Introducere

Carbohidraii sunt substane organice, cu funciune mixt ce au n compoziia lor att grupri carbonilice ct i grupri hidroxilice, constituind o clas de substane foarte important att pentru organismele animale ct i pentru cele vegetale.

I. PARTEA GENERAL
n aceast parte a lucrrii figureaz caracterizarea structurii chimice, sinteza, descrierea, aciunea i utilizarea terapeutic a compuilor studiai, precum i prezentarea produselor farmaceutice comercializate. I.1. HIDRAI DE CARBON I.1.1. Nomenclatur Hidraii de carbon (carbohidraii) constituie o mare familie de substane naturale, ce rezult n procesul fotosintezei, fiind din punct de vedere al structurii chimice produi primari de oxidare ai polialcoolilor, i anume polihidroxialdehide (aldoze) i polihidroxicetone (cetoze). n aceast grup de substane sunt inclui i derivaii lor de oxidare i reducere (acizi uronici, acizi zaharici, polialcooli i ciclitoli) ct i derivaii lor de substituie (dezoxiglucide, aminoglucide). Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Cel care ncearc prima dat s denumeasc hidraii de carbon este C. Schmidt n anul 1844 i i denumete astfel, datorit raportului observat ntre atomii de hidrogen i de oxigen egal cu cel din ap, gsit n primii compui izolai puri. Au fost descoperii nite compui cu proprieti foarte apropiate de ale hidrailor de carbon, care au fost inclui n aceast clas, dar n care raportul dintre hidrogen i oxigen nu mai era cel din ap ca de exemplu C6H12O5. Conform acestei descoperiri, Comisia Internaional pentru Reforma Nomenclaturii Chimice a propus n 1927 folosirea denumirii de glucide n locul celei de hidrai de carbon, avnd n vedere i faptul c glucoza este unul din reprezentanii cei mai importani ai acestor compui. Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 n chimia organic se utilizeaz denumirea de hidrai de carbon i numai n biochimie, datorit rolului important pe care l joac glucoza n procesele biochimice, se folosete denumirea de glucide. Este folosit de asemenea i denumirea de zaharuri, provenind de la zaharoz, unul din reprezentanii importani ai acestei clase de compui. Nici denumirea de glucide sau zaharuri nu este proprie deoarece numeroase substane din aceast familie nu au gust dulce. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 I.1.2.Caracterizare general Carbohidraii sunt, probabil, cele mai abundente molecule organice de pe pamnt, deoarece acetia sunt prezeni n celulele tuturor organismelor vii i sunt principalii

constitueni ai plantelor, reprezentnd carbonului prin fotosintez.

n biosfer, formele majore de asimilare a

Carbohidraii sunt molecule polare, care se caracterizeaz printr-o diversitate de mase moleculare, legturi glicozidice i funcionalitate. Ei sunt constituii din carbon, hidrogen i oxigen, dar pot conine i alte elemente, cum ar fi azot, sulf, fosfor, etc. Sunt caracterizai prin numrul mare de grupe hidroxil, dar pot fi prezente i alte grupe funcionale: carbonil, carboxil, amino, eter, etc. De asemenea, carbohidraii pot fi legai de proteine sau lipide, formnd glicoproteine, respectiv glicolipide. n general sunt solubili n ap, iar pentru muli polimeri este de ateptat gelificarea, formarea de helix, adsorbia etc. Sunt i compui insolubili n ap, un exemplu ar fi celuloza, dar i alte polizaharide. Solubilitatea n alcooli i solveni polari: piridina, dimetilsulfoxid, dimetilformamida se limiteaz la zaharuri de dimensiuni mici. Dei unele zaharide sunt higroscopice i instabile termic, n general sunt stabile la temperatura camerei i n prezena aerului. Carbohidraii au stabilitate termic sczut, fiind supui foarte uor degradrii i deshidratrii prin bine-cunoscutele reacii de caramelizare. Au reactivitate chimic mare, reacionnd cu acizi, baze, grupe amino i muli reactivi. Obinerea derivailor se face cu uurin sau se pot introduce alte grupri pentru protejarea grupelor funcionale specifice. Pentru pstrarea moleculelor intacte, este necesar meninerea pH-ului aproape de neutralitate i evitarea reaciilor de izomerizare i descompunere, care au loc uor n mediul alcalin sau acid. Izomerizarea glucozei la fructoz a fost confirmat de-a lungul unor procese cromatografice, n condiii alcaline. Nu au proprieti de a emite fluorescen i absorb n UV doar la lungimi de und mici. Sanz M.L., Martnez-Castro I.: Recent developments in sample preparation for chromatographic analysis of carbohydrates, Journal of Chromatography A, 1153 (2007) 74-89 I.1.3. Clasificarea hidrailor de carbon Zaharurile se clasific, n funcie de comportarea lor la hidroliz, n monozaharide (oze) i polizaharide (ozide). Monozaharidele nu hidrolizeaz, iar dup numrul de atomi de carbon din molecula lor se numesc: trioze, tetroze, pentoze, hexoze, etc.

Polizaharidele, sub influena acizilor minerali sau sub aciunea unor enzime, hidrolizeaz trecnd n monozaharide. Dup numrul de monozaharide din molecula lor, se deosebesc: oligozaharide (oligos = puin), care conin dou pn la ase resturi de monozaharide, i polizaharide, cu mase moleculare foarte mari, alctuite dintr-un numr mare de resturi de monozaharide. Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 I.1.3.1. Monozaharide Structur molecular Monozaharidele sau monozele (numite i oze sau zaharuri simple) sunt alcooli polihidroxilici, frecvent cu cinci pn la opt atomi de carbon, care conin i o grup carbonil. Sunt polihidroxialdehide sau polihidroxicetone. Monozaharidele

hidroxialdehide se numesc aldoze, iar monozaharidele hidroxicetone se numesc cetoze. Dup orientarea n spaiu a oxidrilului de la C5 ozele prezint dou serii sterice: D i L. n natur predomin seria D. Formele L sunt foarte rare. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 Comportarea grupei carbonil este mai puin simpl. De obicei aceast grup nu se afl n stare liber, ca n aldehidele i cetonele simple, ci formeaz cu una din grupele alcoolice din molecul, un semiacetal ciclic (lactol) printr-o adiie intramolecular. Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250

ntr-adevr aldohexozele, ca glucoza, nu dau reacia Schiff i nu formeaz cu bisulfitul de sodiu complexul bisulfitic, reacii specifice aldehidelor. Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 Grupa hidroxil care se formeaz la atomul de carbon al grupei carbonil este numit semiacetalic sau glicozidic, avnd proprieti diferite de ale celorlalte grupe hidroxil.

Existena grupei alcoolice, n monozaharide, se recunoate prin reacii de esterificare i eterificare, caracteristice pentru alcooli. Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Formularea ciclic a monozaharidelor a fost propus de Colley (1870) i de Tollens (1884), admis n mod general de E. Fischer (1912), iar natura ciclului a fost stabilit de W. N. Haworth (1926). Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Dup numele heterociclurilor cu oxigen, cu 5 i respectiv 6 atomi de carbon, furanul i piranul, forma ciclic a monozaharidelor este denumit furanozic i respectiv piranozic.
2

Datorit unghiului de 10928' format de valenele atomului de carbon hibridizat sp3, catenele atomilor de carbon nu formeaz linii drepte, ci linii frnte, ce pot avea diferite forme, din cauza rotaiei libere n jurul legturilor . Acestea fac ca la o molecul, de exemplu de glucoz, s se apropie dou grupe care au afinitate chimic, cum este grupa carbonil i o grup hidroxil.

n poziia steric favorabil, perechea de electroni neparticipani de la atomul de oxigen al grupei hidroxil din poziia 5 (sau 4), atac atomul de carbon cu densitate mic de electroni al grupei carbonil cu producerea unei legaturi noi CO, iar atomul de hidrogen al aceleiai grupe hidroxil migreaz la atomul de oxigen al grupei carbonil.

n soluie se stabilete un echilibru, la care concentraia formei ciclice, favorabil energetic, este mult mai mare dect cea a formei aciclice. n stare solid, echilibrul se deplaseaz total n favoarea formei ciclice. Prin transformarea grupei carbonil se creeaz un nou centru de asimetrie care duce la formarea a doi stereoizomeri, ce se gsesc n soluie n echilibru dinamic. Apariia celor doi stereoizomerinumii anomeri i notai cu i se datorete faptului c grupa hidroxil glicozidic poate avea orientri diferite fa de planul ciclului. Trecerea din forma n forma i invers se face, probabil, prin intermediul formei carbonilice sau folosind formulele de perspectiv.

Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 Datorit anomeriei numrul formelor izomere posibile ale ozelor din seria D i L se dubleaz. a) Forma acilic a ozelor

b)

Forma ciclic a ozelor redat prin formule de proiecie

c)

Forma ciclic a ozelor redat prin formule HAWORTH

Substituenii care se gsesc n formulele de proiecie n dreapta se figureaz n formulele Haworth sub plan, iar cei din stnga deasupra planului. n formulele alfa seria D este redat prin situarea gruprii CH2OH deasupra planului, iar seria L prin situarea acesteia dedesubtul planului. La izomerii alfa gruparea CH2OH din poziia 6 i OHglicozidic se gsesc n poziia trans, iar la izomerii beta n poziia cis. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Procesul numit mutarotaie se poate observa ca o descretere a rotaiei optice a anomerului (+112) sau ca o cretere a rotaiei optice a -anomerului (+18,7) la valoarea de echilibru. Acizii i bazele n soluie catalizeaz mutarotaia. La echilibru glucoza se gsete n proporie de 30%, iar -glucoza, n proporie de 64%. Forma aldehidic se gsete n cantiti foarte mici; n mediu neutru, de numai 0,024%. Prin formulele de perspectiv (introduse de Haworth-1926) se red mai intuitiv structura ciclic a monozaharidelor, dar se prezint toi atomii ciclului n acelai plan. nc din anul 1950 s-a artat c inelul piranozic poate exista, ca i ciclohexanul, n conformaii fr tensiune, scaun sau baie (Reeves).

Conformerii hidrailor de carbon se aseamn cu cei ai ciclohexanului polisubstituit (ca inozitolii) cu deosebirea c la hidraii de carbon unul din substitueni are un volum foarte mic (perechea de electroni de la oxigen), iar altul un volum foarte mare, grupa CH2OH. De aceea echilibrul ntre cele dou conformaii scaun este, de exemplu pentru -D-glucoz, mult deplasat spre stnga.

n prima form patru substitueni se afl n poziie ecuatorial, iar n a doua form patru substitueni se afl n poziie axial. Unor monozaharide li se atribuie i conformaii twistate. Studiile cu raze X au artat c la -D-glucoza, cristalin, patru substitueni ocup poziii ecuatoriale, iar unul o poziie axial, n timp ce la anomerul toi cinci substituenii sunt n poziie ecuatorial. De aceea anomerul este mai stabil dect anomerul .

La unii derivai ai D-glucopiranozei, anomerul este mai stabil, fapt explicat prin interaciunile de dipol dintre atomul de oxigen din ciclu i cel legat de atomul de carbon C1, care sunt mai mari la anomerul dect la anomerul .

La monozaharide ca i la glicoli se pot forma legturi de hidrogen intramoleculare. Tria lor este maxim cnd distana O...O este apropiat de 2,5 ; folosindu-se modele mecanice s-a artat c aceast distan apare cnd cele dou grupe sunt eclipsate i este mai lung cu 0,3-0,4 cnd grupele sunt intercalate sin. Poziia axial sau ecuatorial a atomului de hidrogen legat de atomul de carbon nr. 1 se poate stabili cu ajutorul spectroscopiei IR; cnd legtura C1-H este ecuatorial banda de absorbie apare la 844 cm-1, iar cnd este axial la 891 cm-1.

Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 Proprieti fizice Monozaharidele sunt compui neutri, cristalini, incolori, solubili n ap, puin solubili n alcool i insolubili n eter, cloroform i hidrocarburi. Au gust dulce. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Monozaharidele naturale n soluie au activitate optic; aceasta permite caracterizarea lor prin rotaia specific. Aldopentozele i aldohexozele au trei i respectiv patru atomi de carbon asimetrici, iar cetopentozele i cetohexozele au cte un atom de carbon asimetric mai puin dect aldozele izomere.

Folosind relaia N=2n, care d numrul de stereoizomeri n funcie de numrul de atomi de carbon asimetrici, rezult c aldopentozele i cetohexozele pot exista sub forma a 8 stereoizomeri (4 perechi de antipozi optici), aldohexozele sub forma a 16 stereoizomeri (8 perechi de antipozi), iar cetopentozele sub forma a 4 stereoizomeri (dou perechi de antipozi optici). Fiecare stereoizomer poate exista n dou forme (ciclice): i . Monozaharidele cu configuraia atomului de carbon asimetric cel mai ndeprtat de grupa carbonil identic cu a D-aldehidei glicerice fac parte din seria D, iar cele cu configuraia corespunztoare identic cu a atomului de carbon asimetric al L-aldehidei glicerice fac parte din seria L. De exemplu:

Rotirea planului luminii polarizate de ctre pentoze i hexoze nu este legat de apartenena la seria D sau L; unele monozaharide (ca fructoza) rotesc planul luminii polarizate spre stnga (sunt levogire), dei fac parte din seria D. De aceea, pe lng notarea seriei optice folosind convenia de simbolizare D-L se noteaz sensul rotaiei optice cu semnele plus sau minus ntre paranteze. Astfel glucoza este notat D(+) glucoz, iar fructoza: D(-) fructoz. Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Clasificarea monozaharidelor n funcie de numrul atomilor de carbon din caten se deosebesc dioze, trioze, tetroze, pentoze, hexoze, heptoze etc. n regnul vegetal i animal se ntlnesc mai frecvent pentozele i hexozele. n natur nu se gsesc trioze libere, dar esterii lor cu acid fosforic joac un rol important ca intermediari n transformrile biochimice ale hidrailor de carbon. Tetrozele nu se ntlnesc n natur, ci au fost obinute prin reacii de degradare ale pentozelor. n afar de cele patru aldo-tetroze se cunosc i dou ceto-tetroze: D- i Leritrulozele. Pentozele Dintre cele opt aldo-pentoze, numai patru se gsesc n natur, iar dintre cetopentoze, n numr de patru numai dou. Pentozele se caracterizeaz prin formare de furfurol la nclzire cu acizii minerali diluai. Dintre pentoze, cele mai importante sunt: D(+)-xiloza, D(-)-arabinoza, L(+)-arabinoza. Hexozele Aldo-hexozele au patru atomi de carbon asimetrici i pot forma 16 izomeri optici. Ceto-hexozele, avnd trei atomi de carbon asimetrici. Principalii reprezentani ai clasei sunt: D-glucoza, D-manoza, D-galactoza i L-fructoza, care sunt totodat i cele mai rspndite monozaharide. Ele se gsesc n natur, libere, sub form de glicozide, de oligozaharide i de polizaharide. O reacie caracteristic pentru hexoze este comportarea fa de acizii minerali care le transform n acid levulic. Cele patru monozaharide naturale fermenteaz sub aciunea drojdiei de bere. DGlucoza, D-manoza i D-fructoza fermenteaz uor; D-galactoza, care se deosebete prin configuraia unui atom de carbon, fermenteaz mai greu, numai cu drojdii

acomodate la acest substrat. Fermentaia poate servi i la dozarea acestor hexoze (msurndu-se CO2 degajat). Fermentaia se poate folosi i pentru izolarea altor zaharuri amestecate cu hexozele naturale, dac acele zaharuri nu sunt atacate de drojdie. Heptozele n natur nu au fost gsite aldo-heptoze, dar au fost sintetizate mai multe asemenea monozaharide, pornindu-se de la aldo-hexoze, prin reacia de lungire a catenei. Exist dou ceto-heptoze, D-monoheptuloza, n fructul arborelui african avocado i D-sedoheptuloza, ntr-o plant cultivat ca ornament (Sedum spectabile) i n primule. Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 I.1.3.2. Compui nrudii cu monozaharidele Tetritolii, pentitolii i hexitolii, din cauza nrudirii lor stereochimice cu monozaharidele pot fi descrii n acest capitol. Tetritolii pot exista n trei forme stereoizomere: o pereche de enantiomeri i o form mezo, inactiv prin compensaie intermolecular. (doi atomi asimetrici cu structur identic). Cei doi tetritoli optic activi, treitolii se formeaz din cele dou treoze, iar mezo-eritritolul se formeaz din ambele eritroze prin reducere. Mezoeritritolul este singurul reprezentant al clasei ce apare n natur, liber n unele alge i ca ester cu acidul orselic. (acid 2-metil-4,6-dihidroxibenzoic) n fungi i licheni. Pentitolii, provenii prin reducerea celor opt aldo-pentoze pot exista n patru forme stereoizomere: o pereche de enantiomeri i dou forme inactive prin compensaie intermolecular. n natur se ntlnesc liberi, D-arabitolul, n unele ciuperci i ribitolul, n planta rucua primvratic (Adonis vernalis). Ribitolul este o component important a riboflavinei (vitamina B2). Ceilali pentitoli au fost obinui din aldopentozele corespunzatoare, prin reducere cu amalgam de sodiu. Hexitolii Prin reducerea celor 16 aldo-hexoze se obin 10 hexitoli: 4 perechi de enantiomeri i dou forme mezo. Configuraia hexitolilor coincid cu cele ale acizilor zaharici provenii din aceleai aldoze. Obinerea hexitolilor

