Particularitatile generale ale plasmidelor bacteriene Plasmida reprezinta o formatiune de acid dezoxiribonucleic, circulara, prezenta in unele bacterii, care

se poate replica autonom de cromozomul" gazdei, dar folosind aparatul replicativ al celulei in care se gaseste. Aceste macromolecule detin trei elemente importante: originea de replicare gena markerilor de selectie (de exemplu, rezistenta la antibiotice) un situs de clonare n dezavanta! al celulelor care contin plasmida este ca acestea se dezvolta mai greu, fata de celelalte celule libere, dar daca se intampla ca in timpul diviziunii celulele sa scape de plasmide, pot avea o dezvoltare accelerata. neori se intampla ca o plasmida sa contina gena de care o celula are nevoie pentru a supravietui,(de exemplu, o gena ce codifica o enzima care distruge un antibiotic), iar daca celula a scapat de acea plasmida, va muri. " astfel de presiune selectiva contribuie la mentinerea unei plasmide in populatie. #itusul de clonare este o regiune importanta intr$un vector de clonare, deoarece aici se introduce frgamentul tinta de A%&, cu a!utorul enzimelor de restrictie si a ligazei. #tructura moleculara a plasmidelor este constituita din molecule de A%& dublu cuaternar circulare inc'ise covalent, iar propietatile structurale difera de cele ale cromozomului, cum ar fi forma super'elocala. Plasmidele sunt denumite uneori vectori", deoarece pot lua A%&$ul de la un organism la altul. (u toate acestea, nu toti vectorii sunt plasmide. %e multe ori sunt folositi virusuri compusi in laborator, un exemplu fiind bacteriofagul lambda, care poate transporta mari bucati de A%& strain. n alt concept important este acela ca in functie de strategia de clonare, o gena poate fi inserata in plasmida in una din urmatoarele orientari: orientarea de la stanga la dreapta sau de la dreapta la stanga. )ntre aceste orientari exista o diferenta fundamentala, sageata din diagrama aratand directia de transcriere*traducere a codificarii genei rosii" . Pentru a izola plasmida pe care o vrem introducem ligatele in +.coli, un proces numit transformare", si selectam bacteria rezistenta la un medicament(ampicilina), apoi cautam colonii bacteriene individuale pentru a gasi una care contine o plasmida cu o structura corecta. (and se transforma A%& in laborator, exista cai care faciliteaza absorbtia A%&$ ului de catre celulele +.coli. na dintre acestea o reprezinta lasarea celulelor in solutie de clorura de calciu cu g'eata, adaugandu$se o proba de A%& ligat, apoi un soc termic celulelor, la ,- de grade pentru o perioada scurta, aproximativ ,. de secunde. /luiditatea membranei creste in punctul in care A%&$ul va fi preluat de catre celula. %upa transformare, provocam bacteria cu un antibiotic, cum ar fi ampicilina. %aca +. coli a preluat o gena rezistenta la ampicilina pe o plasmida, vor trai. Aces proces este numit selectie, deoarece selectam bacteria care poate supravietui. 0ransformarea este un eveniment rar, asadar ma!oritatea bacteriilor dintr$un experiment fiind distruse de antibiotic. %aca o bacterie preia o bucata de A%& care nu poate fi mentinuta intr$o celula(de exemplu, ii lipseste originea de replicare a A%&$ului), acea celula nu va supravietui.