Chlamydia

Chlamydia
trachomatis
trachomatis
Dr. Daniela Dr. Daniela Badescu Badescu
Incluzii Incluzii intracelulare intracelulare de de C. C. trachomatis trachomatis ( ( R.C.Barnes R.C.Barnes, ,
Bacteriology,1998) Bacteriology,1998)
Introducere
Introducere
Taxonomie Taxonomie
Pana Pana acum acum cativa cativa ani ani : :
fam fam. . Chlamydiaceae Chlamydiaceae gen gen Chlamydia Chlamydia specia specia C. C. trachomatis trachomatis
C. C. psittaci psittaci
C. C. pneumoniae pneumoniae
C. C. pecorum pecorum
Everett (Helsinki, 2000) : Everett (Helsinki, 2000) :
fam fam. . Chlamydiaceae Chlamydiaceae gen gen Chlamydia Chlamydia specia specia C. C. trachomatis trachomatis
C. C. suis suis
C. C. muridarum muridarum
gen gen Chlamydophila Chlamydophila specia specia C. C. psittaci psittaci
C. C. pneumoniae pneumoniae
C. C. pecorum pecorum
C. C. felis felis
C. C. caviae caviae
C. C. abortus abortus
Biotipurile
Biotipurile
C.
C.
trachomatis
trachomatis

3 3 biotipuri biotipuri: :
pneumonia pneumonia soarecelui soarecelui
LGV LGV serovarurile serovarurile L1, L2, L3 L1, L2, L3
trachoma trachoma - - serovarurile serovarurile A, B, A, B, Ba Ba, C , C infectii infectii oculare oculare
- - serovarurile serovarurile D D K K infectii infectii urogenitale urogenitale
Ciclul Ciclul de de viata viata la C. la C. trachomatis trachomatis (R.C. Barnes, Bacteriology, 1998) (R.C. Barnes, Bacteriology, 1998)
La La femeia femeia gravida gravida infectia infectia cu cu C. C. trachomatis trachomatis poate poate determina determina: :
- - avort avort spontan spontan
- - sarcini sarcini ectopice ectopice
- - endometrite endometrite postpartum postpartum
La La nou nou- -nascut nascut infectia infectia cu cu C. C. trachomatis trachomatis poate poate determina determina: :
- - conjunctivita conjunctivita (la 5 (la 5- -12 12 zile zile dupa dupa nastere nastere) )
- - pneumonie ( pneumonie (pneumonia pneumonia afebrila afebrila subacuta subacuta la 1 la 1- -3 3 luni luni
dupa dupa nastere nastere) )
- - infectii infectii oro oro- -faringiene faringiene si ale si ale tractului tractului genital genital
Femeile Femeile gravide gravide infectate infectate cu cu C.trachomatis C.trachomatis pot fi pot fi tratate tratate cu cu
eritromicina eritromicina, , azitromicina azitromicina sau sau amoxicilina amoxicilina si si ar ar trebui trebui retestate retestate la 3 la 3
saptamani saptamani de la de la terminarea terminarea tratamentului tratamentului. .
De De asemenea asemenea se se recomanda recomanda retestarea retestarea la 3 la 3- -4 4 luni luni a a tuturor tuturor celor celor
care care au au avut avut o o infectie infectie cu cu C. C. trachomatis trachomatis. .
Manifestari
Manifestari
clinice
clinice
ale
ale
infectiei
infectiei
cu
cu
C.trachomatis
C.trachomatis
C. C. tachomatis tachomatis este este cea cea mai mai frecventa frecventa cauza cauza a a uretritelor uretritelor
negonococice negonococice la la barbati barbati. .
Infectiile Infectiile cu cu C.trachomatis C.trachomatis sunt sunt asimptomatice asimptomatice, mai ales la , mai ales la femei femei, in , in
proportii proportii variabile variabile (dupa (dupa unii unii autori autori chiar chiar 85% 85% important important pentru pentru
diagnosticarea diagnosticarea precoce precoce a a infectiilor infectiilor). ).
In SUA se In SUA se recomanda recomanda screening screening- -ul ul anual anual al al populatiei populatiei feminine feminine din din
grupa grupa de de varsta varsta 20 20- -25 25 ani ani ( (aprox aprox. 2000000 . 2000000- -3000000 3000000 cazuri cazuri noi noi pe pe
ani ani). ).
