LABORATORUL NR.

1
Elemente celulare cu rol genetic
Morfologia cromozomilor metafazici
Benzile cromozomiale i cariotipul n
seria animal

Elemente celulare cu rol genetic

Nucleul celular
organit celular, specific
celulelor eucariote
conine materialul genetic

coordoneaz toate procesele

intracelulare
reprezinta o treime din
volumul total al celulei

NUCLEUL

Membrana nuclear o membran dubl, prezent la toate celulele

eucariote, cu rol de protecie a nucleoplasmei i a informaiei genetice din
nucleu.
este prevazut cu numeroi pori, cu rol n transportul substanelor necesare n
nucleu, i a ARN-ului.

Nucleolul componenta subnuclear ale celulelor;

are o form sferic
rol in pstrarea unei pri a materialului genetic, geneza ribozomilor, diviziunea
celular.
Poate fi observat n nucleu numai n perioada dintre dou diviziuni celulare.
este aezat central sau periferic, ataat de membrana nuclear.
Din punctul de vedere al compoziiei chimice, el este format din ARN, proteine,
enzime i alte substane.

Nucleoplasma (carioplasma) substana fundamental care conine

sruri minerale, substane organice, enzime i o reea de filamente care i
dau nucleoplasmei aspectul reticulat.
Nucleoplasma const din 60% 70% ap, 15% 25% substane organice.
n nucleoplasm este prezent ADN si ARN
Este o soluie coloidal n care faza dispersant este cariolimfa, iar faza dispersat
este cromatina nuclear.

nuclear
envelope

nucleolus
nuclear
pores

chromatin

CROMATINA
Eucromatina:
este puin condensat i slab colorat
prezint mult ADn nerepetitiv bogat n perechi de baze G-C i
proteine nonhistonice
reprezint partea activ genetic a cromatinei
se replic precoce la nceputul fazei S
Alctuiete benzile R din cromozomi

Heterocromatina
este puternic condensat i intens colorat
prezint ADN repetitiv bogat n A-T i histone

Dei inactiv genetic ndeplinete anumite funcii celulare

precum :
stabilizeaz centromerul i telomerele cromozomului,
Intervine n desfurarea meiozei ( n sinapsa cromozomilor omologi)
i probabil n diferenierea celular

este de doua feluri : constitutiv i facultativ ( clasificare

facuta de S.Brown in 1975).

Heterocromatina constitutiv
- Se gseste constant sub forma condensat
- Nu conine gene funcionale i este format din AND nalt
repetitiv ( AND satelit)
- Se gseste n regiunea centromerului, pe bratul lung al
cromozomului Y, pe braele scurte ale cromozomilor
acrocentrici i n constriciile secundare
- Alctuiete benzile C din cromozomi

Heterocromatina facultativ
- Variaz la celule diferite si chiar la organisme diferite : in unele
celule, anumite parti sau gene din cromozomi pot fi active, in
alte celule, aceleasi structuri pot sa nu functioneze fiind sub
forma de heterocromatina
- Aceasta heterocromatinizare poate fi limitata la un anumit
segment din cromozom sau poate cuprinde tot cromozomul (
exemplu tipic la sexul feminin cand unul din cei doi
cromozomi X este inactiv formand corpusculul sexual X).

CROMOZOMII
Cromozomii sunt structuri permanente ale
celulei, dar ei apar mai clar in timpul diviziunii
celulare, indeosebi in metafaza.
Examinai la microscopul fotonic e observ c
ei au forma unor bastonae, fiind alctuii din
dou filamente paralele, alipite, omogene ca
structur, care se numesc cromatide.

Structura
cromozomilor
metafazici
2 cromatide
unite
printr-un
centromer

Replicated
chromosome

P arm

kinetochore
centromere

Q arm
sister chromatids

chromosome

P arm
centromere

Q arm
chromatid

STRUCTURA CROMOZOMILOR
Cromozomii se studiaz n timpul metafazei, cnd prezint o
condensare maxim. n aceast etap, cromozomii sunt bine
individualizi, au braele ngroate, cromatidele fiind distanate. n
structura cromozomilor metafazici deosebim urmtoarele
componente:
cromatidele, cele dou subuniti longitudinale ale cromozomului
metafazic, alctuite din ncte o molecul de ADN dublu catenar
nentrerupt, rezultate n procesul de replicare a ADN. Astfel c,
fiecare cromatid are aceeai cantitate de ADN ca i cromozomul
original din care s-a format i devine un cromozom fiu cu exact
aceleai gene;

centromerul, realizeaz legtura ntre cele dou cromatide pn n

anafaz, el apare ca o constricie cnd cromozomii se condenseaz
n timpul diviziunii celulare.

