Microbiologie

Medical

Lucrari
Practice

1. Elemente legate de controlul calitii n laboratorul de

bacteriologie / microbiologie
Cutoatecacestenoiuninuparafideutilitateimediat,trebuiesavemnvederefaptulc
elesuntinclusentrunuldintrecelemaiimportantecapitolealeactivitii,noricetipdelaboratori
nunumainlaboratoruldemicrobiologie.
Defapt,cuctsuntnelesemaidetimpuriu,cuattpotfimaiutilendezvoltareaviitoarea
oricruimedic,caremaidevremesaumaitrziuvatrebuisneleagimportanalaboratoruluiclinic
ngeneralirespectivalaboratoruluidemicrobiologienparticular,ncolaborarecucelelalte
specialitimedicale.Amdecissintroducemacesteelementenprimulcapitolalmanualuluide
lucrripractice.Considermnecesarparcurgereaacestornoiunidectretoicolegiiimplicain
diferiteleactivitidesfuratensistemulsanitar.Recomandmcitireaialtormaterialeredactate
peaceasttem,dinliteraturamedicalromneascsauinternaional.
noricelaborator,inclusivnlaboratoruldemicrobiologiealUMFCarolDavila,estenecesar
stabilireaunorresponsabiliti.Chiarincazulncareactivitateapracticserezumlaoseriede
demonstraiiiprezentareaunoranumiteaspectepentrutineriiaflainstagiu,elementelelegatede
controlulcalitiinutrebuiesfieignorate.

Atuncicndestevorbadeunlaboratorclinicdemicrobiologie,iarderezultateleobinutepoate
depindeevoluiaiuneorichiarviaaunuipacient,controlulinterndecalitateintrn
responsabilitateaefuluidelaborator,caretrebuiessupervizeze(directsauprindelegarede
responsabilitate)toateactivitiledesfurateiscontrasemnezebuletineledeanaliz.
1.ntrunsistemmedicalbinepuslapunct,buletineledeanaliznesemnate,semnate
indescifrabil,verificatenumaidectrepersonalulmedicalcupregtiremedieetc.,trebuiesdispar
isfienlocuitedebuletinedeanalizredactateduptoaterigorile,incluzndsupervizarea
menionatmaisus.

2.nfiecarelaboratortrebuiesexisteisfieaccesibiloricruimembrualpersonalului
delaboratorundocumentscris,fiesubformaunuimanualtehnic,fiesubformaunuidosarncare
sfieincluseoseriedemateriale,dupcumurmeaz:
Untabelnominalalpersonalului,datetehnicedesprefiecaremembruprecumidate
carespermitcontactareauneianumepersoanencazdenecesitate
Unregulamentdeordineinterioar,inclusivnormeledeprotecieamunciiinormelede
securitatemicrobiologic,precumidescriereasarcinilorfiecruimembrualpersonaluluide
laborator
Olistcuprinzndtoateformulareleutilizatenlaboratorprecumidescriereafiecrui
formularnparte,inclusivrecomandriprivindmoduldecompletarealformularelor
Unplanallaboratorului
Olistaanalizelorcarepotfiefectuatenlaborator
Tehniciledeidentificareamicroorganismelorizolate,porninddelanormelederecoltare,
conservareitransport(pentrufiecaretipdeprodusnparte),testeleutilizate,listamediilorde
culturiareactivilorutilizai,inclusivmoduldeprepararealacestora.
nmodideal(pentrucdeocamdatacesterecomandrinusuntaplicatentoatelaboratoarele
dinaranoastr)artrebuicamanualul(dosarultehnic)sfierevizuiticompletatperiodicis
includnormelemetodologiceredactateitransmisedectreinstituiacareseocupde
coordonareaicontrolulactivitiidesfuratensistemullaboratoarelordemicrobiologiedin
Romniaprecumiactelenormative(recomandri,ordinedeministru,ordonanedeguvern,legi
etc)aprutenlegturcuactivitateadelaborator.
Celemenionatemaisussuntvalabilepentrulaboratoareledemicrobiologie,darnparte,sepot
aplicaoricruitipdelaboratorclinic.
3.nmodnecesar,periodic,ncadrullaboratoruluitrebuieorganizatescurtentlniricare
spermitschimbuldeopiniintremembriipersonaluluidelaborator,prezentareaunorreferate
alctuitedupmaterialedespecialitateaprutenliteraturanaionalsauinternaional,discutarea
unoraspectelegislativelegatedeactivitateadelaboratoretc.
4.Omodalitateobiectivacontroluluiinterndecalitateestereprezentatdesolicitarea
(dectreefuldelaborator,carevaefectuaiverificarearezultatelor)realizriiunortesteavndla
dispoziieprobeoarbe,rezultatulcorectfiindcunoscutnumaidectrecelcareapregtitproba
respectivirespectivdectreefuldelaborator.
5.nprotocoluldelucru,pentrufiecaretestnparte,estenotificatutilizareaunuicontrol
pozitivirespectivaunuicontrolnegativ(spreexempluncazultestuluisusceptibilitiila
bacitracin,controlulpozitivvafireprezentatdeotulpindeStreptococcuspyogenesiarcontrolul
negativvafireprezentatdeotulpindeStreptococcusagalactiae),astfelputndusevalida
rezultateleobinute.
nmodcomplementar,controluldecalitateexternartrebuiscondiionezeautorizaia
eliberatpentrufuncionareaoricruilaboratordemicrobiologieclinic,attnsistemulpubliccti
ncelprivat.Dinpunctdevedereoperaional,fiecarelaboratorartrebuisprimeasc:
unnumrdecod,careestecunoscutdelaboratorulrespectividectreinstituiacare
organizeazcontrolulexterndecalitate
periodic,unnumrdeprobe,alcrorrezultatvafiverificat(pentruexamene
bacteriologice,micologiceiserologice)

formularestandardizatepentruretransmiterearezultatelorobinute.
ndeplinirearecomandrilormenionatemaisusvaconduceimplicitlaproteciapacienilor,
identificareaunoranumiteerori,compararearezultatelorlanivelnaional,posibilitateacolaborriila
nivelinternaional,realizareauneistandardizrinmicrobiologiaclinicromneasc,creterea
ncrederiituturorpartenerilordinsistemulsanitar.
Identificareaunormodalitidelucrunecorespunztoareartrebuisconduclaretragerea
autorizaieidefuncionarecureacordareaacesteianumaidupndeplinireatuturorcriteriilor
necesareuneiactivitiutilediagnosticuluiicaresnupunnpericolsntateasauviaa
pacienilor.
Controlulcalitiilaniveluloricruilaboratorvaatingeeficienamaximcucondiia
uneicolaborrintreclinicilaborator.Suntncpreafrecventesituaiilencaresolicitarea
unuiexamendelaboratorestefcutfrresponsabilitate,frcolegialitateifraaveasuficient
nvedereinteresulpacientului.Attpersonalulmedicaldinlaboratorcticeldinclinictrebuies
acionezenstrnscolaborare.Numainacestcazrezultateleobinutepotficorectinterpretate,
eventualelerezultatecareparincorectepotfianalizateicorelatecusituaiaconcret,particulara
unuianumepacient,iarncazulpersisteneisuspiciuniiuneieroridelaboratorsepoatesolicitan
cunotindecauzrepetareauneianalizesausepoaterealizaprelevareaunuinouprodus
patologicsauauneiprobedesngepentruobinereaseruluidecercetat.
nvedereastabiliriiuneibunecolaborritrebuiesexisteocomunicarepermanentntre
colegiicareidesfoaractivitateanclinicinlaborator.
Trebuiesrecunoatemcdinpcatebunacolaborareicomunicarentreverigilesistemului
desntatereprezintncundezideratneatinsnaranoastr,curelativpuineexcepii.Pornind
delabuletinuldeanalizidocumenteletehnicecaretrebuiesfiedisponibileattpentrulaborator
ctipentruclinic,continundcuscrisorilemetodologicecareaudevenitdincencemairaren
ultimii1015anitrebuiegsitecelemaibunesoluiidecomunicarecolegialitiinific.Este
datoriamanageruluiinstituieimedicaleca,mpreuncuefullaboratoruluiiefiiseciilorclinice,
sfacilitezeorganizareaunorntlniriperiodicentrecolegi.
Trebuiediscutateiagreatenmodcolegialcriteriilecarepotconduce,spreexemplu,la
respingereaunorprobe.Trebuiedesfiinatmodalitateadelucruncareseacceptpentrulucrun
laboratororiceprob,indiferentdemodulncareafostrecoltat,transportatiindiferentdaceste
nsoit(saunu)deunbuletincaresolicitoanumitexaminareicareartrebuismenionezeo
seriededatestrictnecesare.nlocsfieprelucrateprobefrcalitate,carenuaucumsconduc
larealizareaunuidiagnosticmicrobiologiccorespunztoriutilpacientuluicareprezintoinfecie
deetiologieprobabilmicrobian,estedepreferatcaacesteprobesfierespinseissesoliciteo
nourecoltare,corespunztoarecalitativicantitativ.
naintedeancheiaaceastdestuldesumarprezentare,dorimssubliniemncodatc
acestenoiuniartrebuicunoscuteiaplicatedeopotrivnsistemulpubliciprivat.

Controlulinterniexterndecalitatetrebuiesreprezinteoprioritateabsolutpentru
sistemulnaionaldesntateiarelementelelegatedeacestaartrebuisfiecunoscutencdin
perioadadepregtiredebazaoricruimedic,biologsauasistentmedical.

2. Elemente legate de conduita n laboratorul de

bacteriologie / microbiologie. Norme de protecie
a muncii n laboratorul de microbiologie.
intaactivitiinlaboratoruldebacteriologie/micologiearputeafidefinitfoartepescurtdrept
stabilireatratamentuluicaretrebuieurmatncazulunuipacientcareprezintoboalinfecioasde
etiologiebacterian/fungic.Defaptlucrurilesuntmultmaicomplicate,dateledelaboratornupot
fiinterpretatenlipsauneipregtiriserioaseattdinpunctdevedereteoreticctipractic,nlipsa
uneiactivitisusinutenperioadadepregtirecaredureazmaimulianiidefaptcontinutoat
viaa.

Ceeacetrebuiesfiensfoarteclarncdelanceputestec,frrespectareaunorprincipii,
ncondiiileefecturiisauinterpretriimecaniceaunortesteetc.,diagnosticuldelaborator
microbiologiccorectdevineimposibil.
nvedereaatingeriiscopului,nlaboratoruldebacteriologiesevorefectuatehnicilenecesare:
stabiliriiprezeneisaudovediriiabseneiunoranumitebacteriilanivelulunuianumit
substrat
studieriibacteriilorizolatepentruidentificareagenului,grupului,speciei,tipului(delacaz
lacaz)avndlabazoseriedecaracterealebacteriilor,precum
caracterelemorfotinctoriale
caractereledecultur
caracterelebiochimice(pigmentogeneza,sintezaaltorfactoricarepotfievideniai
macroscopic,sintezaunorenzime,sintezadebacteriocine,capacitateadeafermentaunanumit

substrat,capacitateadeafolosiunanumitsubstratdreptunicsursdecarbonetc)
caractereleantigenice(utilizndtehnicidindomeniulimunologiei)
caractereledepatogenitate
sensibilitateafadebacteriofagi
caracterelegatedesintezaanumitormetaboliisaustructurimoleculareidentificabile
spreex.printehnicidecromatografie
caracterelegeneticeetc
stabiliriifaptuluicbacteriaizolatesteimplicatnprocesulinfeciosrespectiv
stabiliriisensibilitiilaantibioticeichimioterapice
monitorizriievoluieisubtratament(dovedireaeficieneitratamentuluiantibacterianales)
identificriicontaminriidelaborator
depistriipurttorilordegermenietc.
Chiardaccelemenionatemaisusparcomplicate,elereprezintosimplificarenraportcu
complexitateaactivitiidinlaboratoruldebacteriologie.

Pentrundeplinireaobiectivelor,laboratoruldebacteriologietrebuieastfelconceputnct
condiiiledelucrusfieoptime.nplus,trebuiesavemnvederecnmomentulefecturiioricrei
tehnicidelaborator,estenecesarsfieasiguratproteciapersonaluluidelaboratorprecumi
prevenireacontaminriiprobelordelucru.Toateelementelenecesaretrebuiesaparscrise
manualultehnicmenionatncadrulcapitoluluiprecedent.

Cldirealaboratoruluidebacteriologiemedicaltrebuiesasigure,pectposibil,prevenirea
expuneriilapraf,curenideaer,sfieluminoasinmsuraposibilitilorspaiiledelucrusfie
orientateastfelnctsprevinincidenadirectarazelorsolare(avndnvedereefectulbactericid
alradiaiilorUVacestelementestedemaximimportannlaboratoruldemycobacteriologie).
Fiecarencperealaboratoruluidebacteriologietrebuiesaibodestinaieprecisiarplanul
laboratoruluinansamblutrebuiesprevadunanumitflux,pectposibilntrunsensunicn
vedereapreveniriicontaminriipreparatelordelaboratorirespectivprevenireantlniriidintre
materialelecontaminateimaterialelesterile.
Laboratoruldebacteriologiemedicalincludencperi(spaii)nvedereadesfurrii
corespunztoareaurmtoareloractiviti:
recepionareaprobelorrecoltatenafaralaboratorului
recoltareaprobelornlaborator
prelucrareaprobelornvedereacultivrii,identificriibacteriilorimplicateetiologic,prin
diferiteletehnicibacteriologice
realizareadiferitelortehniciimunologiceutilendiagnosticulbacteriologicsauimunologic
pregtireamaterialelornecesarenlaborator
sticlrie
alteinstrumentedelaborator
reactivi
mediideculturetc
depozitareamaterialelornecesarenlaborator
splareamaterialelornaintedesterilizareetc.

nafardecelemenionatemaisus,nlaboratoruldebacteriologiemaiexistspaiidestinate
activitiloradministrative(birouri),vestiare,grupurisanitareetc.
ncazulunorlaboratoarespecializate(deex.studiulacizilorgraiprintehnicidecromatografie,
studiulcaracteristicilorbacterieneprintehnicidebiologiemolecularetc.),existanumite
particularitinplanificareaidistribuireaspaiilorfuncionaledinlaboratorelementeletehnice
legatedeacestestructurisuntprezentatendiferitemanualetehnicecarepotficonsultatedectre
ceiinteresai.

ncperile,spaiile,mobilieruldinlaboratoruldebacteriologievorficonstruitenaafelncts
permitrealizareauneicureniiidezinfeciilacelmainaltnivelncazulacestuitipde
laboratoaresepoatevorbidenecesitateaatingeriiperfeciunii.Vafiacordattoatateniapentruca
laboratorulsfieorganizatnvederea
realizriiscopuluimenionatmaisusprintehnicileenumerate
preveniriicontaminriiprobelordelaborator
preveniriirspndiriigermenilornmediulambiant
preveniriiinfeciilordelaborator.
naintedeancheiaprezentareaprincipalelorncperi(spaii)dinlaboratoruldebacteriologie,
dorimsmenionmc:
structuraprezentatpentrulaboratoruldebacteriologienudifernmodesenialde
structuraunuilaboratordemicrobiologiengeneral
nstructuralaboratoruluiestededoritsfieincluse(nmsuraposibilitilorinfuncie
denivelullaboratorului,deexempluncazulunuilaboratordespitaluniversitar)spaiincaresse
poatdesfuraactivitidenvmntipregtireteoreticipractic,spaiincarearputeaavea
locidiferitentlniritehnicentremembriipersonaluluidelaborator
laboratorultrebuiesfielegatfuncionaldeclinic.
Dateleprivindfuncionarealaboratoarelorcareefectueazanalizemedicalesuntinclusen
Ordinulministruluisntiinr.119/2004,normativaducelaziOrdinulministruluisntiii
familieinr.609/2002,precedatdeOrdinulministruluisntiinr.915/2000.Acesteacte
normativetrebuierevizuiteiadaptateperiodic.

Normedeprotecieamunciinlaboratorul
demicrobiologie
nlaboratoruldemicrobiologieselucreazcumicroorganismepotenialpatogenesaudovedite
afipatogene,caresepotidentificandiferiteprodusepatologice(ex.snge,materiifecale,urin
etc)sauaufostizolatenculturilanivelullaboratorului.Existiposibilitatecaunanumitlaborator
sprimeascspreidentificareculturiiizolatedelaunlaboratorcuunniveldecompeteninferior.
Chiardacactivitateasedesfoarntrunlaboratordedicatlucrrilorpracticei
demonstraiilorfcutesubsupraveghereaunuicadrudidacticpentrustudenisautinerimedici
rezideni,existoseriederegulicaretrebuieaplicatecustricteenvedereaeliminriiriscurilorde
contaminare:
1.Estestrictinterzisaccesulpersoanelorstrinenlaborator.Tineriimedicisauviitori

medicivoraccedenlaboratorivorparticipaladesfurarealucrrilorpracticenumaidup
audiereainsuirea(doveditprinsemnturapeunprocesverbalpregtitnacestsens)regulilor
deprotecieamuncii.
2.Toateproduselebiologicevorficonsideratecapotenialinfectante.
3.Esteobligatoriepurtateaechipamentuluideproteciehalatuldeproteciereprezint
nivelulminimacceptat.Halatultrebuiesfiecuraticorectncheiat.nanumitesituaiiseva
recomandautilizareamnuilor,ochelarilor,mtii,bonetei,orului,nclminteideprotecie.Se
recomandcaechipamentuldeproteciesfiepstratseparatdehaineleutilizatenexterior.
4.NusevorpurtamnuidelatexnmomentulmanipulriibeculuiBunsen.
5.Mncatulibutulsuntinterzisensaladelucrripracticedemicrobiologie.Fumatul
esteinterzis,conformlegii,noriceinstituiemedicaldinRomniaicuattmaimultnueste
acceptatntrunlaboratordemicrobiologie.
6.Seinterziceaplicareadecosmetice,lcuireaunghiilor,purtareadeunghiifalse,
manipularealentilelordecontactetc.
7.Esteinterzisintroducereanguraoricruiobiect.
8.Pipetareacuguraestestrictinterzis.nvedereapipetriisevorutilizadispozitivede
pipetareadecvate.
9.Nuestepermisdepozitareaobiectelordeuzpersonalpemasadelucru(haine,geni,
serviete,caieteetc).Serecomandcahainelesfielsatelagarderobsauntrunspaiuspecial
amenajat.
10.Manipulareamaterialuluicontaminatsevarealizacumaximprecauiepentruevitarea
rspndiriimicroorganismelor.ActivitilesevordesfuranvecintateabeculuiBunsenaprins.
11.nsmnrileseefectueazlaflacr.Sevorflambaguriletuturorrecipientelor(tub,
eprubet,flacondesticletc)utilizate,attladeschiderectilanchidere.
12.Ansabacteriologicsevasterilizalarou,attbuclactifirulansei(iarportansaseva
flamba)nainteidupfolosire.Atuncicndsaterminatlucrulcuansancrcatcuprodus
patologic,nvedereasterilizriibuclaanseivafiintrodusiniiallabazaflcriiundetemperatura
estemaisczut,pentruaprevenimprocareacuparticuleinfecioase.Atuncicndselucreaz
ntrunlaboratordeanalizesevorluapreacauiisuplimentare.
13.Sevorutilizaansebacteriologicecorecticompletnchiseicuobuclcudiametrulmai
micde3milimetripentruaseevitadescrcareaspontan.Nusevorfacemicribruteatunci
cndansaestencrcatcuproduspatologic.Sevorevitagesturileampleisevamenineun
permanentcontrolasupramicrilorefectuatenlaboratoruldemicrobiologie.
14.Recomandmcatoateactivitilecarepotfiefectuatenlaboratorsfienscriseidetaliate
nmanualultehnicallaboratorului.naintedencepereaoricruitestsauaoricreimanevre,trebuie
savemnmintetoipaiipecareurmeazsifacem(conformprotocoluluidelucru)astfelnct
savemuncontrolmentalpermanentalfiecreimanevrepecareurmeazsoexecutm.
15.Nuestepermisfugainicimersulrapidprinlaborator.
16.Pipetelecontaminate(pipetePasteur,pipetegradateetc)nusevordecontaminalaflacr,
civorfiintroduse(evitndproducereadestropipotenialinfectani)nflaconulcudezinfectant
(lichiduldezinfectanttrebuiesdepeascnivelulpnlacareaajunsprodusulcontaminant),
undevorfimeninutepentrucirca24ore(nfunciedesubstanadezinfectantutilizat).Flaconulcu
amestecdezinfectantesteobligatoriu.Totnamesteculdezinfectantvorfiintrodusecuaceleai

precauiilameledesticlfolosite.
17.Toatecelelalteobiectecontaminate(exceptndanselebacteriologice,pipeteleilamele)
sevorintroducelafinalulactivitiipractice,cuprecauie,ntrunrecipient(ex.ogleatdinmetal,
cucapac)carevafiautoclavat.
18.Sevarestrngepectposibilutilizareaobiectelorascuite,tietoareineptoare.
19.Pentrundeprtareaobiectelorascuitedeunicntrebuinarerecomandmutilizareade
cutiisigurencareacesteasfiecolectate.Acestecutiivorfiulteriorincinerate.
20.ncazulncarearelocaccidentalcontaminareauneisuprafeecuprodusepatologicesau
culturi,ncazulncareacestevenimentsedatoreazunuitnrmedicsauviitormedicaflatn
pregtire,nprimulrndtrebuieanunatfrntrziereasistentulresponsabilcupregtirea
respectiveigrupedelucru.Serecomandacoperireacuopnzasuprafeeicontaminatedup
caresetoarnosoluiedezinfectantcaresevameninepelocnfunciederecomandrile
productorului,darnumaipuinde30minute.Ulteriorsepoatetrece(dupcaz)lacurirealocului.
21.Lasfrituluilucruluinlaboratorsevorsplaminilecuapispun.
22.nafardeacestemsuri,sevoraveanvederetoatecelenecesareevitriioricruirisc
carearputearezultanurmautilizriiunorsubstanecaustice,manipulriidiferiteloraparate
electriceetc.
nceeacepriveteutilizareacabinetelordesiguranbiologic(hote,boxe,nie),vorfiprezentate
unelenoiunincapitolulal3lea.
Respectareaacestornormedeprotecieestestrictnecesar.
TrebuiesavemnvedereifaptulcrecomandrileidirectiveleUniuniiEuropenendomeniul
biosecuritiiaufostadoptatedectrearanoastr.

3. Date privind echipamentul i aparatura

utilizate n laboratorul de microbiologie
ndiferitelencperi(spaii)alelaboratoruluidemicrobiologieputemntlnioseriede
echipamente,elementedebirotic,diferiteaparate.
Spreexemplu,nncpereaundearelocrecepionareaproduselorpatologicetrebuiesexiste
registresauunsistemcomputerizatdenregistrareadatelor(nregistrareacorectadatelorn
sistemulsanitartrebuiesreprezinteoprioritatepentruoricaredintreunitilemedicaleindiferent
desistemulpublicsauprivat),stativepentrutuburi,eprubete,flacoaneetc,unincubatorla37C,un
frigideretc.nloculundesedesfoardiagnosticulmicrobiologictrebuiesexistelandemn
ansebacteriologice,diferitepipete,pense,baghetedelemn,tampoanedediferitedimensiuni,becul
Bunsen,microscopul,lupa,lameilamele,trusedecolorare,centrifuga,balana,baiadeap,un
incubator,unfrigider,plciPetri,eprubete,containerepentrumaterialulcontaminat,cabinetulde
siguranbiologicetc.
nceleceurmeazvorfienumerateopartedintreustensileleiaparatelecaresepotgsin

laboratoruldemicrobiologie.
1.Microscoape,lupeitrusedecolorani:
microscopoptic(cmpluminos)
altetipuridemicroscop,carepotfiutilizatencamerobscur(microscopcufond
ntunecat,microscopcucontrastdefaz,microscopcufluorescen)nsituaiiparticularede
diagnostic
trusepentrucoloraiiuzuale(albastrudemetilen,Gram,ZiehlNeelsenetc)ispeciale
lupdemnilupstereoscopic(pentrustudiereamorfologieicoloniilor)
2.Cabinetedesiguranbiologic(incinte,boxe,nie):
cabinetuldeclasI,ncareaerulcuratantreneazaerosoliiproduidinsprepersoana
carelucreazicareseaflnlaboratorctremediulexterior,printrunfiltrucarereinemajoritatea
particulelorpericuloase
cabinetuldeclasII,ncareaerulcuratptrundefiltrat,esterecirculatprinfiltreastfel
nctsuprafaadelucruvinencontactcuaersterilnboxnusevorintroducesursedecldur
cabinetuldeclasIIIestecompletnchismediculiintroduceminilenzonadelucru
prinmnuifixateetanlaaparataerulesteattadmisctievacuatprinfiltre
3.Termostateibideapsaudenisip:
termostatereglateladiferitetemperaturi,nfunciedeprofilullaboratoruluiia
germenilorstudiai(ex.3537Cpentrubacterii,28Cpentrufungietc)
cameretermostat
bideapdediferitemrimi(ex.pentrudecomplementareaserurilorla56C)
bidenisip(ex.pentrucoagulareaunormediidecultur/Loeffleretc)
4.Frigidere:
frigideredediferitedimensiuni,cutemperaturainterioarde+4C/estedepreferat
utilizareaunuifrigiderseparatdecongelator,deoarecefrigiderulsedeschidemaifrecventiaceasta
vainfluenatemperaturadincompartimentulcongelator
camerefrigorifice
congelatoarede20Cide70C(pentruanumitelaboratoarespecializate)
5.Centrifugiibalane:
nmodcurentsuntutilizatecentrifugicuvitezade3000g,preferabilcurotororizontal
(pentrudiminuareacantitiideaerosoli)napropiereacentrifugiisevaplasaobalan,pentru
echilibrareatuburilor
centrifugicuvitezesuperioare,nlaboratoarespecializate(mycobacteriologie)
centrifugicuvitezesuperioareisistemdercire(biologiemolecular)
balanetehnice(pentrumediidecultur,reactivi,soluiinvolumemari)
balanefarmaceutice(pentrusoluiidecolorani,altesoluiinvolumemici)
balananalitic(pentrureactivincantitifoartemici)
balanelectronic(pentrubiologiemolecular)
6.Mojare,agitatoare,dispozitivedetriturareaesuturilor
7.Aparatepentrudistilareaidemineralizareaapei
8.AparatepentrustabilireapHului
9.Fotometresaucolorimetre
10.Distribuitoarepentrumediidecultur

11.Aparateidispozitivepentrusterilizareidezinfecie:
incinerator(deregul,nvedereaincinerriisencheieuncontractdeprestriserviciicu
ofirmdeprofil)
etuv(pupinel,cuptorPasteur)
autoclav
filtredediferitetipuri
lmpicuUVetc
12.Containerepentrumaterialulcontaminat:
gleidemetalcucapac
sacidinmaterialplastic
sacirezistenilatemperaturileatinsenautoclav
borcanecusoluiidezinfectanteetc
13.Inventardesticlrie:
eprubetedediferitedimensiuni(ex.12/120mm,16/160mm)
tuburidecentrifug
eavdesticlpentruconfecionareadepipetePasteur
pipetegradatedediferitedimensiuni
baghetedesticl
baloane
flacoane(ex.Erlenmeyer)
pahare(ex.Berzelius)
exsicatoare
cilindriigradaidediferitedimensiuni
plciPetri
lameilamelepentrumicroscopieetc
14.Inventardematerialplasticicauciuc:
dispozitiveadaptatelapipetepentruaeliminapipetareacugura
tuburidecentrifug
containerepentruproduselepatologice
plciPetri
ansecalibrateetc
15.Altearticoledelaborator:trepiede,stelajedelemnsaumetal,couridesrm,sitede
azbest,becuriBunsen,casolete,foarfeci,bisturie,pense,sonde,seringi,ansebacteriologice(cu
bucl,ansefir,dinplatinsaunichelin),tampoanediferite,tijecutamponialteinstrumente
pentrurecoltareaproduselorpatologice,termometreetc.

Francercasmenionmtoatedispozitivele,echipamentele,aparatelentlnitentrun
laboratordemicrobiologieamconsideratcaceastlistareesteutilattpentrumediculsau
biologulcarelucreaznlaboratorctipentruviitorulmedic,indiferentdespecialitate.

4. Metode de dezinfecie i sterilizare

utilizate n laboratorul de microbiologie
Definiiidebaz
Sterilizareareprezintdistrugereasaundeprtareatuturormicroorganismelorpatogenesau
nepatogene,formevegetativesauspori,depeosuprafasaudintrunmediu(lichidsausolid).
Septicnseamncontaminatcumicrobipatogenisauinfectat(deexempluinfeciauneiplgi).
Asepticnseamnlipsitdemicrobi,indiferentdacmicrobiisuntpatogenisaunepatogeni.
Asepsiareprezintansambluldemetodeprincareevitmcontaminareamediuluiambiantcu
germenimicrobienisauprincareputemmeninesterilitateaesuturilor,mediilordecultur,
medicamentelorinjectabileetc.
Dezinfeciareprezintdistrugereaformelorvegetativemicrobiene(uneoriiasporilor)din
anumitemedii(lichide,solide)saudepesuprafee.Serealizeazcuajutorulunoragenifizicisau
cuajutorulsubstanelordezinfectante.
Antisepsiareprezintnlturareasaudistrugereaformelorvegetativemicrobienedepe
tegumente,mucoasesaudinplgi.Serealizeazcuajutorulsubstanelorantiseptice.

Sterilizarea
Toatematerialeleutilizatenlaboratoruldemicrobiologietrebuiesfiesterilenaintede
utilizare.Existomarediversitatedematerialecaretrebuiesterilizate,astfelnctimetodelede
sterilizaresuntdestuldevariate,dupcumurmeaz:
1.Metodedesterilizareprincldur
cldurauscat
clduraumed
2.Metodedesterilizareprinfiltrare
3.Metodedesterilizareutilizndradiaiile
4.Metodechimicedesterilizare.
Metodeledesterilizarecareutilizeazradiaiile(cuexcepiaradiaiilorultraviolete)imetodele
chimicedesterilizare(ex.cuoxiddeetilen)suntutilizaterareorinlaboratoruldemicrobiologie.

Sterilizareavafintotdeaunaprecedatdepregtireamaterialuluicareurmeazsfiesterilizat:
splare,uscare,ambalare/ncazulmaterialelorcurate,necontaminate
autoclavare,splare,uscare,ambalare/ncazulmaterialelorcontaminaterefolosibile
Existoseriedemetodepentruacontrolaeficienasterilizrii,prinindicatoriifizici(ex.
termometru),chimici(ex.floaredesulf,tiouree)saubiologici(ex.sporideBacillus
stearotermophilus).

Sterilizareaprinclduruscat
Sterilizareaprinclduruscatarecamecanismoxidareasaucarbonizareastructurilor
bacteriene.
1.Sterilizareaprinnclzirelaincandescen(larou)reprezintintroducereaimeninerea
nflacrabeculuiBunsenpnlanroire,petoatlungimea,aobiectuluicareurmeazafi
sterilizat.Sepoateaplicapentruansabacteriologic(cubuclsaufir)saupentruspatul.
Flambareareprezinttrecereaprinflacr(dectevaori)aunuiobiect,fraseatinge
temperaturadeincandescen.Flambareaseaplicpentruportans,gtulunuirecipientdesticl
(tub,eprubet,flaconetc)saupentrucapilarulpipetelorPasteur.
2.Sterilizareacuaercaldserealizeaznetuv(pupinel,cuptorPasteur).Etuvaesteocutie
metaliccupereidubli.Cuajutorulunorrezisteneelectriceiaunuitermostatseobineimenine
temperaturapentrusterilizare.Uniformizareatemperaturiininteriorulaparatuluiesterealizatcu
ajutorulunuisistemdeventilaie.
Pentrumajoritateamaterialelorcareurmeazafisterilizate,temperaturadinetuvtrebuies
ating180C,pentruoduratde1or.nunelesituaiitimpuldesterilizarepoatedepi60de
minute(ex.pentruambalajededimensiunimari).
Sterilizareacuaercaldesteindicatpentruobiectedesticl,obiectedeporelan,pulberiinerte
itermostabile,uleiurianhidre,instrumentarchirurgical(pentruinstrumentarulmetalicestede
menionatfaptulcrepetareasterilizrii,ntimp,conduceladeclireaoelului)etc.Nusevor
sterilizanetuvsoluiileapoase,obiecteledeplastic,obiecteledecauciuc,vat,bumbac,fibr
sintetic,altematerialetermolabile,materialecontaminatedinlaborator.
3.Incinerareareprezintardereapnlaobinereadecenu.Existanumiteregulistricte
privindincinerarea,pentruaprevenidiferiteletipuridepoluare.
ncazulspitalelor,demulteorisuntprevzuteincineratoarenstructuraunitiisanitare
respective.Deregul,nvedereaincinerriisencheieuncontractdeprestriserviciicuofirmde
profil.Dinpunctuldevedereallaboratoruluidemicrobiologiearputeafisupuseincinerriimateriale
deunicfolosindinplastic,reziduuriorganicesolide,gunoi,cadavreleanimalelordeexperien
etc.

Sterilizareaprincldurumed
Sterilizareaprincldurumedesteceamaieficientmetoddesterilizareiareca
mecanismcoagulareaproteineloridegradareaenzimelor.
1.Autoclavareaesteesenialattpentrulaboratoareledemicrobiologiectipentruunitile
sanitarengeneral,indiferentdesistemulpublicsauprivat.Vaporiideaprealizeazla0,5

atmosfereotemperaturde115C,la1atmosferotemperaturde121Cirespectiv134Cla2
atmosfere.
Autoclavularecapiesprincipaluncazancupereimetalici,caresenchideetancuun
capacprevzutcuunsistemspecialdenchidereininteriorulcruia,vaporiideapsunt
comprimailapresiuneanecesarnvedereasterilizrii.Existmaimultetipurideautoclave:
autoclavecuperetesimplu
verticale
orizontale
autoclavecumantadeaburi
verticale
orizontale.
ncontinuare,dreptexemplu,vomdiscutanumaidespreautoclavulcuperetesimplu,vertical,la
carevaporiiprovindinapaaflatncazanuldepresiuneiajungncameradesterilizaredejosn
sus.Presiuneadininteriorulcazanuluiestenregistratdeunmanometru.Pentrupunerean
funciuneaautoclavului,ndotareexist2robinete:unulsuperior(robinetuldeaerivapori,care
permitelegturantrecazanimediulexterior)iunulinferior(robinetulcarepermiteevacuareaapei
dincazan).Pentruaevitaaccidenteleexistosupapdesigurancaresedeschideipermite
evacuareavaporiloratuncicnd,accidental,presiuneavaporilordepetelimitadesiguran.n
momentuldefapentruevitarearisculuideavenincontactcuvaporideapfierbiniaflaisub
presiune,autoclavelesuntdotatecuunsistemcarenupermitedeschidereacapaculuipncnd
presiuneadininteriornuoegalizeazpeceadinexterior.Cazanuldepresiuneesteinclusntrun
pereteexteriorsolidcarelaparteainferioarareunspaiuncareseaflsursadecldur.
nparteainferioaracazanuluidepresiuneseaflunsuportpecareseaeazoplacde
metalperforat.Pesuportseaeazmaterialelecaretrebuiesterilizateiarfaptulcplacaeste
perforatpermitetrecereavaporilordeapproduidupnclzireaapei.nvedereasterilizriise
procedeazastfel:
verificmnivelulapeidinparteainferioaracazanului,caretrebuiesfiepnlao
distande23centimetridesuportdacnivelulasczut,secompleteaz(recomandabilseva
utilizaapdistilat)
aezmpesuportobiecteleimaterialeledesterilizat,ambalatecorespunztor
nchidemetancapacul,folosindsistemulspecialdeetaneizarecucareestedotat
autoclavulpecarelavemladispoziie
conectmsursadecldur
deschidemrobinetulpentruevacuareaaeruluiivaporilor(dacrmneaerncazanulcu
presiuneeficienasterilizriivascdeaconsiderabilvaporiideapfiindmaiuori,vornclzin
specialparteasuperioaracazanuluintimpceaerul,carevaatingetemperaturiinferioare,fiind
maigreu,varmnenparteainferioaracazanului)
nchidemrobinetuldupevacuareaaeruluiiapariiaunuijetcontinuudevapori
presiuneadincazanncepescreasciesteurmritcuajutorulmanometruluiatunci
cndpresiuneaatingevaloareadorit(deex.1atmosfer),reglmsursadecldurnaafelnct
aceastpresiunesfiemeninutpentrutoatduratasterilizrii(deex.30minute)
duptrecereacelor30minutentrerupemsursadecldurilsmautoclavulsse
rceascpncndpresiuneadininteriorajungelanivelulpresiuniiatmosferice

deschidemlentrobinetuldevapori
deschidemsistemuldeetaneizareicapaculautoclavului
lsmobiecteleimaterialelesserceascnautoclavuldeschis
atuncicndtemperaturaajungelacirca80Cputemscoatematerialelesterilizate.
Prinautoclavareputemsterilizadiferitesubstanensoluie,sticlrie(cuexcepiapipetelori
lamelor),materialecontaminatedinlaborator,instrumentarchirurgical(metalic,decauciucsau
bumbac),mediidecultur,aparatedefiltratetc.
2.Tindalizarea(sterilizareafracionat)esteometoddesterilizareprincldurumedcare
evitdepireauneitemperaturide100C.Substaneledesterilizatsemeninla56100Ctimpde
3060minute,3pnla8zilesuccesiv.Astfel,utilizndmediicarepermitgerminarea,dupprima
nclziretimpde3060minutesuntdistruseformelevegetativeiarduprcirearelocgerminarea
sporilor.nziuaurmtoaresuntdistruseprinnclzireformelevegetativerezultatedingerminarea
sporiloriarduprcirearelocgerminareasporilorcarenuaugerminatnprimazietc.
Dinpunctdevederetehnicpotfiutilizateautoclavelacaresevameninepermanentdeschis
robinetuldevapori(iastfelnusevadepininteriortemperaturade100C),bideapsaubi
denisip.
Printindalizaresepotsterilizaalimente,unelemediideculturetc.
Pasteurizareaifierbereanureprezintmetodedesterilizare,darsuntutilizatenanumite
situaii.Pasteurizareafoloseteclduraumediareaplicaiinconservareapentruscurtdurata
unoralimente(lapte,bereetc).Existopasteurizarejoas(30minutela5665C),opasteurizare
medie(15minutela6575C)iopasteurizarenalt(25minutela8590C).Prinpasteurizaresunt
distrusebacteriilenformvegetativdarnuisporii.Fierbereapoatefiutilizatatuncicndnu
dispunemdealtemetodeeficientedesterilizare.Fierbereatimpde30minutedistrugebacteriilen
formvegetativ,fungiiivirusurile,darnuisporiibacterieni.Timpulsenregistreazdupceapa
anceputsfiarb.Eficienaacesteimetodepoateficrescutprinadugareadecarbonatdesodiu
12%.

Sterilizareaprinfiltrare
Microorganismelepotfireinutemecanicielectrostaticnporiiunuifiltru.Trecereaunuilichid
printrosubstanprevzutcuporicarevareinemicroorganismeledinlichidulrespectivpoart
numeledesterilizareprinfiltrare.
Dealungultimpuluiaufostutilizateoseriedefiltreclasice(porelan,sticlporoas,azbest
impregnatcucaolin,pmntdeinfuzori).Actualmentesefolosescdincencemaifrecvent
membranefiltrantedinacetatdecelulozcuporozitintre8i0,025mm.nvedereafiltrriisunt
necesareoseriedepieseprecum:unrecipientncareseintroducelichidulcareurmeazafifiltrat,
unrecipientncaresevacolectalichidulsterilizat,oplniecaresemonteazetanntrecele2
recipiente,opompdevidcarevaaspiralichiduldinprimulnaldoilearecipient,prinmembrana
filtrant.Toateacestepiesesuntsterilizateprinautoclavarenaintedencepereafiltrrii.
Existialtevariantetehnice.Cuoimportanpracticparticulararfidemenionatfiltrele
pentrusterilizareaaeruluidincabineteledesiguranbiologic(clasaIIiclasaIII),filtreleHEPA
(HighEfficiencyParticulateAirFilters).
Sterilizareaprinfiltrareesteutilizatpentrudecontaminareaaerului,aunormediidecultur

(carenusepotsterilizaprinautoclavare),aunorreactivicaresuntsensibililatemperaturileatinse
ncazulsterilizriiprinclduretc.

Sterilizareaprinintermediulradiaiilor
Radiaiileneionizante(UV)sauionizante(Xetc)auefectebactericideprinruperealegturilorde
hidrogen,oxidarealegturilordubleetc.
RadiaiileUVsuntutilensterilizareasuprafeelordelucru(pentrurepartizareamediilorde
cultur,altemanevreasepticeetc)ncazulncarenuexistcabinetedesiguranbiologiccuflux
laminar.LmpilecuUVsuntnumitelmpigermicide.
Radiaiileionizantesepotutilizansterilizriindustriale(pentrualimente,medicamente,
seringideunicntrebuinareetc).

AntisepsiaiDezinfecia
Antisepticeleidezinfectantelesuntsubstanecuaciuneantimicrobianneselectiv,alternd
structuriifunciicomunemicroorganismeloriorganismelorsuperioare.Antisepticelepotfi
utilizatepetegumenteimucoase,dezinfectantelepotfiutilizatenumaipesuprafeeistructuri
carenusuntvii.
Clasificarenfunciedemecanismuldeaciune
a).Substanecaredenatureazproteinele(aungeneralefectbactericid):acizii,bazele,alcoolii
(deexemplualcooluletilicde70,folositpentruantiseptizareategumentelor).
b).Substanecareoxideazgruprilechimiceliberealeenzimelor(deexemplu,SH):
hipermanganatuldepotasiu1,utilnantiseptizareamucoaselor,peroxiduldehidrogen,soluie3
%nap,utilizatnantiseptizareaplgilor,halogenii(Cl2,I2,Br2)iderivaiilor(hipoclorii,cloramine,
soluiiiodurateetc)nconcentraiicorespunztoareetc.
c).Substanecareblocheazgruprilechimiceliberealeenzimelor(deexemplu,SH):metale
grele[sruriledemercur,preparateleorganomercuriale(exemplumerthiolatdesodiu),srurilede
argint,compuideargintcoloidal(exemplucolargol,protargol)cuefectebactericide],gruprile
alchilaleformaldehidei,glutaraldehidei,oxiduluideetilenetc.
d).Substanecarelezeazmembranelecelulare:fenolii[acidulfenicareutilizrilimitate
datoritproprietilorcausticeitoxicitiisaleesteetalonulfadecaresemsoaractivitatea
antimicrobianaantisepticeloridezinfectantelor(indicelefenolic),crezolii,hexaclorofenul,
clorhexidina(cuefectetoxicemaireduse)etc],detergenii[anionici(spunuri,perlanetc),cationici
(sruricuaternaredeamoniu,deexemplubromocet),amfolitici(deexempluacidul
dodecilaminoacetic),neionici(deexemplupropilenglicolul)].
e).Substanecarealtereazaciziinucleici:coloraniibazici(violetdegenian,albastrude
metilen,fucsinbazicetc),derivaiideacridin,deexemplurivanolul.
ncontinuarevomprezentapescurtctevadintresubstaneledezinfectante,inndcontde
faptulcnuexistniciundezinfectantideal.Existnumeroasesubstaneinumeroiproductori
deantisepticeidezinfectante.
Hipocloriii:

soluiiledehipocloritsepreparperiodic(seinactiveazdupmaimultde24ore)
concentraiancloractivestediferitnfunciedescopulurmrit(ex.2.500ppmclor
activpentrudezinfectareapipetelorcontaminate)
auefectdezinfectantasuprabacteriilornformvegetativ,sporilorbacterieni,fungilor
(100ppmnoor),virusurilor(200ppmn10minute)
efectulestediminuatconsiderabilnprezenasubstanelororganice(nspecialproteine),
maselorplastice,detergenilor
Derivaiifenolici:
datoritatoxicitii,potenialuluicarcinogeneticicorozivitii,fenoliinusefolosescca
atare,cisubformaderivailorfenolici
soluiilefenolicesepreparperiodic(dupcelmult24ore)
concentraiapoatefidiferitnfunciedescopulurmrit(deobiceiestede25%)
auefectdezinfectantasuprabacteriilornformvegetativ,fungilor,unorvirusuri(ex.HIV
einactivatdesoluia0.5%)
efectulestediminuatpesuprafeeledecauciuc,lemnsaumaterialplastic
Glutaraldehida:
celmaifrecventesteutilizatconcentraiade2%,launpHalcalin
areefectdezinfectantasuprabacteriilornformvegetativ(ncazulmycobacteriiloreste
necesaruntimpmailungdeexpunere),fungilor,virusurilor
datoritfaptuluicnucorodeazmetalele(aacumsentmplncazulsubstanelor
prezentatemaisus)sepoatefolosiiladezinfectareasuprafeelormetalice
nupoatefifolositpentrusuprafee,datoritvaporiloriritaniitimpuluimarede
expunereidealpentrudezinfectareaechipamentelorcontaminatecepotfiimersateoperioadamai
maredetimpncontaineremeninutenchise
Iodoforii:
suntsubstanecarecomplexeaziodulpecarelelibereaznsoluiiapoase
auefectdezinfectantasuprabacteriilornformvegetativ,unorsporibacterieni,fungilor,
unorvirusuri(ex.virusuricunvelilipidic)
suntinactivaidesubstaneorganice(nspecialproteice),maseplastice,detergeni
potfiutilizaipentrudezinfeciasuprafeelor,dezinfeciapipetelorcontaminate.

Sterilizareacuetilenoxid(CH2CH2O):
exercitactivitibactericideprinalkilareaacizilornucleiciiprinnlocuireahidrogenului
labilprintrogruparehidroxietil(CH2CH2OH)
sporiideBacillussubtilisnusuntdistrui
acesttipdesterilizareseutilizeazpentrumaterialecarenurezistatuncicndsunt
supuseaciuniitemperaturiisauradiaiilor(ex.materialedincauciuc,plastic,echipamentelectronic
etc)
etilenoxidulpoateexplodavariantelepentruevitareaexplozieiinclud:1.utilizarea
etilenoxiduluincamerespecialecarepermitmeninereauneipresiuninegative2.combinareacu
CO2ncameredeoelspeciale3.combinareacuhidrocarburifluorinate
indiferentdevariantafolosittrebuierespectatetoaterecomandrileproductorului.
existoseriedeinconvenientenceeacepriveteacesttipdesterilizare(efecte

carcinogenetice,efectelanivelulsistemuluinervosetc)
sterilizareaestenprincipiuinfluenatde:concentraiaetilenoxidului,temperatur,
umiditatearelativitimpuldeexpunere(spreex.odublareaconcentraieivareducelajumtate
timpulnecesarpentrusterilizare).

5. Schema general a diagnosticului microbiologic

Diagnosticuldelaboratornmicrobiologiepoatefiundiagnosticbacteriologicsaumicologic
(direct),undiagnosticimunologic(indirect)sauocombinaieacelordouvariantemenionate.Aa
cumammenionat,ncontinuaredorimsprezentmetapeleprincipalealediagnosticului
microbiologic(bacteriologic,micologic,imunologic),structurpecareurmeazsdiscutm,
concret,diferitesituaiincadrulcapitolelorcareurmeaz.nanexe,atuncicndvomdiscuta
recoltareaitransportulproduselor,vomsintetizapentruuneledintreacesteprodusesituaiile
posibilenmomentulncarenuavemnfaunanumitgensauoanumitspecieciprodusuldin
carevomizolaagentuletiologic,iniialpresupus.

5.1.Diagnosticuldelaboratorbacteriologic/micologic

5.2.Diagnosticuldelaboratorimunologic

5.3.Povestiriadevrate

5. 1. Diagnosticul de laborator bacteriologic / micologic

Diagnosticuldelaboratorbacteriologic/micologicaremaimulteetape,ianume:
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologic(ctmaiaproapededebutulbolii,nainteca
pacientuluisisefiadministratantibioticesauchimioterapice,ctmairapidicorectdinpunctde
vederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsieiantisepsie,prelevndun
anumitproduspatologicnfunciedemanifestareaclinicncazulrespectiv,deexempluurinn
cazuluneiinfeciiurinare,materiifecalencazuldizenteriei,sputncazultuberculozeisau
aspergilozei,scuamencazuluneimicozecutanatesuperficialeetc)(vezianexanr.6).
2.Examinareamacroscopicimicroscopicaprodusuluipatologicreprezintdemulteorio
etapesenial,carepoateorientapaiiurmtori.
Pentruexamenulmicroscopicsevorrealizaminimdoufrotiuridinprodusulpatologicrecoltati
transportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen(AM)/Giemsairespectiv
Gram.Estepreferabilsavemntotdeaunacelpuinncunfrotiu(derezerv),nspecialncazuln
careprodusulpatologicestepreios(LCR,produsrecoltatprinpunciebiopsieetc).ncazul

suspicionriiuneiinfeciimycobacterieneestenecesarrealizareaunuialtreileafrotiu,careseva
coloraZiehlNeelsen.Frotiurileseexamineazlamicroscopuloptic,iniialcuobiectivul40pentruo
analizmaigeneral,pentrustabilireacmpuluimicroscopicsaualzoneideinteres,apoicu
obiectivuldeimersie.Senoteazprezenadiferitelorcelule(eventualmodificatefadenormal,
buratedemicroorganisme),prezenacelulelorinflamatorii(dovadareactivitiiorganismului,ex.
leucocite,surprinzndeventualfenomenuldefagocitoz),precumieventualaprezena
microorganismelor(bacterii,levuri,pseudofilamente,micelii),carevafiinterpretatcuprecauie,n
contextuldat.Chiardacexamenulmicroscopicestedecelemaimulteoriunexamenorientativ,
trebuierealizatdefiecaredat,curigurozitate,nanumitesituaiiputndfifoarteimportantifoarte
util.
Atuncicndprodusulrecoltatestereprezentatdesnge,urinsaumateriifecale,deregulnu
serealizeazfrotiurifixateicolorate.Spreexemplu,ncazulmateriilorfecale,sevafaceo
coprocitogram,unpreparatproaspt(nativ)ntrelamilamel,cutndusenspecialprezena
leucocitelor(dariaunorstructuricarepotdaanumiteinformaiicuprivirelafuncionalitatea
tractuluidigestiv).ncazulsuspicionriiuneiinfeciiurinare,sevarealizaunsedimenturinar(dup
centrifugareaurinei),caresevaexaminantrelamilamelnvedereaaprecieriinumruluide
leucocitepecmpmicroscopic,ncazulncareacesteaexist,nvedereaaprecieriiprezeneiunor
cilindriileucocitariprecumiaaltorcelulenormalesaupatologice,aprezeneiunorelemente
fungiceetc.,datecarepotfideosebitdeutilenvedereaunuidiagnosticcorectiutilpentru
pacient.
ncazulsuspicionriiuneiinfeciimicoticesuntutileattpreparateleproaspete(ex.preparatul
montatnsoluiedeKOHglicerol1020%),frotiurilecucoloraiinegative(tudeIndia,nigrozin),
precumifrotiurilecolorateMayGrnwaldGiemsasauGram.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicsevafacenfunciedesituaie(mediilei
condiiiledeincubaresevoralegenfunciedepresupusulmicroorganismpecaretrebuiesl
izolmspreex.ncazulncareinfeciaesteprodusdemicroorganismestrictanaerobe,nlipsa
condiiiloranaerobedecultivareesteimposibilizolareaagentuluietiologic).Pentrufungitrebuie
utilizatemediilepotriviteiotemperaturmaimicdectceautilizatncazulbacteriilor.Cultivarea
sevarealizanaafelnctssepoatobinecoloniiizolate(tehnicansmnriinpoligon)i
respectivoculturpur,caresevaidentifica.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
a)Caracteremorfologice:sevarealizaunfrotiudincoloniaizolat,frotiucaresevafixai
coloraGramsauZiehlNeelsen,dupcaz,isevaexaminamicroscopic.Prinexaminareafrotiurilor
sevorevidenianumaimicroorganismecuformitinctorialitatesimilar(ncazulgermenilorcu
polimorfismimportant,ex.Proteusspp.,pefrotiuvomobservaaspectemorfologicediferite,dela
aspectecocobacilarepnlaformefilamentoase).ncazullevurilor,aspectulestecocobacilar,
Grampozitiv,dardedimensiunimaimari.
b)Caracteredecultur:sevorexaminacoloniileizolateaprutepemediiledecultursolidei
carepotfidetipSpentrumajoritateagermenilorstudiaiinclusivpentrulevuri,detipRn
cazulCorynebacteriumdiphteriae,MycobacteriumtuberculosisiBacillusanthracis,detipMn
cazulbacteriilorcapsulate,deexempluKlebsiellapneumoniaeirespectivunaspectpufosncazul
mucegaiurilor(detaliiprivindaspectelecoloniilormicrobienesuntprezentatencapitolelededicate

fiecruigennparte).
c)Caracterebiochimice:acesteapotfifoartevariatedelaospeciemicrobianlaaltaipotfi
foarteutilespreexempluncazuldiferenieriienterobacteriilor(introducereanpracticamediilor
multitestpermiteevaluareamaimultorcaracteresimultan,ex.mediileTSI,MIU,sistemeleAPI
etc).ncazulfungilorsuntutilizateauxanogramasauzimograma.
d)Caractereantigenice:caractereleantigenicevorfiexaminatebazndunepestructurai
antigenicitateamicroorganismeloripespecificitateareaciilorantigenanticorp.Vomutiliza
anticorpicunoscuipentruaidentificaantigenelemicrobienenecunoscute.Spreexemplu,prin
reaciideaglutinaredirect,pelam,sepotidentificaantigeneleirespectivspeciileitulpiniledin
genulShigella,Salmonella,Vibrioetc).Reaciideaglutinareindirectsepotutilizapentru
detectareanp.p.astreptococilordegrupAsauBetc.,pentrudetectareaunorenterotoxine,pentru
detectareaunorfungi(Cryptococcusneoformans,Candidaalbicans,Aspergillusspp.)etc.
e)Caracteredepatogenitate:putemexaminacapacitateaunuimicroorganismdeaelabora
anumitesubstanecurolnpatogenitate(ex.coagulazaprodusdeStaphylococcusaureus)sau
infeciaexperimentalaunuianimaldelaborator(ex.izolareapneumococilordelaunpacientcu
pneumoniedupinoculareasputeilaoarecelealbncazulncarensputexistpneumococi,
animalulvamurin2448deore,iardinsngeleluisevaizolaoculturpurdeStreptococcus
pneumoniae).
f)Sensibilitatealaunanumitbacteriofagspecific(lizotipie)
g)Altecaractere(identificatedeex.prinmetodealebiologieimolecularesaualtemetode
moderne)(vezianexanr.7).
5.Antibiogramairespectivantifungigrama(testareasensibilitiilaantibioticeichimioterapice
antibacterieneiantifungice,nvedereastabiliriitratamentului)serealizeazdeobiceiprinmetode
difuzimetrice.ncazulunorinfeciigrave,antibiogramadifuzimetrictrebuiesfiecompletatde
determinareaconcentraieiminimeinhibitorii(CMI)irespectivbactericide(CMB).ninfeciigrave,
cupotenialfatal,poatefinecesardeterminareaniveluluideeficienpentruantibioticulutilizat,
respectivstabilireaniveluldeeficieninhibitorie(NEI)iniveluluideeficienbactericid(NEB)(vezi
icapitolul7).

5. 2. Diagnosticul de laborator immunologic

Diagnosticuldelaboratorimunologicpoatefiserologici/sauimunobiologic.
ncadruldiagnosticuluidelaboratorserologicsevadeterminaprezena(sausevadovedi
absena)anticorpilor,nserulpacientuluiinvestigat,utilizndantigenecunoscute.ndiagnosticul
serologicnebazmpespecificitateareaciilorantigenanticorpiutiliznddiferitetehnicitrebuies
putemrspundelaminimtreintrebrieseniale,ianume:
existanticorpinserulpacientuluiinvestigat?
careestetitrulanticorpilor?
cumevolueazndinamic(ntimp)acesttitrunacestsenssevorrealizaminimdou

determinridiferitelaunintervalde710zileaceastanaliznevapermitesdifereniemsituaia
uneiafeciuniacute(titrulanticorpilorestemaicrescutlaadouadeterminare,nmodclasicde4
ori),desituaiancarepacientulestedejanconvalescen(titrulanticorpilorlaadouadeterminare
vafimaisczut)saudesituaiaunuipacientcuoafeciunecronic(titrulanticorpilorvafi
asemntorsaufoarteapropiatlaceledoudeterminrisuccesive).nvedereaidentificriiunei
infeciiacute,ovariantposibilnmajoritateasituaiilorestedeterminareaanticorpilorspecificide
tipIgM.
ncadruldiagnosticuluidelaboratorimunobiologicsevastudia,deexemplu,reactivitatea
pacientuluifadeunanumitantigeninoculat.Intradermoreacialatuberculin(PPD,preparat
proteicpurificat)saulacandidinreprezintexempleclasice,nacestsens.Tehnica
intradermoreacieiestefolositnmaimultescopuriitrebuiesavemnvederecnfunciede
scopulurmritirespectivnfunciedeantigenulinoculat(idemecanismulimplicat),modulde
citirealrezultatelorvafidiferit(vezianexanr.3).
Considermcpentruoricemedic,indiferentdespecialitate,multedintreprincipiile
microbiologieisuntfoarteutile,meritsfieneleseiaplicatecorespunztor.
Pentruceicaresededicmicrobiologieisaubolilorinfecioase,acestenoiunireprezintobaz
obligatorie,carepoateficompletatutilizndpedeopartediferiteletratatemedicalendomeniudar
iexperienapersonaldezvoltatattdinpunctdevedereteoreticctipractic.

