CAPITOLUL VII.

ACIZII NUCLEICI

7.1. GENERALITI ASUPRA ACIZILOR NUCLEICI

Acizi nucleici sunt substane chimice macromoleculare alctuite din
uniti mai simple numite nucleotide. O nucleotid este alctuit dintr-o
baz azotat, un zahar i un radical fosforic.
Bazele azotate din molecula acizilor nucleici sunt de dou tipuri:
purinice i pirimidinice, ele rezultnd dintr-un nucleu comun numit purin i
respectiv pirimidin, derivai din nucleul benzenic.
Sunt

compui

intracelulari

cu

ncrctura

informaional

extraordinar. Se gsesc n asociaii cu substane proteice, formnd

nucleoproteidele. Componentele neproteice, acizi nucleici, sunt compui
macromoleculari care provin din policondensarea nucleotidelor. Exist dou
tipuri majore de acizi nucleici: acizi deoxiribonucleici (ADN) i acizi
ribonucleici (ARN). Dintre acetia, ADN deine informaia necesar
biosintezei tuturor biomacromoleculelor fabricate de un anume organism.
Fiecare celul a unui organism conine ntreaga informaie necesar
ndeplinirii tuturor funciilor organismului. Aceast informaie se gsete
nscris n ADN-ul nuclear numit genom, ntocmai cum memoria unui
calculator conine ntreaga informaie destinat bunei sale funcionri. Prin
diviziune, oul fecundat, care reprezint o singur celul, i va multiplica
informaia genetic.
Aceasta se va regsi, pe masura creterii i dezvoltrii, n
multitudinea de celule nou aprute. Prin diferenierea celular, care apare
pe treptele superioare ale dezvoltrii speciilor, celulele se specializeaz.
Ele vor folosi doar pri din ntreaga informaie stocat. ntre indivizii

170

aceleai

specii

informaia

genetic

difer

puin,

aceste

diferene

manifestndu-se pe planul nsuirilor fizice dar i comportamentale.

Pe baza informaiei c de fiecare dat cnd un cromozom este
replicat, transformndu-se n doi cromozomi, genele sunt copiate exact, s-a
tras concluzia c genele au nu numai o structur macromolecular, dar i
capacitatea de autoreproducere cu mare fidelitate.
Informaia genetic se gsete sub forma unui mesaj genetic,
inscris prin intermediul unui alfabet format din patru litere, constituit din
nucleotidele care formeaz ADN-ul nuclear. Succesiunea acestora
determin individualitatea fiecarui organism.
Genomul uman este format din aproximativ 3 miliarde de perechi de
nucleotide ceea ce dac ar fi nscrise pe pagini a 3000 de caractere ar
ncpea pe 1000 de volume a 1000 de pagini. Genomul este organizat pe
mai multe subuniti, genele, care funcioneaz coordonat.
Transmiterea informaiei, de la ADN i pn la catena polipeptidic
care se sintetizeaz, se realizeaz prin intermediul acizilor ribonucleici
(ARN), care sunt de mai multe tipuri, fiecare cu un rol bine determinat.
7.2. CONSTITUENII ACIZILOR NUCLEICI
Acizi nucleici sunt substane chimice macromoleculare alctuite din
uniti mai simple numite nucleotide.
O nucleotid este alctuit dintr-o baz azotat, un zahar i un
radical fosforic. Bazele azotate din molecula acizilor nucleici sunt de dou
tipuri: purinice i pirimidinice, ele rezultnd dintr-un nucleu comun numit
purin i respectiv pirimidin, derivai din nucleul benzenic.
Acizii nucleici sunt produi de policondensare ai nucleotidelor.
Nucleotidele sunt substane care conin trei tipuri de molecule legate
covalent: o baz azotat, o pentoza i acid fosforic.

171

Bazele azotate din constituia acizilor nucleici sunt n numr de cinci

i dup structura heterociclic proprie pot fi sistematizate n baze purinice si
baze pirimidinice.

