10/03/2013

1
Relaia Structur -Funcie
A. Proteine globulare
1) Cu structur secundar -helix
Albumina plasmatic (studiu individual)
Hemoproteide:
Mioglobina (Mb)
Hemoglobina (Hb)
Catalaza (studiu individual)
Citocromul C (studiu individual)
2) Cu structur secundar foaie
Imunoglobuline
B. Proteine fibrilare
1) Cu structur secundar specific: Colagen
2) Cu structur secundar -helix: -Keratina (studiu individual)
3) Fr structur secundar: Elastina
Hemoproteide
Definiie d.p.d.v. structural
Hemoproteida = Protein + grupare prostetic HEM
Hem = Protoporfirina IX + Fe
2+
sau
Propionil
Vinil
Metil
10/03/2013
2
Reprezentarea schematic a Hemului
Ionul de Fe
2+
din planului hemului este hexacoordinat.
4 legturi se realizeaz cu atomii de N ale celor 4 nuclee
pirolice ale protoporfirinei IX
n cazul Mb i Hb
a 5-a legtur este cu His proximal prin care hemul
este ancorat de protein
a 6-a legtur cu ligandul specific (O
2
)
n cazul altor hemoproteide, Fe heminic (Fe
2+
Fe
3+
) este
legat prin 2 legturi cu grupri funcionale ale unor radicali
din lanul polipeptidic (prin care hemul este ancorat de
protein).
Mioglobina
Localizare: miocard i muchi scheletici
Rol biologic: rezervor de oxigen
transportor al oxigenului n celula muscular
Structura
Primar: Globina = 153 aminoacizi
Hem = Protoporfirina IX + Fe
2+
Secundar: -helix (75% din lungimea lanului)
-8 fragmente helicoidale: A, B, H
-5 fragmente neordonate ntre helixuri: AB, BC, GH
-1 fragment neordonat la captul N-terminal: NA
-1 fragment neordonat la captul C-terminal: HC
Teriar: globular (cu buzunar hidrofob)
10/03/2013
3
Structura teriar a Mb
Hemul este ancorat ntr-un buzunar
cptuit cu aminoacizi hidrofobi
Excepie 2 aminoacizi:
-His proximal (F8) - leag Fe
2+
din hem
-His distal (E7) stabilizeaz legtura Fe
2+
- O
2
His proximal
His distal
Curba de oxigenare a Mb
Mb + O
2
MbO
2
K
d
=
[Mb]x[O
2
]
[MbO
2
]
=> [MbO
2
] =
[Mb]x[O
2
]
K
d
Gradul de oxigenare (y) =
[MbO
2
]
[MbO
2
] + [Mb]
=
[Mb]x[O
2
]
[Mb]x[O
2
] + K
d
x[Mb]
=
[O
2
]
[O
2
] + K
d
PO
2
+ P
50
Y =
PO
2
= 0 - 1
unde P
50
= 1 mmHg
i reprezint PO
2
care corespunde la Y=0,5
Hiperbola
nlocuind concentraiile cu presiuni
i K
d
cu P
50
=>
10/03/2013
4
Hemoglobina
Localizare: eritrocite (hematii)
Rol biologic: transportor al O
2
de la plamni la esuturi
Structur
Primar: 2 globine de tip (141 aminoacizi)
2 globine de tip (146 aminoacizi)
4 Hem (Fe
2+
)
Secundar: -Helix
Globinele de tip au 7 fragmente helicoidale (A -> G)
Globinele de tip au 8 fragmente helicoidale (A -> H)
Teriar: globular (cu buzunar hidrofob pentru hem)
Cuaternar: tetramer de tip
2

2
(vezi tabel cu tipuri de Hb)
Tipuri de Hb normale
luni
%

d
i
n

t
o
t
a
l
u
l

g
l
o
b
i
n
e
l
o
r
Momentul naterii
Denumire Compozitie %
Etapa de
dezvoltare
Hb A major

