Sunteți pe pagina 1din 39

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului

Elev: Vaipan Vasilica

Profesor ndrumtor: Nuna Cora Mihaela

Grup colar Simion Brnuiu Carei 2010-2011

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

CUPRINS

1. Introducere .................................................................................................. 3 2. Pregtirea instrumentelor i echipamentelor specifice n vederea recoltrii probelor i analizelor microbiologice ................................................................. 5 3. Recoltarea probelor de sol cu instrumentele specifice ................................. 7 4. ntocmirea fiei de recoltare a probelor ..................................................... 19 5. Determinarea microorganismelor din sol ................................................... 20 6. Concluzii..................................................................................................... 23 Anexe: .............................................................................................................. 27 Bibliografie: ...................................................................................................... 39

Vaipan Vasilica

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

1. Introducere

Solul este un sistem dinamic vital pentru activitile umane i pentru meninerea ecosistemelor.Ca interfa dintre scoara terestr, atmosfer i hidrosfer, solul este o resurs neregenerabil care ndeplinete numeroase funcii vitale: producerea de biomas; depozitarea, filtrarea i transformarea unor substane organice i minerale; surs de biodiversitate, habitate, specii i gene; mediu fizic pentru oameni i activitile umane; surs de materii prime. n sens evoluional, microorganismele (n primul rnd microorganismele heterotrofe) sunt ageni reciclatori responsabili cu meninerea biosferei. Aceti ageni valorific termodinamic, favorabil, reaciile chimice obinnd carbon i energie din biomasa moart. Ca rezultat al procesele microbiene de degradare, nutrienii eseniali prezeni n biomasa unei generaii de organisme sunt disponibile pentru urmtoarea generaie. Impactul activitilor umane asupra calitii solului s-a intensificat de-a lungul ultimelor decenii datorit creterii populaiei i exploatrii extensive a resurselor naturale, inclusiv a solurilor. Urmtoarele procese pot fi menionate ca principale surse de impact asupra calitii solurilor: emisiile n atmosfer provenite n principal din industrie i trafic; tehnicile agricole n special utilizarea fertilizanilor organici sau minerali i a pesticidelor; deeurile depozitate pe sol. Ritmul de producere i dispersie a poluanilor a depit, n prezent, procesele naturale de biodegradare. n cutarea remediilor tehnologice a polurii mediului, procesele fizice i chimice pot fi eseniale, dar i procesele microbiologice ofer importante perspective. Microorganismele i comunitile microbiene pot constitui o unitate de msur integrat a calitii solului, un aspect care nu poate fi obinut prin determinri fizice sau chimice i/sau analize ale organismelor mari. Pentru prevenirea consecinelor ecologice ireversibile, parametrii bacterieni care s-au

Vaipan Vasilica

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

dovedit a fi sensibili la poluarea cu metale grele vor putea fi inclui n studiile de evaluare i n strategiile de monitorizare a solurilor poluate.

Vaipan Vasilica

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

2. Pregtirea instrumentelor i echipamentelor specifice n vederea recoltrii probelor i analizelor microbiologice

Pentru recoltarea solului n structur artificial se folosesc fise de diferite tipuri n funcie de adncimea la care dorim s efectum recoltarea i de natura solului, fie casmale sau lopei cu care se sap un an pn la adncimea dorit de unde se recolteaz apoi proba de sol. Pentru recoltarea solului de la suprafa, se folosesc spatule de metal cu ajutorul crora se racleaz suprafaa solului. Solul se recolteaz n recipiente de sticl sau polietilen cu gtul larg i nchidere ermetic, splate n prealabil cu amestec sulfocromic (cele din sticl) sau cu detergeni (cele din polietilen).Se cltesc bine cu ap de robinet, ap distilat i bidistilat i apoi se usuc. Recipientele se sterilizeaz n autoclav (sterilizare umed) la 120 grade timp de dou ore sau n etuv (sterilizare uscat) la 120 grade timp de dou ore.

Vaipan Vasilica

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Prelevarea i analizarea probelor de sol se va face n conformitate cu urmtoarele prevederi: a) prelevarea de probe de sol n scopul estimrii nivelului de poluare se va face n conformitate cu prevederile Ordinului ministrului apelor, pdurilor i proteciei mediului nr. 184/1997 privind Procedura de realizare a bilanurilor de mediu; b) laboratoarele care execut analize de poluani din soluri vor utiliza probe de referin pentru a confirma acurateea i precizia tehnicilor analitice folosite.Aceste probe de referin trebuie analizate mpreun cu probe prelevate din fiecare zon a terenului i toate probele vor fi analizate cu metodologia adecvat, conform standardelor n vigoare; c)n situaiile n care pentru anumii poluani nu exist metode standard de analiz, se vor folosi metodele analitice agreate la nivel internaional, care vor fi difuzate autoritilor competente de ctre autoritatea central pentru protecia mediului; d)rspunderea pentru acurateea i precizia rezultatelor analizelor privind concentraiile agenilor poluani n soluri va reveni prii care execut prelevarea probelor i laboratoarelor care execut analizele.