Bazele purinice sunt derivai ai purinei: adenin (A) (6-aminopurin)

i guanin (G) (2-amino-6-oxipurin).

Bazele pirimidice (Y), sunt derivai ai pirimidinei: uraciul (U) -2,4dioxipirimidin, timin (T) -5-metil-2,4- dioxipirimidin, i citozin (C) -4amino-2-oxipirimidin.

Timina se gsete doar n structura ADN iar uraciul numai n

structura ARN. Celelalte baze azotate se gsesc n ambele tipuri de acizi

172

nucleici. Numele nucleozidelor se formeaza din rdcina numelui bazei

azotate la care se adaug sufixul -idin pentru cele pirimidinice respectiv
-ozin pentru cele purinice.

Figura 77. Structura de principiu a unei nucleotide

Figura 78. Adenozin monofosfatul ciclic (cAMP)

Acidul fosforic, se leaga fosfoesteric de hidroxilul 5 rezultand in

acest mod nucleotidele, monomerii sau elementele de baz (crmizile) ale
acizilor nucleici. (figura 77). Prezena acidului fosforic, confer caracterul
acid att al nucleotidelor ct i catenelor polinucleotidice.
Nucleotidele sunt esteri fosforici ai nucleozidelor. Dup natura
pentozei pe care o conin se disting : ribonucleotide i deoxiribonucleotide.
Policondensarea nucleotidelor se face prin intermediul acidului fosforic,
care stabilete o nou legtur fosfoesteric cu hidroxilul C3 al altei
nucleotide.
173

Denumirea acestor nucleotide se face n mai multe moduri. O prima

posibilitate este aceea de a utiliza numele de acid + (prefixul deoxi) +
rdcina numelui bazei + sufixul ilic, pentru bazele purinice, respectiv idilic
pentru cele pirimidinice.
Astfel

se

poate

exemplifica:

acidul

(deoxi)guanilic,

acidul

deoxitimidilic, acidul uridilic etc.

Figura 79. Adenozin trifosfatul (ATP)

O alt posibilitate este de a denumi nucleotidele ca esteri ai acidului

fosforic (mono) cu nucleozidele: adenozin-5-monofosfat, deoxitimidin-5monofosfat

etc.

sau

de

(AMP=adenozin-5-monofosfat,

utiliza
dAMP=

prescurtri
deoxi

ale

acestor

esteri

adenozin-5-monofosfat,

CMP-citidin monofosfat etc).

Exist i nucleotide speciale care se abat de la structura de baz
mai sus enunat. Acestea sunt fie intermediari n sinteza nucleotidelor, fie
ndeplinesc alte funciuni. Astfel amintim cAMP sau adenozin monofoafatul
ciclic, care conine dou legturi de tip fosfoesteric la poziiile 3 si 5 (figura
78).
Aceste substane funcioneaz ca mediator al aciuni hormonale
fiind interpus intre hormon i enzima specific asupra cruia aceasta
acioneaz. n prezena hormonului se activeaz AMP ciclaza, enzima care
mediaz formarea cAMP si ATP.

174

Difosfo- si trifosfonucleozidele sunt principalele substane folosite de

materia vie ca tampon energetic. Legatura fosfoanhidridic are o energie
liber ridicat (G=7 kcal / mol).