STRUCTURA CROMOZOMILOR
braele cromozomiale, care apar n urma mpririi cromatidelor de
ctre centromer n dou subuniti: braul lung (q) i braul scurt
(p). Braele pot fi aproximativ egale sau de lungimi diferite;
telomerele, regiunile terminale ale cromatidelor determin i
menin individualitatea cromozomilor, prevenind unirea capetelor i
astfel asigurnd stabilitatea lor. Se crede c diferenele individuale
n longevitate indic diferene n lungime a telomerelor;

sateliii, elemente terminale rotunde la nivelul braelor scurte ale

unor cromozomi aconcentrici (prezeni pe cromozomii umani 13,
14, 15, 21, 22). Sateliii sunt legai de corpul cromozomului printrun filament subire de heterocromatin (ADN neinformaional) ce
conin genele care codific ARN-ribozomal.

STRUCTURA CROMOZOMILOR
Dup poziia centromerului
cromozomii pot fi:
metacentrici
(
cu
centromerul n la mijlocul
cromozomului i braele
aproximativ egale );
submetacentrici
(
cu
centromerul n afara zonei
centrale i braele de
lungimi diferite );
acrocentrici
(cu
centromerul spre un capt
al cromozomului ).

CROMOZOMII

OM
- 46
MAIMUTA - 42
CIMPANZEU - 48
BOVINE
- 60
CAINE
- 78
PISICA
- 38
CAL
- 64
SOARECE - 40
DROSOPHILA- 8

Diferena dintre celulele diploide i celulele

haploide

Majoritatea celulelor eucariote conin

perechi de cromozomi i sunt astfel
denumite diploide.
Celulele care conin cromozomi nepereche
sunt denumite haploide.

CARIOTIPUL
Prin cariotip se nelege o aranjare sistematic a cromozomilor unei singure
celule, cromozomi obinui prin fotografiere i dispui pe baza unor criterii
precis stabilite prin standarde internaionale pentru fiecare specie.

Cariotipul este un indicator genetic reprezentativ pentru o celul, dar n

neles lrgit, cromozomii acestei singure celule reprezint cromozomii unui
individ i, n acelai timp, cromozomii caracteristici speciei creia i aparine
individul analizat.
n scopul cariotiprii cromozomii sunt fotografiai la microscop cu obiectiv de
imersie 90x sau 100x, decupai i aranjai n perechi. Apoi, sunt aezai n
ordine descrescnd a mrimii lor, pe grupe morfologice, lsndu-se spaii
mici ntre perechi i mai mari ntre grupe.
Cromozomii sexului se plaseaz dup ultima pereche de autozomi, alctuind
o grup separat.

CARIOTIPUL
n vederea cariotiprii, este necesar identificarea cromozomilor utiliznd mai
multe criterii:

lungimea cromozomului,
poziia centromerului,
numrul i succesiunea benzilor cromozomale.
prezena constriciilor secundare i a sateliilor, dar aceste particulariti morfologie fiind
variabile, au o importan secundar n prezent.

Lungimea cromozomului - Se poate exprima ca:

mrime absolut, n micrometri (La)
lungime relativ, notat pe scurt Lr i exprimat n procente % sau %o.

Masurarea precis a lungimii reale, absolute a unui cromozom se face fie pe

observaii la microscopul optic dotat cu micrometru ocular, fie prin masurarea
imaginii fotografice, n care caz trebuie cunoscut precis raportul de mrire la
fotografiere i copiere.
Lungimea absolut a unui cromozom variaz n limite foarte largi, n funcie de
stadiul mitozei i de gradul de despiralizare cromatidic sub aciunea colchicinei i a
ocului hipotonic.

CARIOTIPUL
De aceea a fost necesar alegerea unui parametru
relativ independent de aceste 2 variabile i acest
parametru este lungimea relativ, adic lungimea
absolut a unui cromozom raportat la lungimea
total a setului haploid normal (lungimea total a
autozomilor A-, mprit a 2, la care se adaug
lungimea cromozomului X).