Hexitolii se obin prin reducerea aldohexozelor cu amalgam de sodiu, catalitic cu nichel Roney sau electrolitic. Cetozele dau prin reducere cte doi hexitoli, deoarece se formeaz un nou atom de carbon asimetric; astfel din D-fructoz iau natere Dsorbitolul i D-manitolul. Proprieti fizico-chimice Hexitolii sunt compui cristalizai, solubili n ap i au gust dulce. Nu reduc soluia Fehling deosebindu-se astfel de hexoze. Cei optic activi nu rotesc dect foarte puin planul luminii polarizate, dar rotaia crete mult prin adugare de acid boric. Prin formarea complexului de acid boric, crete i aciditatea, hexitolul putnd fi astfel tratat cu fenolftalein ca indicator. Prin nclzire, singuri sau cu urme de acizi minerali, hexitolii pierd una sau dou molecule de ap, dnd mono- sau dianhidro-derivai (eteri interni) ciclici. Cu formaldehida, benzaldehida i acetona, hexitolii formeaz acetoli ciclici, asemntori celor cunoscui n clasa monozaharidelor. Hexitolii se esterific uor cu acizii anorganici i organici. Doi hexitoli au importan mai mare: D-manitolul i D-sorbitolul.

D- Manitol Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 I.1.3.3. Oligozaharide

D- Sorbitol

Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i

Oligozaharidele sunt compui rezultai la condensarea a 2-6 monozaharide cu eliminare de ap, a cror formul molecular poate fi scris astfel: nC6H12O6-(n-1) H2O Cele mai importante oligozaharide sunt dizaharidele, rezultate din unirea a dou molecule de hexoz, prin eliminarea unei molecule de ap. Structur molecular

Dizaharidele hidrolizeaz uor la nclzire cu acid clorhidric sau enzimatic, cu formarea a dou monozaharide identice sau diferite. Hidroliza uoar a dizaharidelor demonstreaz c ntre cele dou resturi de monozaharide nu exist o legtur C-C, ci o legtur C-O-C. S-a dovedit experimental c legtura eteric provine de la cel puin o grup hidroxil glicozidic. Toate dizaharidele sunt deci glicozide, unul din resturi putnd fi considerat ca aglicon.

Dac legtura ntre cele dou resturi de zaharuri se face prin atomul de oxigen al grupei hidroxil glicozidic de la un rest de monozaharid i atomul de carbon anomeric de la cellalt rest de monozaharid, atunci dizaharidul, neavnd o grup hidroxil glicozidic liber (care s treac n grupa carbonil), nu este reductor. Invers, dac aceeai legtur nu se face prin unul din atomii de carbon anomerici, este reductor. Dizaharidele reductoare pot forma glicozizi. Dizaharidele nereductoare nu reduc soluia Fehling, nu prezint mutarotaie i nu formeaz glicozizi i osazone. La denumirea dizaharidelor se ine seama de felul resturilor de monozaharide, de forma (furanozic sau piranozic) n care se gsesc, de poziia grupelor hidroxil glicozidice ( sau ), natura grupelor hidroxil, care particip la formarea legturii eterice ntre cele dou monozaharide. Primul element care se precizeaz n stabilirea denumirii dizaharidelor este atomul de carbon din aglicon, care particip la legtura dintre monozaharide (la maltoz 4); urmeaz stabilirea poziiei sau a grupei hidroxil glicozidice, care particip la eliminarea apei ntre moleculele de monozaharide i felul ciclurilor monozaharidelor. Avnd n vedere acestea, lactoza este denumit 4--D-galactopiranozil-D-

glucopiranoza, iar zaharoza, 2`--D-glucopiranozil--D-fructofuranoz (sau 1--Dfructofuranozil-D-glucopiranoz). Grupa hidroxil glicozidic liber putnd fi plasat axial sau ecuatorial, determin existena a dou forme anomere i ntre care se produce mutarotaia. Dintre dizaharidele reductoare cele mai importante sunt: maltoza, celobioza, gentabioza i lactoza.

4--D-galactopiranozil-D-glucopiranoza ( Lactoza) Dintre dizaharidele nereductoare, cea mai mare importan o are zaharoza.

2`--D-glucopiranozil--D-fructofuranoz ( Zaharoza) Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 I.2. CARACTERIZAREA COMPUILOR STUDIAI I.2.1. Monozaharide I.2.1.1. Arabinoza Denumire, structur: Arabinoza *** The Merck Index, Ninth Edition, Merck & Co. Inc., Rahway, NJ., USA, 1976

C5H10O5
Arabinoza este -D-arabinofuranoz. Formele aciclice ale arabinozei:

Mr= 150,13

D-(-)-Arabinoza

D-(+)-Arabinoza

Etimologie Denumirea de arabinoz provine de la guma arabic, de unde o fost izolat prima dat. Merriam Webster Dictionary Rspndire Arabinoza este o aldopentoz- o monozaharid avnd n componen 4 atomi de carbon, incluznd i o grup funcional: o aldehid (CHO). Din motive de biosintez, cele mai multe zaharide sunt aproape ntotdeauna mult mai abundente n natur n forma " D ", sau structural asemntoare cu D-gliceraldehida. Cu toate acestea, L-arabinoza este, de fapt, mai frecvent dect D-arabinoza n natur i reprezint o component a biopolimerilor, cum ar fi hemiceluloza i pectina. Operonul L-arabinozei are un rol foarte important n biologia molecular i bioinginerie. Weast, Robert C., ed (1981). CRC Handbook of Chemistry and Physics (62nd ed.). Boca Raton, FL: CRC Press. p. C-110. L(+)-Arabinoza, este mult rspndit n vegetale, unde apare sub forma unei polizaharide numit araban, precum i ca o component a gumelor i mucilagiilor vegetale i a hemicelulozei. De asemenea a fost gsit n glicozide i n dizaharide (de exemplu n vicianoz, o dizaharid compus din D-glucoz i L-arabinoz). D(-)-Arabinoza nu se gsete dect rar, n natur, ca o component a unor glicozide. Se obine cel mai bine din D-glucoz prin degradare. Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209215, 244-250 Obinere L-arabinoza se obine prin hidroliz din guma de cire sau din sfecl, dup extragerea zahrului. Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250

Pentru sinteza organic a D-arabinozei din glucoz, s-a folosit o metod clasic numit degradarea Wohl. n chimia carbohidrailor, n cazul aldozelor, degradarea Wohl este o reacie n lan. Reacia este denumit astfel dup chimistul Alfred Wohl. Wohl, A. (1893), "Abbau des Traubenzuckers", Chem. Ber. 26 (1): 730744

n prima etap D-glucoza reacioneaz cu hidroxilamina, n prezena metoxidului de sodiu, i este convertit ntr-o oxim. n al doilea rnd, prin reacia dintre anhidrida acetic n acid acetic cu acetat de sodiu, se formeaz pentaacetilgliconitrilul. n aceast etap, oxima este convertit n nitril cu conversia simultan a tuturor grupelor -OH n grupe acetat. n continuare rezult arabinoza prin reacia cu metoxid de sodiu. Clarke H.T., Nagy S.M., Pentaacetyl d-gluconitrile, Organic Syntheses, 1940, 20 :74; 1955, Coll. Vol. 3: 690. Actuala metod dezvoltat de Zemplen i Kiss furnizez randamente mai bune dect cea a lui Wohl. n metoda lui Wohl grupul nitril este eliminat prin tratarea cu hidroxid de argint n prezena amoniacului, n schimb Zemplen folosete alcoxidul de sodiu pentru eliminarea nitrilului.

Wohl A.: Abbau des traubenzuckers, Berichte der deutschen chemischen Gesellscaft, EdituraWiley-VCH Verlag, Weinheim, 1893, 26:730-744

De asemenea D-arabinoza a fost obinut din acid D-gluconic n diverse moduri: prin oxidarea srii de calciu, prin intermediul peroxidului de hidrogen n prezena acetatului de fier; prin fierberea unei soluii apoase de sare mercuric; prin electroliz; prin aciunea hipocloritului de sodiu asupra unei amide. A fost obinut i prin reducerea electrolitic a lactonei acidului D-gluconic. Braun G.: D-Arabinose, Organic Syntheses, 1940, 20: 14; 1955, Coll. Vol. 3: 101.

Degradarea Ruff-Fenton (Otto Ruff 1898, O. Fenton 1893) Transformarea unei hexoze ntr-o pentoz se realizeaz prin oxidarea aldozei n acid aldonic (sare de calciu) urmat de oxidarea n continuare cu ap oxigenat n prezen de acetat de fier, care duce la decarboxilarea i formarea de aldopentoze.

Hassner A., Stumer C.: Organic Syntheses Based on Name Reactions, Tetrahedron Organic Chemistry Series, Volume 22, Second Edition, Elsevier Science Ltd., The Boulevard, Langford Lane Kidlington, Oxford OX5 1GB, UK, 2002, p. 315 Iovu M.: Chimie organic, Ediia a treia, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1993, 461-477 Ruff O.: d- und r- Arabinos, Berichte der deutschen chemischen Gesellscaft, EdituraWiley-VCH Verlag, Weinheim, 1899, 32:550-560 Descriere/ Proprieti Arabinoza se prezint sub form de pulbere alb, solubil n ap, greu solubil n alcool. Prezint mutarotaie: []D12 = +173[]D20 = +105,1. Are T. t.= 157-160C. *** The Merck Index, 14th Edition, Merck & Co. Inc., Rahway, NJ., USA, 2006 Utilizri n industria alimentar sau farmacie ca substan de cretere a vscozitii alimentelor; emulgator; stabilizator;

n producerea unor vopsele, acuarele, pigmente de culoare sau liant, litografie sau n amestec cu cret se folosete pentru lustruirea unor suprafee metalice; o utilizare mai veche a ei era la producerea hrtiei speciale impermeabile, ca adeziv pentru etichete, timbre potale, plicuri, colete potale; vechii egipteni o foloseau la mblsmarea mumiilor, sau n amestec cu ap i funingine la prepararea cernelii pentru scris; ca mediu de cultur pentru bacterii.

http://art-zone.ro/forum_/Arabinoza_(glucida)-1081-1.html I.2.1.2. Fructoza Denumirea oficinal, structura: Fructosum Fructoza este oficinal n Farmacopeea Romn ed. X, British Pharmacopoeia 2009, European Pharmacopoeia 7.0.

C6H12O6
Sinonim: levuloz Fructoza este D-(-)-fructopiranoz. Izomerii D- i L- ai fructozei:
2 2

Mr=180,2

D-Fructoza

L- Fructoza

2 2

- D- Fructofuranoza
2 2

D-Fructoza

- D- Fructofuranoza

Fig. Relaia dintre izomerii fructozei http://en.wikipedia.org/wiki/File:Fructose-isomers.jpg Rspndire Fructoza este cea mai dulce dintre zaharuri, fiind singura cetohexoz prezent n plantele superioare. Se deosebete de glucoz prin poziia gruprii carbonil de la C2. n stare liber se gsete alturi de glucoz i zaharoz n multe fructe dulci sub form piranozic. Cnd este legat ia forma furanozic. n soluii apoase se stabilete un echilibru ntre formele sau pe de o parte i ntre formele piranozic i furanozic pe de alt parte; predomin forma piranozic. Fructoza este prezent n fructe dulci i miere n form liber. Sub forma legat este componentul mai multor oligozaharide (zaharoz, gentianoz, stahidoz) i este monomerul polifructanilor (de exemplu inulina). Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Cel mai mare procent de fructoz l conin: siropul de porumb, nectarul de agave, mierea, melasa, siropul de arar i sucurile de fructe. Park K.Y., Yetley AE- Intakes and food sources of fructose in the United States, American Journal of Clinical Nutrition, 1993, 58 (5 Suppl): 737S-747S Obinere Fructoza se obine din zahr invertit (zaharoza hidrolizat) prin separare cromatografic. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Descriere Fructoza se prezint sub form de pulbere cristalin alb, fr miros, cu gust foarte dulce. Este foarte uor solubil n ap, solubil n alcool, insolubil n eter. Se topete la

aproximativ 106C (cu descompunere). Este optic activ, levogir, prezint fenomenul de mutarotaie: iniial []D20=-133, iar la echilibru -91 pn la 93,5. Conservarea se face n recipiente bine nchise. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37, *** British Pharmacopoeia, London, The Stationery Office, 2009, *** European Pharmacopoeia 7.0, Council of Europe Strasburg, 2011, *** Farmacopeea Romn, Ediia a X-a, Editura Medical, Bucureti, 1993, Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226, Eger K., Troschtz R., Roth H.J.- Arzneistoffanalyse: Reaktivitt, Stabilitt, Analitik, Deutscher Apotheker Verlag Stuttgart, 2006, 97-103 Bhme H., Hartke K., Deutsches Arzneibuch-Kommentar, Wissenschaftliche

Verlagsgesellschaft MBH Stuttgart Govi-Verlag GMBH, Frankfurt, 1981 Aciune i utilizare terapeutic Metabolismul fructozei Fructoza se gsete n alimente, fie ca o monozaharid (fructoz liber), sau ca o unitate a unei dizaharide (zaharoz). Fructoza poate fi metabolizat pe ci diferite, n funcie de localizare. Ea poate fi transformat n glucoz, glicogen sau n intermediari ai glicolizei. n esutul muscular i renal sub aciunea HK, cu consum de ATP, fructoza este fosforilat la F-6-P, care este izomerizat la G-6-P. Acesta poate lua calea glicolitic, glicogenogenezei sau s fie transformat n glucoz (n rinichi). O alt cale de metabolizare are loc n ficat, unde fructoza este metabolizat cel mai rapid, fiind convertit n glicogen sau trigliceride. Sub aciunea fructokinazei (neinfluenat de insulin) are loc fosforilarea cu formare de F-1-P, care este scindat de F-1-P aldolaz (aldolaza B), diferit de cea glicolitic, care acioneaz asupra F-1,6-diP. Se formeaz dou trioze, DOA-P i gliceraldehida. DOA-P poate fi izomerizat la GA-3-P, de la care prin inversarea glicolizei, se formeaz G-6-P, glucoz sau glicogen, sau urmeaz calea catabolic la Pir.

