KIT DE COLORARE

PRIN METODA PAPANICOLAU

PRINCIPIU
Reprezintã tehnica universalã de colorare a preparatelor citologice.
Hemalaunul este reactivul cel mai potrivit pentru colorarea nucleilor,
iar combinaþia de colorãri OG-6 cu EA-50 asigurã o gamã largã de nuanþe de verde
,
albastru, roz ºi oranj pentru celulele cito-plasmatice, evidenþiate pe specimene
vaginale
de depistarea cancerului cervical, uterin sau de vagin.
COMPUNEREA KITULUI KIT opþional cu fixator ºi solvenþi de deshidratare rehidrata
re.
-soluþie stoc de alaun (R-1)
2 x 250 ml
-soluþie de fixare cu protecþia suprafeþei frotiului
1 x 250 ml
-hematoxilinã concentratã (R-2)
5 doze
-alcool 50 %
1 x 150 ml
-oxidant stoc (R-3)
5 doze
-alcool 70 %
1 x 500 ml
-flacon pentru hemalaunul de lucru
1 x 100 ml
-alcool 80 %
1 x 500 ml
-soluþie acidã (R-4)
1 x 250 ml
-alcool 95 %
1 x 500 ml
-colorant oranj OG-6 - R-5
1 x 200 ml
-alcool absolut (min.99,2%)
1 x 250 ml
-colorant complex EA-50 R-6
1 x 200 ml
-xilen alcool absolut (1:1)
1 x 250 ml
-xilen
1 x 250 ml

Prepararea reactivului de lucru

Hemalaunul de lucru : Se ia flaconul pentru reactivul de lucru ºi se introduc 90
ml R-1 (alaun de potasiu).
Se ia o dozã R-2 (hematoxilinã) ºi se introduce peste cei 90 ml alaun de potasiu
. Se omogenizeazã.
Apoi se ia o dozã cu R-3 (oxidant stoc) ºi se introduce în flaconul cu R-1 ºi R-
2.
Se omogenizeazã ºi se lasã la maturat peste noapte. Se recomandã prepararea unei
alte ºarje când timpul de colorare
creºte foarte mult.
Mod de lucru
1.Dacã fixarea s-a efectuat cu soluþie de protecþie a suprafeþei, se menþine î
n baie 2 minute în alcool 50%; se hidrateazã 2 minute în alcool 95%, apoi 2 minu
te în alcool 70%.
2.Fixare efectuatã prin alt procedeu
-menþinerea succesivã câte 30 secunde în urmãtoarele 3 bãi : alcool 80%, alcool
70% ºi în final, alcool 50%.
3.Se spalã cu apã distilatã 30 secunde.
4.Se menþine 5 10 minute în hemalaun de lucru.
5.Se cufundã de 6 ori câte o secundã în apã distilatã (miºcarea trebuie sã fie
înceatã pentru a realiza uniformizarea colorãrii).
6.Se efectueazã 8 cufundãri în R-4 (mediu acid).
7.Se spalã cu apã de robinet 6 minute.
8.Se menþine succesiv 30 secunde în apã distilatã, alcool 50%, alcool 70%, alc
ool 80%, ºi în alcool 95%.
9.Se coloreazã 90 secunde în R-5 (OG-6).
10.Se cufundã încet de douã ori în douã bãi cu alcool de 95%.
11.Se menþine 90 secunde în R-6 (EA-50).
12.Se cufundã de douã ori în trei bãi cu alcool de 95%
13.Se menþine 30 de secunde în alcool absolut
14.Se menþine 4 minute în xilen-alcool (1:1).
15.Se menþine 2 minute în xilen (baia1) apoi 3 minute în xilen (baia2).
16.Se monteazã în rãºinã sinteticã.
Rezultate
Nuclee albastru-negru.
Citoplasmã albastru-verde
Celule cheratinoase roz-portocalii.
Bibliografie
J.D.Bancroft, Alan Stevens, Theory and practice of histological tehniques (1996)
pag.523