Vaipan Vasilica

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

3. Recoltarea probelor de sol cu instrumentele specifice

Recoltarea probelor de sol destinate analizelor fizico-chimice i biologice se realizeaz conform normelor metodologice prevzute n STAS 7184/1-84 Soluri. Recoltarea probelor pentru studii pedologice i agrochimice i au fost prelucrate n conformitate cu normele standardelor SR ISO 103816:1997: Calitatea solului. Linii directoare pentru colectarea, manipularea i conservarea solurilor destinate unui studiu n laborator a proceselor microbiene aerobe i SR ISO 11464:1998: Calitatea solului. Pretratamentul eantioanelor pentru analizele fizicochimice. Pentru analiza fizico-chimic a solurilor proba se recolteaz la adncimea 0-20 cm, n condiii sterile. Probele individuale se recolteaz cu ajutorul unui prelevator de probe de sol tip MOLE din 3 puncte diferite i amestecate mpreun pentru obinerea unei probe compuse pentru fiecare zon analizat. Probele compuse obinute se utilizeaz pentru toate analizele ulterioare. Fiecare eantion se eticheteaz, fiind precizat locul prelevrii, data i adncimea de la care s-a efectuat prelevarea.Probele se pstreaz n frigider, la o temperatur de 4C, pn la prelucrare. Probele de sol se recolteaz n structur natural i n structur artificial. Recoltarea solului n structur natural, aa cum este solul aezat n natur, intereseaz n special pe agrotehnicieni, n timp ce recoltarea probei de sol n structur artificial se folosete n cercetrile de laborator i se poate realiza mai uor. Vezi Anexa 1

Vaipan Vasilica

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Suprafaa de sol care trebuie cercetat se stabilete prin delimitarea unei parcele surprinse ntre 25-250 m pe care se fixeaz punctul de recoltare. Probele individuale de sol se recolteaz foarte rar deoarece este greu de stabilit gradul de preluare prin analiza unei singure probe. Recoltrile de sol se fac prin probe medii obinute din mai multe preluri individuale omogenizate bine. Recoltarea solului de la suprafa se efectueaz dup o prealabil ndeprtare a prafului, rdcinilor, frunzelor sau a altor reziduuri ce se gsesc pe suprafaa solului. Adncimile care se recomand pentru recoltarea solului sunt : pentru islazuri n contact cu ape reziduale, 50 cm pentru suprafee arabile legumicole tratate cu ape reziduale, 20 cm pentru soluri cu puncte contaminate cnd exist bnuiala unei impurificri, 1 m. Prelevri la adncimi mai mari sunt necesare la contaminrile masive sau la solurile extrem de permeabile.

Vaipan Vasilica

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Prelevarea probelor de sol agricol

Prelevarea probelor de sol utilizat n agricultur ridic dou probleme majore: -aplicarea de nutrieni n cantiti potrivite pentru culturile dezvoltate; -evitarea surplusului de nutrieni n agricultur i astfel evitarea contaminrii terenurilor i a apelor subterane prin migrarea nutrienilor mobili n adncime. Astfel, un program adecvat de probare contribuie la un management eficient al fertilizatorilor i la protecia mediului. Perioada optim pentru probare Concentraiile nutrienilor din sol variaz cu anotimpul i, din acest motiv, probarea se va efectua aproape de momentul plantrii/nsmnrii sau aproape de momentul necesar aplicrii fertilizatorilor. n mod ideal, se vor lua probe de sol cu 2-4 sptmni nainte de plantare/ nsmnare sau fertilizarea terenului agricol. De obicei, sunt necesare 1-3 sptmni pentru probarea solurilor, transportul lor la laborator i efectuarea analizelor, respectiv obinerea rezultatelor. Probarea solului foarte ud sau ngheat nu va afecta rezultatele analizelor, dar colectarea propriu-zis a probelor este dificil. n schimb, nu se vor proba terenuri acoperite de zapad deoarece nu se recunosc caracteristicile lor i nu se vor putea preleva probe reprezentative. Frecvena prelevrii probelor Pentru un management adecvat privind fertilitatea solului i obinerea unei recolte bune, se va proba n fiecare an, mai ales n ceea ce privete nutrienii mobili. Analizele anuale ale fiecrui nutrient nu sunt neaprat necesare, dar acest lucru depinde de mobilitatea lui n sol i de necesarul fiecrui teren n parte. Pstrarea informaiilor anuale ale analizelor de sol va putea conduce la evaluri pe termen lung ale concentraiilor nutrienilor.

