Colagenul

Colagenul este prezent n toate animalele pluricelulare i reprezint cea mai abundent
protein din vertebrate. Are localizare extracelular i este organizat n fibre cu mare rezisten la
ntindere. Este component al esuturilor conjunctive fiind prezent n oase, dini, cartilaje,
tendoane, ligamente, tegument i vase de snge. n cantitate mic, se gsete practic n orice esut.
Mamiferele prezint 30 de catene polipeptidice distincte din punct de vedere genetic care se
asociaz pentru a forma 16 tipuri de colagen care exist n acelai individ n esuturi diferite.
Aceast protein extracelular este alctuit dintr-un triplu helix , fiecare caten din
acesta, coninnd cte 1000 resturi de aminoacizi. Secvena n aminoacizi este regulat, n sensul
c aproape fiecare al treilea aminoacid este reprezentat de glicin. Secvena Gly-Pro-Hyp se
repet n mod curent
Colagenul este o molecul cu o lungime de circa 3000 i un diametru de 15 .

Figura 3.42 Secvena n aminoacizi la captul C terminal al unui lan de colagen I bovin ce
aparine unei regiuni triplu helicale (Hyp* reprezint 3-hidroxiprolina).

Pe lng 4-hidroxiprolin (Hyp), n aceast protein fibroas se mai gsesc i ali

aminoacizi hidroxilai i anume: 3-hidroxiprolina i 5-hidroxilizina, dar n cantiti mult mai mici.
Prolina este hidroxilat la hidroxiprolin, sub aciunea prolil hidroxilazei, dup ce catena
polipeptidic a fost sintetizat. Prezena aminoacizilor hidroxilai permite formarea de legturi de
hidrogen intramoleculare care stabilizeaz colagenul.
Prolil hidroxilaza are nevoie de prezena acidului ascorbic (vitamina C) pentru a-i
manifesta activitatea enzimatic. Carena de vitamin C din hrana oamenilor provoac boala
numit scorbut, n care colagenul sintetizat nu poate forma fibre, ceea ce determin apariia
leziunilor la nivelul pielii i fragilitate vascular.
Catenele polipeptidice individuale din colagen adopt o structur de helix de stnga i se
agreg n triplul helix, rsucindu-se una n jurul celeilalte spre dreapta. (Fig. 7-31 Voet).
Caracteristicile acestui superhelix sunt n=3,3 i p=10. Evident, n centrul acestui triplu helix

spaiul disponibil pentru catenele laterale ale aminoacizilor este foarte strmt i aa se explic de
ce fiecare al treilea rest este reprezentat de Gly.

Figura 3.43 Structura triplu helix a colagenului

Legturile peptidice sunt astfel orientate nct hidrogenul iminic al

unui rest de Gly de pe o caten polipeptidic formeaz o legtur de
hidrogen cu oxigenul carbonilic al unui rest de alt aminoacid de pe o caten
nvecinat. Resturile de Pro i Hyp voluminoase i relativ inflexibile,
confer rigiditate ntregului ansamblu.
Colagenul conine glucide legate covalent, care reprezint 0,4-12%
din masa total, n funcie de esutul de origine. Acestea sunt reprezentate
n special de glucoz, galactoz i dizaharidele rezultate din combinarea lor
i sunt ancorate la nivelul resturilor de 5-hidroxilizin din colagen sub
influena unor enzime specifice.
Colagenii de diferite tipuri formeaz fibrile bandate sau agregate de
tipul reelelor. Fibrele bandate sunt alctuite din diferite tipuri de colagen: I,
II, III, V i IX. Aceste fibrile prezint o peridiocitate de 680 i un
diametru de 100 2000 , n funcie de tipurile de colagen pe care le
conin i de esutul de origine.

Figura 3.43 Tip de structur glucidic ancorat covalent de moleculele de colagen

n cadrul fibrilei, moleculele de colagen se aliniaz cap la coad i interacioneaz

hidrofob. Zonele clare apar la nivelul discontinuitilor dintre dou triplu helixuri consecutive.
Resturile glucidice sunt localizate n zonele clare, ceea ce sugereaz c sunt implicate n
direcionarea asamblrii fibrilelor.

Figura 3.44 Aspectul bandat al fibrilelor de colagen aa cum apare la microscopul electronic, se
datorete aranjamentului supraetajat al moleculelor de colagen, ceea ce confer un aspect striat. D,
reprezint lungimea ansamblului format dintr-un disc clar i unul ntunecat (D680 )

Colagenul este insolubil n solveni polari datorit legturilor covalente ncruciate

intramoleculare i intermoleculare, care se formeaz cu participarea catenelor laterale ale lizinei
i histidinei.
Prima etap a acestui proces de nreelare este catalizat de lizil oxidaz, o enzim cu
2+

Cu i n cadrul acesteia resturile de lizin sunt transformate n alizin. Apoi dou molecule de
alizin sufer o condensare crotonic, iar produsul rezultat reacioneaz cu histidina. Acest ultim
produs formeaz o baz
Schiff cu 5-hidroxilizina. Astfel se pot lega pn la patru lanuri polipeptidice unul de altul.
Aceste legturi ncruciate se produc n special la capetele N- i C- terminale ale moleculelor de
colagen.
Gradul de nreelare a colagenului crete cu vrsta animalului.

3.3.2 Conformaia tridimensional a proteinelor

3.3.2.1 Legtura peptidic
Legtura peptidic, plan i rigid, cu puine excepii, prezint o conformaie trans, astfel
nct atomii de carbon succesivi sunt situai pe prile opuse ale gruprii peptidice care i
unete. Conformaia cis este cu aproximativ 8 kcal/mol mai puin stabil dect cea trans.
Aceast diferen de energie este mai mic n legturile peptidice urmate de resturi de prolin
i de aceea, circa 10% din resturile de prolin din proteine sunt implicate ntr-o astfel de
legtur n conformaie cis.
Scheletul unei proteine poate fi privit ca secvena legturilor peptidice
plane i rigide legate ntre ele (Figura 3.17).

Figura 3.16 Conformaiile trans i cis ale legturii peptidice

Caracterul parial de dubl legtur al unitii peptidice se datorete

delocalizrii electronilor n cadrul sistemului reprezentat de oxigenul carbonilic, carbonul
carbonilic i atomul de azot iminic. n consecin, atomii implicai n legtura peptidic mpreun
cu atomii ce carbon ai aminoacizilor care particip la formarea acesteia, se gsesc n acelai
plan.
Ca urmare, mrimile geometrice ce definesc conformaia scheletului catenei polipeptidice
sunt unghiurile formate de legturile covalente simple care leag fiecare C de gruprile peptidice
plane adiacente. Acestea sunt unghiurile de torsiune sau diedrale referitoare la legturile dintre
C N (unghiul ) i C C (unghiul ) corespunztoare fiecrui rest de aminoacid (Figura
3.18). n principiu, unghiurile i pot lua valori ntre -180 i +180, astfel nct toate
conformaiile posibile ale catenei polipeptidice pot fi descrise de aceste unghiuri conformaionale.
Prin convenie, conformaia n care =0 i =0 este cea n care legturile peptidice consecutive
sunt coplanare. Variaiile pozitive ale unghiurilor i corespund rotaiei n jurul acelor de
ceasornic.
Experimentele cu peptide model au dovedit c multe combinaii ale unghiurilor i nu
sunt posibile datorit coliziunilor sterice dintre atomii implicai n legtura peptidic, pe de o

parte, i acetia i gruprile laterale ale aminoacizilor, pe de alt parte. Informaiile de acest tip
sunt furnizate de diagrama Ramachandran (Figura 3.19).
Glicina, care este singurul aminoacid care nu conine nici un atom de
carbon la nivelul catenei laterale, permite existena mult mai multor valori posibile pentru
unghiurile i . Diagrama Ramachandran referitoare la resturile de glicin dintr-o caten
polipeptidic dovedete acest plus de permisivitate. De aceea acest aminoacid se gsete n
locurile unde catena polipeptidic face o ntoarcere n scurt.