7.3. TIPURI STRUCTURALE ALE ACIZILOR NUCLEIC

7.3.1. Acizi deoxiribonucleici (ADN)

Reprezint baza moleculara a conservrii i trimiterii informaiei
ereditare, a diferentierii i reglrii celulare, a meninerii i perpeturii
caracterelor i totodat a modificarilor (spontane) sau induse. n imensa
majoritate a cazurilor (exceptie fac cteva virusuri), ADN-ul are o stuctur
bicatenar elicoidala (dublu helix).
Secvena nucleotidelor alctuiete ceea ce se cheam structura
primar a acizilor nucleici, n timp ce forma bicatener constituie structura
secundar.
Forma pe care o ia catena singur sau molecula bicatener cu toate
rsucirile pe care le sufer, alctuiesc structura teriar, iar interaciunea
ntre dou sau mai multe molecule bicatenare formeaz structura
cuaternar a acizilor nucleici.
a.Structura primar a ADN-ului
Este dat de secvena de nucleotide, care sunt unite prin legturi 35 fosfodiesterice. De fapt structura primar a ADN-ului este similar cu
structura primar a ARN-ului deosebirea fiind la tipul de pentoza si la
existena exclusiv a: uracilului n moleculele de ARN i a timinei n
moleculele de ADN.
Datorit ionizrii restului de acid fosforic, ADN-ul se comport ca un
macroanion.

175

b. Structura secundar a ADN-ului

Modelul ideal al structurii secundare a ADN, a fost creat de James
Watson i Francis Crick n 1953, pe baza rapoartelor lui Chargaff i a
datelor obinute prin studiul structurii ADN prin difracie de raze X.
Potrivit acestui model, ADN se prezint ca o structur bicatenar,
antiparalel, dublu elicoidal de dreapta, ambele catene fiind infurate pe
aceeai ax.
Bazele

azotate

se

afl

dispuse

nspre

interior,

cu

planul

perpendicular pe axa comun de rotaie, decalate ntre ele cu un unghi de

36, iar moleculele de deoxiriboz au planul paralel cu axa de rotaie.
Dispunerea

interioar

bazelor

azotate

este

favorizat

hidrofobicitatea conferit de electroni delocalizai ai nucleelor acestor

structuri. Stabilitatea helixului este asigurat prin legturi de hidrogen ntre
perechile A-T i G-C (cte dou i respectiv trei pentru fiecare pereche).
Aceste legturi de hidrogen nu se pot stabili dect dac cele dou
catene polideoxiribonucleotidice sunt antiparalele (figura 80)

Figura 80. Formarea legturilor de hidrogen

176

Denaturarea si renaturarea ADN

n anume condiii de temperatur, pH i trie ionic acizii
deoxiribonucleici i pot pierde structura bicatenar, cele dou catene
separndu-se. Acest fenomen este cunoscut sub numele de denaturare.
n cazul n care intensitatea cu care acioneaz aceti factori nu
afecteaz structura primar a celor dou catene, prin ndeprtarea
agentului denaturant (rcire, aducerea pH-ului n limitele normal fiziologice,
ndeprtarea ionilor) structura bicatenar se reface, fenomenul numindu-se
renaturare.
Evoluia denaturrii, respectiv a renaturrii poate fi monitorizat
spectrofotomeric prin monitorizarea absorbantei la 260 nm. La aceast
lungime de und se absorb bazele azotate. n structura dublu-helican,
datorit mascrii bazelor, absorbanta are o valoare relativ redus. Pe
masura ce catenele se ndeparteaz reciproc, crete i valoarea
absorbantei, efectul fiind cunoscut de spectrometriti sub numele de efect
hipercrom sau deplasare hipercrom.
Prin analogie cu punctul de topire al solidelor, respectiv cu cel al
enzimelor, se poate defini un punct de topire al ADN-ului (p.t.). Aceasta
este temperatura la care se nregistreaz o jumatate de varianta total a
absorbantei. Desigur relevarea acestuia se face pe baza nregistrrilor
variatiei absorbantei n funcie de temperatur .
Renaturarea este un proces invers denaturrii. n evoluia sa cele
doua catene se vor alinia reciproc, stabilind legturile complementare.
Viteza renaturrii este dependent de lungimea, concentraia ADN i de
timp. Temperatura acioneaz la un nivel optim, difuzia macromoleculelor
fiind direct dependent de temperatur, dar peste o anumit limit se poate
declana topirea duplexului.