Glicogen

G- 1- P
mutaza

G- 6- P

G- 6- P-DH

6- Fosfogluconat

Fructoza
fructokinaza

F- 1- P
aldolaza

F- 1- 6- P2
aldolaza

GA

DHAP

GA- 3- P
3- P- izomeraza

triokinaza

Fig. Conversia metabolic a fructozei n glicogen, n ficat

Fructoza
fructokinaza

F- 1- P
aldolaza

GA
Glicerol-DH

DHAP izomeraza GA- 3- P

triokinaza

Glicerol
glicerol- kinaza

PEP G3P
piruvat- kinaza lactat- DH

Piruvat
piruvat- DH

Lactat

Acetil- CoA
lipogeneza de novo

G3P

Acizi grai

Trigliceride (VLDL- TG)

Fig. Conversia metabolic a fuctozei n trigliceride n ficat http://en.wikipedia.org/wiki/Fructose n veziculele seminale i n cristalin, fructoza se obine din glucoz sub aciunea conjugat a dou enzime: aldozreductaza (NADPH dependent) i sorbitol-DH (NAD+ dependent) pe calea poliolic astfel:

n lichidul seminal fructoza este folosit n scop energetic, de ctre spermatozoizi. Conversia glucozei n fructoz n cristalin este semnificativ, la concentraii mari de glucoz. n diabetul zaharat, activitatea aldozreductazei este crescut, ceea ce determin acumulare de sorbitol i depleie de NADPH, cofactor al glutation reductazei, implicat n aprarea antioxidant a organismului. Sorbitolul nu poate traversa membrana cristalinului, ceea ce contribuie la apariia retinopatiei i cataractei diabetice prin modificri osmotice i, probabil prin dereglarea capacitii antioxidante celulare. Sorbitolul considerat o toxin tisular, produce la diabetici neuropatie, nefropatie, perturbarea metabolismului fosfatidilinozitolilor i activitii Na+-K+-ATP-azei. Oan A.- Biochimie, Procese metabolice, University Press, Trgu Mure, 2004, 35-44, 82-86 Fructoza particip la metabolismul glucidic chiar n absena insulinei, scurt-circuitnd reacia de fosforilare catalizat de acest hormon. n acest fel contribuie la reechilibrarea metabolismului glucidic tulburat de factori hormonali sau toxici, protejeaz proteinele de catalizare i reface rezervele energetice. Cruceanu I., Mateescu I., Manolescu E.Produse farmaceutice folosite n practica medical, Editura Medical, 1982, 79-82, 144 Proprieti farmacotoxicologice Fenomenele secundare apar foarte rar, avnd ca substrat intolerana la fructoz, manifestate prin vrsturi, hipoglicemie, insuficen hepatic i renal. Intolerana la fructoz este de obicei mai grav la copii, de aceea se evit administrarea ei la aceast vrst. Cruceanu I., Mateescu I., Manolescu E.- Produse farmaceutice folosite n practica medical, Editura Medical, 1982, 79-82, 144 Indicaii i utilizri este indicat n diferite forme de denutriie, caexie, insuficen cardiac, hepatite acute sau cronice, leziuni hepatice toxice, com hepatic;

datorit metabolizrii rapide n ficat se folosete i n terapia intoxicaiilor hepatice, n intoxicaii cu etanol; este contraindicat n intoxicaii cu metanol pentru c accelereaz oxidarea metanolului la formaldehid;

avantaj: provoac o cretere nesemnificativ a glicemiei, putndu-se administra la diabetici; agent edulcorant, agent nutritiv n alimentaia parenteral sub form de soluii perfuzabile intravenoase 5%, 10%, 20% sau 40%, preparate cu ap bidistilat i substane apirogene, asociat uneori cu glucoz, etanol, electrolii;

agent umectant (farmacotehnic i cosmetic).

Missir A.: Chimie farmaceutic, Vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226 Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Cruceanu I., Mateescu I., Manolescu E.- Produse farmaceutice folosite n practica medical, Editura Medical, 1982, 79-82, 144 I.2.1.3. Galactoza Denumirea oficinal, structura: Galactosum Galactoza este oficinal n British Pharmacopoeia 2009, European Pharmacopoeia7.0.

C6H12O6
Galactoza este D-Galactopiranoz. Formele aciclice ale galactozei:

Mr=180,2

2 3

2 3

D-Galactoza

L- Galactoza

D-Galactoza prezint patru izomeri ciclici: doi sub form piranozic i alii doi sub form furanozic:
2 2

- D- Galactopiranoza

- D- Galactopiranoza

- D- Galactofuranoza

- D- Galactofuranoza

Galactofuranoza apare n bacterii, ciuperci i protozoare. Nassau et al.- Galactofuranose Biosynthesis in Escherichia coli K-12: Identification and Cloning of UDP-Galactopyranose Mutase, Journal of Bacteriology, 1996, 178:10471052 D-Galactoza cristalizat este forma piranozic; n soluie se stabilete un echilibru cu formele furanozice. n oligozaharide i polizaharide D-galactoza i pstreaz forma piranozic. Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Rspndire D(+)-Galactoza nu se gsete liber n natur, dect rar, dar este adesea ntlnit n dizaharide (lactoz), trizaharide (rafinoz), tetrazaharide (stahioz) i n polizaharide

(galactanii i galactoarabanii) din gume, de exemplu din guma arabic. De asemenea se gsete n glicozide (galactozide) i n fosfatidele din creier. Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226 Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 L(-)-Galactoza este unul din puinele zaharuri din seria L gsit n natur, ca polizaharid, n mucilagul din smna de in, n galactogenul din melc n agar-agar i n alte polizaharide izolate din alge marine. Prin hidroliza acestora se formeaz, n majoritatea cazurilor, i D-glucoz, care se ndeprteaz prin fermentare cu drojdie, find singura atacat de aceasta. Galactoza se gsete n produse lactate, sfecl de zahr, precum i n gume i mucilagii. De asemenea este sintetizat de ctre organism, intrnd n compoziia glicolipidelor i glicoproteinelor din diferite esuturi. Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Obinere D-Galactoza se obine, alturi de glucoz, prin hidroliza lactozei n prezena enzimelor lactaza i -galactozidaza. esutul glandei mamare transform in vitro Dglucoza n D-galactoz. Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Descriere Galactoza se prezint sub form de pulbere cristalin sau fin granuloas, alb sau aproape alb, cu gust slab dulce. Solubil n ap, mai solubil n ap fierbinte, solubil n piridin i greu solubil n etanol (96%). Poate fi anhidr cu T.t.=167C (etanol) sau monohidrat cu T.t.=118-120C (ap). Are activitate optic dextrogir i prezint fenomenul de mutarotaie: iniial []D20 =+150,7, iar la echilibru +80,2. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37, *** British Pharmacopoeia, London, The Stationery Office, 2009, *** European Pharmacopoeia 7.0, Council of Europe Strasburg, 2011, Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226, Eger K., Troschtz R., Roth H.J.- Arzneistoffanalyse: Reaktivitt, Stabilitt, Analitik, Deutscher Apotheker Verlag Stuttgart, 2006, 97-103

Bhme

H.,

Hartke

K.,

Deutsches

Arzneibuch-Kommentar,

Wissenschaftliche

Verlagsgesellschaft MBH Stuttgart Govi-Verlag GMBH, Frankfurt, 1981 Aciune i utilizare terapeutic Metabolismul galactozei Galactoza este componenta lactozei, glicolipidelor, glicoproteinelor, etc. Din acest motiv metabolismul ei urmrete obinerea acestor compui. Pe de alt parte Gal poate fi convertit n glucoz sau glicogen, n special n ficat i rinichi, astfel nct unele ci de metabolizare sunt comune cu ale glucozei. Biosinteza lactozei are loc n glanda mamara. Setul de enzime care realizeaz biosinteza lactozei are ca substrat glucoza. Din aceasta o parte ca anomer este transformat n G1-P n scopul formrii -UDP-Gal, ca donor direct de rest -galactozil. Activarea are loc cu UTP n prezena UDP-G-pirofosforilazei cu formare de -UDP-G. Aceasta sub aciunea unei epimeraze specifice, NAD+ dependent, se transform prin schimbarea configuraiei la C4, n -UDP-Gal.

Sistemul enzimatic al lactozosintetazei funcioneaz ca o galactozil-transferaz. O component a sistemului enzimatic denumit proteina A este prezent n glanda mamar, dar i n ficat i intestin. Ea folosete ca substrat N-acetilglucozamina n loc de glucoz, cu formare de N-acetillactozamina n loc de lactoz. Cealalt component a sistemului enzimatic proteina B este sintetizat numai n glanda mamar. Ea nu are activitate enzimatic proprie, dar n asociere cu proteina A induce n structura acesteia modificri care i schimb specificitatea, n sensul utilizrii glucozei ca substrat cu formare de lactoz. Oan A.: Biochimie, Procese metabolice, University Press, Trgu Mure, 2004, 35-44, 82-86 Glucoza reprezint combustibilul primar de metabolizare la oameni. Este mult mai stabil dect galactoza i mai puin sensibil de a forma glicoconjugai nespecifici,

molecule cu cel puin un zaharid ataat la o protein sau un lipid. Muli speculeaz c acesta este motivul pentru care o cale de transformare rapid de la galactoz la glucoz a fost conservat printre multe specii. Calea principal de metabolizare a galactozei este Calea Leloir, denumit astfel dup doctorul i biochimistul Luis Federico Leloir, care a primit n 1970 Premiul Nobil n chimie pentru descoperirea cii metabolice a lactozei. Calea Leloir const n dou etape, n care -D-galactoza este convertit n UDPglucoz. n etapa iniial are loc convertirea -D-galactozei n -D-galactoz, sub aciunea enzimei mutarotaz (GAL-M). Apoi -D-galactoza este transformat n UDPglucoz prin intermediul a trei enzime principale. Galactokinaza fosforileaz -Dgalactoza, rezultnd galactoza-1-fosfat (Gal-1-P). Apoi galactoza-1-fosfat uridiltransferaza (GALT) transfer o grupare UMP de la UDP-glucoz la Gal-1-P pentru a forma UDP-galactoza. n final UDP-galactoza-4`-epimeraza convertete UDPgalactoza la UDP-glucoz. Frey P.A.- The Leloir pathway: a mechanistic imperative for three enzimes to change the stereochemical configuration of a single carbon in galactose, FASEB Journal, 1996, 10 (4): 461-70

1)

galactomutarotaza

- D- Galactoza 2) galactokinaza
ATP ADP

- D- Galactoza

- D- Galactoza Gal- 1- P 3)

gal- 1- P- uridililtransferaza Gal- 1- P UDP- Glucoza

uracil

uracil UDP- Galactoza 4) UDP- glucozo4- epimeraza uracil UDP- Galactoza UDP- Glucoza uracil G- 1- P

Holden H.M., Rayment I., Toden J.B.- Structure and function of enzimes of the Leloir pathway for galactose metabolism, The Journal of Biological Chemistry, 2003, 278 (45):43885-8 Garret R.H., Grisham C.M.- Biochemistry, Fourth Edition, Brooks/Cole, Cengage Learning, 2010, Australia, Brazil, Japan, Korea, Mexico, Singapore, spain, UK, United States, 556 Bosch A.M.- Classical galactosaemia revised, Journal of Inherited Metabolic Disease, 2006, 29(4): 516-25 Conversia galactozei n glicogen sau glucoz are loc prin intermediul secvenelor de reacii sintetizate n figura de mai jos:

Oan A.: Biochimie, Procese metabolice, University Press, Trgu Mure, 2004, 35-44, 82-86 Indicaii i utilizri pentru testarea strii funcionale a ficatului; ca agent de contrast pentru ultrasunete sub form de microparticule suspendate ntr-o soluie de galactoz. Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202211, 213-220, 222-226 I.2.1.4. Glucoza Denumirea oficinal, structura: Glucosum, Glucose Glucoza este oficinal n Farmacopeea Romn ed. X, British Pharmacopoeia 2009, European Farmacopoeia 7.0.

C6H12O6
Glucoza este D-(+)-glucopiranoz. Sinonim: dextroz Rspndire

Mr 180,2

D(+)-Glucoza este cel mai important dintre zaharuri, n special pentru fiziologia vegetal i animal. n stare liber, D-glucoza se gsete n fructe, de exemplu n struguri i n flori alturi de D-fructoz i de zaharoz (mierea pe care albinele o culeg din nectarul florilor, este un amestec echimolecular de D-glucoz i D-fructoz). D-Glucoza se gsete, combinat cu ea nsi sau cu alte monozaharide, n dizaharidele: maltoz, lactoz, zaharoz, celobioz i n polizaharidele cele mai importante: amidonul i celuloza. D-glucoza mai apare n nenumrate glicozide.

n regnul animal D-glucoza joac un rol nsemnat. Ea se gsete n snge, n concentraie constant de 0,1 %. Scderea concentraiei sub aceast limit duce la tulburri grave. n boala numit diabet apare D-glucoza n concentraie marit n snge i n urin. Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Obinere La scar industrial glucoza se obine din amidon de porumb, cartofi i gru, prin hidroliza enzimatic cu alfa-amilaza sau amiloglicozidaza sau printr-un proces mixt (hidroliza acid parial urmat de hidroliza enzimatic). Hidrolizatul se purific, se concentreaz i se las s cristalizeze. n aceste condiii se obine monohidratul de glucoz (Dextrosum monohydricum). Glucoza anhidra (Dextrosum anhydricum) se obine prin uscarea glucozei hidratate ntr-un curent de aer cald sau prin recristalizare din etanol, metanol sau acid acetic. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Descriere Glucoza se prezint sub form de pulbere cristalin alb, fr miros, cu gust dulce, higroscopic. Solubil n 1 ml ap, n 200 ml alcool, greu solubil n eter, foarte greu solubil n aceton. Poate fi anhidr, cazul produsului oficinal cu T.t.=146C (etanol cald sau soluii concentrate apoase) sau monohidrat, cu T.t.=83C. Prin nclzire ncepe s se descompun la aproximativ 170C pentru ca peste 200C s se caramelizeze, degajnd compui de degradare combustibili. -Glucoza anhidr este optic activ, dextrogir, prezentnd fenomenul de mutarotaie; iniial []D20=+122,2 (monohidrat +102,0), iar la echilibru []D20=+52,5 pn la +53,3 (monohidrat +47,9). -Glucoza are T.t.=148-155C (ap+etanol, acid acetic diluat sau Py) i iniial []D20=+18,70, iar la echilibru +52,70. Sigrid E., Csed C.- Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37, *** British Pharmacopoeia, London, The Stationery Office, 2009, *** European Pharmacopoeia 7.0, Council of Europe Strasburg, 2011, *** Farmacopeea Romn, Ediia a X-a, Editura Medical, Bucureti, 1993, Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226, Eger K., Troschtz R., Roth H.J.- Arzneistoffanalyse: Reaktivitt, Stabilitt, Analitik, Deutscher Apotheker Verlag Stuttgart, 2006, 97-103

Bhme

H.,

Hartke

K.,

Deutsches

Arzneibuch-Kommentar,

Wissenschaftliche

Verlagsgesellschaft MBH Stuttgart Govi-Verlag GMBH, Frankfurt, 1981 Aciune i utilizare terapeutic Metabolismul glucozei Glucidele n general, dar n special glucoza care reprezint forma majoritar n organism, n afar de rolul energetic, care este indispensabil pentru esuturile glucodependente, particip la o serie de alte procese deosebit de importante pentru organism. Toate cile anabolice sau catabolice pornesc de la glucozo-6-P. Cile de metabolizare ale glucozei sunt: glicoliza, ciclul pentozofosfailor, gluconeogeneza, glicogenogeneza i glicogenoliza.