5. 3. Povestiri adevrate
1.Desprediagnosticitratamentninfeciileurinare
Problemaluatndiscuieesteauneicolegemaitinere,studentntrunanmarelamedicin,
dardefapt,caiurmtoarea,poateficonsideratoproblemcarepoatefiaunuisisteminua
unuicazparticular.
nurmcumaimultdeunan,coleganoastrprimetediagnosticuldelitiazrenali
recomandareadeeliminareaacalculilorprinlitotripsie[manevrcareconstnmrunireacalculilor
urinari,fragmentelefiindapoieliminatenmodnaturalprinurinaccesullacalculisefacepecale
endoscopicisubcontrolendoscopicpulverizareacalculilorpoatesfierealizatcuajutorulunei
pense(litotripsiemecanic),cuajutorulultrasunetelor(litotripsieultrasonic),prinundedeoc
repetate(litotripsieelectrohidraulic)saucuajutoruluneifibrelaser(litrotripsieculaser)].Manevra
esteexecutat,cusucces(conformprotocoluluioperator).
Dup5luni,nanulurmtor,semnelecliniceianalizeledelaborator(nspecialurocultura
nsoitdetestareasensibilitiilaantibiotice)permitpunereadiagnosticuluideinfecieurinar(ITU)
cuEscherichiacoli.Viitorulmedicprimetenorfloxacin,timpde10zile.Pentrucla3sptmni
delaprimuldiagnosticsimptomatologiapersist,primeteunnoutratament,deaceastdatcu
amoxicilin+acidclavulanic.Lancheiereaceluidealdoileatratament,simptomatologiapersist
icoleganiseadreseazsolicitndunsfat,menionndicmediculurologiarecomandats
nceapuntratamentcucefuroxim(cefalosporindegeneraiaaIIa)iUrovaxom,timpde20de

zile,apoisrefacanalizele.TulpinadeE.coliidentificatlaultimulexamenbacteriologic
prezentasensibilitatela:acidnalidixic,ceftazidim,cefuroxim,cotrimoxazol,fosfomicin,
gentamicin,rezistenla:amoxicilinilaamoxicilin+acidclavulanicieraintermediarla
norfloxacin(cualtecuvinte,putemremarcaevoluiasubtratamentatulpinii,iniialsensibilla
norfloxaciniamoxicilin+acidclavulanic,rezistenctigatntrepte).
Larecomandareanoastr,colegaseprezintdinnoulauncontrolechografic,conformcruia
sepunnevidenelementelitiazice.Estecunoscutfaptulclitiazarenalreprezintunuldintre
factoriideriscpentruapariiaipersistenaITU.
Opinianoastrafostca,nacestcaz,analizeledelaboratorsserealizezenINCDMI
Cantacuzinoipentrucerancvacaniarreedinanuerancapital,coleganoastra
respectatrecomandareanadouajumtatealuniiseptembrie.Dindiscuiilepecaleelectronic
amaflatcmediculurologaafirmatcestevorbadeoboaldetubrenalicnacestecondiii
trebuieseviteITU,carepotfifactordeagravare.Coleganoastreradejangrijoratdatorit
rezisteneilatratamentainfecieicuE.coli.
DupadministrareadeUrovaxom,uroculturarealizatlaBucuretinlunaseptembrieafost
steril,situaieconformcustatusulclinic(lipsasemnelorsausimptomelor).
Totui,dupcirca23sptmni,semneleisimptomelerevinicoleganiseadreseazdin
nou,pentruunsfat,menionndirezultateleobinutelatestareasensibilitiilaantibioticepentru
tulpinadeE.coli(menionatemaisus)icerndsirecomandmunuldintreantibioticeledinlist
pentruancepeunnoutratament.
Aacumnicidiagnosticuliprescriereatratamentuluilatelefonnureprezintunbunexemplu
nmedicin,niciutilizareaciielectronicenupoatessubstituieexamenulclinicianalizelede
laborator.Avndnminteacesterecomandripecareleamnvat,larndulnostru,nvremea
studenieisauntimpulrezideniatului,singurulsfatpecarelampututexprimaafost:refacerea
analizeidelaborator,totlaINCDMICantacuzino.
SfatulafosturmatiardiagnosticulafostITUcuKlebsiellapneumoniae,ceeaceacontrariato
pecoleganoastr(totui,rezultatulnuafostsurprinztor).
Pentructoataceastdiscuiesepurta,dinnou,pecaleelectronic(coleganoastrse
ntorsesenlocalitateadereedin)ipentrucnutiamundefuseserealizatultimulexamende
laborator,nprimulrndamsolicitataceastinformaie.Aflndattlaboratorulctimediculcarea
pusdiagnosticul,aceastaareprezentatpentrunoiocertitudinecultimuldiagnosticesteiel
corecti,ncontext,existaudouposibilitideprimintenie:
infeciecuunaltgermendinfloraproprie,ncondiiilelitiazeirenale
infeciedubl,attlanivelurinarctinaltsediu,caretrebuietratatsimultan,
urmndcasituaialitiazeirenalesfierezolvatulterior.
Recomandareaafostderealizareaunuinouexamenbacteriologic.Apelndlaunuldintrecei
maiexperimentaicolegi,unuldintrepuiniiiadevraiiprofesoridincatedrademicrobiologie(ajuns
/scoslapensie),nfinalafostdoveditodublinfecie,ITUilanivelgenital,cuKlebsiella
pneumoniae.Tratamentulinfecieilanivelulambelorsediiaduslavindecareainfeciei,dispariia
semnelorisimptomeloriprimireamulumirilorderigoare,prinemail.
2.Cuprivirelalipsadiagnosticuluimicrobiologiciurmrileacesteilipse
Unaltcolegmaitnr,deaceastdatnprimiianidestudiu,arelatatdupmomentulncare
amdiscutatirezolvatosituaieparticular,medical,cnvremeacopilrieiaprimitdefoarte

multeoriantibiotice,deregulncadruluneiautomedicaiistabilitnfamilie.
Celemaifrecventeprobleme,cailamulialicopii(dacnuchiarlatoi)eraulegatede
nasgturechi(ORL),iarmedicamenteleantimicrobieneprimitesaurepetatanualidemaimulte
oripeanpnsprevrstade1314ani.
Separecunmomentimportantafostlegatdeoinfeciedeacelaitip,cumanifestriceva
maiserioase,careaudeterminatfamiliasseprezintempreuncutnrulnostrulamediculde
familieacesta,analizndautomedicaiapropusaconcluzionatcrespectivulmedicamentn
cantitateapropusreprezentaunriscpentrupacientinacestcontext,pacientulanelescnu
trebuiesmaiacceptemedicaiacaatare(chiardaceraminor,laaceadat).Totui,colegul
nostruaconcluzionat:oricumafostsuficientdemulttimpsiaupastileaiurea.
ns,toateacesteproblemesauartatafiminore,fadeceeaceaurmat.
ntrotoamn,lanceputdeliceu,ntrovineri(majoritateaproblemelorimportante/gravesepot
petrecevinerea,nweekend,noaptea,lasfritdeprogrametc),tnrulcolegarevenitacascu
durerifoartemarinzonaarticulaieicoxofemurale,dupolovituraparentminor,ncursulunui
mecidefotbal.Unadintreeroriafost,probabil,faptulcprimareacieacasafostobaiefierbinte
(darrealmentefierbinte).
Dup3648deoredurerilesauintensificatfoartemulticopilul(aveatotuinumai15ani)nu
samaipututdeplasafrajutorulunuiadintreprinisauaunuicadrumetalic.
Aunceputperipluriprinunitisanitare,iniiallaunspitalcuprofildeurgenecopii,ulteriorla
unspitaldeurgenpentruaduli,laoseciedeortopedie(imaginileradiologicenusugeraunimic,
separe).Laceldealdoileaspitalsauadministratmedicamentecalmante,sauefectuatnoi
radiografiiplusrecomandareadeareveniluni,pentrunoianalize.
ntimpulweekenduluidurerilesauintensificatiafostnregistratfebra(peste38,5C)
copilulnumaiputeapunepepmntmembrulinferiordrept.
Larecomandareaunorcunotine,familiasandreptatiniialctreceldealtreileaspital(cu
profildecopii).Laacestspital,ntotcursuldimineiirespective,nimeninuagsittimpulnecesar
pentrualconsultapecopilcaremenioneaz,dinamintiri:nimeninusauitatlamine,eum
ineamdepereiimamaalerga...,motivpentrucareauplecatdelaaltreileaspitalisau
ndreptatspreceldealdoilea,celcuprofildeaduli.Analizeleefectuateaufostremarcabileprin
intensitateainflamaiei(tradusprinvalorilenaltealereactanilordefazacut)isugerareaunei
infecii.Mediculaluatlegturacuuncolegdelaunalpatruleaspital(cuprofildecopii),
suspicionnd,separe,unprocestumorallocalizatosteoarticular.
Dinamintiriledecopilamputearemarcantretimptrecusercam5zile,poatechiaro
sptmn,urlamdedurerecndncercamsmerg,abiamaiputeamsmdaujosdinpati
dacaeramajutaturlamdedurerepentrucnumaisuportamsfiuatinsdeveniseunchinsmerg
labaiepentrucoricumduramultiacolonupreamaiputeamsstau...misaufcutanalize,
radiografiianalizeleindicauoinfeciecarecretea"ncomparaiecuanalizeletrecute...
radiografiilenuspuneaunimic.
Medicii,dupuntimp,auindicattratamentcuoxacilin,12g/zi,iarntrediagnosticele
diferenialeluatendiscuiesauaflat:cancerosos(celmaifrecventdiscutat),tuberculozosoas,
reumatismi...ncelmaibuncaz,oinfecie(copilul,actualulnostrucoleg,iamintetecdup
multtimpaaflatdelaprinicaexistatisuspiciuneadecancer,darpriniiautiutacestlucru
delanceputiimaiaminteteialteaspecte,pecarenuleputemdiscutanmaterialulde

fa).
Dupcirca1sptmndelainternare,pacientulsedeplasacumaregreutate,circa15metri
n30deminute,casajunglabaie(noroccunitebieicarestteaucuminensalonim
ajutau).Aprimitncontinuareoxacilin12g/zi,afostexaminatrepetat,radiologic(separecsau
executat2025deradiografiidebazindelanceputipnntimpulacesteiinternri),semnelede
laborator(reactaniidefazacut)aunceputsstagnezesausevoluezepozitivdurerileau
continuat,lafeliimpotenafuncional.
Lasfaturileunorprieteni,priniiaudecisstransferepacientulnalcincileaspital,cuprofilde
aduli,transfercarenuafostrealizatcufoartemultuurin,dar,separecacestultimtransfera
fostsalutar.Actualulnostrucolegpoartiastziundeosebitrespectcelorcaresauocupatdeel
nclinicadeortopedieaspitalului,attefuluideclinicdariunuicoleg,carelaaceavremeera
maitnripecareavemplcereaslcunoateminoi.Datoritsuspiciuniidecancerosos,au
urmatalteanalize,otomografiecomputerizatioscintigrafieosoas(dinfericireinfirmnd
respectivasuspiciune)tratamentulantiinfeciosafostcontinuatiniialcuoxacilin2g/zin
asocierecugentamicin2mg/kg/corp(de2oripezi)timpde2sptmni,urmatdetratamentcu
oxacilin2g/zi.
Tnrulnostrucolegimaiamintetec,naintedetransferullaalcincileaspitaltratamentula
fostadministratintravenoscndamplecatdela...dejaartamcaundrogataveampemini
foartemultevenesparte,cheaguripebranule...iarnmomentulncareaauzitpentruprimadat
caexistatsuspiciuneadecancerososaslbitcirca4kgn2zile.
nfinal,pacientulafostexternat,vindecat,dupolungperioaddesuferin.
Dindiscuiacutnrulnostrucolegidinamintirileacestuia,nuamremarcatvreoncercarede
diagnosticmicrobiologic,vreorecoltaredeproduspatologiccaresfietransmisspreanaliz
(naintedeadministrareaantibioticelorsauchimioterapicelor),vreorecoltaredesngepentru
hemoculturi.
Nuputemmenionatoateimpresiilepecarecopilul,pacientul,tnrulcolegleaacumulatpe
parcursulacesteiexperienedevia.Totui,amintimodorinexprimatdeacestadefiecaredat
cndtrebuiesmerglaspital,mrogsdaudeunOM.
3.Despreuneleteoremedintimpulfacultiisaurezideniatului
Foartemulttimp,lacursurintimpulstudenieisauntimpulrezideniatuluiamfostnvaic
IDRcuPPD(veziianexanr.3)nuareniciovaloare,nRomnia,pentructoicopiiisunt
vaccinailanatere,pentructuberculozaesteendemicetc.nacestecondiiitoicetenii
romniauIDRpozitivionoutestarenuvaaducenicioinformaieutil.Amsuspicionatdemult
timpcaceastteoremnuareacoperirereal.
nultimiidoiani,princolaborarecuoseriedestudenientuziati(sigur,studiiletrebuie
continuateiestenecesarrealizareaunorobservaiipeunlotsemnificativstatistic),amnceput
infirmareaacestorsupoziii,transmise,dinpcate,multorgeneraiidestudeni,rezidenietc.Dincei
peste60destudenicareaudoritsparticipelastudiu,n40,9%dintrecazurivaloarecitiriila48i
72deoreafost0(zero)milimetrintimpcen19,7%valoareainduraieiafostdepeste10ipn
la22milimetri.ntruncaz,consultulcumediculdespecialitatepneumoftiziologadusla
recomandareaadministrriidehidrazidaaciduluiizonicotinic,pentruprevenireauneituberculoze
manifeste,ceeaceprobabilafostsalutarpentrurespectivul,maitnr,coleg.

6. Norme privind prelevarea i transportul

produselor patologice n diagnosticul microbiologic
direct
nschemageneraladiagnosticuluimicrobiologicdirect,fiecdiagnosticulseadreseazunei
infeciibacteriene,fieuneiafungice,recoltarea(prelevarea)itransportulprodusuluipatologic
reprezintoetapesenial.Dealtfelaceastafirmaieesteperfectvalabilindiagnosticul
virusologicsauparazitologic.Utilizmtermenuldeproduspatologicnrelativexces,adicde
regulrecoltmunanumitproduscareestepotenialpatologicfaptulcestepatologiclvom
dovedi(sauinfirma)ncursuldiagnosticuluidelaborator.Pentruasimplificamoduldeexprimare,
vomacceptautilizareaacestortermenicaatare.
Prelevareaitransportulprodusuluipatologic(p.p.)efectuatecorespunztorvapermite
realizareaetapelorurmtoaredediagnostic,culminndcustabilireasensibilitiilaantibioticei
chimioterapiceamicroorganismuluiimplicatpatogenicninfeciadoveditlaunpacient
anume(nuexistboli,cibolnavi).

Reguliprivindrecoltareaproduselorpatologice
Secunoscoseriederegulicaretrebuierespectatecustricteencursulacesteietape:
esterecomandabilcarecoltareaistabilireamodalitiidetransportap.p.sfiefcut
demedicsausubndrumareaunuimedicdespecialitate
prelevareap.p.trebuiesaiblocnaintecapacientulsfiprimitantibioticesau
chimioterapice
acestdezideratestendeplitdincencemairarceeacecreazmulteproblemen
diagnosticulmicrobiologiccontribuindilaselectareamicroorganismelorrezistentela
medicamenteleantimicrobiene
eforturileprivindndeplinirealuitrebuiesaparinattpacientuluictimedicilor

implicai(medicdefamilie,medicdealtspecialitate)
chiardacboalaestegraviartratamentulantibioticpareurgent,trebuiereinutc
pentrurecoltareap.p.carepoateducelaundiagnosticcarearputeasalvaviaapacientuluisunt
necesarenumaictevaminuteduprecoltareap.p.sepoateadministraprimadozdeantibiotic
sauchimioterapic,alesempiric,pecriteriideprobabilitate
ncazulncareevoluiasubtratamentantibioticestenefavorabil,diagnosticul
microbiologicvapermite(ntretimp)izolareaagentuluietiologicistabilireasensibilitiila
antibioticeichimioterapiceastfelnctschimbareatratamentuluisevaputeafacenmodriguros,
tiinific
alternativelesuntreprezentatedeschimbareatratamentuluinmodmaipuinraional
sauchiariraional,cuposibileurmrinefastepentrupacientsauapelarealacocteilul(asocieri)de
antibioticecuriscurilederigoare
ncazulncare(dintrunmotivsaualtul)tratamentulcuantibioticeafostnceputnainte
deprezentarealaspital/laborator,nfunciedeboalasuspectatsepotrecomandaurmtoarele
abordri
oprirea,dacesteposibil,tratamentuluipentru2448ore,curecoltareap.p.i
ncepereadiagnosticuluimicrobiologic
recoltareap.p.imediatnaintedeurmtoareadozdeantibiotic
ncercareadeantagonizareaefectuluiantibioticului,nmediuldecultur(ex.cusulfat
demagneziuncazulncaresauadministrattetracicline)
diluareainoculului(maialesdacpacientulaprimituntratamentbacteriostatic)n
mediuldeculturfrantibiotic
notificareanformularulncaresesolicitanalizadelaboratoricarensoetep.p.
precuminbuletinuldeanaliz,atuturordatelorprivitoarelatratamentulprimitdectrepacientul
investigat
recoltareaitransportulp.p.trebuiesserealizezectmaiaproapededebutulbolii,dar
trebuiealesmomentulcelmaipotrivit(optim),respectivmomentulncareesteceamaimare
probabilitatecaagentuletiologicssegseascnprodus
nfunciedeevoluiabolii(deex.coproculturanfebratifoidsevaefectuadupprima
sptmndeevoluie)
nfunciedespecificulfiziopatologicalboliirespective(deex.serecomandefectuarea
hemoculturiinaccesulfebril)
produsulpatologicdincareestimmcvomputeaizolaagentuletiologicalbolii
suspicionatevafialesnfunciedemaladieivaputeafireprezentatspreexemplude
osecreiedelanivelulpresupuseiporideintrare(ex.secreienazalsaufaringiann
difterie,secreiegenitalncazuluneibolivenerieneetc)
unprodusdelanivelulcilorderspndirenorganism(ex.snge,esutrecoltatprin
biopsiedelanivelulganglionilorlimfatici)
unprodusdelanivelulcilordeeliminaredinorganism(ex.urinninfeciiletractului
urinar,materiifecalentroboaldiareicacutetc)
unprodusdelanivelulfocaruluiinfecios(ex.lichidcefalorahidian/LCRnmeningit,
sputnpneumonieetc)
nvedereaalegeriiprodusuluicareurmeazafirecoltatestenecesarcunoaterea

patogeniei,evoluieiielementelorclinicelegatedebolileinfecioase,ceeaceesteesenialncazul
practicriicuadevratamicrobiologieiclinice
periodicitateacucareserealizeazrecoltareadep.p.poateinfluenarezultatuln
anumitecazuri,spreexemplu
nsuspicionareaunuisepsis(denumireaacceptatactualpentrusepticemie)se
recomandrecoltareaa23probedesngen24ore,pentruhemocultur
nsuspicionareauneibolidiareiceacuteserecomandrecoltareaacteuneiprobede
materiifecale,treizileconsecutiv,pentrucoprocultur
nsuspicionareauneituberculozepulmonareserecomandrecoltareaacteuneiprobe
desput,treizileconsecutivetc
ceeaceafostprelevatitransmispentruexaminaretrebuiesreprezintecuadevrat
p.p.(acelproduscareconinecumareprobabililtatemicroorganismulinfectant),spreexemplu
ncazulncareestesuspicionatdiagnosticuldemeningitiafostrecoltatLCR,n
cazulncaremeningitaestedeetiologiebacteriansaufungic,microorganismulimplicat
patogenicvaputeafiidentificatncursuldiagnosticuluimicrobiologic
nschimb,dacncazulncareestesuspicionattuberculozapulmonarsevortrimite
spreexaminaresalivsausecreiidelanivelularboreluluirespiratorsuperiornlocdesput,
diagnosticulmicrobiologicesteimposibiletc
dinp.p.sevorprelevaiutilizancursuldiagnosticuluimicrobiologicporiunilecelemai
reprezentative,respectivaceleporiunincaresuntcelemaimariansedeidentificare/vizualizare
prinmicroscopie/cultivareiizolareamicroorganismuluiinfectant,spreexempluncazulrecoltrii
demateriifecale(suspiciunedeboaldiareicacut)sevorselectaporiunilemucopurulente
(eventualmucosanguinolente)
estenecesarsserecoltezeocantitatedep.p.suficientpentruefectuarea
diagnosticuluimicrobiologic(preparateproaspete,frotiuri,cultivripemediidecultur,inoculrila
animaledeexperien,reluareaunormanevrencazulcestenecesar
recoltareaitransportulp.p.trebuiesserealizezencondiiistrictede
asepsie,pentruprevenireacontaminriiceluicarerecolteaz,pentruprevenireasuprainfectrii
pacientuluiipentruprevenireacontaminriip.p.
sevorrespectaprecauiunileuniversaleprivindprevenireacontaminriinunitile
sanitare
sevaevita,pectposibil,contaminareap.p.cumicroorganismecareaparinflorei
microbienenormale(spreex.printehnicaderecoltare/vezirecoltareaurineisauprinmanevre
invazivecareunteazcilenaturaleprincaresunteliminatemicroorganismele/vezirecoltarea
sputeiprinlavajbronhoalveolar)
sevorutilizainstrumentesterileirecipiente(containere/recoltoare)sterile.
Regulileprezentatemaisusreprezintelementefundamentalenvedereaobineriiunui
diagnosticcorecti,dupopinianoastr,trebuiecunoscutedeoricepersoanimplicatnactul
medical,inclusivdestudeniilamedicin,chiardacnuvoralegepentruviitorpregtirean
domeniulmedicineidelaboratorsaundomeniulbolilorinfecioase.
naintedeancheiaaceastparteacapitoluluiprivindnormeleprivindrecoltareaitransportul
p.p.ndiagnosticulmicrobiologicdirectdorimssubliniemctevaaspectecarenutrebuiesfie
neglijate,dupcumurmeaz:

instrumentelepentrurecoltaretrebuiesfienunumaisteriledariadecvate,deex.
foartefrecventesteutilizattamponuldevat,nsrecoltareacutamponartrebuisfierecomandat
doarrecoltriiitransportuluip.p.=secreiedelasuprafaamucoaseloritegumentelorculeziuni
vatapoateconinesubstaneinhibitoarepentrumicroorganisme
cantitateadep.p.recoltabilestemic
microorganismeleileucocitelermnnproporiemarepevatinupotfiuor
transferatepefrotiu,mediudecultur
pentruanumitemicroorganisme(ex.Bordetellapertussis)utilizareatamponuluicuvat
estecontraindicat
recipientelepentrurecoltareitransporttrebuiesfienticurate(darprincltiresfie
eliminateoricesubstanechimicecuposibilefectantimicrobian)iapoisterilizate,preferabilprin
autoclavarenchiderearecipientelortrebuiesfieperfect,pentruaprevenioricecontaminarepe
parcursultransportului
recipientelepentrurecoltareitransporttrebuiesfiemarcatecorespunztornaafel
nctsnufieposibilapariiaunorconfuziiceeacesenoteazperecipienttrebuiescorespund
cuceeaceafostnotatpeformularuldesolicitarearespectiveianalize
dateledeidentificareialtedatesemnificaticevorfitrecutenurmtoareledocumente
registrulunitiisanitare/seciei/cliniciicaresolicitanalizarespectiv(ncazulncare
recoltareaprodusuluipatologicsefacenafaralaboratorului)
formularulprincaresesolicitanalizamicrobiologic
registruldelucruallaboratorului
formularulprincareseanunrezultatulanalizei(buletinuldeanaliz)
pentrusimplificare,unsingurformularpoateincludeattparteacorespunztoarea
solicitriianalizeictibuletinuldeanalizmicrobiologic
oaltmodalitatedesimplificarearputeafireprezentatdenregistrareaelectronica
dateloriutilizareametodelormodernedetransmiterealorexistdoarctevaunitisanitaren
Romniaundesuntutilizateacestemetode
pentrureducereacantitiidedateirespectivasigurareaconfidenialitii,serecurgela
numrulunicdeidentificare,ungrupdecifreiliterecarepermitcodificareaiasociereaacte
unuiastfeldenumrfiecruipacientnparte
cutoatecnregistrareadatelorparepentrumajoritateacelorimplicainactulmedicalo
simpliinutilbirocraie,aceastmodalitatedeapreciereestecompleteronatnregistrarea
datelorifluxulinformaiilornsistemulsanitarsuntextremdeimportanteiestenecesarsfie
depusetoateeforturilenvedereaefecturiilornmodcorespunztor(dinpcateoreledestudiu
dedicateacestoraspectesuntmultpreareduseattpeparcursulstudenieictincursul
rezideniatului)
elementeimportantecaretrebuienotificateatuncicndsesolicitoanalizdelaborator
microbiologic
pentruidentificareaprodusuluipatologiccareurmeazafiprelucratsevornotanumele,
prenumele,vrstapacientului(saunumrulunicdeidentificare),datailoculrecoltrii(unitate
sanitar,clinica,secia,salonul)
pentrufacilitareaalegeriiceleimaipotrivitemodalitipentruprelucrareap.p.sevornota
diagnosticulprezumtiv,naturap.p.,examenulsolicitat,datadebutuluibolii,cemedicaie

antimicrobianafostadministratrespectivuluipacient(antibioticsauasocieredeantibiotice,data
nceperiiadministrrii,doze,durat)
nacelaisenssevornotadataiorarecoltrii,dataiorarecepionriinlaborator,
cineicumafcutrecoltarea,cumafostasigurattransportulp.p.
subliniemfaptulc,celmaiadeseavenimncontactcuformulareincomplete/
completateindescifrabil/completatecueroriichiardacarputeapreaincredibil,formulride
genulnumeX,prenumeY,probZ,rugmtoatbateriadeanalizesuntncmultpreafrecventei
artrebuicadefiecaredatsconduclaodiscuiefermcuexpeditorulpncndasemenea
comportamentevorfieliminate,nbeneficiulpacienilor.

Motivepentrucareunp.p.arputeafirespins
delaanalizamicrobiologic
Respingereap.p.artrebuisreprezinteoexcepienactivitateaunuilaboratordeanalize
medicale,darexistanumitemotivecarepotconducelaaceastdecizie.naintedeaprezenta
ctevaexemplenacestsensdorimssubliniemfaptulcactivitateamedicalsedesfoar
ntrunsistemncareexistmaimulteverigicaretrebuiesfuncionezeperfect(fiecarenparte)iar
ntreverigilesistemuluiartrebuisexisteoperfectcolaborare.
nvedereastabiliriidiagnosticuluiitratamentuluicorespunztorncazulunuipacientcare
prezintoanumitboaltransmisibil(infecioas)nuexistosubordonareciocorelarea
activitilor.Attlaboratorulcticlinicaaudendeplinitfunciifoarteimportante,uneoridecisive
pentruviaapacientului.
Pentrucansituaiilelimitfuncionareasfieperfectestenecesaruncontinuuantrenament
attdinpunctdevedereteoreticitehnicdarinceeaceprivetecolaborareadintreparteneri.
Respingereaunuip.p.isolicitareadectrelaboratorarecoltriiunuinoup.p.decalitate,cares
permitstabilireadiagnosticuluimicrobiologic,trebuienelesecaungestnormalatuncicnd
anumitereguliderecoltareitransportsuntneglijate.
nanumitesituaii,chiardacsuntsesizatediferitedisfuncionalitinceeaceprivetemodul
ncarep.p.afostrecoltatitransportatctrelaborator,problemelepotfirezolvateprintelefonsauo
discuiedirect,spreexemplunvedereaidentificriiunuip.p.careafostrecepionatfrdatelede
identificare.ns,ncazulncareaceastdiscuienupoateconducelastabilireaidentitiip.p.,
respectivaprobnutrebuieprelucratnlaborator.
ncazulncarep.p.afostidentificatdarestenecorespunztordinpunctdevederecalitativ,
prelucrareaacestuiaartrebuitemporizat(p.p.meninutla+4C)pnnmomentulncareseia
legturacumediculcareasolicitatanalizaiseanalizeazdacrecoltareaarputeafirepetati
urmatdetrimitereaunuip.p.corespunztor.ncazulncareonourecoltareesteposibilprimul
p.p.sendeprteazisevaprelucraaldoilea.ncazulncarenuesteposibilonourecoltarei
seestimeazcprelucrareap.p.chiarnecorespunztorpoateaducevreunbeneficiupacientului
examinat,sencearcobinereadatelorcarepotfiobinute(curezervelederigoarecarevorfi
menionatenbuletinuldeanaliz).
Iatctevamotivederespingereaunuiproduspatologic:

sputrecoltatpeparcursula24deore
sputcaredefaptconinesalivisecreiidintractulrespiratorsuperior
urinrecoltatcumaimultde60deminutenurm(carenuafostmeninutla+4C)
exsudatfaringian,exsudatnazal,sput,urin,materiifecaleetcpentrucaresesolicit
izolareaiidentificareagermeniloranaerobi
produsepatologicepentrucareesteevidentcontaminarea(deex.datoritunui
recipientdecolectarenecorespuztor)etc.

Transportulproduselorpatologice
nceeaceprivetetransportulproduselorpatologiceestesemnificativpropoziiaurmtoare:
produselepatologicetrebuiesajungnlaboratorncelmaiscurttimpposibil.Fadeaceast
recomandarecucaractergeneral,arfidediscutatoseriedeaspecteconcrete.
Transportulctmairapid/sauprelucrareaimediataunuip.p.recoltatchiarlanivelul
laboratoruluisuntrecomandatefermdatoriturmtoarelorconsiderente:
estenecesarmeninereacondiieiiniialeaprodusuluipatologic(coninutmicrobian,
citologieetc)pentruaputeanregistraoimaginectmaiapropiatdeceeaexistentlanivelul
procesuluiinfecios
diferitelemicroorganismeaudiferitetemperaturioptimepentrusupravieuire
celelaltecondiiinecesaresupravieuiriimicroorganismelordifernfunciedefiecare
grupdemicroorganismenparte(pH,deshidratare,radiaiiUVsauradiaiisolarengeneral,
prezenaoxigenului,prezenasubstanelorantimicrobiene,fenomenedeautolizetc)
microorganismeledinfloraasociatsepotmultiplicancursultransportului(deregul
mailesnedectmicroorganismelepatogene)
utilizareamediilordetransportmodificaspectulcitologicalp.p.
estenecesarprevenireacontaminriip.p.precumiprevenireacontaminriimediului
externsauapersonaluluicareasigurrecoltarea,transportuliulteriorprelucrareap.p.
nanumitesituaii(rezistenamicroorganismuluinmediulexteriorestedeosebitde
redus)sevarecomandarecoltareaiprelucrareap.p.lapatulbolnavuluisau,dacesteposibil,
pacientulvafiinvitatnlaboratorpentrurecoltare
pentrufoartemultedintrep.p.sepoateacceptauntimpdetransportde12ore(repetm
propoziiademaisus:p.p.trebuiesajungnlaboratorncelmaiscurttimpposibil)
ncazulncaretimpuldetransportalp.p.nupoaterespectaceeaceesteindicatse
poaterecurgelaconservareaacestuiadupcumurmeaz
meninerealatemperatursczut(containerizotermcugheala0Csaufrigiderla
+4C)demenionatcNeisseriameningitidis,Neisseriagonorhoeae,Haemophilusinfluenzaeetc
nurezistlaacestetemperaturi
utilizareaunuimediudetransport(CaryBlair,Stuartetc/vezicapitolul9)
adugareadepenicilin,streptomicinicloramfenicolatuncicndseurmrete

izolareaunuifung(ageniietiologiciaimicozelorcutanatesuperficialepotrezistampachetaten
hrtiesteriliintrodusentrocutiePetripnla48deorefrsnecesiteadugareade
antibiotice)
aspirareap.p.lichidnsering,cueliminarearapidabulelordeaerinchiderea
seringiicuajutorulunuidopdecauciucsterilncareintroducemimediatacul(atenielamanevrarea
aculuideseringncondiiilerecoltriiunuiproduspatologicuman/riscdenepareitransmiterea
altorinfeciiex.HIV)atuncicndurmrimizolareauneibacteriianaerobecarearputeasupravieuin
acestcazcirca30deminuteetc
transportulctrelaboratorsevarealiza
numaidectreuncurierinstruitnacestscop
nrecipienteetanepecaresevalipipictogramapentruriscmicrobiologic
iarncazulncarep.p.trebuieexpediatprinpotsevorrespectanormativelelegalen
vigoareprecumirecomandrilespecialerecunoscutelanivelinternaionaldintrecarecelemai
utilizatesuntelaboratedeWorldHealthOrganization(WHO),CenterforDiseasesControland
Prevention(CDC)sauNationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards(NCCLS)cumeniunea
cprimele2potfiobinutenmodgratuit.

Exemplederecoltareitransportpentructeva
produsepatologice
1.Exsudateoticesaunazale
pacientulstpescaun,cufaaspresursadelumin(preferabilluminanatural)
utilizmtampoanecuvatobinuiteuorumezitecusoluiesalinfiziologicsteril,
cevamaimicidectncazulrecoltriiexsudatuluifaringian
untamponvafiutilizatpentruexamenmicroscopicdirect
untamponvafiutilizatpentrunsmnarepemediidecultur
ncazulsuspicionriidifterieisevorutiliza3tampoane
tamponultrebuiencrcatctmaibinecup.p.(lrotimrelativfermpesuprafeeleunde
esteprezentp.p.)
estedepreferatutilizareaimediatap.p.iarncazulncareacestlucrunuesteposibil,
tamponulvafitrimisctrelaboratornmediudetransport
2.Exsudatulfaringian
serecolteazpreferabildimineaanaintecapacientulsmnnceifrssefisplat
pedini,frsfiutilizatgargarismecudiferitesoluii(iardacacestecondiiinuaufostrespectate,
recoltareasevafacedupminim4ore)
pacientulstpescaun,cufaaspresursadeluminigtulnuoarextensie
neaezmpuinlateralfadepacientpentruaevitacontaminareacupicturieliminate
ncursulunuieventualaccesdetuse(depreferinvompurtamasciochelari)
deprimmbazalimbiicuajutorulunuiapstordelimbsterilincondiiideiluminare
adecvatexaminmfaringeleposterior,pilierii,amigdalelepentruasesizacaresuntzonele
inflamate(roii,cudepozite,ulceraiietc)ieventualeledepozitepurulente

utilizmutilizmtampoanecuvatobinuite
untamponvafiutilizatpentruexamenmicroscopicdirect
untamponvafiutilizatpentrunsmnarepemediidecultur
ncazulsuspicionriidifterieisevorutiliza3tampoane
solicitmpacientuluispronunevocalaAiprintromicaredetergere,circular,
ferm,recoltmsecreiadelanivelfaringian,amigdalianinsistndnzoneleundeexistulceraii,
depozite(ncazulncareseremarcprezenauneifalsemembraneodetamcugrijnspre
periferieirecoltmsecreiacareexistsubaceaststructur)
trebuiesevitmatingereabazeilimbiisauapalatuluimoale
estedepreferatutilizareaimediatap.p.,sauncelmult13orencazulncareacest
lucrunuesteposibil,tamponulvafitrimisctrelaboratornmediudetransport

3.Sputa
ndiagnosticulmicrobiologicalinfeciiloracutealecilorrespiratoriiinferioare(IACRI)se
potexamina
prelevatecaresepotcontaminancursulrecoltriicuflorabacteriannormal:sput,
tamponnazal/faringian,aspiratnazal/faringian,aspirathipofaringian,produsrecoltatprin
bronhoscopiesimpletci/sau
prelevatecarepermitevitareacontaminriiorofaringiane:aspirattranstraheal,aspirat
transtoracic,aspiratbronhoscopicprincateterprotejatcucanuletelescopate/lavajbronhoalveolar,
biopsietransbronic,biopsiepulmonarpetoracedeschis,aspiratpleural,hemoculturi
cutoatecestecontaminatcufloranormalorofaringian,sputareprezintprodusul
patologicrecoltatcelmaifrecvent,nmajoritateaIACRI.Sepotobineprobecalitativ
corespunztoarenmomentulncarepacientulseprezintnunitateasanitar(esterecomandabil
sserecoltezeprimasputeliminatmatinalinniciuncazsputadin24deore).Pacientul
trebuiesneleagdiferenadintre"aexpectora"i"atuiiscuipa".
nainteaprelevriiserecomandperiajulsimplualdinilor,cltireaenergicaguriii
gargaracuap(saucusoluiesalinfiziologic)
dacprobaapareconstituitnprincipaldinsaliv,trebuiessolicitmimediatpentru
prelevareauneinoiprobecarespermitulteriordefinitivareadiagnosticului.nIACRIoprob
mucopurulentnvolumde23mlarputeafisuficient.
stimulareaexpectoraieiprininhalareadeaerosolicalzicusoluiesalin(3%)ofer,de
regul,probecitologicnesatisfctoare(sputaindusarputeafiutilnizolareaPneumocystis
carinii).ncazulncaresepresupuneoinfeciemycobacteriansaufungicesterecomandat
recoltareaiprelucrareaa3produse,n3zileconsecutive.
splareasputeiintensmucopurulente(n3bisuccesivedesoluiesalinizoton)
reducecontaminareaorofaringianfrainfluenasemnificativconcentraiabacterieiinfectante
prinsntramafibrinoasaprobei.Fluidifierea(deex.cuNacetilLcistein)permiteomogenizarea
produselorpatologiceserealizeaznctevaminute.
ncazulsuspicionriiuneiinfeciifungice,probelefluideseconcentreazprin
centrifugare20deminutela3000rot/min.,apoiseexamineazsedimentul.Dinprobelebiopticese
disecmicifragmentesuspectecuvolumedecirca1mmcaresuntapoiexaminatela

stereomicroscop(mrire30).esutulcazeos,fibrosigrsimeaascundnmodfrecventhifeleiar
tratareacuKOHnuclarificpreparatulfiindnecesardisociereaiomogenizareaprobei.
produselepatologicerecoltatepentrudiagnosticulmicrobiologictrebuietransmise
promptctrelaborator(preferabilnmaxim1or,acceptabiln12ore)
produselerecoltatentrunrecoltorsterilde50200ml,cucapaccarepermiteo
nchidereetan,suntetichetateiexpediateimediatlalaboratorpentruafiexaminate.Nuexist
modalitioptimedeconservareaprobelor.Meninerealaotemperaturde4Cprevinemultiplicarea
contaminanilor,conservuniipatogeni,darscadepnlaanulareansadeizolareaaaltora(ex.H.
influenzae,N.meningitidis).
utilizareaunuimediudetransportperturbraportuldintrebacteriiireperelecitologice
aleprobei,esenialepentruapreciarecalitiiprobeiiinterpretarearezultatelorsputoculturii,darn
cazulncareseapreciazcsevadepitimpuldetransportrecomandatsepoateutilizamediul
StuartsauAmies.ncazulncareseurmrete,spreexemplu,izolareaM.pneumoniae,cultivarea
trebuiefcutctmairapidprodusulpatologicpoateficonservatmaxim4orenlipsaunuimediu
specialipnlamaxim24deoredacseutilizeazmediuldetransportpentrumolicute.ncazul
ncarearfinecesaroconservareprelungit,estenecesarutilizareauneitemperaturide70C(n
niciuncaztemperaturacongelatoruluiobinuit).
4.Puroiul
existnumeroasecondiiiclinicencareaparsupuraii(superficialesauprofunde)iar
tehnicaderecoltarevariaznfunciedeorigineapuroiului(arsuriiplgisuprainfectate,abcese,
flegmoane,fistuleetc)
esterecomandatcapentrurecoltaresfolosimtampoanecuvatsterilenumaincazul
ncarenuavemoaltsoluie
puroiulpoatefirecoltatcuansabacteriologic,pipetaPasteur,prinbiopsiere,chiuretare
sau,atuncicndestevorbadecoleciiprofunde,prinpuncieiaspirare
nspecialpentrusituaiilencarevomrecoltap.p.dintrocolecieprofund,colaborarea
ntreclinicilaboratortrebuiesfiefoartebun
atuncicndsuspicionmoinfeciecumicroorganismeanaerobesuntnecesarepregtiri
specialeicelpuinutilizareaseringiicaresenchidecudop(vezimaisus)existgermeni
anaeobicarepotfidistruinctevasecundedecontactcuoxigenul
transportulctrelaboratorsevarealizautilizndmediidetransportsaucontainere
speciale(pentruasigurareaanaerobiozei)p.p.trebuiesfieprelucratn12ore
5.Materiilefecale(vezicapitolul28)
6.Urina(vezicapitolul29)
7.Sngele(vezicapitolul31)
8.Lichidulcefalorahidian
serecolteazncazulsuspicionriiprezeneiunuisindrommeningeal,dupexaminarea
funduluideochi(verificmpresiuneanarteracentralaretinei,semnedestazpapilar)
suspiciuneaesteridicatdemediculdespecialitate(boliinfecioase,neurologie,
medicininternetc)iarrecoltareasevafacelapatulbolnavuluidectremediculcareare
competenadeaexecutaaceastmanevr(ex.prinpuncielombar)
tehniciledeasepsietrebuiesfieriguroasentoatesituaiile,darncazulrecoltriiLCR
ateniatrebuiesfieimaisporit

chiardacacestmanualdelucrripracticeseadreseaznumaiinfeciilorbacterienei
fungice,trebuiesprivimlucrurilenansamblulloridreptexemplu,snuuitmcexist
meningiteinfecioaseimeningiteneinfecioaseiarmeningiteleinfecioasepotfifungice,bacteriene,
parazitare,virale,prionicenplus,pentruelucidareaetiologieiuneimeningiteestenecesar
efectuareaunorexaminribiochimiceadiacentecelorcitologiceimicrobiologiceastfelncteste
dedoritrecoltarea(laadult)auneicantitide510mlLCRrecoltareap.p.esteinvazivivatrebui
sfimnstaresexecutmtoatetestelenecesarefrasolicitarepetareapuncieilombare
recomandmrecoltareaLCRn23tuburisterile(2tuburivorficentrifugateiardinal
treileatubsevorrealizatestelebiochimiceialtetesteutilepentruasugeraetiologia)dacLCR
estefrancpurulent,examenulmicroscopicdirectsefacefrcentrifugare
nmodideal,LCRtrebuieprelucratimediat,cualtecuvinterecoltareaiprocesareap.p.
trebuiesnceaplapatulbolnavuluirecomandmcapelngtrusanecesarmanevreide
recoltaresavemladispoziieospirtier,stativepentrueprubete,mediideculturdiverse
(agarsnge,Lwenstein,Sabouraudetc)
dacLCRurmeazafitransportat,transportultrebuiessefacctmairapidilao
temperaturapropiatdetemperaturacorpuluiuman(nniciuncazla+4CattHaemophilus
influenzaectiNeisseriameningitidis,agenietiologicirecunoscuiaimeningitelorbacterienesunt
distruiprinrefrigerare)
unalmotivnfavoareaunuitransportioprelucrarefoarterapidaLCRestereprezentat
destudiulcitologicalp.p.imaiprecisdenumrarealeucocitelorpolimorfonuclearecarenceps
fiedistrusennumrsemnificativncdinprimele3060minuteduprecoltare
9.Secreiirecoltatedelanivelulaparatuluigenital
existmaimultetipuridesecreiicarearputeafirecoltatenfunciedemanifestarea
clinicnmaterialuldefavomdiscutadoaropartedintreacestea
ncazulsecreieiuretrale,labrbat
recoltareap.p.trebuiessefacdimineaa,naintedemiciune,saulacelpuin2ore
dupaceastancazulncarepacientulnuseprezintdimineaainuesterespectatcondiiade
maisusiardup2oredelamicionaresecreiaestencantitatepreamic,ivomrecomandas
consumectmaipuinelichidenrestulzileiisrevinndimineaaurmtoare,naintedemiciune
suntnecesaretampoanedevatsterile(untamponpentruexamenulmicroscopicial
doileapentrucultivare)sau,alternativoansbacteriologicsterilesterecomandabilcaansas
aibfirulibucladeplatin(sauarputeafioansbacteriologicdeunicntrebuinare)
seobservpenisulimeatulurinarprecumidacexistsecreieuretral
dacexistsecreieuretral,aceastaesterecoltatcutamponul(saucuansa)
ncazulncarenuseevideniazsecreieuretralnmodspontan,cumnaprotejatde
omnudelatex,exprimmuretrautiliznddegetulmareiindexulirecoltmsecreiacare
apare
dacniciprinaceastmanevrnuputemobinep.p.vomrecurgelarecoltarea
intrauretralcutamponul(saucuansa)
nacestscopsuntnecesaretampoanededimensiunimaimici,preferabildinalginatde
calciu(saudacronnsuspiciuneauneiinfeciicuChlamydiaspp.sauMycoplasmaspp.)dup
introducereablnd,pecirca2centimetrilungimeirotireaintrauretralaprimuluitampon,aldoilea
tamponvafiinseratcuaproximativ1centimetrumaiprofund

nsuspiciuneadegonoreeserecomandcultivareaimediatduprecoltarepemediulde
culturnclzitla37Cncazulncareacestlucrunusepoaterealiza,tamponulcup.p.vafi
transmislaboratoruluinmediudetransport(ex.mediulStuartpentruNeisseriagonorhoeaesaualte
variantepentruChlamydiaspp.sauMycoplasmaspp.)
ncazulsecreiilorcervicale,lafemei
recoltareasevafacepreferabilnprimele10ziledupciclulmenstrual,pemasa
ginecologic,dupintroducereavalvelorginecologiceiexaminareavizualavaginuluiicolului
uterin
dacseremarcosecreiepurulent,cuajutorulunorcompresesterilesendeprteaz
secreiadelaniveluicoluluiextern
folosim3tampoanesterileintroduseirotiteuor12centimetrincoluluterin(2dintre
tampoanelevomutilizapentrufrotiuriGramiGiemsaiaraltreileapentrucultivareprocedndaa
cumammenionatmaisus).
10.Diferitep.p.recoltatensuspiciuneaunorinfeciifungice
ninfeciilefungice,nfunciedelocalizaresepotrecoltap.p.foartevariate
spreexemplu,nmicozelecutanatesuperficiale
dupantiseptizarealeziuniicualcoolmedicinal(70)raclmtegumentuliutilizm
pentruexaminarescuameleproduse
attscuamelectialtestructuri(firedepr,fragmentedeunghieetc)se
mpacheteaznhrtiesterilcareseintroducentrocutiePetriisetrimitepentruprelucrarei
examinarenlaborator(nmaxim48deore)
nmicozeleprofunde,nfunciedelocalizare
recoltmp.p.iltransmitemctrelaboratoravndgrijsprevenimdeshidratarea
produsului
serecomandprelucrareaiexaminareaimediat(uniifungisuntfragiliestededorits
putemevaluasituaiafungilorfoarteaproapedemomentulrecoltriipentruaputeanelegecarea
fostsituaiainvitro)
iarncazcontraradugmpenicilin,streptomicinicloramfenicolpentruinhibarea
multiplicriibacterieneimeninemp.p.la+4C(supravieuirealaaceasttemperaturdepindede
fungulimplicatipoatevariadelaorela2sptmni,aacumsentmplncazulunorfungi
dimorfi).
Aacumammenionat,dateleprezentatenucuprindtoateposibilitileivariantele.Am
ncercatsdmdoarctevaexemplecaresuntorientative.Pentruceiinteresaiexistmanuale
dedicateexclusivrecoltriiitransportuluiproduselorpatologice,nmicrobiologie.
Pentrutreidintrep.p.amalesoaltmodalitatedeprezentare.Recoltareaurinii,materiilor
fecaleisngeluivafidiscutatnparteaspecial.

7. Preparate microscopice, frotiuri i principalele

coloraii utilizate n microbiologie

Microorganismelestudiateaudimensiunifoartemici,deordinulmicronilor,astfelnctpentru
examinarealorestenecesaromriredecirca1.000X,aacumvomdiscutaincapitolul
urmtor.Existdiferitetehniciprincaresepoatepunenevidenprezenaunormicroorganisme
ns,demareutilitateesteexamenulmicroscopiccaresepoateadresaunorpreparate
microscopiceproaspete(umede,ntrelamilamel)sauunorfrotiurifixateicoloratenfunciede
suspiciuneadiagnostic,p.p.examinatetc.
nschemageneraldediagnosticmicrobiologic(direct)vomexaminamicroscopicprodusul
patologic(etapaa2a)saucoloniaaprutpemediuldecultur(etapaa4a,punctulb,
identificareapebazacaracterelormorfotinctoriale).
Uneoriexamenulmicroscopicestedecisivpentrudiagnostic,alteoriareunrolorientativ,ns,
chiardinaldoileaandestudiuarfibinecaviitoriimedicisneleag,reiniulteriorsaplice
celenvate,indiferentdespecialitateapecareovorurma.

Preparatemicroscopiceproaspete(umede,native,ntre
lamilamel)
estedepreferatsfolosimlameilamelenoisupuseurmtoarelorprocedurisuccesive
(imersarenamestecsulfocromicctevazile,splare,cltire,pstrarenalcool50%)
lameleseusuc(folosimocrpcurat)apoisedegreseazsuplimentarprinflambare
(treceredectevaoriprinflacrabeculuiBunsen)
depunempelamopicturdinprodusulcareurmeazafistudiat
dacprodusulpatologicareconsistenlichidian(ex.urin,sedimenturinar,materii
fecale,LCR,serozitatedinancrupresupussifiliticetc)vafiutilizatcaatarepentruomaibun
vizualizareputemadugaalbastrudemetilen,lugol,tudeIndia,nigrozinetc
dacculturaesterealizatnmediulichid(ex.pentruLeptospiraspp.)sevautilizaca
atare
dacvremsstudiemspreexemplumobilitateamicroorganismelorcareauformat
coloniipeunmediusolidvomdescrcaoansdincolonientropicturdesoluiesalin
fiziologic,apdistilatsaubulion
dacp.p.esterecoltatntrosuspiciunedemicozsuperficial,pelamademicroscop
sevadepuneopicturdintrosoluie1020%KOHglicerolncaresevadescrcaidispersap.p
dacvremsstudiemaspectulfungilorfilamentoi(mucegaiuri)dintrocolonie,pelam
sevadepuneopicturdesoluielactofenolalbastrucotonncarevomdescrcaunfragmentdin
periferiacolonieirespective
acoperimpicturacuolamel
celmaifrecventpresmuorlamelapentruaeliminaeventualelebuledeaer
ncazulp.p.recoltatntrosuspiciunedemicozsuperficial,nclzimuorpreparatul
printrecerecugrij,de23ori,pedeasupraflcriibeculuiBunsen
dacvremsstudiemaspectulfungilorfilamentoi(mucegaiuri)dintrocolonie,nu
trebuiesmicmsauspresmlamela
nmicroscopiaopticpecmpluminosaezmpreparatulpeplatinamicroscopuluii

examinminiialcuobiectivul10,apoicuobiectivul20sau40(nufolosimobiectivuldeimersie)
sepotfolosiialtetehnicimicroscopice.

Frotiuri(preparatemicroscopicefixateicolorate)
Structurapereteluimicrobiandeterminoanumitafinitatefadecolorani,ceeacepermite
examinareaidifereniereabacteriilorsaufungilornfrotiuri.
frotiurilesepotrealizaporninddelaprodusepatologice(recoltatedelaomsaudela
animaledeexperien)saudinculturamicrobian(nmediulichidsausolid)
frotiultrebuientinsnstratctmaisubire(preferabilnunistrat)
estedepreferatsfolosimlameilamelenoisupuseurmtoarelorprocedurisuccesive
(imersarenamestecsulfocromicctevazile,splare,cltire,pstrarenalcool50%)
lameleseusuc(folosimocrpcurat)apoisedegreseazsuplimentarprinflambare
(treceredectevaoriprinflacrabeculuiBunsen)
Executareafrotiurilordinp.p.cuconsistenfluidsaudinculturimicrobienerealizaten
mediudeculturlichid
dupceamflambatlama,oaezmcuparteaflambatnsus
sterilizmansabacteriologiciateptmsserceasc
prelevmasepticp.p./culturidepunemprodusulncentrullamei
ntindemprinmicridedutevino(dehaurare)peaxullungallameiprodusul
prelevat,nstratctmaisubire,avndgrijsnuneapropiemdemarginilelamei/ntinderease
poatefaceiprinmicricirculare,excentrice
lsmlamasseusucelngbeculdegaz(nugrbimuscareaprineventualetreceri
alefrotiuluiprinflacr)ncazulncareavemndotareundispozitivncarelamasepoateaeza
iuscala+70C,vomutilizaaceastmetod
fixmfrotiulexistmetodechimicedefixare,nscelmaifrecventfolosimfixareaprin
cldur,distrugndnacelaitimpimicroorganismele(careprezintoafinitatetinctorialmai
maredectcelulelevii)
nacestscop,trecemfrotiulprinflacr(aacumamprocedatipentruflambarea
lamei,naintedeexecutareafrotiului)nsdeaceastdatparteapecareamntinsp.p.saucultura
esteorientatnsuscaomodalitatedecontrol,atingemdosulminiiculamaflambatiar
temperaturaatinsprinflambarenutrebuiesfiemaimaredectpecareoputemsuporta
frotiulfixatestegatapentrucolorare
Executareafrotiurilordinp.p.cuconsistensolidsaudinculturimicrobienerealizate
nmediudecultursolid
dupceamflambatlama,oaezmcuparteaflambatnsus
cuajutorulflaconuluicupicurtorsaucuansabacteriologicsterilizatircit
depunemncentrullameiopicturdesoluiesalinfiziologicsauapdistilat
sterilizmansabacteriologiciateptmsserceasc
prelevmasepticp.p./unfragmentdincolonieidepunemprodusulnpicturadefluid
depelam

omogenizmfoartebinep.p./fragmentuldecolonienpicturadefluid
procedmcamaisuspentruntinderea,uscareaifixareafrotiului
Executareaamprentelordeorgan/altep.p.
flambmlama
cuparteaflambatatingemsuprafaadeseciuneaorganuluirespectiv
lamasepoateaplicaipesuprafaadeseciuneaunorprelevatebiopticesauobinute
prinnecropsie
procedmcamaisuspentruuscareaifixareafrotiului

Colorareafrotiurilor
Existfoartenumeroasemetodedecolorareafrotiurilor.Dintreacesteavomprezentadoar
ctevadintrecoloraiilefolositemaifrecvent.
nvedereacolorriiavemnevoiedeotruspentrucolorare(stativdecolorare,coloraniconform
reeteidecolorare,apdistilatsauapcurentpentrusplare,stativdeuscare).
Pentrucolorareafrotiurilordinproduspatologicfolosimcelmaifrecventcoloraiilecu
albastrudemetilen(A.M.),Giemsa,Gramidupcaz,ZiehlNeelsen.nfunciedesuspiciunea
diagnosticip.p.examinatsepotfolosiialtecoloraii(deex.coloraiaGimenezpentru
depistarearickettsiilorpeamprentedeorgandelaanimaleinfectateexperimentalsaucoloraiacu
albastrudetoluidinpentruevideniereaPneumocystiscarinii).
ncazulmultoradintrecoloraiileuzualeaufostrealizatediferitemodificrinfunciede
experienaautoriloriscopulurmrit.Deex.coloraiacuA.Mpoateaveaurmtoarelevariante:
albastrudemetilenLfflerpentrucelemaimultecoloraiisimplesaucaunaldoilea
colorantncoloraiaZiehlNeelsen
albastrudemetilenpolicrompentruevideniereaBacillusanthracisnp.p.,pentru
corynebacteriisaunlocuindcoloraiademaisus
albastrudemetilen(variantaWayson)pentrup.p.,cuosensibilitatemaibundect
utilizareaA.M.Lffleretc.
ncursullucrrilorpracticeprecuminmanualuldefasevadiscutanumaicteovariantcu
referirelaprincipalelecoloraiifolositenmicrobiologie.Ceiinteresaiauladispoziiepentrustudiu
unbogatmaterialteoreticiardupncheiereaantrenamentuluipersonalnceeaceprivete
realizareadefrotiuriicoloraii,fiecarevaputeaalegeovariant,aplicabilnfunciedesituaie.
PentrucolorareafrotiurilorobinutedinculturvomfolosinspecialcoloraiileGram,
ZiehlNeelsenialtecoloraiispecifice,dupcaz(coloraiipentrucili,capsul,sporietc).

Coloraiacualbastrudemetilen
acoperimfrotiulcusoluiedealbastrudemetilen,pentru34minute(nuarerosts
acoperimcucolorantlamanntregime)
splmcuapdistilatsauapdelarobinet
aezmfrotiulnstativpentruuscare(depreferat)saugrbimuscareaprintamponarecu

sugativsauhrtiedefiltru
examinmlamicroscop,notmobservaiile,interpretm

ColoraiaGiemsa
fixareafrotiuluinusefacelacaldcichimic,cualcoolmetilic(deex.timpde1minut)
scurgemlamaiateptmevaporareaalcooluluimetilic
acoperimfrotiulcusoluieMayGrnwald(diluatnpriegalecutamponfosfat),pentru
3minute
nclinmlamaiscurgemsoluiacolorant(careareirolfixator)
acoperimfrotiulcusoluieGiemsa,pentru10minute
splmcutamponfosfat
ateptmcafrotiulsseusuceiexaminmcuunobiectivintermediardaccolorarea
celulelorestemaislabdectceaateptatacoperimdinnoufrotiulcusoluieGiemsa,nc10
minute
splmcutamponfosfat
aezmfrotiulnstativpentruuscare(depreferat)saugrbimuscareaprintamponarecu
sugativsauhrtiedefiltru
examinmlamicroscop,notmobservaiile,interpretm

ColoraiaGram
dilumntrunrecipientfucsina(9priapdistilat/1partefucsin)
acoperimfrotiulcuvioletdemetilsaucristalviolet(violetdegeniandinpunctdevedere
istoric),pentru13minute(nuarerostsacoperimcucolorantlamanntregime)
ndeprtmcolorantul
acoperimfrotiulculugol(mordant,fixator)pentru13minute
ndeprtmlugolul
acoperimfrotiulcuunamestecdealcoolaceton(1parteaceton/3prialcoolde
96)pentruuntimpfoartescurt,78secunde
splminsistentcuapdistilatsauapdelarobinet
acoperimfrotiulcufucsinadiluat1/10pentru1minut
splmcuapdistilatsauapdelarobinet
aezmfrotiulnstativpentruuscare(depreferat)saugrbimuscareaprintamponarecu
sugativsauhrtiedefiltru
examinmlamicroscop,notmobservaiile,interpretm

ColoraiaZiehlNeelsen
Esteocoloraieutilnidentificareaprezeneidebaciliacidalcoolrezisteni(BAAR),
solubilizndperetelebacterianprincretereatemperaturii,facilitndpenetrareacolorantului.
punemfrotiuluscatifixatpeunsuportsituatdeasupratvieidecolorare
acoperimcompletlamacufucsinbazicnediluat(filtratextemporaneu)
trecembeculdegazaprinspesublamaacoperitdefucsin,pnncepeemitereade
vapori(nuatingemtemperaturadefierbere).ncazulncarelamanumaiesteacoperitcompletcu
fucsin,adugmcolorant.Timpuldelucruestede10minute,perioadncarerepetmde3ori
operaiadenclzirealameipnlaemitereadevapori.
splminsistentcuapdistilatsauapdelarobinet
adaugmamesteculdecolorantacidalcool(3mlacidclorhidricconcentrat/97mlalcool

etilic9095),pentru23minute
splmcuapdistilatsauapdelarobinet
recolormcualbastrudemetilen,1minut
splmcuapdistilatsauapdelarobinet
aezmfrotiulnstativpentruuscare(depreferat)saugrbimuscareaprintamponarecu
sugativsauhrtiedefiltru
examinmlamicroscop,notmobservaiile,interpretm

ColoraiaKinyoun
EsteocoloraieutilnidentificareaprezeneideBAAR,frautilizanclzireancursul
etapelordecolorare(coloraielarece).
acoperimlamacompletcuohrtiedefiltrudecupatnacestscop
picurmsoluiedefucsinfenicatKinyounpncndhrtiadefiltrusembibcomplet
iateptm5minute
ndeprtmhrtiadefiltru
splminsistentcuapdistilatsauapdelarobinet
acoperimlamacuamesteculdecolorantacidalcoolpentrucirca30secundevrsm
amesteculdecolorantirepetmoperaiapentrunc30secunde
splminsistentcuapdistilatsauapdelarobinet
acoperimfrotiulcualbastrudemetilen,pentru1minut(nuarerostsacoperimcu
colorantlamanntregime)
splmcuapdistilatsauapdelarobinet
aezmfrotiulnstativpentruuscare(depreferat)saugrbimuscareaprintamponarecu
sugativsauhrtiedefiltru
examinmlamicroscop,notmobservaiile,interpretm

Coloraiifluorescente
Existmaimultevariante,inclusivcoloraiincareseutilizeazanticorpimarcaifluorescent.
VomprezentancontinuarecoloraiafluorescentcuauraminO.Esteocoloraieutiln
identificareaprezeneideBAAR(sensibilitatecrescut).
colormcusoluiedeauraminO(amestecdeauraminO,alcooletilic,fenol,ap
distilat),pentru15minute
splmcuapdistilat
decolormcuamestecdeacidalcool,pentru5minute
splmcuapdistilat
contracolormcusoluiedepermanganatdepotasiu,pentru2minute
splmcuapdistilatsauapdelarobinet
aezmfrotiulnstativpentruuscare(depreferat)saugrbimuscareaprintamponarecu
sugativsauhrtiedefiltru
examinmlamicroscop,notmobservaiile,interpretm

ColoraiaGimenez
Esteocoloraieutilnidentificarearickettsiilorpeamprentedeorgandelaanimaleinfectate
experimentalsaunculturiprecumipentruidentificareaincluziilordeChlamydia
trachomatissauChlamydiaspp.
acoperimlamacuxilol,pentru5minute

ndeprtmxilolul
acoperimlamacualcooletilic(96),pentru23minute
ndeprtmalcoolul
acoperimfrotiulcusoluiadefucsinfenicatpreparatdupreetaGimenez,pentru12
minute,fucsinasepicurpefrotiuprintroplnieprevzutcuohrtiedefiltru
splminsistentcuapdistilatsauapdelarobinet
acoperimfrotiulcusoluiedeverdemalachit,pentru69secunde
splminsistentcuapdistilatsauapdelarobinet
aezmfrotiulnstativpentruuscare
examinmlamicroscop,notmobservaiile,interpretm.
ncapitolulurmtor,dupprezentareamicroscopuluioptic(ncmpluminos),vomenumerao
seriededateprivindstructurilecarepotfiobservate.

8. Tehnica examenului microscopic n

diagnosticul microbiologic
Microscopulesteuninstrumentabsolutnecesarnvedereastabiliriiunuidiagnostic
bacteriologicdirect(existtehnicidemicroscopiecarepotfiutileindiagnosticulmicrobiologic
indirect).Existmaimultecategoriidemicroscoape.nmoduzualexamenulmicroscopicutilizeaz
microscopuloptic(microscopiaopticpecmpluminos).nanumitesituaiisepoaterecurgela
microscopiacufondnegru,microscopiacucontrastdefazsaulamicroscopiacufluorescen.n
cazulutilizriiultimelortreitipuridemicroscopestenecesarocamerobscur.Microscopia
electronic,microscopiaprotonicsaualtetehnicisofisticatedemicroscopienufacobiectul
materialuluidefa(acestetehniciarputeafiutilizatencercetare,deex.pentruaevidenia
interrelaiadintrebacterieibacteriofag).

Microscopulopticimicroscopiaopticpecmpluminos
Microscopulopticesteuninstrumentcarepermiteobservareaobiectelormaimicidectcele
carepotfivzutecuochiulliber(sauculupa).Microscopulformeazimaginivirtuale,mritei
rsturnatealeobiectuluicuajutorulunuisistemdelentileobiectividelentileocular.
Distanaminimdintredoupunctealeunuiobiectcaremaipotfivzuteseparatunulde
celalaltprinmicroscopeste:

undelreprezintlungimeadeundaradiaieifolosite,nesteindicelederefraciealmediului
strbtutderadiaientreobiectioculariaruesteunghiuldintreaxaopticirazelecelemai
ndeprtatedeaxcaremaiptrundncnobiectiv.Pentruamicoraaceastdistanirespectiv
pentruambuntiperformanelemicrosopuluiexistmaimultemetodedintrecarevommeniona
dou,utilizateinstudiulmicrobiologic:

utilizareaunorradiaiiculungimedeundlctmaimic(deex.pentruradiaia
ultravioletsepotdistingeobiectecudimensiunide0,15mm)
mediultransparentdintreobiectiobiectivsaibunindicederefracienctmaimare
(aacumseprocedeazncazulmicroscopuluicuimersie).
nmicroscopiaopticpecmpluminosluminaestetransmisdealungulaxuluioptical
instrumentului,prinpreparat,nacestecondiiiobinnduseuncmpvizualputernicluminat,ncare
obiectele,pentruaputeafivzute,sedistingpefondulluminosfieprinopacitate,fieprinculoarea
lor(nspecialduputilizareaunortehnicidecolorareaserevedeacapitolul7).
Potfirealizateimsurtoricuajutorulmicrometrelor(utilemaimultndiagnosticul
parazitologic)micrometrelesuntplcuedesticlpecaresuntmarcatescalefindivizate,de
dimensiunicunoscute,acrorimaginesepoatesuprapunepesteimagineaobiectuluidecercetat.

Prilecomponentealemicroscopuluioptic
Microscopulopticareurmtoareleprilecomponente:
1.Piciorulmicroscopului,alctuitdintromasmetaliccuroldesusinere,pecarese
sprijinplatinamicroscopului.Peplatinamicroscopuluiseaeazapreparatul.Platinaprezintun
orificiucentralcarepermitetrecerearazelorluminoaseiorificiilateralencaresuntprinicavalerii
cuajutorulcrorapreparatulestefixatpeplatin.Cuajutorula2uruburicesegsescsub
platform,aceastasepoatedeplasape2direciiperpendiculare.
2.Tubulmicroscopuluisusineocularuliobiectivul.Tubulpoatefideplasatmairapidi
grosiercuajutorulmacrovizeiimailentifincuajutorulmicrovizei.Lacaptulsuperioraltubului
sepotpuneocularecudiverseputeridemrire,caresepotschimbauor.Frecventutilizmn
microbiologieocularecuputereademrire10x.
Obiectivulsemonteazanrevolver,situatlacaptulinferioraltubului.Revolverulesteun
suportspecialcarepermitemontareamaimultorobiectiveiinterschimbarealorprinrotire.
Obiectivulestecompusdintrunsistemcentratdelentileaezatentruntubmetaliccarese
nurubeazlarevolver.Putereaseparatoareamicroscopuluiestedeterminatdeputerea
separatoareaobiectivuluiacruiputeredemrireestecuattmaimarecuctdistanafocala
acestuiaestemaimic.
Existobiectiveuscate(ex.10x,20xsau40x)icuimersie(ex.90xsau100x).Obiectivele
uscateprimescfascicululdelumincetreceprinpreparatdirectprinaer,astfelcopartedin
razeletrimisedeobiectctrelentilaconcavsepierdprinfenomenuldereflexietotal.Pierderea
razelordelumindatoritacestuifenomensepoatenlturaprininterpunereantrelameli
obiectivauneipicturideuleidecedrusaudealtlichidcuindicederefracieapropiatdecelal
sticleidincareestefcutlentilafrontalaobiectivului,aacumsepetrecencazulobiectivelorcu
imersie,foartefrecventutilizatenmicrobiologie.
3.Dispozitivuldeiluminareesteformatdinoglindicondensator.
Oglindaareroluldeadirijarazeledelasursadeluminspreaxulopticalmicroscopului
prezintosuprafaplaniunaconcaviestefixatpeunsuport,naafelnctsepoateroti
njuruladouaaxeperpendiculare
4.Condensatorulcareesteformatdin23lentilecuajutorulcroraluminareflectatde

oglindesteconcentratasupraobiectuluifasciculululparalelderazedelumincarecadepe
condensatordevineconvergent.Pentruaobineoimagineclar,condesatorulsepoatedeplasape
verticalpncndobiectulsegsetenfocarulfascicululuiconvergentcareiesedincondensator.
Razeledelumin,naintedeintrareancondensator,trecprintrunsuportdefiltreiodiafragmiris
(diafragmdeapertur).Condensatorulcontribuienmodeseniallaluminozitateaimaginii.