Vaipan Vasilica

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Proceduri de prelevare a probelor


Pentru obinerea unei probe reprezentative, se respect urmtorii pai ai prelevrii probelor: Documentarea privind terenul ce urmeaz a fi probat i procurarea echipamentului de probare adecvat. Utilizarea unei sonde sau a unui burghiu spiralat sunt cele mai convenabile, dar nu se exclude i utilizarea hrleului sau a lopeii pentru probe de suprafa. Se vor utiliza glei de plastic pentru colectarea probelor sau alte recipiente care permit amestecul probelor si obinerea de probe compuse; asigurai-v c echipamentul este curat, mai ales fr urme de fertilizatori, pentru c erorile sunt frecvente i foarte mari, chiar la prezena unei mici cantiti de praf cu fertilizatori pe echipament; nu se vor utiliza glei galvanizate dac se urmre te coninutul de zinc i nici lopei ruginite dac se urmrete coninutul de fier; pentru analize de fier sau mangan, nu se va usca proba de sol nainte de a fi transportat; stabilirea terenului de probat presupune evitarea zonelor mai neobinuite cum ar fi seciuni de sol erodat, canale/anuri, garduri, care presupun o probare special; dac terenul este ntins pe o suprafa mare, cu o topografie variat, el va fi mprit n uniti de probare simple. Probarea subdiviziunilor terenului; subdiviziunile de probare prea mici pot fi omise deoarece nu pot fi separat fertilizate. Fiecare unitate trebuie probat n mai multe locaii diferite, probele urmnd apoi s fie amestecate ntr-o prob compus. Obinerea unei probe compuse depinde de uniformitatea i mrimea unitii de probare. Un minim de 10 probe este necesar pentru fiecare unitate pentru obinerea unei probe reprezentative, dei, cu ct numrul de probe este mai mare, cu att rezultatele vor fi mai precise. Aceste probe se vor recolta aleator, dar avnd grij s acoperim ntreaga arie de probare. Aliniamentele de probare pot fi meandrate sau n zig-zag. Probele sunt apoi amestecate, obinndu-se de regul o cantitate mai mare dect este necesar. Se separ o cantitate care trebuie s fie de minim 500 g sau un volum de 0.5 l.

Adncimea de probare
Adncimea de probare este critic deoarece cultivarea/aratul i mobilitatea nutrienilor n sol pot influena foarte mult coninutul lor n diferite zone ale solului. Adncimea de probare depinde de teren, de practicile de cultivare, adncimea la care se ar i tipurile de nutrieni analizai. Cea mai mare parte a rdcinilor plantelor, cea mai mare activitate biologic i cel mai ridicat coninut de nutrieni sunt la suprafa, aa nct se probeaz i analizeaz primii 30 cm de sol. Se vor analiza pH-ul, P, K, materia organic, S, B, Zn i ali micronutrieni.
Vaipan Vasilica 10

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Adncimea de probare este n mod special critic pentru nutrienii care nu sunt mobili, ca P si K. Adncimea recomandat pentru acetia este de 30 cm. Zona cultivat/arat are o adncime tipic de 15-20 cm i conine de obicei o concentraie mare, relativ uniform, de nutrieni mai puin mobili. Sub aceast adncime, concentraia de regul scade. Aadar, prelevarea de probe n intervalul de 1-25 cm adncime poate conduce la concluzii eronate.

Probarea n adncime
Probarea pentru determinarea concentraiei nutrienilor mobili ca N, B i S implic prelevarea de probe la fiecare interval de 30 cm pn la o adncime de 1.5-2 m, cu condiia c stratul de sol nu este mai subire i se ajunge la roca parental. Fiecare interval de 30 cm este probat cu cte 10 probe sau mai multe, prelevate aleator n unitatea de probare. Dac se intenioneaz s se probeze la mai puin de un an de la aplicarea fertilizatorilor, trebuie s se in seama de faptul c irigaiile sau ploile au dispersat nutrienii mobili de-a lungul anului respectiv. Probarea de adncime, la 70-80 cm, reprezint un mod de a monitoriza migrarea nutrienilor sub suprafa. P este mai de interes pentru c se acumuleaz n sol dac a fost aplicat n cantitate prea mare i este splat n apa subteran, absorbit de vi sau legat de particulele de sol i transportat de corpurile de ap cnd solul este splat. Probarea de adncime nu este foarte uzual i necesit mare atenie. Contaminarea cu sol de suprafa care conine concentraii mai mari de nutrieni poate conduce la concluzii eronate. Echipamentele, printre care sondele hidraulice, sunt scumpe i greu de accesat n teren, dar exist i sonde manuale i burghie cu lungimi diferite. Proba care se analizeaz este o prob compus, obinut prin amestecul eficient a cel puin 5 carote prelevate de la adncimi diferite pentru reprezentativitate. Pentru confirmarea coninuturilor ridicate din adncime, se preleveaza o proba de la suprafa ca referin, din aceeai locaie din care s-a prelevat proba din adncime.

Manipularea probelor
Manipularea probelor trebuie s asigure rezultate corecte i s minimizeze modificrile n concentraia de nutrieni datorit activitii biologice. Probele de sol umed trebuie pstrate la rece pe toat perioada de dup probare. Ele pot fi ngheate sau pstrate la frigider pe perioade ndelungate, fr efecte adverse. Dac probele nu pot fi pstrate n frigider sau nghe a la scurt timp de la colectare, ele trebuie uscate la aer sau duse rapid la laboratorul de analiz. Uscarea la aer se realizeaz prin mprtierea probei ca un strat subire pe o folie de plastic. Se sparg bulgrii de sol i se ntinde solul ca un strat de o jumtate de
Vaipan Vasilica 11

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

centimetru grosime. Se usuc la temperatura camerei i ct mai rapid. Se recomand evitarea contaminrii n timpul uscrii i evitarea surselor artificiale de uscare. Cnd solul este uscat, se amestec intens sprgnd bulgrii. Se iau cam 500 g de sol bine amestecat i se introduc ntr-o pung de plastic, dup care se eticheteaz, se noteaz numele persoanei care a probat, numrul probei, adncimea de probare i numele/numrul terenului. Numele/numrul terenului se regsete pe o hart. Acestea ajut la nregistrarea i pstrarea datelor despre teren, contribuind la istoria terenului alturi de culturi, recolt, fertilizatori.

