a ciclului celular
• ADN polimerazele la eucariote sunt diferite
de cele de la procariote
 Particularitati ale replicarii la eucariote
ADN
Ochi de replicare Originea replicarii

ADN nou

repliconi

Estensia
repliconilor

ADN
replicat

viteza este de 10x mai mica .

replicarea pe fiecare cromosom incepe simultan în mai multe puncte de origine (~ 100)
originea furcilor de replicare apar grupe de 20 – 80 (repliconi)
ADN polimerazele la eucariote sunt diferite de cele de la procariote
Replicarea ADN se face paralel cu sinteza
de histone
 Replicarea este
conservativa / semiconservativa
 Etapele experienţei lui Meselson şi
Stahle
bacteria crescută mai multe generatii pe
mediu cu 15N

bacteria crescută pe mediu cu 14N

după un singur ciclu celular se extrage

ADN şi se entrifughează.

se constată că sedimentează sub ADN

cu 15N şi deasupra ADN cu 14N.
 Mutaţiile
• modificarea secventei normale a
nucleotidelor din ADN.
• apar:
– spontan
– sau induse de factori mutagen
• au rol:
– pozitiv dacă se produc la nivel scăzut
– negativ dacă se produc peste o anumită limită
 moarte sau transformare malignă.
 Tipuri de mutaţii
• Punctiforme
– un nucleotid modificat
• Mutaţii punctiforme spontane sunt:
– deaminarea citozina prin hidroliză trece în
purina
• În celulele normale existând 100 mutaţii / zi.
– depurinarea pierderea unei baze purinice
• În celulele normale peste 5000 mutaţii / zi.
 Agenţii mutageni chimici
• agenţii alchilanţi
– introduc grupări alchil în ADN (metil, etil)
– sunt cancerigeni
• Celulele maligne deoarece au mecanisme
reparatorii deficitare sunt mult mai
sensibile
– Derivaţii de nitrozouree sunt folosiţi în
tratamentul leucemiilor
 Substanţele care se intercalează
între benzile de ADN
• Stabilesc legături între punţile de AND
– Bromura de etidium este fluorescentă în UV
• se foloseşte la identificarea benzilor de ADN electroforeza acizilor
nucleici.
• este carcinogenă
– Cofeina – cancer de cap de pancreas
– Sărurile de platină (cisplatinul) tratamentul cancerului testicular
– Psoralenul în tratamentul psoriazisului
• Pe cale orală ajunge în sânge  piele; se expune pielea bolnavă la
UV  descoamarea pielii.

• Celulele normale au mecanisme reparatorii

• Absenţa lor duce la apariţia de boli genetice: anemia Fanconi
caracterizată prin deficite imunitare mari
• Poate să fie însoţită de intârzieri în creştere, leucemii, cancere.
 Agenţii fizici
• UV – leziuni caracteristice dimerului de timină
• Leziunile sunt reparate pe două căi:
– directă: printr-o enzimă de fotoreactivare când zona
este recunoscută, iar enzima desface legăturile
covalente  perechile de baze.
– dacă dimerul face parte dintr-o zonă extinsă intervin
în ordine:
• o endonuclează – taie dimerul
• o exonuclează - îndepărtează dimerul
• ADN polimeraza – asamblează un lanţ nou
• ligaza –leagă lanţul nou de cel existent
• Dacă mecanismele nu funcţionează apare
Xeroderma Pigmentozum.
 Radiaţiile ionizante (X, , , )
• determină leziuni la nivelul ADN
– ruperea ambelor lanţuri
– modificări de baze
• Dacă mecanismele sunt deficitare:
• Ataxia Teleangiectasia
– boală genetică
• Radiaţiile ionizante sunt utilizate în tratamentul:
– cancerelor
– radioterapie.
 Inhibitori ai biosintezei ADN
• Antibioticele împiedică dezvoltarea bacteriană
sau virală
– la nivel molecular
– în doze mici printr-o acţiune selectivă
– Ex. inhibitori ai biosintezei ADN
• acidul Nalidixic
• acidul fosfonoacetic inhibă selectiv polimerazele ADN viral
• Citostaticele acţionează pe celula tumorală:
– Arabinozincitozina
– Arabinozinadenina
– Neocarcinostatina.
 Structura ARN

T
Structura ARN
ADN mARN
 Fosfor radioactiv
infectare

E-coli +
T2

ARN - radioactiv
ADN
+
ARN
ADN
ARN ADN
molecula hibrida
 Trancrierea la procariote

ADN

transcriere

ARN

traducere

proteine
 Particularitati ale transcrierii la
eucariote
• Exista 3 ARN-polimeraze
– ARN-polimeraza II produce toti precursori
mARN

