Termenul de Inginerie genetic prea, acum ceva timp, ca fiind desprins din domeniul tiinificofantastic.

Astzi, a devenit o realitate bine conturat i cu rezultate promitoare n toate domeniile

vieii cotidiene.
Ingineria genetic reprezint un ansamblu de metode de lucru prin care se manipuleaz materialul
genetic la nivel molecular i celular. Astfel se obin microorganisme, plante i animale reprogramate
genetic, n al cror genom sunt incluse gene strine, utile, exprimabile i transmisibile stabil la
descendeni.

Tehnici utilizate n ingineria genetic

Ingineria genetic utilizeaz metode de cultur in vitro a celulelor i esuturilor animale i vegetale
i tehnologia ADN-ului recombinat. Pe aceste metode se bazeaz hibridarea somatic la plante i
animale, haploidia prin androgenez i ginogenez experimental, precum i clonarea.

Hibridarea somatic la plante se realizeaz cu ajutorul protoplatilor, celule n care s-a distrus
peretele celular prin tratamente enzimatice (exemple: celulaza, pectinaza). Drept urmare,
fiecare celul va fi perfect izolat de celelalte, permind efectuarea experimentelor.
Protoplatii pot fi izolai din orice organ al plantei. Ei manifest totipoten, avnd capacitatea s
regenereze plante ntregi, prin cultivarea pe mediul artificial in vitro (exemplu mediu solid de agaragar).
Fiind lipsii de perete celular, protoplatii pot fuziona spontan sub influena anumitor substane (nitrat
de sodiu, polietilenglicol, ioni de calciu). Dup fuzionarea celulelor, fuzioneaz nucleii, se reface
peretele celular i ncepe diviziunea celular. Dup circa trei sptmni se formeaz calusuri de
culoare verde, care ncep s creasc. Pentru a regenera plantele, calusurile se transfer n medii
speciale de difereniere.
n urma hibridrii somatice rezult hibrizi interspecifici asemntori cu cei obinu i prin hibridarea
sexuat.
Avantajul hibridrii este acela c se pot obine hibrizi celulari ntre specii diferite care n mod normal
nu se pot ncrucia sexuat. Un exemplu este cazul amfiploizilor de tutun (2n = 42 cromozomi)
obinui din dou specii de tutun: Nicotiana glauca (2n = 24 cromozomi) i Nicotiana langsdorfii (2n =
18 cromozomi). Hibrizii obinui nglobeaz numrul de cromozomi ai celor doi prini.
Alte avantaje ale utilizrii protoplatilor sunt: nmulirea vegetativ foarte rapid n urma creia
rezult clone; obinerea unor forme poliploide ce vor fi utilizate n ameliorare; inducerea de mutante;
transferul de gene sau cromozomi n protoplati; transferul de cloroplaste n protopla ti; ob inerea
unor plante rezistente la viroze, etc.

Haploidia prin androgenez i ginogenez experimental este o alt metod de cultur in vitro.

Androgeneza const n reprogramarea inormaiei genetice a microsporilor (grunciorilor de polen),

n culturi in vitro. Ulterior, prin diviziuni repetate, rezult plante haploide (con in doar jumtate din
numrul de cromozomi ai speciei).
Exist dou tipuri de androgenez:

direct, care se realizeaz prin embriogenez (din microspori se obin embrioizi, care prin
diviziuni repetate formeaz plante haploide);

indirect, care se realizeaz prin organogenez (din calus, prin difereniere, se formeaz
esuturi i organe, i ulterior, plante haploide).

Factorii cu o importan deosebit n reuita androgenezei experimentale sunt: vrsta anterelor,

mediul de cultur, hormonii, temperatura i lumina.
Plantele haploide obinute prin androgenez prezint urmtoarele avantaje: sunt pure genetic, sunt
folosite pentru obinerea liniilor izogene (sunt homozigote pentru toate genele), sunt utilizate pentru
producerea de soiuri noi i de hibrizi ce manifest fenomenul heterozis; ajut la identificarea rapid
a mutaiilor recesive i la inducerea unor mutaii artificiale.
Ginogeneza const n reprogramarea informaiei genetice a macrosporilor (sacilor embrionari) n
culturi in vitro. Astfel, dintr-un nucleu haploid, prin diviziuni repetate, se vor forma plante haploide.
Deoarece plantele haploide astfel obinute sunt sterile, ele sunt diploidizate (prin tratamente cu
colchicin) i apoi utilizate n diverse experimente.

