LABORATOR DE CICLURI BIO-GEO-CHIMICE

HIDROLIZA ENZIMATIC A CELULOZEI

Influena pH lui asupra vitezei de hidroliz

INTRODUCERE
Celuloza se ntlnete n vegetale mai ales sub form de fibre. Ea este
amestecat cu cantiti variabile de materii incrustante ca de exemplu lignin,
rini, grsimi, alte polizaharide i substane minerale. Cea mai pur celuloz
este cea din fibre vegetale (fibre de in i ramie i mai ales perii seminelor de
bumbac). Bumbacul conine pn la 90% fibre de celuloz.
Formula empiric a celulozei este (C 6H10O5)n. Deoarece la nclzire ea nu
se topete ci se descompune i innd seama c soluiile sale sunt coloidale
arat c celuloza are o structur macromolecular.
Dac se consider c glucoza este monomerul constitutiv al celulozei
rezult c prin reacia de polimerizare a glucozei se obine, prin eliminare de ap,
celuloza:
nC6H12O6 (n 1)H2O (C6H10O5 )n H2O

Deoarece gradul de polimerizare este foarte mare, molecula de ap din

structura celulozei se poate neglija astfel c ea poate fi scris simplu sub forma
general (C6H10O5)n.
Analiza cu raze X a glucozei arat c celuloza este compus din
macromolecule filiforme, n care grupurile de d-gluco-piranoz sunt unite glucozidic n poziiile 1,4 prin atomii de oxigen, fiind rotite unul fa de altul cu
180C. Formula macromolecular a celulozei este urmtoarea:

LABORATOR DE CICLURI BIO-GEO-CHIMICE

Cu tot aspectul su amorf celuloza se comport fa de razele X ca un
corp cristalin, deoarece molecula este compus din elemente de structur
identice care se repet periodic, precum i datorit faptului c un mare numr de
monomolecule sunt aezate paralel n fibr.
Degradarea celulozei
Celulozele naturale au macromolecule uriae cu grad de polimerizare de
10.000 i lungime de ordinul 1,5 5 m.
Prin diferite procedee fizico-chimice macromoleculele de celuloz pot fi
degradate. Astfel prin mcinare n moara coloidal, fibra de bumbac este
sfrmat n particule de 0,5 m.
Degradarea poate avea loc i pe cale chimic. Acizii produc o reducere a
gradului de polimerizare prin hidroliza legturilor glicozidice.
Produii formai n reaciile de degradare nu sunt unitari ci sunt amestecuri
de polimeri omologi.
1. SCOPUL LUCRARII
Se evideniaz influena pHlui asupra activitii enzimatice a dou tipuri de enzime
celulaz i catalaz.
2. MODUL DE LUCRU
Materiale soluie1,5% Carboximetilceluloz, soluie HCl 0,1M, soluie NaOH
0,1M, celulaz, soluie 1% DNS (acid dihidroxi din nitrobenzoic), o roie, ap
oxigenat 30%, incubator, plit electric
Modul de lucru
Partea I
Se prepar o soluie 1.5% CMC (carboxi metil celuloza se dizolva la cald)

Se numeroteaz patru eprubete

Se introduc n cele patru eprubete soluiile corespunztoare conform tabelului

de mai jos

se msoar valoarea pHlui n fiecare eprubet cu hrtie indicatoare.

LABORATOR DE CICLURI BIO-GEO-CHIMICE

se menin n incubator la temperatura de 55C timp de 1 or

se separa fazele prin filtrare

se introduc 2ml filtrat ntr-o eprubet peste care se adauga 3mL DNS reactiv
(acid 2 hidroxi dinitrobenzoic) se aduce solutia la fierbere timp de 15 minute.

modificarea culorii indic prezena glucozei.

Solutii
CMC 1,5%

eprubeta
2
3
5

(mL)
Acid clorhidric

0,1N (mL)
NaOH

1,1M
Enzim

15

15

15

Observaii

5
0

celulaza
Methaplus, L
pH
4,8

Partea aII a
Se evideniaz efectul catalazei din sucul de roii asupra vitezei de
descompunere a perhidrolului conform reaciei

2. MATERIALE SI METODICA
Materiale:
6 eprubete, soluie de perhidrol, nisip, o roie mic, sita, linguri, soluie HCl.
Modul de lucru
1. Se marcheaz trei eprubete conform modelului 1 si trei conform modelului 2

LABORATOR DE CICLURI BIO-GEO-CHIMICE

modelul 1

modelul 2

2. In eprubeta 1

Se introduce perhidrol pn la semn

Se adaug civa gruni de nisip

Se completeaz observaiile n tabelul 1

3. In eprubeta 2

Se introduce perhidrol pn la semn

Se adaug un cub 1 cm3 de roie ca surs de catalaz

Se completeaz observaiile n tabelul 1

4. In eprubeta 3

Se introduce perhidrol pn la semn

Se adaug un cub 1 cm3 de suc de roie obinut prin trecerea unei buci
de roie prin sit i tifon

Se completeaz observaiile n tabelul 1

5. In eprubeta 4

Se introduce ap distilat pn la 2cm

Se adaug un cub 1 cm3 de suc de roie

Se ateapt 3 minute

Se adaug perhidrol pn la 6 cm

Se completeaz observaiile n tabelul 1

6. In eprubeta 5

Se introduce HCl pn la 2cm

Se adaug un cub 1 cm3 de suc de roie

Se ateapt 3 minute

Se adaug perhidrol pn la 6 cm

LABORATOR DE CICLURI BIO-GEO-CHIMICE

Se completeaz observaiile n tabelul 1

7. In eprubeta 4

Se introduce hidroxid de sodiu pn la 2cm

Se adaug un cub 1 cm3 de suc de roie

Se ateapt 3 minute

Se

Eprubeta

Coninutul

Degajarea
gaz

1
2
cm 3
4
Se
5
6
completeaz observaiile n tabelul 1

de Explicaii

adaug
perhidrol
pn la 6

Tabelul 1

Observaii:
Degajarea de gaz se apreciaz astfel
Observatie
Fr degajare
Degajare moderat
Degajarea puternica
Degajare foarte puternic

Notare
0
+
++
+++

PRELUCRAREA REZULTATELOR
Se trec n tabel observatiile legate de influena pH lui asupra activitii enzimatice.
se compar influena pH-lui asupra activitii celor dou tipuri de enzim.