In Romania in In Romania in anul anul 2003 2003 s s- -a a efectuat efectuat un un studiu studiu pe un lot de pe un lot de femei femei cu cu
varsta varsta intre intre 19 19- -39 39 ani ani : 3,4% : 3,4% din din femei femei au au fost fost gasite gasite pozitive pozitive pentru pentru
antigenul antigenul C. C. trachomatis trachomatis prin prin testul testul PCR PCR Cobas Cobas Amplicor Amplicor CT/NG. CT/NG.
In In perioada perioada 2002 2002- -2003 un 2003 un alt alt studiu studiu a a aratat aratat prezenta prezenta anticorpilor anticorpilor de de
tip tip IgM IgM si si IgG IgG ( (trusa trusa ELISA) ELISA) pentru pentru C. C. trachomatis trachomatis la la aprox aprox. 35% . 35% din din
femeile femeile testate testate din din grupa grupa de de varsta varsta 15 15- -45 45 ani ani. .
Diagnosticul
Diagnosticul
de
de
laborator
laborator
al
al
infectiilor
infectiilor
cu C.
cu C.
trachomatis
trachomatis
Detectare Detectare de de antigene antigene si si CE : CE :
Recoltarea Recoltarea probelor probelor: :
- - endocervicale endocervicale: se utilizeaza : se utilizeaza tampoane tampoane comerciale comerciale (din (din bumbac bumbac, ,
dacron dacron, plastic , plastic sau sau metal); metal); nu nu se se ating ating peretii peretii vaginului vaginului; se ; se evita evita
utilizarea utilizarea recoltoarelor recoltoarelor de de lemn lemn; ;
- - uretrale uretrale: se utilizeaza : se utilizeaza tampoane tampoane comerciale comerciale indicate de indicate de producator producator; ;
- - conjunctivale conjunctivale (la (la simptomatici simptomatici): se utilizeaza ): se utilizeaza tampoane tampoane comerciale comerciale
de de acelasi acelasi tip cu tip cu cele cele mentionate mentionate ; ;
- - urina urina: : primii primii 10 10- -20 ml, la 20 ml, la cel cel putin putin 1 1 ora ora de la de la ultima ultima mictiune mictiune, ,
colectata colectata in in recipiente recipiente sterile; sterile;
Probele Probele sunt sunt pastrate pastrate si si transportate transportate la la temperatura temperatura 2 2 25 25 C C pana pana la la
prelucrare prelucrare (nr. (nr. zile zile este este indicat indicat de de producator producator). ).
Metode Metode de de testare testare: :
Cultura + Cultura + Giemsa Giemsa / IF / IF
- - detectarea detectarea corpusculilor corpusculilor elementari elementari (CE) (CE)
- - singurul singurul test in test in cazuri cazuri medico medico- -legale legale
- - permite permite efectuarea efectuarea altor altor teste teste din din aceeasi aceeasi proba proba
- - necesita necesita mediu mediu de transport, de transport, refrigerarea refrigerarea probei probei dupa dupa
recoltare recoltare (2 (2- -4 4 C C afecteaza afecteaza viabilitatea viabilitatea
microorganismelor microorganismelor), ),
- - timp timp de de pastrare pastrare 24 24- -48ore 48ore
- - specificitate specificitate : 100% : 100%
- - sensibilitate sensibilitate scazuta scazuta : : aprox aprox. 55% . 55%
- - numai numai in in laboratoare laboratoare de de referinta referinta
- - timp timp indelungat indelungat
Teste Teste EIA EIA
- - detectarea detectarea antigenului antigenului LPS LPS
- - simple simple
- - viabile viabile si si pentru pentru probe cu un probe cu un numar numar mic mic de CE de CE
- - sensibilitate sensibilitate variabila variabila (70 (70- -95%) 95%)
- - specificitate specificitate mare (90 mare (90 97%) 97%)
- - necesita necesita teste teste de de confirmare confirmare ( (reactiile reactiile incrucisate incrucisate cu cu alte alte specii specii de de
Chlamydia Chlamydia sunt sunt inlaturate inlaturate prin prin teste teste de de blocare blocare cu cu anticorpi anticorpi
monoclonali monoclonali, care , care verifica verifica rezultatele rezultatele pozitive pozitive) )
Imunofluorescenta Imunofluorescenta directa directa
- - detecteaza detecteaza antigen specific de antigen specific de gen gen (LPS) (LPS) sau sau specific de specie specific de specie
(MOMP) (MOMP)