Fig. Ci de metabolizare ale glucidelor Oan A.- Biochimie, Procese metabolice, University Press, Trgu Mure, 2004, 35-44, 82-86 Indicaii substan energetic, deshidratant al esuturilor i diuretic; se utilizeaz n: alimentaia parenteral a bolnavilor grav denutrii; hipoglicemie; hepatit acut i cronic; insuficien cardiac, renal i hepatic; edem cerebral;

vrsturi; diaree rebel cu acidoz; hemoragii; uremie; arsuri; oc traumatic i operator; intoxicaii cu barbiturice, morfin, salicilai, mercur; toxicoze; boala Addison; cur de ngrare; se recomand 1-2 linguri de glucoz ntr-un pahar de ap ca energizant n perioada de convalescen dup stri febrile ndelungate; soluia 20-40% administrat i.v. mrete presiunea coloid-osmotic a sngelui favoriznd trecerea apei din esuturi n snge i realiznd astfel o deshidratare tisular (n caz de edeme); cantitatea mare de glucoz ce se elimin prin rinichi antreneaz apa provocnd o diurez osmotic; soluia 5% se folosete n alimentaia parenteral dup intervenii chirurgicale; glucoza se utilizeaz ca edulcorant n preparate farmaceutice. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Cruceanu I., Mateescu I., Manolescu E.- Produse farmaceutice folosite n practica medical, Editura Medical, 1982, 79-82, 144 Contraindicaii Glucoza este contraindicat n deshidratri mari (soluii hipertonice), insuficen renal grav. Cruceanu I., Mateescu I., Manolescu E.- Produse farmaceutice folosite n practica medical, Editura Medical, 1982, 79-82, 144 Reacii adverse Injectarea rapid i n doze mari prezint la cardiaci pericolul apariiei edemului pulmonar. Cruceanu I., Mateescu I., Manolescu E.- Produse farmaceutice folosite n practica medical, Editura Medical, 1982, 79-82, 144 I.2.2. Compui nrudii cu monozaharidele- Hexitoli I.2.2.1. Manitol Denumirea oficinal, structura: Mannitolum, Mannitol Manitolul este oficinal n Farmacopeea Romn ed. X, British Pharmacopoeia 2009, European Farmacopoeia 7.0.

sau

C6H14O6
Rspndire

Mr 182,2

Conine cel puin 98,0% i cel mult 102,0 manitol (C6H14O6) raportat la substana uscat. Manitolul (D-manit) este la fel de dulce ca i sorbitolul. D-manitolul, izolat nti din man, o exudaie a arborelui Fraxinus ornus, este mult rspndit n natur, n special n familiile Oleaceae i Scrophulariaceae. Unele alge marine brune (Laminaria digitata), conin n timpul verii, pn la 37% din greutatea uscat, D-manitol. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250, 266-268 Obinere D-Manitolul se obine industrial, alturi de D-sorbitol, prin hidrogenarea catalitic sau electrolitic a D-glucozei, n prezen de alcalii (care produc o epimerizare a D-glucozei la D-fructoz). Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250, 266-268

Bhme

H.,

Hartke

K.,

Deutsches

Arzneibuch-Kommentar,

Wissenschaftliche

Verlagsgesellschaft MBH Stuttgart Govi-Verlag GMBH, Frankfurt, 1981 Sinteza biologic Manitolul este una din moleculele cele mai abundente de stocare a energiei i a carbonului n natur, fiind produs de o multitudine de organisme, inclusiv bacterii, drojdii, ciuperci, alge, licheni i multe plante. Fermentarea microorganismelor reprezint o posibil alternativ de sintez industrial, dnd randamente mult mai mari. ntr-un tip de alge roii (Caloglossa lepreurii) a fost descoperit o cale metabolic de obinere a manitolului pornind de la fructoz, cunoscut sub numele de ciclul manitolului n fungi. O clas de bacterii, coninnd acid lactic, etichetate heterofermentative, datorit cilor de fermentare multiple, produc conversia a trei sau dou molecule de fructoz i a uneia de glucoz n dou molecule de manitol i cte o molecul de acid lactic, acid acetic i dioxid de carbon. Siropurile, care conin concentraii medii sau mari de fructoz (de exemplu sucul de mere de cajou conine 55% fructoz i 45% glucoz) pot produce 200g manitol/1 litru de materii prime. Cercetrile suplimentare au condus la studiul obinerii unor ci de metabolizare ale manitolului mai eficente, din bacteria acidului lactic i la studiul folosirii altor microorganisme, cum ar fi drojdia de bere i E. Coli. Dei aceast metod este promitoare sunt necesare msuri pentru a ajunge la cantitile industriale. Song S.H., Vieille C.- Recent advances in the biological production of mannitol, Appl. Microbiol. Biotechnol., 2009, 84, 55-62. Ghoreishi S.M., Shahrestani R.G.- Innovative strategies for engineering mannitol production, Trends Food Sci. Technol., 2009, 20, 263-270. Extracia din produsul natural Manitolul se gsete ntr-o mare varietate de produse naturale, incluznd aproape toate plantele. Acest lucru permite mai degrab extracia din produsele naturale dect sintezele chimice sau biologice. De fapt n China izolarea din alge marine este cea mai comun metod de producie a manitolului. Lawson P.- In In Mannitol, Blackwell Publishing Ltd, 2007, 219-225. Concentraiile n manitol din exudatele plantelor pot varia de la 20% n drojdia de bere la 90% n copacii din genul Plantanus. Tradiional, manitolul se obine prin extracia Soxhet, utiliznd etanol, ap i vapori de metanol, urmnd hidroliza materialului brut. Apoi metanolul este recristalizat din extract, rezultnd randamente de aproximativ 18% din produsul natural original. Se poate aplica o alt metod de extracie prin utilizarea

fluidelor supercritice i subcritice. Fluidul super- sau subcritic este pompat prin intermediul produsului natural, cea mai mare parte a manitolului putndu-se separa uor de solvent. Extracia cu CO2 supercritic din frunzele de msline a demonstrat necesitatea de mai puin solvent per grame de frunze dect la o extracie tradiional (141,7 g CO2 fa de 194,4 g etanol la 1 g de frunze de msline). Folosirea apei subcritice, nclzite i sub presiune este mai ieftin i s-a dovedit a avea rezultate mult mai mari dect n cazul extraciei tradiionale. Este nevoie doar de 4,01 g de ap/1 g frunze de msline, dnd un randament de 76,75% manitol. Ambele extracii super- i subcritic sunt ieftine, rapide, confer puritate i sunt mai ecologice dect extraciile tradiionale. Cu toate acestea, temperaturile ridicate necesare pentru funcionare i presiunile sunt motive de ezitare n utilizarea industrial a acestei tehnici. Ghoreishi S.M., Shahrestani R.G.- Innovative strategies for engineering mannitol production, Trends Food Sci. Technol., 2009, 20, 263-270. Descriere/ Proprieti Manitolul se prezint sub form de pulbere cristalin alb, fr miros, cu gust dulce. Este uor solubil n ap, puin solubil n alcool, practic insolubil n eter. Se dizolv n soluii alcaline. Are T.t.=165-170C. Este o substan optic inactiv sau foarte puin levogir n soluie apoas (ap distilat), avnd []D20=-0,25. Se conserv n recipiente bine nchise. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37, *** British Pharmacopoeia, London, The Stationery Office, 2009, *** European Pharmacopoeia 7.0, Council of Europe Strasburg, 2011, *** Farmacopeea Romn, Ediia a X-a, Editura Medical, Bucureti, 1993, Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226, Bhme H., Hartke K., Deutsches Arzneibuch-Kommentar, Wissenschaftliche

Verlagsgesellschaft MBH Stuttgart Govi-Verlag GMBH, Frankfurt, 1981 Aciune i utilizare terapeutic Manitolul nu fermenteaz. n tractul gastro-intestinal nu este resorbit; administrat parenteral nu este metabolizat. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Indicaii i utilizri diuretic, laxativ uor;

Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 n osmoterapie pentru reducerea presiunii intracraniene, dup traumatisme craniene; n profilaxia anuriei la bolnavii cu oc, arsuri, transfuzie; *** Memomed, Memorator de medicamente, Ediia 17, Editura Universitar, Bucureti, 2011. este folosit pentru a trata pacienii cu insuficien renal oliguric; se administreaz i.v. i este filtrat de glomerulii rinichiului, dar nu poate fi resorbit din tubii renali, ducnd la scderea volumului de ap i a reabsorbiei ionilor de sodiu, datorit efectului su osmotic; deci manitolul crete excreia ionilor de sodiu, scznd astfel volumul lichidului extracelular; poate fi folosit ca agent de facilitare pentru transportul medicamentelor direct n creier (n tratamentul bolii Alzheimer, sau n chimioterapie pentru tumori cerebrale); Ikeda M., Bhattacharjee A.K., Kondoh T., Nagashima T., Tamaki N. -Synergistic Effect of Cold Mannitol and Na+/Ca2+ Exchange Blocker on Blood-Brain Barrier Opening, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 291, 669-674 Wang M., Etu J., Joshi S.- Enhanced disruption of the blood brain barrier by intracarotid mannitol injection during transient cerebral hypoperfusion in rabbits, J. Neurosurg. Anesthesiol., 2007, 19, 249-256 manitolul poate fi folosit n timpul bypass-ului cardiopulmonar, prezena manitolului asigurnd conservarea funciei renale; aceast soluie previne umflarea celulelor endoteliale din rinichi, care n caz contrar ar fi redus fluxul de snge din aceast zon ducnd la deteriorarea celulelor; manitolul a fost cercetat de o companie farmaceutica din Australia n vederea tratrii fibrozei chistice i broniectaziei i ca un test de diagnostic pentru hiperreactivitatea cailor respiratorii; manitolul este, de asemenea, primul medicament de alegere pentru tratamentul glaucomului acut n medicina veterinar; acesta este administrat sub form de soluie 20%; deshidrateaz umoarea vitroas, ducnd intraoculare; poate fi administrat n caz de intoxicaii severe cu ciguatera; ciguatoxina sau intoxicaia petelui tropical poate duce la accident vascular cerebral; Swift A, Swift T.- Ciguatera, J. Toxicol. Clin. Toxicol., 1993, 31 (1): 129 la scderea presiunii

Schep L.J., Slaughter R.J., Temple W.A., Beasley D.M.- Ciguatera poisoning: an increasing occurrence in New Zealand, N. Z. Med. J., 2010, 123 (1308): 1002 manitolul nu stimuleaz creterea glucozei n snge i prin urmare se utilizeaz ca ndulcitor la diabetici; cnd manitolul este dizolvat complet ntr-un produs are un puternic efect de rcire (n bomboane de ment i gume de mestecat). Kearsley M.W., Deis R.C.- Sorbitol and Mannitol. In Sweeteners and Sugar Alternatives in Food Technology; Ames: Oxford, 2006, 249-261 are higroscopicitate mic, putnd fi utilizat pentru acoperirea bomboanelor dure, fructelor uscate i gumelor de mestecat; intr adesea n compoziia bomboanelor i gumelor de mestecat; Lawson P.- In In Mannitol, Blackwell Publishing Ltd, 2007, 219-225. gustul plcut l face un excipient potrivit pentru comprimatele masticabile. Weiner M.L., Kotkoskie L.A.- Excipient Toxicity and Safety, Drugs and Pharmaceutical Sciences, vol. 103 Marcel Dekker Inc., USA, 2000, 7. Contraindicaii Manitolul mbuntete fluxul sangvin la nivelul rinichilor, dar cu toate acestea este contraindicat n anuria secundar bolilor renale, deshidratare sever, sngerare intracranian (excepie fcnd craniotomia), congestie pulmonar sever sau edem pulmonar. Dorland's Medical Dictionary SUNY Stony Brook Pathology Department HBP310 Inflammation I.2.2.2. Sorbitol Denumirea oficinal, structura: Sorbitolum, Sorbitol Sorbitolul este oficinal n Farmacopeea Romn ed. X, British Pharmacopoeia 2009, European Farmacopoeia 7.0.

C6H14O6
anhidr. Rspndire

Mr 182,2

Conine cel puin 98,0% i cel mult 101,0 sorbitol (C6H14O6) raportat la substana

D-sorbitolul apare n mai multe fructe n special din Familia Rosaceae, genul Sorbus (cel mai abundent n sorbul de munte, Sorbus acuparia). A fost izolat pentru prima dat din fructele de Sorbus aucuparia, (scoru de munte). Se gsete n concentraie relativ mare i n fructele de pducel (Crataegus species), mere (Malus pumila), prune (Prunus domestica), ciree (Cerasus avium). n urma descoperirii metodelor sintetice, izolarea sorbitolului din aceste surse naturale a devenit inutil. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Obinere Pe scar industrial se obine prin hidratarea catalitic a D-glucozei. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Descriere Sorbitolul se prezint sub form de pulbere microcristalin alb, fr miros, cu gust slab dulce, uor higroscopic. Este solubil n 0,5 ml ap, n 25 ml alcool, uor solubil n acid acetic, practic insolubil n cloroform i eter. Are punctul de topire: 95-98C. Puterea rotatorie specific este: []D2 = +4 pn la +7. Este optic activ, foarte slab levogir. Conservarea se face n recipiente bine nchise. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37, *** British Pharmacopoeia, London, The Stationery Office, 2009, *** European Pharmacopoeia 7.0, Council of Europe Strasburg, 2011, *** Farmacopeea Romn, Ediia a X-a, Editura Medical, Bucureti, 1993, Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226,

Bhme

H.,

Hartke

K.,

Deutsches

Arzneibuch-Kommentar,

Wissenschaftliche

Verlagsgesellschaft MBH Stuttgart Govi-Verlag GMBH, Frankfurt, 1981 Aciune i utilizare terapeutic Chiar i n lipsa sorbitolului dietetic, celulele produc sorbitol n mod natural. Aldoreductaza este prima enzim implicat n calea poliolului, fiind responsabil pentru reducerea glucozei la sorbitol i de asemenea pentru reducerea galactozei la galactitol. Nishikawa T., Edelstein D., Du XL. et al.- Normalizing mitochondrial superoxide production blocks three pathways of hyperglycaemic damage, Nature, 2000, 404 (6779): 787-790 Sorbitolul nu poate traversa membranele celulare, iar atunci cnd se acumuleaz produce stres osmotic n celule, determinnd trecerea apei n esuturile insulindependente. Jedziniak J.A., Chylack L.T., Chenq H.M., Gillis M.K., Kalustian A.A., Tunq W.H.- The sorbitol pathway in the human lens: aldose reductase and polyol dehidrogenase, Investigate ophthalmology & visual science, 1981, vol. 20, no. 3, 314326 Prea mult sorbitol acumulat n celulele retinei, n celulele Schwann, care mielinizeaz nervii periferici, poate duce la deteriorarea acestor celule, conducnd la retinopatie, cataract, respectiv neuropatie periferic. Inhibitorii de aldoreductaz sunt n curs de investigare ca o modalitate de a preveni sau de a ntrzia aceste complicaii, care apar frecvent n stabilirea pe termen lung a hiperglicemiei, care nsoete diabetul zaharat insuficient controlat. Se crede c aceste medicamente pot preveni acumularea de sorbitol intracelular, care duce la deteriorarea celulelor la diabetici.

http://findarticles.com/p/articles/mi_m0876/is_n67/ai_14676055/ Sorbitol: a hazard for diabetics? Nutrition Health Review, 1993 n 2007, Centrul pentru Controlul Bolilor a estimat c aproximativ 186,300 de persoane mai tinere de 20 de ani au avut diabet zaharat. De asemenea s-a estimat c ali 23.5 milioane de oameni de 20 ani sau mai mult a avea diabet. Diabetul poate duce la boli, orbire, si insuficien renal. http://www.cdc.gov/diabetes/pubs/pdf/ndfs_2007.pdf Indicaii i utilizri se folosete n alimentaia artificial, ca laxativ asociat cu hidrai de carbon; soluia 50% se administreaz i.v. n edeme (osmoterapie);

 se folosete ca edulcorant pentru diabetici, un substituent al zahrului cu valoare energetic asemntoare acestuia, prezentnd avantajul utilizrii i sub form de soluii etanolice diluate (concentraia maxim: 40%); asociat cu zaharina reduce gustul neplcut postconsum al acesteia; crete absorbia vitaminelor din preparatele farmaceutice; doze de 5-15 g/zi se folosesc n litiaza biliar, colecistite sau dispepsii digestive, avnd aciune colecistokinetic, lipotrop i laxativ; pe cale parenteral, sorbitolul se folosete sub form de soluii perfuzabile 5, 10 i 40% preparate cu substan apirogen, cu efect energetic n alimentaia artificial, diuretic, anticetogenic i de regenerare a esutului hepatic; n tehnica farmaceutic se utilizeaz ca substan adjuvant la prepararea comprimatelor sublinguale i comprimatelor de supt, n unguente poate nlocui glicerina; sub form de soluii apoase 70-85%, se folosete ca agent de ngroare i de suspendare, agent aglutinant i plastifiant sau ca agent de meninere a umiditii, fiind un bun nlocuitor al glicerolului; ca agent antispumant i agent stabilizant, acioneaz prin capacitatea de complexare a unor ioni metalici; este materia prim pentru obinerea acidului ascorbic, a tweenurilor, a polisorbailor, compui folosii ca ageni de solubilizare i ca emulgatori; n hiperkalemie s-a folosit combinat cu sulfonat polistirenul de sodiu, ajutnd la eliminarea ionilor de potasiu din organism; Rugolotto S., Gruber M., Solano P.D., Chini L., Gobbo S., Pecori S.- Necrotizing enterocolitis in a 850 gram infant receiving sorbitol-free sodium polystyrene sulfonate (Kayexalate): clinical and histopathologic findings, J Perinatol, 2007, 27 (4): 2479. n 2010 FDA a descurajat aceast combinaie, deoarece s-au semnalat cazuri de necroz intestinal a colonului, care poate fi fatal; http://www.fda.gov/Safety/MedWatch/SafetyInformation/ucm186845.htm Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226 Contraindicaii