Figura 3.17 Conformaia extins a unui lan polipeptidic

Figura 3.18 Unghiurile de torsiune ale fiecrei catene polipeptidice

n schimb, prolina este aminoacidul cu cele mai multe constrngeri

conformaionale, datorit catenei sale laterale ciclice.
3.3.2.2 Structura secundar a proteinelor
Structura secundar a unei proteine poate fi definit drept conformaia local a scheletului
catenei polipeptidice.

Figura 3.19 Diagrama Ramachandran ce arat valorile unghiurilor

i permise din punct de vedere steric pentru poli-L-alanin

Figura 3.20 Diagrama Ramachandran pentru resturile de glicin dintr-un lan polipeptidic

Pauling i Corey, doi clasici ai chimiei proteinelor, au postulat un

principiu structural important, conform cruia, n proteine trebuie s se
formeze numrul maxim posibil de legturi de hidrogen ntre gruprile
carbonil i imino

din cadrul legturilor peptidice de la nivelul catenei

polipeptidice.
Modelele de pliere a scheletului catenei polipeptidice sunt: helixul,
structurile pliate, care sunt structuri repetitive i curbele (bends, loops sau
turns), care sunt structuri nerepetitive.
Proteinele ce pot adopta, n soluie, o serie de conformaii au o
structur dezordonat (random coil).
3.3.2.2 a Helixul
Prin rotirea cu acelai unghi n jurul fiecrui atom de carbon , catena polipeptidic
adopt o conformaie helical. Helixul poate fi caracterizat prin:

numrul de uniti de aminoacizi per tur de spir (n),

pasul spirei (p), care este proiecia unui tur de spir complet pe axa

helixului

creterea helixului pentru fiecare rest de aminoacid (d); d=p/n

Helixurile pot fi de dreapta sau de stnga, deci prezint chiralitate.

De asemenea, trebuie s prezinte unghiuri i , care s se gseasc n
regiunile permisive ale diagramei Ramachandran.
Structura helix este un aranjament rigid al catenei polipeptidice, care prezint simultan
unghiuri conformaionale permisive i numrul maxim de legturi de hidrogen ntre unitile
peptidice. A fost descoperit de Pauling n 1951. n cazul polipeptidelor alctuite din aminoacizi din seria steric L, helixul este de dreapta i este caracterizat de n=3,6 resturi de
aminocizi per tur de spir, p=5,4, d=1,5 i unghiurile de torsiune =-57 i =-47. Legturile

de hidrogen se formeaz ntre oxigenul carbonilic al aminoacidului n i hidrogenul iminic al

aminoacidului n+4, ceea ce conduce la o la o distan NO de 2,8 care este aproape de
optimumul necesar pentru formarea legturii de hidrogen (2,55-2,77 ). ntre atomii implicai n
legtura peptidic se stabilesc i interacii van de Waals, pe lng cele de hidrogen, ceea ce
explic stabilitatea remarcabil a acestui tip de structur secundar.

Figura 3.21 Exemple de helixuri. Helixul de dreapta i stnga sunt definite cu valori n pozitive, respectiv
negative.

Teoretic, se pot forma i helixuri de stnga, dar acestea nu au fost detectate pn acum
n proteine.
Catenele laterale R ale aminoacizilor sunt orientate spre exteriorul cilindrului delimitat
de helix, pentru a evita mpiedicrile sterice rezultate n urma interaciei cu scheletul catenei
polipeptidice sau cu alte resturi.
Peptidele cu cel puin 13 resturi de aminoacizi i asum spontan, n ap, aceast
conformaie. Dei diferena ntre stabilitatea termodinamic a structurii helix i cea complet
nepliat, dezordonat, numit random coil, este mic, poli-L-alanina adopt o conformaie
helical n soluii apoase.
O proprietate important ce decurge din regularitatea acestui tip de structur secundar,
care se aplic i altora este cooperativitatea n pliere. Dup ce s-a format un singur tur de spir,
adugarea succesiv a resturilor urmtoare de aminoacizi se face mult mai rapid. Avnd n vedere
restriciile sterice, unghiul este aproximativ corect pentru fiecare rest adugat, iar pentru
unghiul se ajunge la conformaia corect prin formarea legturii de hidrogen dintre oxigenul
carbonilic i hidrogenul dintr-o grupare imino a unei legturi peptidice deja fixat ntr-o
conformaie helical.
Glicina dezorganizeaz acest tip de structur secundar, probabil datorit entropiei
crescute a lanului polipeptidic conferite de posibilitile conformaionale ale unghiurilor i
pentru resturile glicil. Prolina dezorganizeaz helixul, datorit valorilor restrictive ale
unghiurilor i , care fac ca helixul s se torsioneze. De regul, resturile prolil se gsesc la
sfritul helixurilor. Toi ceilali aminoacizi se pot integra n acest element de structur secundar,
putnd s-l stabilizeze sau s-l destabilizeze. n general, aminoacizii cu catene laterale ce prezint
constante dielectrice mici, stabilizeaz helixul, pentru c favorizeaz formarea legturilor de
hidrogen dintre unitile peptidice.

Structura helix prezint un moment de dipol, pentru c toate legturile de hidrogen sunt
orientate n aceeai direcie i sunt paralele cu axa structurii.
Structura helix este un helix 3,613, adic conine 3,6 resturi de aminoacizi per tur de
spir i 13 atomi, inclusiv atomul de hidrogen implicat n formarea legturii de hidrogen (Figura
3.23).
Alte structuri helicale posibile sunt: 2,27, 310 i 4,416. Helixul 2,27 numit i panglic
(ribbon) nu a fost observat n natur niciodat. Helixul de dreapta 310 este mai subire i mai
alungit dect cel cel i a fost observat ocazional n proteine, fcnd legtura ntre helix i o
poriune adiacent a catenei polipeptidice. Helixul (4,416) a fost observat rar n proteine, la
captul C-terminal, i este mai scurt i mai lat comparativ cu helixul.