Hibridarea somatic la animale

Primele ncercri au fost fcute n anul 1960 de ctre Georges Berski i colaboratorii si, care au
folosit celule de oarece, aparinnd la dou linii diferite, cultivate n amestec; ei au descoperit c
acestea pot fuziona i forma celule hibride. Aceste celule prezint caracteristici morfologice,
fiziologice i biochimice diferite de cele ale celulelor fuzionate, dar nglobeaz numrul total de
cromozomi ai genitorilor. Hibridarea celular, la animale, reuete dac sunt rezolvate dou
impedimente:

gsirea unui agent inductor care s grbeasc fuzionarea celulelor; este utilizat
virusul Sendai inactivant;

selectarea celulelor hibride din cultur.

S-au gsit medii de cultur selective n care celulele hibride se multiplic, iar celulele genitorilor sunt
eliminate.
O dat ndeplinite aceste condiii, are lor fuzionarea celulelor somatice diferite i
formarea heterocarionului.
Ulterior, are loc fuzionarea nucleilor, urmat de diviziuni mitotice succesive. n final, se formeaz
celulele hibride somatice. Aceste celule nu pot regenera organisme animale hibride. Ele

formeaz clone celulare hibride, la care sunt eliminai preferenial cromozomii uneia dintre speciile
genitoare. Astfel, n culturile celulare hibride om-oarece, se elimin o parte din cromozomii umani.
Drept urmare, n descendena hibrid exist o variaie semnificativ a numrului de cromozomi.
Importana practic a acestui fenomen const n faptul c pot fi realizate hr i cromozomale umane,
care permit o identificare precis a genelor normale i mutante pe cromozomi.
Celulele hibride care conin restructurri cromozomale sunt testate ulterior, pentru prezen a sau
absena enzimelor specifice. Astfel, sunt identificate cu precizie genele ce determin apari ia
maladiilor ereditare umane.
n prezent, se produc cibrizi, hibrizi celulare rezultai din formarea enucleate cu o celul nucleat.

Clonarea organismelor reprezint un ansamblu de procedee prin care se cultiv o singur celul i
se obine o colonie de celule identice. n urma clonrii rezult clone (celule i organisme pure,
identice, ce provin dintr-un singur printe).
La plante (care prezint fenomenul de totipoten), clonarea se realizeaz prin androgenez i
ginogenez. La animale, se realizeaz transplantul de nuclei strini n ovule la care s-au ndeprtat
nuclei.
Metoda clonrii prezint avantajul c, de la un singur organism adult, se pot ob ine copii perfect
identice, din punct de vedere genetic, ale organismului donator.

Tehnologia ADN-ului recombinat

Aceast tehnologie grupeaz tehnicile care permit sinteza chimic sau izolarea genelor unor
organisme, urmat de ineria acestora n genomul unor celule apar innd altei specii. Gazda va
copia ADN-ul strin inserat artificial i-l va transmite descenden ei. Rezult astfel organisme
reprogramate genetic.
Avantajul acestei tehnici const n faptul c toate depi barierele de specie (poate transfera ADN-ul
de la o specie la alta).
Etapele acestei tehnologii sunt: izolarea ADN-ului corespunztor unei anumite gene; multiplicarea
sa; construirea unor molecule de ADN hibride; transferul de la o specie la alta.
Pentru a obine ADN recombinat se folosesc microorganisme (colibacili, drojdie de
bere, Argobacterium sp.), enzime specifice i vectori.

Realizri i perspective ale ingineriei genetice

Sinteza artificial a genelor
Prima realizare n domeniu, dateaz din anul 1970, cnd Har Gobind Khorana i colaboratorii si au
sintetizat artificial la drojdia de bere gena care determin sinteza de ARN-t ce transfer aminoacidul
alanina la locul sintezei proteice.

Ulterior, s-au realizat sinteze artificiale de gene att la procariote ct i la eucariote. Astfel, s-au
sintetizat artificial genele care intervin n producerea hemoglobinei la iepure, ovalbuminei la gin,
insulinei, hormonului de cretere, somatostatinei i interferonului la om.
n prezent, pentru a sintetiza artificial gene, se pornete de la ARN-m folosit ca matri pentru
sinteza ADN-ului. De exemplu, pentru artificial a genei ce determin producerea hormonului de
cretere uman s-a extras ARN-m din hipofiz i s-a introdus n Escherichia coli care s-a cultivat
industrial. Aceasta a produs cantiti crescute de hormon.
Prin programare genetic se obin substane antitumorale eficiente n terapia cancerului.