Sorbitolul poate agrava sindromul de colon iritabil, ducnd la dureri abdominale severe pentru cei afectai, chiar de la cantiti mici ingerate. Reacii adverse Ingerarea unor cantiti mari de sorbitol poate duce la dureri abdominale, gaze, pn la diaree uoar sau sever. Ingestia a 20 grame de sorbitol pe zi ca gum fr zahr a condus la diaree sever cu pierderea n greutate a 11 kg, n opt luni, la o femeie, care a avut iniial 52 kg;. un alt pacient a necesitat spitalizare dup ce a consumat n mod obinuit 30 de grame de sorbitol pe zi. Kathleen D.- Sweetener Side Effects: Case Histories, Researchers Cite 2 Patients Who Suffered Severe Weight Loss From Heavy Use of Sorbitol, 2008

I.2.3. Dizaharide I.2.3.1. Lactoza Denumirea oficinal, structura: Saccharum lactis, Lactose Lactoza este oficinal n Farmacopeea Romn ed. X, British Pharmacopoeia 2009, European Farmacopoeia 7.0.

sau

C12H22O11 * H2O
Rspndire

Mr 360,3

Lactoza este O--D-galactopiranozil-(14)--D-glucopiranoz cu o molecul de ap. Lactoza este un dizaharid care se gsete mai ales n lapte i este format din galactoz i glucoz. n stare liber se gsete ntr-un procent mai mare, n laptele mamiferelor (laptele de vac conine 4,5-5,5% lactoz; laptele de mam conine cca 7% lactoz) i legat ca o component glicozidic n heterozidele vegetale (de exemplu n calendulozidele E i D, n gipsozid). Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Obinere

Lactoza a fost descoperit n lapte n 1619 de ctre Fabriccio Bartoletti, i a fost identificat ca un zahr n anul 1780 de ctre Carl Wilhelm Scheele. Linko P.- Lactose and Lactitol, Nutritive Sweeteners, in Birch, G.G. & Parker, K.J, London & New Jersey: Applied Science Publishers, 1982, 109132 Lactoza se obine industrial din zerul rmas dup obinerea sorturilor de brnzeturi. Prin nclzire precipit proteinele. Lichidul separat se concentreaz, iar lactoza cristalizeaz sub forma unui produs brut glbui. Purificarea se face prin recristalizri succesive. Dac se lucreaz la temperaturi sub 93,5C va cristaliza -lactoza monohidratat. Prin nclzirea soluiilor concentrate de lactoz la peste 93,5C i uscarea rapid a cristalizatului sub vid, se formeaz -lactoza anhidr. Aceasta este mai uor solubil n ap dect -lactoza, este mai dulce i se diger mai uor. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Descriere Lactoza se prezint sub fom de pulbere cristalin alb, fr miros, cu gust slab dulce. Este uor solubil n ap, practic insolubil n alcool, cloroform i eter. Este stabil la aer, dar poate absorbi uor diferite substane volatile, modificndu-i corespunztor mirosul. -Lactoza este optic activ, dextrogir, prezint fenomenul de mutarotaie: iniial are []D20= +92,6, iar la echilibru valoarea scade la +52,3 (10% m/v n H 2O cu 1 ml NH3 100g/L raportat la substana uscat; fr adaus de NH3 echilibrul este atins n 22 de ore). -Lactoza are T.t.=202,8C. -Lactoza este anhidr, dextrogir, avnd iniial []D20= +34, iar la echilibru +52,3 i T.t=252C. Rotaia specific mic a anomerului , reprezint o indicaie pentru o legtur -glicozidic. Conservarea se face n recipiente bine nchise Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37, *** British Pharmacopoeia, London, The Stationery Office, 2009, *** European Pharmacopoeia 7.0, Council of Europe Strasburg, 2011, *** Farmacopeea Romn, Ediia a X-a, Editura Medical, Bucureti, 1993, Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226, Eger K., Troschtz R., Roth H.J.- Arzneistoffanalyse: Reaktivitt, Stabilitt, Analitik, Deutscher Apotheker Verlag Stuttgart, 2006, 97-103 Bhme H., Hartke K., Deutsches Arzneibuch-Kommentar, Wissenschaftliche

Verlagsgesellschaft MBH Stuttgart Govi-Verlag GMBH, Frankfurt, 1981

Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Aciune i utilizare terapeutic n procesul resorbiei i metabolizrii lactoza se comport analog cu zaharoza. La nivelul peretelui intestinului subire este hidrolizat de ctre lactaza, o -galactozidaz. n cazul administrrii unei cantiti mai mari de lactoz, o parte este resorbit ca atare, dar nu poate fi metabolizat i practic se elimin cantitativ prin urin. Hidroliza acid sau enzimatic duce la formarea unui amestec de glucoz i galactoz, un produs de dou ori mai dulce dect lactoza. Epimerizarea cu alcalii duce la formarea lactulozei, produs mai dulce dect lactoza. Lactuloza nu poate fi catabolizat n intestin pentru c lipsete enzima specific. Ea ajunge nemodificat n partea inferioar a intestinului subire i n colon unde si exercit aciunea laxativ (prin osmoz). Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Indicaii este esenial n alimentaia sugarului; n primele luni de via este singurul hidrat de carbon din hrana sugarului; este important n meninerea normal a florei intestinale; are rol important n echilibrul calciului probabil prin formarea de compleci de calciu neionizai, uor solubili; -Lactoza este utilizat n alimentaia copilului, iar -lactoza ca substan adjuvant la tabletare, realizarea de pulberi titrate, diluarea substanelor n homeopatie; Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 uneori lactoza poate intra n compoziia berii robust, avnd efect de ndulcire i nu este fermentabil. Linko P.- Lactose and Lactitol, Nutritive Sweeteners, in Birch, G.G. & Parker, K.J, London & New Jersey: Applied Science Publishers, 1982, 109132 se utilizeaz ca excipient diluant pentru pulberi titrate cu substane foarte active sau cu extracte sau produse vegetale standardizate i pentru pulberi divizate, care conin substane active n cantiti foarte mici; este excipient aglutinant n obinerea granulatelor brichetate i fiind total solubil n ap, excipient diluant pentru comprimate, din care se obin soluii injectabile,

pentru comprimate cu dizolvare rapid i total sau cu sruri de alcaloizi, pentru implante de comprimate homeopatice i comprimate efervescente; (dezavantaj: folosit n cantitate prea mare, determin ntrirea n timp i ca urmare dezagregarea grea a comprimatelor; excipient pilular (pilule cu ihtiol); n cantiti mari, 20-100 g, se folosete ca diuretic i laxativ osmotic, iar n asocire cu oxidul de magneziu la obinerea pulberilor laxative; este un foarte bun agent adsorbant cromatografic i un component frecvent al mediilor de cultur, folosite n microbiologie i pentru biosinteze. Missir A.Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226, Contraindicaii este contraindicat la persoanele cu intoleran la lactoz. Carroccio A., Montalto G., Cavera G., Notarbatolo A.Lactose intolerance and self-reported milk

intolerance: relatioship with lactose maldigestion and nutient intake. Lactase Deficiency Study Group, J Am. Coll. Nutr., 1998, 17 (6): 6316. Reacii adverse persoanele cu deficit de lactaz nu au capacitatea de a digera i metaboliza lactoza, acest lucru ducnd la simptome ca: dureri abdominale, balonare, flatulen, diaree, grea i reflux de acid n esofag. Holzel A., Schwarz V., Sutcliffe K.W.Defective lactose absorption causing malnutrition in infancy, Lancet, 1959, 1 (7083): 11268. McGee H.- Milk after infancy: dealing with lactose, On food and cooking: the science and lore of the kitchen, Scribner, New York, 2004, 1415. I.2.3.2. Zaharoza Denumirea oficinal, structura: Saccharum, Sucrose Zaharoza este oficinal n Farmacopeea Romn ed. X, British Pharmacopoeia 2009, European Farmacopoeia 7.0.

sau

C12H22O11
Zaharoza este -D-fructofuranozil--D-glucopiranozid. Sinonime: zahr, sucroz. Rspndire

Mr 342,3

Zaharoza (zahr, sucroza) este foarte rspndit n natur. n general, hidraii de carbon se acumuleaz sub form de amidon; puine specii de plante acumuleaz cantiti suficient de mari de zahr pentru ca extracia s fie rentabil. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Obinere Materiile prime cele mai importante pentru obinerea zaharozei sunt Saccharum officinalis (trestia de zahr) i Beta vulgaris L. Var. Altissima (sfecla de zahr) Din punct de vedere tehnoogic este important ca zaharoza s nu fie nsoit de alte oze ca glucoza sau fructoza. Acestea ngreuneaz cristalizarea zaharozei i fac extracia nerentabil. Sfecla de zahr, recoltat n primul an de dezvoltare, constituie materia prim pentru obinerea zaharozei. Dup recoltare sfecla se spal i se extrag tieii prin mrunire, fie proaspei (procedeul rapid), fie uscai (procedeul Oxford), cu ap inclzit la 75-80, n difuzoare dup principiul curentului contrar. Zahrul din celule difuzeaz n ap pn ce tieii nu mai conin dect 0,2-0,4% zahr. Tieii epuizai servesc, dup , ca furaj. Soluia brut obinut, tulbure i de culoare brun, cu 12-15% zahr, se trateaz cu var, pentru a precipita acizii fosforic, oxalic i citric, precum i proteinele, apoi se satureaz cu dioxid de carbon la cald, pentru a precipita calciul n exces. Dup filtrare se repet saturarea i se trateaz cu dioxid de sulf pentru decolorare. Soluia clar obinut se concentreaz n vid, operaie n urma creia o parte de zahr cristalizeaz i este centrifugat. Lichidul mum rmas, numit sirop verde, se evapor din nou i d o a doua cristalizare de zahr mai puin pur. Cel de-al doilea lichid mum din acre nu se mai pot obine cristale, numit melas, mai conine nc 46-

50% zahr alturi de betain, aminoacizi i acizi organici. Melasa servete ca hrn pentru animale i la fabricarea alcoolului. Pentru recuperarea marilor cantiti de zahr din melas, procedeul cel mai eficace este bazat pe utilizarea unor schimbtori de ioni. Zahrul brut se rafineaz prin dizolvare n ap, decolorare cu crbune activ, filtrare, evaporare, cristalizare i centrifugare. Fabricarea zahrului din trestia de zahr, mult mai rentabil, nu folosete difuziunea ci presarea prin care se obine un suc bogat n zaharoz. n trestia de zahr zaharoza se acumuleaz n internodii, dar numai dup terminarea creterii n lungime. Vrfurile se arunc pentru c conin cantiti mari de glucoz care ngreuneaz extracia zahrului. Imediat dup recoltare trestia se mrunete i se preseaz. Sucul rezultat are pH acid. Se trateaz cu ap de var pentru purificare, apoi se concentreaz i se las s cristalizeze. Cristalizatul se separ prin centrifugare i se supune rafinarii. Dei zaharoza se obine din surse naturale, s-a ncercat o sintez chimica prima dat n 1953 de catre Raymond Lemieux. Lemieux R.U., Huber G.- A chemical synthesis of sucrose, J. Am. Chem. Soc., 1953, 75 (16): 4118. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Descriere Zaharoza se prezint sub form de cristale incolore sau pulbere cristalin alb, fr miros, cu gust dulce. Se topete la aproximativ 160C, iar la temperatur mai ridicat se caramelizeaz, rspndind un miros caracteristic. Este foarte uor solubil n ap, greu solubil n alcool i glicerol i practic insolubil n cloroform i eter. Este stabil la aer, dar higroscopic n stare de pulbere, adsorbind pn la 1% ap pe care o pierde la nclzire la 90C. Zaharoza este dextrogir, iar amestecul de glucoz i fructoz rezultat prin hidroliz este levogir, pentru c fructoza este mai puternic levogir dect este glucoza dextrogir. n soluie apoas zaharoza are puterea rotatorie specific: []D20= +66,5. Zaharoza nu are aciune reductoare i nu formeaz osazon, deoarece monozaharidele constituente nu au grupe carbonil libere; nu prezint fenomenul de mutarotaie. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37, *** British Pharmacopoeia, London, The Stationery Office, 2009, *** European Pharmacopoeia 7.0, Council of Europe Strasburg, 2011,

*** Farmacopeea Romn, Ediia a X-a, Editura Medical, Bucureti, 1993, Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226, Eger K., Troschtz R., Roth H.J.- Arzneistoffanalyse: Reaktivitt, Stabilitt, Analitik, Deutscher Apotheker Verlag Stuttgart, 2006, 97-103 Bhme H., Hartke K., Deutsches Arzneibuch-Kommentar, Wissenschaftliche

Verlagsgesellschaft MBH Stuttgart Govi-Verlag GMBH, Frankfurt, 1981 *** Japanese Pharmacopoeia, Fifteenth Edition, 2006 Neniescu C.D.: Chimie organic, vol. II, Ediia a VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1973, 209-215, 244-250 Aciune i utilizare terapeutic Prin hidroliza zaharozei rezult zahr invertit, un amestec de D-glucoz i D-fructoz. n intestin, dup hidroliz (n prezena -glucozidazei) este uor resorbit. Glucoza i fructoza sunt rapid absorbite n fluxul sangvin din intestinul subire. Zaharoz nedigerat trece n intestin i este, de asemenea, descompus de hidrolazele: zaharaz sau izomaltaz, care sunt localizate n microvilii din membrana duodenului. Produii rezultai sunt transferai rapid n fluxul sanguin. La unele animale i bacterii zaharoza este digerata enzima invertaza. Ten S., Maclaren N.- Insulin resistance syndrome in children, J. Clin. Endocrinol. Metab., 2004, 89 (6): 252639. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Indicaii cel mai utilizat agent edulcorant, fiind considerat etalon pentru aprecierea puterii de ndulcire a celorlalte substane edulcorante; aliment de larg consum; n tehnologia farmaceutic este excipient diluant pentru pulberi i comprimate perilinguale i agent conspergant; sub form de sirop 50-67% este un bun excipient aglutinant pentru granulate brichetate i tablete; excipient pilular, agent de ngroare sau de suspendare (substituent al glicerolului), umectant i corector de gust; se foloseste la prepararea tabletelor de supt alturi de Gummi arabicum, Tragacantha;

 siropul concentrat de zaharoz (65-67%) inhib dezvoltarea multor bacterii i fungi, fiind un bun agent conservant; soluiile mai diluate pierd aceast calitate i sunt fermentescibile; constituie materia prim pentru obinerea prin fermentaie a etanolului, nbutanolului, glicerolului, acidului citric i a acidului levulinic; n stri hipoglicemice; soluiile hipertone se administreaz n edem cerebral; soluiile injectabile de zahr invertit 20%, 33% i 40% se administreaz parenteral lent i au aciune similar soluiilor corespunztoare de glucoz; au avantajul c pot fi folosite i de diabetici, fructoza coninut reducnd hiperglicemia i glicozuria; soluiile injectabile sunt indicate n alimentaia artificial, insuficen hepatic, oc traumatic sau operatoriu. Sigrid E., Csed C.: Curs de farmacognozie, Vol.I, Trgu Mure, 1999, 25-30,33-37 Missir A.- Chimie Farmaceutic, vol. II, Substane auxiliare, Editura Tehnoplast Company SRL, Bucureti, 2004, 100-102, 202-211, 213-220, 222-226, Contraindicaii Exista grupe de risc, la care consumul de zahar si dulciuri contribuie la aparitia sau agravarea unor boli: persoanele care au antecedente de diabet n familie; cei care se confrunt cu un stres accentuat; persoanele care sufer deja de una din urmtoarele boli (diabet, alergie, infecii recidivante, osteoporoza, hipocalcemie, cardiopatii, tulburari hormonale); copiii aflai n pragul pubertii; persoanele cu gastrita hiperacid sau cei care sufer de colit de fermentaie; persoanele care se confrunt cu anumite probleme psihologice: lipsa de voin, stri de astenie, depresii, ar trebui sa renune la consumul de zahr, care s-a demonstrat c accentueaz aceste problem. Reacii adverse Principalele efecte nocive ale consumului de zahr rafinat: diabetul, caria dentar, obezitatea, osteoporoza i probleme legate de asimilarea calciului, scderea imunitii, cancerul n special cel de colon. Alte boli cauzate de consumul mare de zahr sunt: alergiile, scleroza, cardiopatiile, gastrita, colita de fermentaie, tulburrile de ciclu

menstrual la femei, reumatismul, anemia, astenia, sinuzita, rinita. La copii consumul frecvent de dulciuri influeneaza procesele de cretere, duce la apariia rahitismului si a fragilitii osoase, declaneaz pubertatea prematur, genereaz probleme de comportament (scaderea voinei, predispune la violen, scade capacitatea de concentrare etc.). Baschetti R.- Evolutionary legacy: form of ingestion, not quantity, is the key factor in producing the effects of sugar on human health, Medical hypotheses, 2004, 63 (6): 9338. I.2. PRODUSE FARMACEUTICE Produsele farmaceutice comercializate n prezent n Romnia sunt trecute n tabelul nr. I: Tabelul nr. I Produse farmaceutice care conin carbohidrai i compui nrudii