CARIOTIPUL
Poziia centromerului
Rezult din calcului indicelui centromeric (Ic) care reprezint raportul dintre
dimensiunea braului scurt, notat cu p i dimensiunea total a
cromozomului, adic braul scurt p + braul lung q, nmulit cu 100.

Se observ imediat c acest raport variaz ntre 0 i 0,5.

Ic = 0,5 - centromer situat median (la jumtatea cromozomului).
Ic = 0,25 - centromer situat la sfertul lungimii cromozomului,
Ic = 0,1 - centromer situat aproape terminal.

CARIOTIPUL
n acest fel, n funcie de poziia centromerului,
cromozomii se pot deosebi morfologic.
Cnd centromerul este plasat:

la mijlocul cromozomului metacentric

n vecintatea punctului median submetacentric
n regiunea subterminal acrocentric
O a patra categorie morfologic (telocentrici), adic cei cu
centromerul plasat chiar terminal, s-a dovedit dup anul
1980 c nu poate exista, cromozomii telocentrici nefiind
stabili. Prezena lor la organismele superioar este rar, iar
cromozomii pe care suntem tentai s-i clasificm drept
telocentrici, ci acrocentrici.

CARIOTIPUL- benzile cromozomale

Numrul i succesiunea benzilor cromozomale

Cel mai important criteriu de identificare a cromozomilor este numrul i

succesiunea benzilor cromozomale.

Tehnici speciale de colorare au permis obinerea pe cromozomi a unor benzi

transversale cu intensitate de colorare diferit i n numr diferit, n funcie de
cromozomi i de specie.

Banda cromozomal partea cz net distinct de segmentele transversale vecine,

aprnd mai ntunecat sau mai puin colorat, mai strlucitoare sau mai opac.

Denumirea benzilor se face n funcie de metoda folosit. Cele mai importante

sunt:

CARIOTIPULbenzile cromozomale
CARIOTIPUL

Benzile Q vizibile prin colorare cu derivai acridinici fluoresceni dintre care chinacrina este cel mai des
utilizat. Deoarece chinacrina se scrie n limba englez quinacrine, benzile obinute sub aciunea acestui
colorant s-au numit Q i se pot observa numai la microscopul cu fluorescen.

clorhidratul de quinacrina manifesta afinitate fata de ADD bogat in A-T care maresc intensitatea fluorescentei in
timp ce G-C o reduc.

Benzile G rezult prin folosirea colorantului Giemsa, dup tratarea cz cu alcali, soluii saline concentrate
sau enzime proteolitice (tripsina).

Benzile G au pe cz aceeai dispoziie ca i benzile Q, dar pot fi vizualizate la microscopul optic obinuit.

Benzile R se obin prin denaturare termic i prin colorare Giemsa sau cu fluorocromul acridine orange.
n ceea ce privete intensitatea de colorare, benzile R au dispoziie invers fa de benzile Q i G (R
engl. reverse).

Benzile C localizate n regiunea centromerului, se obin prin tratare cu soluie concentrat de hidroxid
de bariu i colorare Giemsa.

Benzile T identific telomerele

CARIOTIPUL- benzile cromozomale

Benzile care se coloreaz intens cu Giemsa sau
sunt strlucitoare sub aciunea coloranilor
fluoresceni se numesc benzi pozitive.
Benzile care se coloreaz slab cu Giemsa i sunt
slab fluorescente sub aciunea fluorocromilor se
numesc benzi negative.
Aceeai band poate fi pozitiv sau negativ, n
funcie de tehnica de colorare utilizat.

CARIOTIPUL- benzile cromozomale

n afar de benzile simple, pe cz se mai disting n mod convenional, benzile
reper sau reperele i regiunile.
Benzile bine delimitate au fost denumite benzi reper.
Braele cromozomilor au fost divizate n regiuni (zone cromozomale cuprinse
ntre 2 benzi reper vecine).
Rol de repere n delimitarea regiunilor l au centromerii i telomerele.
Pe fiecare bra, regiunea cea mai apropiat de centromer este identificat ca nr.
1, iar celelalte regiuni, dac exist, sunt numerotate n continuare spre telomere.
Terminologia benzilor i dispoziia lor pe fiecare cromozom au fost standardizate
la majoritatea animalelor domestice i de laborator. Orice band sau segment de
cz poate fi uor identificat utiliznd numai 4 semne ntre care nu exist spaieri
sau semne de punctuaie. Primul semn reprezint numrul cz, al doilea semn
desemneaz braul cz (p sau q), al treilea semn indic numrul regiunii, iar al
patrulea semn corespunde numrului benzii.