- - lama cu lama cu proba proba uscata uscata si si fixata fixata poate poate fi fi pastrata pastrata la la temperatura temperatura
ambianta ambianta si si prelucrata prelucrata in in 7 7 zile zile de la de la recoltarea recoltarea probei probei
- - vizualizeaza vizualizeaza CE ( CE (marcati marcati cu cu fluoresceina fluoresceina) )
- - test test util util pentru pentru confirmarea confirmarea altor altor teste teste (ex: EIA) (ex: EIA)
- - calitatea calitatea rezultatelor rezultatelor depinde depinde de de experienta experienta tehnicianului tehnicianului
- - sensibilitate sensibilitate (75%) (75%) si si specificitate specificitate (90% (90% - - 97%) 97%) comparabile comparabile cu cu cele cele
ale ale testelor testelor EIA EIA
NAAT ( NAAT (Tehnici Tehnici de de amplificare amplificare bazate bazate pe pe acizi acizi nucleici nucleici) )
- - detectarea detectarea ADN ADN si si ARN ( ARN (poate poate detecta detecta chiar chiar o o singura singura copie copie
a a genei genei tinta tinta) )
- - recoltare recoltare neinvaziva neinvaziva ( (urina urina sau sau chiar chiar probe probe vaginale vaginale) )
- - nu nu necesita necesita teste teste de de confirmare confirmare a a rezultatelor rezultatelor pozitive pozitive
- - standardizare standardizare posibila posibila : : exista exista kit kit- -uri uri comerciale comerciale
- - sensibilitate sensibilitate : 90 : 90- -98% 98%
- - specificitate specificitate : 98 : 98- -99% 99%
- - necesita necesita echipamente echipamente corespunzatoare corespunzatoare
- - posibilitatea posibilitatea contaminarii contaminarii
Metode Metode de de detectare detectare a a anticorpilor anticorpilor (in ser/plasma) : (in ser/plasma) :
Nu Nu se se recomanda recomanda diagnosticul diagnosticul serologic in serologic in infectiile infectiile urogenitale urogenitale cu cu
C.trachomatis C.trachomatis : :
- - anticorpii anticorpii persista persista si si in in absenta absenta infectiei infectiei, , dupa dupa terminarea terminarea
tratamentului tratamentului; ;
- - raspunsul raspunsul in in anticorpi anticorpi poate poate fi fi slab slab sau sau absent; absent;
- - pot pot exista exista reactii reactii incrucisate incrucisate cu cu alte alte specii specii de de chlamydia chlamydia. .
ELISA ( ELISA (IgA IgA, , IgM IgM, , IgG IgG) )
- - truse truse cu cu antigene antigene fixate (LPS fixate (LPS sau sau MOMP) MOMP)
- - se se recomanda recomanda testarea testarea concomitenta concomitenta a a celor celor 3 3 clase clase de de Ig Ig, in , in
dinamica dinamica utila utila in in depistarea depistarea infectiilor infectiilor trompelor trompelor uterine uterine sau sau ale ale
uterului uterului
Detectarea Detectarea exclusiv exclusiv a a unei unei clase clase de de imunoglobuline imunoglobuline, , dintr dintr- -o o singura singura
proba proba de ser de ser nu nu are are valoare valoare de diagnostic. de diagnostic.
Anticorpii Anticorpii persista persista si si dupa dupa terminarea terminarea tratamentului tratamentului; ; nu nu au au rol rol
protector protector
Imunofluorescenta Imunofluorescenta indirecta indirecta
Test de
Test de
blocare
blocare
cu
cu
anticorpi
anticorpi
monoclonali
monoclonali
pentru
pentru
verificare
verificare
Chlamydia EIA
Chlamydia EIA
Principiul Principiul testului testului: :
Testul Testul MicroTrak MicroTrak II Chlamydia EIA II Chlamydia EIA contine contine anticorpi anticorpi policlonali policlonali de de
iepure iepure impotriva impotriva antigenului antigenului chlamydial chlamydial lipopolizaharidic lipopolizaharidic (LPS). (LPS).
Conjugatul Conjugatul contine contine o o enzima enzima legata legata de de anticorpi anticorpi de de capra capra indreptati indreptati
impotriva impotriva anticorpilor anticorpilor de de iepure iepure. . Reactia Reactia intre intre conjugat conjugat legat legat de de
complexul complexul antigen antigen anticorp anticorp si si substrat substrat produce produce culoarea culoarea
specifica specifica densitate densitate optica optica (DO). (DO).