177

Procesele de denaturare-renaturare au ca aplicaie forma hibrizilor

ADN-ADN sau ARN-ARN, utilizai n tehnicile de manipulare a acizilor
nucleici.
c. Structura teriar a ADN-ului
Complexitatea ADN depinde de tipul procariot sau eucariot al celulei
precum i de poziia organismului pe scar evoluional. Organizarea
spaial a macromoleculelor de ADN n interiorul celulei definesc structura
teriar a ADN-ului.
Procariotele nu au materialul genetic separat pe alte structuri,
neprezentnd un nucleu distinct. Virusurile i bacteriile posed o singur
molecul de ADN bicatenar, de regul circular, nchis covalent. n cazul
virusurilor, materialul genetic poate fi stocat i sub forma de ARN.
Eucariotele posed un nucleu distinct structural de citosol, de care
este separat printr-o dubl membran poroas. Dimensiunile reduse ale
celulei oblig ADN-ul s adopte conformaii cu grad de mpachetare.
Atingerea acestor conformaii este posibil doar prin interaciunea ADN-ului
cu substane proteice care vor ghida duplexul de ctre conformaii dense.
Substanele proteice tipice care interacioneaz cu ADN-ul au
caracter bazic conferit de aminoacizi precum lisina, arginina, histidina i
sunt cunoscute sub numele de histone.
ADN-ul se mai gsete asociat temporar cu o serie de proteine
nehistonice

de

la

factorii

proteici

responsabili

de

declanarea

proteosintezei, pn la enzimele care faciliteaz acest proces. Raportul

masic ntre materialul genomic i proteinele asociate este aproximativ
unitar. Histonele sunt proteine de cinci tipuri diferite care atest meninerea
mecanismelor de pliere a ADN-ului. Aceste tipuri de proteine formeaz un
octamer, prin asocierea n perechi. Acest octamer reprezint miezul unei
structuri repetitive denumit nucleozom.
nfurarea dublului helix ADN n jurul miezului nucleozomului
presupune deformarea dublei catene n zona de contact cu proteina.
178

Energia necesar procesului de deformare este maxim n canelura mica.

n zonele de pliere corespunztoare canelurii mici n contact cu
nucleozomul se ntlnesc foarte frecvent perechile A-T.
Stabilirea structuri nucleozomice este ridicat, poziiile ocupate de
octamer pe catena deoxiribonucleotidic fiind fixe.
Pe lng octamerul histonic i cele dou spire de duplex ADN,
nucleozomul conine ca structuri de legatur, proteina H1 i un numr
variabil de perechi de nucleotide.

Figura 81. Structura unui nucleozom izolat

Histona H1 posed trei situsuri de legare prin intermediul crora se

conecteaza doi nucleozomi adiaceni. n zona central a structurii H1 se
afl aa-numitul miez, care se ataeaz pe nucleozom. Celelalte dou
situsuri sunt capetele N- respectiv C- terminale ale catenei polipeptidice.
Ele interacioneaz cu miezurile H1 ataate nucleozomilor alturai.
O dubl caten ADN, apare ca o niruire de nucleozomi. Dublul
helix care leag doi nucleozomi adiaceni poart numele de ADN de
legtur (linker).

179

Dublul helix n conformaie ideal (Watson-Crick) avea un diametru

de 2 nm i irul polinucleozomic, sau filamentul de cromatin, va avea un
diametru de 11 nm iar lungimea sa se reduce.
Filamentul de cromatin nu este o structur ideal, deoarece
lungimea ADN-ului linker este variabil.
Se ntlnesc poriuni fr nucleozomi n care exist proteine de
legtur

nehistorice. Aceste

zone

sunt hipersensibile

la aciunea

nucleazelor.
irul polinucleozomic se aranjeaz ntr-o structur superhelicoidal
cunoscut sub numele de solenoid sau fibr de cromatin. Suprahelixul
format conine n medie cca. ase nucleozomi pe spir. Firele de cromatin
se vor aranja n structuri mai compacte cu aspect de bucle (anse), al cror
diametru mediu este de cca. 300 nm.
Aceste anse se aranjeaz n structuri cu grad mai mare de
compactivitate numite heterocromatine care n cursul diviziuni celulare vor
atinge forma maxim condensat numit cromosom. Diametrul acestei
structuri de cca. 1400 nm (1,4 m) o face vizibil la microscopul optic. n
alte faze ale ciclului celular dect diviziunea, aspectul microscopic al
materialului genomic este difuz.
7.3.2. Acizii ribonucleici (ARN)
Din

punct

ribonucleotide

de
a

vedere

cror

structural,

componen

ARN-ul
glucid

este
este

constituit
riboza.

din

Aceste

ribonucleotide sunt: AMP, GMP, CMP i UMP.