– ARN-polimeraza I produce speciile de rARN

– ARN-polimeraza III sintetizeaza

• tARN
• rARN 5S
 Particularitati ale transcrierii la eucariote - maturare ARN-ul

exoni
introni

transcriere
5’ 3’
ARN primar
maturarea ARN

7 metilguanozina
100-200 resturi de acid adenilic

mARN

proteine

Genele la eucariote sunt discontinue avand introni si exoni

 Transcrierea - aplicatii medicale
• Inhibitori ai transcrierii:
– Rifamicina – extrasa din Streptomyces
– Rifampicina – derivat semisintetic
• Inhiba initierea transcrierii mARN la bacterii:
• Actioneaza asupra subunitatii Beta din transcriptaza
• Impiedica formarea primei legaturi fosfodiesterice
– Actinomicina D
• inhiba in mod specific transcrierea fara a inhiba:
replicarea
biosinteza
 Traducerea - codul genetic
• Este triplet – fiecare aa este codificat de 3
nucleotide
• codonul este format din 3 nucleotide
• 64 codoni
• 4 elemente (4 baze) luate de 3x (codul genetic este triplet)
• 3 codoni au semnificatia de stop sinteza
• 61 codoni codifica 20 aa
• Codul genetic este degenerat:
• Un aminoacid este codificat de mai multi codoni
• Codul genetic este universal
• Codonii au aceeasi semnificatie la bacterii, plante, om.
 Traducerea
• Traducerea se efectueaza la nivelul
ribosomilor
– 4 baze azotate (patru litere) intr-un limbaj
– 20 amino acizi (douazeci litere)
• Traducerea informatiei genetice codificata
in gene in lant polipeptidic se face pe baza
unui cod genetic
 ribosomii

autasamblareaNomura în 1968
 Traducerea – aplicatii medicale

Antibiotice ce inhibă sinteza proteinelor pot sa actioneze pe

Traducerea – aplicatii medicale
Streptomicina – interactioneaza cu
proteina 12S – determina citirea
gresita a mARN
Mutatii la proteina proteina 12S →
rezistenat la sreptomicina

Tetraciclina împiedică legarea

legarea aminoacil-tARN-ului pe
ribosom

cloramfenicolul acţionează pe subunitatea

50 S (procariote) inhibă peptidiltransferaza
 Traducerea – aplicatii medicale

ciclohexamida acţionează pe subunitatea 60 S

inhibă peptidiltransferaza
Traducerea – aplicatii medicale
Puromicina

structură asemănătoare cu ARNt.

înseală ribosomul legându-se pe locul A.
având o legătură NH2 liberă activează factorul de eliberare  desprinde prematura
a lanţul polipeptidic sub forma de peptidil puromicină  terminare prematură
a servit la descoperirea locurilor A şi B de pe ribosomi.
Traducerea – aplicatii medicale
• Toxina difterică blochează faza de
elongare la eucariote

• Inactivează translocaza.
 Particularitati ale organizarii si exprimarii
materialului genetic la virusuri
• Materialul genetic:
• ADN
• ARN – depozitar al informatiei
genetice (mozaicul tutunului)

• Acidul nucleic este imbracat in

• Capsida
• Invelis ce contin lipide si
glicoproteine
• Nr de gene este intre 3 si 250
 Virusurile cu ADN
• Unele virusuri pot avea ADN dublu catenar de
formă:
– lineară
– circulara
• La bacteriofagul lamda forma liniara se schimba
in forma circulara
• Alte virusuri au lantul de ADN monocatenar (la
bacteriofagul Ø 174 secventa de ADN este citita
in doua feluri rezultand 2 proteine)
 Virusurile cu ARN

Particularitati de exprimare a
materialului genetic
1. ARN viral functioneaza ca si mARN pt
celula gazda

ARN viral`= m ARN

traducere
2. ARN viral este matrita pentru mARN in
celula gazda

m ARN

transcriere traducere

ARN
3. ARN viral este matrita pentru ADN pentru
celula gazda
Harta genomului virusului HIV
4= proteine mici ce care 4
regleaza expresia
genelor virale

1 3
2

1 = proteinele capsidei 3 = revers transcriptaza

integraza

2 = proteinele anvelopei
Amendamente la docma centrala
1.genele îşi pot schimba poziţia pe cromosom

gene

gena transpozabila
2.transcriere inversă a informatiei genetice

ADN ARN proteine

Aplicatii medicale : Dg HVC

3.genele de la eucariote sunt discontinue
4.la eucariote nu există coliniaritate datorită
înădirii ADN

ADN

ARN imatur

ARN matur

proteine
5.la procariote ARNm şi polipeptidul este coliniar

ADN

transcriere

ARN

traducere

polipeptidul
6.la procariote ARNm este policistronic
o gena codifică mai multe proteine

ADN

proteine
 7. doua sau mai multe gene codifică mai multe
proteine
1 2 3 4 5 6
ADN

codifică

proteine
v
8. exită gene care nu codifică proteine

proteina
proteina
proteina proteina
proteina
proteina
9. genomul mitocondrial

-nu foloseşte acelaşi cod genetic

-se transcriu ambele catene

-se clivează asimetric

mai multe proteine