Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure
LP5

Antibiograma
Antibiograma: testarea sensibilitii microorganismelor fa de antibiotice

1. Metode calitative
Metoda difuzimetric Kirby-Bauer
Se testeaz sensibilitatea unei tulpini bacteriene izolate
Prepararea inoculului:
- se suspensioneaz 2-3 colonii izolate n ser fiziologic
- turbiditatea suspensiei se controleaz nefelometric sau comparnd cu tuburi etalon (conin
suspensii de particule latex/sulfat de Ba avnd turbiditate determinat);
- se ajusteaz la 0.5 McFarland (1,5x108 CFU/ml).
nsmnare:
- se alege un mediu corespunztor speciei bacteriene testate

Mueller-Hinton pentru majoritatea bacteriilor

Mueller-Hinton cu snge pentru pretenioi (de ex. streptococi)

medii speciale (pentru Haemophilus spp . neisserii)

- se introduce un tampon n suspensia bacterian, se stoarce pentru ndeprtarea excesului de

lichid
- se terge uniform toat suprafaa mediului de 3x
Depunerea microcomprimatelor de antibiotice
- se aleg antibioticele care trebuie testate in funcie de specia bacterian testat si n funcie de
localizarea infeciei (! infecii urinare)
- se depun discurile de antibiotic la l .5 cm distan de marginea cutiei Petri si la 3 cm distan
unul fa de cellalt (pot fi depuse max. 12 discuri)
- 15 min. temperatura camerei
Incubare
- n funcie de specia bacterian: n atmosfera obinuit sau in atmosfer de CO2 (de ex.
streptococi, neisserii.)
- 35C
- 16-18 ore (n cazul germenilor pretenioi pn la 20-24 de ore)

-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP5

Interpretare
- apare o cultur bacterian confluent, n jurul microcomprimatelor apar zone de inhibiie
(lipsa creterii bacteriene).
- se citesc diametrele zonelor de inhibiie (mm)

- se compar diametrele citite cu diametre standard in funcie de antibiotic, cantitatea de

antibiotic din comprimat, specia bacterian testat
Tabel: Exemple de diametre standard, conform standardelor CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute USA)
Standard

Specii bacteriene

Antibiotic

Rezistent

CLSI

Staphylococcus aureus

levofloxacin 10 ug

Streptococcus pneumoniae levofloxacin 10 ug

Sensibil

15 mm

Intermediar
sensibil
16-18

13 mm

14-16

17 mm

19 mm

pot aprea fenomene de sinergism/antagonism care reflect diferite mecanisme de

rezisten

colonii izolate in interiorul zonei de inhibiie: subpopulaii rezistente

Interpretarea antibiogramelor:
-

Rezultatul se raporteaz: sensibil (S), intermediar sensibil (IS) sau rezistent (R) la
antibioticul testat

nu se comunic diametrele citite (metod calitativ)

cunoaterea rezistenei intrinsece a bacteriilor (dg) + a mecanismelor de rezisten prin

care bacteriile pot dobndi rezisten la diferite antibiotice

-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure

LP5

Variabilele care influeneaz rezultatele:

-

compoziia mediului (coninut de cationi, timidin)

pH (optim: 7,2-7,4)

grosimea gelozei (standard: 4 mm)

inoculul - 0,5 McFarland

microcomprimate (valabilitate, coninut, condiii de pstrare)

timpul, temperatura de incubare

citirea diametrelor (lumin refractat/reflectat, colonii izolate, prezena unui vl,

margini crenelate)

Control de calitate
-

microcomprimatele

loturile noi de medii de cultur se testeaz cu tulpini de referin

2. Metode cantitative
- permit stabilirea concentraiei minime inhibitorii (CMI) a unui antibiotic
CMI: cantitatea cea mai mic de antibiotic care inhib complet multiplicarea unei bacterii
Este recomandat testarea cantitativ n urmtoarele situaii:
cazuri clinice grave (septicemii, endocardite, meningite)
-

rezultate incerte cu metoda difuzimetric / sensibilitate nedeterminat

Metoda diluiilor (macro/microdiluie)

-

se realizeaz diluii succesive din antibioticul de testat n mediu de cultur lichid

se adaug cantiti fixe din cultura bacterian cercetat

incubare 18ore 35C

se urmrete apariia culturii n mediul lichid

CMI: cea mai mic concentraie de antibiotic care nu permite creterea germenilor
(cultur limpede)

-3-