II. PARTEA SPECIAL

Acest capitol cuprinde: caracterizarea monografic a fiecrui compus studiat, analizele cromatografice cu metodele descrise n literatura de specialitate i experienele proprii realizate la cercetarea unor compui. Mi-am propus un studiu fizico-chimic asupra a patru compui din clasa monozaharidelor (arabinoz, galactoz, glucoz, fructoz), a doi compui din clasa dizaharidelor (lactoz i zaharoz) i doi compui din clasa hexitolilor (manitol i sorbitol). Dintre acetia, doar ase au monografii n FR X. Am avut drept scop identificarea i diferenierea compuilor folosind metode cromatografice descrise n literatura de specialitate. Am optat pentru cromatografia pe strat subire, fiind o metod rapid, cu exactitate suficient de mare i un pre de cost sczut.

II.1. CARACTERELE FIZICO-CHIMICE ALE COMPUILOR STUDIAI

n acest capitol figureaz o prezentare a structurii chimice, nomenclaturii, a principalelor proprieti fizice, precum i prezentarea tehnicilor de analiz monografic prevzute de Farmacopei n cazul compuilor studiai. Dintre aceti compui, arabinoza este singura care nu figureaz n Farmacopei. Structura i denumirea chimic a celor ase compui studiai sunt redate n tabelul nr. II

Tabelul nr. II Structura chimic i nomenclatura compuilor studiai

Clasa
M O N O Z A H A R I D E H E X I T O L I D I Z A H A R I D E

Denumire
Arabinoz (Arabinose)

Nomenclatur
-D- arabinofuranoz

Structur chimic

Fructoz (Fructosum) Galactoz (Galactosum) Glucoz (Glucosum)

D-(-)-fructopiranoz

D-galactopiranoz

D-(+)-glucopiranoz

Manitol (Mannitolum) D- manitol

Sorbitol (Sorbitolum) D- sorbitol

O--D-galactopiranozilLactoz (Saccharum lactis) (14)--Dglucopiranoz cu o molecul de ap

Zaharoz (Saccharum)

-D-fructofuranozil-D-glucopiranozid

II.1.1. Proprieti fizico-chimice Compuii studiai sunt oficinali n Farmacopei, cu excepia arabinozei. Principalele proprieti fizice ale acestor compui sunt cuprinse n tabelul nr. Tabelul nr. Proprietile fizico-chimice ale compuilor studiai Denumirea Aspect i culoare Arabinoza pulbere cristalin pulbere Fructoza cristalin, alb pulbere cristalin sau Galactoza fin granuloas, alb sau aproape alb uor solubil puin solubil insolubil solubil greu solubil insolubil insolubil 167 (anhidr); 118-120 (monohidrat) 146 Glucoza pulbere cristalin, alb greu solubil (anhidr); 83 (monohidrat) 252 Lactoza pulbere cristalin, alb uor solubil insolubil insolubil insolubil (anhidr); 202,8 (monohidrat) cristale Zaharoza incolore sau pulbere cristalin, alb Manitol pulbere cristalin, alb pulbere Sorbitol microcristalin, alb uor solubil uor solubil solubil insolubil insolubil 95-98 puin solubil practic insolubil insolubil 165-170 uor solubil greu solubil insolubil insolubil 160 uor solubil solubil insolubil insolubil 106 Ap solubil Solubilitate Alcool greu solubil Cloroform insolubil Eter insolubil Punct de topireC 157-160

II.1.2. Metode de analiz monografice Dintre metodele prevzute la monografiile din diferite Farmacopei se pot enumera tehnicile de identificare, de cercetare a puritii i de analiz cantitativ (dozarea) a fiecrei substane n parte.

II.1.2.1. Tehnici de identificare La monografiile fructozei, glucozei i lactozei, n Farmacopeile studiate (Ph. Eur. 7.0, B.P. 2009) se prevede identificarea substanelor prin cromatografie pe strat subire (CSS), folosind soluii de referin. Se folosete o soluie 0,05% de substan preparat n soluie de metanol 60%. Ca soluie de referin se folosete un amestec de fructoz, glucoz, lactoz i zaharoz. Adsorbant: silicagel G Developant: ap- metanol (R)- acid acetic anhidru (R)- clorur de etilen (R) (10:15:25:50 v/v). Volumul de aplicat: 2 l. Detectare: cu o soluie ce conine de 0,5 g timol (R) ntr-un amestec de 5 ml acid sulfuric (R) i 95 ml etanol (R); nclzire la 130C timp de 10 minute. Cerine: spotul obinut s fie similar cu cel al soluiei de referin. La monografia galactozei, n Farmacopeile studiate (Ph. Eur. 7.0, B.P. 2009) se prevede identificarea substanei prin spectrul de absorbie n domeniul IR i prin (CSS) folosind o soluie de referin. Pentru identificarea galactozei prin CSS: Se folosete o soluie 0,05% de galactoz preparat n soluie de metanol 60%. Ca soluie de referin se folosete o soluie de galactoz, glucoz i lactoz. Adsorbant: silicagel G. Developant: ap- propanol (R) (15:85 v/v). Volumul de aplicat: 2 l. Detectare: cu o soluie ce conine de 0,5 g timol (R) ntr-un amestec de 5 ml acid sulfuric (R) i 95 ml etanol (R); nclzire la 130C timp de 10 minute. Cerine: spotul obinut s fie similar cu cel al soluiei de referin. FR. X prevede identificarea lactozei i prin spectrul de absorbie n domeniul IR. La monografia zaharozei, Farmacopeile studiate (Ph. Eur. 7.0, B.P. 2009) prevd identificarea substanei prin CSS folosind o soluie de referin.

 Se folosete o soluie 0,05% de zaharoz preparat n soluie de metanol 60%. Ca soluie de referin se folosete um amestec de fructoz, glucoz, lactoz i zaharoz. Adsorbant: silicagel G. Developant: soluie saturat de acid boric 60%- soluie de acid acetic glacial (R)etanol (R)- aceton (R)- acetat de etil (R) (10:15:20:60:60 v/v). Volumul de aplicat: 2 l. Detectare: cu o soluie ce conine de 0,5 g timol (R) ntr-un amestec de 5 ml acid sulfuric (R) i 95 ml etanol (R); nclzire la 130C timp de 10 minute. Cerine: spotul obinut s fie similar cu cel al soluiei de referin. La monografiile manitolului i sorbitolului, n Farmacopeile studiate (Ph. Eur. 7.0, B.P. 2009) se prevede identificarea substanelor prin CSS folosind o soluie de referin i prin spectrul de absorbie n domeniul IR, doar n cazul manitolului. Pentru identificarea substanelor prin CSS: Se folosete o soluie 0,25% de substan. Ca soluie de referin se folosete o soluie de manitol i sorbitol. Adsorbant: silicagel G. Developant: ap- acetat de etil (R)- propanol (R) (10:20:70 v/v). Volumul de aplicat: 2 l. Detectare: cu o soluie de acid 4-aminobenzoic (R); uscare ntr-un curent de aer rece pn cnd acetona este ndeprtat; nclzire la 100C timp de 15 minute; stropire cu cel de-al doilea reactiv, soluie de periodat de sodiu 2g/L; uscare ntrun curent de aer rece i nclzire la 100C timp de 15 minute. Cerine: spotul obinut s fie similar cu cel al soluiei de referin.

II.1.2.2. Condiii de puritate La monografiile substanelor studiate se prevd urmtoarele impuriti specifice: n cazul fructozei FR. X, Ph. Eur. 7.0, B. P. 2009 prevd controlul zaharurilor strine, astfel: 0,5 g fructoz se dizolv n 1 ml ap i 9 ml alcool (R) soluia rmne limpede. n cazul galactozei Ph. Eur. 7.0, B. P. 2009 prevd: coninutul n ap s fie maxim 1% corespunznd la 1 g, iar n cazul contaminrii microbiene, numrul total de germeni aerobi nu trebuie s depeasc 102 microorganisme/g. n cazul glucozei FR. X prevede controlul urmtoarelor impuriti specifice:

 Amidon, dextrin: la 10 ml soluie A se adaug 0,05 ml iod 0,05 mol/l; nu trebuie s apar o coloraie rocat sau albastr. Dextrin: 1,0 g glucoz se dizolv n 1,7 ml ap, la care se adaug 3 ml alcool (R); soluia trebuie s rmn limpede. Zaharoz: la 0,5 glucoz se adaug 5 ml acid sulfuric (R) i se ine pe ghea timp de 15 min; amestecul trebuie s fie incolor. O eventual coloraie nu trebuie s fie mai intens dect coloraia unei soluii- etalon preparate din 0,30 ml cobalt- E.c., 1,20 ml fer- E.c. i ap la 5 ml. n cazul lactozei, FR. X prevede controlul urmtoarelor impuriti specifice: Dextrine, amidon, substane reductoare: la 10 ml soluie A se adaug 0,05 ml acid clorhidric (R), 0,05 ml iod 0,05 mol/l i se agit; coloraia trebuie s fie asemntoare cu aceea a unei soluii- martor preparate din 10 ml ap, 0,05 ml acid clorhidric (R) i 0,05 ml iod 0,05 mol/l. Substane proteice: la 10 ml soluie A se adaug 1 ml NaOH 300 g/l (R) i 0,05 ml sulfat de cupru (II) 50 g/l (R); nu trebuie s apar o coloraie violet. Zahr, fructoz: la 5 ml soluie A se adaug 0,1 g rezorcinol (R), 1 ml acid clorhidric 100 g/l (R) i se nclzete timp de 5 min.; nu trebuie s apar o coloraie roie; amestecul se poate colora n galben. Zaharuri solubile n alcool (glucoz, zaharoz) cel mult 0,5%: 2 g lactoz pulverizat se dizolv n 20 ml alcool 90, se agit timp de 15 min i se filtreaz. 10 ml filtrat se evapor pe baia de ap ntr-o capsul de sticl n prealabil cntrit i reziduul obinut se usuc la 105C pn la mas constant. n cazul zaharozei FR. X prevede controlul urmtoarelor impuriti specifice: Dextrine, amidon, sulfat de calciu, alte impuriti: la soluia obinut la Aspectul soluiei se adaug 20 ml alcool (R) i se agit; soluia trebuie s rmn limpede. Zahr invertit, alte substane reductore: la 5 ml soluie A se adaug 5 ml sulfat de cupru (II) i tartrat de potasiu i sodiu- soluie (R) i se nclzete pn la fierbere; nu trebuie s se formeze imediat un precipitat galben sau rocat. n cazul manitolului i sorbitolului, FR. X, Ph. Eur. 7.0, B. P. 2009 prevd controlul zaharurilor reductoare, astfel: 0,5 g manitol sau sorbitol se dizolv, prin nclzire la aproximativ 40C, n 25 ml ap. Soluia se rcete, se adaug 20 ml citrat de sodiu i sulfat de cupru (II)- soluie (R), se nclzete astfel nct soluia s fiarb n 4 min i se continu fierberea nc 3 min. Se rcete rapid i se adaug 100 ml acid acetic (R) 30 g/l i 20 ml iod 0,05 mol/l. Se adaug, sub agitare, 25 ml acid clorhidric 100g/l (R) i dup dizolvarea

precipitatului se titreaz excesul de iod 0,05 mol/l cu tiosulfat de sodiu 0,1 mol/l pn la coloraie albastr. Se adaug 2 ml amidon- soluie (I) i se continu titrarea, agitnd energic, pn cnd culoarea albastr devine verde. Trebuie s se foloseasc cel puin 12,8 ml tiosulfat de sodiu 0,1 mol/l. II.1.2.3. Analiza cantitativ (Dozarea) n cazul manitolului i sorbitolului FR. X prevede urmtoarea determinare cantitativ: 0,5 g manitol sau sorbitol se dizolv n 50 ml ap i se completeaz cu acelai solvent la 100 ml ntr-un balon cotat. La 10,0 ml din aceast soluie se adaug 20 ml metaperiodat de sodiu 0,1 mol/l, 2 ml acid sulfuric 100 g/l (R) i se nclzete pe baia de ap timp de 15 min. Se rcete, se adaug 3 g hidrogenocarbonat de sodiu (R), 50 ml arsenit de sodiu 0,05 mol/l i 1 g iodur de potasiu (R). Se las n repaus timp de 15 min, se adaug 2 ml amidon soluie (I) i se titreaz cu iod 0,05 mol/l pn la coloraie albastr. n paralel se efectueaz determinarea cu o probmartor. Diferena dintre numrul de mililitri de iod 0,05 mol/l folosii la cele dou titrri reprezint volumul de iod 0,05 mol/l consumat de manitol sau de sorbitol. 1ml iod 0,05 mol/l corespunde la 0,001822 g C6H14O6. PRIVIND IDENTIFICAREA I DIFERENIEREA

II.2.