Examinareafolosindmicroscopulopticncmpluminos
1.Examinareaunuipreparatproaspt(ntrelamilamel)
Pelamsedepuneopicturdinsuspensiacareurmeazafiexaminat,seacopercuo
lamel,seaeazpeplatinamicroscopuluiisefixeazcuajutorulcavalerilor.
Condensatorulestecobortcirca1,5cmsubplatin,diafragmulestesemideschisiar
obiectivul40Xestecobortpndeasupralamelei(privindprinlateral).
Privindprinoculare,rotimfoartencetmacrovizaridicnduortubulmicroscopuluipnapare
cmpulmicroscopic.Punemlapunctimagineacuajutorulmicrovizeiireglndluminaprin
modificareafanteicondensatorului.
Sepotexaminaastfel:sedimentulurinar,materiifecaleproveninddelaunpacientcudiaree,
suspensiidebacteriicaresepresupunecsuntmobile,preparateumederealizatencazul
suspicionriiuneimicozecutanatesuperficialeetc
sedimenturinar/putemvizualiza:celuleepiteliale(malpighiene,vezicale,uretraleetc),
celulesanguine(leucocite,hematii),cilindriiurinari(hialini,leucocitari,eritrocitari,epiteliali,granulari
etc),cristaleurinare,levuri(eventualnmugurite,cublastoconidii),Trichomonasvaginalisetc
examenulsedimentuluiurinarestefoarteutil
preparatmontatnsoluieKOH/putemvizualiza:levuri(numr,form,dimensiuni),
blastoconidii,atroconidii,pseudohife,microorganismeasociate
preparatcoloratcutudeIndia(coloraienegativ)/putemvizualiza:levuricapsulate,
nconjuratedeunhalouclarpefondulntunecatalpreparatului,ex.Cryptococcusneoformans
ncazulncareseurmretemobilitateamicroorganismelor,trebuiesputemdeosebi
micarearealdemicareabrownian(oscilaiepelocaparticulelor)urmrimrepereleaflaten
vecintateamicroorganismeloretc.
2.Examinareaunuipreparatfixaticolorat
Frotiulseaeazpeplatinamicroscopuluiisefixeazcuajutorulcavalerilor.
Centrmzonapecaredorimsoexaminm.Procedmcamaisusutilizndobiectivul40x
alegemcmpulpecarelvomexaminaulteriorcuobiectivulcuimersie(deex.uncmpncare
sesizmprezenaleucocitelor).
Ridicmtubulmicroscopului,punemopicturdeuleidecedrupelam,nzonapecare
urmeazsoexaminm.Condensatorulesteridicatpnsubplatinamicroscopuluiiare
diafragmuldeschis.
Privinddinlateral,folosimmacrovizaicobormobiectivulcuimersie(90xsau100x)pn
atingemsuprafaalameirealizndcontactulicuuleiuldecedru.Manevratrebuierealizatcugrij
pentruanuspargefrotiul.
Privimprinoculareirotimfoartencetmacrovizaridicndfoartencettubulmicroscopic,pn

prindemimagineacmpului.Cuajutorulmicrovizeipunemlapunctimaginea.
Sepotexamina:morfologiacelulelordinprodusulpatologic,prezenaleucociteloridac
acesteasuntmodificate,prezenabacteriiloridispunereaacestora(ex.intrasauextraleucocitar),
morfologiabacteriilor,morfologiaunorparazii,morfologialevurilor,aspectulfrotiurilordesngeetc
frotiucoloratcualbastrudemetilen(A.M.)/putemvizualiza:bacteriicoloratenalbastru
nchis,ncazulbacteriilorcapsulate,aceaststructurvaapreacaunhalounecolorat,celule
diferite(nfunciedesediulrecoltrii)iceluleinflamatoriipentrucarenucleulaparentroculoare
albastrumainchisntimpcecitoplasmaaparecunuanedealbastrucoloraiacuA.M.permiteo
maibundifereniereadetaliilorstructurale
frotiucoloratGiemsa/putemvizualiza:hematii(rozroii),polimorfonucleareneutrofile
(citoplasmroz,granulaiibrune,nucleuviolaceu),polimorfonucleareeozinofile(citoplasmroz,
granulaiibrune,nucleuviolaceu),limfociteimacrofage(citoplasmalbastr,nucleuviolaceu),
bacteriicoloratenviolet,formetroficedePneumocystiscarinii(nucleurou,citoplasm
albastr),Histoplasmacapsulatumncitoplasmacelulelorfagocitare(levuricoloratenrou),
incluziunideChlamydiatrachomatis(corpusculiireticulaiaparalbatri,corpusculiielementariapar
roii)etc
frotiucoloratGram
ncazulncarefrotiulafostrealizatdinculturpurputemvizualizamicroorganismecu
aceeaiform,aceleaidimensiuni(excepieProteusspp.),oanumitdispoziie,cusaufr
capsul(halounecolorat),grampozitive(coloratenviolet)saugramnegative(coloratenrou),
levurilesecoloreaznviolet
ncazulncarefrotiulafostrealizatdinproduspatologicputemvizualizacelulediferite
(nfunciedesediulrecoltrii)iceluleinflamatoriipentrucarenucleulicitoplasmaaparndiverse
nuanederou,bacteriigrampozitivei/saugramnegative,fibrinilevuricaresecoloreazn
violetetc
frotiucoloratZiehlNeelsensauKinyoun/putemvizualiza:bacilideculoareroie,relativ
fini(ncazulprezeneiBAAR),altebacterii(neAAR),celulediferite(nfunciedesediulrecoltrii)i
celuleinflamatoriideculoarealbastr(toatestructurileneAARaparcoloratealbastru)etcncazul
colorriiunuifrotiudinculturpurvomevidenianumaibacilideculoareroie.

ntreinereamicroscopului
Dupterminareaexamenuluimicroscopictrebuieefectuateurmtoareleproceduri:
nchidemsursadelumin
ridicmcuajutorulmacrovizeitubulmicroscopului
cobormcondensatorul
scoatemlama(saulamailamela)depeplatinamicroscopului
preparateleproaspetelepunemnborcanulcuamestecdezinfectant
preparatelefixate(pecareurmeazslepstrm)seintroducntruncontainercuxilol
(12minute)apoi,dupevaporareaxiloluluisepunntrocutie
tergemlentilaobiectivuluicuimersiecupulpadegetuluisaucuohrtiemoale,

special,pentruaocuradeuleiuldecedru(periodic,vomtergelentilaacestuiobiectivcuun
tifonfoartecuratmbibatnxilol)
curmplatinamicroscopuluiilentilacondensatoruluicutifoncuratmbibatnxilol
acoperimmicroscopulcuohusdeplasticsaupnz,pentrualferidepraf
pentruapreveniefectulnedoritalmultiplicriiunorfungiasuprasistemuluioptic,o
recomandarearfimeninereamicroscopuluintrunambalajdepolietilenmpreuncuosubstan
desicant,spreexemplusilicagel.

Microscopulcufondntunecat(negru)
Pentruacesttipdeexaminareesteutilizatunmicroscopopticobinuitlacareseadapteazo
sursdelumincuintensitatemareiuncondensatorcardioid(cuoglinzisfericeconcentrice),cu
posibilitidediafragmarealuminii.Condensatorulpentrucmpntunecat(fondnegru)oprete
accesulspreobiectivalrazelordelumindirecteiarobiectulesteiluminatoblic.Astfeloparte
dintrerazeledifractateireflectatedeobiectuliluminatoblicptrundnobiectivcareapareluminos
pefondulntunecatalcmpului.
Pentruaevitareflexiatotalarazelor,naintecaobiectulsfieluminat,acestaesteimersat
ntropeliculdelichid(lichiddeimersiecuindicederefraciemairidicat,ex.glicerina).Lamele
trebuiesaibgrosimeade1milimetru(distanafocalacondensatoruluifiind1,2milimetri).
Tehnicadeexaminare
Dupcentrareadiafragmeidecmpfolosindobiectivulcumrire10xicondensatorulpentru
cmpluminos,trebuiesnlocuimacestcondensatorcucondensatorulcardioid.Condensatorul
cardioidestecudiafragmanchis.Ridicmcondensatorulpnlanivelulplatineimicroscopuluii
punempelentilacondensatoruluiopicturdeglicerin.
Pregtimpreparatulproaspt(ntrelamilamel)ilplasmpeplatinamicroscopuluiastfel
nctsvinncontactcuglicerinadepelentilacondensatorului.Fixmpreparatulcuajutorul
cavalerilor.
Examinminiialcuobiectivul10x,apoicuobiectivul40xcobortpnaproapedesuprafaa
lameleipunemlapunctimagineacuajutorulmicrovizei.Cndobinemimagineacurgeriicurentului
delichidtimcamprinscmpulmicroscopic.Utilizndmaidepartemicrovizapunemlapunct
detaliileiapoinregistrmceeaceamexaminat.
Examinarealamicroscopulcufondnegruesteindicatnmodspecialpentruexaminarea
morfologieiimobilitiipentruTreponemapallidumnserozitateadinancrulsifiliticsau
pentruLeptospiraspp.nproduspatologic(ex.urin)saudinmediidecultur.
lichidulclarrecoltatiancrulsifilitictrebuieexaminatnmaxim20minutedup
recoltareputemvizualizaspirocheteluminoase,fine,lungi,cuspireregulate,capeteefilate,cu
micridenurubare,flexie,translaie,pefondnegru
npreparatulproasptcareconineleptospireputemvizualizafilamenteluminoase,
spiralate,foartemobile,cumicridenurubareiflexie,pefondnegru.

Microscopulcucontrastdefaz
Pentruacesttipdeexaminareestenecesarsavemndotareamicroscopuluioseriedepiese

strictnecesare,respectiv:uncondensatorspecialcareincludeoseriedediafragmeinelare,
obiectivedefaz(defaptobiectiveobinuitelacarenplanulfocalsuperiorafostmontatoplac
defazobiectiveledefazsuntgravatecuPh),ocularedecentrare,lampcuintensitate
luminoasmare,filtruverde.
Folosindmicroscopiacucontrastdefazesteposibilobservareaobiectelortransparentecare
prezintvariaiidegrosimesauvariaiialeindiceluiderefracienstructuralor.Suntutilizate
preparatemicroscopiceproaspete.Faptulcacestepreparatenusuntfixateicoloratepermite
examinareaunorcaracteristicicarearputeafialteratencursulacestorprocese.Sepotexamina
structuricitoplasmatice,morfologiacelular,daristructuribacterienesaufungice.

Microscopulcufluorescen
Microscopulcufluorescentrebuiesfiedotatcuurmtoarelepiesespeciale:sursaderadiaii
(deex.olampdinsticldecuarcuvaporideHgcareemiteradiaiiultraviolete),setuldefiltre
(caloric,deexcitaie,debaraj),condensatorulpentrufondntunecat.
Filtreleauurmtoareleroluri.Filtrulcaloricabsoarberadiaiilecaloriceemisedelamp(sursa
deradiaiiemiteattradiaiiultravioletectiradiaiiluminoaseicalorice).Filtreledeexcitaie
permitnumairadiaiilorculungimedeundmic(ex.ultraviolete)sacceadctrepreparatul
microscopic.Acesteradiaiireprezintradiaiideexcitaie.Filtredebarajsuntdefaptfiltrede
proteciepentrucnupermittrecerearadiaiilordeexcitaienocivestreacspreocularirespectiv
spreochiulexaminatorului,ntimpceluminaemisdefluorocromitreceipoatefiperceput.
Filtreledeexcitaieidebarajsuntalesenfunciedefluorocromulutilizat.
Condensatorulmretecontrastulimaginiimaibinedectuncondensatorobinuit.
Pentruexaminareanfluorescenmaisuntnecesarectevaelemente,respectivobiectivele
acromate(cumeniuneacobiectivulcuimersietrebuiesaibdiafragmiris),utilizareaunuilichid
deimersiecarenuseusucuorilipsitdeproprietateadefluorescen(ex.glicerintamponat
neutr)irespectivlamecugrosimeade1milimetru.Estepreferabilutilizareaunuidispozitiv
monocular.

Examinareafolosindmicroscopulcufluorescen
Preparatelemicroscopice(carepotincludebacterii)sunttratatecuflurocromi(colorani
fluoresceni).Fluorocromiisuntcompuiorganicicare,dupiradierecuradiaiiultravioleteabsorb
radiaiaexcitant,intrnstaredeexcitaieiaratuncicndrevinnstareanormalpierdenergia
acumulatemindradiaiiluminoase.DintrefluorocromiamputeaamintiauraminaO,rhodaminaB,
acridinoranjRsautripaflavina.Luminavizibilemisdepindedefluorocromulutilizat(spreexemplu
culoareaestegalbenpentruauraminaO,galbenportocaliepentrucombinaiadeauraminO
rhodaminBetc).
Suntdemenionatnmodspecialacelesubstanecaresepotlegacovalentdeanticorpi,
marcndastfelcomplexeleantigenanticorpcaredevinfluorescente.Atuncicndmarcajulse
realizeazcuizotiocianatdefluoresceinluminaemisvaaveaculoareverdeiardacmarcajulse
realizeazculisaminrhodamin,luminaemisvaaveaculoareportocalie.
Dreptexempluprivindutilizareamicroscopieicufluorescenvommenionaexaminarea

frotiurilorcoloratefluorescentsauimunofluorescentndiagnosticulbacteriologicaltuberculozeisau
alleprei.Alteexemplevorfiprezentatencadrulcapitolului20.

9. Medii de cultur
Populaia=omultitudinedeindiviziaiuneispeciicarehabiteazntrunanumitbiotop.Clona
reprezintpopulaiacarerezultdintrosingurcelulprinnmulirevegetativ.Tulpina=populaia
microbianalcatuitdindescendeniiuneisingureizolrinculturpur.
nfunciedetemperaturadedezvoltare,microorganismelepotfimezofile,psichrofilesau
termofile.Bacteriilestudiatedemicrobiologiamedicalsuntnimensalormajoritatemezofile(au
temperaturaoptimdedezvoltarecuprinsntre3037C).Pentrufungi,temperaturaoptimde
dezvoltareestenjurde28C.
Pentruaidentificaagentuletiologicaluneiinfeciitrebuiecadintrunprodusrecoltatdela
pacientsobinemmaintirespectivulmicroorganismnculturpur,pentrucaulteriorsise
poatstudiacaracterelefenotipicesaugenotipice.Cultivareaesteesenialipentrudeterminarea
sensibilitiilaantibioticeichimioterapice.
Metodeledecultivareabacteriilorsaufungilorurmresctreiobiective:obinereauneipopulaii
microbienesuficientecantitativpentruinvestigaiilepropuse,prevenireacontaminriiprodusului
cercetatcuunmicroorganismstriniizolareafiecreitulpinimicrobieneurmritencazulunui
produsplurimicrobiannculturimonomicrobienedenumiteculturipure.Nuexistunmediuunic,
valabilpentrucultivareaoricruimicroorganism.
Termenulnsmnaredefineteoperaiadeintroducereauneicantitaidegermenintrun
mediudeculturartificial,ntimpcepentruculturilecelulare,ouembrionateimaialesanimale
deexperienfolosimtermenulinoculare.
Cultivareaserealizeazprinnsmnareamicroorganismelorpemediidecultur.Mediile
solidesaulichidecareasigurnutrieniiicondiiilefizicochimicenecesarecreteriiimultiplicrii
senumescmediidecultur.Totalitateamicroorganismeloracumulateprinmultiplicareantrun
mediudeculturpoartnumeledecultur(bacterian,fungicetc).
***
Existofoartemarevarietatedemediidecultur.
Mediiledecultursepotclasificadupmaimultecriterii.nprimulrnd,nfunciedeconinutul

nceluleviiavemladispoziie:
1.Mediinecelulare(artificiale,mediidecultur)
2.Mediicelulare(careincludcelulevii)ianumeanimaledelaborator,oudegin
embrionatesauculturidecelule.
Existanumitemicroorganisme(ex.virusuri,Rickettsii,Chlamydii)carenupotficultivatedect
pesubstraturicareincludcelulevii.Majoritateabacteriilor,fungiiiuneleprotozoaresepotcultiva
ipemediidecultur(necelulare,artificiale).

Gazdelevii(mediicelulare)
Animaleledeexperien
Fiensituaiamicroorganismelorcarenusedezvoltpemediiartificiale,fiencazulncarese
studiazcaractereledepatogenitate,sepotutilizanfunciedespeciamicrobianiscopul
urmrit:oarecelealb,cobaiul,obolanul,hamsteruliiepurele.Pentruproducereadeseruriimune
suntfolosiicai.Animaleledelaboratornecesitcondiiispecialedentreinereiarbiobazatrebuie
srespecteoseriedenormecaresgarantezecalitateaacestorgazdevii.Astfelseexplic
costurileridicatenceeacepriveteacesttipdemedii.
Avndnvederemicroorganismulinoculat,susceptibilitateagazdeiiscopulurmritsepot
inoculaanimalecuvrstediferite(embrioni,nounscui,animaletinere,aduli)pecidiferitede
inoculare(percutanat,prinscarificare,subcutanat,instilarelanivelulanumitormucoase,peros,
intramuscular,intravenos,intratesticularetc).
Aacum,spreexemplu,virulenaMycobacteriumtuberculosisscadepemsurde
microorganismulestecultivatpeanumitemediidecultur(aspectdoveditiprinobinereatulpinii
vaccinaleBCGdeM.tuberculosisvariantabovis),nsensinvers,estenecesaruneoriexacerbarea
virulenei,prinpasajerepetaterealizatepegazdesusceptibile.Alteexemplevorfidiscutaten
capitolelereferitoarelaStreptococcuspneumoniae,Shigellaspp.,Klebsiella
pneumoniae,Treponemapallidum,Rickettsiaspp.,ChlamydiasppiCandidaspp.
Ouldeginembrionat
Areavantajulunuipremaisczut,estenmodnormalsteril(ncondiiileproduceriiacestor
gazdeviinunitispecializate),nuprezintfactoriantimicrobieninperioadancareserealizeaz
nmodobinuitinocularea(la614ziledeincubaie).
Ouldeginestentiexaminatlaovoscoppentruevaluareaembrionuluiiprezeneiunor
eventualemodificrinedorite.ncondiiidestrictasepsieouldeginembrionatsepoateinocula
intraembrionar(intramuscular,intracerebraletc),lanivelulmembraneichorioalantoidian,nsacul
alantoidiansaunsaculamniotic.Oulinoculatseintroducenincubator,la37Cncondiiidebun
ventilaieaaeruluiiumiditatecorespunztoare,pentru1saumaimultezile.Sepoateutiliza
aceastmetodpentruizolareaiidentificareatulpinilorrickettsiene(utilizndmetodeimunologice,
ex.reaciademicroaglutinare).
Culturidecelule
Existposibilitateautilizriiunorculturideorgansauaculturilordeceluledispersate.Acestea
dinurmsepotclasificanculturiprimare,tulpinicelulareiliniicelulare.
Culturileprimarederivdindispersiaenzimatic(deex.cutripsinEDTA)acelulelorunui
organproasptrecoltatipotfimeninuteinvitropentru35pasaje.Tulpinilecelularereprezint

culturicuunsingurtipdecelule(culturiomogene)ipotfimeninuteinvitropentru5060pasaje.
Liniilecelularecontinue(stabile)suntpopulaiicelularecarederivdinesutnormalsaumaligni
potfisubcultivate(respectndindicaiiledinprotocol)nmodnelimitat.Aufostpuselapunctfoarte
multeliniicelularespreexemplu:
liniicelularederivatedinrinichidemaimu(Vero,BSC1,BGMKetc),oarece(McCoy),
ovardehamster(CHO)
liniicelularederivatedincarcinomdecoluterin(HeLa),laringe(HEp2)
liniicelularelimfoblastoide(MT4,H9etc)etc.

PentruChlamydiatrachomatissepotutilizaliniilecelulareBGMK,HeLa,McCoy,
pentruChlamydiapneumoniaesepotutilizatliniilecelulareHeLa,HEp2,pentruChlamydia
psittacisepoateutilizaliniacelularMcCoyetc.Liniilecelularepotfiutileinvedereastudierii
efectuluiunorexotoxine,spreexempluncazultoxinelorprodusedeE.coliO157:H7irespectiv
deShigellashigasepoateutilizaliniacelularVerontimpcepentrutoxineleprodusedeVibrio
choleraeiE.colienterotoxigensepoateutilizaliniacelularCHO.

Mediiartificiale(necelulare)
Mediiledeculturartificialesuntmaiieftine,sepotpreparamaiuor(folosindreetefoarte
asemntoarecelordebuctriesaualtevariantedesprecarevomdiscutapescurtncontinuare)
i,frafiideale,suntcelmaifrecventutilizatenpracticatmicrobiologic.
Condiiiimpusemediilordeculturartificiale:
sfiesterile,
sfienutritive(sconinfactoriidecreterenecesari),
saibunanumitpH(celmaiadeseantre7,27,6),
saiboanumitpresiuneosmotic,
saibumiditateafavorabilmultiplicriigermenilor
altecondiii.
Clasificareamediilordeculturartificiale
Mediiledeculturartificialesepotclasificaduposeriedecriterii.
Dupstareadeagregare,mediiledeculturartificialepotfi:
solide(agar/geloz,agarsnge,AABTL,ADCL,BordetGengou,Chapman,Lffler,
Lwenstein,MuellerHinton,Sabouraud,TCBS,TSIetc)
lichide(appeptonatalcalin,bulionMuellerHinton,bulionnutritiv,bulionsnge,bulion
selenit,buliontioglicolat,Middlebrook7H9,O.C.S.T.etc)
semisolide(CaryBlair,MIU,Stuartetc)
Dupcomplexitateaingredientelor,mediilepotfi:
simple(agar,bulionsimpluetc)
complexe(agarsnge,gelozchocolat,agarcufactoriXiV,BordetGengou,
MuellerHintonetc)
Dupscopulurmritmediiledeculturartificialepotfi:
detransport(appeptonatalcalin,CaryBlair,Stuartetc)
deizolare(agarsnge,BordetGengou,Lffler,Lwenstein,Sabouraudetc)

deidentificare(TSI,MIU,truseAPIetc)
deconservare(agarnutritivncoloanetc)
Dupconinutulnap,mediilepotfi:
cuumiditateobinuit
mediiuscate(deshidratate)nscopulconservrii
Mediispeciale:
elective(Lffleretc)
selective(agarsngeaziddesodiu,BSA,Chapman,MacConkey,Tinsdalecuteluritde
potasiu,mediicuantibioticeetc)
dembogire(appeptonatalcalin,bulionselenit,O.C.S.T.etc)
difereniale(AABTL,ADCL,agarsnge,MIU,TSI,TCBSetc)
Existialtecriteriideclasificare.

Mediulelectivconineingredientelecareconvincelmaibinedezvoltriiuneianumitebacterii
(deexemplumediulLffler,cusercoagulatdebou,pentrubaciluldifteric).
Princoninutulsunsubstaneantimicrobiene,mediulselectivinhibdezvoltareaaltorbacterii
dectceaacreiizolareseurmrete.Deexemplu,mediulcuteluritdepotasiupentruizolarea
baciluluidiftericsaumediincareincludemantibiotice(fadecarebacteriacaresedoreteafi
izolatesterezistent).
Mediuldembogirefavorizeaznmulireaanumitorbacteriipatogene,inhibnddezvoltarea
floreideasociaiedintrunproduspatologic.Funcioneazconcomitentcamediuselectivica
mediuelectiv.
MediuldiferenialconineunindicatordepHiunanumitsubstrat(deexempluunzahar)care
poatefisaunumetabolizat,determinndmodificareapHuluiiaculoriiindicatoruluisau
modificareaaspectuluiculturii.Deexemplu,agarulcualbastrudebromtimollactozat(AABTL)
permitedifereniereabacteriilorlactozopozitive(cumesteE.coli)debacteriilelactozonegative
(Shigella,Salmonellaetc).Alteexemple:ADCL(agardezoxicolatcitratlactoz),TSI(3zaharurii
fier),MIU(mobilitateindoluree).

Iniial,toatemediiledecultureraupreparatenlaborator,diningredientelestabiliteconform
reetei.Etapelegeneralepentruproducereaunuimediusuntasemntoare:
cntrireaingredientelor
dizolvareanapdistilatsauapdeionizat
verificareapHuluiiajustarealapHulcorect
filtrarea
sterilizarea(deregulprinautoclavare)
repartizareantuburi,flacoaneetc.

nmomentuldefafoartefrecventserecurgelacumpraredemediideshidratate,situaien
careestenecesardoaradugareaapeidistilate,demineralizatesaudistilateidemineralizate
(conformrecomandrilorproductorului),condiionareaisterilizareaprinautoclavaresaumetoda
recomandatpentrumediulrespectiv.

Existdeasemeneamediigatapentruutilizare,condiionatenplciPetrisautuburi.
Indiferentdeformadecondiionareamediilordeculturprecumiindiferentdemodulde
procurarealacestora,laboratorulcareleutilizeaztrebuieslesupuncontroluluidecalitate.
Spreexemplu,pentruatestasterilitateamediuluiagarsnge,incubm2plcila37Ctimpde
48deorenutrebuiesaparmodificrimacroscopice.Pentruatestaperformanamediului
(eficienabiologic)utilizmpeoaltplac,ipecteojumtatedeplac,vomcultivaotulpinde
coleciedeStreptococcuspyogenesirespectivotulpindecolecieStreptococcuspneumoniae
incubmplacaPetripentru1824orela37Ciapoianalizmdezvoltareaculturii,caracterele
coloniilorirespectivcaracterelehemolizeiproduse.
ngeneral,mediiledeculturdupproducereipnnmomentulutilizriisuntconservatela
adpostdeluminasolar,+4C,nfoliedeplasticnchisermetic.Mediilepentruanaerobi(bulion
tioglicolat,altemedii)sepstreazndulapuri,lantunericitemperaturacamerei.
Descrieresuccintpentruunelemediimaifrecventfolosite
Agarsnge
Includeagarnutritivbazcaresedizolvlatemperaturridicatiprinagitarenapdistilat
autoclavm(15minutela121C)iapoircimpnla50C.Laaceasttemperaturadaugmn
proporiede5%sngeledefibrinat(sngedeberbec,cal,bousaudeiepuresngeledeomar
puteafiutilizatnumaidacnuexistoaltposibilitate,folosinddeexemplusngecareadepit
limitadevalabilitatentrobancdesnge).Distribuimmediulncondiiiaseptice,nplciPetri.
Poatefimeninutla+4Cpnla4sptmni.
Agarchocolat
Procedmcamaisus,pnlaobinereaamesteculuideagarsnge.Introducemflaconulcu
mediunbaiedeapimeninemtimpde10minutela80Castfeleritrocitelevoreliberafactorii
nutritivinecesaridezvoltriiunorbacteriimaipretenioasedinpunctdevederenutritiv.Cnd
temperaturarevinela50CturnmmediulnplciPetri.Sepoateconservalatemperatura
frigideruluipentrunumaimultde4sptmni.
Amies
Includeagar,tioglicolatdesodiu,crbunefarmaceuticneutru(pentruafacilitasupravieuirea
microorganismelorfragile,deex.Neisseriagonorrhoeae)iosoluietamponatdesruri
anorganice.Nuconineindicatorredox.Estesterilizatprinautoclavareipoatefimeninutla+4C
timpde12luni.
Esteunmediudetransportcarelimiteazimultiplicareaunoreventualicoliformide
contaminare(ceeacenuserealizeazprinfolosireamediuluiStuart).
Appeptonatalcalin
EsteunmediuutilizatpentrutransportulprobelorncaresesuspecteazprezenaVibrio
cholerae.Includepeptoniclorurdesodiudizolvateprinnclzirenapdistilat,cuajustarea
pHuluilaovaloarede8,69,0.Mediulesterepartizatntuburi.Sterilizmprinautoclavare(15
minute,121C).Valabilitateaestedecirca6luni(latemperaturade4C).
Bulionselenit
Esteunmediudembogire,utilizatpentruizolareaSalmonellaspp.Includeprintrealte
componenteselenitaciddesodiu.Datoritriscuriloracestmediunuvafipregtitdefemei
nsrcinateiarceicarenproducvoraveagrijsnuinhalezesaunghitaceastsubstan.
Sterilizareamediuluiturnatntuburisefacenbaiadeaplatemperaturadefierbereinuprin

autoclavare.Sepoateconservalatemperaturafrigideruluitimpde6luni.
CaryBlair
Includeagar,tioglicolatdesodiuiosoluietamponatdesrurianorganicedizolvate(prin
nclzireiagitare)napdistilat.Estesterilizatprinautoclavareipoateficonservatla
temperaturafrigideruluimaimulteluni.
CaryBlairesteunmediudetransportnspecialpentrugermenigramnegativi.
LwensteinJensen
Reprezintmediulclasicutilizatnmycobacteriologie.Include3componenteprincipale:o
soluiedesruriiamidon,soluiadeverdemalachitiomogenizatuldeou(proaspeteibine
antiseptizate).Dupfiltrareprodusulserepartizeazntuburi(cucapacnurubat,inndcontde
timpullungdeincubare,28sptmni).Mediulestecoagulatnpant,la85Ciduprcirese
poatemeninelatemperaturafrigideruluictevaluni,pnlautilizare.
MacConkey
Esteunmediuslabselectivodiferenialcareincludehidrolizatdegelatin,hidrolizatde
cazein,lactoz,sruribiliare,clorurdesodiu,rouneutru(indicatordepH),cristalvioletiagar,
dizolvatenapdistilatiautoclavatetimpde15minutela121C.Poatefimeninutla+4Cpn
la4sptmni.
Mediipentruanaerobi
Existmaimultetehnicipentruaasiguracondiiiledeanaerobioz.Relativfrecventse
utilizeazmontareaplciiPetri,careconinedejamediuldeculturrcitinsmnat,rsturnat
pecapaculpropriu,pecaresegseteunpliculecareconineamestecreductor(pirogalol,talc,
carbonatdepotasiu).Utilizmparafinnclzitpentruaetaneizaplaca.Dupsolidificarea
parafinei,mediuldeculturesteincubatnvedereaobineriicoloniilor.
Mediipentrufungi
Vomdiscutapescurtdoarunmediumaifrecventutilizat,respectivmediulSabouraud.Acesta
includeglucoz,digestiepancreaticdecazeiniagarcaresedizolvprinuoaragitare,lacald,
napdistilat.DupajustareapHuluila5,6urmeazfierbereaifiltrareamediului,lacald.Apoi
arelocrepartizareanplciPetrisauntuburiiacesteaseautoclaveaztimpde15minutela
121C.naintedeutilizare,plcilecumediuSabouraudpotfistocatelatemperaturafrigiderului
pentrucirca2luni.Demulteoriacestmediudevineselectivprinadugaredeantibiotice
(cloramfenicol,gentamincinetc).
DespremediilemultitestTSI(triplesugariron)iMIU(mobilitateindoluree)vomdiscutan
cadrulcapitolelor12i28.
Stuart
Includeagar,tioglicolatdesodiu,glicerofosfatdesodiu,clorurdecalciuialbastrudemetilen,
dizolvateprinnclzirelatemperaturadefierberenapdistilat.Estesterilizatprinautoclavarei
poatefimeninutla+4Ctimpde23luni.
Esteunmediudetransportuniversalbacteriilepotsupravieui13zile.

10. Tehnici de cultivare

Tehniciledecultivaresefolosescpentruobinereadecoloniiizolateprinnsmnarea
produsuluipatologicpemediisolideipentrurepicareacoloniilorizolatenvedereaobineriide
culturpur,precuminaltesituaii.

Pentruacorelanoiunilepecarelevomprezentacuceeaceafostprezentatncapitolele
anterioare,facemurmtoarelemeniuni:
ncapitolul5amdiscutatschemageneraladiagnosticuluimicrobiologic
acestdiagnosticnupoatefirealizatnlipsacunotinelorprivind
conduitanlaboratorianormelordeprotecieamuncii(capitolul2)
echipamentuliaparaturanecesare(capitolul3)
dezinfeciaisterilizarea(capitolul4).
Toateacesteatrebuienelesencontextuluneiactiviticaresprevinerorile,srealizeze
proteciapacienilor,spermitcompararearezultatelorlanivelnaionaliinternaional,s
contribuielarealizareauneistandardizrinmicrobiologiaclinicromneasciscreasc
ncredereatuturorpartenerilordinsistemulsanitardinaranoastr(capitolul1).
Porninddelaacestenoiunidebaz,ncapitoleleurmtoareamdiscutat:
primaetapadiagnosticuluidirect(bacteriologicsaumicologic),ncapitolul6
utilizareaexamenuluimicroscopicnadouairespectivnapatraetap(deidentificare)
adiagnosticuluidirect(capitolele7i8)
substraturilepecaresepoaterealizaatreiairespectivapatraetap(ctevadintre
caractereleexaminate),ncapitolul9.
ncapitoluldefavomaveanvedereopartedintretehnicileindispensabilediagnosticului
microbiologicngeneral,subliniindutilizareaacestoranatreiaiapatraetapdediagnostic
ncapitoleleurmtoare(1113)vomprezentaopartedinelementelecaredefinesc
complexitateaetapeideidentificareamicroorganismeloriarncapitolul14vomdiscutaoparte
dintremodalitiledestabilireasensibilitiilaantibioticeichimioterapice(antibacterienesau
antifungice)cuajutorulcrora,dupncheiereaunuidiagnosticcorectmicrobiologic,putemstabilin
modtiinifictratamentulantimicrobiancetrebuieprescrisunuianumitpacientcareprezintoboal
infecioasdeetiologiebacteriansaufungic.
Aacumammenionatincapitolul9,tehniciledecultivareurmresctreiobiective:
obinereauneipopulaiimicrobienesuficientecantitativpentruscopulpropus
prevenireacontaminriiprodusuluicercetatcualtemicroorganismei
izolareafiecreitulpinimicrobieneurmritencazulunuiprodusplurimicrobiannculturi
monomicrobienedenumiteculturipure.
Nuexistunmediuunic,valabilpentrucultivareaoricruimicroorganism.
Esteesenialsseneleagnecesitateaobineriicoloniilorizolateprecumiaculturilorpuren
diagnosticuldelaboratorbacteriologicimicologic(direct).ncazulncarecoloniileizolate

reprezintoculturpur(formatdinacelaitipdemicroorganism),aceastavafiutilizatn
vedereaidentificriiagentuluietiologic(bacteriaizolatdelaunpacientcuopresupusboal
infecioas)precumilaefectuareaantibiogrameinvedereastabiliriitratamentuluiintit
(antibioticullacarebacteriaizolatestesensibil).nsituaiancarenusareuitobinereaculturii
pure,porninddelacoloniileobinutesevorfacerepicripemediideculturneselective.
Obinereadecoloniibacterieneizolatedintrunproduspatologicsepoaterealizaprinepuizarea
inocululuipemediiledeculturfolosind:
ansabacteriologic
pipetaPasteur
tamponuldevatmontatpeotij
baghetadesticlnformdeL
altetehnicidensmnare.
Ansabacteriologictrebuiesterilizatnainteidupfiecareutilizareasaprinnclzireapn
laincandescen(larou)abucleiifiruluiurmatdeflambareaportansei,pecndcelelalte
ustensilepentrunsmnarevorfisterilizateprinaltemetode(vezicapitolul4).

Obinerea coloniilor izolate prin epuizarea inoculului cu

ansabacteriologic
nsmnareanpentagondeschisamediuluisolidaflatntroplacPetrifolosindansa
bacteriologic,pentruobinereadecoloniibacterieneizolate,porninddelaunproduspatologic
recoltatitransportatctrelaboratorntroeprubet/tubnchiscudopdevatincludeurmtoarele
etape:
atenie:toateactivitilesedesfoarnstrictavecintateabeculuidegaz!
atenie:pesuprafaamediuluideculturpoateexistalichiddecondenscarearputea
facilitacontaminareaculturiibacterieneestenecesarcaplacaPetricumediudeculturpecare
dorimsfacemcultivareasfiemeninutntermostat,cumediulnsus,ntredeschis,pentru
evaporareacondensului!
sesterilizeazansabacteriologiclaflacrabeculuidegazprinaducereala
incandescenabucleiifiruluianseiurmatdeflambareaportansei(trecereprinflacrde23ori)
senoteazpeplacacumediudeculturdatainoculrii,numruldeidentificareitipul
produsului(tipulprodusuluipoatefiinclusprintrunsimbolnnumrulunicdeidentificare)
seiaeprubetacuproduspatologicnmnastng(ncazulncarefiinddreptaci,ansa
bacteriologicesteinutnmnadreapt,cauncreion),sescoatedopuleprubeteiutilizndn
acestscopdegetele45delamnadreapt
atenie:snusescapedopuldinmn=pericoldecontaminareameseidelucru!
atenie:dopulnutrebuiestrnsnpodulpalmei=pericoldecontaminare!
seflambeazguraeprubetei(trecereprinflacrde23ori,imprimndouoarmicare
derotirenambelesensuri)
seintroduceansaneprubetfrsseatinggurasaupereiiacesteianpartea
superioar,sercetebuclapepereiieprubeteinvecintateaprodusuluipatologicisencarc

buclaanseidinprofunzimeaprodusuluipatologic,recoltndfragmentecarearputeaincludecuo
maimareprobabilitatebacteriiimplicatenprocesulinfecios(ex.poriunicuaspectpurulent)
sescoateansafrsaatingempereiisauguraeprubetei
atenie:contaminareapereiloreprubeteinporiuneancaresevamontadopul,va
ducelacontaminareadopuluiirespectivlaomareprobabilitatedecontaminareaaceluicareva
utilizaulterioreprubeta/tubulcuproduspatologic
seflambeazguraeprubetei
semonteazdopullaeprubetprintromicaredersucirecearecascopfixarealui
atenie:guraeprubeteipoatefifierbintedupflambare!
atenie:ntoataceastperioadsecontraindicefectuareaunormicribrutecu
ansancrcatcuproduspatologicmicrilebruteinecontrolatepotdeterminacontaminareacu
produspatologicameseidelucru,amediuluidelucrusauaceluicaremanipuleazprodusul
patologic!
dupceeprubetaafostaezatnstativ,mnastngeliberatvaluaoplacPetripe
careovaaezapemascucapaculnjosimediulnsus
totcumnastngsevadeschideplacaiarcuansancrcatcuproduspatologicse
vortrasalinii(striuri)aproximativparalelentreele,caunzigzag(fraseridicaansadepe
mediuldecultur)reprezentndoprimlaturaunuipentagondeschis
senchideplacaPetri
ansasesterilizeazlaflacr,portansaseflambeaz
serceteansa(sepoatencercarcireaeiprinatingerepesuprafaamediuluisolid
steril,nensmnat,lngpereteleexterioralplciiPetri)
frssemaincarceansacuproduspatologicsetraseazadoualatura
pentagonuluiintersectndopeprima,totcaliniiparalele,dupcareansasevasterilizadinnou
sevaprocedalafelcamaisusipentruurmtoarelelaturiavndgrijsnuseuneasc
ultimalaturcuprimalatur
nmomentulinteresectriicuansaalaturiiprecedenteapoligonului,ansaeste
rencrcatcumicroorganisme,darncantitatedincencemaimic,pncesevaajungela
ctevacelulemicrobieneizolatecare,diseminatepeplacvordanaterelacoloniimicrobiene
izolate
seintroduceplacaPetripecareafostrealizatcultivareantermostat,rsturnat(cu
mediulnsusicapaculnjos),latemperaturaoptimmultiplicriimicroorganismuluisuspectat
(pentrucelemaimultebacteriitermostatulvafireglatpentruotemperaturde3537C,pentrufungi
la28C)
dupoperioaddeincubarede1824ore(pentrucelemaimultedintre
microorganismelestudiate),peprimalatursevaobineceamaiimportantcantitatedecultur
(culturmicrobianconfluent),peurmtoarelelaturisevaremarcascdereacantitativaculturii
iarcelpuinpeultimalaturapentagonuluideschissevorobinecoloniiizolate.
Dacmediuldeculturpecaresarealizatcultivareanpentagondeschisesteneselectiv,
coloniileizolateobinutepotfiutilizatenetapeleulterioare(identificareprindiferitemetode,testarea
sensibilitiilaantibioticeichimioterapice).ncazulncareculturaprimaresteobinutpeun
mediuselectiv,esteobligatorierepicareacoloniilorizolatedeoarececoloniileizolatevizibilepotfi
asociatecumicroorganismeinhibatedatoritselectivitiimediului,carenusevdcuochiulliber

sauculupaicaresevormultiplicapemediiledeidentificarefcndimposibilinterpretarea
rezultatelor.

Tehnicadescrisesteotehnicdebazicuanumitemodificrisepoateutilizainalte
situaii(spreexempluatuncicndprodusulpatologicesterecoltatnaltetipuriderecipiente).

Altetehnicidecultivare(nsmnare)
Amalespentruoprezentareamnunittehnicaobineriicoloniilorizolateprinepuizarea
inocululuicuansabacteriologic(nsmnareanpentagondeschis)deoarececonsidermc
aceastreprezintotehnicesenial,carepoatefireinutncdinaldoileaandestudiu).n
continuarevomprezentaaltetehnicidecultivare,fraepuizatoatevarianteleposibile.

nsmnareacuansacalibrat
sepoateutilizapentruuroculturainaltescopurincareaproximareanumruluide
microorganismedezvoltatepemediuldeculturesteutil
putemutilizaansedeplatinsauansedeunicfolosinpentru0,01saupentru0,001
ml/calibrulanselordeplatintrebuieverificatnfiecarelun
urinarecoltatcorespunztor(vezicapitolele6i29)seomogenizeazprinrsturnarea
dectevaoriarecipientuluiderecoltare(nchisetan)
respectndregulilelucruluiaseptic,nclinmrecipientuldecolectarenaafelncts
putemspunembuclaansei,paralelpesuprafaaurineiisprelevmp.p.
peoplacPetricumediuldecultursedescarcurinanstriu,peunuldintrediametre
apoiepuizminocululpetoatsuprafaaplciinstriuriperpendicularepestriuldedescrcare,cu
micridezigzag
dupincubare,nziuaurmtoarevomnumracoloniileapruteispreexempluvom
nmulinumruldecoloniicu1000dacamutilizatpentrunsmnareansade0,001ml
dinmotiveeconomiceputemsrealizmnsmnareanmodasemntoraurineipeo
jumtatesauchiarpeoptrimedeplac.

nsmnareacutamponulsaucubaghetadesticlnL
acestetehnicisepotfolosiattporninddelaproduspatologic(metodpreferatn
unelelaboratoare)ctidelacoloniicaresuntutilizatepentruobinereadeculturpur
nsmnareacutamponulpoatefifolositipentrurealizareaantibiogramei
difuzimetrice
vomprezentancontinuarevariantancareseutilizeaztamponulpentrucultivareaunui
produspatologic(exsudatfaringianetc),presupunndcsuntemdreptaci
notmpeplacacumediudeculturdatainoculrii,numruldeidentificareitipul
produsului(tipulprodusuluipoatefiinclusprintrunsimbolnnumrulunicdeidentificare)nuvom
mainotaaceastetaplaprezentareaurmtoarelortehnicidarmenionmacumfaptulceste
obligatorie,defiecaredataltelucruricuimportangeneral,menionatelatehnicaobinerii
coloniilorizolateprinepuizareainoculuicuansabacteriologicrmnvalabile
scoatemtamponuldintubulprotectorcuprimeletreidegetedelamnadreapt
flambmguratubuluiprotectorilaezmpeunstativ
cumnastnglumoplacPetri(carenumaiprezintlichiddecondensinterior)pe

careoaezmpemascucapaculnjosimediulnsus
totcumnastngdeschidemplacaiarcudreaptadescrcmtamponulncrcatcu
produspatologic(existmaimultemodalitidedescrcareatamponului,dintrecarevomprezenta
dou)
descrcmtamponulprinrulare,petoatefeelepeorazaplcii,urmndcasdispersm
produsulcuobaghetdesticlnL,steril,petoatsuprafaaplcii
descrcmtamponulprinrulare,petoatefeelepeuncadranalplcii,urmndcas
dispersmprodusulcuansabacteriologicncelelaltecadrane,canmetodapentagonului
deschis(dupnsuireatehnicii,pentrueconomie,sepoaterealizacultivareapejumtateaunei
plci).

Tehnicadiluiilorsuccesivenlichiduldecondensalmediilorsolide
mediuldeculturesteturnatneprubetesautuburiutilizmmaimulteeprubete
prelevmcuansap.p.ildescrcmnpicturadelichiddecondensalprimuluitub
frsncrcmdinnouansacup.p.odescrcmnpicturadecondensaceluideal
doileatub.a.m.d
dupnsmnare,nclinmeprubetelepentruascldasuprafaamediuluinclinat,cu
picturarespectivdelichiddecondens,realizndnacestmoddispersiamicroorganismelordin
picturadeinocul,pesuprafaamediului.

Tehnicaepuizriianseipemediisolide
constnefectuareauneiseriidensmnricuansabacteriologicncrcatosingur
datcuamesteculdemicroorganisme,ntrunirdeeprubetecugeloznclinat,frasteriliza
sauarencrcaansabacteriologicpeparcurs
nsmnmporninddelabazaeprubetei,atingndmediuliurcndprindescrierea
unorstriurinzigzag,pentrufiecareeprubetnparte
realizmastfeloepuizareaconinutuluiansei,nfinal,ajungndsnsmnmnumai
ctevacelulemicrobiene,dincarevorapreadupincubarecoloniiizolate.

nsmnareaprinnepareamediuluiturnatntuburisaueprubete
metodasepoateutilizapentruconservareaculturilorpurealeunortulpiniconsiderate
reprezentative,atulpinilordecolecie,atulpinilordereferin,pentrunsmnareaunormedii
multitest(TSI,MIUetc)etc
sepreferutilizareauneiansefir,sauauneiansecuobuclmic(dupcaz)
nfunciedescopulurmritexistanumitevariantealeacesteitehnici,iartuburile
(eprubetele)utilizateaudimensiunidiferiteiocantitatedemediucaredifer(respectndprotocolul
delucrucorespunztor)
spreexempluncazulnsmnriimediuluiTSI
seutilizeaztuburidedimensiunimici,cantitateademediuutilizatpentruuntubfiind
de3ml
iniialsensmneazparteadreaptprinnepare,fraseatingebazatubului
ulteriorsensmneazparteanclinatprinrealizareaunorstriurinzigzag,atingnd
suprafaamediului.

nsmnareacuseringa
produselelichide(nspecialsnge,pentruhemoculturdarialtep.p.)sepot
nsmnadirectcuseringacucaresafcutrecoltarea

nsmnareacupipeta(Pasteursaupipetagradat,dupcaz)
ladeschidereainchiderearecipientelorflambmgurafiecruianparte,aacumam
prezentatmaisus
naintedeafolosipipeta,deisterilizatnprealabil,ovomflambaprintrecerepetoat
lungimeaprinflacr
pentruaprelevap.p.dinrecipientuldetransportprecumipentrunsmnarenmediul
lichidsausolid,folosimundispozitivctdesimplu(estecontraindicataspirareacugura)
dupncheiereansmnriieliminmlichidulrmaseventualnpipetnflaconulcu
amestecsulfocromic,introducempipetanamesteculsulfocromiciaspirmsoluiadezinfectant
pnaproapededopuldevatalpipetei
toatepipetrileserealizeazcuajutoruldispozitivuluiadaptatlapipet
pipetavafimeninuttimpde24orenamesteculsulfocromic.

nsmnareacupipeta,prininundare
reprezintovariantatehniciiprezentatemaisus
sepoatefolosipentrudepunereainocululuinvederearealizriiantibiogramei
difuzimetrice,pentruverificareasensibilitiilabacteriofag(lizotipie)etc
dupncrcareapipeteicuculturapur,inocululsedescarcpesuprafaamediuluisolid
dinplacaPetri,apoisenclinnmodrepetatplacapentrunsmnareauniformasuprafeei
mediului
excesuldeinoculseaspircupipetaPasteurisedescarcnsoluiadezinfectant
placaselasapoilngflacrpentruuscare,cucapaculntredeschis.

Tehnicadiluiilorsuccesivenmediilichide
poatefifolositpentrudiluareunorsuspensiiantigenice,seruri,fagietc
nacestscopfolosimunirdeeprubetentoateeprubetelerepartizmcuaceeai
pipetocantitateconstantsoluiesalinfiziologic(0,9mlnfiecareeprubet)
pipetelegradatesterileimpachetatenhrtiesedesfacnmomentulutilizriinmodul
urmtor:rupemhrtiachiarlamijloculpipetei,printromicaredersucirensensopusacelor
douminitragemparteadehrtiecaresetermincuuncaptrsucitliber(corespundeporiunii
superioareapipetei),decarevominepipetantimpullucruluiscoatemadouajumtateahrtiei
fraatingeparteaefilatapipeteiiastfelpipetarmnesterilpentrulucru
cuoaltpipetprelevm0,1mldincantitateadesuspensiemicrobianiintroducem
inocululnprimaeprubetaspirmieliminmlichiduldinpipetdectevaoripentru
omogenizareasuspensieiapoipunempipetasepunenamestecsulfocromic
lumonoupipetcucareaspirm0,1mllichiddintubul1iintroducemacestlichidn
tubul2,aacumammenionatmaisusschimbmpipetairepetmmanevrapnlaultimultub
dinultimultubscoatem0,1mlpecareieliminmnamesteculdezinfectant

Ctevatehnicideizolarespeciale
1.Metodefizice
nclzireanbaiedeap,timpde10minutela80Cap.p.recoltatnmodcorespunztor
isuspensionatnbulionVF(mediuanaerob)dincaresedoreteizolareaunorgermeniisporulai
anaerobi
2.Metodechimice
utilizareamediilorselectivesauamediilordembogire

adugareala1mldep.p.recoltatnmodcorespunztor(isuspensionatnbulionVF)a
1mldealcooletilicde95urmatdeagitareatubuluitimpdeoorlatemperaturacamerei
produsulrezultatsensmneazpemediianaerobe,pentruizolareaunorgermenisporulai
3.Metodebiologice
inoculareasputeincaresesuspecteazprezenaS.pneumoniaelaoarecelealb
dup14ziledelainoculare,oarecelefaceoinfeciesepticemiccupneumococ
sepoateizolaoculturpurdepneumococdinsnge,cord,splin,ficatetc.
Aplicareaacestortehnicivafidiscutatncapitolelorurmtoare,iaruneledintretehnicivor
puteafiexecutatesauprezentatedemonstrativncadrullucrrilorpractice.

11. Examinarea caracterelor de cultur,

metabolice precum i a altor caractere fenotipice
utile n identificarea microorganismelor
ncapitolul5amprezentatSchemageneraladiagnosticuluidelaboratormicrobiologicipe
aceastschemamncercatsevolum,adugndtreptatnoidateteoreticeipractice.nacest
capitolvomcontinuadiscutareaceleidea4aetapeadiagnosticuluidirect(careincludei
verificareadinpunctdevederemicroscopicacoloniilorizolate),strictnecesarpentruidentificarea
microorganismelorizolatedelapacieniicubolitransmisibile.
Iniialvomreluactevadefiniiiielementeteoreticeurmndcamaidepartesprezentm
principalelecaracterestudiatenuneledintresubetapeleacestuimomentdiagnostic,maiprecis
caractereledecultur,ctevanoiuniprivindcaracterelebiochimice,metabolice,depatogenitaten
cursullucrrilorpracticesevadiscutaidesprealtecaracteremicrobiene.

Definiiiialteaspecteteoretice
Coloniaizolat
Pemediisolide,germeniinsmnainsuprafaproduccolonii.Coloniaestetotalitatea
bacteriilorrezultatedinmultiplicareauneisingurecelulebacteriene.Ocolonieesteoclon
bacterian.Coloniileizolatesepotobinedeexempluprintehnicansmnriiprindispersie(cu
ansabacteriologicsaucutamponul),aacumafostprezentatncapitolul10.
Incubareaconstnmeninereamediilordeculturnsmnate,ncondiiilenecesarepentru

dezvoltareaculturii.Majoritateaspeciilorbacterienesedezvoltiduclaapariiauneiculturincirca
1824deoredeincubarelatemperaturaoptimdedezvoltareasiguratntermostat(deregul
3537C).Pentrubacteriilecarenecesitoatmosferde35%CO2(carboxifile),plcilecultivatese
vorpunenexsicator,mpreuncuolumnareaprins.Pentrubacteriilestrictanaerobeeste
necesarincubareananaerobioz.Omarepartedintrefungi,nspeciallevuri,autemperatura
optimdedezvoltareanjurula2830C.
Dezvoltareamicroorganismelorpemediideculturpoatepermiteevaluareaanumitoraspecte
macroscopicesaumicroscopice(ex.coloniileprodusedeMycoplasmaspp.)carepotreprezenta,
dupcaz,modalitideidentificaresaudeorientarenalegereaalgoritmuluideidentificare.
Caractereledeculturinclud:
necesitilespecificenvedereacultivrii
bacteriinepretenioase(caresepotcultivapemediisimpleex.E.coli)
bacteriipretenioase(carenecesitmediicomplexe,mbogitesau/iadugarean
mediiaunorfactoridecretereex.Haemophilusinfluenzae)
bacteriistrictaerobe(Bordetellapertussis),aerobefacultativanaerobe(E.coli,S.
aureus,S.pyogenesetc),carboxifile(S.pneumoniaeetc),microaerofile(Campylobacterspp.,etc),
strictanaerobe(Clostridiumspp.)
temperaturaoptimdecultivare(2030CpentruListeriamonocytogenes,42C
pentruCampylobacterjejuni,3537Cpentrumajoritateabacteriilor,2830pentruunelelevurietc)
intervaluldetimppentruapariiacoloniilorizolate,nfunciedetimpuldegeneraie
1824orepentrumajoritateabacteriilor
2448orepentrumajoritateafungilor
sptmnipentruMycobacteriumtuberculosisetc
aspectul,consistenaiaderenacoloniilor/culturii
modificrileaprutepemediunvecintateacoloniilor/culturiietc.
Examinareaculturilor/coloniilorizolateesteunprocesfoarteimportant,necesitcunoaterea
teoriei,multexerciiu,atenieiexperien.Pentruaobinecelemaibunerezultateestenecesaro
buniluminare(preferabilluminanatural)iariluminareamediuluicareurmeazaficititsevaface
celpuininincidenoblic.Examinareasepoatefacecuochiulliber(celpuininiial)darar
trebuicompletatcuexaminareafcutcuajutoruluneilupesauaunuistereomicroscoppentrua
puteanregistratoateaspecteleimportanteipentruaputeasesizaapariiacoloniilordedimensiuni
micisaufoartemici.

Aspectulculturilorpemediilichide
Bacteriileifungiifacultativanaerobisedezvoltntoatmasadelichid,tulburndul.Bacteriile
strictaerobesedezvoltpreponderentlasuprafaamediului.
SeacceptcdeobiceitulpinilecarepemediilesolideformeazcoloniidetipStulbur
omogenmediul(majoritateabacteriilor)ntimpcetulpinilecareformeazcoloniidetipR
realizeazotulburaremaipuinomogen.VarianteleRpotlsamediullimpede,formndflocoane
caresedepunsauunstrat(vl)lasuprafaamediului(deexemplubaciluldiftericsaubacilul
tuberculos).

nurmadezvoltriimicroorganismelornmediideculturlichidesemaipotremarcai
pigmentogeneza(ex.Pseudomonasaeruginosa)sauutilizndsimulolfactivsepoateconstata
apariiaunuimiroscaracteristic(ex.unmirosdecornarsncazulclostridiilor).
Vomprezentactevaexemple,menionndcexistivariaiidelaregul:
mediulestetulburatomogen(ex.Staphylococcusspp.)
mediulesteclar,cudepozitgrunjospepereiilabazatubului(ex.S.pyogenes)
mediulesteclar,cuvllasuprafa(V.choleraenappeptonatalcalin)
dezvoltareaculturiiserealizeazcaunineladerentdepereiitubului,lasuprafaa
mediului(ex.E.coli)
mediulesteclarcudezvoltareauneimembraneuscate,lasuprafa(ex.Bacillus
subtilis)
mediulesteclarcuapariiaunuidepozitfloconosaderentlabazatubului(B.anthracis)
mediulesteclar,iarlasuprafasedezvoltomembrangroas,plisat(M.
tuberculosis).

Aspectulculturilorpemediisolide
Condiiiledecultivareiaspectulculturiisuntcaracterecheienidentificareabacteriilor.
Aspectulcoloniilorvariaznfunciedemicroorganismulimplicat,frapermitediferenieride
speciedefinitive(darauutilitatencontextulstudieriituturorcaracterelor)nanumitecazuri
sugereazdiagnosticul,darntotdeaunaorienteazsprealtetestrinecesare.
Trebuiesexaminmurmtoareleelemente:
dimensiunea(coloniilepotfimari,depeste2mmaacumseformeazn
cazulStaphylococcusspp.,K.pneumoniaeetcsauncazullevurilormedii,decirca12mmpentru
multedintrebacteriilestudiatemici,sub1mm,spreexempluncazulStreptococcusviridans,etc
ifoartemici,caresepotexaminacuajutorulstereomicroscopului,aacumsentmpln
cazulMycoplasmaspp.sauUreaplasmaspp.)
marginile(regulate,neregulate,ntregi,circulare,erodate,zimate,ondulate,lobate,
filamentoase,acoperitecumiceliupufos,invadndmediulnvalurietc)
forma(punctiform,circular,neregulat,dendritic,filamentoas,lenticular)
relieful(plat,acuminat,convex,bombat,ombilicat,papilat)
suprafaa(neted,umed,lucioas,mat,uscat,granular,rugoas,papilat,
zbrcit,mucoid,pufoasetc)
culoarea(pigmentate,pigmentareaestelanivelulcolonieisaualmediului,
nepigmentateacestcaracterdepindedepigmeniiproduisau/ideindicatorideculoaredin
mediu)
opacitatea(transparente,semitransparente,opace)
consistena,aderenalamediu(examinatedeex.cuajutorulanseibacteriologice)
altecaractere,carevorfiprezentatencontinuare.
Tipuridecolonii
ColoniaS(smooth)aresuprafabombatineted,umed,marginicirculareiadesea
aspectstrlucitor.Germeniipstreazstructuraantigenicinuaglutineazspontancusoluie
salinfiziologic.Germeniicapsulaiipstreazcapsula.Virulenaesteconservat.Majoritatea

bacteriilorstudiateprecumilevurileformeazcoloniidetipS(S.aureus,S.pyogenes,E.
coli,Candidaalbicansetc).
ColoniaR(rough)esteplat,mat,uscat,suprafaaeiprezintrugoziti,marginilesunt
crenelate(zimate).Structuraantigenicnuestecaracteristic.Nupstreazcapsula.Virulenanu
esteconservat(excepiiB.anthracis,M.tuberculosis,C.diphteriae).
ColoniaM(mucoid)estemare,strlucitoare,umed,mucoas.Estedatdeexemplude
bacteriilecareprezintcapsul(exempluKlebsiellapneumoniae).
Aspecteparticulare
fenomenuldeinvazie,reprezintuncaracterdeidentificarepreliminar
pentruProteusspp.,obacteriefoartemobildacnsmnmotulpincareaparineacestuigen
laperiferiauneiplciPetricumediusimplu(agarizat2%),delaloculnsmnriiculturase
dezvoltnvaluriconcentrice(sentindedinaproapenaproape)petoatsuprafaamediuluipe
anumitemediiselective,invaziaesteinhibatisepotobinecoloniiizolate(adugmlamediulde
culturacizisausruribiliare,tiosulfatdesodiuetc)
fenomenullinieidedemarcaie,reprezintuncaracterutilnstudii
epidemiologice,ncazulncaretulpinileimplicateaparingenuluiProteusdacpeoplaccu
mediusolidcultivm2tulpinidiferite,n2puncteopuse,tulpinilesevordezvoltainvadndpnla
unpunctnapropierealinieidentlnire,undesevacreaoliniededemarcaientrecele2tulpini
(distande12milimetri)dactulpinilenusuntdiferitevaavealoccretereanvalurifr
demarcaiecudezvoltareauneipnzecontinuedecultur
fenomenuldecrare,reprezintovariantdeizolarenculturpurauneitulpini
deProteuscultivareaunuiproduspatologicnlichiduldecondensalunuitubcugeloznclinat
incubatnpoziieverticalvaconduce(ncazulncarenp.p.existotulpindeProteusspp.)la
obinerean24oreauneiculturipuredeProteus,caresevadezvoltanvalurisuprapusepnla
parteasuperioaramediuluidecultur
apariiacoloniilorncapdemeduz/coamdeleu,aspectcarepoatefi
caracteristicncazulizolriiuneitulpinideBacillusanthraciscoloniilesuntmari,albcenuii,detip
R,iarlaperiferiacoloniei,cuajutoruluneilupe,sepotobservaprelungiriondulatecareaudusla
denumirilemenionatemaisus
apariiacoloniilorpufoase,spreexemplupemediulSabouraud,la2830C,dup
circa7zile,coloniiledeCoccidioidesimmitisdezvoltunmiceliuaerian,devinpufoase,cresci
acopernctevazilesuprafaamediuluiiniialalbe,devinntimpgalbenmaroniicoloniipufoase
potapreaincursuldezvoltriinanaerobiozauneitulpinideClostridiumtetanietc.