Figura 3.22 Structura unui -helix de dreapta

Figura 3.23 Modelul legturilor de hidrogen n mai multe tipuri de helix

Coninutul proteinelor n helix variaz de la 0 la 100%. De exemplu, mioglobina are o

astfel de structur secundar n proporie de 75-80%, pe cnd chimotripsina nu o prezint de loc.
3.3.2.2 b Structura pliat
Acest element de structur secundar (numit pentru c a fost descoperit dup helix)
este stabilizat prin legturi de hidrogen ce se formeaz ntre lanuri polipeptidice nvecinate. i-n
acest caz, unghiurile i se gsesc n regiunea permisiv a diagramei Ramachandran i este
utilizat capacitatea maxim de formare a legturilor de hidrogen.
O caten polipeptidic pliat, este numit caten i este aproape complet extins. Ca
urmare, distana axial ntre aminoacizii vecini este de 3,5 , n contrast cu 1,5 pentru helix.
n conformaia legturile de hidrogen se pot forma intracatenar sau ntre catene
polipeptidice adiacente. Structura pliat poate exista n dou variante:

antiparalel, n care lanurile polipeptidice nvecinate au polaritate opus, iar legturile de

hidrogen formate sunt paralele

paralel, n care catenele sunt orientate n aceeai direcie, iar punile de hidrogen
constituite sunt concurente

Catenele laterale ale aminoacizilor sunt orientate de o parte i de alta a

lanului polipeptidic. Structura pliat se prezint ca o foaie de hrtie mpturit n evantai.
n anumite situaii exist limitri referitoare la tipul de aminoacizi ce pot
participa la formarea structurii. Atunci cnd catenele sunt foarte aproape una de alta ntr-o
protein, cum este cazul fibroinei din mtase i al proteinei din pnza de pianjen, au un coninut
foarte ridicat de resturi de glicin i alanin, care au radicalii R cei mai mici. Aceti aminoacizi
sunt prepondereni la nivelul unei mari pri din secvena proteic
Structura pliat antiparalel apare n proteine fibrilare de tipul fibroinei, care este o
keratin, produs de viermele de mtase. Dar se gsete i n aproximativ 80% din proteinele
globulare analizate pn n prezent. n multe cazuri, ntreaga protein conine numai structur.
La nivelul proteinelor globulare, acest motiv structural const din 2 pn la 15 catene
polipeptidice (media fiind 6). Catenele au pn la 15 resturi de aminoacizi, prezentnd n medie
6 resturi. De exemplu, lectina concanavalina A prezint ase catene antiparalele. Arareori se
ntlnete o structur paralel cu mai puin de 5 lanuri, ceea ce sugereaz c aceasta este mai
puin stabil de cea antiparalel

Figura 3.24 Formarea legturilor de hidrogen n structuri pliate

Este posibil ca aceasta s se datoreze distorsionrii legturilor de hidrogen comparativ cu cele

din structura paralel. De asemenea, n unele proteine, se ntlnesc i structuri mixte paralelantiparalel.
3.3.2.2 c Structurile nerepetitive
Structurile secundare repetitive reprezentate de helix i structur
pliat reprezint circa jumtate dintr-o protein globular medie, restul fiind reprezentat de
segmente polipeptidice nerepetitive care formeaz o conformaie de bucl (coil sau loop
conformation). Totui, aceste structuri nu sunt mai puin ordonate dect cele repetitive.
n proteine, poriunile de caten polipeptidic cu o anumit structur secundar repetitiv
sunt legate cu fragmente care schimb brusc direcia, numite reverse turns sau bends (numite
aa pentru de cele mai multe ori fac legtura ntre dou structuri antiparalele), care se gsesc n
general la suprafaa proteinelor. Acestea se mai cunosc i sub denumirea de bucle n form de ac
de pr (hairpin bends).

Caracteristica esenial a acestor structuri este c sunt alctuite din patru aminoacizi i c
oxigenul carbonilic al restului de aminoacid n din prima legtur peptidic a acestui motiv
formeaz o legtur de hidrogen cu hidrogenul iminic n+4 al celei de-a treia legturi peptidice
(ultima). Conformaiile acestor elemente de structur secundar variaz n funcie de secvena n
aminoacizi. S-a constatat c glicina i prolina se gsesc frecvent n bends, datorit rolului de
balama flexibil a glicinei ntre regiuni de lan polipeptidic, pe de o parte, i al restriciilor
conformaionale impuse de prolin pe de alta. La ora actual, se apreciaz c secvenele care
conin prolin contribuie la constituirea bends. Este probabil ca formarea acestor structuri
secundare nerepetitive n stadiile iniiale ale plierii proteinelor s determine asamblarea
cooperativ a elementelor de structur. Exist dou tipuri de structur bends, care difer prin
valorile unghiurilor de torsiune:
Tipul I cu :

2=- 60, 2= - 30
3=- 90, 3=0

Tipul II cu:

2=- 60, 2= 120

3= 90, 3=0

Tipul I este considerat o form distorsionat de helix 310, iar tipul II prezint adeseori
glicina n poziia 3. De asemenea, n ambele tipuri de bends, al doilea rest de aminoacid este
frecvent prolina.
Aproape toate proteinele cu mai mult de 60 de resturi de aminoacizi conin elemente
curbe ce conin 6 pn la 16 uniti constitutive, numite bucle ( loops, pentru c au forma
literei greceti omega), care pot conine bends i care constituie entiti globulare compacte, ale
cror caviti sunt ocupate de catenele laterale ale aminoacizilor constitueni. Acestea se gsesc
de regul la suprafaa proteinelor i probabil au rol n recunoaterea biologic.
Multe proteine prezint regiuni dezordonate, care pot fi reprezentate de secvene ce
conin aminoacizi cu radical ionizat la pH fiziologic, sau de capetele N- i C-terminale, care sunt
caracterizate de posibilitatea de a se mica liber n soluie. Adeseori, aceste segmente
polipeptidice au rol funcional, respectiv, pot lega o molecul specific. Astfel, ele au o structur
dezorganizat n absena ligandului i una organizat n prezena acestuia. Aceast flexibilitate
asigur posibilitatea proteinei de a-i exercita funcia biologic.

Figura 3.25 Tipuri de bends

3.3.2.3 Structura teriar

Din punct de vedere al conformaiei spaiale, proteinele pot fi globulare
sau fibrilare. Proteinele fibrilare prezint secvene repetitive sau pseudorepetitive, care sunt
rspunztoare pentru conformaia lor regulat, pe cnd cele globulare nu au o asemenea
caracteristic a structurii primare. O structur primar unic determin o structur tridimensional
unic care se formeaz prin plierea n spaiu a unei proteine.
Structura teriar a unei proteine este aranjamentul tridimensional realizat prin plierea
elementelor de structur secundar i interaciile dintre catenele laterale ale aminoacizilor
constitueni. Unitatea constitutiv a structurii teriare este reprezentat de domeniu, care conine
combinaii de elemente de structur secundar, este alctuit din circa 50-200 de resturi de
aminocizi i prezint un diametru de aproximativ 25 . Domeniile sunt uniti independente din
punct de vedere structural i au caracteristicile unei proteine globulare mici. Proteinele de mici
dimensiuni pot avea unul, dou sau trei domenii. n schimb, titina, care este o protein enorm din
muchi, de 3000 kilodaltoni, prezint 260 de domenii. n cele mai multe proteine, catena
polipeptidic se pliaz pentru a forma un domeniu, dup care trece printr-o regiune flexibil, de
tip balama i apoi se organizeaz urmtorul domeniu. Chiar cnd o protein este alctuit dintrun singur domeniu, acesta conine adesea doi lobi ntre care se gsete o fos. Multe proteine, de
exemplu hemoglobina, constau din subuniti de mrimea domeniilor globulare ale unor proteine
de dimensiuni mici.
Domeniile structurale ale proteinelor sunt adeseori codificate de o singur secven
codant de ADN, adic de un exon al unei gene de la eucariote. Domeniile de acest tip pot servi
ca module mobile din punct de vedere evolutiv, care apar n noi proteine i se multiplic n timpul
evoluiei. Astfel, de exemplu, domenii structurale din imunoglobuline se gsesc nu numai n

