Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mureş
LP5 TD

Stabilirea numărului total de lactobacili din lichidul bucal

Lactobacilii sunt frecvent izolați din cavitatea bucală, în special din placa dentară și de pe
limbă.
· L. casei, L. rhamnosus, L. fermentum, L. acidophilus, L. salivarius, L. plantarum, L.
paracasei, L. gasseri, L. oris
· Reprezintă mai puțin de 1 % din flora cultivabilă a cavității bucale
· Prevalența lor crește în cazul pacienților cu carii
· Fermentează glucoza cu producere de lactat sau lactat și acetat
· Se folosesc medii selective pentru estimarea numărului de lactobacili din salivă
· Test pentru aprecierea activității cariogene a microflorei bucale
o Cu toate ca aceste teste nu sunt foarte relevante, ele oferă informații în legătură
cu dieta pacientului
§ Nivelul de lactobacili se corelează cu aportul de carbohidrați din dieta
persoanei
Metoda clasică
Recoltarea lichidului bucal
· În seara anterioară recoltării pacientul efectuează o igienă riguroasă a cavității
bucale, apoi nu mai consumă alimente, lichide, etc.
· Dimineața, înainte de a mânca, se clătește cavitatea bucală cu ser fiziologic steril
· După un repeus de 30 minute, se clătește din nou gura cu 20 ml ser fiziologic steril
timp de 2 min.
o Serul va fi colectat în recipient steril
Tehnica de lucru
· Se efectuează diluții succesive 1/10, 1/100, 1/1000, 1/10000
· Din fiecare diluție se însămânțează 1 ml prin inglobare în 10 ml mediu fluidicat
· Se numără coloniile de lactobacili
o Colonii R, cu margini neregulete
o Se numără plăcile în care s-au dezvoltat cel puțin 20-30 colonii și cel mult 300
colonii
o Se corectează cu factorul de diluție și se apreciază numărul de lactobacili/ml.
lichid bucal

-1-
 Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mureş
LP5 TD

Metode rapide
CRT bacteria ®
· Se folosește pentru determinarea numărului de streptococi mutans și de lactobacili din
salivă
· Utilizează medii selective
· Contraindicații
o Tratament antibiotic
§ Testul se poate utiliza doar după 2 săptămâni de la încetarea
tratamentelor antibiotice
o Utilizarea apei de gură cu efect antibacterian
§ Testul se poate utiliza după 12 ore
Metoda de lucru

· Se realizează stimularea secreției salivare prin mestecarea unor granule de parafină

· Se recoltează saliva în recipient steril
· Se umezesc ambele părți ale mediului cu salivă
o Saliva se va picura cu pipeta pentru a evita zgârierea mediului
· Se scurge excesul de salivă
· Testul se plasează în recipient, se închide ermetic
· Se incubează la 37o C, 48 ore, în poziție verticală
· Citirea se face în comparație cu etalonul

-2-
Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mureş
LP5 TD

-3-
 Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mureş
LP5 TD

Studiul efectului antimicrobian al materialelor dentare, al

pastelor dentare

Substanțele antiseptice pot determina asupra microorganismelor următoarele acțiuni

antimicrobiene:
· Acțiune bacteriostatică, fungistatică
o Întreruperea temporară a creșterii și multiplicării microorganismelor vii
o Acțiune reversibilă
· Acțiune bactericidă, fungicidă, germicidă
o Întreruperea completă, definitivă a creșterii și multiplicării
microorganismelor vii
o Fenomen ireversibil

Metoda diluțiilor succesive în mediu lichid

Se utilizează pentru stabilirea acțiunii bacteriostatice, respectiv bactericide a
substanțelor.
Acțiunea bactericidă
· Se realizează diluții succesive din substanța de testat, într-un mediu lichid,
favorabil dezvoltării germenului de testat
· Se adaugă cantități fixe din cultura de cercetat
· Se incubează 18 ore la 37oC
· Citirea
o Se notează cea mai mică cantitate de substanță care inhibă total
creșterea bacteriilor (prima eprubetă în care mediul nu este tulbure)
Acțiunea bacteriostatică
· Se realizează diluții succesive din subatanța de testat, într-un mediu lichid,
favorabil dezzvoltării germenului de testat
· Se adaugă cantități fixe din cultura de cercetat
· Se incubează 18 ore la 37oC
· Din fiecare eprubetă în care s-a observat inhibiția creșterii microbiene se
prelevă o cantitate egală (50 µl) și se însămânțează în mediu lichid
· Se incubează 18 ore la 37oC
-4-
Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mureş
LP5 TD

· Rezultatul acestor pasaje va diferenția concentrațiile bacteriostatice de cele

bactericide
o Tuburile cu mediu clar indică acțiune bactericidă
o Tuburile în care germenii au crescut indică acțiune bacteriostatică

Metoda difuzimetrică
· Din cultura bacteriană se realizează o suspensie 0,5 McFarland
· Se însămânțează uniform pe mediul Muller Hinton
o Se umectează un tampon în suspensie
o Se șterge uniform pe toată suprafața mediului, de 3 ori, rotindu-se
permanent tamponul
· Metoda cu microcomprimate
o Se depun microcomprimate de hârtie de filtru pe suprafața mediului
o Pe microcomprimate se depune o cantitate standard din substanța de
cercetat
o Se incubează 18 ore la 37oC
o Se citește diametrul zonelor de inhibiție
· Metoda godeurilor
o Se decupează godeuri în mediul de cultură
o În godeuri se depune o cantitate standard din substanța de cercetat
o Se incubează 18 ore la 37oC
o Se citește diametrul zonelor de inhibiție

Tehnici pentru determinarea acțiunii bactericide în raport cu timpul de

contact
· Tehnica indicelui fenolic
o Acțiunea antimicrobiană a substanțelor testate este comparată cu
acțiunea fenolului pur

-5-
Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mureş
LP5 TD

Pastele dentare
Controlul acțiunii antimicrobiene a pastelor dentare in vitro
· Reprezintă controlul componentelor cu acțiune antimicrobiană
Metoda difuzimetrică
· Din cultura bacteriană se realizează o suspensie 0,5 McFarland
· Se însămânțează uniform pe mediul Muller Hinton
· Tuburile de paste de dinți se țin 30 min. la 4oC, apoi se exprimă pasta și se
secționează un cilindru de 2-3 mm
· Depunerea pastelor dentare pe microcomprimate de hârtie de filtru pe suprafața
mediului
· Se incubează 18 ore la 37oC
· Se citește diametrul zonelor de inhibiție
Determinarea acțiunii globale a igienei bucale asupra florei bacteriene
· Recoltarea lichidului bucal dimineața (lichidul A) și la 30 minute după igiena
cavității bucale (lichidul B)
· Se realizează diluții 1/10 și 1/100 din ambele produse
· Se înglobează câte 0,5 ml din lichidul nediluat și din diluții în 10 ml mediu topit
· Se toarnă în plăci
· După răcire se incubează la 37 oC 1-3 zile
· Se numără coloniile și se calculează nr. germeni/ml lichid bucal

-6-