CERCETRI

SUBSTANELOR STUDIATE UTILIZND METODE CROMATOGRAFICE Cromatografia este una din ramurile vaste ale analizei instrumentale, cu aplicaii largi n separarea, detecia i determinarea substanelor chimice n general i n analiza i controlul medicamentelor n particular. Tehnicile cromatografice de analiz sunt n primul rnd tehnici de separare dintre cele mai selective i mai eficiente, inclusiv pentru urmele de substane. Asociate cu metode de detecie, tehnicile cromatografice sunt capabile s sesizeze cantiti infime de substane, ceea ce le confer o mare sensibilitate, precum i capacitate sigur de dozare pn la nivele de ppb, ppt, n funcie de sensibilitatea detectorului. Boji M., Sndulescu R., Roman L. Oprean R.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-25, 174-188 Cromatografia a fost descoperit i definit pentru prima dat de botanistul rus Mikhail Tswett, care n 1906 a separat o serie de pigmeni vegetali cum sunt clorofillele i xantofilele, din extracte n eter de petrol, pe o coloan de carbonat de calciu fin pulverizat. Boji M., Sndulescu R. et al.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18, 174-188

Izmailov N. A. Shraiber S. M.- Spot Chromatographic Adsorbtion Analysis and its Application n Pharmacy Communication, Pharmatsiya, 1938, 3: 1-7 Berezkin V. G., Dzido T. H.- The Discovery of Thin- Layer Chromatography by N. A. Izmailov and M. S. Shraiber, Journal of Planar Chromatography Modern TLC, 2008, 21 (6): 399-402 n scopul identificrii i diferenierii substanelor cercetate, am optat pentru cromatografia pe strat subire (CSS), fiind o metod sensibil, cu posibilitatea automatizrii procesului cu un pre de cost sczut, ceea ce conduce la utilizarea ei pe scar larg n analiza cantitativ. Boji M., Muntean D. L.- Controlul medicamentelor. Metode spectrale, cromatografice i electroforetice de analiz, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj, 2004, 271-280 II.2.1. Metoda cromatografiei pe strat subire (CSS) II.2.1.1. Prezentare general Cromatografia pe strat subire (CSS) a fost utilizat pentru prima dat de N. A. Izmailov i M. Schreiber (1938) Berezkin V. G., Dzido T. H.- The Discovery of ThinLayer Chromatography by N. A. Izmailov and M. S. Shraiber, Journal of Planar Chromatography Modern TLC, 2008, 21 (6): 399-402 Geiss F.- Fundamentals of Thin Layer Chromatography (Planar Chromatography), Huething Verlag, Heidelberg, 1987, 171 , dar E. Stabil este considerat printele acestei metode. Mai nti a fost denumit cromatografie pe suprafa sau cromatografie pe coloan deschis, apoi E. Stabil o denumete Dnnsicht- Chromatographie- Cromatografie n strat subire, denumire sub care a fost consacrat. Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 C.S.S. este o metod care permite separarea componentelor unui amestec pe baza diferenei lor de deplasare de-a lungul unui strat adsorbant (care acoper o plac de sticl, metal sau polimer), sub aciunea unui sistem de solveni. Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 FR X Amestecul prob este distribuit ntre dou faze: una staionar i una mobil, care traverseaz patul cromatografic. Faza staionar poate fi un solid, un material poros, o suprafa activ sub forma unor particule mici sau un suport solid acoperit cu un film de lichid. Faza mobil este un gaz sau un lichid. Muntean D. L., Imre S.Analiza medicamentului, Ghid practic, University Press, Trgu Mure, 2007, 81-88

Boji M., Sndulescu R. et al.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18, 174-188 Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 Gyresi . , Kelemen H.- Lucrri practice de chimie farmaceutic (Culegere de tehnici cromatografice), UMF, Trgu Mure, 1996, 1-5 Boji M., Muntean D. L.- Controlul medicamentelor. Metode spectrale, cromatografice i electroforetice de analiz, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj, 2004, 271-280 Prima etap n C.S.S. o reprezint depunerea probelor i const n aplicarea unui volum din soluia prob sub forma unui spot cu diametru de 2-6 mm la o distan de 2 cm de partea inferioar a cromatoplcii. Pentru aplicarea soluiilor se pot folosi: capilare, micropipete sau seringi micrometrice; dispozitive de aplicare a probelor (micropipete cu autoumplere, ce au mai multe vrfuri calibrate pentru aplicarea unor volume de 2-100 l soluie aplicat); abloane din material plastic cu scar gradat pentru aplicarea probelor la distan egal, cu un numr de orificii cu diametru variabil, care permit estimarea suprafeei zonelor aplicatoare automate i semiautomate (sisteme robotizate de aplicare). Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 Migrarea (eluarea, developarea) se realizeaz prin antrenarea analiilor de ctre faza mobil. Boji M., Sndulescu R. et al.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18, 174-188 Placa cromatografic este introdus ntr-o cuv prevzut cu capac unde se afl o cantitate mic de faz mobil ce servete drept eluent. Atunci cnd frontul solventului a parcurs o distan considerat suficient, se scoate placa din cuv, se noteaz poziia limit atins de faza mobil i apoi se las s se evapore solventul. Boji M., Muntean D. L.- Controlul medicamentelor. Metode spectrale, cromatografice i electroforetice de analiz, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj, 2004, 271-280 Boji M., Sndulescu R. et al.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18,174-188 Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 Gyresi . , Kelemen H.- Lucrri practice de chimie farmaceutic (Culegere de tehnici cromatografice), UMF, Trgu Mure, 1996, 1-5

Uscarea cromatogramelor se poate face la temperatura camerei ntr-un curent de aer rece sau cald sau n etuv la temperaturi sub sau peste 100C n funcie de stabilitatea dizolvanilor i a substanelor analizate. Boji M., Sndulescu R. et al.Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18, 174-188 Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 Gyresi . , Kelemen H.- Lucrri practice de chimie farmaceutic (Culegere de tehnici cromatografice), UMF, Trgu Mure, 1996, 1-5 *** Encyclopedia of chromatography Third Edition, vol. I, CRC Press Taylor & Francis Group, 2010, 581-586 Dup migrare, detecia se poate face vizual sau instrumental. a. Detecia vizual a.1. Detecia chimic: direct pentru compui colorai; dup pulverizarea unui reactiv capabil s reacioneze cu moleculele separate pentru a da substane colorate sau fluorescente. a.2. Detecia fizic n lumin UV-VIS: la 254 nm pe o faz staionar impregnat cu un indicator de fluorecen la aceast lungime de und; la 366 nm pe o faz staionar fr indicator de fluorescen; moleculele natural fluorescente sau cele devenite fluorescente printr-o reacie chimic de derivatizare sunt detectabile prin fluorescen direct. a.3. Detecia biologic: se bazeaz pe inducerea unei reacii de tip antigen-anticorp. *** Encyclopedia of chromatography Third Edition, vol. I, CRC Press Taylor & Francis Group, 2010, 581-586 a.4. Detecia microbiologic Boji M., Muntean D. L.- Controlul medicamentelor. Metode spectrale, cromatografice i electroforetice de analiz, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj, 2004, 271-280 Boji M., Sndulescu R. et al.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18, 174-188 Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 Muntean D. L., Imre S.- Analiza medicamentului, Ghid practic, University Press, Trgu Mure, 2007, 81-88

b. Detecia instrumental permite identificarea i cuantificarea mai precis dect detecia vizual. Se utilizeaz: b.1. detectori densitometrici: fotodensitometre; b.2. detectori prin spectrometrie de mas dup trecerea n soluie a petelor; b.3. detectori captatori de radio-izotopi. Alegerea fazelor staionare n CSS se face n funcie de o serie de factori i parametri fizico-chimici: mrimea granulelor; suprafaa specific a acestora; volumul porilor; diametrul i repartiia granulometric a porilor. Muntean D. L., Imre S.- Analiza medicamentului, Ghid practic, University Press, Trgu Mure, 2007, 81-88 Boji M., Muntean D. L.- Controlul medicamentelor. Metode spectrale, cromatografice i electroforetice de analiz, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj, 2004, 271-280 Boji M., Sndulescu R. et al.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18, 174-188 Cele mai utilizate faze staionare sunt cele care au ca adsorbani: silicagel, alumin, pulbere de celuloz, kiselgur, hidroxid i silicat de magneziu, calciu, etc. Silicagelul se poate utiliza ca atare sau se pot grefa pe suprafaa particulelor sale grupri (grefoni): RP18, RP8, RP2 sau grupri CN, -NH2, C6H5- etc. Boji M., Sndulescu R. et al.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18, 174188 Fried B., Sherma J.- Thin- Layer Chromatography, Techniques and Applications, Third Edition, Revised and Expanded, Marcel Dekker Inc., New York, Basel, Hong Kong, 1994, 25-34, 87-90 Tabelul nr Adsorbani utilizai n C.S.S. Denumirea Silicagel H Silicagel G Silicagel GF Compoziia Silicagel fr liant Silicagel cu CaSO4 Silicagel cu CaSO4 Mecanismul de separare Adsorbie; repartiie Adsorbie; repartiie i Adsorbie; repartiie

indicator fluorescent Alumin bazic Alumin neutr Alumin acid Celuloz MN 300 PEI Celuloz MN 300 G Kiselgur G Poliamid Oxid de aluminiu fr liant Oxid de aluminiu fr liant Oxid de aluminiu fr liant Celuloz fr liant Celuloz fr liant Pmnt de infuzoriu cu liant Polimer sintetic Adsorbie i schimb ionic Adsorbie Adsorbie i schimb anionic Repartiie; schimb anionic Repartiie Repartiie; adsorbie Adsorbie

Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 Gyresi . , Kelemen H.- Lucrri practice de chimie farmaceutic (Culegere de tehnici cromatografice), UMF, Trgu Mure, 1996, 1-5 Developanii (faza mobil) sunt solveni organici sau anorganici de puritate avansat, cu capacitate de eluie diferit n funcie de faza staionar. Alegerea unui singur solvent sau amestec de solveni, innd cont de substana de analizat i faza staionar Fried B., Sherma J.- Thin- Layer Chromatography, Techniques and Applications, Third Edition, Revised and Expanded, Marcel Dekker Inc., New York, Basel, Hong Kong, 1994, 25-34, 87-90, este cheia eficienei procesului cromatografic. n tehnica cromatografic se folosesc numeroi solveni simpli sau (amestecuri monofazice de solveni, cu polariti diferite i compoziie foarte variabil) Muntean D. L., Imre S.- Analiza medicamentului, Ghid practic, University Press, Trgu Mure, 2007, 81-88. n seriile eluotropice solvenii sunt aezai n ordinea crescnd a puterii lor de eluie. Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 Fried B., Sherma J.- Thin- Layer Chromatography, Techniques and Applications, Third Edition, Revised and Expanded, Marcel Dekker Inc., New York, Basel, Hong Kong, 1994, 25-34, 87-90 Developanii trebuie s ndeplineasc anumite condiii: s realizeze valori Rf ale substanelor de separat ntre limitele 0,5-0,9, diferena ntre valorile Rf a doi componeni din proba de separat fiind cel puin 0,02-0,05; trebuie s separe complet toate substanele dintr-un amestec; s fie astfel ales nct izotermele de adsorbie (absorbie) ale substanelor de separat, pe adsorbantul (absorbantul) folosit s fie liniare; nu trebuie s produc transformri chimice ale substanelor de separat;

 nu trebuie s reacioneze cu reactivii de identificare sau s reduc sensibilitatea substanelor fa de acetia. Pelloni Tama V., Iohan F.- Cromatografia n strat subire, Editura Tehnic, Bucureti, 1971, 196-199 Fiecare compus este definit prin aa numita valoare Rf (retardation factor sau factor de retenie), care corespunde migrrii sale relative n raport cu solventul. Boji M., Muntean D. L.- Controlul medicamentelor. Metode spectrale, cromatografice i electroforetice de analiz, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj, 2004, 271-280 Valoarea Rf msoar viteza de deplasare a zonelor de substan fa de cea a frontului de developant. Rf-ul se definete ca fiind raportul ntre a i b.
a Rf = , b unde:

a= distana parcurs de substan de la punctul de aplicare al soluiei la centrul petei; b= distana parcurs de developant de la punctul de aplicare al soluiei (n cm) pn la frontul developantului, trecnd prin centrul petei (n cm). Moffat A. C., Franke J. P., Stead A. H. et al.- Thin Layer Chromatographic Rf values of Toxicologically Relevant Substances on Standardized Systems, VCH Verlagsgesellschaft, Weenheim, 1987, 1618 Factorul de retenie al aceluiai compus difer considerabil n funcie de faza staionar i temperatur. Boji M., Muntean D. L.- Controlul medicamentelor. Metode spectrale, cromatografice i electroforetice de analiz, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj, 2004, 271-280 Boji M., Sndulescu R. et al.- Analiza i controlul medicamentelor, Editura Intelcredo, Deva, 2003, 17-18, 174-188 Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 C.S.S. este oficializat n FR. X, avnd aplicabilitate n: determinarea identitii i puritii medicamentelor prin compararea R f- urilor cu a unui standard extern sau intern; separarea i identificarea componentelor dintr-un amestec complex; evaluarea proceselor i reaciilor chmice n industrie; evaluarea cantitativ i calitativ a medicamentelor i metaboliilor din mediile biologice.

Boji M., Muntean D. L.- Controlul medicamentelor. Metode spectrale, cromatografice i electroforetice de analiz, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj, 2004, 271-280 Dua S.- Chimie analitic instrumental, University Press, Trgu Mure, 2007, 189-195 II.2.1.1. Analiza glucidelor i a compuilor nrudii chimic prin metoda C.S.S. Am luat n considerare calitile metodei cromatografice pe strat subire, n special n separarea compuilor cu structuri nrudite, i am efectuat cercetri privitoare la alegerea tehnicilor cele mai optime n acest scop. n continuare voi prezenta experimentele prin care am evideniat identificarea i separarea substanelor studiate. Experimentul I Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, utiliznd metoda lui Kraus prevzut n DC- Atlas. Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de fructoz, glucoz, lactoz i zaharoz de concentraii 0,5% n soluie de metanol 70%. Volum aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plac pe suport de alumin cu ALUGRAM SIL G/UV254 cu dimensiunea 10X20 cm i grosimea 0,25 mm. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 1,5 cm. Dup fiecare aplicare, placa s-a uscat. Developant: acetonitril- ap (85:15 v/v). Distan de migrare: 15 cm. Detectare: pulverizare cu soluie de anilin (R); prepararea reactivului: 1 g anilin se adaug la 100 ml diclormetan i 2 g acid acetic glacial nclzire la 110C pete colorate n galben (ochrei); expunere la atmosfer de amoniac pete colorate n galben ochrei cu fluorecen roie n UV (= 254 nm). Cromatograma obinut este prezentat n fig, iar valorile Rf n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul nr Valorile Rf ale substanelor studiate

Denumire Lactoz Zaharoz Glucoz Fructoz

Valorile Rf 0,12 0,31 0,34

Fig. II.1. Cromatograma experimentului I (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. glucoz; 4. fructoz; 5. amestec) Se observ c sistemul de solveni aplicat permite separarea lactozei de monozaharide (glucoz i fructoz), iar distana de migrare a glucozei este apropiat de cea a fructozei. Reactivul de detectare nu permite identificarea zaharozei. Experimentul II Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, utiliznd sistemul de solveni prevzut n metoda lui Kraus din DC- Atlas, iar ca reactiv am folosit acid p-aminobenzoic descris de York et al. n Thin- Layer Chromatography, Reagents and Detection methods. Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de arabinoz, fructoz, galactoz, glucoz, lactoz i zaharoz de concentraii 0,5% n soluie de metanol 70%. Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plac pre-fabricat Kieselgur 60 F254 pentru C.S.S. clasic 20X20 cm, pe suport de sticl. plac pe suport de plastic, POLYGRAM SIL N-HR cu dimensiunea 10X20 cm i grosimea 0,2 mm.

Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: acetonitril- ap (85:15 v/v). Distana de migrare: 15 cm. Detectare: pulverizare cu acid p- aminobenzoic (R); prepararea reactivului: 1 g acid p- aminobenzoic se dizolv n 18 ml acid acetic glacial, apoi se adaug 20 ml ap i 1 ml acid fosforic 85%; pentru detectare se folosesc 2 volume din aceast soluie i 3 volume de aceton. nclzire la 110C, timp de 15 min. Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile Rf n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumire Lactoz Zaharoz Galactoz Glucoz Fructoz Arabinoz Valorile Rf 0,13 0,20 0,30 0,34 0,36 0,42 Culoarea petei Galben- brun Galben- brun Brun Brun Brun Rou

Fig. II.2. Cromatograma experimentului II (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. glucoz; 5. fructoz; 6. arabinoz; 7. amestec)

Fig II.3. Separarea monozaharidelor (1. galactoz; 2. glucoz; 3. fructoz; 4. amestec)

Se observ c sistemul de solveni aplicat permite separarea substanelor studiate cu Rf-uri ale monozaharidelor (fructoz, galactoz i glucoz) apropiate. Experimentul III Scopul analizei: am urmrit identificarea i diferenierea manitolului i sorbitolului, utiliznd sistemul de developare oficinal n Ph. Eur 7.0. i B. P. Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de manitol i sorbitol 0,25% Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plac pe suport de plastic, POLYGRAM SIL N-HR cu dimensiunea 10X20 cm i grosimea 0,2 mm. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: ap- acetat de etil (R)- propanol (R) (10:20:70 v/v) Distana de migrare: 15 cm. Detectare: pulverizare cu acid p- aminobenzoic (R) preparat la fel ca la experimetul II; uscare ntr-un curent de aer rece pn cnd acetona este ndeprtat; nclzire la 100C timp de 15 minute; stropire cu cel de-al doilea reactiv, soluie de periodat de potasiu 2g/L; prepararea reactivului: 1 g de periodat de potasiu se dizolv n 500 ml de ap. uscare ntr-un curent de aer rece i nclzire la 100C timp de 15 minute. Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile Rf n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumire Sorbitol Manitol Valorile Rf 0,20 0,25 Culoarea petei galben deschis galben deschis

Fig. II.4. Separarea sorbitolului de manitol (1. sorbitol; 2. manitol; amestec) Folosind sistemul de developare prevzut n Ph. Eur. i B. P. s-au putut identifica cei doi hexitoli, iar la separarea lor nu s-au obinut distane de migrare apropiate. Experimentul IV Scopul analizei: am urmrit identificarea manitolului i sorbitolului, dar i diferenierea acestora, utiliznd metoda similar de la experimentul I, cu deosebirea c am nlocuit sistemul de developare: ap- acetat de etil (R)- propanol (R) (10:20:70 v/v) cu izopropanolap (90:10 v/v), iar distana de migrare este de 12 cm. Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile R f n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumire Sorbitol Manitol Valorile Rf 0,33 0,40 Culoarea petei galben galben

Fig. II.5. Separarea hexitolilor (1. sorbitol; 2. manitol; 3. amestec) Se poate observa c folosirea sistemului de developare: izopropanol: ap (90:10 v/v) duce la o separare mai clar a compuilor. Experimentul V Scopul analizei: am urmrit diferenierea hexitolilor de monozaharide, folosind metoda lui Krauss combinat cu cea din Ph. Eur. pentru identificarea hexitolilor. Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de galactoz, glucoz, fructoz, manitol i sorbitol 0,5% n soluie de metanol 70%. Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plci pe suport de plastic, POLYGRAM SIL N-HR cu dimensiunea 20x20, 10x20 cm i grosimea 0,2 mm. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: acetonitril- ap (85:15 v/v). Distana de migrare: 15 cm.

Detectare: pentru monozaharide: pulverizare cu acid p- aminobenzoic (R), preparat la fel ca la experimentul II. uscare ntr-un curent de aer rece pn cnd acetona este ndeprtat; nclzire la 100C timp de 15 minute; pentru hexitoli: pulverizare cu acid p- aminobenzoic (R); uscare ntr-un curent de aer rece pn cnd acetona este ndeprtat; nclzire la 100C timp de 15 minute; stropire cu cel de-al doilea reactiv, soluie de periodat de potasiu 2g/L; prepararea reactivului: 1 g de periodat de potasiu se dizolv n 500 ml de ap. uscare ntr-un curent de aer rece i nclzire la 100C timp de 15 minute. Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile R f n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumirea Sorbitol Manitol Galactoz Glucoz Fructoz Valorile Rf 0,11 0,13 0,16 0,18 0,21 Culoarea petei Brun Brun Brun Galben- deschis Galben deschis

Fig II.6. Separarea monozaharidelor de hexitoli (1. galactoz, 2. glucoz; 3. glucoz; 4. sorbitol; 5. manitol; 6. amestec)

Fig. II.7. Diferenierea glucozei de sorbitol (1. glucoz; 2. sorbitol; 3. amestec)

Fig. II.8. Separarea fructozei de sorbitol (1. fructoz; 2. sorbitol; 3. amestec)

Fig. II.9. Separarea manitolului de glucoz Fig. II.10.Separarea manitolului de fructoz (1. manitol; 2. glucoz; 3. amestec) (1. manitol; 2. glucoz; 3. amestec) n cromatogramele prezentate se poate observa o separare clar a monozaharidelor de hexitoli. Experimentul VI Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, utiliznd sistemul de solveni prevzut de Jarusiewicy J. A., Sherma J. i Fried B. n articolul publicat n revista Comparative Biochemistry and Physiology din 2006. Am extins metoda C.S.S. pentru toate monozaharidele i dizaharidele studiate, n articol metoda fiind descris doar pentru glucoz i maltoz. Ca reactiv am folosit - naftol n acid sulfuric, preparat dup un alt articol al lui Sherma J. din Encyclopedia of chromatography, Third Edition, vol. I (2010). Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de arabinoz, fructoz, galactoz, glucoz, lactoz i zaharoz 0,5% n soluie de metanol 70%. Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plci pe suport de plastic, POLYGRAM SIL N-HR cu dimensiunea10x20 cm i grosimea 0,2 mm.

nainte de a fi folosite, plcile au fost splate cu amestecul diclormetan- metanol (1:1) i uscate ntr-un curent de aer. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: acetat de etil- acid acetic glacial- metanol- ap (60:15:15:10 v/v). Distana de migrare: 15 cm. Detectare: pulverizare cu - naftol n acid sulfuric. prepararea reactivului: 5 g - naftol se dizolv n 160 ml etanol, se adaug 20 ml acid sulfuric i 13 ml ap. nclzire la 110C timp de 5 minute. Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile R f n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumirea Lactoz Zaharoz Galactoz Fructoz Glucoz Arabinoz Valorile Rf 0,30 0,46 0,52 0,56 0,57 0,60 Culoarea petei

1 2 3 4 5 6 7 Fig. II.11. Cromatograma experimentului VI (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. glucoz; 5. fructoz; 6. arabinoz; 7. amestec)

2 3 4 5 6

3 4

Fig. II.12. Separarea dizaharidelor de monozaharide (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. glucoz; 5. arabinoz; 6. amestec)

Fig. II.13. Separarea dizaharidelor de monozaharide (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. fructoz; 4. arabinoz; 5. amestec)

2 3

Fig. II.14. Separarea lactozei de monozaharide (1. lactoz; 2. galactoz; 3. fructoz; 4. arabinoz; 5. amestec)

Fig. II.15. Separarea lactozei de monozaharide (1. lactoz; 2. galactoz; 3. glucoz; 4. arabinoz; 5. amestec)

Se observ c sistemul de solveni aplicat permite separarea substanelor studiate cu Rfuri ale monozaharidelor (fructoz i glucoz) apropiate. Experimentul VII Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, folosind aceeai tehnic de la experimentul VI, cu deosebirea c am utilizat plci fr splare cu diclormetan- metanol (1:1), iar distana de migrare este de 13,5 cm. Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile Rf n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumirea Lactoz Zaharoz Galactoz Fructoz Valorile Rf 0,26 0,38 0,43 0,47 Culoarea petei

Glucoz Arabinoz

0,48 0,50

Fig. II.16. Cromatograma experimentului VII (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. fructoz; 5. glucoz; 6. arabinoz; 7. amestec) Se observ c sistemul de solveni aplicat permite separarea substanelor studiate cu Rfuri ale monozaharidelor (fructoz i glucoz) apropiate. Am mai constatat c distanele de migrare sunt mai mici dect n cazul plcilor tratate cu diclometan: metanol (1:1).

Experimentul VIII Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, utiliznd sistemul de solveni prevzut n Ph. Eur. i B. P. la identificarea fructozei, glucozei i lactozei, aceast tehnic fiind descris i n Vademecum cromatografic al Dl. Prof. Dr. Gyresi rpd. Am extins metoda C.S.S. pentru toate monozaharidele i dizaharidele studiate. Ca reactiv am folosit tot naftol n acid sulfuric, preparat la fel ca n experimentul VI. Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de arabinoz, fructoz, galactoz, glucoz, lactoz i zaharoz 0,5% n soluie de metanol 70%.

Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plac pe suport de plastic, POLYGRAM SIL N-HR cu dimensiunea10x20 cm i grosimea 0,2 mm. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: ap- metanol- acid acetic anhidru- 1,2-dicloretan(10:15:25:50 v/v). Distana de migrare: 15 cm. Detectare: pulverizare cu - naftol n acid sulfuric. nclzire la 130C timp de 10 minute. Cromatograma obinut este prezentat n Fig. , iar valorile Rf n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumirea Lactoz Zaharoz Galactoz Fructoz Glucoz Arabinoz Valorile Rf 0,23 0,30 0,36 0,38 0,40 0,43 Culoarea petei

2 3 4

5 6 7

Fig. II.17. Cromatograma experimentului VIII (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. glucoz; 5. fructoz; 6. arabinoz; 7. amestec)

Experimentul IX Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, utiliznd tehnica cromatografic prevzut de Reiffov K. et al. n articolul publicat n revista Journal of Planar Chromatography- Modern TLC, vol. 16 din 2003. Am extins metoda C.S.S. pentru toate monozaharidele i dizaharidele studiate, n articol metoda fiind descris doar pentru glucoz, fructoz i zaharoz. Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de arabinoz, fructoz, galactoz, glucoz, lactoz i zaharoz 0,5% n soluie de metanol 70%. Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plci pe suport de plastic, POLYGRAM SIL N-HR cu dimensiunea10x20 cm i grosimea 0,2 mm. nainte de a fi folosite, plcile au fost impregnate cu acetat de sodiu 0,02 M i uscate ntr-un curent de aer. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: cloroform- diclormetan- metanol- ap (17,5:7,5:17,5:3 v/v).

Distana de migrare: 15 cm. Detectare: pulverizare cu urmtorul reactiv: prepararea reactivului: 2 g de difenilamin i 2 ml de anilin se dizolv n 80 ml de aceton, se adaug cu atenie 15 ml acid fosforic i se dilueaz la 100ml cu aceton. nclzire la 120C timp de 20 de minute. Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile R f n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumirea Lactoz Zaharoz Galactoz Fructoz Glucoz Arabinoz Valorile Rf 0,28 0,41 0,45 0,50 0,52 0,60 Culoarea petei

1 2 3 4 5 6 7 Fig. II.18. Cromatograma experimentului IX (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. fructoz; 5. glucoz; 6. arabinoz; 7. amestec)

Experimentul X Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, utiliznd tehnica cromatografic prevzut de Reiffov K. et al. n articolul publicat n revista Journal of Planar Chromatography- Modern TLC, vol. 16 din 2003. O tehnic similar este descris de aceeai autori n articolul publicat n revista Journal of Chromatography A, 1110 (2006). Am extins metoda C.S.S. pentru toate monozaharidele i dizaharidele studiate, n articole metoda fiind descris doar pentru glucoz, fructoz i zaharoz. S-a folosit aceeai metod cromatografic ca la experimentul IX. Ceea ce difer este developantul: butanol- etanol- ap (5:3:2, v/v) i distana de migrare (13 cm). Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile R f n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumirea Lactoz Galactoz Zaharoz Fructoz Glucoz Arabinoz Valorile Rf 0,42 0,52 0,53 0,56 0,57 0,57 Culoarea petei

1 2 3 4 5 6 7 Fig. II.19. Cromatograma experimentului X (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. fructoz; 5. glucoz; 6. arabinoz; 7. amestec) Experimentul XI Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, folosind tehnica cromatografic prevzut de Dr. Tyihk E. n A Rteg- Kromatogrfia Zsebkonyve din 1979 la identificarea oligozaharidelor. Am extins metoda C.S.S. pentru toate monozaharidele i dizaharidele studiate. Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de arabinoz, fructoz, galactoz, glucoz, lactoz i zaharoz 0,5% n soluie de metanol 70%. Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plac pe suport de plastic, POLYGRAM SIL N-HR cu dimensiunea10x20 cm i grosimea 0,2 mm. nainte de a fi folosit, placa a fost impregnat cu NaH2PO4 0,2 M i uscat ntrun curent de aer. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: 2-propanol- aceton- soluie de acid lactic 0,1 M (4:4:2 v/v). Distana de migrare: 12 cm. Detectare: pulverizare cu urmtorul reactiv: prepararea reactivului: 4 ml de anilin i 4 g de difenilamin se dizolv n 200 ml de aceton, apoi se adaug cu atenie 30 ml acid fosforic 80%. nclzire la 120C timp de 20 de minute. Cromatograma obinut este prezentat n fig. II.20, iar valorile Rf n tabelul. Denumirea Galactoz Lactoz Glucoz Fructoz Zaharoz Valorile Rf 0,25 0,31 0,42 0,44 0,50 Culoarea petei

Arabinoz

0,52

1 2 3 4 5 6 7 Fig. II.20. Cromatograma experimentului XI (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. fructoz; 5. glucoz; 6. arabinoz; 7. amestec)

Experimentul XII Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, utiliznd tehnica cromatografic prevzut de Wang Q. i Fang Y. n articolul publicat n revista Journal of Chromatography B, 812 (2004). Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de galactoz, glucoz i fructoz de concentraii 0,5% n soluie de metanol 70%. Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plci pe suport de aluminiu, ALUGRAM SIL G/UV254 cu dimensiunea 10X20 cm i grosimea 0,25 mm. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: aceton- ap (96:4 v/v).

Distana de migrare: 15 cm. Detectare: pulverizare cu anilin- acid ftalic (R); prepararea reactivului: 0,9 ml anilin i 1,66 g acid ftalic se dizolv n 100 ml aceton. nclzire la 110C, timp de 15 min. Cromatogramele obinute sunt prezentate n fig. II.21. i fig. II.22. iar valorile Rf n tabelul. Rezultate i discuii Tabelul Valorile Rf ale substanelor studiate Denumirea Galactoz Glucoz Fructoz Valorile Rf 0,33 0,37 0,44 Culoarea petei

Fig. II.21. Cromatograma exp. XII n UV la 366 nm

Fig. II.22. Cromatograma exp. XII

(1. galactoz; 2. glucoz; 3. fructoz; 4. amestec)

Experimentul XIII Scopul analizei: am urmrit separarea monozaharidelor ntre ele, a dizaharidelor ntre ele i a monozaharidelor de dizaharide, utiliznd sistemul de solveni prevzut n metoda lui Pachaly P. din DC- Atlas. Tennica de lucru: Soluii de analizat: am preparat soluii de arabinoz, fructoz, galactoz, glucoz, lactoz i zaharoz de concentraii 0,5% n soluie de metanol 70%. Volumul de aplicat: 1-2 l. Adsorbant: plci pe suport de aluminiu, ALUGRAM SIL G/UV254 cu dimensiunea 10X20 cm i grosimea 0,25 mm. Linia de start s-a marcat la 2 cm de la baza plcii. Pe linia de start s-au aplicat soluiile analizate cu ajutorul capilarelor la o distan una de cealalt de circa 2 cm. Dup fiecare aplicare placa s-a uscat. Developant: aceton- etilmetilceton- soluie acid boric 3% (40:40:25 v/v). Distana de migrare: 15 cm. Detectare: pulverizare cu urmtorul reactiv: prepararea reactivului: 0,5 g difenilamin se dizolv n 25 ml metanol, apoi se adaug 0,5 ml anilin i 2,5 ml acid fosforic 85%; nclzire la 120C, timp de 10 min. Cromatogramele obinute sunt prezentate n figurile, iar valorile R f n tabelul.

Denumirea Fructoz Lactoz Galactoz Arabinoz Zaharoz Glucoz

Valorile Rf 0,44 0,61 0,73 0,77 0,80 0,82

Culoarea petei Rou

Fig. II.23. Cromatograma experimentului XIII (1. lactoz; 2. zaharoz; 3. galactoz; 4. glucoz; 5. fructoz; 6. arabinoz)

Fig. II.24. Separarea dizaharidelor de monozaharide (1. fructoz; 2. lactoz; 3. galactoz; 4. zaharoz; 5. amestec)

Fig. II.25. Separarea lactozei de monozaharide (1. fructoz; 2. lactoz; 3. galactoz; 4. glucoz; 5. amestec)

Fig. II.26. Separarea dizaharidelor de monozaharide (1. fructoz; 2. lactoz; 3. arabinoz; 4. zaharoz; 5. amestec)

Fig. II.27. Separarea lactozei de monozaharide (1. fructoz; 2. lactoz; 3. arabinoz; 4. glucoz; 5. amestec)