anticorpi ci i ntr-o serie de proteine de suprafa ale celulelor. La interfaa dintre domenii se
gsesc n principal aminoacizi nepolari, dar se formeaz i un numr mic de legturi de hidrogen.
Centrul catalitic activ al enzimelor este localizat de regul la interfaa dintre domenii. n timpul
actului catalitic pot avea loc micri ale domeniilor i reorganizri ale legturilor de hidrogen de
la nivelul interfeelor. De asemenea, situsurile de legare a unor molecule mici, de tipul
nicotinamid adenin dinucleotidului (NAD+), se gsesc ntre dou domenii ale unei proteine ce
prezint mai multe astfel de uniti, ceea ce nseamn c la acest proces particip grupri ale
aminoacizilor prezeni n ambele domenii.
Prin studii de difracie cu raze X pe proteine cristalizate, s-a putut determina structura
tridimensional a multor proteine i s-a observat c, n toate acestea, apar combinaii de elemente
de structur secundar cu aranjamente geometrice specifice, care se numesc superstructuri
secundare sau motive.
Cele mai des ntlnite motive structurale sunt: helix-loop-helix, haipin , --.

Figura 3.26 Variante ale motivului helix-loop-helix

Figura 3.27 Motivul hairpin

Figura 3.28 Motivul

n figura 3.26 sunt prezentate dou variante ale motivului helix-loop-helix. n acest caz,
dou segmente sunt legate printr-o regiune loop de lungime variabil. Varianta (a) se ntlnete
n proteinele ce se leag la ADN (unul din segmentele helicale interacioneaz cu acidul nucleic)
iar varianta (b) este asociat cu proteinele ce leag calciu (un cation divalent de calciu se
ancoreaz n mijlocul regiunii loop).
Motivul hairpin prezint dou catene , legate printr-o bucl de lungime variabil, care
pot fi antiparalele (Figura 3.27a) sau paralele (Figurile 3.27 b i c). Conexiunea dintre catenele
se poate face spre dreapta (Figura 3.27 b), ceea ce se ntlnete mai frecvent, sau spre stnga
(Figura 3.27 c).
Al treilea motiv, --, este constituit din dou catene paralele, legate spre dreapta cu
un helix (Figura 3.28).
n keratin se ntlnete motivul , n care dou helixuri cu
polaritate diferit sunt legate direct.
Figura 3.21 Motivul din unele proteine

n funcie de polaritatea lor, aminoacizii au o distribuie spaial

diferit. Astfel, aminoacizii nepolari se gsesc n principal n interiorul
proteinelor, fr s aib contact cu solventul apos. Totui, n unele
cazuri, acetia sunt prezeni i la suprafaa extern, unde sunt aglomerai
n regiuni hidrofobe, care constituie situsuri de interacie cu alte
proteine sau lipide de la nivelul membranelor. Cei ionizai la pH
fiziologic se gsesc n principal la suprafaa proteinelor i interacioneaz cu solventul apos. Dac
acetia se gsesc n interiorul proteinei, au o funcie bine definit, participnd, de exemplu, la
cataliza enzimatic sau la legarea unui ion metalic. n sfrit, aminoacizii polari dar neionizai la
pH fiziologic se gsesc distribuii att la suprafaa proteinelor ct i n interiorul acestora, unde
particip la formarea legturilor de hidrogen cu alte grupri din interiorul acestora.

Forele ce stabilizeaz structura teriar

n urma plierii n spaiu a catenelor polipeptidice, resturile de aminoacizi aflate la distan
mare n cadrul structurii primare, devin nvecinate iar catenele lor laterale interacioneaz.
Tipurile de interacii care se pot stabili sunt:
Legturi disulfurice, care sunt legturi covalente, stabilite ntre resturi de cistein
apropiate n urma organizrii spaiale a proteinei. Acestea stabilizeaz structura tridimensional a
catenelor polipeptidice.
Interacii electrostatice ce se realizeaz prin interacii ionice (punile saline) i prin
interacii dipol-dipol. Interaciile ionice se realizeaz ntre radicali ai aminoacizilor de semn
contrar. Un exemplu de astfel de perechi de ioni sunt: GluLys sau AspArg. Radicalii ionizai
ai aminoacizilor, fiind expui la exteriorul moleculei proteice, sunt solvatai de moleculele de ap.
Perechile de ioni de semn contrar care se gsesc mascate n miezul proteinelor globulare,
contribuie ns la stabilizarea structurii teriare, dei contribuia acestor interacii la stabilizarea
structurii tridimensionale este mic.
Interaciile dipol-dipol, care apar n dipoli indui i/sau permaneni ai unor molecule
neutre din punct de vedere electric, sunt cunoscute sub denumirea de fore van der Waals.
Datorit faptului c gruprile carbonil i imino ale legturilor peptidice sunt dipoli permaneni, pe
lng legturile de hidrogen, datorit cmpurilor electrice reziduale acestea interacioneaz i prin
fore van der Waals. De asemenea, dipolii permaneni induc un moment de dipol n grupri
vecine, ceea ce determin apariia unor fore de atracie. Aceste interacii sunt mult mai slabe
dect cele ionice, variaz cu r-3, astfel nct diminueaz cu creterea distanei. De altfel, orice
molecul neutr din punct de vedere electric are un moment de dipol mic rezultat din micarea
rapid a electronilor. Acest moment de dipol tranzitoriu polarizeaz electronii din gruprile
nvecinate genernd un moment de dipol (Figura 3.29 c) care determin atragerea gruprilor una
de ctre cealalt. Acestea sunt fore de dispersie London, care sunt extrem de slabe (energia de
asociere este proporional cu r-6). Numrul mare de contacte interatomice n proteine fac ca
forele London s influeneze major conformaia acestora. n miezul proteic cu

constant

dielectric sczut, interaciile dipol-dipol influeneaz semnificativ plierea proteinelor.