2
90
Adult
Hb A
2
minor
2

2
2-5
Hb A
1c
glicat
2
(Glc)
2
3-9
HbF fetal
2

2
Ft
Nou nascut
HbE
embrionar
Gower 1
Gower 2
Portland

2
Embrion
Exprimarea gradat a genelor globinelor
Familia globinelor
Familia globinelor
10/03/2013
5
Formarea Hb glicate HbA
1c
Condensarea glucozei cu gruprile -NH
2
ale
Val
1
(N-terminale) din globinele
Structura cuaternar a Hb A
10/03/2013
6
Interaciunile ionice ce stabilizeaz
structura deoxi-Hb
6 legturi ionice interlanuri: 4 legturi
1
-
2
i 2 legturi -
2 legturi ionice intralanuri
Cantitatea total de O
2
din snge = O
2
dizolvat + O
2
legat de Hb
O
2
dizolvat = 2% din cantitatea total de O
2
din snge = 15mL / min
Dac
cantitatea maxima de O
2
legat de Hb = 1,34mL O
2
/1g Hb
concentraia Hb n snge = 15g / 100mL
debitul sngelui = 5L / min
O
2
legat de Hb = 98% din cantitatea total de O
2
din snge
= 15 x 1,34 x 50 = 1005 mL / min
Transportul oxigenului de la plamni la esuturi
10/03/2013
7
Oxigenarea Hb
Hb + 4O
2
Hb(O
2
)
4
Afinitaii
pt. O
2
P
Y =
O
2
+ P P
n
n
O
2
n
50
n = Nr. lui Hill = gradul de cooperativitate ntre subuniti
n = 2,8 => exist cooperativitate pozitiv
=> subunitile se ajut n procesul de legare a O
2
Forma tensionat (T)
cu afinitate mic pt. O
2
Deoxi-Hb
Forma relaxat (R)
cu afinitate mare pt. O
2
Oxi-Hb
O
2
Curba de oxigenare a Hb
Sigmoida
Aspectul sigmoidal al curbei de oxigenare demonstreaz c ntre protomeri se
manifest cooperativitate pozitiv!
10/03/2013
8
Modificrile conformaionale ale
helixului F induse de legarea O
2
Starea tensionat T Starea relaxat R
Prin legarea O
2
atomul de Fe este tras n planul hemului
=> micarea helixului F i apoi a intregului lan polipeptidic
Oxigenarea Hb => Tranziia R -> T
35

Deoxi = Forma T cu afinitate pt. O
2

36
Oxi = Forma R cu afinitatept. O
2
10/03/2013
9
Cantitatea de O
2
eliberat la nivelul esuturilor
Comparaie ntre curbele de oxigenare
ale Mb i Hb
Mb
Hb
Afinitatea mare a Mb pt. O
2
(26 x afinitatea Hb),
asigur ncrcarea Mb cu O
2
eliberat de Hb la esuturi!
Presiunea parial a O
2
esuturi Plmni
Hb rspunde rapid
la modificri mici ale
presiunii O
2
Mb
Hb
10/03/2013
10
Factorii care influeneaza oxigenarea Hb
pH-ul
Concentraia (presiunea) CO
2
Concentraia 2,3-Difosfoglicerat (2,3DPG)
Temperatura
Presiunea CO
Efect Bohr
Efectul pH, PCO
2
, [2,3DPG] i al temperaturii
asupra curbei de oxigenare a Hb
Scderea pH-ului, respectiv creterea pCO
2
, [2,3DPG] i a tepemperaturii determin
reducerea afinitii Hb pentru O
2
=> deplasarea curbei spre dreapta
10/03/2013
11
Efectul Bohr
pH-ului i PCO
2
=> scderea afinitii Hb pentru O
2
=> eliberarea O
2
CO
2
+ H
2
O H
2
CO
3
Anhidraza
carbonic
H
2
CO
3
H
+
+ HCO
3
-
HbO
2
+ H
+
HbH + O
2
HbO
2
+ CO
2
Hb-COO
-
+ O
2
nucleul imidazolic al His
146
, His
142
din globinele
gruparea -NH
2
a Val1 din globinele
CO
2
se leag de gr. NH
2
deprotonate
Hb-NH
2
+ CO
2
Hb-NH-COO
-
+ H
+
Carbamino-Hb
Metabolism
Cea mai mare parte din CO
2
se
transform n HCO
3
-
i H
+
Protonarea oxiHb conduce la eliberarea O
2
Protonii se leag de
O mic parte din CO
2
se leag de oxiHb
i contribuie la eliberarea O
2
Efectul Bohr
10/03/2013
12
Hb - Transportul CO
2
Transportul O
2
i CO
2
de ctre Hb
10/03/2013
13
Efectul 2,3-DPG
O
2
2,3DPG
Forma T
Forma R
Sinteza & Efectul 2,3-DPG
10/03/2013
14
[2,3DPG] permite adaptarea la altitudine
Absena 2,3-BPG
G
r
a
d

d
e

s
a
t
u
r
a
r
e

c
u

O
2
Presiunea partial a O
2
La altitudine mare
n condiii normale
Creterea concentraiei 2,3DPG determin eliberarea aceleiai cantiti de O
2
la nivelul
esuturilor, chiar dac, din cauza presiunii reduse a O
2
, s-a legat mai puin O
2
de Hb
Hb - Efecte alosterice
10/03/2013
15
Efectul 2,3DPG asupra HbF
HbF =
2