Caracteremetabolice
Existnumeroasetestecarepermitinvestigareaacestorcaracterealemicroorganismelor.n
continuarevomprezentadoarctevadintreacesteteste(veziicapitolul12precumidiferite
capitoledinparteaspecial).ncapitolul11vommaidiscutaidesprectevadintretestelecare
evideniazcaracteredepatogenitatealebacteriilorsaufungilor.Estederemarcatfaptulcunele
dintretestelecarevorfidiscutatearputeafiincluseattngrupulcaracterelormetabolicectin
grupulcaracterelordepatogenitate(ex.hemolizancazulanumitormicroorganisme,producerea

unorenzimecucaracterdetoxineetc).

1.Pigmentogeneza
Pigmentogenezaestecaracteristicbacteriilorcromogeneiestedependentdecondiiilede
cultivare.Poatereprezentaunelementutilpentruidentificare(deexemplupentruPseudomonas
aeruginosasaupentruStaphylococcusspp.).
Duplocalizareapigmentului,bacteriilepotficromofore(pigmentulestelegatncitoplasm)
paracromofore(pigmentulesteprezentnperetesaunstratulmucos,deexemplupigmentulauriu
laS.aureus,pigmentulgalbencitrinlaS.saprophyticus)cromopare(pigmentulalbastru,sau
galbenverzui,saudealtculoareestedifuzibilnmediu,deexemplulaPseudomonasaeruginosa).
Fungiipotproduceoseriedepigmeni,spreexemplucoloniiledeCandidaalbicansauculoare
alb.Mucegaiurileproducovarietatemultmaimaredepigmeni(ex.Aspergillusdeflectuscolonii
cenuiicuperiferiarozsaucupetegalbene,Aspergillusflavuscoloniigalbenverzuipnlaverde
nchisiarprivitepeparteacealaltaplciisuntroiibrune,Aspergillusfumigatuscoloniiiniial
albecaredevinalbastreverzuisaualbastreiarprivitepecealalaltparteaplciisuntcoloratebrun
saunalteculori,Aspergillusnigercoloniiiniialalbecaredevinbrunnegrepstrndoculoare
albpecircumferiniarprivitepecealalaltparteaplciisuntcoloratengalbenetc).

2.Producereaunorhemolizine
Unelemicroorganismeproducenzime(hemolizine)carelizeazhematiiledinmediiledecultur
cusnge.Hemolizaarediferiteaspectenfunciedemecanismuldeaciuneispeciadeoriginea
hematiilor(cal,berbec,iepureetc).Ctevaexempledehemolizine:
1.ahemolizinaproduceolizincompletahematiilor,zonaavndoculoareverzuie
(ex.Streptococcusviridans,Streptococcuspneumoniae)
2.ahemolizinaproducelizahematiilorn2zone,napropiereacolonieiexistunhaloude
hemolizincompletnconjuratdeozondehemolizcomplet(ex.uneletulpinideStreptococcus
spp.)
3.bhemolizinaproducelizacompletahematiilor,zonadehemolizesteclar
(ex.Streptococcuspyogenes,Bacilluscereus,Listeriamonocytogenes,Haemophilusducreyi)
4.bhemolizinacareproduceohemolizdetipcaldrece(zonedehemolizincompletla
37Ccare,dupmeninereaculturiila+4Ctimpdectevaore,devinecompletex.anumitetulpini
deStaphylococcusaureus)
5.ghemolizinaprodusdeStaphylococcusspp.lizeazdeiepure,om,oaie,darnuproduce
zonedehemolizpeagarsngencazulstreptococilor,ghemolizaindicabsenahemolizei.

3.Producereaaltorenzime
catalaz(ex.Mycobacteriumspp.,Staphylococcusspp.)
carbohidraze(evideniatepemediidifereniale,vezicapitolele12i2834)
gelatinaz(culturamicrobianlichefiazgelatina,ex.Clostridiumperfringens)
lecitinaz(ex.Bacillusanthracis,Clostridiumspp.)
nitratreductaz(ex.Mycobacteriumspp.)
oxidaz(ex.Neisseriameningitidis,N.gonorrhoeae,Pseudomonasaeruginosa,Vibrio
cholerae)
termonucleaz(ex.Staphylococcusaureus)etc.
4.Altecaracteremetabolice
aciuneareductoare(evideniatdeex.laC.diphteriaecultivatpemediucuteluritdeK)

sensibilitatealadiferitetemperaturi
toleranalaunanumitpH(ex.V.choleraesemultipliclapHalcalin)
toleranalaoanumitconcentraiedeNaCl(ex.Staphylococcusaureus)
sensibilitatealaoptochin(ex.S.pneumoniae)saulabacitracin(ex.S.pyogenes)etc.

Caracteredepatogenitate
Patogenitateareprezintcapacitateaunuigermendeadeclananorganismulgazd
fenomenemorbide,patogene,modificrilocale,generaleifunctiolaesa.Patogenitateaesteun
atributdespecieiestedeterminatgenetic.Virulenareprezintgraduldiferitdepatogenitate
exprimatncadruluneispecii.Esteunatributaltulpiniimicrobieneimplicate.
Caractereledepatogenitatepotfievideniateinvitrosauinvivo.

Testeefectuateinvitro
examinareaaspectuluicoloniilor(majoritateaspeciilorbacterienesuntpatogenenforma
S,cuexcepiabacililorantraxului,diftericituberculos)areaspectorientativ
,cuefectuareaanumitortestebiochimice/metaboliceaspectorientativ(examinarea
pigmentogenezei,fermentareamanitei,testulcoagulazei,testulfibrinolizei,producereade
hemoliziteetc)dintretestelemenionateestedeluatnconsideraienprimulrndtestul
coagulazei
evideniereaproduceriiunortoxine
endotoxine(testulLimulusprezenaendotoxineiproducegelificareaunuilizat
deLimuluspolyphemus)
exotoxine(testulELEK/vezicapitolul16,ELISA,efectecitopatice,testulproduceriide
lecitinaz,testulplcilorsemineutralizateetc).

Testeefectuateinvivo
nacestscopseutilizeazanimaledelaboratorsensibilefadeinfeciaexperimentalcu
diferitemicroorganismesaufadeanumitetoxinemicrobiene(ex.oarecialbi,cobai,iepuri,pisici
etc.,nfunciedespeciamicrobianpentrucareseefectueaztestul/speciadeanimalceamai
sensibilicaleadeinoculareceamaipotrivit).Animaleledelaboratortrebuiesfiesntoase,
verificareasefaceprinexaminareaacestoranaintedeefectuareatestrii,peparcursula1014zile.
Dupinoculare,animalelesuntmarcateiinutesubobservaie(feritedeoricecontaminare)
observaiaesteclinicurmrinduseevoluiacurbeifebrileiapariiasemnelordeboal.Pentruorice
testserecomandutilizareaunuilotdeanimalepentruacelaitipdeinoculare,ceeacecrete
suplimentarcostulacestuitipdetestare.ncontinuarevomprezentactevaexemple:
identificareaBacillusanthracis:pregtimosuspensieatulpiniicareurmeazafitestat
nsoluiesalinfiziologiciinjectmsubcutanat,cte0,2mlpentrufiecareanimal,launlotde
oarecialbiurmrimevoluiatimpde23zileiefectumfrotiuridinsngelerecoltatprin
puncionareacorduluisauamprentedesplin
testareatoxigenezeiuneitulpinideCorynebacteriumdiphteriae:obinemoculturde24
oreatulpiniideidentificatinoculmsubcutanat,nregiuneaabdominalcte25mldecultur
pentrufiecareanimal,la2loturidecobai(unlotneprotejat,aldoilealotprotejatcucte1000UIde

serantidiftericpentrufiecareanimal)ncazulncaretulpinaestetoxigen,animaleleneprotejate
vormurin14zile,cusemnedeintoxicaiedifteric(congestiacapsulelorsuprarenale,lichidseros,
serofibrinossaufibrinosnpleur,pericard,peritoneuiedemgelatinoslaloculdeinoculare)ntimp
ceanimaleleprotejatenuprezintnicioreacie
toxinotipiancazulsuspicionriiuneitoxiinfeciialimentarecuClostridiumbotulinum:se
obinesupernatantdupcentrifugareaunorprodusepatologicesaualimentelorincriminatei
trituratelacareseadaugantibioticepentruainhibamultiplicareafloreideasociaiesevautiliza
supernatantcaatareisupernatantdupmenineretimpde15minutela100C(ircire)toxina
botulinicfiindtermolabilsevorinocula4loturideoareci(0,5ml/oarece)saucobai(1ml/
cobai)dupcumurmeaz
supernatantcaatare
supernatantinactivat
0,1mlserantitoxinAurmatla30minutedesupernatant
0,1mlserantitoxinBurmatla30minutedesupernatant
spreexemplu,ncazulncareanimaleledinloturile1i4mor,iaranimaleledinloturile
2i3supravieuiesc,np.p.existtoxinbotulinicdetipA
identificareainfecieipulmonarecuStreptoccuspneumoniaesaucuKlebsiella
pneumoniae:realizmunamestecdesputisoluiesalinfiziologicsteriliinoculm
subcutanatsauintraperitonealcte5mldep.p.pentruunanimal,launlotdeoarecialbiprezena
microorganismuluivaproducen2448deoreosepticemiemortalfacemfrotiuriiculturidin
sngelerecoltatprinpunciecardiac,lichidperitonealiamprentdesplinpentrudeterminarea
tipuluicapsularputemfacereaciadeumflareacapsulei(vezicapitolul12)
identificareaetiologieistafilocociceauneitoxiinfeciialimentare(producerea
enterotoxinei):dupceseobinenculturtulpinadestafilococ(porninddelamateriifecale,lichid
devrstur,alimente)serepicnagar0,5%iseincubeaz48orenatmosferdeCO2se
filtreazmediuliarlichidulobinutsemeninelatemperaturadefierberetimpde30minute
(enterotoxinaestetermostabil)testulDolmansefacelapisoide23lunilacareseinoculeaz
intraperitoneal13mldinfiltratulrcitdup20120minute,ncazulprezeneienterotoxineiapareo
staredenelinite,agitaieurmatedediaree,vrsturiisomnolendup12zileanimalele
inoculateirevin
cercetareapatogenitiiuneitulpinidestafilococsefacelaiepure,careesteanimalulde
laboratorcelmaisensibillainfeciaexperimentalcuStaphylococcusaureus
testareapatogenitiiunorlevuri(ex.Candidaalbicans):porninddelaoculturde24de
orenmediulSabouraudlichidseparmsedimentulirealizmosuspensie0,2%aacestuian
soluiesalinfiziologicsterilinoculmnvenelecoziilaunlotdeoareci(cte0,20,8mlpentru
fiecareanimal)suspensiaobinutiurmrimevoluiaanimalelortimpde410ziledacestevorba
deotulpindeC.albicanspatogen,animalelevormuridupcirca1sptmn
(anatomopatologicvomputeaevideniaabcesemiliarerenale,splenice,hepatice)etc.

12. Teste de identificare avnd la baz diferite

caractere biochimice ale bacteriilor i fungilor
Existnumeroasetesteutilenidentificareabacteriilorifungilor,avndlabazdiferite
proprietibiochimicealeacestoractevadintretestevorfiprezentatencontinuare.
Acestetestedeidentificareauoimportandiferitladiferitelegenuriispeciibacterienei
respectivfungiceifacpartedinetapaapatraadiagnosticuluidelaboratorbacteriologicsau
micologic.Schemadeprezentareestensasemntoare.

12.1.Utilizareaunuicarbohidratcaunicsursdecarbon
Auxanograma
Principiu:
Diferitelelevuriprezintunanumitechipamentenzimaticcuajutorulcruiapot,spreexemplu,
sutilizezeunanumitcarbohidratcaunicsursdecarbon.Dezvoltareauneilevuripeunmediun
careesteinclusunsingurcarbohidratdemonstreazutilizareaacestuiacaunicsursdecarbon
(asimilareacarbohidratuluirespectiv).nmodasemntorsepoatetestacapacitateaasimilriiunor
substaneazotatedectrelevuri.
Materialenecesare:
culturapuralevuriideidentificat,pepantdeagarSabouraud
mediupentruasimilareacarbonuluidectrelevuri
soluiedevitamine
soluii5%alecarbohidrailor(ex.glucoz,maltoz,zaharoz,lactoz,galactoz,
trehalozetc)napdistilat,sterilizateprinfiltrare
rondeledinhrtiedefiltru,sterile(diametru6milimetri)
Tehnicadelucru:
Culturafungicestesuspensionatn5mldeapdistilatsteril.Mediuldeculturpentru
asimilareacarbonuluiestenclzitpnlatopireiapoircitla50C.ntruntubsterilcu
capacitateade30mlintroducemaseptic20mldemediu,2mlsoluiedevitaminei0,25mldin
suspensiafungic(levuric)dupcareamesteculesteturnatntroplacPetristeriliseateapt
solidificareamediuluimpreuncucelelaltecomponente.
Depunemaseptic5rondeledinhrtiedefiltru,unancentrui4spreperiferiafiecruicadranal
plciiiimediat,utilizndoanscudiametrulbucleide3mm,depunempefiecaredintrerondele
ceeacevomprelevadindiferite(5)soluiidecarbohidrai
obligatoriuvomprelevadinsoluiadeglucoz
dacdorimstestmpentru9carbohidraidiferiiavemnevoiede2plciPetri.
Incubmla2830Cpentru2448ore,apoiurmrimapariiaculturiinjurulrondelelor.

Existialtemodalititehnicenrealizareaauxanogramei.
Interpretare:
trebuiesexistemultiplicarelevuric(culturprezent)njurulrondeleipecaream
depusoansdinsoluia5%deglucoztoatelevurilepotfolosiglucozadreptunicsursdeC
senoteazdezvoltareaculturiinjurulrondelelorundeaceastaesteevideniati
utilizndrezultateleobinute,ncontextulcelorlaltedatedelaborator,sestabiletespecialevuric
Controldecalitate:
tulpinadereferindeCryptococcuslaurentii
tulpinadereferindeCandidapseudotropicalis

12.2.Testulsensibilitiilabacitracin
Principiu:
MultiplicareastreptococilordegrupAesteinhibatdebacitracin(antibioticprodusdeBacillus
licheniformis).SeapreciazcdintretulpiniledeStreptococcuspyogenes,maipuinde1%sunt
rezistentelabacitracin.
Materialenecesare:
coloniihemoliticeizolatepegelozsnge
microcomprimatedebacitracincu0,04Uicu0,1U(inucu10U/microcomprimat)

Tehnicadelucru:
Sepreleveaz34coloniihemoliticeisensmneaznstriurifoarteapropiate,suprapuse
n3direcii,peojumtatedeplacPetricugelozsnge(dinmotivedeeconomiesepoateutiliza
iunsectordeplac).
Plasmncentrularieinsmnateunmicrocomprimatcubacitraciniincubmpentru1824
orela3537C.
Interpretare:
Testulestepozitiv(bacteriaestesensibillabacitracin)ncazulncare
rezultoinhibiieacreteriibacteriene,indiferentdediametru,njurul
microcomprimatuluicu0,04Ubacitracin
rezultoinhibiieacreteriibacterienecudiametrul11mm,njurul
microcomprimatuluicu0,1Ubacitracin.
Controldecalitate:
MartorpozitivStreptococcuspyogenes
MartornegativStreptococcusagalactiae

12.3.Testulbilolizei(Neufeld)
Principiu:

Pneumococii(Streptococcuspneumoniae)capsulaisuntlizainprezenabileisausrurilor
biliare(uneletulpininecapsulatenusuferacestproces)prinactivareauneienzimeautolitice.
Materialenecesare:
coloniiizolate,ahemolitice
soluiededezoxicolatdesodiu10%
soluiesalinizoton
apdistilat
Tehnicadelucru:
Sepreparnsoluiesalinfiziologicosuspensieporninddelacoloniileahemoliticeizolate.
TurbiditateasuspensieitrebuiesfieasemntoarecuturbiditateaetalonuluiMcFarland0,5sau1.
Repartizmcte0,5mldinsuspensien2eprubetedesticl.
nprimultubadugm0,5mldezoxicolatdesodiuiarnaldoileatubadugm0,5mlap
distilat.Incubmtimpde2orela3537C.
Interpretare:
Testulestepozitiv(bacteriileaufostlizatenprezenadezoxicolatuluidesodiuisunt
pneumococi)dacsuspensiasaclarificatntubulncareamadugatdezoxicolatinusa
clarificatntubulncareamadugatapdistilat
Testulestenegativdacambeletuburiaurmasopace.
Controldecalitate:
MartorpozitivStreptococcuspneumoniae
MartornegativStreptococcusviridans.

12.4.TestulCAMP
Principiu:
StreptocociidegrupBproducosubstanextracelulardenaturproteicdenumitfactorul
CAMP(dupiniialelecercettorilorcareaupuslapuncttestul/Christie,Atkins,MunchPetersen),
careacioneazsinergiccublizinaprodusdeuneletulpinideStaphylococcusaureus.Dac
aceste2microorganismesuntcultivaten2striuriperpendiculare(frsseating),acolounde
cele2striurisenvecineaz,lizahematiilor(deberbecsaudebou)aparemrit,nformdevrf
desgeat.
Materialenecesare:
coloniidestreptococihemoliticisaunehemolitici(dacunanumitcontextsauanumite
testesugereazprezenaunuistreptococdegrupB)
plciPetricugelozsngedeberbecsaudebou
tulpinadeS.aureusproductoaredeblizin(ATCC25923)/alternativamputeautiliza
fiidinhrtiedefiltruimpregnatecublizinstafilococic
ATCC=AmericanTypeCultureCollection
tulpinidecercetat
Tehnicadelucru:
InoculmnstriuotulpindeS.aureusproductoaredeblizin,peunuldindiametreleplcii

cuagarsnge.Perpendicularpeaceststriuvominocula(frsatingemstriuldestafilococ)o
tulpinCAMPpozitiv,otulpinCAMPnegativitulpinidecercetat.
Incubmla3537Caerobpnadouazisautimpde6orenatmosferde510%CO2.
Interpretare:
apariiauneizonedehemolizlrgite,nvrfdesgeat(vrfulspretulpinade
stafilococ)reprezintuntestpozitiv(confirmatdemartorulpozitiv)
hemoliznemodificattestnegativ(confirmatdemartorulnegativ)
Controldecalitate:
MartorpozitivStreptococcusagalactiae
MartornegativStreptococcuspyogenessauunstreptococdegrupD

12.5.Testulproduceriidecatalaz
Principiu:
Catalazadescompuneperoxiduldehidrogennapioxigen.

12.5.A.pentrumycobacterii
Materialenecesare:
culturapuramicroorganismuluicareurmeazafitestat,pemediuLwenstein
soluiedeperoxiddehidrogennTween80iapdistilat
Tehnicadelucru:
Pesteculturabacterianseadaug1mldesoluiedeperoxiddehidrogeniselastubulla
temperaturacamerei.
Semsoarnlimeacoloaneidebuledeoxigenisenregistreazvaloareanmm.
Interpretare:
Acestaesteuntestsemicantitativ,careajutladifereniereaspeciilordemycobacteriin
funciedecantitateadecatalazprodus.nvedereauneidiferenierisuplimentare,sepoateutiliza
testultermosensibilitiicatalazei(Mycobacteriumtuberculosis,spreexemplu,produceocatalaz
termosensibil).
Notificareasepoatefacenmodulurmtor
peste20mm+++
1020mm++
510mm+
<5mm
Controldecalitate:
MartorpozitivM.fortuitum
Martormaislabpozitiv(testsemicantitativ)M.tuberculosis/ncazultestuluipentru
termosensibilitateacatalazeirezultatulvafinegativdupnclzire20minutela68C
Martornegativmediuneinoculatpestecareseadaugsoluiedeperoxiddehidrogen

12.5.B.pentrualtemicroorganisme(spreexempludiferenierea

stafilococilordealtemicroorganisme)
Existmaimultetehnicidintrecarevomprezentatestulrealizatpeosuspensiebacteriani
respectivtestulcatalazeiprinsuspensionareaculturiipelam
Materialenecesare:
coloniiizolatedezvoltatepemediifrsnge/ncazulncareurmeazstestmo
bacteriecaresadezvoltatpegelozsnge,deoarecepotapreareaciifalspozitivedatorit
catalazeieritrocitare,urmeazsprelevmculturabacterianfraatingemediuldeculturn
acestsensurmeazsutilizmoansfirisprelevmculturdinporiuneaceamaibombata
colonieideidentificat
soluiedeperoxiddehidrogen3%
apdistilat
Tehnicadelucru:
B1.
Realizmosuspensiebacteriandensn12mldeapdistilatlacareadugm12picturi
desoluiedeperoxiddehidrogen3%.
Observmimediatiduptrecereaa5minuteapariiabulelordeoxigen.
B2.
Peolamdesticlpunemopicturdinsoluiedeperoxiddehidrogen.Suspensionmcultura
npicturadeH2O2iurmrimtimpde30desecundeapariiabulelordeoxigen.
Interpretare:
apariiabulelordegazsemnificuntestpozitiv,bacteriaproducecatalaz
absenabulelordegazsemnificuntestnegativ.
Controldecalitate:
MartorpozitivStaphylococcusaureus
MartornegativStreptococcuspyogenes

12.6.Testulutilizriicitratuluicaunicsursdecarbon
(Simmons)
Principiu:
Uneledintreenterobacteriideinunechipamentenzimaticcarepermiteasimilareaiutilizarea
citratuluicaunicsursdecarbon.UtilizndunmediucareconinecitratiunindicatordepH,
putemindentificaalcalinizareamediuluiirespectivaceaenterobacteriecarepoateutilizacitratul
caunicsursdecarbon.
Materialenecesare:
osuspensierelativdensobinutdincolonia(culturpur)bacterieipecaredorimso
identificm
mediulcareconineacidcitric0,2%(Simmons),turnatnpantneprubetemicin
prezenaindicatoruluidepHilapHneutru,mediulnensmnatareoculoareverde
Tehnicadelucru:
cuajutoruluneianse,prelevmsuspensiebacterianpecareonsmnmntrun
singurstriupesuprafaamediuluiSimmons

incubmla37Ciexaminmdezvoltareaculturiiieventualamodificareaculorii
mediului
Interpretare:
apariiauneiculturibacterienedealungulstriului,nsoitdemodificareculoriicare
devinealbastr,semnificuntestpozitiv=bacteriautilizeazcitratulcaunicsursdecarbon
nprezenaunuitubfrdezvoltareaculturii,culoareamediuluifiindverdeputemnotifica
unrezultatnegativ
Controldecalitate:
MartorpozitivKlebsiellapneumoniae/Enterobactercloacae
MartornegativEscherichiacoli

12.7.Testulcoagulazei
Principiu:
Stafilocociicoagulazopozitiviproducoenzimcareactiveazcoagulareaplasmei.Exist2
tipuridecoagulaz:coagulazalibericoagulazalegatdeperetelecelular(clumpingfactor).
Coagulazaliberacioneazpeprotrombin.Coagulazalegatacioneazdirectpefibrinogenul
plasmatic.StafilocociicoagulazopozitivisuntconsideraiStaphylococcusaureus.
Materialenecesare:
coloniiizolatepemediuneselectivaletulpiniicareurmeazsfietestat
plasmdeiepure(depreferat)/ncazulncareplasmadeiepurenuestedisponibilse
poatefolosiplasmuman(cusensibilitatemaimarelacoagulazaprodusdeS.schleiferiiS.
lugdunensis)
lame,tuburi

Tehnicadelucru:
a.Testulcoagulazeipelam
Verificprezenacoagulazeilegate.Pelamsedepuneopicturdeapdistilat(nusoluie
salinfiziologic).Suspensionmiomogenizm12coloniinpicturadeapdistilat(suspensia
trebuiesfietulbureomogen).
Ateptmcirca10secundeiurmrimapariiauneieventualeautoaglutinri(cazncarenu
puteminterpretarezultatultestuluitrecemlaefectuareatestuluicoagulriintub).Dacpictura
rmnetulbureomogen,adugm1picturdeplasmiurmrimapariiacoagulilortimpde
1015secunde.
Alternativsepotutilizatrusecomerciale.
Interpretare:
apariiacoagulilorn1015secundesemnificuntestpozitiv
absenacoagulilorsemnificuntestnegativ/5%dinS.aureusdaureaciifalsnegative
latestulpelam,fiindnecesarrealizareatestuluicoagulazeintub
b.Testulcoagulazeintuburi

Verificprezenacoagulazeilibere.Pipetmaseptic0,5mldeplasmntruntubsteril.
Prelevmocolonieiodescrcmnplasmadintub(alternativputemnsmnaocoloniede
testatn0,5mlbulionglucozat,incubm1824orela3537Civomamestecaplasmacu
suspensiamicrobianrezultatdupcultivare).
Incubmtubultimpde4orela3537C(pentruuneletulpinireaciapoatefipozitivchiarimai
repedede4ore).Rezultatulreacieiesteexaminatprinnclinareatubului.Dacreaciaeste
negativla4ore,reincubmpnla24ore.
Atenie,cheagulpoatefilizatdestulderapiddupmomentulformrii(uneletulpinideS.
aureusproducfibrinolizin).Dinacestmotiv,uniiautorirecomandexaminaretubuluitestdin30n
30minute,nprimele4ore.
Interpretare:
formareaunuicheag,semnificunrezultatpozitiv
absenacheaguluisemnificunrezultatnegativ
Controldecalitate:
MartorpozitivS.aureus
MartornegativS.epidermidis

12.8.Testulfilamentrii,pentruCandidaalbicans
Principiu:
Dupcultivarenseruman,serbovin,serdeberbecetctimpde24ore,la3537C,
blastoconidiileindividualedeC.albicansproducfilamentescurte(tubigerminativi).
Materialenecesare:
coloniiizolate,nscopulidentificrii
seruman,serbovin,serdeberbec,serfetaldeviel,serumalbuminbovinetc
aplicatoaredelemnsausterilepipetePasteurcuvrfulefilat,lameilamele,tuburimici

Tehnicadelucru:
ntruntubdedimensiunimici(ex.12/75mm)introducemaseptic0,51mldeserumansau
alttipdeser.Cuunaplicatorsteril(caunbeiga)atingemcoloniacaretrebuieidentificatiapoil
introducemntub.Incubmtimpde24ore,la3537C.
Realizmunpreparatntrelamilameliexaminmlamicroscopuloptic.
Interpretare:
prezenaunortubigerminativicuuncalibrumaingustdarcuolungimede34orimai
maredectdiametrulceluleideorigine,carecontinudirect,frniciostrangularesausept
blastoconidia,semnificuntestpozitiv
absenaaspectuluimenionatmaisussauprezenaunorpseudotubigerminativicare
suntdelimitaiprintrostrangulareiunseptdeblastoconidiesemnificuntestnegativ
Controldecalitate:
MartorpozitivC.albicans
MartornegativC.tropicalis

12.9.A.MediulmultitestMIU(mobilitateindoluree)
Principiu:
Mediulconineuree,triptofan,roufenol(indicatordepH)iestecondiionatntuburide
dimensiunimici.Gelozaestemoalepermindmobilitateamicroorganismuluinsmnathidroliza
ureeivaducelaalcalinizaremediului(culoareavireazdelagalbenlarou)producereadeindoldin
triptofanvafiindicatdenroireareactivuluiEhrlich
Materialenecesare:
tuburidedimensiunimicicumediulMIU
hrtiueindicatorcureactivEhrlich(sepoatefolosiireactivKovacs)saureactivEhrlich
/Kovacscondiionatnsticluedeculoarebrun
coloniideidentificat(coloniiizolate,culturpur)
ansfiretc
Tehnicadelucru:
Utilizmpentrunsmnareoansfir.Prelevmdincoloniaizolatpemediuneselectiv(dac
pentrucultivareaufostutilizatemediiselectivetrebuiesprelevmcugrij,frsatingemmediul
decultur)insmnmmediulprinneparencercndsrealizmonsmnarenlinie
dreapt.Fixmdedophrtiuaindicatornaafelnctsajungdeasupracoloaneidemediu,fr
slatingem.Incubmla3537Ctimpde24ore.ncazulncarenuarelocvirareaculoriimediului,
incubmpnla48deore.
Interpretare:
dinpunctuldevederealmobilitii
opacifiereaaparenumaipetraiectuldensmnarebacteriaesteimobil
opacifiereaesteuniformncoloanademediubacteriaestemobil
dinpunctuldevederealproduceriiureazei
culoareacoloaneirmnegalbenbacteriaesteureazonegativ
culoareadevineroiebacteriaesteureazopozitiv
apariiaunuiineldeculoareroielasuprafaamediuluinureprezintuntestpozitiv
dinpunctuldevederealtransformriitriptofanuluinindol
schimbareaculoriihrtieilarouvioletbacteriaesteindolpozitiv
culoareahrtieirmnealbbacteriaesteindolnegativ
alternativ,nlipsahrtiuelorindicatorsepoatepicurareactivEhrlichlasuprafaa
mediuluiiinterpretamodificarea/lipsamodificriiculorii
Controldecalitate:
MartorpozitivProteusmirabilisM+U+I+
MartornegativShigellaspp.MUI

12.9.B.MediulmultitestMILF(mobilitateindol
lizindecarboxilazfenilalanindezaminaz)
Principiu:
Mediulconineocantitatesczutdeglucoz,peptoncuDLtriptofan,Llizin,

DLfenilalanin,bromcrezolpurpursoluie2%(indicatordepH)iestecondiionatntuburide
dimensiunimici.Gelozaestemoalepermindmobilitateamicroorganismuluinsmnat.
ProducereadeindoldintriptofanvafiindicatdenroireareactivuluiEhrlich.Decarboxilarealizinei
vaducelaalcalinizaremediului(nabsenalizindecarboxilazeirezultouoaracidifiereamediului
datoritfermentriiglucozei).Dezaminareafenilalanineiducelaapariiadeacidfenilpiruvici
amoniacadugndclorurfericrezultoculoareverde.
Materialenecesare:
tuburidedimensiunimicicumediulMILF
hrtiueindicatorcureactivEhrlich(sepoatefolosiireactivKovacs)saureactivEhrlich
/Kovacscondiionatnsticluedeculoarebrun
coloniideidentificat(coloniiizolate,culturpur)
ansfiretc
Tehnicadelucru:
Tehnicadelucruesteasemntoarecuceaexpuslapunctul12.9.A.
Interpretare:
dinpunctuldevederealmobilitii
opacifiereaaparenumaipetraiectuldensmnarebacteriaesteimobil
opacifiereaesteuniformncoloanademediubacteriaestemobil
dinpunctuldevederealtransformriitriptofanuluinindol
schimbareaculoriihrtieilarouvioletbacteriaesteindolpozitiv
culoareahrtieirmnealbbacteriaesteindolnegativ
dinpunctuldevederealproduceriilizindecarboxilazei
alcalinizareacoloaneitraduceprezenaenzimei
acidifiereauoaracoloaneitraduceabsenaenzimei
dinpunctuldevederealproduceriifenilalanindezaminazei
apariiaunuiineldeculoareverdelasuprafaamediuluiilanivelultraiectuluide
nsmnaredupadugareauneipicturideclorurferic10%traduceprezenaenzimei
Controldecalitate:
MartorpozitivProteusmirabilisM+I+FDaz+LDaz
MartornegativKlebsiellapneumoniaeMIFDazLDaz+

12.10.MediulmultitestTSI(triplesugariron)
Principiu:
Mediulesteagarizat,condiionatndouzone(ncoloanlabazinpant)iconine
glucoz(nraportde1/10fadecelelaltezaharuri),lactoz,zaharoz,citratfericiunindicatorde
pH(rouneutru).Parteadreapt(coloana)nuvinencontactcuaeruliofercondiiirelativede
anaerobioz.Parteanclinat(panta)ofercondiiidemultiplicarenaerobioz.
Concentraiaglucozeiestemaimic,pentrucafermentareaacestuizaharspoatfidetectat
chiardacestesingurulzaharmetabolizat.Dacobacteriesedezvoltnparteadreaptvorfi
eliberaiaminoacizi,carenzonaaerobvorfidecarboxilaioxidativivormodificapHulspre
alcalin.ncazulncarelactozai/sauzaharozanusuntfermentate,cantitateadeacidprodus
prinfermentareaglucozei(toateenterobacteriilefermenteazglucoza)estesuficientdemicpentru

capHuldelanivelulpanteisrevinrapidlaneutru.nacelaitimp,pHulrmneacid(iculoarea
mediuluirmnegalben)lanivelulcoloaneipentrucncondiiiderelativanaerobioznuareloc
decarboxilareaoxidativ.Daczaharuriledelanivelulpanteisuntfermentate,cantitateadeacid
produsestesuficientdemarepentrucapHuldelaacestnivelsrmnacidirespectiv
culoareapanteisrmngalben.
Prezenacitratuluiferic,ncazulncarebacteriaproduceH2Sducelaapariiauneiculorinegre
(seformeazsulfitferos).
Lanivelulcoloaneisemainregistreaziproducereadegaz(delaapariiaunorbulefinepe
traseuldensmnare,pnlafragmentareasaurupereacoloanei).
Materialenecesare:
tuburidedimensiunimicicumediulTSI
coloniideidentificat(coloniiizolate,culturpur)
ansfiretc
Tehnicadelucru:
Utilizmpentrunsmnareoansfir.Prelevmdincoloniaizolatpemediuneselectiv(dac
pentrucultivareaufostutilizatemediiselectivetrebuiesprelevmcugrij,frsatingemmediul
decultur)insmnmcoloanaprinnepare,apoiretragemansaiatingndsuprafaacoloanei
descriemunstriunzigzag.Incubmla3537Ctimpde24ore.
Interpretare:
nceeaceprivetefermentareaglucozei
culoareacoloaneiestegalbenglucozaestefermentat
culoareacoloaneirmneroieglucozanuestefermentat(nuesteenterobacterie)
fermentareaglucozeipoatefisaununsoitdeproduceredegaz
interpretareasefacesimilarpentrufermentarealactozei/zaharozei,lanivelulpantei
ncazulncareseproduceH2S,remarcmapariiauneiculorinegrelanivelulcoloanei
alteelementeprivindinterpretareaacestorrezultatevorfiprezentatencapitolul28
Controldecalitate:
MartorpentrupHacidlanivelulcoloaneiipantei,frproduceredeH2SE.coli
MartorpentrupHacidlanivelulcoloanei,pHneutrulanivelulpanteiiproduceredeH2S
Salmonellatyphimurium
esteposibiliutilizareaaltortulpinimartor.

12.11.Testulproduceriideniacin
Principiu:
Mycobacteriileproducntimpulmultiplicriiniacin(acidnicotinic)pecareoutilizeazn
sintezaNADiNADP.Majoritateamycobacteriilorposedoenzimcarepoatetransformaniacina
libernacidnicotinicmononucleotid.Dacmicroorganismelenuprezintaceastenzim(ex.M.
tuberculosis),nmediuldecultursevaacumulaniacin.Niacinaestesolubilnapipoatefi
extrasdinmediu(deex.nsoluiesalinfiziologic)iarnreaciecubromuradecianogen(atenie
lautilizare!)nprezenaanilineirezultnduncompusdeculoaregalben.
Materialenecesare:
soluiedeanilin4%(conservatnsticldeculoarebrunla28C)

soluiedebromurdecianogen10%(arfidepreferatdatoritriscurilorfiidehrtie
indicatorimpregnatensoluiedebromurdecianogen,produsecomercial)
folosimculturi(realizatepemediulLwensteinJensen),nvrstdeminim3sptmni
Tehnicadelucru:
Folosimosubculturmycobacteriancucretereconfluent.Adugmcuajutoruluneipipete
Pasteurapdistilatsterilsausoluiesalinfiziologic.cuajutorulpipeteiPasteur(saucuajutorul
uneianse)raclmcoloniilepentruapermiteextracianiacineidinmediu.Tuburilermn1orla
temperaturacamerei.
Transfermcte0,5mlnfiecaredintrentuburiledetestare.Adugmsuccesiv0,5mlanilin
4%irespectiv0,5mlbromurdecianogen.Examinmdup5minutepentruaobservaapariia
culoriigalbenencazulreacieipozitive.naintedeeliminare,vomneutralizatuburileprin
adugareaunuivolumegal(aproximativ3ml)deNaOH10%nfiecaretub.
Interpretare:
apariiauneiculorigalbene,reprezintuntestpozitiv
absenaculoriigalbene,reprezintuntestnegativ
Controldecalitate:
MartorpozitivMycobacteriumtuberculosis
MartornegativMycobacteriumavium.

12.12.Testulproduceriidecitocromoxidaz
Principiu:
Unelebacteriiproduccitocromoxidaz,enzimcarelipsetelabacteriilestrictanaerobe.
Aceasthemoproteinacioneaziasuprauneisubstane,tetrametilpfenilendiaminrezultnd
uncompusdeculoarepurpurie
DintrebacteriileoxidazopozitiveamintimVibriospp.,majoritateaspeciilor
dePseudomonas,Alcaligenesspp,Neisseriaspp.(dintregermeniigramnegativi)iMicrococcus
spp.(dintregermeniigrampozitivi)
Materialenecesare:
soluieapoasdetetrametilpfenilendiamin1%conservatnsticldeculoarebrun
latemperaturafrigideruluisaufiidehrtieindicatorimpregnatnreactiv(preparatecomercial)
hrtiedefiltru
anscufirdeplatinsaupipetPasteur(cudat)
coloniiizolatedezvoltatepeagarsnge,agarchocolatsauagarMuellerHinton
Tehnicadelucru:
Existmaimultevariantetehnice,darvomdiscutadoarunadintreacestea.Punemntrocutie
Petriunfragmentdehrtiedefiltrupecaredepunem12picturidesoluieapoasdetetrametil
pfenilendiamin1%.Dupsterilizareaircireaansei,prelevmdintrocolonieizolati
descrcmculturapehrtiadefiltruprinmicricircularedemicamplitudine.
Urmrimapariiauneireaciideculoarenintervalde10secunde
Interpretare:
apariiauneizonedeculoarepurpurien10secunde,reprezintuntestpozitiv

absenaculoriipurpurie,semnificuntestnegativ
apariiazoneicoloratemaitardivnupermiteinterpretareatestului,nprincipiuestevorba
despreunrezultatnegativ
Controldecalitate:
MartorpozitivPseudomonasaeruginosa
MartornegativEscherichiacoli

12.13.Testulsensibilitiilaoptochin
Principiu:
Majoritateatulpinilordepneumococi(Streptococcuspneumoniae)suntsensibilelaconcentraii
sczute(<5g/ml)deoptochin(hidrocloriddeetilhidrocuprein).Uneletulpinialealtorstreptoci
careproduchemolizviridanspotfisensibile,darlaconcentraiimaimarialesubstaneiactive,n
timpcealtetulpinisuntrezistente.
Materialenecesare:
discuricuoptochin(5g/disc),cudiametrulde6milimetri
plcicuagarsnge
tampoanesterile
coloniihemoliticeizolate,careurmeazafitestate
Tehnicadelucru:
Prelevmcuuntamponsterildepreferat23coloniiirealizmonsmnarepejumtatea
uneiplcicuagarsnge,naafelnctsrezulteoculturconfluent(dinmotivedeeconomie,
nsmnareasarputearealizaipeoptrimedeplacPetri).Plasmundisccuoptochinn
centrulzoneinsmnateipresmuorpentrucadisculsadereuniform.Incubmtimpde1824
orela3537Cnatmosferde5%CO2.
Interpretare:
apariiauneizonedeinhibiiecudiametrulmaimarede14mm,semnificuntestpozitiv
absenainhibiieinjuruldisculuisemnificuntestnegativ
interpretareaestediferitdacsefolosescdiscurideoptochincualtedimensiuni(ex.cu
diametrulde10mm)
Controldecalitate:
MartorpozitivStreptococcuspneumoniae
MartornegativStreptococcusviridans.

Frndoialcacestetestereprezintdoarctevaexempledinmultitudineatestelorutilizate
nlaboratoruldemicrobiologie.Numainvedereaidentificriidiferitelorspeciimycobacterienesepot
utiliza,spreexemplu,peste130detestefenotipice.
nelegerealordinpunctdevedereteoreticprecumiutilizarealornmodpracticsuntutileatt
pentrustudeni,mediciirezideniaflailadebutulpregtiriinspecialitateademedicindelaborator,
pentruviitoriimedicidinaltespecialitictipentrumediciiibiologiiimplicaindiagnosticulde
laboratorlanivelclinicsauninteresulsntiipublice.
Avndlabaznoiunileteoreticenvate,diferiteleexempleprecumimanualelecareprezint
dinpunctdevederepracticdiagnosticulmicrobiologic,fiecaredintreceiimplicaivaputeasaplice

acesteelemente,deprinzndartaacestuidiagnosticattdeutilnpracticamedicallanivel
individualsaupopulaional.
Ultimultestpecarelvomprezentanfinalulacestuicapitolnusebazeazpeproprietile
biochimiceciarelabazcaractereleantigenice(structuraantigenic)alemicroorganismelordin
speciaStreptococcuspneumoniae.
Datoritfaptuluicnuexistuncapitolspecialaltehnicilorimunologiceundearputeafi
integrat,precumidatoritfaptuluicnpaginileprecedenteamprezentattestulbilolizeii
respectivtestulsensibilitiilaoptochin(ambeletestefiindnecesarendifereniereaStreptococcus
pneumoniaedeStreptococcusviridans)amdecissincludemaici,acesttest.

12.14.Testulumflriicapsulei(Neufeld,Quellungtest)
Principiu:
Complexulantigenanticorpformatnurmacuplriiantigenuluicapsularpneumocociccu
anticorpiianticapsulariareorefringensuperioarmediuluinconjurtoriapare,laexaminareacu
microscopuloptic,caunhalouclardispusnjurulbacteriilor,haloucarearedimensiunimaimari
decthaloulidentificatprinmicroscopie(preparatcoloratcualbastrudemetilen)nlipsaserului
anticapsular.
Materialenecesare:
culturauneibacteriicaresepresupunecaparinespecieiS.pneumoniae
sepotutilizaiprodusepatologice(ex.LCR)
seranticapsularpolivalentserurianticapsularemonovalente(detip)
soluiedealbastrudemetilen(1%)
soluiesalinfiziologic
lameilamele
microscopoptic
Tehnicadelucru:
A.examinareapreparatuluimartor
realizmosuspensieomogenopalescentdinculturabacteriann0,5mlsoluiesalin
fiziologiciadaugm0,5mlsoluiedealbastrudemetilen
depunemopicturdinsuspensiepeolamdemicroscop,acoperimcuolameli
examinmdimensiuneahalouluicareaparedatoritprezeneicapsulei
B.examinareapreparatuluitest
depunempeoaltlamdemicroscopopicturdinsuspensiabacterianinstricta
vecintateaacesteiadepunemopicturdinserulpolivalentanticapsular
amestecmprinmicricircularecele2picturi
ateptm10minute(preparatulsemeninencamerumed)
Interpretare:
identificareaunorcocicolorainalbastru,dispuiizolatsaunpereche,nconjuraideun
halouclar,maibinedefinitidedimensiunimaimaridecthaloulvizualizatprinexaminarea
preparatuluimartorsemnificuntestpozitiv,respectivprezenapneumococilor
ncazulncarenuestesesizatniciodiferenntrepreparatultestipreparatulmartor

neaflmnsituaiaunuitestnegativ
dupidentificareaunuitestpozitivfadeserulpolivalent,putemutilizaseruri
monovalente,specificedetippentruaindentificatipulcapsular
testulumflriicapsuleisepoaterealizaipornindpeproduspatologic
Controldecalitate:
MartorpozitivtulpincapsulatdeStreptococcuspneumoniae
MartornegativStreptococcusviridans.

15. Reacii antigen-anticorp utilizate n

microbiologie
BazelemolecularealeinteraciuniiAgAc
Reaciadintreantigen(Ag)ianticorp(Ac)necesitinteraciuneadeterminantuluiantigenic
(epitop)cusitusuldecombinarealanticorpului(paratop).
FactoriicarecondiioneazinteraciuneaAgAcsunt:
complementaritateastructuraldintreepitopiparatop(reaciaestespecific)
complementaritateapresupuneadaptareaconformaionalacelordougrupri,detipulcheien
broasc
complementaritateaelectrochimicagruprilorcareintrnreacieesteoconsecina
complementaritiistructuralepentrustabilizarealegturiiintrnaciuneforeintermoleculare,care
suntlegturinecovalente,forenespecificecuvaloaremic,spreexemplu
legturidehidrogen/energiedelegare37kcal/mol
foreelectrostatice(coulombienesauionice)/energiedelegare5kcal/mol
legturivanderWaals/energiadelegare12kcal/mol
legturihidrofobe.
Complementaritateastructuralsauforeleintermolecularenusunt,suficientefiecarenparte,
pentruaformalegturistabileestenecesarndeplinireaambelorcondiii.Cuctenergiadelegare
areactanilorestemaimare,cuattcomplexeleAgAcsuntmaistabile.
Interaciuneadintreepitopiparatopestedefinitde2parametri(afinitateaiaviditatea
anticorpilor).
Afinitateamsoarforadelegaredintreepitopiparatop.Afinitateaesterezultanta
forelordeatracieiderespingerecaremediazinteraciuneacelordoireactani.Ointeraciunecu
afinitatenaltpresupunestructuricomplementareperfecte,ntimpcecomplementaritatea
imperfectagruprilorreactantedeterminoafinitatesczut,deoareceforeledeatraciesunt
activenumaipedistanefoartemiciisuntdiminuatedeforelederespingere.Afinitateaanticorpilor
sepoatemsuraprindializalaechilibru.

AviditateaesteunparametrualinteraciuniiAgAccarerezultdinmultivalenaAg.Cele
maimulteAg.posedmaimultdectunepitop.Deexemplu,bacteriile,polizaharideleetc,aupe
suprafaunnumrmaredeepitopirepetitivi.Ag.proteiceauepitopimultipli,dardiferii.Antigenele
multivalenteleagunnumrechivalentdemoleculedeanticorpi.Energiatotaldelegarea
epitopilormultipliaiunuiAg,cuparatopiispecificiestemultsuperioarncomparaiecuenergia
separatafiecreiinteraciunidintreepitopiparatop.Aviditateacaracterizeazenergiamediede
legareaunuiAgmultivalentcuAcspecificiimsoarforarezultantaafinitiidintreepitopii
multipliaiunuiAgiparatopiicomplementari.ComplexeleAgAcformatedeantigenelemultivalente
suntstabile,disocierealorfiinddificil,deoareceestenecesarrupereatuturorlegturilorexistente.

Reaciincruciate
nanumitecazuripotavealocreaciincruciateunAgreacioneazcuunAccareafost
sintetizatfadeunaltAg(acestereaciipotapreadeex.datoritfaptuluicanumiteAgposed
anumitegruprideterminantecomune).Spreexemplu,serulimunantipolizaharidcapsular
deStreptococcuspneumoniaeaglutineazeritrociteleumanedegrupA(cuspecificitateantigenic
conferitdeNacetilgalactozamin),iarserulimunantiEscherichiacoliaglutineazeritrocitele
umanedegrupB(cuspecificitateantigenicconferitdegalactoz).Nuvomdetaliaaceste
aspectenmaterialuldefa.

Stadiilereaciilorantigenanticorp
InteraciuneaprimarsedatoreazlegriiefectiveaAcdeAgidepindenmoddirect
decantitateaiafinitateaAc.Dinpunctdevederediagnostic,reaciileAgAcncarereactaniise
aflninteraciuneprimarpotfipusenevidenprinnefelometrie.ncazultipurilordereaciicare
vorfidiscutatencapitoleleurmtoare,interaciuneaprimarnudevinevizibil(complexeleAgAc
suntdedimensiunimici,solubileisepotdesprindeuor).Invivoacesteinteraciunisuntspre
exemplunecesareisuficientenvedereaneutralizriiunorexotoxinecirculante(difteric,botulinic
etc),pentruinhibareaactivitiiunorbacteriisauvirusuri,saundeclanareaunorreaciide
hipersensibilitate(ex.nreaciadehipersensibilitatedetipI).
Interaciunilesecundareaparlacirca30deminutedupinteraciunileprimare.Datorit
faptuluicAgpoateaveamaimuliepitopiiarAcareminim2paratopicomplexeleprimaremici,
solubile,interacioneazntreeleformndcomplexesecundare,produsulfinalfiinduncomplex
AgAccaoreeatridimensional,insolubil,multmaistabildectcomplexeleprimare.Dinpunctde
vederediagnostic,reaciileAgAcncarereactaniiseaflninteraciunesecundarpotfipusen
evidenprintehnicicarevorfienumeratenfinalulacestuicapitolidiscutatencapitolele
urmtoare.Invivo,manifestrileinteraciunilorsecundaresuntdependentedenaturareactanilori
decondiiiledereacie.
InteraciunileteriaredefinescmanifestrileinvivoalereaciilorAgAcidepindnspecial
deanumitevariabilecaresuntcaracteristicegazdei.Interaciunileteriarepotconducelaunrezultat
pozitiv(proteciagazdei)saunegativ(degradaretisular).

TipuridereaciiAgAc
nfunciedenaturaantigenului,metodeleaplicatepentruvizualizare,scopulurmritexistmai
multetipuridereaciiAgAc,dupcumurmeaz:
reaciideprecipitare
potavealocngel(imunodifuziaradialsimplMancini,dubladifuzieOuchterlonyetc)

sau
potavealocnmediulichid(reaciaRamon,precipitareaninelAscolietc)
reaciideaglutinare
sepotfolosindiagnosticulbacteriologic(ex.reaciaHuddleson)sau
sepotfolosindiagnosticulserologic(ex.reaciaWright)
reaciadefixareacomplementului(RFC)
ndiagnosticulserologicalsifilisului,leptospirozeietc
ndiagnosticulserologicalinfeciilorviraleetc
reaciideseroneutralizare
reaciaASLO(ndiagnosticulserologicalinfeciilorstreptococice)
diferiteintradermoreaciicumecanismimunumoraletc
reaciincarecomponentelesuntmarcate
izotopic(radioimmunoassay,RIA)
enzimatic(enyzmelinkedimmunoassay,ELISA)
fluorescent(fluorescentimmunoassay,FIA)
chemiluminiscent(chemiluminiscentassay,CLA).

16. Reacii antigen-anticorp: reacia de

precipitare
ReaciaAgAcdeprecipitarepoateavealocnmediulichidsausolidiconstnunirea
AgsolubilecuAcspecifici,rezultndcomplexeantigenanticorp,carenudevininsolubileistabile
dectncazulformriiuneireeletridimensionale,conformteorieireeleicarepresupune:unAgcel
puintrivalentpentruamplasareaAc,unAcbivalenticondiiifizicefavorabileprecipitrii(ex.Ac
puinglicozilai,detipIgGcu3%glucide,superioriAcdetipIgMcu10%glucide).
ReaciadeprecipitareestesensibilispecificnevideniereaprezeneiAg(pentrurealizarea
reeleiAgAcestenecesarcanreaciesintreoanumitcantitatedeAgiAc,caresse
gseascntrunanumitraport/proporie,iarAgcareparticiplaformareaagregatelorsuntntro
cantitateproporionalmaimic,nraportcuAc).ncadrulcursuluisediscutdiferitelesituaiilegate
deprezon(excesdeAc),excesrelativdeAc,zonadeechivalen(AgiAcsegsescn
totalitatenprecipitat),excesrelativdeAgirespectivpostzon(excesdeAg).Pentruanumite
sistemeAgAcvafidefinitinoiuneadeproporieoptim.

Clasificareareaciilordeprecipitare
Reaciiledeprecipitaresepotclasificadupcumurmeaz.
Reaciideprecipitarenmediulichid
Reaciideprecipitarenamestec,reaciidefloculare

titrareatoxineidifterice(metodaRamon),determinareatitruluiAcantitoxicietc
VDRL(VeneralDiseaseResearchLaboratory),USR(UnheatedSerumReagin),RPR
(RapidPlasmaReagin)etc,ndiagnosticulserologicalsifilisului
Reaciideprecipitareninel
reaciaAscoli,determinareagrupuluistreptococicetc
Reaciideprecipitarentubcapilar
determinareaprezeneiproteineiCreactive
determinareaprezeneitipuluiMstreptococic(streptococidegrupA)etc
Dozajulnefelometricetc
Reaciideprecipitarenmediugelifiat
Imunodifuziaradialsimpl(ex.metodaMancini)
Difuziadubl
metodaElek
difuziadublradial(Ouchterlony)
Reaciideprecipitarencaredifuziangelestecombinatcumigrareancmpelectric
Imunoelectroforeza
Contraimunoelectroforeza
Electroforezaurmatdeimunofixare
Electroimunodifuzia.

Reaciideprecipitarenmediulichid
AulabazunireaAgcuAcnmediullichid,formndusecomplexeAgAc,carevorprecipita
atuncicndAgiAcsegsescnanumiteproporii.
Reaciideprecipitarenamestec
ReaciadeprecipitarentreAgiAcsepoatecuantificaiestefoarteutilpentruademonstra
prezenairespectivabsenaprecipitatuluinfunciedeconcentraiilerelativedeAgiAc.Spre
exemplupentrutitrareatoxineidifterice(Ramon)sepunncontact,namestecntuburi,
cantitiegaledincomponentacaretrebuietitrat(toxinadifteric,Ag)cucantitivariabiledeAcla
caretitrulestecunoscut.Cantitateamaximdeprecipitatsegsetentubulundeexistraportul
deechivalen.Pentrusistemultoxindiftericanticorpiantitoxindifteric(caincazul
sistemuluitoxintetanicanticorpiantitoxintetanic),raportuldeechivalensesuprapune
pesteproporiaoptim,astfelnctsepoateobservarelativuortubulncareaparecantitateacea
maiimportantdeprecipitat.Cunoscndtitrulanticorpilor,seaflimediattitrultoxinei(1Lf=
1limesfloculans=cantitateadetoxincaresecombincuounitatedeantitoxin=1UA=1
unitateantitoxic).Dacspreexempluprecipitareamaximaparentubulncaretitrulanticorpilor
estede10UA,titrultoxineiestede10Lf.
nmodasemntor,prinmetodaDeaniWebsepoatedeterminatitrulanticorpilor
antitoxici,cunoscndtitrultoxinei.
Reaciideprecipitareninel
Reaciadeprecipitareninel,constnpunereancontactaAgiAcastfelnctsnuse
amestecereaciacareaparelainterfaadintreAgiAcseconcretizeazprintruninelde
precipitarealbicios.Seutilizeazpentruidentificareaoriginiipetelordesnge(reaciaUhlenhut,n
medicinalegal)ipentruidentificareaprovenieneiunorpreparatepebazdecarne(nindustria

alimentar).
Demonstrativ,ncursullucrrilorpractice,reaciadeprecipitareninel(reaciaAscoli)sepoate
utilizapentruidentificareaprezeneiantigenuluicrbunos(AgobinutdelaBacillusanthracis).
Istoric,soluiadeantigensepreparaporninddelaorgane(deex.splin)recoltatedelaunanimal
careadecedatipentrucaresesuspectacdecesulafostprodusdeoinfeciegeneralizat
cuBacillusanthracis.Fragmentuldeorgansemojaransoluiedeclorurdesodiusteril,
adugnduseulteriorctevapicturideacidacetic,apoisemeninealatemperaturadefierbere
timpde510minute.DupdecantareaialcalinizareacuNaOH,urmafiltrareairezultasoluia
antigenic.Dinpunctdevederetehnicvomutiliza3tuburi,1pentrureaciei2tuburimartor.n
primultubmartorvompipeta0,5mlseranticrbunosi0,5mlsoluiesalinfiziologiciarnal
doileatubmartorvompipeta0,5mlsernormaldecali0,5mlsoluiedeantigen.nceeace
privetetubuldereacietrebuiespipetmnti0,5mldinserulanticrbunos,urmndcasoluiade
antigen(ncantitatede0,5ml)sfiepipetatfoartelent,eventualprinscurgerepicturcu
picturpepereteleinterioraltubului,naafelnctcele2soluiisnuseamestece.ncazul
reacieipozitive(prezenaAgcrbunosnsoluiaantigenic),dupcirca5minute,lainterfaadintre
cei2reactiviapareunineldeprecipitare.

Reaciideprecipitarenmediugelifiat
Utilizareagelozei,ncarepotsmigrezeceidoireactivi(sevautilizaoanumitconcentraiede
agarnsoluiedetamponveronal,naafelnctporiigeluluispermitmigrarea),vaducela
vizualizareareacieiAgAcprintrunarc/liniedeprecipitare.
Imunodifuziaradialsimpl(IDRSMancini)
Imunodifuziaradialsimpl(Mancini)sebazeazpedifuziaspontaniradialaAgdinproba
decercetat,ntrungelcareconineocantitateconstantdeanticorpi,determinndapariiaunui
cercdeprecipitarealcruidiametruestedirectproporionalcuconcentraiadeantigendinprob.
Pentruaobineuncercdeprecipitaredemrimeconvenabil,concentraiaAcnglobaingel
trebuiesfiealeasnfunciedetitrulacestoraideconcentraiaAgcareurmeazafitestat.
Metodapermitedeterminareacantitativaimunoglobulinelor(IgG,IgM,IgA),fraciuniiC3a
complementului,alfa1antitripsinei,siderofilineietc.
Suntnecesareplcue(deex.cudiametrulde5cm)ncaresetoarnungelcareincludeAc
fadestructuraacreiconcentraiedorimsodeterminm.Existuncodalculorilorispre
exemplu,plcuelecarevorfiutilizatepentrudeterminareaconcentraieideIgGauculoareroie,
pentruIgAculoareaestealbastr,pentrusiderofilinculoareaesteportocalieetc.ngelsunt
perforatemicigodeuri(3mmdiametru).Suntnecesareseruridecercetatiunserdereferinn
caresecunoateconcentraiadiferitelorcomponente(spreex.cte100UI/mlpentrufiecaredintre
cele3imunoglobuline).naintedepipetareaserurilorngodeuriserealizeazdiluareaacestora,
diluiafiindpentruIgG,IgAisiderofilinirespectivpentruIgM,complementC3i
alfa1antitripsin.Diluiaseruluidereferinsefacenfunciedeproteinacareurmeazafi
determinat.Cantitateadeserintrodusnfiecaregodeuestede5ml(ungodeupentruserulde
referinirestulpentruseruriledecercetat).
Dup10minutedemeninereaplcueipemasadelucruaceastaseincubeazla37C,cu
stratuldegelpoziionatnsus,timpde48orepentruIgAiIgMirespectiv24deorepentru
celelaltecomponente.Citireaserealizeazcuajutoruluneiriglegradate,dinplastic,origl

specialpentruaceastanaliz(demonstratncursullucrrilorpractice).Sevamsurainiial
diametrulcerculuideprecipitaredinjurulgodeuluincareseaflseruldereferiniarrezultatul
obinuttrebuiescorespundateptrilor(deex.6mmpentruIgGcareafostdiluatiastfelare
concentraiade25UI/ml).ncazulcrezultatulestecelateptat,sepoatefacedirectcitirea
diametrelorcercurilordeprecipitarepentruseruriledecercetatncazcontrarestenecesaro
corecie(dacspreexempludiametruleste6,5mmnlocde6mm,dinvaloareaobinutpentru
seruriledecercetatsescad0,5mm).Dupcitireadiametrelor,secomparrezultatelecucelepuse
ladispoziientabeleiarcifraobinutsenmuletecudiluiaprobei(spreex.dacobinemo
valoarede50UI/mlpentruIgG,vomnmulicu4pentruaobinerezultatulreal).
Imunodifuziadublradial(Ouchterlony)
ImunodifuziadublsebazeazpedifuziaAgiAc(unulsprecellalt)ntrungel.Deoarece
mrimeamoleculelordeAgiAcestemaimicdectdiametrulporilorgeluluiiardistanaparcurs
dereactantntrunanumittimpestedirectproporionalcugradientulconcentraieisaleiinvers
proporionalcugreutateasamolecular,migrareareactanilorunulsprecellaltdeterminformarea
unorliniideprecipitarelaloculdentlnireAgAc.ngelultransparentvoraprealiniiopace,
numrullorcorespunzndnumruluisistemelorAgAcstudiate.
Metodacertificprezenasauabsenaproteineicercetate.Sepotevideniaalfafetoproteina,
proteinaCreactiv,beta2microglobulina,proteineBenceJonestipkappailambda,produide
degragareaifibrinogenuluietc.nmicologie,prinimunodifuziesepoateidentificaprezena
exoantigenelorfungice(Histoplasmacapsulatum,Blastomycesdermatidis,Coccidioides
immitisetc)sauprezenaAcfadeAgfungice,spreexemplundiagnosticulserologicalunei
aspergilozeinvazive.Aceastmetodestencfrecventutilizatpentrudeterminareaspecificitii
anticorpilorantinuclearisauaaltoranticorpinpatologiauman.
Suntnecesarelamedemicroscoppecaresetoarnungeldeagar1%,lamaputndfifolosit
peparcursuluneizile(dacacestlucrunusepoatendeplini,lamatrebuiepstratncamer
umed,latemperaturafrigiderului,pentrumaximosptmn).ngeluldepelamseperforeaz3
grupedegodeuri,cte7godeurinfiecaregrup(1godeucentrali6godeuriperiferice,fiecarecu
diametrulde3mm).DacspreexempludorimsdeterminmprezenaproteineiCreactiv(CRP)
nseruridecercetat,avemnevoiedeunsercuAcantiCRP,seruridecercetatiunserdereferin
careconineCRP.Numerotndgodeurileperiferice,pipetmAcantiCRPngodeulcentraliserde
referincuCRPngodeurile1i4.ncelelaltegodeuripipetmseruriledecercetat.Incubmla
37C,timpde24deore,ncamerumed(ntrocutiePetriputempuneobucatdevatmbibat
nsoluiesalinfiziologic,alturidelamarespectiv).Liniiledeprecipitarepotdevenivizibiledup
24oredarsuntmultmaiclaredup24deore.
Pentrucitirepoatefinecesarolupiosursdelumin.ntregodeulcentraligodeurile1i
4(martoripozitivi)voraprealinii(arcuri)deprecipitare.ncazulncaredeex.ngodeul2exist
CRP,vaapreaunarcdeprecipitareintregodeulcentraligodeulnr.2.Estecertificatprezena
CRPncazulncarecele2liniideprecipitare(dintregodeulcentraligodeurile1i2)suntunan
continuareaceleilalte(imaginedegenunchindoit).
DubladifuzieElek
Aceastmetodpermitedepistareacapacitiitoxigeneauneitulpini
deCorynebacteriumdiphteriae.ncazulncaretulpinaestetoxigen,toxinavadifuzanmediuiar
dupunireacuAcantitoxin,complexeleAgAcvordanatereunorliniideprecipitare.

ntrocutiePetriturnmmediulElekidupcemediulsantrit,decupmunanpeunuldin
diametre.nanulrespectivpipetm0,5mlserantidifteric,sercareconineAcantitoxindifteric
nconcentraiede1.000UI/ml.Acantitoxindiftericvordifuzanmediu.Dupcirca2ore
nsmnmperpendicularpeanulcuAcantitoxin,defiecareparteaanului,otulpin
deCorynebacteriumdiphteriaetoxigen(martorpozitiv),otulpin
deCorynebacteriumdiphteriaenetoxigen(martornegativ)itulpinidecercetat,cteunstriu(de
fiecareparteaanului)pentrufiecaretulpin.Incubmla37Cpentru48ore,darurmrimzilnic
apariiaculturiiiprecipitatului(liniilordeprecipitare).Dealungulliniilordensmnareapare
culturbacterian.DinculturadeCorynebacteriumdiphteriaetoxigen,toxina(Ag)difuzeazn
mediu.UnireadintreAgiAcducelaformareaunorcomplexeAgAccareprecipit,iarnmediuvor
aprealiniideprecipitarenunghiuriledintreculturianulcuAcantitoxin.ncazulncareapar
liniideprecipitarenunghiuldintreunadintretulpiniledecercetatianulcuAcantitoxin,
respectivatulpinestetoxigen.Reaciavafinegativpentrumartorulnegativipentrutulpinilede
cercetatnetoxigene.