Figura 3.29 Interaciile dipol-dipol. Intensitatea dipolului este
reprezentat de grosimea sgeii (a) Interacii dipol-dipol (b) Interacii
dipol-dipol indus (c) Fore de dispersie London

Legturi de hidrogen iau natere ntre un rest cu

o grupare donor slab acid (D-H) i un alt rest cu un
atom acceptor (A), care conine o pereche de electroni
neparticipani. n sistemele biologice, A poate fi C, N i
S. Legturile de hidrogen sunt mai puternice dect cele
van der Waals, dar mai slabe dect punile saline i

legturile covalente. Astfel de legturi se pot forma ntre resturile SerSer, AsnSer,
GlnCys, etc.
n proteine, multe legturi de hidrogen sunt membre ale unei reele n care fiecare donor
formeaz aceste legturi cu acceptori multipli i fiecare acceptor formeaz legturi de hidrogen cu
mai muli donori. Legturile de hidrogen interne din proteine se formeaz astfel nct ia natere
numrul lor maxim posibil. n solveni apoi, proteinele complet nepliate formeaz legturi de
hidrogen cu moleculele de ap.
Legturile de hidrogen interne constituie o baz structural pentru plierea catenelor
polipeptidice.
Forele hidrofobe sunt cele ce determin substanele nepolare s i minimizeze contactul
cu apa i moleculele amfipatice (cu o parte polar i una apolar) s formeze micele n soluii
apoase. Datorit faptului c proteinele formeaz un fel de micele intramoleculare, n care catenele
laterale ale aminoacizilor nepolari sunt departe de contactul cu moleculele de ap, interaciile
hidrofobe sunt importante pentru structura proteinelor.
Dei aceste fore sunt mai slabe i dect forele van der Waals, n ansamblurile
moleculare care implic un numr mare de contacte nepolare, ele constituie o real for i
influeneaz major plierea proteinelor n conformaia nativ.

Figura 3.30 Tipuri de interacii care stabilizeaz structura tridimensional a proteinelor

n interiorul moleculelor proteice, catenele laterale ale aminoacizilor sunt mpachetate

foarte strns. Eventualele fose existente sunt umplute cu molecule de ap. Densitatea de
mpachetare (raportul dintre volumul nveliurilor van der Waals ale atomilor dintr-o regiune i
volumul total al regiunii) n interiorul proteinelor globulare este de aproximativ 0,75. Aceast
valoare este de acelai ordin de mrime cu cea corespunztoare cristalelor moleculare formate de
molecule organice mici. De aceea s-a tras concluzia c interiorul unei proteine este asemntor cu
un cristal molecular, bine mpachetat. Totui, regiunile cu multe legturi de hidrogen sunt
mpachetate mai lax.
3.3.2.4 Structura cuaternar a proteinelor

Dei multe proteine globulare funcioneaz ca monomeri, n sistemele biologice exist un

numr imens de exemple de ansambluri proteice complexe.
Structura cuaternar a proteinelor reprezint asocierea ordonat a subunitilor globulare
pentru a forma un agregat funcional. Aceasta implic dou tipuri de ansambluri proteice:
Primul tip, n care subunitile sunt, din punct de vedere structural, foarte diferite, iar
organizarea lor spaial depinde de natura specific a interaciilor dintre subunitile diferite. n
general, aceste ansambluri prezint forme geometrice foarte neregulate.
Al doilea tip, n care agregatele moleculare sunt alctuite din copii multiple ale unuia sau
mai multor tipuri de subuniti diferite. Datorit recurenei interaciilor structurale specifice dintre
subuniti, asemenea agregate formeaz, n general, aranjamente regulate din punct de vedere
geometric.
Proteinele alctuite din subuniti identice se numesc oligomere, iar subunitile
respective se numesc protomeri. Un protomer poate fi constituit dintr-un singur lan polipeptidic
sau din mai multe lanuri diferite. Astfel, hemoglobina, care este alctuit din dou catene
polipeptidice de -globin i dou de -globin (22), poate fi considerat un dimer alctuit din
doi protomeri .
Legturile care se stabilesc ntre subunitile dintre ambele tipuri de ansambluri proteice
sunt: hidrofobe, de hidrogen i uneori sub form de puni disulfurice.
Avnd n vedere c proteinele sunt compui fundamental asimetrici (pentru c sunt
alctuite numai din L-aminoacizi), este evident c cel mai simplu model de structur cuaternar
este formarea agregatelor liniare (Figura 3.31 a, b). Formarea unor asemenea agregate se
realizeaz n urma repetiiei unui singur tip de interacie structural specific dintre unitile
identice, adiacente ale ansamblului.
O alt modalitate de aranjare pentru acest nivel de organizare a proteinelor este simetria
ciclic sau rotaional. n urma asocierii subunitilor rezult structuri plate

(3.32 a-e) sau

poliedral (3.32 f, g). Moleculele simetrice cu structur plat sunt de regul dimeri sau trimeri.
Agregatele mai mari, sunt n general poliedrice, ceea ce dovedete existena mai multor tipuri de
interacii intermoleculare ntre subunitile. De asemenea, acestea ncorporeaz un numr fix de
copii ale unei subuniti, spre deosebire de agregatele liniare i cu simetrie helical.

Figura 3.31 Agregate proteice cu structur cuaternar liniar sau helical

De asemenea, destul de frecvent, se observ i aranjamente helicale ale subunitilor

moleculare identice (Figura 3.31 c, d). Agregatele moleculare helicale sunt, n general, asociate
cu structurile ce au proprietatea de autoasamblare i se ntlnesc n nveliul proteic al virusurilor
filamentoase, unde formeaz un container cilindric n care este adpostit acidul nucleic viral
(Figura 3.32). Datorit faptului c nveliul este rezultatul interaciei a numeroase copii ale
aceleiai proteine, acest aranjament reprezint o utilizare foarte eficient a informaiei coninute
n acidul nucleic viral (Figura 3.33).
Structurile cuaternare helicale i poliedriece joac un rol central n autoasamblarea structurilor
biologice de dimensiuni foarte mari pornind de la
subuniti identice. Stabilizarea acestora se realizeaz atunci cnd toate subunitile
interacioneaz n mod similar din punct de vedere geometric, precum ionii ntr-un cristal de sare.
Interaciile din cadrul structurii cuaternare nu sunt simetrice sau echivalente chiar dac au loc
ntre subuniti identice. Cel mai simplu tip de neechivalen se nregistreaz la unele contacte
ntre dimeri, unde catenele laterale ale unor aminoacizi individuali situate n apropierea axei de
simetrie sunt forate s adopte poziii diferite pentru a evita unele suprapuneri sterice.
Formarea agregatelor din subuniti are consecine funcionale foarte importante. Interaciile de la
nivelul suprafeelor de contact permit o modalitate de comunicare ntre subunitile individuale.
Evenimentul produs atunci cnd o subunitate din agregat interacioneaz cu un ligand sau un
substrat se propag i la nivelul celorlalte subuniti. Asemenea interacii constituie baza
fenomenului de cooperativitate n sistemele biochimice i permit o serie de mecanisme de control
pentru reglarea proceselor biochimice.

