W&k Structura primar i secundar a ADN

Structura primar a acizilor nucleici [ADN]

Acizii nucleici sunt substane chimice macromoleculare cu mas molecular de peste 10 000 daltoni, fiind polimeri de nucleotide. Daltonul este o unitate de mas molecular, fiind a dousprezecea parte din masa unui atom de carbon (1,66 x 10~24 g), 8 aproximativ egal cu masa unui atom de hidrogen. Macromolecula de ADN de la bacteriofagul c x 174 are masa molecular p de 1,7 x IO6 daltoni, iar ADN bacterian are o mas molecular cuprins ntre 4 x IO6 i 5 x IO6 daltoni.

Capitolul 2
Structura primar a acizilor nucleici este o structur monocatenar i rezult n urma polimerizrii nucleotidelor. Polimerizarea lor este facilitat de structura chimic a elementelor componente i de legarea lor n molecula de nucleotid. Dou nucleotide alturate se leag prin intermediul unui radical acid fosforic. Acesta unete pentozele a dou nucleotide vecine n poziiile C 5 -C 3 ' sau C3'-C5' (fig. 7). Astfel, dac ntr-un nucleotid radicalul acid fosforic este legat de atomul C 5 ' al pentozei, acesta se va lega de pentoza nucleotidului alturat la atomul C3', cu eliminarea unei alte molecule de ap. n acest fel rezult lanuri de polinucleotide (fig. 7). Caracteristica unei structuri primare monocatenare este dat de secvena (ordinea) nucleotidelor din catena de acid nucleic, caracteristic pentru o anumit molecul de acid nucleic. Structura primar este caracteristic pentru acizii ribonucleici i pentru moleculele de ADN de la unele virusuri (virusul c x 174, geminivirusuri p de exemplu). De menionat c n molecula de ARN pot exista regiuni bicatenare, prin rsucirea macromoleculei, pe mici poriuni, n jurul propriei axe i formarea de puni de hidrogen de tipul A = U, respectiv G = C (A = adenin, U = uracil, G = guanin, C = citozin).

Structura secundar a ADN

Structura secundar a macromoleculei de ADN a fost stabilit n anul 1953 de J.D. Watson, F.H.C. Crick i M.H.F. Wilkins (Premiul Nobel pentru medicin i fiziologie n anul 1962). Ea corespunde tipului B de ADN, prezent n regiunile cu eucromatin, care conin gene active metabolic. Conform acestui model, molecula de ADN este alctuit din dou catene macromoleculare, antiparalele, cu direcie diferit de naintare (antiparalele), rsucite n jurul 9

Fig. 7. Structura primar a acizilor nucleici

Partea I unui ax comun, avnd forma unei scri n spiral (fig. 8). dou perechi alturate de nucleotide este de 3,4 A. Diametrul elicei, la tipul B al ADM, este de 19 (fa de valoarea de 20 stabilit iniial). Dublul helix prezint rsucirea spre dreapta, fiind uor asimetric i prezint dou scobituri: scobitura mare i scobitura mic. Acestea reprezint locul unde acioneaz factorii mutageni.

3,4 nm

Timin

h3Cx HC
Fig. 8. Structura spaial a moleculei de ADN.
//

Punte de hidrogen

'C.

r Cele dou balustrade ale scrii sunt reprezentate printr-un schelet glucido-fosforic, iar treptele scrii sunt reprezentate prin baze azotate ntre care se stabilesc puni de hidrogen de natur electrostatic de tip A = T, respectiv G = C i invers (fig. 9). Prin aezarea n interiorul moleculei a bazelor azotate i a punilor de hidrogen, acestea sunt protejate de aciunea diferiilor factori de mediu, asigurndu-se stabilitatea moleculei i implicit a informaiei genetice, conferit de ordinea de nuleotide dintr-o caten. Datorit faptului c pot exista numai patru tipuri de legturi de hidrogen, A = T, G = C, respectiv T = A, C = G, se asigur reproducerea cu mare fidelitate a informaiei genetice n urma procesului de replicare. Pasul elicei (o rotaie complet a celor dou catene n jurul unui ax comun) este de 34 A. Deoarece la un pas al elicei se afl 10 perechi de nucleotide, distana dintre 10
Grup glucido-fosfat

,0-.., T T H * L / T. S N \\ \ . / ^ C SN
q H
N

Adenin

X Grup glucido-fosfat

Citozin

HC \ v w \ N . ,/ / ^C' w Grup
glucido-fosfat

y/V

H \ N-

-H-. "O

Guanin

-..TT N \ A , "11-N'
\

C'

CH

o...

^CN

\\

Grup glucido-fosfat

Fig. 9. Punile de hidrogen formate ntre bazele azotate din cele dou catene ale moleculei de ADN

Partea!

Fenomenul de denaturare - renaturare. Hibrizii moleculari

Prin nclzirea unei soluii de ADN la o temperatur de 85C-95C sau prin men inere la o concentraie ridicat de sruri, legturile de hidrogen dintre cele dou catene complementare se pot rupe. Procesul este numit denaturare, rezultnd ADN denaturat monocatenar (fig. 11). Temperatura de denaturare (punctul de topire al ADN), difer de la o specie la alta, fiind dependent de procentul de legturi triple de hidrogen (G = C) i proporional cu procentul acestora n molecula de ADN. Dac soluia de ADN monocatenar este rcit brusc, cele dou catene nu se mai reunesc (nu se mai refac punile de hidrogen), rezultnd ADN monocatenar. Renaturarea reprezint capacitatea catenelor complementare de a reface dublul helix. Procesul are lor printr-o rcire treptat, lent, care permite refacerea punilor de hidrogen i reasocierea catenelor, rezultnd ADN renaturat (fig. 11). Procesul de renaturare se produce n dou etape. In prima etap, o caten de ADN din

12

soluie se mperecheaz cu alt caten la ntmplare, formndu-se scurte regiuni bicatenare. Ulterior, n etapa urmtoare, regiunea de baze mperecheate se extinde de-a lungul moleculei, ntreaga molecul devenind bicatenar. Hibridizarea implic refacerea unui dublu helix, pornind de la catene de ADN de origine diferit sau de la o caten ADN i o caten ARN. Hibridizarea se poate realiza pe dou ci: hibridizare lichid (atunci

Capitolul 2
cnd cele dou preparate de ADN monocatenar sunt amestecate n soluie) i hibridizare de filtru (prin imobilizare pe un filtru de hibridizare). Pe baza unor experimente de hibridizare i stabilind procentul de realizare a secvenelor dublu catenare, se poate observa nrudirea dintre specii (rol n stabilirea relaiilor filogenetice dintre specii), fiind totodat o metod de lucru utilizat n tehnologia ADN-recombinant.