G-banding is due to differential staining

along the length of each chromosome.

Figure 12.12

CARIOTIPUL
Prezena constriciilor secundare i a sateliilor
Unii cromozomi prezint, n unele regiuni ale braelor scurte, zone necolorabile
cu anumii colorani, sub forma unor strangulri denumite constricii
secundare, spre deosebire de centromeri care sunt constricii primare.
Atunci cnd constriciile secundare sunt deosebit de accentuate i se gsesc pe
braele scurte ale unor cromozomi acrocentrici sau submetacentrici, ele
determin separarea fragmentelor terminale ale braelor scurte sub forma
unor satelii.
Prin urmare, sateliii sunt mase mici de cromatin, localizate la extremitatea
terminal a braelor scurte ale unor cromozomi, aparent independente, dar
legate printr-un filament foarte fin de poriunile bazale.
De form rotund sau oval, diametrul lor corespunde, uneori cu cel al
cromatidelor, alteori este mai mic sau mai mare.

CARIOTIPUL

Idiograma - reprezentarea schematic a cz dintr-un cariotip, bazat pe msurtori

ale acestora din mai multe celule (10-25) i dispunerea lor n ordine descrescnd,
potrivit mrimilor medii calculate.

Caracteristicile morfologice ale cromozomilor unor specii de animale

oarecele de laborator (mus musculus domesticus) 2n = 40 cz toi cz sunt
acrocentrici
Vaca (Bos taurus) 2n = 60 cz autozomii (29 perechi) sunt acrocentrici, gonozomul
X este submetacentric mare, gonozomul Y este metacentric mic
Porcul domestic 2n = 38 cz autozomii (29 perechi) sunt metacentrici, acrocentrici
i submetacentrici, gonozomul X este metacentric mare, gonozomul Y este
metacentric mic
obolanul de laborator 2n = 42 cz autozomii (29 perechi) sunt acrocentrici i
metacentrici, gonozomul X este acrocentric mare, gonozomul Y este acrocentric
mic
De subliniat c gonozomii X i Y nu prezint morfologia literelor al cror nume l
poart.

CARIOTIPUL BOVIN (BOS TAURUS)

58 de autozomi
acrocentrici
2 cz sexuali
submetacentrici

CARIOTIPUL OVIN (OVIS ARIES)

52 de autozomi :
1-3 metacentrici
(fuziune)
4-26 - telocentrici
2 cz sexuali:
X telocentric
Y - metacentrici

CARIOTIPUL CAPRIN (CAPRA HIRCUS)

58 de autozomi
telocentrici
2 cz sexuali
submetacentrici

EQUUS CABALLUS

Nr de cz variz n limite largi, de la

2n=32, la 2n=66

La calul domestic 2n-64

62 de autozomi:
Grupa I 1-4 submetacentrici
Grupa II 5-9 - metacentrici
Grupa III 10-12 metacentrici mici
Grupa IV 13 - subtelocentric
Grupa V 14-31 - acrocentrici
2 cz sexuali :
X submetacentrici
Y - telocentric

CARIOTIPUL LA PORCUL DOMESTIC

36 de autozomi:
Grupa I 1-5
submetacentrici
Grupa II 6-7 subtelocentrici
Grupa III 8-12
metacentrici
Grupa IV 13 subtelocentric
Grupa V 13-18 acrocentrici
2 cz sexuali :
X submetacentrici
Y - telocentric

Cariotipul la iepurele domestic

Oryctolagus cuniculus
42 de autozomi Grupa I 1-5
submetacentrici
Grupa I 1-6 metacentrici
Grupa II 7-11 -submetacentrici
Grupa III 12-17
submetacentrici
Grupa IV 18 21 acrocentrici
2 cz sexuali :
X, Y submetacentrici

CARIOTIPUL LA PSRI
2n = 80
Macrozomii dimensiuni mari (6-8 perechi de
cz), inclusiv cz sexuali Z i W
Sexul mascul este homogametic ZZ
Sexul femel este heterogametic ZW
Cz W este constituit din cromatin constitutiv,
fiind inactiv genetic

Microzomii

Gin 2n=78
Curc - 2n=82
Bibilic - 2n=78
Raa comun 2n=80
Raa leeasc 2n=78
Gsc 2n=82