Figura 3.32 Tipuri de structuri cuaternare cu simetrie rotaional i poliedric

Figura 3.33 Structura nucleocapsidei virusului mozaicului tutunului

3.3.2.5 Corelaii ntre structura primar i conformaia unei proteine

Structurile secundar i teriar sunt determinate de structura primar, ceea ce este o
confirmare a faptului c conformaia pliat nativ este structura cea mai stabil ce se poate forma.
Pornind de la aceasta, teoretic este posibil s se realizeze anticiparea structurii proteinei porninduse de la secvena de aminoacizi. Practic, acest tip de predicie, rmne un deziderat nc greu de
atins. La ora actual, avnd n vedere c un numr mare de proteine conin un numr mic de tipuri
de domenii, este posibil s se prezic structura unora, folosind informaiile acumulate din studiile
de difracie cu raze X ale proteinelor nrudite.
n acest moment este clar c unii aminoacizi tind s formeze structuri secundare de un
anumit tip. Analiznd figura 3.34 se observ c acidul glutamic, metionina i alanina par s fie cei
mai importani formatori de helix, pe cnd valina, izoleucina i tirozina tind s formeze structuri

 pliate. De asemenea, prolina, glicina, asparagina , acidul aspartic i serina se gsesc cel mai
frecvent n conformaia turns, care permite o schimbare n scurt a direciei catenei polipeptidice.

Figura 3.34 Probabilitatea relativ a unui aminoacid de a se gsi

ntr-un anumit element de structur secundar

n 1956, Christian Anfinsen a efectuat un experiment, devenit clasic, care a dovedit

existena relaiei dintre secvena de aminoacizi i conformaia ribonucleazei bovine, protein, cu
activitate enzimatic, alctuit dintr-o singur caten polipeptidic format din 124 resturi de
aminoacizi, care conine i patru legturi disulfurice. Prin tratarea acesteia cu mercaptoetanol,
agent de scindare a legturilor disulfurice, soluie de uree 8M, care depliaz proteina, la pH=8, s-a
obinut o structur complet dezorganizat (conformaia random coil), care nu mai prezint
activitate enzimatic.

Figura 3.35 Reducerea i denaturarea ribonucleazei

Enzima denaturat n urma acestui tratament, i-a recptat activitatea prin ndeprtarea
mercaptoetanolului i ureei prin dializ. Anfinsen a dedus c gruprile
sulfhidril ale enzimei denaturate sunt reoxidate n prezena aerului iar
enzima se repliaz spontan n forma activ din punct de vedere
catalitic. Acest experiment a dovedit c informaia coninut n
secvena de aminoacizi determin structura tridimensional complex a
ribonucleazei.
Figura 3.36 Formarea ribonucleazei native n prezen de urme de -mercaptoetanol

Dac reoxidarea ribonucleazei reduse s-a realizat n prezen de uree 8M, dup care
ulterior, agentul denaturant a fost ndeprtat, refacerea activitii a fost n jur de 1%. Motivul este
c, n acest caz, refacerea punilor disulfurice s-a fcut greit. Conformaia acestei forme
enzimatice prezint o energie liber mare. n prezena unor urme de mercaptoetanol n soluie,
aceast form trece n una complet activ, pentru c agentul de reducere catalizeaz reformarea
punilor disulfurice pn cnd este reconstituit enzima nativ. Conformaia nativ este
caracterizat de cea mai mic energie liber, deci are cea mai mare stabilitate comparativ cu
forma cu legturi disulfurice greit formate.

Proteinele globulare
Proteinele globulare se prezint ca molecule sferice compacte i ndeplinesc roluri de
enzime, proteine transportoare sau receptori.
Mioglobina
Mioglobina este o protein muscular care fixeaz O2. Este alctuit dintr-un singur lan
polipeptidic, care conine 153 de aminoacizi i are o mas molecular de aproximativ 17 kDa i o
grupare prostetic, reprezentat de hem.
n 1957, Kendrew a determinat structura tridimensional a mioglobinei din muchi
scheletic de caalot , care este stabil, i servete ca rezerv de oxigen n timpul scufundrii.
Aceast protein are o structur compact, cu un procent de -helix de aproximativ 75%.
Cele opt segmente helicale, de dreapta, au fost denumite de la A la H. Primul rest de aminoacid n
helixul A este desemnat A1, al doilea A2, etc. ntre helixuri exist cinci segmente nehelicale,
(numite AB, CD, etc., dac sunt localizate ntre helixurile A i B, respectiv ntre C i D).

Figura 3.46 . Modelul tridimensional al mioglobinei

Legturile peptidice sunt plane, iar gruprile carbonil i imino sunt n

conformaie trans.

Interiorul moleculei const aproape n totalitate din resturi de aminoacizi nepolari:

leucin, valin, metionin i fenilalanin, iar treonina, tirozina i triptofanul, care prezint o parte
polar i una apolar sunt orientai astfel nct poriunea polar protubereaz spre interior.
Unicele dou resturi de aminoacizi polari din miezul hidrofob sunt reprezentate de histidin, care
au rol n legarea hemului.
Hemul este format dintr-un derivat porfirinic i un ion Fe (II). Derivatul porfirinic care se
gsete n hemoglobin, ca i n mioglobin este protoporfirina IX, care conine patru inele
pirolice (notate de la A la D) legate prin puni metinice, substituite cu patru grupri metil, dou
grupri vinil i dou propionat.
Gruparea hem este situat ntr-o adncitur n molecula de mioglobin. Patru situsuri de
coordinare sunt ocupate cu electronii atomilor de azot pirolic.

Figura 3.47 Structura hemului

Situsurile 5 i 6 sunt situate de o parte i de alta a planului inelului protoporfirinic.

Ionul de Fe (II) este legat de unul din resturile de histidin, restul F8 (histidina
proximal), care ocup a cincea poziie de coordinare a ionului, iar n a asea poziie se gsete
molecula de oxigen. Cellalt rest de histidin, E7 (histidina distal), se gsete ntre molecula de
hem, dar nu este legat de aceasta.

Figura 3.48 Modelul situsului de legare a mioglobinei, care prezint gruparea hem, histidina proximal (F8) i distal
(E7).