Prin legturi de tip diester fosforic, aceste nucleotide sunt legate n
macromolecule, ce variaz ca dimensiuni, proprieti i funcii biologice.
a.Structura acizilor ribonucleici.
ARN-ul este n majoritatea cazurilor monocatenar i prezint o
structur primar, determinat de secvenializarea mononucleotidelor n
catena polinucleotidic i o structur secundar, imprimat de dispunerea
elicoidal a catenei.
180

Structura teriar n-a fost pus n eviden la ARN. Excepiile

observate, apar pe poriuni de caten de ARN, att intracatenar ct i
intercatenar. Catenele partenere pot fi att ARN, ct i ADN.
Zonele dublu catenare se formeaz tot prin mperecherea bazelor
complementare A-T(U) respectiv G-C. Deoarece prezena hidroxilului din
poziia 2 mpiedic poriunea dublu catenar s adopte o conformaie de
tip B, n structura de duplex ale ARN se ntlnesc conformaii de tip A.
S-au sintetizat trei tipuri principale de ARN, ce difer ntre ele prin
rolul jucat n sinteza proteic: ARN mesageri (ARNm), ARN de transport
(ARNt) i ARN ribozomali (ARNr). Pe lng aceasta mai exist i ARN de
mas mic ARNsn (small nuclear ribonucleic acids) sau ARNsc (small
citosolic ribonucleic acids), care au rol n procesarea acizilor ribonucleici de
transport.

ARN mesageri (ARNm)

Poart informaia coninut ntr-o secven de ADN similar celei

iniiale. Secvena unui ARNm este similar celei originale. Diferenele ntre
catena matri (ADN) i cea copie (ARN) constau n nlocuirea deoxiribozei
din ADN cu riboza din mARN i nlocuirea timinei din ADN cu uracilul din
ARNm. Ulterior ARNm-ul replic, se va traduce ntr-o secven de
aminoacizi, care va forma noua caten polipeptidic sintetizat.
Aceast caten polipeptidic sintetizat reprezint expresia, sau
forma exprimat a informaiei genetice stocate n ADN (n gen).
Intensitatea relativ de sintez este mare, corespunztoare nevoilor
constante ale celulei pentru diferite proteine, coninutul momentan de
ARNm este redus, durata de viaa a acestuia fiind mult mai mic fa de
celelalte dou tipuri.
Aceasta se explic prin hidroliza imediat a ARNm-ului dup
ndeplinirea rolului su care vor servi ca materie prim pentru noi procese
de transcriere. Faptul c fiecrei proteine i corespunde o secven de
ARNm justific diversitatea molecular a acestui tip de ARN.
181

La eucariote, ARNm se sintetizeaz n nucleu, se transfer n citosol,

se ataeaz pe ribosomi unde particip ca model la sinteza noii catene
polipeptidice n cursul procesului de traducere.
Structura ARNm este monocatenar. La procariote pot exista zone
limitate ca lungime n care apar legturi intracatenare care confer structurii
locale aspectul unei agrafe de pr (hair pin). Structura ARNm-ului este
dificil de explorat datorit instabilitii acesteia.