Probarea special
Probarea special se refer la terenurile n trepte pentru irigat, terenuri care i-au pierdut o mare parte din solul de suprafa datorit eroziunii, terenuri cu anuri/canale datorit irigaiilor, terenuri cu benzi de fertilizatori aplicai i terenuri care nu au fost intens arate. Terenurile terasate i erodate au puin sol original la suprafa, expunnd sol de sub suprafa. Aceste arii se probeaz separat dac sunt destul de ntinse si pot fi cultivate. Solul expus este de regul mai srac n substan organic i mai bogat n argil i carbonat de calciu. Pentru obinerea unei probe reprezentative, se probeaz canalele de irigaie nainte ca ele s existe, iar daca ele exist deja, se urmrete procedura. Micarea apei i a nutrienilor dizolvai poate crea un mod special de distribuie a nutrienilor pe zonele ridicate dintre canale. Pentru o prob reprezentativ se iau probe apropiate, dispuse perpendicular pe canal. Sunt necesare aproximativ 20 de locuri de probare cu cte 3 probe pe locaie pentru obinerea unei probe compuse reprezentative de sol. n fiecare loc de probare se preleveaz o prob de pe vrful dealului (ridictura dintre canale), de la mijlocul distanei dintre vrf i fundul canalului si de pe fundul canalului. Adncimea de probare din punctul median este de 30 cm, n timp ce la vrf va fi peste 30 cm iar pe fundul canalului sub 30 cm, pentru obinerea de probe de la aproximativ aceeai adncime. Cele trei probe se amestec obinndu-se cte o prob compus din fiecare locaie. Se amestec apoi probele din diversele locaii, obinnd o prob compus reprezentativ ce urmeaz a fi analizat pentru nutrieni nemobili (K, P, micronutrieni). Pentru nutrieni mobili (N, S), se recomand profile de probare mai adnci. Probarea ariilor pe care au fost aplicai fertilizatori dup o dispunere n benzi i a fost efectuat aratul, se realizeaz dup procedurile obinuite. Proba reprezint o felie cu grosimea de 2.5-5.0 cm i este prelevata de la 30 cm adncime, dinspre centrul unei benzi spre centrul urmtoarei. Probarea poate fi sistematic, controlat sau aleatoare.

Vaipan Vasilica

12

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Probarea sistematic se aplic tiind direcia, adncimea i distana dintre benzile de aplicare a fertilizatorilor. Se preleveaz 5-10 probe de sol orientate perpendicular pe band, de la marginea ei pn la marginea urm toarei. Se pstreaz acelai stil, probndu-se n minim 20 de locaii ale fiecrui teren. Se amestec apoi probele din fiecare locaie, obinndu-se o prob compus reprezentativ. Probarea controlat presupune aceleai date, dar se preleveaz 20-30 probe de pe teren, avnd grij s acoperim toat suprafaa cu probe i s evitm benzile cu fertilizatori. Valorile testelor probelor vor fi ceva mai mici pentru nutrieni nemobili (P, K, micronutrieni) dect n cazul celorlalte stiluri de probare. Probarea aleatoare se aplic atunci cnd nu se cunosc benzile de fertilizatori din aplicarea precedent. Se preleveaz 40-60 de probe pe arie i se amestec pentru o prob compus. Probarea solului puin sau deloc arat ine seama de faptul c fertilizatorii aplicai nu s-au amestecat cu solul prin arat. Se nltur astfel 2.5 cm de sol de suprafa pentru a evita nutrienii. Se probeaz la intervale de 7.5 cm pe primii 30 cm, la 3 ani sau 5 ani pentru determinarea pH-ului care afecteaz capacitatea fertilizatorilor. Probarea n reea regulat n terenuri neuniforme implic separarea unui grid cu distane scurte ntre locaiile de probare, care permite o hart precis a solurilor i stabilirea de necesiti diferite n ceea ce prive te fertilizatorii. Terenurile irigate folosesc reele de 6-9 km distan ntre locaiile de probare sau 8 km, n funcie de culturi.

Vaipan Vasilica

13

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Metodologia de prelevare a probelor de sol pentru determinarea fertilitii solului propus n Romnia

Unul dintre cei mai importani factori ce influeneaz rezultatul analizei de laborator i, respectiv, elaborarea programelor de fertilizare, este prelevarea corect a probelor de sol.

Instrumentele necesare

Pentru a obine rezultate ct mai exacte, se recomand prelevarea probelor de sol cu ajutorul unui burghiu. Nu se recomand prelevarea probelor cu ajutorul uneltelor agricole (lopat, sap), deoarece aceste unelte nu permit prelevarea unor cantiti egale de sol pentru fiecare prob.