2
Globinele leag mai slab 2,3DPG
Afinitatea HbF pentru O
2
> Afinitatea HbA
HbF (a ftului) poate prelua O
2
de la HbA (a mamei)
Curba de oxigenare n prezena CO
Afinitatea Hb pt. CO este de 200 ori mai mare dect afinitatea Hb pt. O
2
CO se leag de Fe i astfel mreste afinitatea celorlalte subunitai pt. O
2
=> Scade cantitatea de O
2
eliberat la nivelul esuturilor!
10/03/2013
16
Hemoglobinopatii
A. Calitative = sinteza unor globine anormale
datorit mutaiilor punctiforme
A. Cantitative = talazemii = sinteza unei cantiti
insuficiente a uneia dintre globine
Hemoglobinopatii calitative
nlocuirea conservativ/neconservativ a unui aminoacid (Aa)
de la suprafaa structurii cuaternare a Hb
Ex: Glu -> Val n cazul HbS
nlocuirea neconservativ a unui Aa din buzunarul hemului
Ex. His prox. -> Tyr n cazul MetHb = HbM Boston
nlocuirea neconservativ a unui Aa implicat n legarea
2,3DPG => modificarea afinitii pt. O
2
nlocuirea neconservativ a Aa de la nivelul contactelor dintre
subuniti (interfaa
1

2
) => pierderea cooperativitii
nlocuirea neconservativ a unor Aa implicai n stabilizarea
conformaiei => instabilitatea globinelor
10/03/2013
17
HbS i Anemia falciform
Forma asimptomatic - la indivizii heterozigoi, care au o gen normal i o gen S.
Hematiile conin 20-40% HbS restul fiind HbA
Hematiile prezint fenomenul de siclizare numai dac saturaia cu O
2
a Hb < 40%, nivel
rar atins chiar i n sngele venos
crizele dureroase i infarctul splenic apar numai la pacienii cu stri hipoxice severe.
Forma simptomatic - la homozigoii care au numai gena anormal S.
Hematiile conin 80% HbS, restul fiind HbF.
Hematiile sufer fenomenul de siclizare la o presiune normal a O
2
din sngele venos.
=> la copii apar tumefacii dureroase, neeritematoase, la nivelul minilor i picioarelor
(crizele pot mima reumatismul acut), splenomegalie, oc hipovolemic
Sechestrarea acut a hematiilor n splin i infeciile cu pneumococ, refractare la
tratament, pot conduce la deces.
HbS & Anemia falciform
Sickle cell disease
10/03/2013
18
HbS confer protecie mpotriva malariei
Ciclul transmiterii malariei
Ariile endemice ale malariei coincid cu
cele ale anemiei falciforme
Hematiile care conin HbS au o durat
de via scurt i astfel parazitul
Plasmodium falciparum nu poate
ajunge la maturitate !
Formarea MetHb i a Corpilor Heinz
Cnd nivelul MetHb
depete capacitatea
MetHb reductazei, speciile
reactive ale O
2
(ROS) vor
determina formarea
Corpilor Heinz (agregate
de Hb)
10/03/2013
19
Organizarea genelor globinelor
Cromozomul 16
Genele globinelor din familia
Cromozomul 11
Genele globinelor din familia
G A

1

2
Talasemia = absena sau sinteza sczut de globin
Exist 4 copii ale genei (cte 2 pe fiecare cromozom 16)
=> Sunt posibile 4 nivele de gravitate a bolii:

Normali

Purtatori ai
talasemiei
Silent carriers

Indivizi cu
boala talasemic
(HbAHbH =
4
)
Thalassemia
disease
HbFHbBart =
4
HbAHbH =
4
Fr coop.pozitiv
Cu afinitate pt. O
2
Talasemia
10/03/2013
20
Talasemia = absena sau sinteza sczut de globin
Exist 2 copii ale genei (cte 1 pe fiecare cromozom 11) =>
sunt posibile 2 nivele de gravitate a bolii

Normali Indivizi cu
tara talasemic
Thalassemia
minor
Indivizi cu
Boala talasemic
Thalassemia
major
Talasemia
Hematii mici, hipocrome,
cu forme diferite
Simptomele talasemiei
Anemie hemolitica
Paloare
Sange in urina
Icter
Splina marita
Ficat marit
Schelet deformat
Craniu deformat
Facies mongoloid, etc.
Tratament ???
10/03/2013
21
CURS IV. Relaia Structur -Funcie
Proteine globulare
cu structur secundar foaie
Imunoglobuline