Reaciideprecipitarencaredifuziangelestecombinat
cumigrareancmpelectric
Electroforezaproteicngel
Electroforezaproteicngelestefolositnlaboratoruldeimunochimiepentrudecelareaunor
proteinepatologice.Deplasareaproteinelorntrunstratdegelcareestesupusaciuniiunuicmp
electricsevarealizadifereniat,pentrufiecarestructurproteicnparte,nfunciedegreutatea
molecularincrcturaelectricaproteinelor.Pentruvizualizareestenecesarfixarea,uscarea
icolorarealiniilordeprecipitarecarecorespundfraciunilorproteicedinserulnormalsauunor
eventualeproteinepatologice(ex.ocomponentmonoclonal).
Imunoelectroforeza
Seasociazelectroforezangelcuimunodifuziadubl(realiznduseseparareaprin
electroforezaproteinelornmediugelozat,urmatdeoimunodifuziedublutilizndunantiser
corespunztor).ReaciaAgAcsevavizualizaprinapariiaunorarcurideprecipitare.Esteometod
foarteutilnstudiereapuritiiunuiAg(sauAc),nsnmodcurentareindicaiididactice.Datorit
faptuluicnboalapneumococicprinurinseelimincantitidestuldeimportantedeAgK,
prezenaacestuiapoatefievideniatdeex.prinimunoelectroforez.
Contraimunoelectroforeza
ContraimunoelectroforezareprezintodubldifuziencaredeplasareaunulfadecellaltaAg
iAcesteacceleratdeuncmpelectric.Peolamdemicroscopsetoarnungeldeagar1%i
seperforeaz3grupedeperechidegodeuri,fanfa.Metodapoatefiutilizatpentruacele
structuriantigenicecarencmpelectricmigreazctreanod.Lundndiscuiespreexempludoar
unadintrecele3grupedeperechidegodeuri,ngodeurilecarevorfipoziionatesprecatod(polul
negativ)pipetmAgiarngodeurilecarevorfipoziionatespreanod(polulpozitiv)pipetmAc
cunoscui,specificiAgpecaredorimslidentificm.Reaciaestemairapidimaisensibil
dectdubladifuziedeoarecemigrareacelordoireactaniunulctrecellaltesteamplificatde
cmpulelectric.Reacia(apariiauneiliniideprecipitarentregodeuri,ncazulncarengodeul
catodicsegseteAgpresupus)poateficititdupnumai3090minutenlocde24deoreaa
cumsentmplndubladifuzieOuchterlony.Metodaafostutilizatdinpunctdevedereistoric

pentruidentificareaprezeneiAgHBs.Sepoateutilizapentruidentificareaantigenelorcapsularen
lichidulcefalorahidianlapacienicumeningitacut(Haemophilusinfluenzae,Neisseria
meningitidis,Streptococcuspneumoniae).
Electroimunodifuzia
Electroimunodifuziaarelabazelectroforezaprobelorcareconinproteinaantigen,ntrunstrat
degel,careconineocantitateconstantdeanticorpimonospecifici(antiproteinantigen),
rezultndzonedeprecipitarenformderachetsauconuri,acrorarieestedirectproporional
cuconcentraiaantigenului.MetodaareosensibilitatemaimaredectIDRS.

17. Reacii antigen-anticorp: reacia de aglutinare

nreaciadeaglutinareantigenelesuntdenaturcorpuscular.Reaciadeaglutinareconstn
reaciaAccuAg(naturalsauartificial)depesuprafaaunorparticule(bacterii,hematii,latex,
cristaledecolesteroletc),determinndaglutinareaacestoraprinscdereaforelorelectrostaticede
repulsiedintreparticuleiformareaunorpunidelegtur.
Aglutinareaestemaisensibildectprecipitarea,Agfiindoparticulinuomolecul
solubil.AnticorpiidetipIgMsuntmaiaglutinanidectAcdetipIgG(pentrucaumaimulte
valene).ExistiAcneaglutinani(incomplei/blocani)saucareaglutineaznumailarece.

Ctevatipurideaglutinare
Existmaimultevariantetehnicedeaglutinare.Dintreacesteavomprezentancontinuare,pe
scurt,aglutinareadirect,aglutinareaindirect,inhibareaaglutinrii,aglutinareancoloani
aglutinareamediatdeAcantiimunoglobuline.Ulteriorvomdiscutareaciiledeaglutinareutilizate
nbacteriologieimicologie.
Aglutinareadirect
AglutinareadirectreprezintaglutinareaAgnaturalealeunorparticule(bacterii,celule)de
ctreAcspecifici.Sepoateutilizandiagnosticulbacteriologic,deex.pentruidentificarea
enterobacteriilor(Shigella,Salmonella,E.colietc)pebazastructuriiantigenice,ndiagnosticul
serologicalunorboliinfecioase(febrtifoid,brucelozetc),pentrudeterminareagrupelor
sanguine(ABO)etc.
Aglutinareaindirectsaupasiv
Esteoreaciencareparticuleartificiale(globuleroiiformolate,particuledelatex,cristalede
colesterol,colodiuetc)saunaturalesuntncrcateinvitrocuAgsauAcisuntaglutinatede
ctreAcsauAgcorespondentedinprobadecercetat.Seutilizeaznprincipalpentrudecelarea
factoruluireumatoid,determinareaCRP,determinareagrupuluistreptococicetc.
Inhibareaaglutinrii
ReaciaconstninhibareaaglutinriiparticulelorncrcatecuAg,dupcenprealabilAc

reacioneazcuAgcorespondent.Seutilizeazdeex.pentrudecelareamioglobineisaun
diagnosticulimunologicalsarcinii.
Aglutinareancoloan
Metodapermiteomaibunvizualizareareaciei.Dispozitivulutilizatare2compartimente,
parteancareseintroducreactivii(situatsuperior)iocoloansituatinferior,plincu
microparticuledesticl.Dupintroducereahematiiloriaseruluidecercetatiincubarea
acestora,dispozitivulestecentrifugat.ncazuluneireaciipozitivecomplexulAgAcsevaputea
vizualizalanivelulcoloanei,ntimpcencazuluneireaciinegative,hematiilesedepunnporiunea
inferioaracoloanei.
AglutinareamediatdeAcantiimunoglobuline
AnticorpiiantiIgsevorcuplacuparticulencrcatecuAcivorducelaapariiaunor
aglutinate(prinapariiacomplexuluiimun).Seutilizeazspreexemplundecelareafactorului
reumatoid(tehnicaWaalerRose).

Utilizareareacieideaglutinarenmicrobiologie
Vomprezentaattexempledeutilizareareacieideaglutinarendiagnosticuldirectctin
diagnosticulindirect(serologic).Reamintimfaptulcncadruldiagnosticuluidelaboratorserologic
sevadeterminaprezena(sausevadovediabsena)Acnecunoscui,nserulpacientuluirespectiv,
utilizndAgcunoscute.ndiagnosticulserologic,deregul,trebuiesputemrspundelaminim
treintrebrieseniale:existanticorpinserulpacientuluiinvestigat?careestetitrulanticorpilor?
cumevolueazndinamic(ntimp)acesttitru?nacestscopvomrealizaminimdoudeterminri
diferitelaunintervalde710zile(pentrumajoritateainfeciilorcarepotfidiagnosticateastfel).n
acestcapitolvomdiscutaattreaciiserologicecalitativectireaciiserologicecantitative.

Reaciideaglutinareutilizatendiagnosticuldelaborator
microbiologicdirect
Tehnicadeaglutinareseexecutnapatraetapadiagnosticuluidelaborator,respectivn
etapadeidentificare,pebazacaracerelorantigenice.nmomentulaplicriiacesteireaciiavemo
seriededateporninddelainformaiileclinice,paraclinice,epidemiologice,saprelevatunanumit
p.p.,caresaexaminatdinpunctdevederemicroscopiciafostcultivat.Aacumammenionat
anterior,nvedereaidentificriiestenecesarsavemcoloniiizolate,culturpur.

1.Aglutinareapelam
Spreexemplu,ncursulidentificriiuneitulpinienterobacteriene(Shigella
spp.,Salmonellaspp.,E.colietc),dupcultivareap.p.pemediiselectivodiferenialeseobin
coloniiizolateidinporiuneasuperioar(bombat)acoloniilorizolatefacemtreceripemedii
multitest(ex.TSI,MIU).nziuaurmtoare,avemdejamaimulteelementepentruncadrareatulpinii
izolatentrospecie,dar,folosindspreexempluculturabacteriandezvoltatpemediulTSI,putem
facereaciadeaglutinare.nniciuncaznusevorutilizapentruidentificareapebazdecaractere
antigenicetulpinimaivechide1824ore.
Pentrurealizareareacieideaglutinaresuntnecesareurmtoarele:culturadeidentificat(colonii
detipS,de1824ore),soluiesalinfiziologic,AccunoscuifadeAgpecaredorimsle
identificm(Acpolivaleni,Acmonovalenidegrup,Acmonovalenidetip,dupcaz),lamede
microscopcurate,paharBerzeliuscuamestecdezinfectantetc.
Iniial,peolamdemicroscopcuratidegresatpunemlaunadintreextremitilelameio

picturdesoluiesalinfiziologic,ncaresuspendmunfragmentdincoloniadeidentificatnaa
felnctsobinemosuspensieomogen,opalescent.ncazulncaresuspensiarmne
omogen,putemtrecelaetapeleurmtoarencazulncarepicturaselimpezeteiapargrunji,
tulpinaestenetipabilprinaceastmetod(apareaglutinareanespecific),arputeafivorbadeo
tulpincareprovinedintrocoloniedetipR.nurmtoareaetap,lacealaltextremitatealamei,
punemopicturdesercuAccunoscui,deex.polivaleniirealizmosuspensieomogen,
opalescent,acolonieideidentificat.nclinmlamadectevaori,uor,ntoatedireciile,pentrua
favorizacontactuldintrecei2reactaniiunireacomplexelorAgAcmici,solubile,pentruaforma
reeledecomplexeAgAc.ncazulreacieipozitive(corespondenntreAccunoscuiiAgpecare
dorimslidentificm)picturaselimpezeteiapargrunjideaglutinare.Esteindicatscitim
reaciapefondnegru.Decelemaimulteoricitireasefacecuochiullibernsncazulunor
aglutinatededimensiunifoartemicipoatefinecesarsfolosimolup,unmicroscopsauun
aglutinoscop.Pentruidentificareadiferitelormicroorganismeexistschemecareorienteazetapele
deurmat(tabeleleischemelerespectiveselivreazdectreproductorimpreuncuserurilecu
Acspecifici).Lamelepecaresefacreaciiledeaglutinare,dupterminareareaciilorseintroducn
amesteculdezinfectant.
ncadrullucrrilorpracticevorfidiscutateaglutinrilepentruidentificareaE.coli,Salmonella
spp.pnlaniveldespecie(conformclasificriiKauffmannWhite)irespectivagrupurilor
deShigellaspp.TotprinaglutinaredirectsemaipotidentificatulpinideVibrio
cholerae,Haemophilusinfluenzaetipb,tulpinideBrucellaspp.,tulpinideE.colienteropatogen,
iarncazulleptospireloriunorrickettsiiapariiaaglutinriitrebuieverificatcuajutorul
microscopului.
Reaciideaglutinareindirectsepotutilizapentrudetectareanp.p.astreptococilordegrupA
sauB,pneumococilor,meningococilor,E.colitipcapsularK1,H.influenzaetipcapsularb,pentru
detectareaunorenterotoxine(stafilococice,clostridieneetc),pentrudetectareaunorfungi
(Cryptococcusneoformans,Candidaalbicans,Aspergillusspp.)sauaunorvirusuri.Totprintehnica
deaglutinareindirectsepotidentificaexotoxinenfiltratuldecultur,streptocociidegrupAD,E.
coliO:157,Legionellapneumophila,Listeriamonocytogenesetc.

2.Aglutinareantuburi
Tehnicadeaglutinarentuburisepoatefolosipentruconfirmareaunuirezultatpozitivla
aglutinareapelamsauatuncicndrezultatuluneiaglutinripelamnuestesuficientdeclar.
Vomavealadispoziieculturapurdeidentificatcaresevapreparadifereniatnfunciedetipulde
Agpecaredorimslidentificm.Spreexemplu,dacncercmsidentificmAgdetipOiar
bacteriaarputeasprezinteiAgHsauAgK(carearputeainhibaaglutinareacuAgO)culturase
vamenine12orela100CpentruinactivareaAgdenveli,dupcaresevatrecelarealizarea
aglutinriintuburi(oprocedurasemntoarepoatefinecesarincazultehniciideaglutinarepe
lam).VomutilizaunirdeeprubetencarevomintroduceAccunoscui,caresevordilua
succesiv,binar,cusoluiesalinfiziologic.ntuburilerespectivevomadugaocantitate
echivalentdesuspensieAg(spreex.,la0,5mlAcvomaduga0,5mlsuspensieAg).Incubarea
sevafacedifereniat,nfunciedetipuldeAgpecaredorimslidentificm(ex.20orela52C
pentruidentificareaAgO).
Reaciaestepozitivncazulapariieiaglutinatelor(grunjoasencazulprezeneiAgO,
floconoasencazulprezeneiAgHetc).Reaciadeaglutinarentuburipermiteiverificaretitrului

lacarearelocformareacomplexelorAgAc.

Reaciideaglutinareutilizatendiagnosticulserologic
ndiagnosticulserologic,nmodobinuit,reaciileutilizatepermitdetectareaprezeneiAcn
seruldecercetatdaristabilireatitrului.Totuiexistictevaexempledereaciideaglutinare
calitative.

1.Aglutinareapelam
ReaciiledeaglutinarepelamHuddleson(ndiagnosticulbrucelozei)irespectiv
KudicksSteuer(ndiagnosticultifosuluiexantematic)auintratnistoriamedicinei.Primadintre
reaciioutilizmdemonstrativncadrullucrrilorpractice,apariiaaglutinatelorfiindclariartehnica
delucrufoartesimpl.Suntnecesareurmtoarelemateriale:lamedemicroscopcurate,Ag
brucelosinactivat(coloratnviolet),serdecercetat.Peolamdemicroscopdepunemopictur
dinsoluiadeAgbrucelosinimediatavecintateaacesteia,opicturdeserdecercetat.Cu
coluluneialtelameamestecmiomogenizmcei2reactani.Prinmicridenclinarealamein
toatedireciilefacilitmformareacomplexelorAgAc,ncazulncarenseruldepacientsunt
prezeniAcantiBrucellaspp.Reaciaestepozitivncazulncareseremarcprezena
aglutinatelor.Chiarinperioadancareaceastseutilizandiagnostic,oreaciepozitivpelam
trebuiasfieconfirmatprinaglutinarentuburi.
Tehnicadeaglutinareindirectpoatefiutilizatndiagnosticulserologicalinfeciilorproduse
deHelicobacterpylori,Treponemapallidum(hemaglutinarepasiv)etc.

2.Aglutinareantuburi
Tehnicadeaglutinarentuburisepoatefolosindiagnosticulserologicalbrucelozei(reacia
Wright),diagnosticulserologicalinfeciilorprodusedeCryptococcusneoformans,diagnosticul
serologicalfebreitifoideetc.DenumireadereacieWidalpentrudiagnosticulserologicalfebrei
tifoideaintratnistoriamedicinei.
Lundndiscuiediagnosticulserologicalfebrelorenterice,inclusivfebratifoid,suntnecesare
urmtoarele:serurirecoltate(ndinamic)delapacieniilacaresesuspicioneazacestdiagnostic,
tamponfosfatsalin,baiedeapcutemperaturreglabil,Agcunoscute(AgOiAgH).Sevalucra
cu2rndurideeprubete,unrndpentrudetectareaprezeneiititruluiAcantiO,aldoileapentru
detectareaprezeneiititruluiAcantiH(pentrupersoanelenconvalescensauncazul
suspicionriistriidepurttorvomncercasidentificmnseruldecercetatAcititrulAcantiVi,
deex.prinhemaglutinarepasiv).
Seruldecercetat,pentrufiecarernddetuburi,vafidiluatcutamponfosfatsalin,ndiluii
binare.Dacamesteculdeserdecercetatidiluantvafincantitatede0,5ml,vomadugao
cantitatesimilardeAg,cte0,5mlAgOnprimulrnddetuburiirespectivcte0,5mlAgHn
aldoilearnddetuburi.Vomprocedanaafelnctsobinemnprimultubodiluiede1/20,nal
doileatub1/40etc.UntubvaconinedoarunamestecdetamponfosfatsalinisoluieAg(tub
martor).Dupceomogenizmconinutultuburilor,vomincubatuburilecuAgOtimpde20orela
52CiartuburilecuAgHvorfiincubatetimpde2orela52Curmatde10minutelatemperatura
camerei.
Citireasevarealizadupincubare,comparndrezultatuldinfiecaretubcumartorulpentruAg.
Pentruevideniereareacieivomagitauortuburile.AglutinareaHdiferdeaglutinareaO.

AglutinatulOestemaidens,maigrunjos,ntimpceaglutinatulHestemaifloconosiuorde
disociatprinagitare.Ultimultubcaremaiprezintaglutinarevizibilpermitestabilireatitrului
reaciei.ncapitolul31vomreluaacesttipdediagnosticivomdiscutamodalitiledeinterpretare.

18. Reacii antigen-anticorp: reacia de fixare a

complementului
Sistemulcomplement
Complementulreprezintunconstituentfoarteimportantalaprriinaturaleirespectivo
componentnormalaserului.Sistemulcomplement(C)cuprindecirca30decomponente
celularesauplasmatice.SistemulCsepoateactivapetreici,repectivcaleaclasic,calea
lectinicicaleaaltern.Activareapecaleaclasicestedeclanatnprimulrnddeformarea
complexelorimune(AgAc)darideapariiacelulelorapoptotice,anumitevirusurisaudeproteinaC
reactivcuplatcuanumiiliganzi.Calealectinicpoatefiactivatdemicroorganismecareprezint
nstructurgrupurimanozterminale.Caleaalternpoatefiactivatdebacterii,fungi,virusurisau
deceluletumoraleetc.
SistemulCprezintnumeroaseactivitibiologicefiindimplicatninflamaie(componentele
C3a,C4a,C2b,C5a,complexulC5b7,C3e),naprareaantiinfecioas(opsonizare,facilitarea
fagocitozei,lizamicroorganismuluiimplicat),nmetabolismulcomplexelorimune,clearanceul
celulelorapoptoticesaunreglarearspunsuluiimun.Cutoatecnmodobinuitareunrol
benefic,sistemulCpoateaveaiefecteduntoare.
Reaciadefixareacomplementului(RFC)
Facepartedintrereaciilealcrorrezultatnupoatefivizualizatfrunartificiutehnic,nacest
cazutilizareaunuisistemhemoliticindicator.Motivulpentrucareestenecesaracestsistem
indicatorsedatoreazfaptuluicAgestefiesubformmacromolecularfieestereprezentatde
corpimicrobienidedimensiunifoartemici,iarcomplexulAgAcformatnudevinevizibilcuochiul
liber.RFCafostimaginatncdinanul1901dectreJulesBordetisaperfecionatdestulde
multdealungultimpului.Aceastreacieesteutilizatnpeste100desistemeAgAc,printehnici
clasicesautehnicicareausuferitmodificri,inclusivintroducereamicrometodelorRFC.
ReaciadefixareacomplementuluisepoatefolosiattpentruidentificareaAgctin
diagnosticulserologic.Pentrucnuurmeazsdiscutmpelargprimavariant,vomenumera
doarctevadintreexemple,RFCpermindidentificareaunorAgrickettsiene,chlamydiene,virale
etc.ndiagnosticulserologic,ceamaicunoscutmetodrmnencRFCBordetWasserman,
utilizatndiagnosticulserologicalsifilisului.
SubliniemfaptulcRFCesteometodlaborioas,ncarenuseadmiteroritehnice,darfiind

executatcorectestefoarteexact,areomaresensibilitateispecificitate.Estedeasemenea
unadintremetodelecuunmaregraddereproductibilitate.
Principiu
RFCsebazeazpeproprietateasistemuluiCdeasefixapecomplexulimunAgAc.nprima
fazareacieiseintroduceseruldecercetatiardacacestserconineAcspecificifadeAg
cunoscutsevaformauncomplexAgAc,urmatdefixareaC,caresevaactivapecaleaclasici
nuvamaifidisponibilpentruasefixapesistemulhemoliticindicator(hematii+Acantihematie).
ncazulncareseruldecercetatnuconineAcspecificifadeAgcunoscut,nuvaavealoc
formareaunuicomplexAgAcnprimaetapaRFC.Dupintroducereanreacieasistemului
hemoliticindicator,hematiileiAcantihematiesevorcupla,vorformauncompleximuniarCliber
sevafixapeacesta.DupfixarevaurmaactivareaCirespectivlizahematiilor,hemolizaputndfi
examinatcuochiulliber.
Materialeireactivinecesari:
seruldecercetatrecoltatdelapacientulsuspectsauoperechedeseruri,obinuten
dinamic
seruridereferin(martorpozitivinegativ)
Agcunoscut(suspensiecorpuscularsausoluiecoloidal,dupcaz)
sistemulCobinutdinserproasptsauconservatrecoltatdelacobai
sistemulhemoliticindicatorformatdin
hematiideberbec,soluie4%,valabiltimpdeosptmnla4C
serhemoliticantihematiideberbec(obinutprininjectrirepetatedehematiideoaiela
iepureledelaborator,splatecusoluiesalinfiziologic)titraticonservatla4C
baiedeapcutemperaturreglabil
plcicugodeuri,tuburidehemoliz,pipetediferiteetc.
Tehnicadelucru:
Aacumammenionat,tehnicadelucruestelaborioasinuvafiprezentatntotalitate,n
celeceurmeaz.
seruldecercetatsevamenine30minutela56C,nbaiadeap,pentru
inactivareaCpropriu
principial,RFCarelocn2etape
nprimaetapsepunnreacieC,seruldecercetatiAgcunoscutexist2
posibiliti:a.nseruldecercetatexistAcspecifici,rezultnduncomplexAgAcpecareseva
fixaCb.nseruldecercetatnuexistAcspecifici,nuseformeazcomplexAgAc,Crmne
liber
nadouaetapseintroducenreaciesistemulhemoliticindicator(hematii+Ac
antihematie)exist2posibiliti:a.Cnuesteliber,nuarelochemoliza,b.Csefixeazpe
sistemulhemolitic,lizeazhematiileiobservmapariiahemolizei
toireactiviiutilizaitrebuiestandardizai,respectivsevorrealiza
omogenizareasuspensieidehematiicueventualetalonareprinspectrofotometrie
titrareaseruluihemolitic
titrareaCnprezenaAg
titrareabidimensionalaAgiaseruluidereferin
nRFCfinalsevaprocedaastfel

sedilueazconformindicaiilordinprotocoluldelucrureactiviiutilizai(serulhemolitic,
seruriledecercetat,Ag,seruriledereferin,C)
serepartizeazngodeurilecorespunztoareseruriledecercetat,AgiC
peoplacseparatsepreparmartorii(martorpentrusistemulhemolitic,martor
pentruC,martorpentruAg,2martoripentruseruldereferin,martorsigurnegativ)
plcileseintroducpnadouazila4C
adouazi,plcilesemeninla37Ctimpde30minute
seadaugntoategodeurilesistemhemolitic
plcilesemeninla37Ctimpde30minute
sepunplcilela4C,pnlasedimentareahematiilor
existanumitediferenentretehnicilecantitativeicelecalitative,darprincipiilesunt
aceleai
nRFCBordetWasserman,metodcalitativ,reaciaserealizeazneprubete,2pentru
reaciapropriuzis(unacuserdiluat1/8,celaltcuserdiluat1/16,2pentrumartorisigurpozitivi
sigurnegativicteunapentrufiecaredinceilalimartori,respectivmartorpentruseruldecercetat,
martorpentruAg,martorpentruC,martorpentruserulhemolitic)
Interpretare:
Iniialseverificrezultateleaprutepentrumartori(fiecestevorbadeometodcantitativsau
calitativ)spreex.ncazulmetodeicalitative,ntubulmartorpentruseruldecercetattrebuiesfie
hemoliz,lafelcaintuburilemartorpentruAg,Cisersigurnegativ.ntuburilemartorsigur
pozitivimartorpentrusistemulhemolitic,nutrebuiesfiehemoliz.
ntuburilecuseruldecercetat,dacaparehemoliza,nseamncnuexistAciartestul
estenegativ(lichiduldintubvaaveaunaspectrou,limpede).
Testulestepozitivatuncicndntuburilecuserdecercetatnuaparehemoliz,hematiilese
depunformndunbutonnparteainferioaratubului(nseruldecercetatexistAc).Pentrua
stabilidiagnosticulfinal,estenecesarcaRFCBWsfieconfirmatprinreaciispecifice(vezi
capitolul45).
Controldecalitate:
Cuprivirelacontroluldecalitateammenionatutilizareamartorilor,pentrufiecarereacie.
nRFCutilizatndiagnosticulserologic,Agcunoscutvafialesnfunciedesuspiciuneade
diagnostic.RFCcantitativsepoateutilizapentrudiagnosticulserologicalinfeciilorproduse
deMycoplasmapneumoniae,Chlamydiaspp.,Rickettsiaspp.,Treponemapallidum,Leptospira
spp.,Borreliaspp.,Brucellaspp.,diferitevirusurietc.
nscopulcreteriisensibilitiiispecificitiisealegproprietileAgcunoscut,oanumit
temperaturdeincubare(deex.4Cnlocde37CnRFCKolmer)etc.AcfixatorideCapar
precocencursulboliiastfelnctidentificareaprezeneilorpoatesemnificaoinfecieacutsau
recent.

19. Reacii antigen-anticorp: reacia de

neutralizare (seroneutralizare)
LafelcaiRFC,nreaciadeseroneutralizare(RSN)estenecesarunartificiutehnicpentrua
permitevizualizarearezultatelor.ncazulRSN,Agareoanumitproprietatebiologic(toxic,
enzimatic)carepoatefiblocatprincuplareacuAcspecific.Neutralizareaefectuluibiologic
respectivsepoaterealizadoarncazulncaredeterminantulpentrutoxicitatesaupentruactivitatea
enzimaticrespectivesteacelaicudeterminantulantigenic(epitop).
Reaciiledeseroneutralizarearputeafiutilizatenmaimultemprejurri,spreexemplun:
diagnosticulmicrobiologicdirect
identificareaClostridiumperfringensprinmetodaplcilorsemineutralizate(vezicap.44)
testareatoxigenezeiuneitulpinideCorynebacteriumdiphteriae(testdeseroprotecie,
vezicap.11)
toxinotipiancazulsuspicionriiuneitoxiinfeciialimentarecuClostridium
botulinum(vezicap.11i45)
diagnosticulserologic
reaciaASLO(veziicap.25)
prevenireaunorboliinfecioaseprevenibileprinvaccinareievaluareaeficacitiivaccinale
vaccinareacuanatoxine(DTP,DT,ATPA,ADPAveziicap.22)
titrareaprezeneiAcantitoxine(difteric,tetanicetc)
testareaprinIDR(intradermoreacie)asusceptibilitiifadeoanumitboal
infecioascarearelabazdreptmecanismpatogenicefectuluneiexotoxine
tratamentul/profilaxiaunorboliinfecioaseprinutilizareadeimunoglobulinespecificeomologe
sauutilizareaunorserurihiperimuneheterologe.

ReaciaASLO
Aceastreaciepoatefiutilizatndiagnosticulretrospectivaluneiinfeciistreptococicesau
pentruconfirmareaetiologieiuneibolipoststreptococice(mpreuncucriteriileminoreimajorede
diagnostic).ReaciaASLOdetermintitrulAcantistreptolizinO(SLO).
Principiu:
TitrareaAcantiSLOsebazeazpefaptulcSLOareefecthemoliticasuprahematiilorde
iepuresaudeberbec.ncazulncarenseruldecercetatexistAcantiSLO,aciuneahemolitica
SLOesteneutralizat.CombinnddiluiidinseruldecercetatcuocantitateconstantdeSLOvom
puteadeterminatitrulASLO.
Materialeireactivinecesari:
serdecercetat(sauseruripereche,recoltatelaintervalde2sptmni)
SLOliofilizat(standardizatdectreproductor)
sngedefibrinatdeiepure/berbec
soluiesalinizoton,soluiederivanol0,3%
eprubete,pipetegradatefoartecurate
baiedeap,centrifugetc
Tehnicadelucru:
Trebuieurmatetoateindicaiiledinprotocoluldelucru,respectiv

seomogenizeazsuspensiadehematii
sendeprteazinhitoriiSLOdinseruldecercetat(utilizmsoluiederivanolisuspensiede
crbuneactiv,realizmodiluiede1/10aseruluicaresevamenine30minutela56C)
serealizeazdiluiiledeseriserepartizeazntuburiledereacie(serndiluiisuccesive)
mpreuncuSLO(ncantitateconstant,cte0,5ml/tub)combinareaseruluidecercetatcuSLO
reprezintprimaetapareaciei
seagittuburilepentruomogenizareisemenintimpde15minutela37C
urmeazadouaetapareacieiASLO,respectivadugareasuspensiedehematii(5%),cte
0,5mlnfiecaretub
seagitpentruomogenizareiseincubeaztimpde45minutela37C
secentrifugheaztuburiletimpde1minut(1.500rotaii/minut)isemeninpnadouazila
4C(temperaturafrigiderului).
Interpretare:
Porninddelaodiluieiniialaseruluide1/10,dupadugareatuturorreactivilortitrul(numrul
deunitiASLO)vafi12,50ntubulurmtor,100,125,166,250,333etcntuburileurmtoare.
TitrulreacieiASLOestedatdeceamaimarediluiedeserlacarelipsetecomplethemoliza.
Pentruzonanoastrgeograficseacceptcanormaluntitrude200(maxim250)unitiASLO.
Existtesteserologiceipentruevideniereaprezeneiititruluianticorpilorfadealtestructuri
antigenice(deexemplustreptodornaz,hialuronidaz,streptokinaz).
Controldecalitate:
Ultimele2tuburisuntreprezentatedetubulmartorpentruhematii,ncareseverificrezistena
hematiilorirespectivtubulmartorpentruSLOncaresepunSLOisuspensiadehematii.
ExistiposibilitateadearealizaomicrometodASLO,reaciaefectundusenplcide
materialplasticcugodeuri.
UtilizareaRSNnprofilaxiaitratamentulunorboliinfecioase
Vaccinareanscopulobineriiuneiproteciiprinseroneutralizare
VaccinulDTPincludeosuspensiedegermeni(Bordetellapertussis)nfazaI,combinatcu
anatoxinadiftericitetanic.Primovaccinareasencepevrstade2lunianounscutului,
administrnduse3dozelaintervalde2luni(la2,4,6luni).Pentrumeninereaimunitiisepractic
revaccinareaIla6lunidelaprimovaccinareiarrevaccinareaaIIasepracticla36delunidevia
acopiluluirespectiv.Datoritposibilelorreaciiadverse(fadecomponentapertussis)se
recomandeliminareaacesteialanounscuiicuproblemealesistemuluinervos,laceipredispui
laboalilaceicareauavutoreacieadverssemnificativlaoadministrareanterioaraDTPului.
Sestudiazposibilitateautilizriipescarlargaunuivaccinacelularncaresfieinclustoxina
pertussisinactivat.
Evaluareaeficacitiivaccinurilor
Serecomandtestareastriideimunitateindusprinvaccinare,conformnormativelorelaborate
deautoritiledesntatepublicmetodeleaulabaztitrareaAcantitoxin(difteric,tetanic
etc)nseruriprelevatedelacopiivaccinai,prindiferitetehnici.Spreexempluseconsidercun
copilesteprotejat(prezintrezistenspecificncazuluneiinfeciidifterice)dactitrulAcanti
toxindiftericestemaimarede0,03UAI/ml
Sepotfacetestedesusceptibilitate,invivo,pentruaverificadacpersoanainvestigateste
saunuprotejatfadeoeventualinfecie.nacestscopsepracticIDR.nistoriamedicineiau

intratIDRDick,carepermitetestareasusceptibilitiifadescarlatin(toxinaesteelaboratde
ctrestreptococuldegrupAlizogenizat)irespectivIDRSchick,carepermitetestarea
susceptibilitiifadedifterie(toxinaesteelaboratdectrebaciluldiftericlizogenizat).
ambeleIDRserealizeazsimilardinpunctdevederetehnic
spreex.ncazulIDRSchickseinjecteazntreimeamedieaantebraului,strict
intradermicocantitatede0,1mltoxindiftericdiluatcorespunztor.ncazulncarensngele
persoaneitestatesegseteocantitatedeAcantitoxinmaimarede0,03UAI/ml,toxina
inoculatvafineutralizatinuvaapreaniciomodificarelaloculinoculrii(lipsaeritemului
semnificfaptulcpersoanatestatnuestesusceptibilsfacdifterie,ncazulncarese
infecteazcuunbacildifterictoxigen).ncazulncarepersoanarespectivnuprezintAc
antitoxindifteric,Aginoculatvaconducelaapariiaunuieritemlaloculdeinoculare
UAI=unitateantitoxicinternaional
Terapiasauprofilaxiaspecific(imunoterapiepasiv)
Administrareadeimunoglobulinespecificeomologe,obinutedelapersoaneimunizate(natural
sauartificial)fadeoanumitmaladieinfecioas,deex.nimunoterapiainfecieicuClostridium
tetani(tetanos)sepotadministraintramuscular36.000UAI
Administrareadeseruriimuneheterologe,obinuteprinhiperimunizareacailor,ntratamentul
tetanosului,difteriei,botulismuluietc.
Terapiabolilorncaremecanismulpatogenicimplicexotoxinetrebuieinstituitctmairapid,
deoareceexotoxinelepotfineutralizatenumaiatuncicndsegsescncirculaie.

20. Reacii antigen-anticorp: reacii n care

componentele sunt marcate
Reamintimc,nfunciedenaturaantigenului,metodeleaplicatepentruvizualizare,scopul
urmritexistmaimultetipuridereaciiAgAc,ianume:
1.reaciideprecipitare
2.reaciideaglutinare
3.reaciadefixareacomplementului(RFC)
4.reaciideseroneutralizare.
Dacncazulprimelor2tipuridereaciivizualizareasepoatefacedirect(cuochiulliber,cu
ajutoruluneilupeetc)ncazulRFCiRSNestenecesarutilizareaunorsistemeindicator.n
continuarevomdiscutadesprereaciileAgAcncarepentruinterpretareestenecesarmarcarea
reactanilor,ceeacesepoateface:
izotopic(radioimmunoassay,RIA)
enzimatic(enyzmelinkedimmunoassay,ELISA)
fluorescent(fluorescentimmunoassay,FIA)
chemiluminiscent(chemiluminiscentassay,CLA)etc.

Radioimunoanaliza(RIA)
Posibilitateautilizriiizotopilorradioactivinmedicinaconduslamultedescopeririimportante
ndomeniu.IntroducereaRIA,pentrudeterminareacantitativaprezeneiunuimarenumrde
substaneprezentencantitifoartemicinlichidelebiologice,aconstituitunrealsucces.RIAa
fostincmaiesteutilizatnmultedintrespecialitilemedicale.
PentrumarcareaAgsepotutiliza3H,125I,14Cetc.Seintroducnreacieocantitatecunoscut
deAgmarcatradioactiv,AgnemarcatpecaredorimsldozmiAccunoscuicuspecificitate
fadeAg.SevarealizaocompetiiepentrucuplareacuAcntreAgmarcatiAgnemarcat
radioactiv.Duprespectareatimpilordinprotocoluldelucrusemsoarradioactivitateacomplexului
AgAciaplicndformuledecalculcorespunztoaresepoateaflacantitateadeAgnemarcat.
RIAesteotehnicobiectiv,cufoartemaresensibilitate,permitecuantificareaunorcantiti
foartemicideAgsaudehaptenedar,datoritproblemelorlegislative,costuluiaparaturiii
reactivilor,riscurilorimplicate,estenlocuitdincencemaimultcutehnicidetipELISA.

Analizaimunoenzimatic(ELISA,EIA)
Marcareaenzimaticafostintroduspentruprimaoarnhistochimie,n1966,dup5ani
devenindunmarkerincazulreaciilorAgAc.PrezenacomplexelorAgAcvaputeafivizualizat
icuantificatdeoareceunuldintrereactiviesteconjugatcuoenzim,iardupadugareanmediul
dereacieaunuisubstratcromogenspecificenzimeimarker,densitateaopticamediuluide
reaciesevamodificaiarvaloareadensitiiopticesepoatenregistra.
Reaciileimunoenzimaticepotavealornsistemomogensauheterogen(activitateamarkerului
enzimaticnuesteinfluenatdectrereaciaAgAc).ncontinuarenuvomdiscutadectdespreal
doileatipdereacii,caresuntmaifrecventutilizatenmicrobiologie.
TehnicileELISApotfiutilizateattpentruidentificareaAgctipentruidentificareai/sau
titrareaAc.ngeneral,reaciileimunoenzimaticeserealizeaznurmtoareasuccesiune:
primulreactiv(AgsauAc,nfunciedeceeadorimsdeterminm)estefixatpeun
suportsolid(foartefrecventreprezentatdegodeurileunorplcideplastic,darpotfiibile,tuburi
etc)deregulaceastfixareserealizeazdectrecompaniileproductoare
adugmaldoileareactiv,celnecunoscut(AcsauAg)
ncazulncareexistcomplementaritatestructuralielectrochimicntreceidoi
reactivi,areloccuplareaiformareacomplexuluiAgAcpentrueliminareareactivilorcarenuau
intratncomplexarelocoprimsplare
reactivuladugatnurmtoareaetapvariaznfunciedetipuldetehnicELISA(n
finalulacestuisubcapitolvomprezentapentruexemplificareunadintrevarianteletehnice)deex.se
poateadugaunreactivcaresepoatecuplacuAc,iaracestreactivestelarndulluicuplatcu
enzima(conjugatenzimatic)ncontinuareareloconousplare
pentruvizualizareareaciei,adugmunsubstratcromogenpecareenzimapoate
acionaiconducelaapariiauneiculoricaresepoatevedeaicuochiulliber,darsecitetecu
ajutoruluiunuispectrofotometru
valorilenregistratepentruprobsecomparcuvalorilenregistratepentrumartorul
pozitivimartorulnegativ,seaplicformulaindicatdectreproductor,iarinterpretareaseface
aacumesteindicatnprotocolultehniccarensoetetrusaELISA.

Enzimeleutilizatemaifrecventsuntfosfatazaalcaliniperoxidaza.ncazulprimeienzime,
substratulcromogenvafipnitrofenilfosfatuliarncazulperoxidazei,substratulcromogenvafi
ofenilendiaminansoluiedeapoxigenat.
PrintehniciledetipELISAseobineospecificitatebunsaufoartebuniarsensibilitateaeste
comparabilcuceaobinutncazulRIA.Tehnicaesteobiectiv,adevenitautomatizat,iarprin
extindereaoferteiicretereanumruluicelorcareoutilizeazpreurilesuntcompetitive.
Existmaimultemodalitideclasificarepentruacestetehnici,spreexemplu:
nfunciedescopulurmrit,sepoatedeterminaprezenaAgndiferiteproduse
patologicesauprezenaAcnser,LCR,alteumori
nfunciedetipuliordineareactivilorintroduinreacietehnicilepotfinecompetitive
saudecompetiie(directesauindirecte)
nfunciedecomplexitateatehnicii,putemdiscutadesprevarianteleclasice(aacuma
fostdescrismaisusirespectivaacumurmeazsfieprezentatnexemplulconcret)i
respectivdesprevariantelesimple/rapide.
nanumitesituaii,rezultateleobinuteprinELISAtrebuieconfirmateprinmetodemaispecifice.
ncontinuarevomprezentasuccintetapeleELISAncazuldeterminriiprezeneideAc
antimycobacterieninser.Nuexistncostandardizareadiagnosticuluiserologicntuberculoz
(vezicap.42)daraacumurmeazsdiscutm,pentruapunediagnosticuluneiinfeciicuM.
tuberculosis,toatedatelecarepotfiobinutesuntimportanteitrebuieanalizatencontext.
Principiu:
AnticorpiiprezeninseruldeanalizatseleagspecificdeAgimobilizatepemicroplci
KohINorHardmuth.Complexulimunformat,reacioneazprinfragmentulFcalimunoglobulinelor
(nspecialIgG)cuconjugatulProteinAstafilococicperoxidazadinhrean(SpAHRPO)care
estepusnevidenacuortofenilendiaminHC1(OPD).Reaciaestecuantificatfotometric.
Materialeireactivinecesari:
Plcisensibilizate(IC)
Tampon1(TFSTCH)esteformatdintamponfosfatsalinpH7.2,0.15M,Tween200.05%
caseinHammersten0.5%imertiolatdesodiu0,1%.Sepstreazla+4oC.esteutilizatpentru
rehidratareidiluri.
Tampon2(TFST)de10oriconcentratareaceeaicompoziiecaTamponul1cu
excepiacaseineiHammersten.esteutilizatpentrusplri.
Tamponcitrat(3)pH5.0,pentrudizolvareaOPD
Ortofenilendiamin(pastilede9mg,cntritedeproductor)
Serdecercetat
Sermartorpozitiv(M+)
Sermartornegativ(M)
SoluieconcentratdeconjugatSpAHRPO
Perhidrol(30%H2O2)
Tehnicadelucru
ngodeurileplciisensibilizate(InstitutulCantacuzino)seintroduc100mlTampon1i
seincubeaz60minutela37oC.
Placasegoletedeconinut(automatsauprinrsturnareiscuturarepeunstratde
hrtiedefiltru).

Probeledeserdeanalizatiserurilemartor(M+iM)sedilueaz1/25nTampon1
(25mlser+0.6mlTampon1).Serurileserepartizeazcte100mln3godeuriparalele,
notndusencaietuldelucrupoziiaserurilor.
Incubmplacala37otimpde60min,natmosferaumed.
Placasespalde3oricuTampon2ide2oricuapdistilat,pentrunlturarea
spumei.Pentruaceastoperaie,ntisedilueazTamponul2concentratprinamestecareaunui
volumTampon2cu9volumeapdistilat.
ConjugatulSpAHRPOsedilueaz1/500nTampon1(30mlconjugat+15mlTampon
1)iserepartizeazcte100ml/godeu
Seincubeaz60minla37oncamerumed.
Senlturdingodeuriconjugatulisespalcamaisusde3oricuTampon2ide2
oricuapdistilat.
SepreparsoluiadeOPDprinadugareaa15mlTampon3si8mlperhidrol,
repartizndusecte100ml/godeu.
Seincubeazlatemperaturacamerei,feritdelumindirect,pnanmomentulapariiei
ngodeulcorespunztorseruluiM+auneiculorigalbeneintenseiarcorespunztorseruluiMlipsa
apariieiculorii.Aceastaserealizeazncirca1030min.
Analizasefacecuajutorulunuifotometru(l=450nm)frblocarecuacid.
Interpretare:
RezultateleseexprimnUnitiImunoEnzimatice(UIE)duparelaia:(ODXODM/
ODM+ODM)100
*ncareODXreprezintdensitateaopticaprobeideanalizat,ODMestedensitateaoptic
aseruluimartornegativiarODM+densitateaopticaseruluimartorpozitiv.
Valoriledepnla10UIEsuntconsideratenesemnificative,deipotindicaunnceput
desintezdeanticorpi,repetareadeterminriidup12luni,putndindicaocretereatitrului.
Indiferentdevaloareaobinutrezultatelesevorinterpretancontextulclinic,
epidemiologiciparaclinic,inndcontderezultateleexamenuluimicrobiologicdirect.

Imunofluorescena(FIA,IF)
Imunofluorescenapoatefiutilizatattndiagnosticulmicrobiologicdirect(pep.p.recoltatde
labolnavsaupeculturapur)ctindiagnosticulserologic.Unuldintrereactivi(Ag,AcsauAc
antiAc)estemarcatfluorescent.PosibilitateacuplriistabileaAccufluorocromi,fralterarea
specificitiiAc,afostevideniatncdinanul1942.
Fluorocromiisuntcompuiorganicicare,dupiradierecuradiaiiultravioleteabsorbradiaia
excitant,intrnstaredeexcitaieiaratuncicndrevinnstareanormalpierdenergiaacumulat
emindradiaiiluminoase(veziicap.8).DintrefluorocromiamputeaamintiauraminaO,
rhodaminaB,acridinoranjRsautripaflavina.Luminavizibilemisdepindedefluorocromulutilizat
(spreexempluculoareaestegalbenpentruauraminaO,galbenportocaliepentrucombinaiade
auraminOrhodaminBetc).
TehnicileIFpotfidetipdirectsaudetipindirect.
ncazulIFdirect,Agestenecunoscutisepoateaflantrocultur,etalatpefrotiucaatare
sauparazitndanumitecelule(ex.sepoateutilizaoprobrecoltatprinbiopsie).Produsulcare

urmeazafianalizatesteincubatnprezenaAcmarcaifluorescent,cunoscui.Spreex.ncazul
frotiuluicoloratfluorescent,duprealizareafrotiuluiacoperimlamacuserulcareconineAc
marcaifluorescent,incubmtimpde30minutela37C,splmcutamponfosfatsaliniapoicu
apdistilat(pentrundeprtareaAccarenuauintratncomplexulAgAc),ateptmsseusuce
iexaminmcumicroscopulcufluorescen.PutemidentificaastfelAgaparinnd
speciilorLegionellapneumophila,Bordetellapertussis,Mycobacteriumtuberculosis,Chlamydia
trachomatis,Treponemapallidum,Cryptococcusneoformans,Histoplasma
capsulatum,Pneumocystiscariniietc.Metodaesterapidiaplicabilpentrufrotiuridinp.p.sau
dinculturdarinanatomiapatologicsaunhistochimie.PentrufiecareAgdecercetattrebuie
preparatserulcareconineAcspecifici,marcaifluorescent.
IFindirectpresupunerealizareaunuifrotiuporninddelaAgcunoscut.Frotiulseacopercu
serdecercetatidupoincubaiede30minutela37Csplmcutamponfosfatsalinicuap
distilatpentrundeprtareareactivilorcarenuauintratnreaciaAgAc.Pefrotiusepuneunsercu
AcantiIgdeom,marcaifluorescentiseincubeaztimpde30minutela37C,sespal,se
ateaptuscareafrotiului,urmndexaminarealamicroscopulcufluorescen.nsituaiancaren
seruldecercetatexistAcspecificiAgcunoscut,arelocformareacomplexuluiAgAciarnetapa
urmtoare,AcantiIgdeomsecupleazpecomplexinmodindirect,prinfluorescen,
identificm(inunelevariantetehniceputemtitra)Ac.Metodapoatefiutilizatndiagnosticul
serologicalinfeciilorprodusedeLegionellapneumophila,Mycoplasmapneumoniae,Leptospira
spp.,Borreliaburgdorferi,Treponemapallidum,Helicobacterpylori,Toxoplasma
gondii,Pneumocystiscariniietc.

21. Testarea imunitii de tip cellular

Existoseriedemetodeutilepentruevaluarearspunsuluiimundetipcelular(RIC).Evaluarea
RICestenecesarattnsituaiaunorpacienilacaresesuspicioneazprezenauneistride
imunodeficien,ctinanumitebolitransmisibilecaresepotnsoidemodificrifiziopatologicea
RIC.Datoritfaptuluicnmomentuldefaaufostpuselapunctvarianteterapeuticecarepot
influenanmodfavorabilrspunsuluiimun,estenecesarsavemladispoziiemodalitide
identificareadeficienelorimune.
nvedereastabiliriiunuiastfeldediagnostic,celmaifrecventpornimdelaosuspiciunecare
poateficliniciarasociereauneiinfeciicuagenietiologiciconsideraioportunitipoates
reprezintesemnalulpentrudeclanareadiferitelorinvestigaii.Spreexemplu,infeciile
cuPneumocystiscariniisauCryptococcusneoformanspottrdaoafectarealimfocitelorT,
infeciilerepetate,purulentecuStaphylococcusaureus,Pseudomonascepacia,Serratia
marcescens,Aspergillusspp.arputeafidatorateunorsuferinealecelulelorfagocitareetc.
Avndnvedereceledemaisus,investigareapacientuluilacaresesuspicioneazo
imunodeficienartrebuisfierealizatprinurmtoareleactiviti:

Aplicareaanamnezeipeparcursulcreiaartrebuisaflmdateprivindmedicaiaprimit
derespectivulpacient,momentuldebutuluisuferineirespective,antecedenteleheredocolaterale,
dateprivindvaccinrileefectuate(veziicapitolul22),dateprivindageniietiologiciizolaii
identificaiulterioretc.Adeseorianamnezaareoimportancrucial.
Examenulclinic,porninddelacunoatereanlimiiigreutiipacientuluiinvestigat
comparndcuvalorileconsideratenormalepentruvrstarespectiv,prezenaunorsemneclinice
sugestive(lanivelulfeei,dentiieiievoluieiacesteia,lanivelultegumentuluiianexeloracestuia,
lanivelulscheletului,organelorinternecarepotfiexaminateclinicetc)
Examenedelaborator(numrulelementelorfigurate:hematii,granulocite,trombocite
formulaleucocitar,aspectulpefrotiulrealizatdinsngeleperiferic,VSHetc)
studiulmaiaprofundatlimfocitelorisubpopulaiilorlimfocitareCD3+,CD4+,CD8+etc
(numr,procent)prinmetodeclasiceimoderne(ex.flowcitometrie)
studiulfuncieisubpopulaiilorlimfocitare(prinmetodeclasiceimoderne)
determinareanumruluideceluleformatoaredeanticorpifadeantigene
timodependente(plajehemolitice)
studiulfuncieicelulelorfagocitare(aderare,inhibiiaaderrii,inhibiiamigrrii
macrofagelorsauleucocitelor,deficienelanivelulgranulaiilor,deficienenmieloperoxidaz,
deficienenNADPHoxidaz,eliberarearadicalilordeoxigenactividectrecelulelorfagocitare
nestimulatei/saustimulatecuzimosan,lectineetc)
evaluareaactivitiicitotoxiceacelulelorNKiK(citotoxicitateanaturalmediat
celular,citotoxicitateamediatcelularanticorpdependent/ADCC,citotoxicitateaspecificfade
celuletumoralesaunormale/prineliberarede51Cr,induceredelimfociteTCitotoxiceinvitroprin
culturistimulatecuantigenetumoraleiIL2etc)
studiiprivindreactivitateacelulelorimplicatenrspunsulimundetipcelularapreciat
prinincorporareadetimidintritiatdectrelimfocitelestimulatecudiverimitogeni,lectinecare
seleagdemembranacelular(fitohemaglutinin,concavalinAetc),substanecareacioneaz
directfranecesitaexistenaunorcomponentemembranare,diferiteantigene(PPD,candidin
etc),citokine(IL2),celuleallogeniceetc
studiulsecreieidecitokine,modalitateindirectdeapreciereafuncieicelulelor
implicatenrspunsulimundetipcelularetc
Testeimunobiologice,printehnicaintradermoreaciei(IDR),folosindantigenecare
stimuleazrspunsulimundetipcelular(ntrziat)nliteraturainternaionalesterecomandato
bateriedeantigene,patrucincidintreantigenelemenionatencontinuare
Candidin(antigenextrasdinCandidaalbicans,unextractaposrealizatndiluie1/10
antigenulestenumitiDermatophytonO)
Coccioidin(antigenextrasdinCoccidioidesimmitis)carenspoateinterferacutestele
serologicerealizatepentruhistoplasmoz
Histoplasmin(antigenextrasdinHistoplasmacapsulatum)careproduceiocreterea
titruluianticorpilorfixatoridecomplement
Antigenulextrasdinvirusulurlian
Fitohemaglutinin(mairarfolositinvivo)
LizatdinculturdeStaphylococcusaureus
Ocombinaientrestreptokinazistreptodornaz

Toxoidtetanic,cuconcentraiade10limesfloculans/ml(diluat)
Toxoiddifteric,cuconcentraiade30limesfloculans/ml(nediluat)pentruultimele2
antigenepotapreareaciidehipersensibilitatedetipumoralceeacepoatecreaprobleme
importantenceeacepriveteevaluarearspunsuluiimundetipcelular
Tricofitin(extrasdinTrichophytonspp.)
Tuberculin(derivatproteicpurificat,PPD,extrasdinculturadeMycobacterium
tuberculosis).
nceleceurmeazvomdiscutadespreIDRcuPPD.
Principiulmetodei
Tuberculinareprezintunamestecrelativbinestandardizatdeantigeneproteice
mycobacteriene,utilizatnmodcurentpentrudecelareainfecieituberculoase(TB),individualsau
populaional.AcestextractsepoateutilizancadruluneibateriidetesteIDRpentruevaluarea
reactivitiidinpunctdevederealrspunsuluiimundetipcelular(RIC).Dupceopersoandatse
infecteazcumycobacterii,urmeazsensibilizareaiproliferareaanumitorpopulaiidelimfociteT
(LT).InjectareaintradermicatuberculineistimuleazLTideclaneazoseriedeevenimentece
conduclaunapariiaunuiRICiaunormanifestridehipersensibilitatedetipIV.Reaciileimplic
vasodilataie,edemiinfiltratculimfocite,bazofile,monocite,neutrofile.LTantigenspecifice
prolifereazielibereazlimfokinecaremediazacumularealocaladiferiteloraltecelule.
Rspunsulmaximseconstituielacirca48oredupinjectare.Ariainduraiei(infiltratuluicelular)
reflecthipersensibilitateadetipntrziat.Eritemulreprezintoreacieinflamatorieacut,cauzat
devasodilataiacapilariarapariiaeritemuluinuvafiinterpretatdreptoreaciepozitiv.Limfocitele
sensibilizateatingunniveladecvatpentruaconducelaapariiaunuirspunsinterpretabildup24
sptmnidelainfeciainiialcuM.tuberculosis.Sensibilitateapoatepersistamaimuliani,dar
reactivitateascadederegulodatcuvrsta.
Materialeireactivinecesari
PorninddelatuberculinapreparatdeKoch(Oldtuberculin,1891),n1901afostrealizat
produsulNewtuberculin,iarulteriorderivatulproteicpurificat(PPDS,preparatdeSeibertn
anul1941),adoptatcaStandardInternaionalpentruPPD.Metodadeobinereafostreprezentat
deprecipitareaproteinelordinfiltratulmediuluideculturconcentratlacald,cusoluie50%sulfat
deamoniu.UnitateainternaionalpentruPPDestedefinitdreptactivitateabiologicconinutn
0,000028mgdePPDS(0,00002mgPPD+0,000008mgsruri).PPDRT23reprezintlotulde
tuberculinpurificatnanul1958nDanemarcaiasiguromogenitateaprodusuluiantigenicfolosit
instudiiepidemiologicenlumeantreag.Dinprodusulrealizatiniialseprepardiluiilenecesare
(etalonate)lacareseadaugTween80nscopulreduceriiabsorbieipepereteledesticlalfiolei.
nmoduzualseutilizeaz2UI/doz,echivalentula5UIPPDS.nraportcuPPDRT23,n
RomniaseutilizeazPPDIC65produsdectreINCDMICantacuzino.
Tehnicadelucru
naranoastrseutilizeaztehnicainjectriiintradermice(Mantoux).
controlmprodusulbiologicpecareurmeazslutilizmdinpunctdevedereal
perioadeideeficacitate,conservriincondiiileprevzutedectreproductor
utilizmnumaiseringicuvolumuldemaxim1mlicudiviziuniclarmarcate,celpuin
pentrufiecare1/10mlprecumiacepentruinjecieintradermic,deunicntrebuinare
agitmenergicfiolapentruaomogenizaconcentraiaprodusuluibiologic,tiutfiindc,n

timpuluneiconservrimaindelungate,tuberculinatindesseabsoarbpepereiidesticlaifiolei
aspirmnseringocantitatesuficientdesoluiepentruaputeaeliminaintegralorice
buldeaeraprutntrepistoniorificiulacului
poziionmaculastfelnctbizoulsfiealiniatdiviziunilorseringii
antiseptizmcualcool(minim3minute)oariesituatpefaaanterioaraantebraului
stng,launireatreimiimediicuceasuperioar
cuprindemzonarespectivaantebrauluinpalm,ntinzndpieleactmaiuniformntre
extremitateainferioaraeminenteitenareihipotenarepedeoparteicelepatrudegetestrns
lipite,pedealtparte
ptrundemcuaculaproapetangentlasuprafaaantebraului,cubizoulnsus,pn
acestaestesituatnderm
elibermtegumentulifixmseringapresndopeantebraulsubiectului,avndgrijs
nuseacoperediviziunileseringiipentruaputeaurmriicantitateainjectat
injectmstrict0,10mldacinjectareasafcutstrictintradermicapareobuluor
denivelat,cumarginirelativabrupte,cuaspectdecoajdeportocalidiametrude58mmn
lipsaapariieiacesteibule(ncazulinjectriihipodermicesaucndsepierdesoluientreseringi
aculincorectmontat),esterecomandatssereiamanevracumaimultatenie,repetnd
injectarealaodistande35cmsaulaantebraulopus.
Lapersoaneleinfectateanterior(sensibilizate),laloculinjectriiapareoreacieconstnddin
eritemedeminduraiencepnddupcirca6oreiatingndunnivelmaximdupcirca3660ore,
careseretragenurmtoarectevazile.Peloculreacieipoatepersistaoperioadndelungato
zondehiperpigmentaie.
Citirearezultatului
Citirearezultatuluisefacedereguldup72ore,asigurndobuniluminareazonei
examinate(estedepreferatluminanatural).Recomandmoprimcitirela24ore(pentrua
surprindeoeventualhipersensibilitatedetipumoralfadeantigenulinoculatcarearestructur
proteic),oadouacitirela48oreicitireafinalla72deore.
Identificmexistenauneieventualeariiintenseritematoviolacee,carecircumscriezonancare
amfcutinocularea.ncazulexisteneiuneiastfeldereacii,apreciemtactil(prinmicrirepetate,
atingndzonarespectiv)cupulpapoliceluisauinelaruluilimitelezoneideinfiltraiedermic
(perceputcafiindreliefat)corespunznddinpunctdevederehistopatologicinflamaiei(edem,
limfocite,macrofage,PMN)icarereprezintreacianespecificispecificfadeantigenul
injectat.
Msurmdiametrulmaximalzoneideinfiltraie.Notmisemicantitativintensitateainfiltraiei
dermice("tipPalmer"),semnificaiafiindurmtoarea:
tipI,induraiefermsauprezenauneiflictene
tipII,induraieelastic
tipIII,infiltraiedepresibil
tipIV,frinfiltraieaparent.
Citireareacieituberculinicereprezintoevaluaresubiectiv,existndposibilitateaunor
importantevariaiiinteriintraindividualedinparteapersoanelorcareefectueazlectura.Dubla
citire"norb"frcunoaterearezultatuluiceleilaltelecturi,poatereducevariaiilegrosiere,cu
condiiacaambelepersoanecarecitescrezultatulsaibexperiencuaceasttehnic.

Interpretarearezultatuluitestuluituberculinic(IDRcuPPD).
nfunciedeanalizelestatisticeefectuate,existctevarecomandricuprivirelainterpretarea
IDRcuPPD.
CentruldecontroliprevenireabolilorAtlantaGeorgia(CDC)amodificatrelativrecent
clasificareareactivitiilatestulcutanatefectuatcu5UIPPDdupcumurmeaz:
1.Reaciaesteconsideratafipozitivdacdiametrulinduraieieste>5mmnurmtoarele
cazuri:
persoanecareauavutuncontactrecentcuuncazdeTB
persoanecusemneradiologicedeTB
persoaneinfectatecuHIV.
2.Reaciaesteconsideratafipozitivdacdiametrulinduraieieste10mmncazul
persoanelorcarenuintrincategoriilemenionatemaisusdaraualifactoriderisc,spreexemplu:
persoanenscutenrincareprevalenaTBestecrescut(dinAsia,Africa,America
Latinetc)
persoanecarefolosescdroguriinoculatepecaleinjectabil
persoanefradpostsaucarelocuiescnazilesauninstituiicorecionale
persoanecareprezintafeciunicarecrescrisculapariieiTB(silicoz,diabetzaharat,
bolihematologiceialesistemuluireticuloendotelial,malnutriie)sausunttratatecumedicamente
imunosupresive.
3.Reaciaesteconsideratafipozitivdacdiametrulinduraieieste15mmncazulaltor
situaiidectcelemenionatemaisus
NB.PersoaneleinfectatecualtetipuridemycobacteriipotprezentareaciipozitivedupIDRcu
PPD,nsdereguldiametrulinduraiei<10mm,excepiile(diametru>10mm)putndaparen
specialladebutulinfeciei.
naranoastrseconsiderdreptpozitivereaciileatuncicnddiametruleste9mm.Aceast
definiieconvenionalsebazeazperezultateleunortestriefectuatepeeantioanesemnificative
statistic,lacareanalizaepidemiologicadistribuieivaloriloraartatcplasarealimiteintre
valorilede910mmseparcelmaibinecele2categorii(neinfectaiiinfectai)asigurndcelmai
sczutprocentderezultatefalspozitiveirespectivfalsnegative.Clasificareaindivizilordintro
populaiennegativiipozitivilatestultuberculinicservetelamsurareaextinderiiinfecieiTBn
aceapopulaie(prevalenainfeciei)oferindunplusdeinformaieprinanalizaseparatpegrupede
vrst.Dacserepetdeterminareaprevaleneiinfecieipevrstelaintervaledefinitedetimp,
dinamicaprevaleneiinfecieinfiecarecohortpermitedeterminarearisculuianualdeinfecie,
indicatorfiabilalevoluieiendemieituberculoase.
nceeacepriveteinvestigareareactivitiidinpunctuldevederealRICpentruunanumit
subiect,lacaresautilizatobateriedeantigene,dacspreexemplurezultatulestenegativ
pentrufiecaredintrecele45antigenefolositesepoatepresupunefaptulcsubiectulrespectiveste
anergicnceeacepriveteRICiserecomandefectuareaunorinvestigaiisuplimentare.