Adncimea de prelevare a probelor

Adncimea de prelevare a probelor este determinat de elementul chimic care urmeaz a fi analizat. Azotul se dizolv complet n ap i migreaz n straturile de sol. Pe timp de secet, cele mai mari concentraii de azotat de amoniu se acumuleaz n straturile de suprafa ale solului. Dup precipitaii abundente, cea mai mare parte a azotatului de amoniu migreaz la o adncime de 4560 cm sau mai adnc. Iat de ce, pentru a analiza coninutul de azotat de amoniu, se recomand prelevarea probelor de sol de la o adncime de 060 cm. Avnd n vedere c fosforul i kaliul sunt greu solubile n ap i practic nu migreaz, precum i faptul c adncimea brazdei pe majoritatea cmpurilor constituie 2025 cm, adncimea de colectare a probelor pentru fosfor i kaliu va constitui 020 cm.

Vaipan Vasilica

14

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Cnd se preleveaz probele de sol?

Pentru a efectua analiza coninutului de azotat de amoniu, se recomand prelevarea probelor la temperaturi ce nu depesc 10C. La aceast temperatur, procesul de mineralizare a substanelor organice din sol se desfoar foarte lent. n aceast perioad, precum i primvara nainte de semnat, coninutul de azotat de amoniu este acelai. Probele de sol pentru analiza oricrui alt element chimic pot fi prelevate n orice perioad a anului.

Cum se preleveaz o prob reprezentativ de sol?

Cu ct este mai mare numrul de sub-probe colectate, cu att mai reprezentativ va fi proba final. Procesul de prelevare a probelor, n rezultatul cruia sunt obinute sub-probe reprezentative, asigur o prob final care reflect coninutul real de elemente nutritive n sol. Probabilitatea obinerii unei probe finale reprezentative crete cu fiecare sub-prob. Dimensiunea cmpului nu influeneaz numrul de sub-probe necesare pentru proba final. Pentru a colecta o prob final ct mai relevant, se recomand prelevarea a 20 de sub-probe de pe fiecare cmp. Sub-probele se colecteaz sub form de ah. Pentru a obine probe relevante este necesar s se evite poriunile neuniforme ale cmpului sau acelea care au fost prelucrate n mod diferit cu erbicide sau ngrminte. Iat cteva exemple de poriuni neuniforme: brazde moarte, marginile cmpului, depresiuni, gropi, suprafeele care difer dup culoare i textur. Asemenea poriuni vor fi evitate doar dac ele ocup o suprafa nesemnificativ. n cazul n care aceste poriuni constituie o parte nsemnat din suprafaa total a cmpului, se recomand prelevarea unei probe separate de pe fiecare asemenea poriune.

Vaipan Vasilica

15

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Pregtirea i pstrarea probei de sol

Pstrarea ndelungat a probei de sol poate influena rezultatul analizei de laborator. De aceea, toate sub-probele colectate trebuie turnate ntr-un vas din plastic (cldare), amestecate minuios, dup care, din amestecul obinut, se va lua o prob medie de 0.5 kg, care va fi trimis la examenul agro-chimic de laborator. Proba final trebuie bine uscat n aer liber. Pentru aceasta, presrai solul ntr-un strat de 1 cm pe o suprafa din polietilen sau aluminiu. Se interzice uscarea solului n cuptoare cu microunde sau alt tip de cuptoare. Sarcina de baz a uscrii solului este stoparea activitii microbiologice i formrii azotatului de amoniu nainte de analiza de laborator.

Not: Nu admitei contaminarea probelor n timpul prelevrii lor! Fumatul n timpul manipulrii probelor de sol este strict interzis!

Recomandri

Pentru prelevarea probelor de sol, folosii burghiul. Pentru analiza coninutului de azot, prelevai probe de la o adncime de 060 cm. Pentru analiza altor elemente, prelevai probe de la o adncime de 0 20 cm. Probele de sol pentru analiza coninutului de azot, fosfor i kaliu se preleveaz separat. Pentru analiza coninutului de azot, prelevarea probelor se efectueaz la temperaturi ce nu depesc 10C . Pentru analiza coninutului de celelalte elemente, prelevarea probelor se efectueaz n orice perioad a anului. Pentru obinerea unui rezultat exact, prelevai cte 25 de sub-probe de pe fiecare cmp. Evitai poriunile neuniforme ale cmpului. Prelevai o prob separat de pe fiecare poriune neuniform dac aceasta ocup o suprafa nsemnat a cmpului. Pentru aceste poriuni

Vaipan Vasilica

16

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

vor fi emise recomandri de fertilizare separate. Folosii recipiente din plastic; amestecai minuios probele de sol.

Greutatea probei finale care urmeaz a fi trimis la laborator nu trebuie s depeasc 0.5 kg. Uscai probele de sol n aer liber: presrai solul ntr-un strat de 1 cm pe o suprafa din polietilen sau aluminiu.

