Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure LP5

Antibiograma
Antibiograma: testarea sensibilitii microorganismelor fa de antibiotice

1. Metode calitative Metoda difuzimetric Kirby-Bauer

Se testeaz sensibilitatea unei tulpini bacteriene izolate Prepararea inoculului: - se suspensioneaz 2-3 colonii izolate n ser fiziologic - turbiditatea suspensiei se controleaz nefelometric sau comparnd cu tuburi etalon (conin suspensii de particule latex/sulfat de Ba avnd turbiditate determinat); - se ajusteaz la 0.5 McFarland (1,5x108 CFU/ml). nsmnare: - se alege un mediu corespunztor speciei bacteriene testate Mueller-Hinton pentru majoritatea bacteriilor Mueller-Hinton cu snge pentru pretenioi (de ex. streptococi) medii speciale (pentru Haemophilus spp . neisserii)

- se introduce un tampon n suspensia bacterian, se stoarce pentru ndeprtarea excesului de lichid - se terge uniform toat suprafaa mediului de 3x Depunerea microcomprimatelor de antibiotice - se aleg antibioticele care trebuie testate in funcie de specia bacterian testat si n funcie de localizarea infeciei (! infecii urinare) - se depun discurile de antibiotic la l .5 cm distan de marginea cutiei Petri si la 3 cm distan unul fa de cellalt (pot fi depuse max. 12 discuri) - 15 min. temperatura camerei Incubare - n funcie de specia bacterian: n atmosfera obinuit sau in atmosfer de CO2 (de ex. streptococi, neisserii.) - 35C - 16-18 ore (n cazul germenilor pretenioi pn la 20-24 de ore)

-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP5

Interpretare - apare o cultur bacterian confluent, n jurul microcomprimatelor apar zone de inhibiie (lipsa creterii bacteriene). - se citesc diametrele zonelor de inhibiie (mm)

- se compar diametrele citite cu diametre standard in funcie de antibiotic, cantitatea de antibiotic din comprimat, specia bacterian testat
Tabel: Exemple de diametre standard, conform standardelor CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute USA) Standard CLSI Specii bacteriene Staphylococcus aureus Antibiotic levofloxacin 10 ug Rezistent 15 mm 13 mm Intermediar sensibil 16-18 14-16 Sensibil 19 mm 17 mm

Streptococcus pneumoniae levofloxacin 10 ug

pot aprea fenomene de sinergism/antagonism care reflect diferite mecanisme de rezisten

colonii izolate in interiorul zonei de inhibiie: subpopulaii rezistente

Interpretarea antibiogramelor: Rezultatul se raporteaz: sensibil (S), intermediar sensibil (IS) sau rezistent (R) la antibioticul testat nu se comunic diametrele citite (metod calitativ) cunoaterea rezistenei intrinsece a bacteriilor (dg) + a mecanismelor de rezisten prin care bacteriile pot dobndi rezisten la diferite antibiotice

-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP5

Variabilele care influeneaz rezultatele: compoziia mediului (coninut de cationi, timidin) pH (optim: 7,2-7,4) grosimea gelozei (standard: 4 mm) inoculul - 0,5 McFarland microcomprimate (valabilitate, coninut, condiii de pstrare) timpul, temperatura de incubare citirea diametrelor (lumin refractat/reflectat, colonii izolate, prezena unui vl, margini crenelate) Control de calitate microcomprimatele loturile noi de medii de cultur se testeaz cu tulpini de referin

2. Metode cantitative
- permit stabilirea concentraiei minime inhibitorii (CMI) a unui antibiotic CMI: cantitatea cea mai mic de antibiotic care inhib complet multiplicarea unei bacterii Este recomandat testarea cantitativ n urmtoarele situaii: cazuri clinice grave (septicemii, endocardite, meningite) rezultate incerte cu metoda difuzimetric / sensibilitate nedeterminat

Metoda diluiilor (macro/microdiluie) se realizeaz diluii succesive din antibioticul de testat n mediu de cultur lichid se adaug cantiti fixe din cultura bacterian cercetat incubare 18ore 35C se urmrete apariia culturii n mediul lichid CMI: cea mai mic concentraie de antibiotic care nu permite creterea germenilor (cultur limpede)

-3-