ARN de transport sau de transfer (ARNt)

Au rolul de a transporta aminoacizii din citosol, pn la locul sintezei

catenei polipeptidice, ribosomul. Aici aminoacizii sunt ordonai n catena
polipeptidic n formare, pe baza secvenei nucleotidice din ARNm care se
gsete ataat de ribosom. Aceste le confer caracteristica de molecul
adaptor ntre catena de ARNm i catena polipeptidic.
Pentru realizarea acestor procese fiecare acid ribonucleic de transfer
posed capacitatea de recunoatere a unei anumite secvene de nucleotide
din ARNm i n acelai timp de legare a unui anume aminoacid.

Figura 82. Modelul plan al unei molecule de ARNt.

ARNt-ul mai ndeplinete funcia de activator al moleculei de
aminoacid care va intra n reacia de policondensare pentru c aminoacidul

182

va fi transportat prin legare esteric la ARNt. Structura ARNt asigur

ndeplinirea funciilor sale.
Fa de variabilitatea mare a ARNm, numrul de specii de ARNt la
nivel celular este limitat la circa 40 cu variaii relativ mici ntre specii.
Moleculele de ARNt posed caracteristici comune, pe lng
aspectele particulare pe care le deosebesc. Moleculele de ARNt sunt
formate dintr-un numr limitat de nucleotide (73-94). Unele dintre acestea
se gsesc mperecheate.
n componena ARNt se gsesc nucleotide cu baze atipice. Numrul
lor variaz de regul ntre 7 i 15. Cele mai frecvent ntlnite sunt
prezentate n figura 83. Multe dintre acestea sunt derivai metilai sau
dimetilai ai bazelor A, U, C i G.
Bazele atipice au potenialul de formare a perechilor alterat.
Modificrile sterice, electronice i cele lipofile permit o modelare mai
rafinat a interaciunii cu proteinele ribosomale, cu sintetazele care
acioneaz n decursul sintezei proteice.
Captul 3-OH terminal are ntotdeauna secvena de baze CCA, iar
captul 5-fosforilat are n majoritatea cazurilor un rest de acid guanilic.
Fiecare molecul de ARNt are patru zone dublu helicate, care
confer un aspect de frunz de trifoi cu patru foi pentru molecula forat s
apar n plan figura 82.
Structura realizat prin formarea celor patru zone de duplex
delimiteaz patru bucle: bucla TC, al crei nume deriv de la secvena
obligatorie ribotimin-pseudouracil-citozin, o bucl suplimentar de
lungime variabil (bra suplimentar), bucla anticodon, care conine o
secven de trei nucleotide, XYZ, strict stereocomplementar cu o secven
corespunztoare din ARNm.
ARN ribozomal (rARN)
Formeaz masa principal a ribozomilor. Acetia sunt organite
celulare situate n citoplasm formate din acid ribonucleic (65 %) i din
183

proteine. Studiul ribozomilor a artat c structura acestora este format din

dou subuniti ribonucleoproteice asociate prin legturi slabe, ntre care
exist un spaiu n care poate intra ARNm-ul.
Aceste dou subuniti difer ntre ele prin mas molecular
cuantificat prin constanta de sedimentare Svedberg.
Constanta de sedimentare S, este o mrime care se utilizeaz n
cazul determinrilor comparative de mas molar a unor molecule prin
msurarea vitezei de deplasare a substanei ntr-un cmp ultracentrifugal.
Acizi ribonucleici de mas mic (snRNA)
La eucariote, n urma procesului de transcriere apare un ARN primar
care conine secvene informaionale numite exoni care se vor exprima n
proteine precum i n secvene intercalate, numite introni. Acest ARNm
primar va suferi un proces de excizie-splicing, n urma cruia introni vor fi
excizai iar capetele libere ale exonilor se vor suda.
La acest proces particip o serie de structuri ribonucleoproteice,
numite snurps (small ribonucleoprotein particles), n constituia crora intr
catene scurte, cu pn la 300 de nucleotide, foarte bogate n acid uridilic.
Aceste componente ribonucleoproteice au rolul de a cataliza
procesul identificnd i apropiind punctele de seciune i de sudare
realiznd procesul de hidroliz propriu-zis.

184

Figura 83. Baze atipice ntlnite n moleculele de ARNt.

185