Probarea solurilor contaminate cu metale (plumb, cadmiu, arsen) Probarea se axeaz pe zonele de joac ale copiilor (cei mai vulnerabili la aceste metale pe care le ingereaz din sol). Din aceste zone se preleveaz cteva probe de suprafa (primii 5 cm de sol) cu o lingur curat, se nltur toate componentele strine solului, dup care se combin probele din cel puin 8 locaii. Se cur uneltele de probare i se repet n alt zon. Probarea grdinilor este asemntoare, dar se preleveaz probe din primii 15-20 cm de sol, care conin rdcinile plantelor. Sunt necesare cel puin 3 probe din fiecare grdin. Terenurile contaminate, care presupun o mare variaie a compoziiei contaminanilor necesit 10-20 de probe pentru obinerea unei probe compuse reprezentative. Acolo unde se cunoate o contaminare excesiv, se probeaz la rdcina copacilor, la nlimi ct mai mari. Probele nu se amestec i sunt necesare 2-3 ca numr.

Echipamente utilizate:

Pentru o probare corect se folosete o trus pedologic de teren alctuit dintr-o ldi care conine: - o sticlu picurtoare de HCl 1/3 concentraie pentru identificarea carbonailor - clorur de Ba n/10 pentru identificarea sulfailor - azotat de Ag n/10 pentru identificarea clorurilor - fenolftalein 1% n alcool pentru identificarea carbonatului de Na
Vaipan Vasilica 17

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

- fericianur de K 5% pentru identificarea Fe bivalent (pentru fenomene de gleizare i psedogleizare) - salicilat de Na 5% pentru determinarea pH -ului - pH-metru de teren - eprubete - plnie de sticl - hrtie de filtru - cuit - paclu - rulet sau metru de lemn de 2 m - pungi - cilindri - bidoane - etichete n plus se folosete o lopat, sond pedologic, ciocanul geologic, ldie, cutii de carton sau plastic, altimetru i clinometru.

Vaipan Vasilica

18

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

4. ntocmirea fiei de recoltare a probelor

Probele de sol recoltate trebuie s fie nsoite de o fi de recoltare, care trebuie s cuprind : data cnd s-a fcut recoltarea ; localitatea i denumirea locului de unde s-a recoltat ; adncimea la care s-a fcut recoltarea; precipitaiile atmosferice n ziua recoltrii; scopul analizei; numele i calitatea celui care a fcut recoltarea ; felul polurii la care a fost supus solul. Probele recoltate trebuie ferite de aciunea razelor solare n timpul transportului i pstrate la frigider cel mult 24 h pentru unii indicatori care se modific n timp cum ar fi : azotul, amoniacul, nitraii, nitriii, umiditatea etc. Pentru poluanii anorganici sau de alt natur care au o persisiten mai mare n sol, analiza se efectueaz pe probe de sol uscat la temperatura camerei. Pentru uscarea solului la temperatura camerei, se ntind foi de material plastic pe suporturi sau mese i apoi se pune solul frmiat pe ct e posibil ntr-un strat nu prea gros ntr-o ncpere ferit de poluri suplimentare.

Vaipan Vasilica

19

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

5. Determinarea microorganismelor din sol

Recunoaterea nivelului de poluare a solului se efectueaz ca i pentru ceilali factori de mediu cu ajutorul investigaiilor microbiologice i chimice ale solului. Dup Lucia Alexa, indicatorii microbiologici sunt grupai n microorganisme cu ajutorul crora se poate evalua att mrimea riscului epidemiologic, ct i valoarea procesului de autoepurare teluric. Pentru aprecierea contaminrii solului cu flor patogen i convenional patogen cei mai frecveni indicatori folosii sunt: a . Numrul total de germeni calculai la 1 g sol uscat la 105C. Este un indicator nespecific, orientativ, care arat numai intensitatea de impurificare, dar nu i natura ei. Dei nu exist norme, se recomand urmtoarea interpretare a valorilor lor: sol curat - sub 10000 germeni/g sol; slab poluat - 10 000 germeni/g sol; poluat - 100 000 germeni/g sol; foarte poluat -1 000 000 germeni/g sol.

b. Numrul bacteriilor coliforme este un indicator pentru aprecierea contaminrii solului cu bacterii intestinale. Se consider solul curat cnd titrul bacteriilor coliforme este de 1 i mai mult, slab poluat - 1-0,1, poluat - 0,10,001 i foarte poluat - sub 0,001. c. Bacteriile sulfito-reductoare (Cl. perfringens) sunt, de asemenea, indicatori ai polurii cu fecale. n solurile curate titrul CI. perfringens este mai mare de 0,1, n cele slab poluate - 0,1-0,001, n solurile poluate - 0,001-0,0001, iar n cele foarte poluate - mai mic de 0,0001. d. Bacteriile termofile se dezvolt n solurile poluate numai dup ce flora mezofil, prin activitatea sa, a ridicat temperatura pn la 40-45C. La aceste temperaturi flora mezofil dispare i se nmulesc intens bacteriile termofile. Prezena bacteriilor termofile n sol indic o poluare organic intens a solului
Vaipan Vasilica

20

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

i posibilitatea existenei bacteriilor patogene sporulate (b. antracis, b. tetanic, clostridii), precum i a agenilor zoonozelor: leptospira, brucela, pasteurela. e. Depistarea altor microorganisme servete la aprecierea proceselor de autopurificare din sol. De obicei, se depisteaz bacterii de nitrificare i denitrificare , care, dac sunt prezente n numr mare, arat poluarea organic intens a solului. Poluarea biologic a solului se apreciaz i prin indicatori parazitologici. Solurile curate nu conin ou de geohelmini, cele slab poluate conin mai puin de 10/g sol, cele poluate - 10-100/g, iar cele foarte poluate mai mult de 100/g sol.

a. Determinarea Numrului total de germeni (NTG)

Principiul metodei: prin determinarea NTG se pot observa populaiile microbiene din sol.