In In testul testul de de blocare blocare MicroTrak MicroTrak II : II :
aceeasi aceeasi reactivi reactivi ca in ca in trusa trusa MicroTrak MicroTrak II EIA II EIA
+ +
anticorpi anticorpi monoclonali monoclonali de de soarece soarece impotriva impotriva
LPS LPS chlamydial chlamydial
Anticorpii Anticorpii de de soarece soarece se se leaga leaga de LPS de LPS chlamydial chlamydial in in competitie competitie cu cu cei cei
de de iepure iepure. . Conjugatul Conjugatul se se leaga leaga exclusiv exclusiv de de anticorpii anticorpii de de iepure iepure. .

Valoarea Valoarea DO se reduce. DO se reduce. Daca Daca procentul procentul de de blocare blocare este este 50% 50%
rezultatul rezultatul prezumptiv prezumptiv pozitiv pozitiv este este confirmat confirmat. .
Daca Daca procentul procentul de de blocare blocare este este < 50%, < 50%, rezultatul rezultatul fals fals pozitiv pozitiv initial initial nu nu
se se verifica verifica ( (este este negativ negativ). ).
Proba Proba fara fara reactiv reactiv de de blocare blocare: : Proba Proba cu cu reactiv reactiv de de blocare blocare: :




= antigen LPS = antigen LPS
= = anticorpi anticorpi policlonali policlonali de de iepure iepure
= = anticorpi anticorpi monoclonali monoclonali de de soarece soarece
= = conjugat conjugat ( (enzima enzima conjugata conjugata cu cu anticorpi anticorpi de de capra capra anti anti- -iepure iepure) )

Screening
Screening
-
-
ul
ul
infectiilor
infectiilor
urogenitale
urogenitale
cu
cu
C.
C.
trachomatis
trachomatis
la
la
femei
femei
NAAT din NAAT din proba proba endocervicala/urina endocervicala/urina
Hibridizare Hibridizare de acid nucleic din de acid nucleic din proba proba endocervicala endocervicala
EIA EIA sau sau DFA din DFA din proba proba endocervicala endocervicala
Cultura din Cultura din proba proba endocervicala endocervicala
Conform Conform recomandarilor recomandarilor din MMWR vol. 51 din MMWR vol. 51- - 2002 2002
Screening
Screening
-
-
ul
ul
infectiilor
infectiilor
uretrale
uretrale
cu
cu
C.
C.
trachomatis
trachomatis
la
la
barbati
barbati
NAAT din NAAT din proba proba intrauretrala/urina intrauretrala/urina
EIA/DFA EIA/DFA sau sau cultura din cultura din proba proba intrauretrala intrauretrala
Conform Conform recomandarilor recomandarilor din MMWR vol. 51 din MMWR vol. 51- - 2002 2002
Teste
Teste
suplimentare
suplimentare
utilizate
utilizate
dupa
dupa
un
un
test
test
pozitiv
pozitiv
de screening
de screening
PRINCIPII GENERALE PRINCIPII GENERALE
Toate Toate testele testele pozitive pozitive de screening de screening ar ar trebui trebui sa sa fie considerate fie considerate dovezi dovezi
prezumtive prezumtive ale ale infectiei infectiei, , iar iar pacientii pacientii trebuie trebuie sfatuiti sfatuiti sa sa urmeze urmeze tratamentul tratamentul
corespunzator corespunzator, , deoarece deoarece un test un test suplimentar suplimentar ar ar putea putea da da un un rezultat rezultat fals fals- -negativ negativ. .
Se Se recomanda recomanda: :
testarea testarea unei unei a a doua doua probe probe printr printr- -un test un test diferit diferit
testarea testarea probei probei originale originale printr printr- -un test un test diferit diferit
repetarea repetarea testului testului original pe original pe proba proba originala originala folosind folosind anticorpi anticorpi
de de blocare blocare
repetarea repetarea testului testului original pe original pe proba proba originala originala
TESTE SUPLIMENTARE TESTE SUPLIMENTARE
In In cazul cazul unui unui test de screening non test de screening non- -NAAT NAAT pozitiv pozitiv: :
cultura cu cultura cu coloratie coloratie anti anti- -MOMP MOMP specifica specifica pentru pentru C. C. trachomatis trachomatis
test cu test cu anticorpi anticorpi de de blocare blocare
test NAAT test NAAT
In In cazul cazul unui unui test de screening NAAT test de screening NAAT pozitiv pozitiv: :
un alt test NAAT un alt test NAAT
Conform Conform recomandarilor recomandarilor din MMWR vol. 51 din MMWR vol. 51- - 2002 2002