Mioglobina se poate gsi sub form de deoxihemoglobin i oxihemoglobin, care

prezint a asea poziie de coordinare a ionului divalent de fier liber, respectiv ocupat de O2
sau sub form de ferimioglobin, care conine ionul Fe (III), n care aceast poziie este ocupat
de o molecul de ap.
Apoproteina din mioglobin, micoreaz susceptibilitatea ionului Fe (II) din hem la
oxidare.
Hemoglobina
Hemoglobina este o protein cu rol de transportor al oxigenului molecular de la plmn la
esuturile periferice.a fost prima protein a crei mas molecular a fost determinat cu acuratee.
De asemenea este una din primele proteine a crei structur tridimensional a fost determinat de
ctre Max Peruz.
Este un tetramer 22 (sau un dimer alctuit din protomerii ). Subunitile i sunt
nrudite ntre ele din punct de vedere structural i evolutiv i cu mioglobina.
Hemoglobina transport oxigenul molecular de la plmni, branhii i piele la capilarele
din esuturi. Animalele foarte mici nu prezint aceast protein, pentru c respiraia se face prin
difuzia pasiv a oxigenului. ncepnd de la anelide apare sistemul circulator i deci necesitatea
unui transportor de oxigen, care poate fi hemoglobina, hemocianina sau hemeritrina.
Hemocianina este o hemoprotein care conine cupru i care este albastr n prezena oxigenului
i incolor n absena acestei interacii iar hemeritrina este o protein cu fier dar fr hem.
Petii din Antarctica au sngele incolor i sunt unicele vertebrate adulte fr
hemoglobin, pentru c au un metabolism diminuat, iar solubilitatea oxigenului la temperatura de
-1,9C este foarte mare.
Cele patru subuniti ale hemoglobinei leag necovalent cte o grupare hem. Hemul este
responsabil pentru culoarea roie a hemoglobinei, citocromilor i catalazei. Oxigenarea modific
starea electronic a complexului Hem-Fe(II), aa cum se observ din schimbarea de culoare de la
rou nchis a sngelui venos la rou deschis a sngelui arterial.
CO, NO i H2S pot coordina a asea poziie de ligand a ionului Fe(II) cu o mai mare
afinitate dect oxigenul molecular.
Fe(II) poate fi oxidat la Fe(III), cu formare de methemoglobin, care nu leag oxigenul
molecular. Molecula de hemoglobin este aproape sferic, cu un diametru de 55 , cele patru
subuniti fiind aranjate tetraedric. Gruprile hem sunt situate n adnciturile aflate la exteriorul
catenelor polipeptidice, cte una pentru fiecare subunitate.

Figura 3.49 Figura Hem-Fe(II) (feroprotoporfirina IX). Ionul de fier

divalent este hexacoordinat, patru situsuri fiind ocupate cu electroni
neparticipani ai atomilor de azot pirolic, al cincilea fiind coordinat de
electronii neparticipani ai unui atom de azot imidazolic dintr-un rest
de histidin din lanul globinic iar al aselea de o molecul de oxigen

Figura 3.50 Structura deoxihemoglobinei (a) i oxihemoglobinei (b)

Catena conine 141 iar catena , 146 resturi de aminoacizi. Structurile teriare ale celor
dou lanuri i a mioglobinei sunt similare, dei doar 18% din resturile de aminoacizi sunt
identice n cazul celor trei proteine. Concluzia ce se poate trage este c secvene de aminoacizi
diferite pot genera structuri tridimensionale similare.
La ora actual este cunoscut secvena n aminoacizi a peste 60 de specii, iar n urma
analizei acesteia s-a constatat c o variabilitate semnificativ a multor poziii, cu excepia a 9
aminoacizi care sunt conservai n majoritatea speciilor i au rol important pentru funcionarea
moleculei de hemoglobin.
Lanurile polipeptidice ale hemoglobinei sunt aranjate astfel nct interaciile
semnificative au loc ntre subunitile neidentice. Astfel, interacia 12 (respectiv 21) implic
19 de resturi de aminoacizi, pe cnd la interfaele 11 respectiv 22 interacioneaz 35 de resturi.
Natura interaciilor este predominant hidrofob, dar exist i legturi de hidrogen i ionice. n
schimb, interaciile 1-2 i 1-2 sunt puine i au caracter polar.
Oxigenarea determin modificri importante de structur cuaternar a hemoglobinei,
astfel c oxi- i deoxihemoglobina (proteina care are a asea poziie de coordinare a Fe (II)
ocupat de o molecul de ap, n loc de oxigen molecular) prezint forme cristaline diferite.

Oxigenarea determin rotaia dimerului 11 cu 15 fa de dimerul 22. Molecula oxigenat este

mai compact, astfel nct distana ntre ionii de Fe (II) din lanurile scade de la 40 (ct este n
molecula de deoxihemoglobin) la 33 . n oxihemoglobin, resturile C-terminale ale celor patru
lanuri polipeptidice prezint o libertate de rotaie aproape complet, pe cnd n
deoxihemoglobin, aceste grupri terminale sunt legate ntre ele. Gruprile carboxil terminale i
catenele laterale ale resturilor C-terminale particip la interacii electrostatice care rigidizeaz
tetramerul. n consecin, structura cuaternar a deoxihemoglobinei este denumit T (tensionat)
iar cea a oxihemoglobinei R (relaxat) (Figura 3.50). Legarea O2 la deoxihemoglobin modific
structura cuaternar a moleculei prin faptul c determin micarea n planul porfirinei. Atunci
cnd Fe2+ se mic n planul hemului, antreneaz n micare i restul de His, ceea ce determin
modificri conformaionale la nivelul interfeei subunitilor. Acest fapt determin trecerea TR.
Deci o modificare structural la nivelul unei subuniti este transmis la nivelul interfeei dintre
subuniti. Legarea oxigenului la o molecul de hem este comunicat la nivelul unor pri din
molecula de hemoglobin aflate la distane mai mari.
Hemoglobina nu transport numai oxigenul molecular ci i H+ i CO2.
Proprietile de legare a oxigenului sunt reglate prin interacii dintre situsuri separate
neadiacente. Hemoglobina este o protein alosteric, n timp ce mioglobina nu este. Aceast
diferen se manifest n trei moduri:
1) Legarea oxigenului molecular la hemoglobin favorizeaz
legarea unei alte molecule de oxigen la aceeai molecul de hemoglobin. Cu alte cuvinte,
oxigenul se leag cooperativ la hemoglobin, situaie care nu se ntlnete n cazul mioglobinei
2) Afinitatea hemoglobinei pentru oxigen depinde de pH, n
timp ce n cazul mioglobinei, acest parametru este independent de pH. Molecula de CO2 afecteaz
i ea caracteristicile de legare a oxigenului de ctre hemoglobin. Att H+ ct i CO2 favorizeaz
eliberarea O2 legat i reciproc, O2 determin eliberarea H+ i CO2 legai.
3) Afinitatea pentru oxigen a hemoglobinei este reglat de 2,3bifosfoglicerat. Ca urmare hemoglobina prezint o afinitate mai sczut pentru oxigen dect
mioglobina.
Dac se reprezint grafic saturaia Y (fracia de situsuri de legare a oxigenului ocupate) n
funcie de presiunea parial a oxigenului, pO2 se obine aa numita curb de disociere a
oxigenului

Figura 3.51 .Curbele de disociere a oxigenului pentru

mioglobin i hemoglobin

Analiznd Figura 3.51 se observ c, la

orice valoare a presiunii pariale a oxigenului,

mioglobina prezint o saturaie n oxigen mai mare dect hemoglobina, ceea ce nseamn c
mioglobina are o afinitate pentru oxigen mai mare dect hemoglobina. Curba de disociere a
mioglobinei este hiperbolic, pe cnd cea pentru hemoglobin are caracter sigmoid, ceea ce arat
c legarea O2 la hemoglobin este cooperativ, i n consecin, moleculele de hem din aceeai
molecul de hemoglobin comunic ntre ele.
n condiii fiziologice, scderea pH determin scderea afinitii hemoglobinei pentru O2
(Figura 3.52). De asemenea, creterea concentraiei de CO2 scade afinitatea pentru oxigen.