Material necesar: cutii Petri, pipete sterile, eprubete sterile, balan, mediu specific, etuva reglabila.

Vezi Anexa 2

Modul de lucru: se cntrete 1 g de sol la balana analitic, se dilueaz cu diluie 10-1 se agit, apoi se ia 1 ml i se pune ntr-o cutie Petri peste care se adaug mediul specific NTG preparat i sterilizat, apoi se amestec analiza prin rotirea cutiei Petri ntr-o direcie circular orizontal paralel cu masa. Daca se dorete se poate face i o diluie 10-2 pn la 10-n diluii. Cutiile Petri se las
Vaipan Vasilica 21

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

timp de 10 minute pentru uscarea mediului, dup care se ntorc cu fundul n sus i se pun la termostat la 37 grade timp de 3 zile.

Interpretarea rezultatelor : se numr coloniile aprute, iar rezultatul se nmulete n funcie de diluie. (cu 10 , 100, 1000, etc) b. Determinarea Bacteriilor Coliforme

Principiul metodei: prin determinarea Bacteriilor Coliforme observa populaiile microbiene din sol. Material necesar: cutii Petri, pipete sterile, eprubete sterile, balan, mediu specific, etuv reglabil.

se pot

Vezi Anexa 2 Modul de lucru: se cntrete 1 g de sol la balana analitic, se dilueaz cu diluie 10-1 , se agit apoi se ia 1 ml i se pune ntr-o cutie Petri peste care se adaug mediul specific Bacteriilor Coliforme preparat i sterilizat, apoi se amestec analiza prin rotirea cutiei Petri ntr-o direcie circular orizontal paralel cu masa. Daca se dorete se poate face i o diluie 10-2 pn la 10-n diluii. Cutiile Petri se las timp de 10 minute pentru uscarea mediului, dup care se ntorc cu fundul n sus i se pun la termostat la 30 grade timp de 1 zi. Interpretarea rezultatelor : se numr coloniile aprute, iar rezultatul se nmulete n funcie de diluie. (cu 10 , 100, 1000, etc)

Vaipan Vasilica

22

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

6. Concluzii

Studiul distribuiei populaiilor microbiene n solurile poluate

Materiale i metode Acest studiu realizeaz pentru prima dat o biomonitorizare complex a calitii solului, pe baza studierii dinamicii populaiilor microbiene i a abundenei a apte grupe ecofiziologice de bacterii, care pot constitui indicatori sensibili ai calitii solului: bacteriile heterotrofe aerobe (Atlas, 2004), bacteriile amonificatoare (mediu de cultur cu ap peptonat), bacteriile nitrificatoare (Drgan-Bularda, 2000), bacteriile denitrificatoare (Pochon, 1954), bacteriile fier-reductoare (Prvu i colab., 1977) i bacteriile desulfoficatoare (Allen, 1957). Cu excepia bacteriilor aerobe heterotrofe (n cazul crora s-a utilizat metoda culturilor n plci), determinarea numrului celui mai probabil de bacterii (NCP) s-a realizat utiliznd tehnica diluiilor zecimale, rezultatele fiind prelucrate cu ajutorul tabelului statistic al lui Alexander (1965). Pentru evaluarea potenialului microbian general al solurilor analizate, pe baza numrului de bacterii din diferitele grupe ecofiziologice analizate s-a calculat indicatorul bacterian al calitii solurilor (Muntean, 1995-1996). Datele obinute au fost analizate statistic utiliznd programul SPSS Statistics 17, prin calcularea coeficientului de corelaie Pearson la dou praguri de semnificaie: 0,05 i 0,01.

Vaipan Vasilica

23

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Concluzii generale

A. Evaluarea microbiologic a solurilor poluate:

Numrul de bacterii i intensitatea activitilor enzimatice au prezentat oscilaii n funcie de sezon i de punctul de prelevare al probelor. n ordinea abundenei, bacteriile heterotrofe aerobe au fost urmate de ctre bacteriile amonificatoare, nitritbacterii, bacteriile denitrificatoare, nitratbacterii, bacteriile fierreductoare i bacteriile desulfoficatoare. Numrul de bacterii i intensitatea activitilor enzimatice n zonele poluate sunt sensibil mai reduse dect n zona martor. Totui prezena bacteriilor n solurile poluate denot dezvoltarea, n mod natural, a toleranei la prezena metalelor. S-au stabilit corelaii negative, statistic semnificative ntre concentraia metalelor, pe de o parte i numrul de bacterii, respectiv intensitatea activitilor enzimatice, pe de alt parte. n ierarhia solurilor poluate, bazat pe valorile indicatorilor bacterieni, solul din zonele protejate s-a situat pe prima din cele 8 poziii, ceea ce sugereaz existena unei comuniti bacteriene activ i echilibrat iar pe ultima poziie s-a situat solul din zona depozitului de hexaclorciclohexan, zon parial acoperit cu vegetaie, din cauza concentraiei ridicate de pesticide i metale grele.