Figura 3.52 Efectul pH asupra afinitii hemoglobinei pentru oxigen

n contracia muscular se formeaz CO2 i H+ i

de aceea, n capilarele din muchi oxihemoglobina
elibereaz O2. Astfel, se realizeaz nivelul ridicat de O2
necesar pentru producerea de energie n esuturile active
din punct de vedere metabolic. Acest efect a fost
descoperit de Christian Bohr n 1904.
Efectul invers a fost observat de Haldane, n
1914, la nivelul capilarelor alveolare din plmn, unde, la
concentraia mare de O2, hemoglobina elibereaz CO2 i
H+ i fixeaz O2. Relaia dintre legarea O2, CO2 i H+ se
numete efect Bohr.
Afinitatea pentru oxigen a hemoglobinei din hematii este mai mic dect a hemoglobinei
n soluie. Acest fapt se datoreaz prezenei 2,3-bifosfogliceratului, care este un compus
intermediar n glicoliz, n hematii la concentraie aproximativ egal cu cea a hemoglobinei.
Acest metabolit scade afinitatea pentru oxigen a hemoglobinei de 26 ori, ceea ce permite
proteinei s cedeze oxigen la nivelul capilarelor din esuturile periferice.
Hemoglobina fetal sau hemoglobina F (22) manifest o afinitate pentru oxigen mai
mare n condiii fiziologice dect hemoglobina A (22), ceea ce optimizeaz transferul
oxigenului din circulaia matern n cea fetal. Hemoglobina F leag 2, 3-bifosfogliceratul mai
slab dect hemoglobina A i de aceea are o afinitate mai mare pentru oxigen.
S-a constatat c doar o molecul de 2, 3-bifosfoglicerat se leag la deoxihemoglobin,
ceea ce a sugerat c acest compus fosforilat se leag n cavitatea central situat pe axa de
simetrie a moleculei proteice, unde cele patru subuniti devin foarte apropiate. Studii ulterioare
de difracie cu raze X au confirmat presupunerea iniial.

Figura 3.53 Structura 2,3-bifosfogliceratului

Figura 3.54 Efectul 2,3 bifosfogliceratului asupra curbei de
disociere a oxigenului n hemoglobin

Situsul de legare al 2,3-bifosfogliceratului este constituit din resturi de

aminoacizi ncrcai pozitiv de pe fiecare lan i anume: gruparea -amino, His 2, Lys 82 i His
143. Acestea interacioneaz electrostatic cu molecula puternic negativ la pH fiziologic a 2, 3bifosfogliceratului.
n oxihemoglobin, cavitatea central devine prea mic pentru acest compus polianionic.
Practic, 2, 3-bifosfogliceratul stabilizeaz structura cuaternar a deoxihemoglobinei prin legarea
ncruciat a lanurilor , deci deplaseaz echilibrul spre forma T. Prin acest mecanism scade
afinitatea pentru oxigen a hemoglobinei.
De asemenea, CO2 diminueaz afinitatea hemoglobinei pentru oxigen. Acesta este
transportat de hemoglobin sub form de carbamat, datorit faptului c grupare -amino
neionizat a hemoglobinei poate reaciona reversibil cu CO2, iar anionii carbamat formeaz puni
saline care stabilizeaz forma T.

n legtur cu mecanismul alosteric s-au formulat dou modele:

Modelul secvenial al lui Koshland

Modelul simetric, propus de Monod, Wyman, Changeux

Modelul lui Koshland se bazeaz pe trei presupuneri, i anume:
1) Pentru fiecare subunitate sunt accesibile dou stri

conformaionale T i R
2) Tranziia TR la nivelul unei subuniti este indus de
legarea ligandului la o anumit subunitate
3) Modificrile conformaionale rezultate n urma legrii
ligandului la o subunitate pot crete sau descrete afinitatea altor subuniti din aceeai molecul
pentru acesta

Figura 3.55. Modelul secvenial pentru o protein alosteric tetrameric

Modelul simetric se bazeaz pe urmtoarele ipoteze:

1)

Proteina nu poate avea dect dou stri conformaionale R i T.

Toate subunitile pot exista numai n forma T sau numai n forma R. Hibrizi de tip RT nu sunt
posibili.
2) Ligandul se leag cu afinitate sczut la forma T i cu afinitate
ridicat la forma R.
3) Legarea fiecrui ligand crete probabilitatea ca toate subunitile
s fie n form R. Aceast tranziie alosteric este concertat,<astfel nct toate subunitile sufer
la unison trecerea TR.
Mecanismul alosteric real al hemoglobinei este mult mai complex, dect cel descris de
cele dou modele, care trebuie privite drept cazuri limit. n realitate, procesele alosterice
combin elemente din ambele.
n general, o protein alosteric nu are proprieti fixe, pentru c caracteristicile sale
funcionale sunt reglate de molecule specifice din mediu. n consecin, interaciile alosterice au
importan imens n funcionarea celulei. n evoluie, trecerea de la mioglobin la hemoglobin,
care este capabil s preia informaii din mediu a constituit un salt calitativ.

Figura 3.56. Modelul simetric pentru o protein alosteric tetramer

3.3 Nivelele de organizare ale proteinelor

Funcia proteinelor poate fi neleas numai n corelaie cu structura acestora, adic relaia
tridimensional dintre atomii componeni.
n mod clasic, descrierea din punct de vedere structural a proteinelor se refer la patru
nivele de organizare:
1. Structura primar care reprezint secvena de aminoacizi a
catenei polipeptidice, respectiv numrul i succesiunea resturilor de aminoacizi
2. Structura secundar care se refer la aranjamentul spaial local al
atomilor aminoacizilor implicai n formarea legturii peptidice
3. Structura tridimensional ce constituie rezultatul interaciilor
dintre catenele laterale ale aminoacizilor din catenele polipeptidice
4. Structura cuaternar care este rezultatul interaciunii dintre
catenele polipeptidice independente, cu structuri primare, secundare i teriare bine definite
3.3.1 Structura primar a proteinelor
Prima determinare a structurii primare a unei proteine a fost realizat de Frederick Sanger
n 1953, care a determinat compoziia n aminoacizi a insulinei bovine. Dup ce aceast tehnic
de secveniere a fost pus la punct, a fost elucidat secvena n aminoacizi a altor mii de proteine.

Figura nr.3 1. Structura primar a insulinei bovine

Cunoaterea structurii primare a proteinelor este esenial pentru cunoaterea

mecanismelor moleculare de aciune ale acestora, precum i pentru elucidarea spectrelor de raze
X i rezonan magnetic nuclear.
Compararea secvenelor proteinelor analoage dintr-un individ, sau ale aceleiai proteine
de la indivizii aceleiai specii sau din specii nrudite permite stabilirea unor relaii evolutive ntre
proteine i organismele care le produc, care completeaz studiile taxonomice bazate pe
comparaii morfologice.
De asemenea, cunoaterea secvenei n aminoacizi are aplicaii clinice, pentru c o serie
de boli ereditare se datoreaz unor mutaii ce conduc la substituirea unui singur aminoacid dintr-o
protein.