Vaipan Vasilica

24

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

B. Evaluarea impactului polurii cu Zn, Pb i Cd asupra populaiilor microbiene din sol:

Densitatea bacteriilor i intensitatea activitilor enzimatice au prezentat variaii cantitative n funcie de tipul i concentraia metalului. Cele mai sensibile la poluare s-au dovedit a fi bacteriile nitrificatoare i activitile dehidrogenazice. Prezena metalelor n concentraii crescute a avut un efect inhibitor puternic asupra speciilor rezistent i a determinat moartea celor sensibile la poluare. Aceste efecte toxice dovedesc faptul c mecanismele de rezisten nu ofer protecie la nivele crescute ale metalelor.

C. Efectele metalelor grele asupra viabilitii celulare la A. chroococcum i P. putida Viabilitatea celular, cuantificat prin testul cu albastru tripan, a variat n funcie de microorganism, tipul de metal i de concentraia metalului aplicat. Viabilitatea celular nu a atins 100% n niciuna dintre probe, evoluia fiind descendent la A. chroococcum i P. putida, pe msura creterii concentraiei metalelor, consecin a efectului inhibitor exercitat de metalele grele prezente n mediul de cultur. Viabilitatea celular a fost mai ridicat la P. putida dect la A. chroococcum, astfel c Azotobacter poate fi considerat un indicator al nivelului de poluare mai sensibil, inclusiv la concentraii mici ale metalelor. Dinamica comparativ a artat c ambele specii de microorganisme i-au pstrat viabilitatea n prezena tuturor metalelor, la toate concentraiile, fr s coboare sub nivelul de 104 celule/ml. Acest lucru este consecina dezvoltrii unor mecanisme de rezisten la toate metalele analizate, care permit supravieuirea microorganismelor n medii poluate.

Vaipan Vasilica

25

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

D. Efectele metalelor grele asupra creterii la P. putida:

% inhibiiei creterii la P. putida a avut o evoluie ascendent, pe msura creterii concentraiilor de metale. n ordinea toxicitii, stabilit n funcie de valorile concentraiilor metalelor care au determinat inhibiia creterii P. putida n proporie de 10% (EC10) i respectiv 50% (EC50), dup 16 ore de incubare, cadmiul a fost cel mai toxic metal, urmat de plumb i de zinc. Pentru toate cele trei metale analizate EC50 a fost nregistrat la concentraii mai mari dect valorile normale prevzute de Ordinul 756/1997, ceea ce arat c P. putida a rspuns la excesul de Zn2+ sau la prezena Cd2+ i Pb2+ prin mecanisme de rezisten. n concluzie, datorit numeroaselor capaciti, utilizarea microorganismelor n programele de evaluare i monitorizare sunt necesare, schimbrile n microflora unui sit specific indicnd schimbri n calitatea mediului. Pentru a surprinde ct mai fidel modificrile determinate de impactul antropic trebuie utilizai mai muli indicatori (msurtori ale biomasei microbiene, respiraiei, microorganisme cheie, activiti enzimatice etc.). Activitile enzimelor din sol se modific mai devreme dect ali parametri. De aceea, determinarea activitilor enzimatice sunt mai adecvate, acestea oferind date sugestive ntr-un timp mult mai scurt dect analizele microbiologice, privind procesele biodegradative din sol.

Vaipan Vasilica

26

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Anexe:
Anexa 1: Modul cum se recolteaz probele de sol

0 0

0 0 0 0 0 0 0

Vaipan Vasilica

27

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

0 0 0 0

0 0 0 0 0

Vaipan Vasilica

28

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Anexa 2: Instrumente de laborator

Etuva

Vaipan Vasilica

29

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Etuva

Balana analitic

Vaipan Vasilica

30

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Pipete, pH-metru, hrtie indicatoare de pH, substane chimice, pahar Berzelius, Biureta cu stativ

Vaipan Vasilica

31

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Lame, Lamele Cutie Petri

Cutii Petri

Vaipan Vasilica

32

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Vaipan Vasilica

33

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Spirtiera

Vaipan Vasilica

34

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Eprubete

Vaipan Vasilica

35

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Anexa 3: Echipamente de prelevare a probelor de sol:

Vaipan Vasilica

36

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Vaipan Vasilica

37

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

Vaipan Vasilica

38

Determinarea indicatorilor microbiologici ai solului


2010-2011

BIBLIOGRAFIE:

a) Chimia sanitara a mediului, S.Manescu editura Titulescu Bucuresti 1974 b) Igiena mediului, Cadariu Gh., Manescu S. Bucuresti 1974 c) Igiena, Barnea M. si colaboratori, Bucuresti 1971 d) Igiena mediului, Andronache Elena, Bucuresti 1978

Vaipan Vasilica

39