23. Introducere n diagnosticul de laborator

microbiologic
nprimaparteamanualuluidelucrripracticeamprezentatdateleprivindbazelediagnosticului
nmicrobiologie,studiulmicrobiologicdirectirespectivevaluarearspunsuluigazdeifade
infecie.Avndlabazacestecunotine,ncapitoleleurmtoarevomdiscutapernddiagnosticul
delaboratoralinfeciilorprodusedeprincipalelemicroorganismestudiate.
Pentrufiecaredintrecapitolele2452vomutilizaschemadediagnosticprezentatncapitolul
5,schempestructuracreiaamdiscutatdealtfelidiferiteleaspectedinparteageneral.
Utilizareanmodrepetatauneischemeclarepermiteomaibunfixareacunotinelorprecumi
atingereaobiectivuluistabilit:reinereaunorprincipiidectrestudeniindiferentdespecialitateacare
vafialeasulteriorsaudectremedici.Microbiologiaeste,dupprereanoastr,otiincufoarte
mareaplicabilitatepractic.Elementeledebazalemicrobiologieisuntnecesareiutilepentrutoi
ceiimplicainsistemulsanitarcunoatereaacestorelementedebazarputeaprevenioseriede
anomaliiieroricareuneorisuntdezastruoase(aacumsantmplatdeex.ntromaternitaten
careoseriedenounscuiaudecedatdatoritunorinfeciidespital).
Dacnurmcucirca30deanilanivelinternaionalanceputsseconsidere(nmoderonat)
cproblemelelegatedebolileinfecioasesuntdincencemaipuinimportante,eroarecareacreat
icreazncmariproblemensntateapubliclanivelinternaional,nultimii56ani(nspecial
ncepndcuanul1998)sanelescbolilortransmisibiletrebuieslisereacordeimportana
cuvenit.Astfel,inclusivlaniveleuropean,aufostelaboratenumeroaseactenormativenacest
domeniuiarfondurilealocateausporitsubstanial,ncercndsseameliorezesituaiacreat
datoriteroriloranterioare.
inaranoastr,preocupareafadesntateapublicngeneralifademicrobiologian
sntateapublicnmodparticularacrescutdupanul1997.Activitateadesfuratndomeniul
reformelorpentrusntateapublicnRomniaeste,dinacestpunctdevedere,destuldeaproape
dereformacarearelocrestulEuropei.Diferiteleproiecteiprogrameiniiatenspecialnperioada
19972000igsesciastziconcretizareanaplicareaunormsuricumareimportanlanivel
naional:reabilitareacentrelordereferinpentrumicrobiologie,reformasistemuluidesupraveghere
atuberculozei,adaptarealastandardeinternaionaleasistemuluidediagnostic,prevenireicontrol
pentrubolilecutransmiteresexual,meninerealaunnivelcorespunztoraimunizrilorpentrua
prevenibolileprevenibileprinvaccinare,includereaRomnieinsistemuldepregtirenscopul
supravegheriibolilortransmisibilelaniveleuropeanetc.
Dinanul1999Romniafaceparte(camembrufondator)dinReeauadesupraveghereabolilor
transmisibilenBalcani.nanul2000,afostorganizatunadintrecelemaiimportantentlniricu
scopularmonizriisupravegheriibolilorinfecioasenEuropa(ConsensusMeetingonSurveillanceof
InfectiousDiseases,Grottaferrata,Italia,7aprile2000).Prezentareapecareunuldintreautorii
prezentuluivolumafcutocuacestprilej,discuiilecareauurmatnatelieredelucru,ntlnirilecu
factoridedecizieaiOrganizaieiMondialeaSntii,iniiativaorganizriiuneireelede
supraveghereabolilortransmisibilenriledinEuropaCentralideEst(ntlnireplenarpecare
amorganizatondecembrie2000,laBucureti)auduslaconstruireaunuiproiectdereformn
domeniulsupravegheriibolilortransmisibilecusprijineuropean(PHARE)careafostaprobatde

asemeneananul2000iestencursdedesfurare.
Chiardacreprezintomsurpentruprevenireaunormaladiivirale(inubacterienesau
fungice)vommaiamintidintremsuriluatenultimiianimbuntireaprogramuluidevaccinare
mpotrivainfeciilorcuvirusulhepatiteiB,nanul1999.Vaccinareanounscuiloraveadejao
vechimede4ani,darn1999prinpoliticadusndomeniulsntiipubliceafostinclusi
vaccinareacopiilordinclasaaIIIa,vaccinareatuturorelevilordinanulIdelacolilesanitare
postlicealeirespectivastudenilordinanulIdinfacultiledemedicinistomatologie.Aceast
politicvaducecannumaicivaani,unmarenumrdegeneraiidecopiisfievaccinatefade
oinfeciecaredeveniseendemiclanivelulanilor90.
Fiecaredinaspectelemenionateareostrnslegturattcumicrobiologiacticu
sntateapublicimeritaficunoscutedectremediciiiviitoriimedicidinsistemulsanitar
romnesc.
nbolileinfecioase(transmisibile)diagnosticulareoimportanconsiderabil,deoarecede
stabilireacorectiprecoceadiagnosticuluidepindattvindecareabolnavului,ctisuccesul
msurilorpreventivecaretrebuieiniiatectmairapidposibil.Spreexemplu,ignorareaprimuluicaz
aluneiboliinfecioasegrave(ex.holer)poateaveaconsecineepidemiologicefoarteimportante.
Cutoatecnprimiidestudiuesteabordatnmodspecialparteamicrobiologic(bacteriologic,
virusologic,parazitologic,micologic)adiagnosticului,estestrictnecesarsmenionmc
examenulclinicipstreaziastziodeosebitvaloare.nscopuldiagnosticriibolilor
infecioaseaufostpuselapunctnumeroasetehnicidelaborator,metodeparaclinice,precisei
obiective,darutilitatealorestemaximatuncicndrezultatelesuntinterpretatencontextulclinic
iepidemiologic.
ndiagnosticulbolilortransmisibiletrebuierespectateoseriedereguli,dupcumurmeaz.
1.Obinereadatelor(clinice,paracliniceidelaborator)esteurgent.Anamnezatrebuie
realizatcurigurozitate.Apreciereastatusuluiimunologicpoatefiesenial.Niciunelementobinut
prinexamenulobiectivnutrebuieneglijat.
2.Dateleobinutetrebuieprivitecauntotunitarnupotfiabsolutizateniciposibilitileclinicei
nicicelealelaboratorului.
3.Esteindispensabilssestabileascundiagnosticetiologicntoatemaladiileinfecioase,
avndnvedereimportanatratamentuluiantimicrobian
4.Folosireacorectalaboratoruluiconstituieoaltregulimportant.Estenecesarcafiecare
medicclinicianstieceanalizscear,ceproduseserecolteazdelabolnav,cndicums
lerecolteze,cumsleexpediezectrelaborator.Pentruobinereaunordatecorecteprin
exameneledelaborator,clinicianulvarespectactevareguli:produseleserecolteaznaintede
administrareatratamentuluiantimicrobiansetrimitelaboratoruluiocantitatesuficientdeprodus
pentruexaminatprodusulpatologictrimistrebuiesfiereprezentativpentruboalarespectiv(de
exemplu,sputinusalivninfeciilerespiratoriiinferioare)produsulexaminatnutrebuie
contaminatcualigermenincursulrecoltriisaualtransportului(recoltareaseptic)expedierea
ctrelaboratorsefacencondiiiledeconservarecerutepentrufiecaretipdeproduspatologicn
partesesolicitexaminareaimediataproduselortransmisectrelaborator.
5.Trebuiesexisteocolaborarestrnsicontinuntreclinicianispecialistulde
laborator.Estenecesaroinformareclinicaomuluidelaboratordectreclinicianpentru
orientareastudiilornlaboratoripentrualegereacelormaibunemetodedeidentificareaagentului

etiologic.nacelaitimp,laboratorultrebuiesinformezeclinicianulpeparcursnlegturcudatele
obinute.
ncadrulexamenelordelaborator,unlocprioritaresteocupatdediagnosticulmicrobiologic
(bacteriologic,micologici/sauimunologic),carevafiprezentatncontinuare(veziicapitolul
5).Foartepescurtvomdiscutactevadatereferitoarelaalteexameneparaclinice,utilen
diagnosticulbolilorinfecioase.
Diagnosticulcitologicconstnpunereanevidenaunoraspectecelularecaracteristice,
utilizndunprodusprelevatdelabolnav.Spreexemplu,citodiagnosticulrevrsatelorpleuraleial
LCRpoateaducedatepreioasepentruelucidareaetiologieiuneipleureziiirespectivaunei
meningite.Diagnosticulhistologicimplicbiopsii(recoltateprintehnicchirurgical)sau
punciibiopsiialediferitelororgane(ficat,rinichi,plmn,ganglionilimfatici,fragmentevasculare,
mucoasdigestivsaurespiratorie)carepermitpunereanevidenaunormodificristructurale
caracteristice,determinatedeaciuneaagentuluimicrobian.Dintremetodeledelaborator
nespecificesuntutilendiagnosticulbolilorinfecioasehemograma,leucograma(cumodificri
caracteristicenuneleboli),vitezadesedimentareahematiilor,testelededisproteinemie,diferite
testeenzimatice,determinareaprezeneiproteineiCreactiv(betaglobulincareaparensern
afeciuniinflamatorii,neoplaziiinprocesenecrotice),altetestedeinflamaie(reactanidefaz
acut)etc.
Referitorlaaltemetodeparaclinicevomamintiexamenulradiologiccarepoatefurnizadatede
valoarepentrubolileinfecioasecuparticiparepulmonar(pneumoniivirale,febrQ,tuseconvulsiv,
pneumoniepneumococicetc).ndiagnosticulbolilorinfecioasesemaipotfolosi
rectosigmoidoscopia,electroencefalografia,electrocardiografia,diferitedeterminribiochimice,
exameneoftalmologice,scintigrafia,ecografia,tomografiacomputerizat,tehnicaderezonan
magneticnuclear.
Diagnosticuldelaboratormicrobiologic(ex.bacteriologic)
Diagnosticuldelaboratornmicrobiologiepoatefiundiagnosticbacteriologic(direct),un
diagnosticimunologic(indirect)sauocombinaieacelordouvariantemenionate.Schema
generaladiagnosticuluidelaboratormicrobiologicafostdiscutatncapitolul5ivafiaplicat
concretncapitolelecareurmeaz.Pentrufiecaremicroorganism/diagnosticnparte,dinlistap.p.
posibildeutilizat,vomalegepentruprezentarecteunulsingur,consideratreprezentativ.
Principalelemicroorganismepentrucaresevastudiadiagnosticulmicrobiologic
Bacteriilestudiatepotfigrupatedupmaimultecriterii,darovariantutilesteceancare
avemnvederestructurapereteluibacterianirespectivafinitateaacestuiafadediferiicolorani.
Unprimgrupimportantestecelcareincludecociicuimportanmedical,grampozitivi
(stafilococi,streptococi,pneumococietc)irespectivgramnegativi(meningocociigonococietc).
Dintrebacteriilegramnegativecareaudimensiunipebazacroranupotfincadratedreptcoci
saubaciliseaflparvobacteriile,cocobaciliigramnegativi(Haemophilusinfluenzae,Bordetella
pertussis,Brucellaspp.etc).
Baciliigrampozitivicarevorfidiscutaisepotgrupanbacilinesporulai(Corynebacterium
diphteriae,Listeriaspp.etc)irespectivbaciligrampozitivisporulai(Bacillusanthracis,Clostridium
spp.etc).
Baciliigramnegativistudiaiaparinfiefamilieienterobacteriilor(E.coli,Salmonellaspp.,
Shigellaspp.,Klebsiellapneumoniae,Proteusspp.,Yersiniaspp.etc)fiesuntincluingenuri

separateprecumVibriocholeraedingenulVibriosauPseudomonasaeruginosadin
genulPseudomonas.
MicroorganismeledingenulMycobacteriumsepotcolora(cudificultate)prinmetodaGram,dar
nmodcaracteristicsecoloreazprinmetodaZiehlNeelsen.Speciaprincipalstudiateste
reprezentatdeM.tuberculosis.
Oseriedebacteriispiralate(ex.Treponemapallidum,Leptospiraspp.,Borreliaspp.)nuse
coloreazprinmetodaGramdatoritstructuriiparticulareaperetelui.Potfistudiatemicroscopicfie
npreparateproaspete(utilizndtehnicimicroscopicespeciale)fieutilizndcoloraiiparticulare(ex.
impregnareaargentic).
Pnnurmcuoperioaddetimpmicroorganismeleaparinnd
genurilorRickettsia,ChlamydiaiMycoplasmaerauinclusencategoriavirusurilor.Totui
proprietilelorfundamentalefacslestudiemastzintrebacterii.
nobiectuldestudiusuntncadraiifungii(ciupercile)careauoseriedecaracteristiciaparte.
Noiunilelegatedediagnosticulmicologicsuntprezentatemaipelargntratateledespecialitate.

24. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Staphylococcus
Stafilocociisuntcocigrampozitiviaerobi,facultativanaerobi,imobili,nesporulai,
catalazopozitivi.GenulStaphylococcuscuprindemaimultegrupedemicroorganismedeinteres
medical(uneledintreacestegrupuriincluzndmaimultespecii).Celemaicunoscutespeciisunt
reprezentatede:StaphylococcusaureusS.epidermidisS.saprophyticus.S.aureusreprezint
speciacelmaifrecventimplicatnclinic,ntimpcealtespeciisuntnepatogenesaucondiionat
patogene.nfunciedecapacitateadeaelaboracoagulaz,toistafilocociicoagulazopozitivisunt
grupaicaS.aureus.
Stafilocociipotdevenipatogeniisepotmanifestacaatarefieprinmultiplicareiinvazivitate,
fieprinmultiplicareitoxinogenez(fiindposibilicombinareaacestormecanisme).Determinanii
patogenitiilastafilococincludproduseletoxiceienzimatice.S.aureusesteimplicatcaagent
etiologicntromarevarietatedeinfeciisupurative(cupuroi),ncepndcuinfeciilesuperficialeale
tegumentelorimucoaseloricontinundcupanariii,furuncule,abceseprofunde,infeciiale
diferitelororganeinternecusaufrgeneralizareainfeciei.Pedealtparte,arfidemenionat
toxinozele(datoratenspecialtoxinelorelaborate)ianumetoxiinfeciilealimentare,necroliza
toxicaepidermului,sindromuldeoctoxicetc.Toxiinfeciilealimentaresuntprovocatede
exotoxinelepreformate,existentenalimentencaresaumultiplicatstafilococienterotoxigeni.
Stafilocociicoagulazonegativi(SCN)suntimplicaininfeciiaprutedupmanevre
medicochirurgicalecarepenetreazbarieracutaneomucoas(cateterisme,implante,protezri
intravasculareetc).ArmaifideamintitinfeciiletractuluiurinarigenitalcuS.saprophyticus(la

femeiletinere).OinfeciegravprodusdeSCNesteenterocolitapostantibioticeanounscutului
(maialesaprematurului,lacareadministrareanecontrolataantibioticelorpoateproduce
disbacteriemiicuconsecinegrave).Pentruadiscutadiagnosticuldelaboratorninfeciileproduse
destafilococivomalegedreptreprezentativeinfeciilepurulentealetegumentelori
mucoaselorinevomreferinumailaStaphylococcusaureus.
Diagnosticuldelaboratorestenumaibacteriologic,direct,cuurmtoareleetape.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).nfunciedemaladiaprovocatsepotrecoltaurmtoareleproduse
patologice:secreiipurulente(dinfoliculite,abcese,celulite,fistule,infeciialeplgiloriarsurilor),
lichide(depunciesinusal,otic,mastoidian,articular,peritoneal,pleural,pericardic),
exsudatnazalsauexsudatfaringian,snge,LCR,sput,urin,secreievaginal,tampoane
vaginale,lichiddevom,materiifecale,alimente,prelevatedepesuprafaacatetereloriainseriilor
iv.aleacestora.ncontinuarevomdiscutacazulncarep.p.estereprezentatdepuroi(vezii
capitolul6).
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersieisenoteaz
prezenacelulelordelaniveltegumentar(eventualmodificatefadenormal),prezenacelulelor
inflamatorii(ex.leucocite,piocite)iprezenacocilorgrampozitivi,cudiametrulde0,51,5m,
dispuinlanuriscurte,perechi,izolaisaungrmezineregulate.Cociisepotsituaintrasau
extraleucocitar.Searenvedereloculdeundeafostrecoltatp.p.(puroiulpoatefinecontaminat,
dacserecolteazdeex.prinpuncieaspiraredintrocoleciepurulentprofundiestefoarte
probabilcontaminatcuflordeasociaiedacafostrecoltatdintroleziunesuperficial).
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Stafilocociisedezvoltngeneralpemediideculturobinuiten1824ore,la3537C.
ColoniileauaspectdetipS,diametrulcuprinsntre13mmisuntpigmentatenfunciedespecia
izolat(ex.pigmentauriu).Pemediulgelozsnge,njurulcoloniilorpoateapreaozonde
hemolizclar.Stafilocociisepotmultiplicapemediihiperclorurate,tolerndoconcentraiede
710%NaCl(ex.mediulChapman).
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocigrampozitivi,cudiametruldecirca0,51,5m,
dispuinlanuriscurte,perechi,izolaisaungrmezineregulate
Caracteredecultur:ProduccoloniidetipS,pigmentateauriupemediilecusngepot
producehemoliz.
Caracterebiochimice:Stafilocociiauunmetabolismglucidicattrespiratorcti
fermentativ.Fermenteazglucoza,manitolul,xiloza,lactoza,zaharozaetc.cuproduceredeacid.
CapacitateadeacidifiereamediuluiconinndmanitesteutilizatcatestdediferenierentreS.
aureus(manitopozitiv)iSCN(manitonegativ).Stafilocociiauriisuntcatalazopozitivi(vezi
12.5.B).Sepoatefaceitestulfosfatazei.Existsistememultitestcaresepotprocuracomercial

(API,MicroScan,Miniteketc).
Caractereantigenice:SepotutilizatestecomercialecareincludfibrinogeniIgGcare
cupleazcoagulazalegatiproteinaA(tehnicideaglutinareindirect).
Caracteredepatogenitate:Trebuieefectuattestulcoagulazei(vezicapitolul12,punctul
12.7)pentruidentificareaexotoxinelorsepoateutilizaotehnicdetipELISAsauaglutinarea
pasivinversat(veziicapitolul11).
Sensibilitatealabacteriofagi:Susceptibilitatealaaciunealiticabacteriofagilorafost
sistematizatpentrutulpiniledeS.aureusntrunsistemcaresepoateutilizalanivelulcentrelorde
referin.
Altecaractere/testeutilizatenidentificare:Sepotutiliza(ncentredereferin)teste
caresebazeazpeproprietifenotipicemoleculare(studiulacizilorgraicelulari,alunorenzime
saualunorpolipeptidetotale)saugenotipice(fragmentederestriciealematerialuluigenetic,
hibridareamolecular,ribotipia).Saudezvoltattehnicirapideutilizndtrusedeidentificarei
instrumenteautomatizatepentruevideniereaunorelementealepereteluicelular(proteinaA,
coagulazalegat),aenzimelorelaboratenalimentsaulichiduldehemocultur(testulpentru
termonucleaz)iatoxinelor(enterotoxine,TSST1,exfoliatine).Existmetodecareutilizeaz
markerimolecularipentruevideniereaprezeneiMRSA(stafilococrezistentlameticilin)ipentru
difereniereaintraspecificlaS.aureusiSCN.
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)esteobligatorieiserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetrice.ncazulunor
infeciigravetrebuiesfiensoitdealtedeterminri(vezicapitolul14).

25. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Streptococcus
Streptocociisuntcocisfericigrampozitivicareformeazperechisaulanurincursuldiviziunii
celulare.Suntlargrspndiinnatur.Uniifacpartedinfloraumannormalaliisuntasociaicu
afeciuniumaneimportantedatorateparialinfecieistreptocociceiparialrspunsuluiimunal
gazdei.Nusaelaboratunsistemperfectpentruclasificareatuturorstreptococilor.Dintrespeciile
cuimportanmedicalarfideamintitS.pyogenes(grupA),S.agalactiae(grupB),S.
viridans(careaparinefloreinormale),S.pneumoniae(pneumococul)etc.Enterocociiaparineau
grupuluiD,nsnmomentulactualfacpartedintrungenseparat,genulEnterococcus.
Streptocociisuntimobili,nesporulaiipotaveasaunucapsul.nacestcapitolvomdiscuta
diagnosticuldelaboratoralinfeciilorprodusedeStreptococcuspyogenes.
CeimaimulidintrestreptocociicareconinantigenuldegrupAsuntstreptococipiogeni.
Streptocociipiogenisuntbetahemolitici(producnmodcaracteristiczonelargidehemolizclarn
jurulunorcoloniidedimensiunimici).Deregulstreptocociipiogenisuntsensibililabacitracin.

Streptocociisuntpotenialimplicaintromarevarietatedeboli.nprincipalstreptocociipiogeni
potdevenipatogenidatoritmultiplicriiicapacitiideinvazivitate.Proprietilebiologiceale
microorganismelorinfectante,naturarspunsuluigazdeiipoartadeintrareainfecieiauomare
influenasupratablouluiclinic.Infeciilestreptococicearputeafigrupateastfel:
Boliinvazive,ncareputemincludefaringita,anginastreptococic,erizipelul,diferite
infeciinsferaORL,pneumonia,impetigostreptococic,celulita,fasceitanecrozant,febra
puerperal,endocarditainfecioas,sepsisulstreptococicetc.
Boliprodusedestreptococilizogenizai,ncareputemincludescarlatinaisindromulde
octoxicstreptococic.
Bolilepoststreptococicecareincludreumatismularticularacut(RAA)iglomerulonefrita
acutpoststreptococic(GNA).Diferiiautoriiaunconsiderareialteentiticlinice.
Pentruadiscutadiagnosticuldelaboratorninfeciileprodusedestreptocociipiogenivom
alegefaringitastreptococic.nvedereaconfirmriiuneibolipoststreptococicevomdiscuta
reaciaASLO(veziicapitolul19).
Diagnosticuldelaboratorbacteriologic,direct,nfaringitastreptococic.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologic,secreiapurulentdelanivelulfaringelui,
trebuiesserealizezerespectndoseriedereguli(ctmaiaproapededebutulbolii,nainteca
pacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapidicorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,
respectndtoatenormeledeasepsieiantisepsie,recoltareasefacepreferabildimineaanainte
capacientulsmnnceifrssefisplatpedini,frsfiutilizatgargarismecudiferite
soluii,iardacacestecondiiinuaufostrespectate,recoltareasevafacedupminim4oreetc
(veziicapitolul6).Produsulrecoltattrebuieprelucratctmairepedeposibil,nsnniciuncaznu
trebuiestreacmaimultde23oredelarecoltarepnlacultivare(preferabil12ore).ncazuln
careseestimeazdepireaacestuiintervaldetimptrebuiefolositunmediudetransport,ex.
mediulStuart(veziicapitolul9).Chiarinaceastsituaie,nuartrebuistreacmaimultde24
deorepnlaprelucrareap.p.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaadoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersieisenoteaz
prezenacelulelordelanivelfaringian,prezenacelulelorinflamatorii(ex.leucocite,piocite)i
prezenacocilorgrampozitiviaezaiseparat,nperechisaunlanuri,dariaaltortipuride
microorganisme.Examenulmicroscopicalp.p.aredoarunrolorientativ.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Streptocociipiogenisuntgermenipretenioicarenusedezvoltpemediidecultur
obinuite.Mediulcelmaifrecventfolositesteagarsnge,pecareculturaaparenn1848ore,la
3537C.ncazulncarenuremarcmapariiadecoloniicaracteristicedup24deore,reincubm
placaPetripentruncozi.ColoniileauaspectdetipScudiametrulde0,51mm,nconjurate
deozondebhemoliz(zonclardehemoliz,cuundiametrumultmaimaredectdiametrul
coloniei).ncursulnsmnrii,pecelpuinunadintrelaturilepoligonuluidescristrebuies
realizmionepareamediuluinaafelnctinocululsajungmainprofunzime.Aceast
manevr(existialtevariantetehnice)estenecesarpentruapermiteactivitateahemolizineiO
(aceaststreptolizinesteinactivatnprezenaoxigenului).Speciilecareproducmaterial

capsular,dinacidhialuronic,adeseoridaunatereunorcoloniimucoide(detipM).Sepotfolosi
pentrucultivareimediiselective(deex.agarsngeplustrimetoprimsulfametoxazol).
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocigrampozitivi,sfericisauovoidali,cudiametrulde
circa1.Sedividntrunplanperpendicularpeaxalorlungisepotdispunenlanuri.Lungimea
lanurilorvariaziestecondiionatdefactoridemediu.
Caracteredecultur:ProduccoloniidetipScudiametrulde0,51mm,nconjurate
deozondebhemolizsaucoloniidetipM.
Caracterebiochimice:
Streptocociipiogeniproduchemolizdetipbeta.
PrintestulPYResteidentificatsintezapirolidonilamidazei(actualmenteexistiteste
comerciale,rapide,pentrutestulPYR).
MultiplicareastreptococilordegrupAesteinhibatdebacitracin(antibioticprodus
deBacilluslicheniformis).SeapreciazcdintretulpiniledeStreptococcuspyogenes,maipuinde
1%suntrezistentelabacitracin(vezicapitolul12).
Streptocociipiogenisuntrezistenilatrimetoprimsulfametoxazol.
Caractereantigenice:
Sepotutilizatestecomercialepentrudetectarearapidapolizahariduluispecificde
grupAalstreptococilorpiogeninp.p.,dupextraciechimicsauenzimatic(ex.cupronaz).
Tehnicileutilizatepotfiaglutinareaindirect(latexaglutinare),coaglutinareasauELISA.
Prinreaciideaglutinare(latexaglutinare,coaglutinare)pelam,sauprecipitaresepot
determinaantigenelestreptococicedegrup(Lancefield)saudetip.
S.pyogenesestempritnserotipuripebazaantigenelorproteiceM(peste80)prin
reaciadeprecipitarentuburicapilareiT(28serotipuri)prinreaciadeaglutinarepelam.Aceste
testrisefacncentredereferin.
Altetesteutilizatenidentificare:Sepotutilizasondelenucleotidicepentrudetectarea
directastreptococilordegrupAnexsudatulfaringian.
5.Streptocociipiogeniimeninsensibilitateacunoscutlapenicilin(aufostidentificaten
ultimaperioadtulpinitolerante,caresuntinhibatedarnudistrusedectrepenicilin).Pentru
pacieniialergicilabetalactaminesepoatealegepentrutratamenteritromicina,daraufost
identificatetulpinirezistentelaacestmedicamentantimicrobianinacestcazantibiogramadevine
necesar.ngeneralantibiogramaserealizeaznscopepidemiologic.
Diagnosticuldelaboratorserologic
DiagnosticulimunologicalinfeciilorprodusedestreptocociibhemoliticidingrupulAarputea
constadininvestigareafiearspunsuluiimunumoral(prezenaititrulanticorpilor,ncadrul
diagnosticuluiserologic),fiearspunsuluiimundetipcelular.ncontinuarenuvomdiscutadect
diagnosticulserologic,careareimportanpractic.
Diagnosticulserologicesteutilpentrucertificareaetiologieibolilorpoststreptococice(RAA,
GNA),identificareauneieventualestridehipersensibilitate,diagnosticulretrospectivaluneiinfecii
streptococice,evaluareaevoluieicliniceieficacitiitratamentului.Diagnosticulserologicse
realizeazdeobiceiprinreaciaASLO,careidentifictitrurialeanticorpilorantistreptolizinO(vezi
icapitolul19).Testareasefacendinamic,peserurirecoltatelaintervalde710zile.Pentru

zonanoastrgeograficseacceptcanormaluntitrude200(maxim250)unitiASLO.Estestrict
necesarrealizareacontroluluiinterniexterndecalitate.
Existtesteserologicepentrudeterminareaprezeneiititruluianticorpilorfadealtestructuri
antigenice(streptodornaz,hialuronidaz,streptokinaz).Titrulanticorpilorantistreptodornazeste
crescutlapacieniicuinfeciitegumentareitrebuieinvestigatdacsesuspicioneazprezenaunei
glomerulonefriteacute.Sepotdeterminaianticorpiianticarbohidrat(hemaglutinarepasiv)sau
antiMAP(prinlatexaglutinare).

26. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de Streptococcus pneumoniae
Streptococcuspneumoniaeseprezintsubformdecocigrampozitivi,alungii,lanceolai,
dispuingeneralndiplopeaxullongitudinal,ncapsulai,nesporulai,imobili.Pneumocociisunt
aerobi,facultativanaerobi.PegelozsngedeterminahemolizlafelcaStreptococcusviridans.
Creterealorestefavorizatnatmosferde5%CO2laotemperaturde37C.Streptococcus
pneumoniaepoatedevenipatogenprinmultiplicareiinvazivitate,conducndlaapariiaunorvariate
infeciialetractuluirespiratorsuperioriinferior,aleurechiimedii,alesinusurilor,darialteinfecii
produseprindiseminarehematogen(ex.meningit,endocardit,carepotfifoarte
grave).Pneumoniapneumococicsensoetedeprezenaedemuluialveolariaunuiexsudat
fibrinos,urmatdeapariiadehematiiileucocite.
Datoritfaptuluicpoatefacepartedinfloramicrobiannormal,existoseriedeproblemen
ceeacepriveteinterpretareasemnificaieiprezeneipneumococilornprodusepatologicecarepot
ficontaminatecuaceastflor(ex.sputarecoltatprinexpectoraie).Unadintremarileprobleme
terapeuticedecurgnddindezvoltarearezisteneilaantibioticeoreprezintapariia
pneumococilorrezistenilapenicilinialtemedicamenteantibacteriene.
Pentruadiscutadiagnosticuldelaboratorninfeciileprodusedepneumococivomalegedrept
entitatepatologicreprezentativpneumoniapneumococic.
Diagnosticulpneumonieipneumococice
Diagnosticulpneumonieipneumocociceesteclinic,radiologiciardinpunctdevederealstabilirii
etiologieiesteundiagnosticbacteriologic(direct).
Diagnosticuldelaboratormicrobiologicestenumaibacteriologic(direct).
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).nfunciedemaladiaprovocatsepotrecoltaurmtoareleproduse
patologice:sput,aspiratbronicsautraheal,exsudatfaringian,secreiioticesauconjunctivale,
lichidpleural,lichidpericardic,LCR,puroi,snge,materialnecroptic.npneumoniapneumococic
agentuletiologicpoatefiizolatiprinhemocultur.ncontinuarevomdiscutacazulncarep.p.
estereprezentatdesput(veziicapitolul6).

2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersieisenoteaz
prezenacelulelordelanivelalveolar(ex.macrofagealveolare),prezenacelulelor
inflamatorii(ex.leucocite)iprezenacocilorgrampozitivi,alungii,lanceolai,dispuin
generalndiplo,ncapsulai(cuocapsulcomun),nesporulai.Examinareamicroscopictrebuie
sdemonstrezecalitateaprodusuluipatologicisrealizezeoidentificareprezumtiva
microorganismuluiimplicat(veziicapitolul52).ncoloraiacualbastrudemetilen,capsulapoate
apreacaunhalounjurulpneumococilor.Utilizndanticorpianticapsulari,sepoaterealizao
identificarerapidinclusivdirect,peprodusulpatologic(deexemplusput),prinreaciade
umflareacapsulei(vezicapitolul12,punctul12.14).
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Pneumocociisuntgermenipretenioi,carenusedezvoltpemediisimple,suntaerobi,
facultativanaerobi.PegelozsngeformeazcoloniidetipSsaudetipM,nconjuratedeozon
deahemoliz(lafelcaStreptococcusviridans).Multiplicareaestefavorizatnatmosferde5%
CO2laotemperaturde3537C.nmediiledeculturlichidetulburomogenmediul.
Produsulpatologicsepoateinoculailaanimaledelaboratorsensibile,respectivlaoareci
albi.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocigrampozitivi,alungii,lanceolai,dispuingeneral
ndiplo,ncapsulai(cuocapsulcomun),nesporulai.
Caracteredecultur:PegelozsngeformeazcoloniidetipSsauM,nconjuratedeo
zondeahemoliz(lafelcaStreptococcusviridans).
Caracterebiochimice:
Glucozareprezintprincipalasursdeenergiepentrupneumococi.Acetiaelaboreaz
enzimezaharolitice,proteoliticeilipolitice.
Fermentareainulineireprezintuncaracterbiochimicimportant,utilndiferenierea
pneumococilordes.viridans(existtulpinideS.viridanscarefermenteazinulina).Seutilizeaz
unmediuncareexistinuliniunindicatordepH.ncazulreacieipozitivearelocomodificare
depHirespectivmodificareaculoriimediului.
Pneumocociielaboreazenzimeautolitice.Autolizaesteindusiacceleratdebil,
sruribiliare,acizibiliaritestulesteutilnidentificareapneumococilor(testulbilolizei,Neufeld
vezicapitolul12,punctul12.3).
Suntsensibililaoptochin(etilhidrocuprein),sensibilitatealaaceastsubstanfiind
deasemeneautilnidentificareidifereniereadeStreptococcusviridans(vezicapitolul12,
punctul12.13).
Caractereantigenice:
Celmaiimportantdeterminantantigenicipatogenicestecapsulapolizaharidic
(antigenulK),ceprotejeazpneumococulfadefagocitozipermiteinvazivitatea.Structura
polizahariduluicapsularestespecificfiecruiserotipnparte.Pnnprezentaufostidentificate
peste85deserotipuricapsularediferite,acrorstructurafostdeterminatpentrumajoritatea

serotipurilor.Aufostproduseserurispecificeanticapsularepolivalenteimonovalente,utilen
identificareapneumococilorcuajutorulreacieideumflareacapsulei(vezicapitolul12,punctul12.
14).nacelaiscopsepoateutilizaireaciadeaglutinare.
DatoritfaptuluicprinurinseelimincantitidestuldeimportantedeAgK,prezena
acestuiapoatefievideniatprinreaciidelatexaglutinaresaumaibineprinimunoelectroforez.
Caracteredepatogenitate:Sepoateutilizainocularealaoarecelealb(vezicapitolul
11).
Altetesteutilenidentificare:Sepotutilizasondenucleotidicepentruidentificarea
ARNr.
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)esteobligatorieiserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetricepemedii
suplimentatecusngedefibrinatdeoaie.Pentruverificareasensibilitii/rezisteneilapenicilinse
utilizeazmicrocomprimatecuoxacilin(1mg).ncazulunorinfeciigraveantibiogramatrebuies
fiensoitdealtedeterminri(vezicapitolul14).

27. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

microorganisme din genul Neisseria
FamiliaNeisseriaceaeincludemaimultegenuri.
Exemplu:Neisseria,Moraxella,Acinetobacter,Kingella.ngenulNeisseria,speciileimportante
pentrupatologiaumansuntNeisseriameningitidis(meningococul)iNeisseria
gonorrhoeae(gonococul),darsepotamintiiN.lactamica,N.sicca,N.subflavaetc.nacest
capitolvomdiscutanumaidiagnosticuldelaboratorninfeciileprodusedemeningococigonococ.
Neisseriileseprezintsubformdecocigramnegativi,dispuindiplo,reniformi,imobili,
nconjuraideostructurcapsularcomun.nfunciedestructuracapsuleiexistmaimulte
serogrupuri.Ambelemicroorganismesuntoxidazopozitiveiaunevoienvedereaizolriide
utilizareaunormediideculturmbogite,necesitilenutritivefiindmaimarincazulgonococului.
PrincipialsepotmultiplicapemediulMuellerHinton(amintitilaantibiogramadifuzimetric)dup
ceizolareadinp.p.afostrealizatpealtemediimbogite.Multiplicareaareloclaotemperatur
deincubarede3537Cincondiiileuneiatmosferede310%CO2.Coloniileaparn2448deore,
mairapidncazulmeningococului.

Neisseriameningitidis
Neisseriameningitidispoatefacepartedinfloramicrobiandelaniveloral,nazalsaufaringian.
Colonizareapoatepersistasptmnisaulunidezile.Meningococulesteunmicroorganism

condiionatpatogencarepoatefiimplicatninfeciirespiratorii,darestesemnificativdereinutfaptul
cprininvazivitatepoateconducelaapariiauneibacteriemiincursulcreiacomplicaiaprincipal
estemeningitameningococic.Meningococulreprezintunadinprimeletreicauzedemeningit
infecioaslaaduli(alturideHaemophilusinfluenzaeiStreptococcuspneumoniae).
Diagnosticulmeningiteimeningococice
Diagnosticulmeningiteimeningococicepornetedelaelementeleclinice,eventualntrun
anumecontextepidemiologicdinpunctdevederealstabiliriietiologieiesteundiagnostic
bacteriologic(direct).
Diagnosticuldelaborator
nmeningitameningococicdiagnosticulesteurgent(riscdeevoluiecusechelei/sau
deces),deimportanmaximfiindrecoltareaitransportulrapidalLCRctrelaborator.Estede
preferatrealizareauneicultivrilapatulbolnavului,chiardacpentruconcentrareagermenilorar
puteafinecesarcentrifugareaLCR.AnalizacitologicibiochimicaLCResteutilnstabilirea
etiologiei.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmai
rapidicorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).Aacumammenionat,recoltareaLCRprinpuncie(dupverificareapresiuniidin
arteracentralaretineiprinexaminareafunduluideochi)trebuiefcutpectposibillapatul
bolnavului,avndladispoziietotceestenecesarpentrupregtireafrotiurilor,cultivareapediferite
mediidecultur,repartizareauneicantitideLCRpentruexamenulcitologicibiochimic(vezii
capitolul6).LCRpoatefipurulent.ncazulncarep.p.urmeazafitransportatctrelaborator,
transportultrebuierealizatfrntrziere(laotemperaturapropiatde37C).Meningococular
puteafiizolatiprinhemocultur,cultivareasecreiilornazalesaufaringieneetc.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.DacLCRestefrancpurulentfrotiurilesepotexecutadirectdinp.p.,ncaz
contrarrealizminiialcentrifugareaLCR.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersie
isenoteazprezenacelulelorinflamatorii(ex.leucocite)iprezenacocilorgramnegativi,
dispuindiplo,reniformi,imobili,nconjuraideostructurcapsularcomun,situaiintrasau
extraleucocitar.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Meningocociisuntgermenipretenioi,carenusedezvoltpemediisimple,suntaerobi,
facultativanaerobi.Sepotutilizamediiselective(ex.mediincareseincludevancomicin,colistin,
trimetopriministatin)sauneselective(ex.MuellerHinton,gelozsngesaugelozchocolat)pe
careformeazcoloniidetipSsaudetipM.Estenecesaroatmosferde35%CO2,lao
temperaturde37C.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocigramnegativi,dispuindiplo,reniformi,imobili,
nconjuraideostructurcapsularcomun,nesporulai.
Caracteredecultur:ColoniiledemeningococsuntdetipS,cudimensiunidecirca12

mm.Tulpinilencapsulate(ex.grupeleA,C)potconducelaapariiaunorcoloniidetipM.
Caracterebiochimice:
Metabolizeazdiferiicarbohidrai,activitatecarepoatefiutilnidentificare.Spre
exemplumeningococulmetabolizeazattglucozactimaltoza.
Produccitocromoxidaz,untestcheienidentificare(veziicapitolul12)
ExistoseriedesistemecomercialepentruidentificareexoenzimaticaNeisseriilor
(ex.QuadFerm+,RIM,Miniteketc).
Caractereantigenice:nfunciedestructuralipooligozahariduluiexist12serotipuri.Cel
maiimportantdeterminantantigenicestecapsulapolizaharidic.Structuracapsularpermite
subdivizareaspeciein13serogrupuri.Dintreacesteamaiimportantesuntgrupele:A,B,C,Yi
W135.
Prezenameningococuluipoatefidetectatdirectnprodusulpatologicprinlatex
aglutinare,coaglutinaresaucontraimunoelectroforezutilizndseruripolivalenteantiA,C,Y,
W135irespectivserurimonovalenteantiB(sepotdetecta0,020,05mgdeAg/ml).Denotat
posibilitateauneireactivitincruciatefadeAggrupuluiB,respectivAgK1delaE.coli.
Tehnicisimilaresepotutilizapentruidentificareatulpinilordemeningococizolaten
cultur.
Caractereutilizatentiparea(tipizarea)tulpinilorizolate:Existdiferitetehnici
(imunologice,electroforetice,debiologiemolecular)caresuntpracticatenumaincentrede
referin.UtilizareaPCRareosensibilitateispecificitatedecirca91%foarteutillapacienii
pentrucaresainiiatdejaantibioticoterapia.
5.Antibiograma(testareasensibilitiitulpinilorizolatenvedereastabiliriitratamentului)este
recomandatiserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetrice.ncazulunorinfeciigrave
antibiogramatrebuiesfiensoitdealtedeterminri(vezicapitolul14).

Neisseriagonorrhoeae
Infeciilegonococicecontinusreprezinteoproblemimportantdesntatepublic.
Dupptrundereanorganismulreceptiv,nfunciedecaleadetransmitere,gonococulse
ataeazdemucoase(genitourinar,ocular,rectal,faringianetc)iproducelocalosupuraie
acut.Labrbaiapareuretritagonococic.Lafemei,gonoreeaselocalizeazendocervical,darse
poateextindelaniveluluretrei,vaginului,glandelorBartholin,trompeloruterine.Dacmamaare
gonoreeinounscutulsenatepecalenatural,poateapreaoftalmiagonococic.Rareori
gonococulpoatediseminapecalesanguin(bacteriemie),cuapariiaunorleziunidermice,artrite,
tenosinovitegonocociceetc.
Diagnosticuldelaboratorngonoree
Diagnosticuldelaboratorestenumaibacteriologic(direct),cuetapelecunoscute.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmai
rapidicorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).Labrbatsepreleveazsecreiauretral(eventualpicturamatinal)iarla
femeierecoltareatrebuieefectuatpemasginecologicdelanivelulcoluluiuteriniglandelor
Bartholin(veziicapitolul6).Secreiileaudeobiceiunaspectpurulent.Estedepreferat
cultivareaimediat,pemediideculturpotriviteinatmosferdeCO2.ncazulncarep.p.

urmeazafitransportatctrelaborator,transportultrebuierealizatfrntrziere(laotemperatur
apropiatde37C).Chiarincazulutilizriimediilordetransport(ex.mediulAmiespluscrbune
activat),acestanuartrebuisdurezemaimultde6ore.Gonococularputeafiizolatiprin
hemocultur,cultivareasecreiilorconjunctivale,faringiene,cultivareaurineietc.ncazulncarenu
existniciosecreie,sepoateutilizaurinacaretrebuiecentrifugatinsmnatimediatpe
mediidecultur.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersieisenoteaz
prezenacelulelor,acelulelorinflamatorii(ex.leucocite)iprezenacocilorgramnegativi,
dispuindiplo,reniformi,imobili,nconjuraideostructurcapsularcomun,situaiintrasau
extraleucocitar.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Gonocociisuntgermenifoartepretenioi,carenusedezvoltpemediisimple,suntaerobi,
facultativanaerobi.Sepotutilizamediiselective(ex.mediincareseincludevancomicin,colistin,
trimetopriministatin)sauneselective(ex.mediulGC,gelozsngesaugelozchocolatcu
diferitesuplimentenutritiveserecomandutilizareapulberiidehemoglobininuasngelui
proaspt).Estepreferatcultivareandublu,pemediiselectiveineselectivencazulncarep.p.
estereprezentatdesecreiedelanivelulrectuluisaudesecreiefaringiansevorfolosinumaimedii
selective.Estenecesaroatmosferde310%CO2,laotemperaturde3537C.Coloniileaparn
2448deore.GonococulproducecoloniidetipS,cudimensiunide0,51mmsaucoloniidetipM,
nepigmentate,transparentesauopace.Estederemarcatfaptulcnaceeaiplacpotaprea
pnlacincitipuridecolonii(T1T5),ceeacepoatefacilitaidentificarea.Placaesteeliminatn
cazulncarenusedezvoltcolonii,dup72deore.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocigramnegativi,dispuindiplo,reniformi,imobili,
eventualnconjuraideostructurcapsularcomun,nesporulai.Sepoateutilizaicoloraia
fluorescent.
Caracteredecultur:ColoniiledegonococsuntdetipSsauM(vezipunctul3).
Caracterebiochimice:
Metabolizeazdiferiicarbohidrai,activitatecarepoatefiutilnidentificare.Gonococul
metabolizeazglucozadarnuimaltoza.
Produccitocromoxidaz,untestcheienidentificare(veziicapitolul12).
Testulcatalazei(superoxol)esteintenspozitiv.
ExistoseriedesistemecomercialepentruidentificareexoenzimaticaNeisseriilor
(ex.QuadFerm+,RIM,Minitek,GonochekIIetc).
UtilizndgaleriaAPINH(manual)putemidentificaspecii
deNeisseria,HaemophilusiBranhamellacatarrhalis,nnumai4ore.
Caractereantigenice:
nfunciedestructuralipooligozahariduluiexist6serotipuri.Gonocociipotexprima
simultanmaimultestructuriantigenicdiferite,ceeacecreazproblemetehnice.Acestetestrise

realizeazncentredereferin.
Prezenagonococuluipoatefidetectatdirectnprodusulpatologicprincoaglutinare
(suspensiedeS.aureustipCowanIstabilizatisensibilizatcuAcmonoclonaliantiproteinIdin
membranaexternagonococilor)sauprintrotehnicimunoenzimatic(cuAcpoliclonali).
SepotutilizaAcmonoclonalicunoscui,pentruidentificaregonococuluiprintehnica
imunofluoresceneidirecte.
Caractereutilizatentiparea(tipizarea)tulpinilorizolatesaudirectpentrup.p.:
Existdiferitetehnici(imunologice,biochimice,debiologiemolecular)caresunt
practicatenumaincentreledereferin.
Metodelebiologieimoleculareauattospecificitatectiosensibilitatefoartebunse
potutilizafieporninddelaculturifiedelap.p.
Sondelenucleotidice
PCR
LCR(LigaseChainReaction)aceastmetodsepoateutilizaporninddelaurinsau
delasecreiivaginaleiareunsingurdezavantaj,costulridicat.
5.Antibiograma(testareasensibilitiitulpinilorizolatenvedereastabiliriitratamentului)este
recomandatiserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetrice(mediulutilizatesteGC
suplimentatnutritivdarfrpulberedehemoglobin).Aufostidentificatetulpinirezistentela
penicilin(fiedatoritunuiplasmidcarecodificoblactamazdetipulTEM,fiedatoritunor
mutaiicromozomiale).Estenecesartestareaproduceriideblactamaz(deex.folosinddiscuricu
nitrocefin).DeterminareaCMIsepoaterealizaprinmetodeclasicesaucuajutorultestuluiE(vezi
capitolul14).

28. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de enterobacterii. Coprocultura.
FamiliaEnterobacteriaceaecuprindeunimportantnumrdegenuridemicroorganisme
semnificativedinpunctdevederemedical(28)inumeroasespecii(peste100,ncazulncarenu
lumnconsiderareclasificareagenuluiSalmonellanpeste2000despecii).Dintregenurileincluse
naceastvastfamilie,vomaminti
urmtoarele:Escherichia,Shigella,Salmonella,Yersinia,Klebsiella,Proteus,Citrobacter,Edwarsie
lla,Enterobacter,Morganella,ProvidenciaiSerratia.ncapitoleleurmtoarevomdiscutanumai
desprediagnosticulninfeciileprodusedemicroorganismeleaparinndprimelor6genuri
enumerate.Enterobacteriilesuntbaciligramnegativicarenusepotdifereniaprinmicroscopie
optic,mobilicuciliperitrichi(ex.Salmonellaspp.,Proteusspp.),sauimobili
(ex.Shigella,Yersinia,Klebsiella),nesporulaiunelespeciiprezintcapsul(ex.Klebsiella
pneumoniae).

Suntgermeninepretenioicaresepotmultiplicapemediisimple,aerobifacultativanaerobi,
utilizeazfermentativglucozacusaufrproduceredegaz,suntoxidazonegativi,catalazopozitivi,
reducnitraii.FormeazcoloniidetipS,R(ncazulculturilorvechi)sauM(pentruspeciile
capsulate),potfermentalactoza(ex.Escherichiacoli,Klebsiella)sausuntlactozonegativi
(ex.Salmonella,Shigella,Yersinia).Pentruizolareaspeciilordeenterobacteriiputemfolosimedii
selective,diferenialeiselectivodifereniale.Existmediicuselectivitatemaireduscareinhib
majoritateabacteriilorgrampozitiveipermitedezvoltareatuturorenterobacteriilor(ex.mediulMac
Conkeycusruribiliarenconcentraiemicsepoateadugaicristalviolet),mediicu
selectivitatemediecareinhibmultiplicareaenterobacteriilorlactozopozitive(ex.mediulADCLcu
dezoxicolat,citratilactoz,mediulShigellaSalmonellacusruribiliareiverdebriliantsaumediul
XLDcuxiloz,lizinidezoxicolat,preferatnmultedintrerileUniuniiEuropene)imediicu
selectivitatenalt(ex.mediulWilsonBlaircuverdebriliantnconcentraiecrescut).
Caracterelebiochimicesuntesenialepentruidentificareaenterobacteriilor.Dupexaminarea
caracterelordecultur(pemediileselectivodiferenialesepoateidentificaicomportamentul
enterobacteriannceeaceprivetefermentarealactozei),prinrepicareacoloniilorsuspectepe
mediipotrivite(TSI,MIU/MILF,Simmonsetc),nziuaurmtoaresepotexaminadiferitecaractere
biochimice(fermentareazaharurilor,evideniereaunuianumitmetabolit,metabolizareaunuianumit
substrat,utilizareacitratuluicaunicsursdecarbon,identificareaunorenzimeetc)saualte
caracterefenotipice(ex.motilitatea).nmomentuldefaexistbateriidetesteisisteme
comercialecarepermitexaminareauneigameextinsedecaracterebiochimice(ex.galeriileAPI).
Dorimsmenionmcpentrufiecaretestfenotipicexistoseriedevariaiicaresuntprezentate
procentualntabelespecialdedicate.
Unaltaspectfoarteutilpentruidentificareestereprezentatdestudiereacaracterelorantigenice
folosindseruricunoscute(preparatepeanimaledelaborator),cuajutoruldiferitelorreaciiAgAc
(veziicapitolele1520).ToateenterobacteriiledeinAgO.EnterobacteriilemobiledeinAgH.
EnterobacteriilecapsulatedeinAgK.SalmonellatyphiprezintiAgVi,Yersiniapestisprezint
AgF1etc.
Infeciileenterobacterienesuntdestuldevariate.Potfilocalizatelaniveldigestiv(dizenteriei
sindroameasemntoaredizenteriei,sindroameasemntoareholerei,toxiinfeciialimentareetc),
lanivelultractuluiurinar,lanivelulaparatuluirespiratorsaulanivelulsistemuluinervos.Infeciile
enterobacterienepotaveaialtelocalizrisaupotfigeneralizate(deex.nfebratifoid,febrele
paratifoide,pest).
nmajoritateainfeciilorprodusedeenterobacteriidiagnosticulestebacteriologic,direct.nfebra
tifoiddiagnosticulpoatefiattbacteriologicctiimunologic(serologic).
Datoritfaptuluicnmultedintreacesteinfeciiprodusulpatologicestereprezentatdectre
materiilefecale,ncontinuarevomdiscutaexamenulbacteriologicalmateriilorfecale.

Coprocultura
nmultedintreinfeciileprodusedeenterobacterii,caresemanifestprinsindromdiareic,
utilizmcoprocultura.nceleceurmeazvomdiscutacoproculturangeneral,nunumaidinpunctul
devederealuneiinfeciienterobacteriene.

Boaladiareicacut

Boaladiareicacut(BDA)afostirmneoentitatepatologicfoarterspnditlanivel
mondial.Spreexemplu,naranoastrnultimiiani,numruldecazuridebolidiareiceacuteafost
de85.055nanul2000,81.268nanul2001irespectiv97.317nanul2002,cuoincidende
446,50/0000n2002.naceeaiperioaddetimp,nfiecareanaudecedatdatoritBDAcirca100de
pacieni.
Sindromuldiareicincludeeliminareaapeste3scaunen24deoreiarscauneleauconsistena
diminuat(pnlaemitereaunorscauneapoase,cupierdereaapnla2030litri/zinholer).
Materiilefecalepotaveaaspectpatologic(apos,mucos,purulent,sanguinolentetc),culoare
modificat,mirosparticularetc.Deregulsindromuldiareicasociazialtesemneisimptome
digestive(dureriabdominale,tenesme,grea,vrsturietc)saugenerale(febr,staregeneral
alteratetc).FoarteimportantiobligatoriudereinutestecBDAducelapierderideapi
electroliiiarinterveniaceamaiimportantcaretrebuieavutnvedereestereechilibrarea
hidroelectrolitic.

Agenietiologici
Boaladiareicacutpoatefideetiologieinfecioasineinfecioas.ncontinuarevomdiscuta
pescurtetiologiainfecioasngeneral,nunumaiceabacteriansaufungic.Estedemenionatc
mareamajoritateaBDAinfecioaseauetiologieviral.
Etiologiabacterianinclude:
Salmonellaspp.
Shigellaspp.
Escherichiacoli(EPEC/enteropatogen,ETEC/enterotoxigen,EHEC/
enterohemoragic,EIEC/enteroinvaziv,EAEC/enteroagregant,DAEC/aderentdifuz)
Klebsiellaspp.
alteenterobacterii(Yersiniaenterocolitica,Citrobacterspp.,Proteusspp.etc)
Vibriocholeraeialivibrioni
alibaciligramnegativi(Aeromonasspp.,Alcaligenesspp.,Pseudomonasspp.etc)
Bacilluscereus
Campylobacterjejuni
Clostridiumperfringens,Clostridiumdifficile
Clostridiumbotulinum
Staphylococcusaureusetc
Etiologiafungicinclude:
Candidaalbicans(lapacienicuSIDA)etc
Etiologiaparazitarinclude:
Giardialamblia
EntamoebahystoliticaiEntamoebacoli
Trichinellaspiralis
Cryptosporidiumparvum
Strongyloidesstercoralisetc
Etiologiaviralinclude:
rotavirusurile
virusurileNorwalkiasemntoarevirusurilorNorwalk
calicivirusurile

astrovirusurile
coronavirusurile
enterovirusurile
adenovirusurileetc.
Grupareaageniloretiologicinfunciedemecanismulpatogenic
Attdinpunctdevederediagnosticctipentrutratamentpoatefiimportantelucidareatipului
demecanismimplicat.Astfel,BDAarputeafiproduseprin:
mecanismneinflamator,atuncicnddinpunctdevederemicroscopicnpreparatulntre
lamilamelnuseevideniazleucocite(ex.BDAprodusedeVibriocholerae,ETEC,Clostridium
perfringens,Staphylococcusaureus,Giardialamblia,rotavirusuri,virusuriNorwalk,Cryptosporidium
parvumetc)
mecanisminflamator,atuncicnddinpunctdevederemicroscopicnpreparatulntre
lamilamelseevideniazleucocitepolimorfonucleare(ex.BDAprodusedeShigellaspp.,
EIEC,Salmonellaenteritidis,Vibrioparahaemolyticum,Entamoebahystoliticaetc)
mecanismdepenetrare,atuncicnddinpunctdevederemicroscopicnpreparatul
ntrelamilamelseevideniazleucocitemononucleare(ex.BDAsausindromdiareicprodus
deSalmonellatyphi,Yersiniaenterocoliticaetc).
Dupcumsepoateremarca,simplarecoltareaprodusuluipatologicurmatderealizareaunui
preparatnativ(vezicapitolul7)iexaminareamicroscopicaacestuiapotdainformaiiimportante
cuprivirelaetiologiaprobabilprecumiatitudineaterapeuticdeurmat.Esteevidentcntro
BDApentrucareageniietiologicisuntviralisaumecanismulpatogenicincludeaciuneaunei
toxineestecontraindicatadministrareadeantibioticesauchimioterapiceantibacteriene.
Indicaiilecoproculturiinbacteriologie
atuncicndestesuspicionatoinfeciecuShigellaspp.,Vibriocholerae,E.coli(tipurile
patogene),Campylobacterspp.,YersiniaenterocoliticasauSalmonellaspp.nspeciallapacienicu
vrsteextremesauimunodepresie
dupcirca1sptmndeladebutulfebreitifoideetc
atuncicndBDAprezintrisculextinderiilaniveluluneicolectiviti(cree,grdinie,
tabere,unitidealimentaiepublic,staiidedistribuieaapeipotabileetc)
atuncicndBDAaparelapacienicareaufosttrataicuantibioticeiarsindromuldiareic
persistidupntrerupereaantibioticoterapiei
atuncicndsindromuldiareicpersistmaimultdeosptmnsauarelocorecdere
nscopulverificriistriidesntateapersoanelorcarelucreaznunitidealimentaie
public(conformnormativelorstabilitedectreministerulsntii)
nscopdecercetareetc.
Recoltareaitransportulmateriilorfecale
Sevorrespectarecomandrilemenionatencapitolul6,nspecialfaptulcrecoltareap.p.
trebuiesserealizezenaintedeadministrareademedicamenteantimicrobiene.Sepotrecoltai
examina:
scaunulemisspontanreprezintprodusulpatologicutilizatcelmaifrecvent.Defecaia
arelocntrunrecipientdecartonsauntruncontainerdinmaterialplasticdeunicntrebuinare
(carepoatefiapoidecontaminatieliminatfrprobleme).nacelaitimpefectumiexaminarea
macroscopicap.p.dinpunctuldevederealmirosului,culoriisauaspectului.Utilizmpentru

prelevarelinguriarecoltoruluialegndporiunicarepermitcuomaimareansizolareaagentului
patogen(fragmentemucopurulente,poriunicusnge,flocoaneriziformeetc)sauporiunidiferite
dintrunscaunncarenuseremarcaspectelemenionateanterior.Prelevmocantitatede
aproximativ1grampecareosuspensionmnmediuldetransport(minim2mlncazulscaunelor
apoase).
tamponulrectalesterecomandatncazuluneiinfeciicronicecuShigellaspp.,atunci
cndsuspicionmportajuldeShigellaspp.sauSalmonellaspp.Tamponulsterilseintroducecu
blndeeisepreleveazsecreiiledelanivelulmucoaseirectale,prinrotire,pentruarecolta
materialdincriptelerectale.Apoiintroducem.tamponulnmediuldetransport.Pentruaputea
nchiderecoltorul,tiemnmodcorespunztortijatamponului.
sondaNelatonsepoateutilizaatuncicndurmrimrecoltareap.p.delanivelulcolonului
sigmoid.Introducemcublndeesondapnlaniveluldorit(circa1012cmlacopilirespectiv
circa1520cmlaadult),adaptmlacellaltcaptalsondeioseringiaspirmp.p.delanivel
sigmoidian.Introducemp.p.nmediuldetransport.
ncazulncarep.p.nupoatefiprelucratimediatsaunmaxim1or,utilizmunmediude
transport,transportullarece(+4C)sautransportulnmediudetransportmeninutla4C.Celmai
frecventutilizmmediulCaryBlair(vezicapitolul9).Acestmediuasigursupravieuirea
enterobacteriilorpatogenetimpde2448deore,inhibndnacelaitimpmultiplicareafloreide
asociaie.AtuncicndestesuspicionatinfeciacuV.cholerae,apapeptonatalcalinserveten
acelaitimpdreptmediudetransportimediudembogire.
Examinareamateriilorfecale
Materiilefecalesuntexaminatemacroscopicimicroscopic.Dinpunctdevederemicroscopic,
defiecaredatsevorrealizapreparatenative(ntrelamilamel).Materiilefecalesunt
suspensionatentropicturdelugolsaudealbastrudemetilen1%iarpreparatulsevaexamina
iniialcuobiectivul10,apoicuobiectivul40.Spreexemplu,evideniereaapeste40PMN/cmp,
nsoitedemacrofageihematii,conducelasuspicionareauneidizenteriibacteriene.Frotiurile
coloratepotfiutilensuspicionareadiagnosticuluideenterocolitcuCampylobacterspp.saual
coliteipseudomembranoase,postantibioticoterapie.
Cultivareamateriilorfecale
nmodobinuit,pentrucultivarevomutiliza3mediidiferite,respectivoeprubetcubulion
selenitaciddesodiui2plciPetri,unacumediucuselectivitatesczut(ex.MacConkey)i
altacumediucuselectivitatemedie(ex.ADCLsauXLD).Acestemediiselectivesuntnacelai
timpimediidifereniale.
Alegemfragmentecaracteristicedinp.p.(mucus,puroietc)insmnm23ansenmediul
cubulionselenit(mediudembogirenspecialpentruSalmonellaspp.).Realizmosuspensie
omogennmediullichid.Prelevmoans(sauopictur)dinsuspensieiodepunempemediul
MacConkey.Moduldensmnarediferdecelprezentatncapitolul10.ntindemp.p.nstriuri
paralelepeojumtatedeplac,pnaproapedemarginileplciifrsleatingem.Frs
sterilizmansa,atingemultimile34striuriidispersmp.p.naltestriuriparalele,perpendiculare
peprimele,pejumtatedinmediuldisponibil,pnaproapedemarginileplciifrsleatingem.
Atingnddinnouultimele34striuri,dispersmp.p.nmodsimilarpemediulncnensmnat.
Incubmtimpde1824deorela3537C.
nziuaurmtoare,porninddelatubulcubulionselenitnsmnmaacumammenionatmai

susoplaccuMacConkeyioplaccuADCL(sauXLD)incubmacesteplcitimpde1824de
orela3537C.Examinmplcilensmnateprecedentnvedereaselectriicoloniilorsuspecte.
PemediulMacConkeycoloniilelactozopozitiveaudimensiunide13mm,suntroii,pot
prezentaunhalouopalescent,deregulsuntdetipSdarpotfiidetipM.Coloniile
lactozonegativeaudimensiunide12mm,nusuntcolorate,sunttransparente,deregulsuntde
tipS.
PemediulADCLmajoritateabacteriilorlactozopozitivesuntinhibatepotapreatardivcolonii
dedimensiunimaimici,roii,detipS.Coloniilelactozonegativeaudimensiunide12mm,nusunt
colorate,suntsemitransparente,detipSdacproducH2Scentrulcolonieiestedeculoareneagr.
Deregulurmrimapariiacoloniilorlactozonegative,iarpentruetapeledeidentificarevom
repica(fraatingemediuldecultur)3coloniincazulncarepacientulestecopili35coloniin
cazulncarepacientulesteadult.ncazulncarenuexistcoloniilactozonegative,pentru
identificarevomrepica(frsatingemmediuldecultur)10coloniilacopilirespectiv10colonii
laadult(dacseconsidercidentificareaestenecesar,deex.nizbucniriepidemicedeBDA).
Aadar,dupapariiacoloniilorizolatepemediileselectivodiferenialetrecemlaidentificarea
speciilorimplicatepatogenicpebazacaracterelormorfotinctoriale,decultur(vezicapitolul11),
biochimice(vezicapitolele11i12),antigenice(vezicapitolele1120,nspecialcapitolul17),de
patogenitate,pebazasensibilitiilabacteriofagiieventualpebazaunorcaracteremoleculare.
Pentruinterpretarevomutilizadiferiteletabeledisponibilentratateledespecialitatesau
recomandrileproductorilorncazulutilizriiunorsistemecomercialedediagnostic.Pentru
tulpinileconsiderateafiimplicatepatogenicvomrealizastudiulsensibilitiilaantibioticei
chimioterapice,deregulprinmetodedifuzimetrice(antibiogramadifuzimetricstandardizat,
comparativ,Etest).
Alteaspecteparticulareurmeazafiprezentatencapitoleleurmtoare.

29. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de Escherichia coli. Urocultura.
Dupceoseriededatesugerauasemnareadinpunctdevederemolecularntrespeciile
genurilorEscherichiaiSalmonella,cunotineleactualepledeazpentruogrupareaspeciilordin
genurileEscherichiaiShigella.Cutoateacestea,vomprezentancontinuareseparatdiagnosticul
delaboratorninfeciileprodusedemicroorganismeleaparinndgenurilorclasice.
GenulEscherichiacuprindegermenicomensalicaresegsescubicvitar(nap,pesol,etc)iarla
nivelulintestinuluiumanaurolnsintezaunorvitamine(simbioz).Suntbaciligramnegativimobili
sauimobili,aerobifacultativanaerobi,lactozopozitivi.SpeciatipestereprezentatdeEscherichia
coli.

CutoatecmajoritateatulpinilordeE.colisuntsaprofitesaucondiionatpatogene(fiind
implicateninfeciioportunisteculocalizrinafaratractuluidigestiv,spreex.peritonite,colecistite,
infeciialeplgilor,endometrite,pneumoniietc)existianumitetulpinidotatecucaractere
patogeniceparticulare.DintreacestetipurideE.coli(patotipuri)sedistingtreigruprimai
importante:
tipuripatogeneimplicatenbolidiareiceacute(BDA)
E.colienteroagregativ(EAggEC)implicatnapariiauneiBDAapoase,persistent,cu
mucus,nspeciallasugari
E.colienterohemoragic(EHEC),spreexempluserotipulO157:H7,careelaboreazdou
citotoxineiesteimplicatnapariiauneiBDAapoas,carepoatedeveniseverisepoatensoi
deocomplicaiegrav,sindromulhemoliticuremic
E.colienteroinvaziv(EIEC)careelaboreazunasaumaimulteenteroxineproducndun
sindromdizenteriform
E.colienteropatogen(EPEC)caredetermindiareelacopilulmic,uneoridegravitate
maxim(ex.diareemalignlanounscut)
E.colienterotoxigen(ETEC)careelaboreazdouenterotoxine(termolabili
termostabil)iproduceunsindromholeriform
E.coliaderentdifuz(DAEC)careproducediareeapoas,persistent,lacopiinvrst
de15ani
tipuri(grupuri)patogeneimplicateninfeciialetractuluiurinar(ITU)
tipulpatogenimplicatninfeciameningeallanounscut.
Indiferentdelocalizareainfeciei,diagnosticuldelaboratormicrobiologicestebacteriologic,
direct.
Diagnosticuldelaboratormicrobiologicninfeciileculocalizaredigestiv
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute.Produsulpatologicestereprezentatdeobiceidescaunuldiareicdaramputearecoltai
lichiddevrstursauunanumitalimentincriminat.Materiilefecaleseexamineazmacroscopici
setrimitctrelaboratoraacumammenionatncapitolulprecedent.ncontinuarevomdiscuta
diagnosticuluneiinfeciiprodusdeEHEC(ex.O157:H7)dar,subliniemfaptulcnpractica
medical,porninddelap.p.reprezentatdemateriilefecale,putemizolaoricemicroorganism
implicatetiologicnBDA,dupcaz.Materiilefecalepotaveaaspecthemoragiciarlaexaminarea
macroscopicap.p.putemobservaprezenaunorlambouridemucoasepitelial.Transportulse
varealizaaacumammenionatncapitolulnr.28.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareapreparatuluinativ,ntre
lamilamelremarcmprezenahematiilorileucocitelorPMN.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(vezicapitolulnr.28).n
vedereaizolriiEHEC,pelngmediilemenionatencapitolulprecedentserecomandutilizarea
mediuluiMacConkeycuDsorbitol,deoarecespredeosebiredemajoritateatulpinilordeE.
coliEHECnufermenteazsorbitolul(saulfermenteaztardiv).nacestsens,coloniilesuspecte,
repicate(fraatingemediul)nvedereaidentificriivorfinecolorate,cudimensiunide13mm,de
reguldetipS(coloniilesorbitolpozitivevoraveaoculoareroz).
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor

caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligramnegativi.
Caracteredecultur:
ProduccoloniidetipScucaracterelemenionatemaisus.
Caracterebiochimice(pentruEHECsevorexaminalanivelulcentruluidereferin
procesareaunorculturincareesteprezentEHECnecesitmsurisuplimentaredesiguran):
Fermenteazglucoza(cuproduceredegaz),suntlactozopozitivi,nufermenteaz(sau
fermenteaztardiv)sorbitolul,nuproducH2S
Potproduceindol,suntureazpozitivi,mobili(darexistitulpiniimobile)etc.
Sepotfolosimediilemultitestconvenionale(TSI,MIU,MILF)saugaleriilemultitestAPI
10S,API20E,APIRapid20Esaualtevariante
Altetestecepotfistudiatenscopulidentificriigermenilor:
Testareacaracterelorantigenice:Agsomaticepotfiidentificateprinreaciideaglutinare
saulatexaglutinare(sepotutilizaiserurimonovalenteantiO157irespectivantiH7)toxinelepot
fiidentificateprintehnicidetipELISA,latexaglutinare,latexaglutinarepasivinversat
(VETRPLA),sauprinseroneutralizareaefectuluicitotoxicpeceluleVero
Testareacaracterelordepatogenitate:EHECproduceenterocolithemoragicletalla
purcelsepoatestudiaefectulcitopaticpeceluleVero
Testedebiologiemolecular(PCR,detectareagenelordepatogenitateporninddela
p.p.saudelacoloniileizolatepeMacConkeycuDsorbitol).
5.Antibiogramaesterecomandatderegulnumaipentrusupraveghereaapariieifenomenului
derezistenlaantibioticeichimioterapiceserealizeazprinmetodedifuzimetrice.

Urocultura
Tractulurinarestenmodnormalnecontaminat,nschimburetradistalpoateprezentaoflor
microbianfoartevariat,fiindcontaminatcumicroorganismeproveninddinzonagenitalsaude
lanivelulcolonului.Dintreacestemicroorganismeputemizoladelaniveluluretreidistalestafilococi
coagulazonegativi,E.coli,Klebsiellaspp.,Proteusspp.,bacilidifteromorfi,enterococi,streptococi,
neisseriisaprofite,Mycoplasmaspp.,Ureplasmaspp.sauFusobacteriumspp.Laacelainivelar
puteafiidentificateitulpinideCandidaspp.,Clostridiumspp.,diferiicocigrampozitivisaugram
negativianaerobi,lactobabili,mycobacteriinetuberculoase,stafilocociauriietc.Colonizarea
microbianauretreidistaleexplicmotivulpentrucarenmareamajoritateacazurilorvom
realizauroculturacantitativ.
Cutoatecindiferentdegrijacucarevomrecoltap.p.(urina)acestavaficontaminat,prin
apreciereacantitativanumruluideunitiformatoaredecoloniinurinaproasptrecoltat,din
mijloculjetului,putemsprecizmdacpacientularesaunuinfecieurinar.Maimultestudiiau
artatcatuncicndsedemonstreazprezenaa105bacterii/ml,aceastaindicoinfeciea
tractuluiurinar(ITU)naproximativ80%dintrecazurintimpceovaloarede104bacterii/mlindic
ITUnmaipuinde30%dintrecazuri.
Datoritacestorrezultate,npracticamedicalseconsidercneaflmnsituaiauneiITU
atuncicndnumruldebacterii/mlurineste105/ml.
Cutoateacestea,dorimssubliniemcinterpretarearezultatuluinutrebuierealizatmecanic

ideciziafinalnceeacepriveteidentificareabacteriei,efectuareatestriisensibilitiila
antibioticeirespectivredactareabuletinuluideanalizartrebuisfieluatavndnvedere
aspectulmacroscopicalurinii(ex.purulent),rezultatulexamenuluimicroscopicalsedimentului
urinar(ex.prezenadePMN),numruldeunitiformatoaredecolonii/mlurinielementeclinice
(ex.disurie,miciunimaifrecvente,febr),cualtecuvintecolaborareantreclinicilaboratoreste
esenial.Spreexemplu,ncazulunorelementesugestive,chiardacnumruldebacteriiestede
104/ml,putemluadeciziasrepetmuroculturaiarizolareaaceleiaibacteriipoateindica
prezenaITU.Pedealtparte,izolareaapeste104unitiformatoare/mlncazulstafilococilorsau
levuriloresteluatnconsiderareiarprezenanurinaListeriamonocytogeneslafemeile
nsrcinatesauprezenanurinaSalmonellatyphisuntsemnificativeindiferentdenumrulUFC/
ml.
Pentruasubliniancodatimportanaetapeiderecoltareitransportaurineiamintimfaptul
curinareprezintunfoartebunmediudeculturpentrumajoritateabacteriilorcarepotcontamina
p.p.iaroprobdeurincareareiniial(nmomentulrecoltrii)103bacterii/ml,dup2orela
temperaturacamereivaconine105bacterii/ml.
ClasificareaITUsepoatefacedupmaimultecriterii.ITUjoaseincludcistitadardupunii
autoriiuretrita,prostatitaiepididimita.ITUnalteincludpielonefritaacut,necrozapapilar
(complicaieapielonefriteiacutesaucarepoateapreanabsenainfeciei),abcesulrenalsau
pielonefritacronic(dupuniiautori).Invaziatractuluiurinarpoateavealocpecale
ascendent,limfaticsauhematogen.
ExistoseriedefactoricarefavorizeazapariiaITU,dintrecareamintim:obstruciilecareduc
lastazurinar(adenomsaucarcinomdeprostat,tumoridevecintate,stricturiuretralesauale
coluluivezical,compresiuneuretralntimpulsarcinii,corpistrini,calculiurinari,cateterizare
urinaretc),refluxulvezicoureteral,alifactorifuncionali.
Agenietiologici
Microorganismelemaifrecventimplicatenproducereauneiinfeciiatractuluiurinarsunt
nordinedescresctoareE.coli,Klebsiellapneumoniae,Klebsiellaoxytoca,Enterobacter
cloacae,Enterobacteraerogenes,Pseudomonasaeruginosa,Proteusmirabilis,Proteus
vulgaris,Citrobacterfreundii,Citrobacterdiversus,Enterococcusfaecalis,stafilococii
coagulaznegativi.Adenovirusurilepotdeterminacistitehemoragicelacopii.Mairar,nordine
descresctoareetiologiaITUpoatefireprezentatdeStaphylococcusaureus,Acinetobacter
calcoaceticus,streptococibhemoliticidingrupeleA,B,CsauG,Morganellamorgani,Providencia
rettgeri,P.stuartii,Serratialiquefaciens,Serratiamarcescens,Candidaalbicans,Salmonella
spp.,Corynebacteriumurealyticum.CuprivirelaE.coli,celmaifrecventmicroorganismimplicatn
ITU,existanumitegrupuriuropatogene,spreex.O1,O2,O7etc.nmodcert,existdiferenen
ceeacepriveteetiologiaITUpegrupedevrst,nfunciedesexsaulapacieniispitalizain
comparaiecupacieniipentrucaresesolicituroculturanambulatoriu.
Realizareauroculturii
Recoltareaitransportulprodusuluipatologic
nITUsepotrecoltaurin,snge(ex.npielonefritaacut)sauchiariLCR.ncontinuarevom
discutadesprerecoltareaitransportulurinei.
nafarderecomandrilegeneralemenionateanterio,trebuiessubliniemuneleaspecte
particulare

ncazulncarenusepoaterecoltaprimaurindediminea,trebuieateptatpentru
recoltare34oredupmiciune
Recoltareaserealizeazdupsplareacuapispunaorganelorgenitaleia
perineuluiexistrecomandrispecificepentrusexulfemininimasculinirespectivpentrucopilul
mic
Estepreferabilcarecoltareasaiblocntrunspaiucorespunztornapropierede
laboratoriarpersonalulmedicaltrebuiesexpliceieventualsasisterecoltarea
Estecontraindicatrecoltareaurineiladomiciliu(potexistaeroriderecoltareiar
prelungireatimpuluidetransportvaconducelamultiplicareabacteriilor,aacumammenionatmai
sus)duprecoltare,ncazulncareurinanuesteprelucratimediat(sauncelmult30deminute
duprecoltare),p.p.trebuiemeninutlatemperaturafrigideruluiiartransportultrebuierealizatla
+4C
Deregulserecolteazurinadinmijloculjetuluidupsplareaorganelorgenitaleia
perineului,prinmiciuneseelimincirca100mlurin(ndeprtndastfeloparteagermenilordela
niveluluretreidistale)iabiaapoiserecolteaz2050ml(preferabil50ml)urinnrecipientulsteril,
dupcaremiciuneacontinu
Existialtetehniciderecoltare,neinvazivesauinvazive(puncieiaspiraie
suprapubian,cateterizareuretral,curiscurilerespective).
Examinareamacroscopicimicroscopicaurinei
Realizminiialexamenulmacroscopicp.p.poatefitulbure,opalescent,poateprezentaun
anumitmirosetc.nvedereaexamenuluimicroscopicalurineiomogenizmurinaprinrsturnare,
de23ori.Punemopicturdeurinpelam,acoperimcuolameliexaminmcumicroscopul
cuimersie(saumicroscopulcucontrastdefaz).ncazulncareidentificmprezenaacelpuin
uneibacteriipefiecarecmp,nfiecaredintre5cmpurisuccesive,putemcuobunaproximaie
sconsidermcavemobacteriuriede105bacterii/ml.Alternativsepoateutilizapreparatul
coloratGram.Estenecesarsapreciemconcomitentiprezenapiuriei(peste10leucocite/
mm3deurin).Aufostimaginateoseriedealtetestepentruapreciereapiurieiibacteriuriei,spre
exemplutestulGriess(detectareanitriilornurin),detectareaesterazeileucocitare,teste
bioluminiscenteetc.Piuriaibacteriuriatrebuieinterpretatencontextulclinic.
Examenulsedimentuluiurinarpermitevizualizareadeceluleepiteliale(malpighiene,vezicale,
uretraleetc),celulesanguine(leucocite,hematii),cilindriiurinari(hialini,leucocitari,eritrocitari,
epiteliali,granularietc),cristaleurinare,levuri(eventualnmugurite,cublastoconidii),Trichomonas
vaginalisetcexamenulsedimentuluiurinarestefoarteutilitrebuierealizatdefiecaredat.
Cultivareaurinei

nmodobinuit,pentrucultivareputemutiliza34mediidiferite.Dinmotivedeeconomieam
puteansmnaojumtatedeplaccumediuMacConkey(frcristalviolet),ojumtatedeplac
cugelozsngeicteunsectordeplaccumediuagarteluritirespectivagarcueozini
albastrudemetilen(EMB)ncazulncareexamenulmicroscopicalurineiestepozitiv.Dac
examenulmicroscopicestenegativ,nsmnmdoarojumtatedeplacPetricumediu
MacConkey.
OvariantdensmnarepentrumediileMacConkeyigelozsngeesteutilizareauneianse
calibratede1lcuajutorulcreiaprelevmurinprinatingereasuprafeeip.p.dupomogenizare.
nsmnminiialunstriupecentruljumtiideplacdupcarentindemp.p.nstriuriparalele,

perpendicularepeprimulstriu.nfinalfrsterilizmansantindemp.pnstriuriparalelenunghide
45fadestriurileprecedente.Dupoincubarede1824orela3537C,nmulindcu1000
numruldeUFCdezvoltate,putemapreciacareestenumruldebacterii/mldeurin.
Frecventesteutilizatnsmnareaurineidupdiluare(ex.1/100)cuajutorulpipeteigradate.
nsmnmdeex.peoplaccumediuMacConkey0,1mldeurindiluat1/100,incubmn
condiiilecunoscuteidupapariiacoloniilorcalculmnumruldebacterii/mlprinnmulirea
numruluideUFCinversuldiluieinversulvolumuluinsmnat.
Interpretarearezultateloruroculturiicantitative
Izolareauneibacteriicuoconcentraiedepeste105/mldeurinconfirmITUlabrbat
saulafemeie(cusimptomecaracteristice)ncazulcpacientaesteasimtomatic,certificareaITU
estedatdeizolareaaceleaibacteriinadouaprobdeurin
Izolareaadoubacteriidiferite,fiecarecuoconcentraiedepeste105/mldeurin,
impunerepetarearecoltriiinsmnriincazulncarerezultatulestesimilaripentruadoua
probdeurinesteposibilITUmixt(ncazcontraresteofoarteprobabilcontaminare)
Izolareaatreibacteriidiferite,chiarincazulncareconcentraiilepentrufiecaren
partedepesc105/mldeurin,impunerepetareaanalizeiextremdeprobabilestevorbadeo
contaminaresaudeunp.p.recoltatcumaimulttimpnurmimeninutlatemperaturacamereii
nulafrigider
Izolareauneibacteriicuoconcentraiede104/mldeurinconducelarecomandarea
repetriianalizei(existiuneleexcepii,ncarerezultatulesteconsideratpozitiv,spreex.pentru
levurinconcentraiedepeste104/mldeurin,stafilocociicoagulazonegativinconcentraiede
peste5104/mldeurinetc)
LipsamultiplicriibacterienesaudezvoltareadeUFCnconcentraiede103/mldeurin
reprezintouroculturnegativ
Dorimssubliniemdinnoucrezultatulmicrobiologictrebuiesfieanalizatncontextul
clinicicorelatcurezultatulmicroscopieiiarncazulanumitorbacterii(ex.Salmonellatyphi)
rezultatulestepozitivindiferentdeconcentraiaUFC/mldeurin.
ncazuluneiuroculturipozitive,bacteriaizolatseidentific(pebazacaracterelor
morfotinctoriale,decultur,biochimice,altecaractere)isetesteazsensibilitatealaantibioticei
chimioterapice,deregulprinmetodadifuzimetric(vezicapitolul14).
ExistoseriedencercripentruoptimizareadiagnosticuluiITU,inclusivabordareaunortehnici
miniaturizate.DintreacesteavomamintimetodaimaginatnInstitutuldeboliinfecioaseMatei
Bal(prof.FlorinCruntu),metodaUrilineetc.Spreexempluultimadintremetodeutilizeazo
lamdeplasticacoperitpeambelepricumediudecultur,protejatntruntubdeplastic.
Principiu:
MediulCLEDdepeprimapartealamei(CysteineLactoseElectrolyteDeficientagar)are
culoareverdeipermitenumrareacoloniilorbacteriene(indirectanumruluideUFC/mlurin)i
identificareaprezumtiv.ConcentraiasczutdeelectroliiinhibinvaziaProteusspp.Mediul
MacConkeyfrcristalvioletdepeadouapartealameiareculoarerozinhibmajoritatea
bacteriilorgrampozitive.
Tehnicadelucru:
Deurubmcapaculiextragemlamafrsatingemsuprafaaagarului.Imersmlaman
probadeurinrecoltat(dacurinanuestesuficientcantitativ,repartizmp.p.pecele2priale

lameicuajutoruluneipipetePasteur).ndeprtmexcesuldeurinpeohrtiedefiltrucurati
punemlalocndispozitivlamansmnat.Incubmnpoziiedreapt,timpde1824orela
3537C.Adouazicitimrezultatele,comparndnumruldecoloniiaprutepemediulCLEDcu
modelulproductorului.
Interpretare:
ncazulncarenumruldeUFC/mlestemaimarede105realizmtestesuplimentarepentru
identificareirespectivantibiograma.Alteelementeprivindinterpretareaaufostprezentateanterior.
Controldecalitate:
Pregtimosuspensiebacteriannsoluiesalinfiziologicsterilcu105106bacteriipe
mldinfiecaredintretulpiniledereferin
StaphylococcusaureusATCC25923
EscherichiacoliATCC25922
ProteusmirabilisATCC12453
InoculmsuspensiileastfelpregtitepesuprafaamediilordeculturUriline,iardup
1824oreincubarecitimiinterpretmrezultatele
Staphylococcusaureus:aparcoloniidoarpemediulCLED.Fermentarealactozeieste
indicatdeprezenaculoriigalbenenjurulcoloniilordezvoltate.
Escherichiacoli:aparcoloniigalbenepeCLEDicoloniirozpeMacConkey.
Proteusmirabilis:aparcoloniitranslucideiarculoareaCLEDestealbastrpeMac
Conkeyaparcoloniiincolore.

30. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Shigella

GenulShigellaartrebuisfacparteconformstudiilordebiologiemoleculardintrungencare
includeiEscherichiaspp.,genulEscherichiaShigella.Cutoateacestea,nmomentulactualeste
acceptattratareaseparatacelordougenurinrudite.Pebazastructuriiantigeniceaufost
difereniatepatrusubgrupe(AD)respectivShigelladysenteriae(13serotipuri),S.flexneri(6
serotipuricaresepotsubdivizansubserotipuri),S.boydii(18serotipuri)iS.sonnei(1serotipcu
2fazesauvariante,respectivRiS).
GenulShigellaincludebaciligramnegativi,imobili,cudimensiunide0,50,8/23,
nesporulai,necapsulai,aerobifacultativanaerobi,glucozopozitivifrproduceredegazoxidazo
negativi,lactozonegativi.Subgrupelesepotdifereniadeex.pebazafermentriimanitei(subgrupul
Aestemanitonegativ).CrescpemediisimpleiproduccoloniidetipSn24deore.
MicroorganismeledingenulShigellasuntpatogeneprinmultiplicareiinvazivitate.ncazul
serotipului1dinsubgrupulA(Sh.shiga)esteimplicatitoxigeneza.Exotoxinashigaafecteaz

attintestinulctisistemulnervoscentral(putndconducelaapariiaunorfenomenede
meningismsauchiarpierdereastriidecontien,pnlacom).Fadeanimaleledeexperien
areefectletal.
InfeciilecuShigellaspp.suntderegullimitatelanivelultractuluiintestinal.Dizenteriapoate
apreadupingestiaanumai10100debacterii,careselocalizeaz,semultipliciinvadeaz
epiteliulintestinal(potapreaabceselanivelulpereteluiintestinuluigros,lanivelulileonului
terminal,abcesecareevolueazspreulceraie,necroz,hemoragie).Dupoperioaddeincubaie
decirca25zile,ncazuluneidizenteriitipiceaparbruscfebr,diareeapoas,dureriabdominale
intense.Ulteriorseeliminscaunefoartenumeroase(2040/zi),nefecaloide,cumucus,puroii
snge,nsoitedecoliciintestinaleitenesmerectale.Stareageneralsenrutete(maigravn
cazuluneiinfeciiprodusedeSh.shiga).nlipsatratamentuluicorespunztor(nspecialnlipsa
reechilibrriihidroelectrolitice)evoluiapoatefifatal.nafardedizenterie,Shigellaspp.poate
produceitoxiinfeciialimentaredetipinfecios.
Diagnosticuldelaboratormicrobiologicestebacteriologic(direct)itrebuiefcutdeurgen
datoritimplicaiilorposibilealeuneidizenterii.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.Produsulpatologicestereprezentatdemateriifecale,darsarputea
recoltailichiddevrstur.Lanceputulboliiestemaiuorsizolmbacteriapatogen,
deoareceiniialseelimincirca103109bacterii/gramdemateriifecale.Dinpunctde
vederemacroscopicmateriilefecalepotfincantitatemic,coninndmucus,puroiisnge
(uneorisngelenuestevizibilmacroscopic).Recomandmrecoltareaicultivareanspeciala
fragmentelorcareconinmucus,puroiisnge.Transportultrebuiesfierealizatrapid,dareste
preferabilnsmnarealapatulbolnavului.Dacaceastrecomandarenupoatefiurmat,
recomandmfolosireaunuimediudetransport,mediulbacteriostaticCaryBlair.Oaltvariantde
recoltareposibil(deex.ncazuriatipicesaupentrucontrolulstriidepurttor)estereprezentat
deutilizareasondeiNelatonintrodusncolonulsigmoid(1015cmlacopilsau1520cmlaadult)
aspirndp.p.cuajutoruluneiseringi.Materiilefecalesevorsuspensionansoluieclorurosodic
saunmediulCaryBlair.Existiposibilitateadearecoltap.p.atuncicndsepresupune
diagnosticuldizenterieibacterieneprinrectosigmoidoscopie.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaunuipreparat
proasptntrelamilamel(nuefectumfrotiuridinacesttipdeprodusulpatologic,ncazuln
caresuspectmoinfeciecuShigellaspp.).Preparatulseexamineazlamicroscopulopticcu
obiectivul40.EvideniereaanumeroasePMNvinensprijinulstabiliriimecanismuluiboliidiareice,
iarunprocentdepeste75%PMNnsoitdeprezenahematiilorestesugestivpentrudizenteria
bacterian.Anumiiautorirecomandutilizareaimunofluoresceneidirecteexamenulestecostisitor
nspecialdatoritexisteneinumeroaselorserotipuri.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Sevorutilizamediiledeculturrecomandate,prezentatencapitolul28.Shigellasedezvolt
pemediileslabimoderatselectiveinusemultiplicpemediilenaltselective.ncazulapariiei
unorcoloniilactozonegative,repicm35coloniiizolatepemediilemultitest(TSI,MIU,MILF)sau
procedmconformprotocoluluidelucrupentrugaleriiletipAPI.

4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligramnegativicucudimensiunide0,50,8m/23m
Caracteredecultur:
produccoloniidetipS,lactozonegative,semitransparente,cudiametrulde12mmpe
MacConkeysauADCL(S.sonneipoateproducecoloniicaredevinrozdeoarecepoatefermenta
tardiv,lactoza)iroiipeXLD
Caracterebiochimice:
sepotinvestigaanalizndrezultateleobinutepemediilemultitestsaupegaleriileAPI
caracterelebiochimicesuntutileindifereniereasubgrupelorgenului
microorganismeledingenulShigellasuntglucozopozitive,frproduceredegaz,
lactozonegative,nuproducH2S,imobile,ureaznegative,indolnegative
potfinecesaretestebiochimicesuplimentare
Caractereantigenice:
seutilizeazseruriimunepolivalentepentrusubgrupsauseruriimunespecificedetip,
prinreaciideaglutinarepelam,conformunorschemestabilite
ncazulncareotulpinizolatareuncomportamentbiochimicsugestivdarreaciade
aglutinareestenegativ,trebuiesrealizmosuspensie(destuldedens)dinrespectivatulpin,
pecareomeninemtimpde3060minutelaotemperaturde100Ciulteriorrepetmreaciade
aglutinare
Testareasensibilitiilabacteriofagi(lizotipia)sepoateutilizanstudiiepidemiologice
saunscopdecercetare,fiindrezervatlaboratoarelordereferinschemeledelizotipieaufost
utilizatenspecialpentruS.flexneri2aiS.sonnei
Altecaractere/testeutilizatenidentificarelanivelulcentrelordereferin:
testebiochimicesuplimentare(biotipie)
bacteriocinotipie(ex.pentruS.sonnei)
rezistotipie(tipareprinpaternulrezisteneilaantibiotice),utilnscopepidemiologic
testulSereny(producereacheratoconjunctiviteilacobai)repicmcoloniasuspectpe
geloznclinatiardup8ore,introducemoansdecultursubpleoapaunuicobaidup1224
orencazuluneireaciipozitiveaparecongestieconjunctival,secreiepurulentiopacifierea
corneeicuaccentuareaacestorfenomeneievoluiesprecheratoconjunctivit(testulpoatefipozitiv
incazulunortulpinideEscherichiacoli)
tehnicialebiologieimoleculare(stabilireaprofiluluiplasmidic,ribotipia,sondeleADN
etc).
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapice)serealizeazprin
metodadifuzimetricstandardizat,nspecialnscopulsupravegheriiapariieiunortulpinirezistente
lamedicamenteleantimicrobienedaripentrustabilireatratamentuluiantimicrobiancorespunztor.

31. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Salmonella.

Hemocultura.
ExistmaimulteclasificripentrumicroorganismelecareaparingenuluiSalmonella.Una
dintreclasificrileacceptate(Ewing)grupeazgenuln3speciiianumeS.typhi(patogendoar
pentruom),S.choleraesuis(patogenlaporc,ocazionalilaom)iS.enterica(produceboli
diareicelaomilaanimal,cuaproximativ2000deserotipuri).Estencbinecunoscutschemade
identificareserologic(KaufmannWhite)caresubmpartegenulSalmonellangrupecareinclud
foartemultespecii,spreex.grupulA(S.paratyphiA),grupulB(S.paratyphiB,S.typhimurium),
grupulC(S.paratyphiC),grupulD(S.typhi,S.enteritidis)etc.
GenulSalmonellaincludebaciligramnegativi,cudimensiunide24mm/0,40,6mm,mobili
cuciliperitrichi(cuexcepiaS.galinarumpullorum),necapsulai,nesporulai,glucozofermentativi
(cuproduceredegazcuexcepiaS.typhi),nufermenteazlactoza,producH2S(existiexcepii)
iutilizeazcitratulcaunicsursdecarbon.
InfeciileprodusedemicroorganismelecareaparingenuluiSalmonellasepotmprin
salmonelozeminore(enterocolite,toxiinfeciialimentare)isalmonelozemajore(febratifoid,febre
enterale).
Enterocolita(gastroenterita,toxiinfeciaalimentardetipinfecios)aparedupingestiaa
5

10 108salmonele.Febratifoid(febraenteral)poateapreadupingerareaacirca103salmonele.
Febratifoidesteoboalgravcarenlipsatratamentuluipoateconduceladeces.S.typhitrece
priniprintreceluleleepitelialedelanivelulanseiileocecale,semultiplicactivnsubmucoasi
estefagocitatdemacrofageundesupravieuieteicontinussemultiplice.Microorganismele
trecapoinganglioniimezenterici,ncanalultoraciciconduclaapariiauneiprimebacteriemii
urmatdeinvadareaaltororganeiformaiunilimfatice.Multiplicareaimportant,nspeciallanivelul
organelorcusistemreticuloendotelialbinereprezentat(ficat,splin),esteurmatdeoadoua
bacteriemiemasivideeliminareaprinbili/sauurin.Lasfritulprimeisptmnide
boal,S.typhiseelimindinfoliculiiintestinaliiprinbilnmateriilefecale,excreia
prelungindusemulttimpnconvalescen.Potapreaangiocolit,colecistitbolnavulpoatedeveni
purttor(ex.lanivelulveziculeibiliare)dupvindecare.
ncazulafeciunilorstrictdigestive,diagnosticuldelaboratormicrobiologicestebacteriologic,
direct.ncazulafeciunilorsistemice,diagnosticulpoatefibacteriologici/sauserologic.
Diagnosticuldelaboratormicrobiologicninfeciileculocalizaredigestiv
Diagnosticulbacteriologic(direct)cuprindeetapelecunoscute.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute.Produsulpatologicestereprezentatdeobiceidemateriilefecaledaramputearecolta
ilichiddevrstur,unanumitalimentincriminatetc.Materiilefecaleseexamineazmacroscopic
isetrimitctrelaboratoraacumammenionatncapitolul28.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareapreparatuluinativ,ntre
lamilamelputemremarcaprezenagranulocitelormononucleare.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,careurmeazafiidentificat(vezicapitolele
910i28).Pentruizolareaiidentificareaagentuluipatogenp.p.estensmnatpeunmediu

lichiddembogire(bulionselenit)ipedoumediigelozateselectivodifereniale(MacConkeyi
ADCL/XLD).Dupoincubarede1824orela3537C,pemediilesolidepotapreacolonii
bacterienesuspecte(lactozonegative)dincareobinemculturapurnscopulidentificriiistabilirii
sensibilitiilaantibiotice.Pentruacreteansadepistriiagentuluicauzal,culturade1824oren
bulionselenitvafitrecutpemediilesolide(peMacConkeyiADCL/XLD).
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicizolatnculturpursevarealizapebaza
maimultorcaractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligramnegativi.
Caracteredecultur:
ProduccoloniidetipS,lactozonegative,cudiametrulde13mm(necoloratei
semitransparentepeMacConkeynecoloratedarcucentrulnegrupeADCLroii,
semitransparente,cucentrulnegrupeXLD).ncazulncareafostfolositimediulWilsonBlair
(foarteselectiv,carenuincludelactoz)coloniilesuntnegre,cumarginineregulateihaloumetalic.
Caracterebiochimiceidemobilitate:
Fermenteazglucoza(cuproduceredegaz),suntlactozonegativi,producH2S,(exisi
excepii)iutilizeazcitratulcaunicsursdecarbon.
Nuproducindol,suntureazpozitivi,mobili,produclizindecarboxilazi
ornitindecarboxilazetc.
Pentrupunereanevidenacaracterelorbiochimicesepotfolosimediilemultitest
convenionale(TSI,MIU,MILF)saugaleriilemultitest(API10S,API20E,APIRapid20Esaualte
variante).
Caractereantigenice:
seutilizeazseruriimunespecifice,nschemecarefolosesciniialAcantiOiulterior,
nfunciederezultatulobinut,AcantiH,prinreaciideaglutinarepelamconformschemei
KauffmannWhite(existtabeleischemecaretrebuierespectate)
ncazulncareotulpinizolatareuncomportamentbiochimicsugestivdarreaciade
aglutinareestenegativ,trebuiesrealizmosuspensie(destuldedens)dinrespectivatulpin,
pecareomeninemtimpde3060minutelaotemperaturde100Ciulteriorrepetmreaciade
aglutinare.
Altetestecepotfirealizatenscopulidentificriigermenilor,deregullanivelulcentrului
dereferin
schemesuplimentarepentrutestareacaracterelorantigenice(serotipie)
testesuplimentarebiochimice(biotipie)
testeprivindsensibilitatealabacteriofagispecifici(lizotipie)
testedebiologiemolecular(determinareaprofiluluiplasmidic,ribotipia,studiulunor
secvenespecificelanivelcromozomialetc).
5.Antibiogramaesterecomandatderegulnumaincazulpacienilorcuvrsteextremesau
pentrusupraveghereaapariieifenomenuluiderezistenlaantibioticeichimioterapicese
realizeazprinmetodedifuzimetrice.
Diagnosticuldelaboratormicrobiologicnfebreleenteraleestebacteriologici/sauserologic.
Diagnosticuldefinitiv(cert)estereprezentatdeizolareaiidentificareaS.typhinp.p.
Diagnosticulbacteriologic,directrespectetapelecunoscutealeacestuitipdediagnostic,
cuanumiteparticulariti.Multedinaspecteaufostprezentateanterior.

Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.Produsulpatologicestereprezentatnprimasptmndesnge,ulterior
putemrecoltamateriifecale,urin,lichidbiliar,mduvhematogenetc.Hemoculturavafi
discutatnceleceurmeaz.ncazulncarep.p.estereprezentatdemateriifecale,respectm
ceeaceamprezentatmaisus,cuoseriedesublinieri:
SuntnstudiumetodedeidentificareaprezeneiS.typhi,directnp.p.(ex.materiifecale)prin
latexaglutinareiPCR
ColoniiledeS.typhipotsnuprezintecentruldeculoareneagrpeADCLsauXLD.
S.typhingeneralnuproducegazdinglucoziarH2Spoatefiprodusncantitimiciitardiv
nufolosetecitratulcaunicsursdecarboniesteornitindecarboxilaznegativ.
PentruidentificareaAgOpoatefinecesaroinactivareprealabil(termic,folosindo
substanacidsauaceton).PentruidentificareaAgHpoatefinecesarinactivareacu
formaldehid.PrezenaAgVipoatecreaproblemenceeacepriveteidentificareaAgO.
Deilizotipiaesteometodlaborioas,demulteorisedovedetesuperioardinpunctulde
vederealrezultatelorobinutencomparaieinclusivcumetodealebiologieimoleculare.
Testareasensibilitiilaantibioticeichimioterapiceesterecomandatpentrufiecaretulpin
deS.typhiizolat.
Diagnosticulserologic
Uniiautoriconsidercniciunuldintretesteleutilizabilendiagnosticulserologicnueste
suficientdespecific,sensibilirapid.Diagnosticulserologicserealizeazrespectndprincipiile
generalealeacestuitipdediagnostic.ReaciaWidalafostimaginatnfinalulsecoluluialIXleai
standardizatlamijloculsecoluluiXX.SerodiagnosticulWidal,folosindculturiviideS.typhinuse
maipracticastzi.Ceamaicunoscutmetodutilizabilactualesteanalizasericcantitativ,
realizattotprintehnicaaglutinriintuburi.Utilizmseriiseparatedetuburi,cteoseriepentru
fiecareAgcunoscutfolosit,seruldecercetatfiinddiluatcorespunztorprotocoluluidelucru.Atunci
cndpresupunemofebrtifoidsauparatifoidutilizmspreex.6seriidetuburi,cuAgcunoscute
iinactivate,pentruaevideniaAcantiO(TOS.typhi,AOS.paratyphiA,BOS.paratyphiB),
iantiH(dS.typhi,aS.paratyphiA,bS.paratyphiB).Duprealizareadiluiilor,incubm
tuburilepentruAcantiOtimpde1820orela52Curmatde10minutelatemperaturacamereiiar
tuburilepentruAcantiHtimpde2orela52Curmatde10minutelatemperaturacamereiicitim
reacia.Untitrude1/250ncazulAcantiOirespectiv1/2500ncazulAcantiHarputeafi
sugestiv.Cretereade4oriatitrului,la2determinrisuccesive(intervalde710zile)poate
confirmasuspiciuneadediagnostic.Lapersoanelevaccinatenantecedentediagnosticulserologic
nupoatefiutilizat(rezultatelenusuntinterpretabile)iestestrictnecesarizolareanculturiaS.
typhi.
Attncazulbolnavilor,darmaialesncazulconvalesceniloripurttorilorafostrecomandat
reaciadeaglutinarentuburipentruidentificareaprezeneiititruluiAcantiVi.Seconsidercun
titrudepeste1/40poateficonsideratsugestiv.

Hemocultura
Arborelecirculatorestenmodnormalsteril.
Bacteriemia/fungemiareprezintprezenatranzitorieideregulintermitentabacteriilor/

fungilorntorentulcirculator.Obacteriemie/fungemiesepoatensoidecretereatemperaturiii/
saufrisonprecumidealtesemnesausimptoame.Dintresituaiilecarepotconducelaapariia
uneibacteriemiiputemaminti:realizareauneiextraciidentare,periajulmaienergicaldinilor
folosindoperiuneadecvat(preadur)precumimulteactemedicalesaumedicochirurgicale
invaziverealizateladiferitenivelurianatomice(cateterismeetc).
Bacteriemia/fungemiansoescinfeciilegeneralizatecubacterii/fungi.Existomare
varietatedemicroorganismecapabilesproducinfeciigeneralizate(bacteriiaerobeianaerobe,
fungi,virusuri,parazii).Trebuiensmenionatc,destuldefrecvent,ohemoculturpozitivnu
indicdefaptagentuletiologicalinfecieiciocontaminaresurvenitpeparcursuldiagnosticului
microbiologic.Dintreageniicontaminanintlniimaifrecventputemaminti:Staphylococcus
epidermidis,S.hominis,Micrococcusluteus,Corynebacteriumspp.,Brevibacterium
epidermidis,Propionebacteriumacnes,Acinetobactercalcoaceticus,streptocociinonhemolitici
etc.Esteimportantutilizareanoiunilordemicrobiologiecliniccaretrebuiefoartebine
cunoscutedectremediculmicrobiologncolaborarecurestulmembrilorechipeicomplexe,pentru
stabilireanmodcorespunztoraetiologieiinfecioaseiatitudiniideurmat.
Avndnvederecelemenionatemaisus,dorimssubliniemialtedoudintreaspectele
importantedecaretrebuiesseinseamanrealizareauneihemoculturi:
momentulrecoltriisngelui
volumuldesngerecoltat.
Cuprivirelaprimulaspectestedereinutcntotdeaunaserecomandrecoltareaaminim2
probedesnge,nscelmaifrecventsuntrecoltate3probedesnge,nmomentediferite,pe
parcursula24deore.nanumitecazuri(deex.nendocarditabacteriansubacut),bacteriemia
fiindcontinu,suntsuficiente2hemoculturi/24ore.Pedealtparte,ncazulncarepresupunem
cagentuletiologicpoatefacepartedinfloranormalvomrecoltaminim3probepentru
hemocultur.nceleceurmeazoslistmctevadinexempleleposibile,nceeaceprivete
momentulrecoltriisngeluiinumruldehemoculturirecomandate:
endocarditacutrecoltm3hemoculturidin3sediidiferite,peparcursula12ore
endocarditsubacutrecoltmminim2hemoculturidin2sediidiferite(veziimai
sus)launintervalmaimarede15minute
sepsisrecoltm3hemoculturidinsediidiferite,peparcursula10minute(idealarfi,
pentrutoatecazurilemenionate,srecoltmsngelecucirca30minutenaintedevrfulfebril,
acestmomentarcoincidecuceamaimareconcentraiedemicroorganismentorentulcirculator,
daracestmomentestedificildeprecizat)
febrdeoriginenecunoscutrecoltm23hemoculturi,dinsediidiferite,launinterval
detimpde4560minuteetc.
nceeaceprivetealdoileaaspect,avndnvederefaptulcderegulncursulbacteriemiilor/
fungemiilornumruldeunitiformatoaredecolonii/mldesngeestedestulderedus,trebuies
recoltmunvolumdesngeadecvat(pentrufiecarehemoculturnparte).Astfel,vomrecoltacirca
20mldesngencazuladulilori15mldesngencazulnounscuilor,sugariloricopiilormici
(deoarecenumruldeUFC/mlpoatefidecirca3orimaimarelaacestegrupedevrst).
Atuncicndestenecesarrealizareauneihemoculturi(defaptaunuisetdehemoculturi)
estenecesarsnegndimilaurmtoareleaspecte:
celmaiadeseahemoculturiletrebuierealizatenurgen

sngele,fiindunprodusbiologicnmodnormalsteril,vomizolacelmaiadeseaun
singuragentinfecios(darexistiposibilitateaunorasocieri)
dintreageniietiologicicusemnificaieclinicizolaimaifrecventprinhemocultur,n
ordinedescrescndafrecveneiputemaminti:Staphylococcusaureus,diferite
enterobacterii,Pseudomonasaeruginosa,streptococihemolitici(inclusivpneumococul),
enterococi,Haemophilusinfluenzae(tipb),Neisseriameningitidis,germenianaerobi(Bacteroides
fragilis,Fusobacteriumspp.,Peptostreptococcusspp.,Clostridiumperfringensetc),stafilococi
coagulazonegativi,Listeriamonocytogenes,Leptospiraspp.,Brucellaspp.,Candida
spp.,Cryptococcusneoformans,Histoplasmacapsulatum,Aspergillusspp.etc
existanumiteparticularitinceeacepriveteetiologiainfeciilorgeneralizatenfuncie
devrstapacienilor,poartadeintrareposibil,focarulinfeciosprincipal,stareadinpunctulde
vederealaprrii(specificeinespecifice)agazdeirespectiveetc
nsngeexistoseriedefactoriantimicrobieniacroraciunetrebuiepectposibil
diminuat(aceastaserealizeazpedeoparteprindiluarea1/10asngeluicultivatnraportcu
volumulmediuluideculturdarexistioseriedesubstanechimicecarepotfiutilizatenacelai
scop,spreex.polianetolsulfonatuldesodiuareattefectanticoagulantctideneutralizarea
unorfactoriantimicrobieni)
mediiledeculturicondiiiledeincubaretrebuiealesnaafelnctspermit
dezvoltareaageniloretiologiciprobabili
asigurareacalitiimediilordeculturvaincludeattcontrolulsterilitiifiecruilotcti
controluleficieneiacestora(prininoculareamediilorcutulpinidereferin,decolecie).
Pentrurecoltareasngeluitrebuierespectatecondiiileimpuserecoltriioricruitipdep.p.
Subliniemnsimportanarespectriicustricteearegulilordeprelevareasepticirespectiva
recoltriisngeluinaintedeadministrareaoricruitratamentantimicrobian.Orictdeurgentarfi
consideratctrebuienceputterapiasepoatetemporizapnserealizeazrecoltareasngelui
pentruhemocultur,ceeacenastfeldesituaiiarnecesitaunintervaldetimpdenumai1015
minute.
Esterecomandatcarecoltareasfieurmatdensmnareadirectpemediuldecultur,la
patulbolnavului,spreexempluntrunsistemnchisderecoltareainsmnareaacumafost
realizatdeProf.Dr.MateiBal.Utilizareasistemelorcuvacuumesterelativrecentnaranoastr
nSUAafostutilizatncnaintede1974.Altfelspus,recoltareaartrebuisfieurmatimediatde
nsmnare,framaiexistaoetapdetransport.Dacaceastrecomandarenupoatefiurmat
amputeafolosiuntubcareconine1mldintrosoluie0,250,50%depolianetolsulfonatdesodiun
carerealizmrecoltareasngeluiipecareltransmitemimediatctrelaboratorpentru
nsmnareapemediidecultur.
Mediiledecultursuntmediilichide,mbogite(ex.bulioninfuziedecordcreierpentruaerobi
irespectivbulionColumbiacucisteinpentruanaerobi)condiionatenflacoanecorespunztoare
cantitiidesngepecaretrebuiesorecoltm.Pentrubacteriilecumultiplicarelenteste
recomandatutilizareamediuluibifazic(mediusolidificatnpant,deex.gelozchocolatplus
mediullichidbuliontripticazdinsoia).nfinalulprezentriivomdiscutaidespresistemele
automatepentruhemocultur.
ncazulncarerecoltareaafostrealizatsimultanndouflacoanepentruhemocultur,unul
vafiincubatnaerobioziarcellaltnanaerobioz.Pentruunelemicroorganisme(ex.Brucella

spp.)estenecesarincubareanatmosferde510%CO2.Temperaturadeincubareestecelmai
frecvent3537C.
Examinareaflacoanelordehemoculturserealizeazde2ori/zinprimele3zile,apoizilnic
pentruminim7zile(nanumitesituaiiflacoanelepotfiincubatetimpdemaimultesptmni).
Examinareaofacemmacroscopicurmrindoseriedeaspectecarearputeassemnifice
dezvoltareamicrobian(tulburareamediuluimaimultsaumaipuinuniform,apariiauneipeliculela
suprafaamediuluilichid,apariiaunuidepozitpestratuldehematiidinzonadeclivaflaconului,
apariiaunorbuledegaz,apariiaunorcoloniipemediulsolidncazulncareamutilizatmediul
bifazicetc).Dinpunctdevederemicroscopic,manipulndasepticflacoaneledehemoculturputem
realizafrotiuripecarelecolormGram.
ncazulapariieiunormodificriprecumceledescrisemaisusdariatuncicndacesteanu
apar(trecerioarbe)vomrealizasubcultivripemediidecultursolide(deex.gelozchocolat).
Prinutilizareamediuluibifazicsubcultivareaserealizeazuorifrrisculcontaminrii,prin
simplanclinareaaflaconuluiiscldareapanteicumediuldecultursolid).
Dupobinereaculturiipuretrecemlaidentificareaagentuluietiologicistabilireasensibilitiila
antibioticeichimioterapiceaacestuia.nvedereatestriisensibilitiilaantibioticeputemutiliza
cainoculbulionuldehemocultur,darrezultateleobinutevorficonfirmateprinantibiograma
difuzimetricstandardizatporninddelacoloniileizolate(culturapur).
nmomentuldefaexistnumeroasesistemeautomateutilizatepentruhemocultur(BacT/
Alert,Isolator,BACTEC,SeptiChek,Vitaletc).
Spreexemplu,sistemulBacT/ALERTreprezintuninstrumentautomatpentrudetectarea
multiplicriimicrobiene,capabilsincubeze,sagiteismonitorizezecontinuu(pebazde
reflectometrie)aerobianaerobprelevatedelapacienisuspecidebacteriemie/fungemie.
Instrumentulprezint:
unmoduldecontrolcareincludeunecrancepermiteoperatoruluisintervin(prinatingerea
cudegetul)nalegereaopiunilordencrcareidescrcareaflacoanelorintroduse,
unmoduldeincubarecepoateprelucra120pnla240flacoanensmnate,
posibilitatearealizriiautomateacontroluluidecalitatealcelulelorncaresuntintroduse
flacoanele(nefiindnecesarinterveniaoperatorului).
Intervaluloptimdefuncionarealinstrumentuluiestesituatntre+5oi45oC.Flacoanele
introduseninstrumentsuntrecunoscutedeacestacuajutorulunuicititordecoddebare(codulse
aflpepartealateralaflaconului).Flacoaneleiinstrumentulsuntprodusenconformitatecu
standardeleinternaionaledecalitatenvigoare(ISO9001,FDAiQualitySystemRegulations).
Flacoaneledeculturconinmediudeculturlichid(bulion),carepermitmultiplicareamajoritii
speciilorbacterieneprecumiafungilor.FiecareflaconconineunsenzorLES(senzoremulsie
lichid),cedetecteazproducereadeCO2,caindicatoralmultiplicriimicrobiene.
Existmaimultetipurideflacoane,pentruincubarenaerobioz,anaerobioz,pentruaduli
saucopii,pentrupacienilacarenusauadministratmedicamenteantimicrobieneanteriorrecoltrii
(variantastrictrecomandat)sauchiaripentrupacieniaflaisubtratamentantibiotic.
Citireaseefectueazautomatlafiecare10minute,rezultndomediede144citiri/zi,prin
reflectometriecuafiajpemonitor,semnalluminossausonor.ncazulunuirezultatpozitiv,flaconul
respectivesteanalizatprinmetodealemicrobiologieiclasicesaumodernenvedereaidentificrii
specieimicrobieneistabiliriisensibilitiilaantibioticeichimioterapice.

Interpretarearezultatelorhemoculturii
Avndnvederepedeoparteposibilitateacontaminriiuneihemoculturiiarpedealtparte
cretereaincideneihemoculturilorpozitivecusemnificaieclinicncaresuntimplicate
microorganismecondiionatpatogene,carefacpartedinfloramicrobiannormal,rezultatele
trebuieinterpretatecuresponsabilitateinechip.
Existargumentebacteriologice(deex.izolareaaceluiaimicroorganismdinmaimulte
flacoanedehemocultur)iclinicecarepermitmedicilorinfecionitincolaborarecumedicii
microbiologisstabileascetiologiamicrobian(uneoripolimicrobian)auneiinfeciigeneralizate.
Fiindvorbadeinfeciicupronosticadesearezervat,laboratorularedatoriascomunice
rezultatelepemsurceacesteasuntobinute(deex.aspectulmicroscopicpefrotiulcoloratGram
duptulburareabulionuluidecultur,aspectemicroscopiceiculturaleobservatedupdezvoltarea
unorcolonii,rezultateleantibiogrameinestandardizateetc,saufaptulcduposptmnde
observaienusepoateevideniamultiplicareamicrobian)pentrucaspoatfiluatecelemai
adecvatemsuri,nfavoareavindecriipacientuluirespectiv.

32. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Klebsiella
MicroorganismeledingenulKlebsiellasuntenterobacteriiimobile,nesporulate,caracterizate
printrointensactivitatemetabolicasuprahidrailordecarbonpecareihidrolizeazcuproducere
deaciziiuneoridegaz.Glucozaestedegradatcuproduceredegaz.Existmaimultespeciide
exempluKlebsiellapneumoniae,K.ozaenae,K.rhinoscleromatisiK.oxytoca.Klebsiella
pneumoniaeestespeciaprincipalagenuluiiincludebaciligramnegativi,capsulai(capsula
poateaveadimensiunide23orimaimaridectdiametrulbacteriei).
Consideratiniialcaagentetiologicalpneumoniilor,sadoveditcnumai13%dinpneumonii
(grave,necroticeihemoragice,nspeciallapacienicuunsistemdeapraredeficitar)sunt
produsedeKlebsiellapneumoniae.Microorganismul,condiionatpatogen,poatefiimplicatntro
marevarietatedeboliprecumtoxiinfeciialimentaredetipinfecios,infeciialetractuluirespirator
superior,infeciiurinareetc.DincencemaifrecventKlebsiellapneumoniaeesteizolatninfecii
nosocomiale(despital),veziicapitolul23.
Cutoatecnuesteceamaireprezentativentitateclinic,vomdiscutancontinuare
diagnosticulpneumonieiprodusedeKlebsiellapneumoniae.Diagnosticulcompletincludeelemente
clinice,paracliniceidelaboratordiagnosticulbacteriologicfiindutilnstabilireaetiologieii
tratamentuluiantibioticcorespunztor.
Diagnosticuldelaboratormicrobiologicestebacteriologic,direct,incluzndurmtoareleetape.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei

antisepsieetc).ninfeciileprodusedeKlebsiellapneumoniaesepotrecoltamateriifecale,urin,
snge,puroietc.ncontinuarevomdiscutacazulncarep.p.estereprezentatdesput(vezii
capitolul6).Dinpunctdevederemacroscopic,sputapoateaveaunaspectmucoid,deculoare
rounchis,njeleudecoacze.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersieisenoteaz
prezenacelulelordelanivelalveolar(ex.macrofagealveolare),prezenacelulelor
inflamatorii(ex.leucocite)iprezenabacililorgramnegativi,dedimensiunirelativ
mari,ncapsulai(nconjuraideocapsulvoluminoas).Examinareamicroscopictrebuies
demonstrezecalitateaprodusuluipatologicisrealizezeoidentificareprezumtiva
microorganismuluiimplicat(veziicapitolul52).ncoloraiacualbastrudemetilen,capsulaapare
caunhalounjurulklebsielelor.Utilizndanticorpianticapsulari,sepoaterealizaoidentificare
rapidinclusivdirect,peprodusulpatologic,prinreaciadeumflareacapsulei(vezicapitolul12,
punctul12.14).
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Klebsiellapneumoniaesepoatedezvoltapemediideculturobinuiten1824ore,la3537C.
Sepreferutilizareaunormediideculturslabselective(ex.MacConkey).Klebsiella
pneumoniaenusedezvoltpemediinaltselectiveiesteparialinhibatpecelemoderat
selective.PemediilesolideKlebsiellapneumoniaeformeazcoloniilactozopozitive,mari,
detipMbombate,cremoase,npicturdemiere,caredauaspectuldecurgerepesuprafaa
mediuluidecultur,cutendindeconfluare.Sepoaterealizaiinocularealaanimaledelaborator
sensibile(oarecelealb),veziicapitolul11.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligramnegativi,cudimensiunimari,capsulai,
capsulafiindvoluminoas,dispuinlanuriscurte,perechisauizolai.nmediuldeculturpot
pierdecapsula.
Caracteredecultur:Produccoloniilactozopozitive,detipM,mari(23mmla24de
ore,peste4mmla48ore),bombate,vscoase,cremoase,npicturdemiere,caredau
aspectuldecurgerepesuprafaamediuluidecultur,cutendinlaconfluare.
Caracterebiochimice:
Klebsiellaesteunmicroorganismlactozopozitiv,ceeacesepoateevideniancdin
etapadeizolarepemediulMacConkey.
Altecaracterebiochimicesestudiazduprepicareaunorcoloniipemediimultitest
(TSI,MIU),pemediulSimmonssaunsistememultitestcomercialedetipAPI.
Klebsiellapneumoniaeesteglucozopozitiv(cuproduceredegaz),lactozopozitiv,nu
produceH2S,imobil,ureazpozitiv,indolnegativ,caresedezvoltfolosindcitratulcaunic
sursdecarbon.
Produceacetoin,caracterevideniatprinreaciaVogesProskauer.
Caractereantigenice:
SeutilizeazseruricuanticorpicunoscuipentruidentificareatulpinilordeKlebsiella,

printehnicideaglutinare,coaglutinaresaulatexaglutinare.Existpeste80detipurideantigenK
laKlebsiellapneumoniae.Acestereaciisepotpracticanlaboratoaredereferin.
Caracteredepatogenitate:Sepoateutilizainocularealaoarecelealb(vezicapitolul
11).
Altecaractere/testeutilizatenidentificarecaresepotutiliza(ncentredereferin):
Testareasensibilitiilabacteriofagi(uneledintreschemeaufoststabilitenInstitutul
Cantacuzino)
Grupareanfunciederezistenalaantibioticeichimioterapice
Caracteretestateprinmetodealebiologieimoleculare(stabilireaspectruluiplasmidic,
cuidentificareaplasmidelorimplicatenvirulenetc).
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)esteobligatorieiserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetrice.Determinarea
CMIiCMBpoatefinecesar(vezicapitolul14).

33. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Proteus

GenulProteusesteformatdingermenipleomorfi(deundeinumelegenului),foartemobili,
gramnegativi,aerobifacultativanaerobi,carenufermenteazlactoza,producureaz,produc
fenilalanindezaminaz,suntnesporulai,necapsulai.Exist2speciiprincipale,Proteus
mirabilisiProteusvulgaris.
DeregulmicroorganismeledingenulProteussuntimplicatepatogenicnafeciuniceaparn
afaratractuluidigestiv(facpartedinfloramicrobianintestinal).Existtotuiitoxiinfecii
alimentaredetipinfecioscuProteusspp.nmodfrecventsediscutdespreinfeciiletractuluiurinar
(ITU),darsuntposibileialteinfecii(tegumentare,genitale,cualtelocalizrincursulunei
bacteriemiilapacienicustatusimundeficitarsaunspital/infeciinosocomiale).Vomdiscutan
continuarediagnosticuldelaboratoralITU.
Diagnosticuldelaboratormicrobiologicestebacteriologic,direct,incluzndurmtoareleetape.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).ninfeciileprodusedeProteusspp.sepotrecoltaurin,puroi,diferiteexsudate
purulente,materiifecale,lichiddevrstur,alimente,sngeetc.ncontinuarevomdiscutacazuln
carep.p.estereprezentatdeurin(veziicapitolul29).Dinpunctdevederemacroscopic,urinaar
puteafitulbure,purulent.Transportulurineitrebuierealizatrapid,nmaxim30minute,iardac

aceastrecomandarenupoatefindeplinit,p.p.trebuietransportatlarece(+4C).
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaunuipreparatproaspt
ntrelamilamel,dinsedimentulrezultatdupcentrifugareaurinei.Examenulmicroscopical
urineiestefoarteimportantpentrucesteuorderealizat,esteieftinipermiteobservareaunor
elementecareorienteazdiagnosticul.Examinareamicroscopicaurineiarputeaconducela
economiiimportante(detimp,reactiviimateriale,mediidecultur)veziicapitolul29.Proteus
spp.prezintunmarenumrdeciliperitrichicareconfermobilitateacaracteristic(existi
tulpiniaciliate).SepoaterealizaiunfrotiucoloratGramdinurinaomogenizat.Germeniiau
unaccentuatpolimorfismpefrotiuputnduseobservabacili,cocobacili,formefilamentoasede
pnla30m.Suntnecapsulaiinesporulai.Prezenaacelpuin1leucocit/cmpmicroscopic
laexaminareacuobiectivuldeimersiesugereazpiuria,carentruncontextclinicsugestivajutla
definireaITU.ncazulncaredinurinaomogenizatprelevmcuansacalibratde0,01mluriniar
nfrotiulrezultatidentificmcelpuin12bacterii/cmp(nmicroscopiaopticcuimersie)acest
rezultatsugereazprezenaa105bacterii(unitiformatoaredecolonii)/mlirespectivinfecia
tractuluiurinar.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologictrebuierealizatnaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Crescpemediisimpleinclusivpemediipeptonatelichidecudegajareaunuimiroscaracteristic
deputrefacie.SuportmarivariaiidetemperaturidepH.Estenecesarrealizareauroculturii
cantitativeidemonstrareaprezeneiapeste105bacterii/mldeurin.Pemediilesimpleuzuale,pe
agarsnge,peAABTLetc,nusepotobinecoloniiizolate,fiindcunoscutfenomenulde
invazie(veziicapitolul11).AcestaspectsugereazprezenaProteusspp.nprodusulpatologic.
Fenomenulpoatefiinhibatdacserealizeaznsmnareap.p.pemediiselectivodifereniale
(ex.MacConkeysauADCL).PeacestemediiProteusspp.producecoloniilactozonegative,detip
S.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligramnegativi,cuunaccentuatpolimorfism(bacili,
cocobacili,formefilamentoasedepnla30m),necapsulaiinesporulai.
Caracteredecultur:
Fenomenuldeinvazie:reprezintuncaracterdeidentificarepreliminarpentruProteus
spp.,obacteriefoartemobildacnsmnmotulpincareaparineacestuigenlaperiferiaunei
plciPetricumediusimplu(agarizat2%),delaloculnsmnriiculturasedezvoltnvaluri
concentrice(sentindeinaproapenaproape)petoatsuprafaamediului
Peanumitemediiselective,invaziaesteinhibatisepotobinecoloniiizolate
(adugmlamediuldeculturacizisausruribiliare,tiosulfatdesodiuetc)acestecolonii
suntlactozonegativeidetipS
Fenomenullinieidedemarcaie,reprezintuncaracterutilnstudiiepidemiologice,n
cazulncaretulpinileimplicateaparingenuluiProteusdacpeoplaccumediusolidcultivm2
tulpinidiferite,n2puncteopuse,tulpinilesevordezvoltainvadndpnlaunpunctnapropierea
linieidentlnire,undesevacreaoliniededemarcaientrecele2tulpini(distande12
milimetri)dactulpinilenusuntdiferitevaavealoccretereanvalurifrdemarcaiecu
dezvoltareauneipnzedeculturcontinue

Fenomenuldecrare,reprezintovariantdeizolarenculturpurauneitulpini
deProteuscultivareaunuiproduspatologicnlichiduldecondensalunuitubcugeloznclinat
incubatnpoziieverticalvaconduce(ncazulncarenp.p.existotulpindeProteusspp.)la
obinerean24oreauneiculturipuredeProteus,caresevadezvoltanvalurisuprapusepnla
parteasuperioaramediuluidecultur.
Caracterebiochimice:
Proteusspp.includemicroorganismelactozonegative.
Altecaracterebiochimicesestudiazduprepicareaunorcoloniipemediimultitest
(TSI,MIU),pemediulSimmonssaunsistememultitestcomercialeProteusspp.esteglucozo
pozitiv(uneoricuproduceredegaz),lactozonegativ,produceH2S,mobil,ureazpozitiv,sepoate
dezvoltafolosindcitratulcaunicsursdecarbon.
Proteusspp.producefenilalanindezaminaz.
ProteusmirabilisesteindolnegativiornitindecarboxilazpozitivntimpceProteus
vulgarisesteindolpozitiviornitindecarboxilaznegativ.
Caractereantigenice:
Seutilizeazseruricuanticorpicunoscui(antiOiantiH)pentruidentificareatulpinilor
deProteus,printehnicideaglutinare(lanivelullaboratoarelordereferin).
Altecaractere/testeutilizatenidentificare(ncentredereferin):
Testareasensibilitiilabacteriofagi
Grupareanfunciederezistenalaantibioticeichimioterapice.
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)esteobligatorieiserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetrice.Determinarea
CMIiCMBpoatefinecesar(vezicapitolul14).

34. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Yersinia
GenulYersiniainclude11speciidintrecareYersiniapestis(cauzaciumei),Y.
pseudotuberculosisiY.enterocoliticaproducinfeciiumane.Suntenterobacteriidedimensiuni
mici,cuaspectdebacilisaucocobaciligramnegativi,careprezintcoloraiebipolar.nprodusul
patologicprezintunpleomorfismaccentuat.Nuformeazspori,potprezentastructuridetip
capsular.Suntaerobifacultativanaerobi,catalazopozitivi,oxidazonegativi.Crescpemediisimple
iproduccoloniidetipSn2448deoreultimele2speciisuntmobilela2230C.

ncontinuarevomdiscutadespreyersiniozelecupoartdeintraredigestiv,carepotaveadrept
agenietiologiciY.enterocoliticasauY.pseudotuberculosis.Y.enterocoliticareprezintocauz
destuldefrecventaBDA,celpuindindateleprezentatenliteraturadespecialitateinternaional.
Poatedeterminainfeciicucaracterinvazivlocalizatepeileonulterminal,cuprindereaganglionilor
mezentericiiapariiaunordurerinfosailiacdreaptceeacepoateconducelapunereaeronata
diagnosticuluideapendicitacut,maialeslacopii.ncazuladulilorsadoveditimplicareaY.
enterocoliticandeclanareaunorartritereactivesauaeritemuluinodoscudificultinceeace
privetediagnosticuldiferenial.Lapacieniicuvariategradedeimunodepresieboalaentericpoate
fiurmatdemanifestriextraintestinale,uneorincadruluneiinfeciigeneralizate.Bolileproduse
deY.pseudotuberculosisauoincidenmaireduspotapreaenteritesubacute,adenopatie
mezentericetc.
Diagnosticuldelaboratornyersiniozelecupoartdeintraredigestivestebacteriologic,direct.
ncazulmanifestrilorextraintestinaleesteindicatdiagnosticulserologic.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.Produsulpatologicpoatefireprezentatdemateriifecale,ganglionirecoltai
intraoperator,sngeetc.ncontinuarevomdiscutadiagnosticuluneiBDA.Sepoatefolosimediul
detransportCaryBlair.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaunuipreparat
proasptntrelamilamel(nuseefectueazfrotiuridinmateriilefecale).Preparatulse
examineazlamicroscopulopticcuobiectivul40.Vomevideniaprezenacelulelorinflamatorii.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).nvedereaizolriiY.pseudotuberculosissauY.enterocoliticasepotutilizadiferitemedii
selectiveclasice(MacConkey,ADCL)saumediulCIN(cefsulodin,irgasan,novobiocin),eventual
cuincubarelatemperaturacamerei(2030C).Existdiferitemetodedembogire,deex.
inoculareap.p.ntamponfosfatsalincuincubarela4Ctimpde13sptmniurmatdetreceri
pemediilemenionatemaisus.Coloniilesuspecteserepicpemediilemultitestclasicesaupe
galeriiAPI.
4.Identificareasevarealizapebazamaimultorcaractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocobacilisaubaciligramnegativicucudimensiunide
0,53m/12m,posibilpleomorfi
Caracteredecultur:
ProduccoloniidetipS,de11,5mm(23mmdup48ore)
PemediulCINcoloniilesuntsemitransparente,cumarginiclareicentrulrou
Caracterebiochimice:
sepotinvestigafolosindmediilemultitestclasicesaugaleriileAPI
fermenteazglucozafrproduceredegaz,nufermenteazlactoza,nuproducH2S
suntimobilela37Cimobilela22C,nuproducindol,producureaz
Caractereantigenice:
seutilizeazserurispecificeantiYersinia,prinreaciideaglutinarepelam
Testareasensibilitiilabacteriofagi(lizotipia)sepoateutilizanstudiiepidemiologice
saunscopdecercetare,fiindrezervatlaboratoarelordereferin

Altecaractere/testeutilizatenidentificarelanivelulcentrelordereferin:
testebiochimicesuplimentare
reaciideaglutinarecualteseruriimune,pentrutipurimaipuinfrecventntlnite
bacteriocinotipia
tehnicialebiologieimoleculare(digestiaendonucleazicaADNuluicromozomial,
electroforezancmppulsatil,ribotipia,PCRetc).
5.Esterecomandatrealizareaantibiogramei(verificareasensibilitiilaantibioticei
chimioterapice),prinmetodadifuzimetricstandardizat.Sepotutilizaisistemeautomate,de
exemplutrusaautomatATBG5,cucitireiinterpretaredup1824oredeincubare(21
antibiotice),pentrubaciliGramnegativi.

Diagnosticulserologic
Diagnosticulserologicesteutilndeterminareaetiologieiartritelorreactive,eritemuluinodos
sauncazulaltormanifestriextraintestinale.Anticorpiiaparlacirca47ziledeladebutulbolii,
atingvaloareamaximdupcirca14zileipersistctevaluni.Sepotpracticadiferitetehnici,de
ex.reaciadeaglutinarentuburi.

Seconsidercvaloareatitruluisemnificativeste1/160.Esterecomandattestareaserurilor
pereche,ndinamic.
Trebuiesfieluatnconsiderareposibilitateaapariiaunorreaciincruciate,datorit
existeneiunorantigeneasemntoarelamicroorganismedingenurileBrucellasauSalmonella.

35. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Pseudomonas
GenulPseudomonasfacepartedinfamiliaPseudomonodaceaeiincludemaimulte
specii.Pseudomonasaeruginosa(bacilulpiocianic,bacilulpuroiuluialbastru)reprezintspecia
ceamaiimportantagenului,relativfrecventimplicatninfeciilapersoanecureactivitatesczut,
precumininfeciinosocomiale(infeciidespital).Acetigermenisuntbaciligramnegativi
aerobi,oxidazopozitivi,nesporulai,cudimensiunide15m/0,51m,mobilidatoritprezeneiunuia
saumaimultorflageli(polari).
Datoritcapacitiideadaptareisupravieuirendiferitemedii,precumidatoritfactorilorde

virulenpecareideine,Pseudomonasaeruginosapoateproduceinfeciifoartevariate,dela
infeciitegumentaresuperficialepnlastridesepsiscuevoluiefulminant.Prezena
piocianiculuiarputeafisemnalatdeculoareaalbastrverzuieapansamentelor.Lapersoanelecu
reactivitatenormal,infeciilesuntdeobiceilocalizate(foliculite,otite,infeciioculareetc).Lanivel
dermic,procesulinfeciospoateaveaioevoluiegrav,cuapariiadeveziculecaresespargise
refacpeobaznecroticprocesulpoateprogresanprofunzime(ecthymagangrenosum).
Lapersoanelespitalizate,cureactivitatediminuatisupuseunormanevremedicochirurgicale
invazive(intubaii,cateterizrietc)precumilapersoanelecuarsuri,Pseudomonas
aeruginosapoateproduceinfeciilocalizate,darpotenialuldiseminriiiapariieiunorcomplicaii
grave(bacteriemie,osteomielit,meningit,endocardit,sepsis)estefoarteimportant.nlipsa
tratamentuluiadecvat(dificildatoritrezisteneilaantibiotice),evoluiaprocesuluiinfeciospoatefi
gravsaudeosebitdegrav.UnfenotipparticularalspecieiPseudomonasaeruginosaproduceo
infeciepulmonarcroniclapacieniicufibrozchistic(mucoviscidoz).Dintreentitileclinice
menionatemaisus,dinpunctdevederealdiagnosticuluidelaboratorvomdiscutainfeciile
supurativealetegumentelorimucoaselor.
Diagnosticuldelaboratorestenumaibacteriologic,direct,cuurmtoareleetape.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).ncontinuarevomdiscutacazulncarep.p.estereprezentatdepuroi(vezii
capitolul6).Puroiultrebuieexaminatmacroscopic,deoarecepoateaveaunaspectsugestiv
(culoarealbastrsaugalbenverzuifluorescent).
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersieisenoteaz
prezenacelulelordelaniveltegumentar(eventualmodificatefadenormal),prezenacelulelor
inflamatorii(ex.leucocite,piocite)iprezenabacililorgramnegativicucudimensiunide
15m/0,51m,dispuinlanuriscurte,perechi,izolai.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Pseudomonasaeruginosasepoatedezvoltapemediideculturobinuiten1824ore,la542
C,cudezvoltareoptimla3037C.Sepreferutilizareaunormediideculturselective.Uneori
cultivareaserealizeazpeagarsnge.PemediilesolidePseudomonas
aeruginosaformeazcoloniidetipScaresepigmenteaznmodspecific,nsoinduse
depigmentareamediului(albastrusaugalbenverdefluorescent).Demenionatcpotaprea
colonii(detipS)cuaspectediferite,dndimpresiaprezeneiconcomitenteaunorbacteriidiferite.
Culturapoateaveaunmirosaromat,caalflorilordeteisauiasomie.Peagarsngeproduce
hemoliz.nmediilichide,Pseudomonasaeruginosatulburmediulnsntimpducelaapariiaunei
membraneaderent,cenuie,lasuprafaaacestuia.Dup1824deore,submembransepoate
evideniaprezenapigmentuluiprodus.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligramnegativicucudimensiunide15m/0,51m,

dispuinlanuriscurte,perechi,izolai,relativpolimorfi.nculturimaivechipotapreadiferiteforme
(filamentoase,cocoide).Mobilitateasepoateexaminapepreparatulproaspt,ntrelamilamel.
Caracteredecultur:
ProduccoloniidetipScaresepigmenteaznmodspecific,nsoinduse
depigmentareamediului(albastrusaugalbenverdefluorescent).Potapreacolonii(detipS)cu
aspectediferite,dndimpresiaprezeneiconcomitenteaunorbacteriidiferite.Coloniilepotprezenta
osuprafairidescent,culuciumetaliciplajedeautoliz,degajndoaromptrunztoare
particular.Pentrustimulareasintezeipigmenilorsepoatefolosirepicarepemediispeciale,KingF
(stimuleazproducereadefluorescein)iKingP(stimuleazproducereadepiocianin).
Culturapoateaveaunmirosaromat,caalflorilordeteisauiasomie.
Pemediilecusngeproduchemoliz.
Multiplicareala42Cpoatefiutilpentruidentificare.
Caracterebiochimice:
Producediferiipigmeni,dintrecaremaiimportanisuntpiocianina(albastru)i
pioverdinasaufluoresceina(galbenverzuifluorescent).
Esteungermencatalazopozitivcaredegradeazoxidativglucozainufermenteaz
lactoza(attcoloanactipantamediuluiTSIauculoareroie).
Sepoaterealizatestuldeoxidarefermentareaglucozei.
Bacilulpiocianicesteoxidazopozitiv(vezicapitolul12).
Pentrustudiimaiaprofundate,nmomentulactualanumitelaboratoareutilizeaz
sistemecomercialecareverificnacelaitimpnumeroasecaracterebiochimicepermindnu
numaincadrareangenulPseudomonas,dariidentificareaprecisaspeciei(deexempluRapid
NTF,cuidentificareaspeciein448deore).
Caracteredepatogenitate:
Sepotstudiananumitesituaii(inoculm4oarecicucantitifixedegermenicultivai
pegeloznclinat2%iurmrimsupravieuireaacestoratimpdepatruzile).
Altetestecepotfistudiatenscopulidentificriigermenilor:
Testareacaracterelorantigenice
Testareasensibilitiilabacteriofagi(lizotipia)irespectivpiocinopiasepotutilizan
studiiepidemiologicesaunscopdecercetare,fiindrezervatelaboratoarelordereferin
Testedebiologiemolecular(sondenucleotidice,analizaADNduputilizareade
endonucleazederestricie,PCR).
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)esteobligatorieiserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetrice.Pseudomonas
aeruginosareprezintunuldintremicroorganismelecarepotcreadificultideosebitdemarin
alegereatratamentuluietiologic,datoritrezisteneilafoartemultedintreantibioticeleuzuale.Cu
toatecanumiiautoriindicfaptulcabacilulpiocianicarfisensibillamezlocilin,ticarcilin,
ticarcilinacidclavulanic,piperacilin,piperacilintazobactam,imipenem,aztreonam,anumite
aminoglicozide,fluorochinolonesaucefalosporinedegeneraiaaIIIa,considermcprincipiul
caretrebuiereinutestecnoriceinfeciecuPseudomonasaeruginosa(atuncicndsadovedit
cacestmicroorganismesteagentuletiologicalinfeciei)antibiogramaesteobligatorie.ncazul
unorinfeciigraveantibiogramadifuzimetrictrebuiesfiensoitdealtedeterminri(vezicapitolul

14).

36. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Vibrio
GenulVibrioincludemaimultespeciidintrecare12suntpotenialpatogenepentruom.
Vibrioniisuntbaciligramnegativi,drepisauuorncurbai,foartemobili,necapsulai,nesporulai.
SpeciaprincipalestereprezentatdeVibriocholerae(vibrionulholeric),aerobfacultativanaerob,
oxidazopozitiv,rezistentlapHalcalinisruribiliare.Vibrionulholericproduceoenterotoxini
determinholera.
ncondiiinaturalevibrionulholericestepatogennumaipentruom.Dozainfectantestede
1081010microorganisme.Holeranuesteoboalinvaziv.Germeniinuajungntorentulcirculatorci
rmncantonailanivelultractuluiintestinalcolonizeazmargineanperieacelulelorepiteliale,se
multiplicielibereaztoxinaholeric.Dupoperioaddeincubaiede14zileaparbruscgrea,
vrsturi,diareeabundent(2030litri/zi)icrampeabdominale.Scauneleapoase,riziforme(ap
deorez)coninmucus,celuleepitelialeiunmarenumrdevibrioni.Existopierdererapidde
fluideielectroliicareduceladeshidratare,colapscirculatorianurie.Ratamortalitiinlipsa
tratamentuluieste2550%.
Diagnosticuldelaboratornholerestebacteriologic,direct,trebuierealizatctmairapid
posibil(urgendinpunctdevedereepidemiologic)iincludeetapelecunoscute.
Diagnosticulunuicazgravdeholeresteuorderealizat,nspecialncontextuluneiepidemii.
Cutoateacestea,cazurileuoaresaucazurileizolatesuntrelativdificildedifereniatdealteboli
diareiceacute.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.Produsulpatologicestereprezentatcelmaifrecventdemateriifecale,dar
sarputearecoltailichiddevrstur.Dinpunctdevederemacroscopicmateriilefecalesunt
apoase,riziforme(apdeorez),deculoareverzuie,cumirosfetid,coninflocoanedemucus.
Transportultrebuiesfierealizatrapid,nmaxim13ore.Sepoatefolosicamediudetransport
mediulbacteriostaticCaryBlair.Mediulappeptonatalcalin(pH99,5)poatefiutilizatattn
calitatedemediudetransportctidemediudembogire.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaunuipreparat
proasptntrelamilamel(nuseefectueazfrotiuridinprodusulpatologic).Preparatulse
examineazlamicroscopulopticcuobiectivul40.Esenialestefaptulcnuseevideniaz
prezenaleucocitelor.Vibrioniisuntnnumrmareiprezintmicriactive,derostogoliresau
micrihaotice.Suplimentar,p.p.arputeafitratatcuAcspecificidacmobilitateaestestopat,
seconfirmdiagnosticul.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Abordareadiagnosticuluideholerserealizeaznmoddifereniat,respectivprezumtiv(la

nivelulunuilaboratorperiferic)idecertitudine(lanivelullaboratoruluidereferin).Este
recomandatutilizareaattaunuimediumoderatselectiv(ex.BileSaltsAgar/BSA)ctiaunui
mediunaltselectiv(ex.ThiosulphateCitrateBilesaltsSucrose/TCBS).
LundnconsideraresituaiancareseridicsuspiciuneauneiinfeciicuV.choleraese
recomandnsmnareap.p.,directsauduptransportulnmediulCaryBlair,nappeptonat
alcalin(APA).Dupincubarepentruoduratde68orela3537,facemtrecereapemediul
selectiv(TCBSi/sauBSA)lund2ansedelasuprafaaAPA(nacestinterval,lasuprafaaAPA
poatesaparunvl,respectivculturadevibrioni).
Examenulmicroscopicalvlului(preparatproaspt,ntrelamilamel:vibrionifoartemobili,
cumicriderostogoliresauhaotice)precumiutilizareaunoranticorpispecifici(reacie
antigenanticorp)potgrbidiagnosticul.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligramnegativicucudimensiunide13m/0,50,8m
Caracteredecultur:
ProduccoloniidetipS,galbene,mari,cudiametrulde24mm(peTCBS)
PemediulBSA,V.choleraeproducecoloniidetipSrotunde,strlucitoare,transparente
capicturilederou(spredeosebiredecoloniiledeE.colicaresuntmate).
Caracterebiochimice:
V.choleraeesteoxidazopozitiv(vezicapitolul12)
TestuluvieideADNsepoateutilizapentruadifereniatulpinicaresunt
oxidazopozitiveiformeazcoloniicuaspectasemntor(V.choleraeiAeromonasspp.)n
acestscopsuspensionmocoloniesuspectntropicturdesoluie0,5%dezoxicolatdesodiu,
peolamdemicroscop.ncazulncareestevorbadeocoloniedevibrioni,acetiasuntlizaii
elibereazADNulcarepoatefitrascuansacaouvi
altetestebiochimice,prinmetodeclasicesauutilizndgaleriilemanualesauautomate
(ex.API20E,ID32E),seefectueazlanivelulunuilaboratordenivelsuperiorsaulanivelul
centruluinaionaldereferintestelebiochimicepotdifereniabiotipulclasicdebiotipulElTor(se
apreciazcV.choleraeO:139esteunmutantalbiotipuluiElTor)
Caractereantigenice:
SeutilizeazserantiholericO:1isepracticreaciadeaglutinarepelam.Lanivelul
centruluidereferinseconfirmreaciapozitiviseidentificserotipul(Ogawa,Inabasau
Hikojima)iarncazuluneireaciinegativeserealizeazoreaciedeaglutinarepelamfolosindser
antiholericO:139
Testareasensibilitiilabacteriofagi(lizotipia)sepoateutilizanstudiiepidemiologice
saunscopdecercetare,fiindrezervatlaboratoarelordereferin.Existsistemedelizotipare
caredefinescpeste140delizotipuridiferite.
Altecaractere/testeutilizatenidentificarelanivelulcentrelordereferin:
testulsensibilitiilaagentulvibriostaticcuO/129(10gi50g)
determinareatoxinogenezeitulpinilordeV.choleraeprinreaciaVETRPLA(latex
aglutinarepasivinversat)
tehnicidetipELISApentruidentificareaunorstructuricaracteristiceV.cholerae
tehnicialebiologieimoleculare(ribotipie,PCRetc).

5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapice)serealizeazprin
metodadifuzimetricstandardizat,nspecialnscopulsupravegheriiapariieiunortulpinirezistente
lamedicamenteleantimicrobiene.

37. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Haemophilus
MicroorganismeledingenulHaemophilussuntcocobacilipolimorfi,imobili,nesporulai,gram
negativi,aerobi,facultativanaerobi.Suntgermenipretenioipentruasedezvoltaaunevoiede
prezenafactorilordecretereprezeninsnge(deundeinumelegenului).Existmaimulte
specii,dintrecarecelemaicunoscutesuntHaemophilusinfluenzaeiHaemophilusducreyimulte
dintretulpiniledeH.influenzaesuntcapsulate.

Haemophilusinfluenzae
Haemophilusinfluenzaeestepatogenprinmultiplicareiinvazivitate.Microorganismulptrunde
pecalerespiratorie.Boaladebuteazcaorinofaringitacut,probabilnasocierecuoinfecieviral
lanivelultractuluirespirator.Aceastapoatefiurmatdeepiglotit,laringotraheit,otit,sinuzit,
mairardepneumoniedaridecelulitsaudemeningitacutpurulentlacopiiimiciprecolari.
Sinusurilesauurecheamediepotfiafectateprinextensielocal(sepoatenotafaptul
cHaemophilusinfluenzaetipbipneumococulsenumrprintreageniietiologicifoartecomuni
aiotiteimediibacterieneiaisinuziteloracute).Dacmicroorganismulptrundentorentul
sanguin,peaceastcalepoateinfectameningele.OcazionalinfeciacuH.influenzaepoateducela
olaringotraheitobstructivfulminantcarenecesittraheotomiesauintubarepromptacopilului
respectiv.nvedereadiscutriiexamenuluidelaboratorvomaveanvederemeningitaprodusdeH.
influenzae.
DiagnosticuldelaboratormicrobiologicninfeciilecuHaemophilusinfluenzaeeste
bacteriologic,direct,incluzndetapelecarevorfiprezentatencontinuare.
nmeningitaprodusdeH.influenzaediagnosticulesteurgent(riscdeevoluiecusechelei
/saudeces),deimportanmaximfiindrecoltareaitransportulrapidalLCRctrelaborator.Este
depreferatrealizareauneicultivrilapatulbolnavului,chiardacpentruconcentrareagermenilorar
puteafinecesarcentrifugareaLCR.AnalizacitologicibiochimicaLCResteutilnstabilirea
etiologiei.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).ninfeciileprodusedeHaemophilusinfluenzaesepotrecoltasecreiidelanivelul
tractuluirespiratorsuperiorsauinferior,secreiidinsferaORL,lichiderecoltateprinpuncie,snge,
LCRetc.ncontinuarevomdiscutacazulncarep.p.estereprezentatdeLCR(veziicapitolul6).

Aacumammaimenionat,recoltareaLCRprinpuncie(dupverificareapresiuniidinartera
centralaretineiprinexaminareafunduluideochi)trebuiefcutpectposibillapatulbolnavului,
avndladispoziietotceestenecesarpentrupregtireafrotiurilor,cultivareapediferitemediide
cultur,repartizareauneicantitideLCRpentruexamenulcitologicibiochimic(veziicapitolul
6).ncazulncarep.p.urmeazafitransportatctrelaborator,transportultrebuierealizatfr
ntrziere(laotemperaturapropiatde37C,refrigerareaestecontraindicat).H.influenzaear
puteafiizolatiprinhemocultur,cultivareasecreiilornazalesaufaringieneetc.Dinpunctde
vederemacroscopic,LCRpoateaveaaspectpurulent.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.DacLCRestefrancpurulentfrotiurilesepotexecutadirectdinp.p.,ncaz
contrarrealizminiialcentrifugareaLCR.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersie
isenoteazprezenacelulelorinflamatorii(ex.leucocite)iprezenacocobacililor
gramnegativi,fini,capsulai,dispuiseparatsaungrmeziaranjatenaceeaidirecie,uneori
dispuinlanuriscurte,situaiintrasauextraleucocitar.Datoritfaptuluicacestemicroorganisme
secoloreazrelativslabncoloraiaGramarputeafinecesarcolorareafrotiuluiderezervprintro
altmetodsau,recolorareaprelungitcufucsin.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Haemophilusinfluenzaeesteunmicroorganismfoartepretenioscarenusepoatedezvoltape
mediideculturobinuite.UneletulpinideHaemophilusinfluenzaenecesitpentruiniierea
creterii510%CO2.Estenecesarpentruincubareoatmosferumed,la3537C,ioduratde
minim2448deore.Pentrucultivaresuntnecesarifactoridecretereprecumhemina(factorX)i
factorulVcarepoatefinlocuitprinNAD,NADPsaualtecoenzime.Ambiifactoriseobindin
eritrocite,nsestenecesareliberareaconinutuluiacestoranmediu(deexempluprincldur,
sauprindigestiepeptic).FactorulVestesintetizatidestafilococulauriu,astfelcpegeloz
sngecoloniiledeHaemophilusinfluenzaesuntmainumeroaseidedimensiunimaimarin
apropiereauneiliniipecareafostnsmnatotulpinhemoliticdeStaphylococcus
aureus(fenomenuldesatelitism).ColoniilesuntdetipSsauMiatingundiametrude0.50,8mm
dup24deore,respectiv12mmla48deore,avndaspectulunorpicturideroupegeloz
chocolat.Pegelozsngecuinfuziedeinimcreieraparcoloniimici,rotunde,convexe,detipS,
carenprimele24oreprezintirizaiiputernice,caracteristice.Nuaparehemoliz.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocobaciligramnegativi,mici(11,5/0,3mm),dispui
separatsaungrmezi,uneoridispuinlanuriscurte.nmediicomplexe,la68ore,predomin
formelecocobacilare,careauicapsul.nculturilevechisecaracterizeazprinpleomorfismi
pierdereacapsulei(dificultidediagnosticdiferenialmicrobiologic).
Caracteredecultur:ProduccoloniiledetipSsauMcareatingundiametrude0.50,8
mmdup24deore,respectiv12mmla48deore,avndpegelozchocolataspectulunorpicturi
derou.Necesitprezenanmediuldeculturafactorilordecretere(XiV).FactorulVeste
sintetizatidestafilococulauriu,astfelcpegelozsngecoloniiledeHaemophilus
influenzaesuntmainumeroaseidedimensiunimaimarinapropiereauneiliniipecareafost

nsmnatotulpinhemoliticdeStaphylococcusaureus(fenomenuldesatelitism).Pe
gelozsngecuinfuziedeinimcreieraparcoloniimici,rotunde,convexe,detipS,carenprimele
24oreprezintirizaiiputernice,caracteristice.Nuaparehemoliz.
Caracterebiochimice:
Majoritateatulpinilor(70%)suntindolpozitive(transformtriptofanulnindol).
Fermenteazinconstantdiferiicarbohidraii.Pebazaunortestebiochimicespeciaa
pututfimpritnbiotipuri.
UtilizndgaleriaAPINH(manual)putemidentificaspecii
deNeisseria,HaemophilusiBranhamellacatarrhalis,nnumai4ore.
Caractereantigenice:
SeutilizeazseruricuanticorpicunoscuipentruidentificareatulpinilordeHaemophilus
influenzae,printehniciimunologice,nfunciedeAgK.Tipurile(af)sepotdifereniaprinreaciide
umflareacapsuleiideimunofluorescen.
Tulpinilecapsulate(AgK)sepotidentificanp.p.(LCRsauurindupcentrifugare)prin
contraimunoelectroforez,latexaglutinaresauELISA.
TulpinilenecapsulatesepotidentificaitipizaprinMultilocusEnzymeElectrophoresis
(MLEE).
Alteteste:existsondenucleotidiceprodusecomercialpentruidentificareaH.
influenzae.
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)estenecesariserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetrice.Este
recomandatutilizareaunuimediuspecial,respectivHaemophilustestmedium(HTM).Sepot
utilizaitruseautomatepentrutestare(ex.ATBHAEMOcucitireiinterpretaredup1824ore
saurapidATBE4cucitireiinterpretaredup45oreincubare).DeterminareaCMIiCMBpoate
finecesariserealizeazprinmetodeclasicesaucuajutorultestuluiE(vezicapitolul14).
IdentificarearspunsuluiimunfadeHaemophilusinfluenzae
IdentificareaprezeneideanticorpifadeH.influenzaearputeafiutilpentruverificarea
rspunsuluiimunnurmavaccinrii.nacestscopaufostutilizateRIAiELISA.

Haemophilusducreyi
Haemophilusducreyiestestrictpatogenpentruspeciaumanfiindagentulpatogenaluneiboli
cutransmiteresexual,ancrulmoale.nregiuneagenitalapareancrulmoale(iniialseformeaz
opapulsensibil,cueritemnjur,urmatdeapariiauneipustuleiapoiauneieroziunicare
ulcereaz),dureros,cueritemiedem.Potexistaancremultiple.Ganglioniiregionalisuntmrii,
dureroiipotsupura.Diagnosticuldiferenialsefacecusifilisul,infeciacuvirusulHerpes
simplexilimfogranulomatozavenerian.
Diagnosticuldelaboratorestenspecialmicrobiologic(bacteriologic,direct).
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).ninfeciileprodusedeHaemophilusducreyisepotrecoltasecreiidelanivelgenital
(raclareasecreieidesubmargineaancruluipuroidinabces).

2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.Putemvizualizaintrasauextracelularbacilidedimensiunimici,pleomorfi,
gramnegativi,dispuinperechisaulanuriparalele(niruri),frecventnasocierecualte
microorganisme.Sepotcolorabipolar.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).CultivareaH.ducreyiestedificil.NecesitpentrucultivarefactorulX.Sepoatedezvoltadac
produsulpatologicesterecoltatdelabazaancruluiicultivatpegelozchocolatplusvancomicin
3mg/mlla33Cnatmosferde510%CO2.
4.Identificareamicroorganismuluisevarealizapebazamaimultorcaractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbacilidedimensiunimici,pleomorfi,gramnegativi,
dispuinperechisaulanuriparalele.Sepotcolorabipolar.
Caracteredecultur:ProduccoloniiledetipSdedimensiunimici,dup37ziledela
cultivare.Pegelozsngepotproducehemoliz.
Caracterebiochimice:
Necesitprezenanmediuldeculturafactoruluidecretere(X).
Haemophilusducreyiestecatalazonegativ.
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)estenecesaripoaterealizaprinmetodedifuzimetrice.
Diagnosticuldelaboratorimunologic
ancrulmoaleestesinguraafeciuneprodusdemicroorganismedingenulHaemophilusn
carediagnosticulserologicarputeafiutil.Identificareprezeneianticorpiloresteutilinscop
epidemiologic.SepotutilizatehnicidetipELISApentruidentificareaanticorpilorIgGsauIgMcare
aparfadeH.ducreyi.
EstencndiscuieutilitateaIDRcuAgextrasedinculturdebaciliDucreyi.

38. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Bordetella
MicroorganismeledingenulBordetellasuntcocobacilipolimorfi,imobili,nesporulai,capsulai,
gramnegativi,asemntoricelordingenulHaemophilus,strictaerobi.Speciatipestereprezentat
deB.pertussisagentuletiologicaltuseiconvulsivealteexemplesuntreprezentatedeBordetella
parapertussisiBordetellabronchiseptica.Suntgermenipretenioipentruasedezvoltaaunevoie
demediideculturmbogite.

Bordetellapertussis
Bordetellapertussisestepatogennumaipentruom.Transmitereaserealizeaznspecialpe
caleaerian(picturiPflgge)ntrunaccesdetuse.Contagiozitateaestemaximnprimulstadiu

deboalilanceputulstadiuluialdoilea(detuseparoxistic).Microorganismulader,se
multiplicrapid,interfercuactivitateamucociliarnormal,aparprimelemanifestriclinicecarese
agraveaztreptat.Substaneletoxiceelaborate(inspecialtoxinapertussis/TP)auurmtoarele
aciuni:TPconducelahipoglicemie,sensibilizarelahistamin,reducereaactivitiimacrofagelor,
diminuarearspunsuluiimunumoral(sintezadeanticorpi)adenilatciclazapertussisdiminu
activitateafagocitaramacrofagelorileucocitelortoxinaletalproducenecrozelocale,citotoxina
trahealareefectcitotoxicpeceluleleciliateetc.
DiagnosticuldelaboratormicrobiologicninfeciilecuBordetellapertussisestebacteriologic,
directdiagnosticulserologicestetardiviarputeafiutilpentruundiagnosticuldiferenial
(postfactum)saudinpunctdevedereepidemiologic.
Diagnosticuletiologicestefoarteutilnprimulstadiualtuseiconvulsive(pacientulestefoarte
contagiosiarevoluiaboliipoatefiinfluenatpozitivprinadministrareadeantibiotice)
identificareaB.pertussislapersoaneleasimptomaticeirespectivlacontaciarpermiteaplicarea
unormsuripreventive.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).ninfeciileprodusedeBordetellapertussissepotrecoltasecreiidelanivelul
tractuluirespiratorsuperior(nazal,faringian)vomrealizarecoltareacuajutorultamponuluidin
alginatdecalciucareselaspeloc3060desecundepentruafavorizaadsorbiaB.
pertussis(bumbaculinhibdezvoltareamicroorganismelor)sauprinaspirareasecreiilor
traheobronice.Estedescrisimetodaplcilortuite(seexpuneoplacPetricumediul
BordetGengoulacaresaadugatantibiotic,deschis,laaproximativ20cmnfaaguriibolnavului
ntimpulaccesuluidetuse).Esterecomandatprelucrareaimediatap.p.,dacesteposibilla
patulbolnavului(microorganismulfiindfoartepuinrezistentnmediulextern).Nuexistometod
perfectpentrurecoltareap.p.atuncicndsesuspicioneazoinfeciecuB.pertussis(toate
metodeleaudiferitelimiteattdinpunctuldevederealsensibilitiisauspecificitiictidinpunct
devederepractic).
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologic,caresevorcoloracualbastrudemetilen(AM)irespectivGram.Examinm
frotiurilelamicroscopulopticcuimersieinotmprezenacelulelorinflamatorii(ex.leucocite)i
prezenacocobacililorgramnegativi,dispuiseparatsaunperechi,rareorinlanuriscurte.
DatoritfaptuluicacestemicroorganismesecoloreazrelativslabncoloraiaGramarputeafi
necesarcolorareafrotiuluiderezervprintroaltmetod(imunofluorescendirect)sau
recolorareaprelungitcufucsinsausafranin.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Bordetellapertussisesteunmicroorganismfoartepretenioscarenusepoatedezvoltapemedii
deculturobinuiteesteinhibatdeacizigrai,peroxiziorganicietc.IzolareaB.pertussisnculturi
estedificil,dareforturilesuntnecesarepentruaputeafievaluatvariaiagenetic(defaz)i
respectivpentruaputeasupravegheafenomenulapariieirezisteneilaantibioticeichimioterapice.
Bordetellapertussisnecesitpentrucultivarenicotinamidsauacidnicotiniciotemperatur
optimde3537C,cuincubaretimpde37zile,naerobioziatmosferumed.Celmai

cunoscutmediudeculturestemediulBordetGengoucareconineagar,maceratdecartof,snge,
glicerolidevineselectivprinadugaredepenicilin/meticilinsaucefalexin.Albuminele
plasmaticedinacestmediuleagaciziigraiipermitdezvoltareamicroorganismelor.Dezavantajul
principalalmediuluiclasicBordetGengouestereprezentatdetimpulscurtncarepoatefiutilizat
(17zile).
Actualmenteserecomandutilizareaunuimediufolositiniialcamediudetransport,care
includegeloznutritiv,crbuneactivatiestesuplimentatcu10%sngedecal.Acestmediu
poatefiutilizatpeparcursula12luni,iarcoloniiledeB.pertussisaparmairapid.
nvedereaizolriiprimareestenecesarmediulBordetGengousaumediulcucrbuneactivat,
nsprintrecerirepetatecoloniilesepotdezvoltaipegelozsngesauchiaripegelozsimpl.
Microorganismulsevamultiplicamairapid,coloniilevorfimaiopaceivorapreamodificri
morfologice(pleomorfism),alterristructurale,virulenafiindsczut.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocobaciligramnegativi,mici,cudimensiuneade
0,20,5m/0,52m,imobili,dispuiseparatsaunperechi,rareorinlanuriscurte,cutendinade
adevenipleomorfinurmasubcultivrilor(potapreaiformefilamentoase).Utilizndcoloraii
speciale,ncoloniilerezultatedinprimoculturisepotevideniastructurilecapsulare.Dacfrotiulse
coloreazcualbastrudetoluidin,sepunnevidengranulemetacromaticesituatebipolar.
Imunofluorescenadirectesteutilipentruidentificareamicroorganismuluidupcultivare.
Caracteredecultur:ProduccoloniidetipSsauM.Dup37ziledeincubarela37C
pemediulBordetGengousepotdezvoltacoloniidetipSmici,convexe,uortransparente,cu
strluciremetalic,foarteaderente,nconjuratedeunhaloudehemoliz(fazaI).nlumina
transmisobliccoloniileseamncupicturiledemercur.Pemediulcucrbuneactivatcoloniile
aparmairepede,sunttotdetipS,mici,convexe,negre,cusuprafaaperlat.
Caracterebiochimice:
Bordetellapertussisestehemolitic,oxidazopozitiv,ureazonegativ.
Sepotutilizatrusecomercialemanualecareidentificspeciidebaciligramnegativi(ex.
API20E,API20NE),fiindderegulnecesareitesteadiionaledeidentificare.
Caractereantigenice:
SeutilizeazseruricuanticorpicunoscuipentruidentificareatulpinilordeBordetella
pertussis,prinreaciadeaglutinarepelam.
Altetestedeidentificareutilizatenlaboratoaredereferin:Sepoateutilizaamplificarea
geneticfolosinddiferiteamorse(primeri)tehnicaPCRareobunspecificitateisensibilitate
dezavantajulprincipalfiindreprezentatdecostulridicat.
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)poatefinecesarnscopulsupravegheriiapariieifenomenuluiderezistenla
antibioticeiserealizeazprinmetodedifuzimetrice.
Diagnosticulserologicestetardiv.DinpunctdevederetehnicaufostutilizateRFC,reaciile
deaglutinare,hemaglutinareihemaglutinoinhibaresautehniciledetipELISA.Anticorpiiapardina
2asaua3asptmndeboal.Diagnosticulserologicarputeafiutilpentruundiagnosticul
diferenial(retrospectiv)saudinpunctdevedereepidemiologic.

39. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Brucella
GenulBrucellacuprinde7specii,cunumeroasebiotipuri,careinfecteazanimaleleisepot
transmitedecelemaimulteoriaccidentalomuluideex.Brucellamelitensis(capre,oi),Brucella
abortus(vaci),Brucellasuis(porci),Brucellacanis(cini).Suntcocobaciligramnegativi(demulte
oricoloraibipolar),cudimensiunide0,50,6m/0,61,5m,imobili,prezentndeventualostructur
capsular,nesporulai,localizainmodcaracteristicintracelular,aerobifacultativanaerobi,catalazo
pozitivi,relativinactivimetabolic,caresedezvoltrelativdificilpemediiledeculturintrndn
categoriabacteriilorpretenioasecunecesitinutritivecomplexe,suntbacteriifastidioase(maiales
atuncicndserealizeazcultivareainiial,dinp.p.).
Brucelelesuntmicroorganismeparazitepentruoseriedeanimalesaupentruom,capabiles
determineinfeciiacute,cronicesauinfeciiinaparente.Cronicizareadepindedecapacitateade
multiplicarencelulefagocitare.FormelecelemaigraveaparcaurmareainfecieicuBrucella
melitensis,urmatdeinfeciacuBrucellasuis,BrucellaabortusirespectivBrucellacanis.
Transmiterealaompoatefirealizatpecaledigestiv,cutanatimairarpecalerespiratorie.
Delanivelulporiideintrare,microorganismeleajunglanivelulganglionilorlimfaticiregionali,
depescaceastbarieripecaleaductuluitoracicajungnsngeiarpecalesangvinn
organelecusistemreticulohistiocitarilanivelosos.Incubaiaestenmediede23sptmni,
nsuneoripottrecectevalunintremomentulinfectriiiapariiafenomenelorclinice.Debutul
estedeobiceiinsidios,manifestatprinastenie,indispoziie,cefalee,artralgii,febrmoderat,
transpiraiiabundente.
nperioadadestaresimptomelesuntpolimorfe,brucelozafiindunadinbolileextremdegreude
recunoscutclinic.Febraondulant(carecretencursuldupamieziiiscadentimpulnopii)
nsoitdefrisoaneareovaloareistoric.nrealitate,curbafebrilareunaspectvariabil.
Transpiraiileabundentenocturne,cuunmiroscaracteristic,astenia,durerilesubdiverseforme
reprezintalteelementecarepotficomunencursulbolii.Saudescriscirca200desemneclinice
carepotaparenbruceloz.
Durataboliipoatefide34sptmni,darcelmaifrecventdepete3luni,ajungndn
formelecronicelaanidezile.nformelecronicediagnosticulsestabiletefoartedificil.
Diagnosticulbrucelozei
nprincipiu,nrealizareadiagnosticuluisepornetedelaaspectecliniceiepidemiologice,
nsdiagnosticuldelaboratoresteesenial,reprezentndunicametodcertpentruundiagnostic
pozitiv.
Diagnosticuldelaboratornbrucelozpoatefibacteriologic(direct)sauserologic.Diagnosticul

bacteriologicincludeurmtoareleetape.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialctmairapiddupdebutulboliiinaintedeiniierea
antibioterapiei.Produsulpatologicestereprezentatcelmaifrecventdesnge,darsarputea
recoltaiprinpuncieganglionar,punciemedular(ratadeizolarecrete),punciehepaticsau
splenic,sauarputeafireprezentatdeLCR,urin,bil,lapte,materialenecropticeetcnfunciede
simptomatologieistadiulbolii.ncontinuarevomdiscutasituaiancareserealizeaz
ohemoculturprinmetodeclasicesaunsistemedecultivarerapide,detipulBactAlert,Bactec
sauSeptiChek(veziicapitolul31).
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicnuaducederegulinformaiiutile
diagnosticului,nspecialdacestevorbadesnge.Sepoatefolositehnicaimunofluorescentcare
uneoriducelarezultatepozitive.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Toatespeciileaucerinenutritivecomplexenecesitndpentrudezvoltaremediimbogitecu
substanenutritive(aminoacizi,proteineserice,glucoz,sruri,vitamine,ser,sngeetc).Se
recomandefectuareahemoculturilornmediulbifazic(solidlichid),ex.tipCastaneda.Culturase
incubeaznatmosferde510%CO2,la37Cpentruoperioaddeminim23zileculturile
negativetrebuieurmritepnla4sptmni.ncazulmediuluibifazic,vomnsmnapantade
mediusolidlafiecare23zile,fradeschideflaconul.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntcocobaciligramnegativicucudimensiunide0,50,6m/
0,61,5m,dispuiizolatsaunperechi,lanuriscurte,grupat.Sepotcolorabipolar.Poatefi
necesaroprelungireatimpuluiderecolorarecufucsin,altfelsuntpalidcolorai.
Caracteredecultur:
Pemediilembogitecorespunztoarenutritiv,potproducedup23zilecoloniidetip
S,cuundiametrudecirca1mmdimensiuneacoloniilorsemreteastfelnctla1sptmnde
incubarediametrulpoatefide67mmpotfiidentificate(nspecialdupincubareprelungit)colonii
detipRsauM
Examinatefolosindosursdeluminla45,coloniileapartransparente,
galbendeschis,asemntorpicturilordemierentimpcenluminareflectatprezinto
transparencenuiualbstruie
Caracterebiochimice:
Brucellaspp.duprepicarepeunmediuneselectivprezintunmetabolismoxidativ
Microorganismelesuntcatalazopozitive,ntimpcetestareareaciiloroxidazei,ureazei
iproduceriideH2Spotdarezultatevariabilesepotutilizasistemeclasicedetestare,dareste
posibiliutilizareagaleriilorAPI(ex.API20E)
TestmnecesitateanCO2,pentruizolare
Semaipotverificametabolizareaglucozei,lactozeiprecumisensibilitatealadiferii
coloraniincluideex.nmediidecultur(ex.tioninsaufucsinbazic)
Caractereantigenice:
UtilizmseruriimuneantiBrucellaadsorbite,prinreaciideaglutinarepelam(exist

reaciincruciate)ncazuluneireaciipozitive,lanivelullaboratoarelordereferinsepotrealiza
reaciideaglutinarepelamcuseruriimunemonospecifice(antiA,MsauantiRncazulcoloniilor
detipR)
Testareasensibilitiilabacteriofagi(lizotipia)sepoateutilizanstudiiepidemiologice
saunscopdecercetare,fiindrezervatlaboratoarelordereferinspreexemplufagulTbilisi
lizeaztulpiniledeB.abortus,poatelizalaconcentraiicrescutetulpiniledeB.suis,darnulizeaz
tulpiniledeB.melitensis,B.canissautulpinilenformR
Altetesteutilizatenidentificarelanivelulcentrelordereferin:
tehnicialebiologieimoleculare(existsondenucleotidicespecificepentrudiferite
biotipuriizolatemaifrecvent,deex.1i3aparinndB.melitensissencearcpunerealapuncta
PCR,pentrudiagnosticulbrucelozei).
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapice)serealizeazprin
metodadifuzimetricstandardizat,iesteutilattnscopulsupravegheriiapariieiunortulpini
rezistentelamedicamenteleantimicrobienectipentrustabilireatratamentuluicorespunztorn
cazuluneimaladiiinfecioasengeneraldificildetratat.
Diagnosticulserologic
Estedemulteorinecesar,inndcontdedificultilentlnitencursuldiagnosticului
bacteriologic.Utilizmantigenecunoscuteincercmsdeterminmprezenaanticorpilor
specificinsngelepacientului,valoareatitruluianticorpilorirespectivevoluiaacestuititrun
dinamic.TrebuiesmenionmcanticorpiidetipIgMcrescninfeciaacut(ncteva
sptmni)darpersistininfeciacronicsauchiariduptratamentulantibioticrealizat
corespunztor(timpde12ani).AnticorpiidetipIgGapardupcirca3sptmnideladebutul
brucelozei,atingovaloaremaximla68sptmniipersistncazuluneiinfeciicronice.
nspecialdinpunctdevedereistoricdiscutmiputempracticancadrullucrrilorpractice,
aglutinareapelam(Huddleson,reaciecalitativ,descreening).Ceamaicunoscutiutilizat
tehnicdediagnosticserologicestereaciadeaglutinarentuburi(Wright)princareputem
determinaatttitrulanticorpilordetipIgMcticelalanticorpilordetipIgG.
Avndnvederefaptulcnbrucelozaparianticorpiblocani(AcdetipIgAcareblocheaz
activitateaaglutinantaAcIgMsauIgG),carepotpersistaanidezile,existdificultiinceea
cepriveteinterpretarearezultatelorobinutendiagnosticulserologic.
Pentruasimplifica,considermcuntitru1/160estesugestiv,ntimpceocreterede4ori
ndinamicatitrului,poateconfirmadiagnosticuldebruceloz.
Existoseriedevariantetehnicecarepermitreducereaerorilordeinterpretare:
diluareasuplimentaraserurilordecercetat
testuldeblocare(adugmtuburilorncarereaciaWrightestenegativcte1pictur
deserimunantiBrucelladacreaciarmnenegativinicinacestcaznuapareaglutinarea,
concluzionmcnseruldecercetatexistanticorpiblocani)
testulCoombs
utilizareauneitehnicidetipELISApentrudetectareaAcdetipIgMiIgGcareaparfa
deproteinelemembraneiexterneetc.
Diagnosticulimunobiologic
DatoritfaptuluicninfeciacuBrucellaspp.estestimulatnspecialrspunsulimunmediat
celular,diferiiautorimenioneazutilizareaintradermoreacieicubrucelinninvestigareaunuicaz

suspectdebruceloz.IDRcubrucelinpoateidentificaexistenauneistridehipersensibilitatede
tipIV,fadeantigenulbrucelos.

40. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de Corynebacterium diphtheriae
GenulCorynebacteriumincludemaimultespeciidebaciligrampozitivi(sepotcolora
neuniform),uorincurbai,mciucai,aezainV,L,nmicigrmezineregulatesaunpalisade,
nesporulai,necapsulai,imobili,aerobiifacultativanaerobi,catalazpozitivi.
StudiirecenteaudelimitatgrupulCorynebacteriumdiphtheriaencareseregsescspeciileC.
diphtheriae,C.pseudotuberculosisiC.ulcerans(ultimeledoufiindureazpozitive).Cultivmai
binepemediimbogite(deex.cuadaosdesersausnge).Aucapacitatea(ncazulconversiei
genetice)deaelaboraexotoxin.C.diphtheriaeincludepatrubiotipuri:gravis,mitis,intermediusi
belfanti.
Dupptrundereacareareloccelmaifrecventlanivelultractuluirespirator(faringian,nazal),
urmeazmultiplicareaiinducereauneiinflamaiilocale.Tulpinilelizogene(infectatecu
bacteriofagitox+)sintetizeaztoxinacarepoateafectaoricetipdecelul,darcelemaiimportante
efectesuntlanivelcardiac(miocardit),nervos(demielinizare),renal(necroztubular),
suprarenalian,muscularihepatic.nctevaziledeladebutulinfeciei,toxinainduceapariiaunei
structuricompusedinfibrin,leucocite,eritrocite,celuleepitelialerespiratoriimoarteibacterii,
respectivfalsamembrandeculoaregrimaronie(diphtheramembran).Aceaststructurse
poateformalocal(amigdalian,faringian,nazaletc)sausepoateextinde,acoperindfaringele,
obstrucionndarboreletraheobronic(cruplaringian,asfixiemecanic).Laadpostulfalsei
membrane,baciliiicontinumultiplicareaisintezadetoxincaredifuzeazpecalesanguini
conducelaapariiaunortulburriladistan(tulburrideritmcardiac,miocardit,dificultivizuale,
devorbire,denghiireetc).
Cuctdiagnosticulestemaitardiv,cuattratamortalitiiprindifteriecrete.
Datoritfaptuluicnultimii15aninuaumaifostnregistratecazurideboalnaranoastr,
existrisculnerecunoateriiacesteipatologiidectremediciicarenuauvzutniciodatuncazde
difterie.Risculapariieicazurilorexistiarsistemuldesntatetrebuiesfienpermanenpregtit
pentruareacionaprompt,dintoatepuncteledevedere(clinic,terapeutic,diagnostic,epidemiologic
etc).
Diagnosticuldelaboratorndifterieestebacteriologic,directitrebuierealizaturgentexist
anumiteparticulariticaretrebuiemenionate.
ncazulsuspicionriiunuicazdedifteriediagnosticuliinstituireatratamentuluiseimpuncu
maximurgen.Sepornetedelaundiagnosticprezumtivbazatpeurmtoarelesemne:a).
amigdaliti/saufaringitcudurerideintensitatemedieplusasociereauneifalsemembraneb).
adenopatieiedemcervical,maialesdacseasociazcufaringitmembranoasisemnede

toxicitatesistemicc).cornajistridor(respiraiizgomotoaseiuiertoare),tiraj(depresiunea
prilormoisuprasternale,supraclaviculare,intercostale,epigastricenmomentulefortului
respirator)d).paraliziapalatuluimoalee).secreienazalserosanguinolentasociatcuprezena
unorfalsemembranelanivelulmucoasei.
Seadaugdinpunctdevederebacteriologicexaminareafrotiurilorrealizatedinprodusul
patologiccolorateGramicualbastrudemetilen.Tratamentulspecific(administraredeantitoxin)
seinstituiefrntrziere,fraateptafinalizareadiagnosticuluibacteriologic.
Diagnosticuldirect(bacteriologic),curealizareaetapelorcorespunztoare,esteutilpentru
confirmareinscopepidemiologic.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6).Produsulpatologicestereprezentatcelmaifrecventdesecreiidela
nivelulfaringeluiidesecreiinazale.ncazulprezeneifalseimembraneserecomand
detaareacuprecauieaacesteiairecoltareasecreieiaflatesubaceaststructur.nvederea
prelevriip.p.vomutilizaminimpatrutampoanediferite,treipentrurecoltareasecreiilorfaringienei
alpatruleapentrurecoltareasecreiilornazale.Primultamponvafiutilizatpentrurealizarea
frotiurilor,aldoileasevautilizapentrucultivarepediferitemediidecultursolide,selectivei
neselective(ex.gelozsnge,Loefflerimediicuteluritdepotasiu,precummediulTinsdale),n
timpcealtreileaialpatruleatamponvorfiintrodusentrunmediudembogire(OST,
ousertelurit).Pentrufiecarecultivarenparteexistunanumitalgoritm.Spreexemplu,mediul
Loefflervafiincubatpentru48orela3537Cdupcaresevarealizaunprimfrotiu,coloratGram.
Dacrezultatulestenegativtubulsereincubeaztimpde18oreiardacestepozitivsefaceo
repicarepemediulTinsdaleisencepeidentificareapebazacaracterelorbiochimice.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicpoatefidecisiv(ncontextclinici/
sauepidemiologicsugestiv)pentruncepereatratamentuluispecific.Realizmminimdoufrotiuri,
unulcoloratGramiarcellaltcoloratcualbastrudemetilen.Prezenaunorsemneclinicesugestive
lacareseadaugvizualizareapefrotiulcoloratGramaleucociteloriaunorbaciligrampozitivi(la
limit),uorincurbai,mciucai,aezainV,Lsausubformdeliterechinezetintimpcela
coloraiacualbastrudemetilen(modificat)amputearemarcaprezenagranulelormetacromatice
puteaconducelaadministrareadeantitoxindiftericdiagnosticuldecertitudineurmeazafi
stabilitulterior.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Aspectulcelmaicaracteristicsenregistreazpemediilecuteluritdepotasiu(ex.
GundelTietz,Hoyleetc),dup2448deore.BiotipulgravisformeazcoloniiopacedetipR,plate,
cumarginicrenelate,cutendinadeasedesfacenfragmenteatuncicndsuntprelevatecuansa,
relativdificildeemulsionat,deculoarecenuiesauneagr,diametrulcolonieifiindde1,52mm.
BiotipulintermediusformeazcoloniiopacedetipS,platecucentrulmamelonat,deculoare
cenuiesauneagrcumarginetransparent,diametrulcolonieifiindde1,52mm(darse
recunoateprezenaunorcoloniidedimensiunidiferite).BiotipulmitisformeazcoloniidetipScare
pottrecenformaRprinmbtrnire,cusuprafalucioas,culoarecenuiesauneagr,
translucide,diametrulcolonieifiindde0,51mm.BiotipulbelfantiformeazcoloniiopacedetipS,
deculoarecenuiesauneagr,diametrulcolonieifiindde1,52mm(darserecunoateprezena
unorcoloniidedimensiunidiferite).

4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Seexamineazcelmaibineatuncicndfrotiulesterealizat
dincoloniiaprutepemediulLoeffler(aspectetipiceaparincazulfrotiurilordinp.p.).Suntbacili
grampozitivi(lalimit),polimorfi,cudimensiunide18m/0,50,8m,uorincurbai,mciucai,
aezainV,Lsausubformdeliterechinezeti.Existrecomandarearealizareaunorfrotiuri
colorateimunofluorescent,ceeacearpermiterealizareaunuidiagnosticmairapid.
Caracteredecultur:
nfunciedebiotip,produccoloniidetipSsauR,aacumammenionatmaisus.Pe
mediiledetipulgelozeisngeaspectulmorfologicesteaproapesimilar,culoareafiindalbsaugri
perlat.Biotipurileintermedius,mitisibelfantiproducozonmicdebhemoliz.
PemediulTinsdalecoloniilesuntnegre(datoritproduceriideH2S)cuhalogrimaro.
Anumiiautorimenioneazcfrotiurilerealizateporninddelacoloniiledezvoltatepeacestmediu
permitevideniereagranulelormetacromatice.
PemediulLoeffler(mediuelectiv)coloniileaparn18orefiindalbe,lucioase,bombate,
semicremoase,asemntoarepicturilordespermanet.
Caracterebiochimice:
nscopuldiferenieriiC.diphtheriaedealtespeciialegenuluisepractictestul
pirazinamidazei(negativ)icistinazei(pozitiv).Testulcatalazeiestepozitiv.
Difereniereabiotipuriloriconfirmareadiagnosticuluidespecieserealizeazprintestul
catalazei(pozitiv),ureazei(negativ),reducereanitrailorifermentareaunorzaharuri.
Sepotutilizasistemecomerciale,precumgaleriileAPICORYNEcaresebazeazpe
combinareatestelorbiochimicecutesteleenzimatice(20teste)
Caractereantigenice:
Seutilizeazserantitoxindiftericpentruidentificareaproduceriitoxineiprintestul
ELEK(veziicapitolul16).Testulpoatefiinterpretatla2448oreesteuntestsimpluiprecis.
Caracteredepatogenitate:
Testareatoxigenezeiinvivo,pecobai,lanivelulcentruluidereferinculturaeste
inoculatsubcutanatlaunlotdecobaineprotejaiiunlotdecobaiprotejai(cuantitoxin
difteric).ncazulncareculturatestatincludemicroorganismetoxigen,cobaiineprotejaimorn
2448orecuevideniereasemnelordeintoxicaiedifteric.
TestareaproduceriidetoxinpeceluleVerosauprinaltemetode(Westernblot,ELISA,
PCRpentrusubunitialegeneitox+etc)
Testareasensibilitiilabacteriofagi(lizotipia)sepoateutilizanstudiiepidemiologice
saunscopdecercetare,fiindrezervatlaboratoarelordereferin.
Altecaractere/testeutilizatenidentificarelanivelulcentrelordereferin:
Testebiochimicesuplimentare
tehnicialebiologieimoleculare(ribotipie,profilulderestriciealuneiregiuni
caracteristice,dupamplificaregenicetc).
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapice)sepoaterealizaprin
metodadifuzimetricstandardizat,nspecialnscopulsupravegheriiapariieiunortulpinirezistente
lamedicamenteleantimicrobiene.Deregul,tulpiniledeC.diphtheriaesuntsensibilela
antibioticelefolositeuzualntratament(penicilin,eritromicin).

41. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Listeria
GenulcuprindemaimultespeciidintrecareceamaiimportantspecieesteListeria
monocytogenes,carepoateproduceinfeciivariate,umaneianimale.Mairaraufostizolatetulpini
dinspeciileL.ivanoviiisauL.seeligeri.Suntbacilifinigrampozitivi,aerobifacultativanaerobi,
mobilila25C,caresedezvoltpreferenialla30Cdarsepoatemultiplicailatemperatura
frigiderului(mbogirelarece).

Listeriamonocytogenes
Listeriamonocytogenesestepatogenprinmultiplicareiinvazivitate(prezintostructur
asemntoareproteineiMstreptococice,producediferitesubstanecurolninvazivitate,inclusiv
lecitinaza,fosfolipazaCilisteriolizinaO,cuefecthemolitic).Infecteazprobabiliniialcelulele
intestinale,supravieuieteintracelularisemultiplicintramacrofagic.
Listeriozaesteozoonoz.Infeciaumanapareaccidentalifoartefrecventevolueaz
inaparent.Dintremanifestrileclinicegraveamintimlisteriozaperinatal,probabiloinfecie
intrauterin(avortspontan,natereprematur,sepsiscudecesnaintesaurelativrepededup
momentulnateriietc).Laadulipotapreameningoencefalit,bacteriemieurmatdemetastaze
septice(maialeslaimunodeprimai)imairar,diferiteinfeciifocalizate.
Dintretoatetipurileantigenice,90%dintretulpinileizolatelaomaparintipurilorIa,IbiIVb.
PutemmenionactipulIVbafostmaifrecventasociatcuconsumuldebrnzfcutdinlapte
nepasteurizat.Asociereaunorepidemiidelisteriozcuconsumuldealimentecontaminate
sugereazcaleagastrointestinaldreptceamaiimportantcaledeptrundere.
DiagnosticuldelaboratormicrobiologicninfeciilecuListeriamonocytogeneseste
bacteriologic,direct.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmai
rapidicorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieetc).Diagnosticuldelaboratorsebazeazpeizolareaiidentificareamicroorganismului,
nspecialdinsngei/saudinLCR.ninfeciileprodusedeListeriamonocytogenessemaipot
recoltalichidamniotic,placent,esutfetal,dariprelevatepatologicecontaminatecualigermeni
precummateriifecale,secreiigenitale,alimente,probedinmediulexternetc.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimdoufrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracualbastrudemetilen
(AM)irespectivGram.Listeriamonocytogenesseprezintcabacilisaucocobaciligrampozitivi,
cudimensiunide0,55mm/0,50,8mm,dispuiizolat,nperechisaunlanuriscurte,intrasau
extracelular.

3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Demenionatcsepoatemultiplicalatemperaturicevariazntre245C(temperaturaoptim
fiindde2030C)nculturileiniiale,temperaturasczutfavorizeaz
multiplicareaL.monocytogenes(mbogirelarece)tolereazoatmosferde510%
CO2precumiconcentraiidepeste5%NaCl.
ncazulp.p.necontaminate(snge,LCRetc)vomutilizaspreex.agarglucozatsautriptozat,
suplimentatcu5%sngedeberbec.Atuncicnddorimsrealizmizolareaporninddelap.p.
contaminate(alimente,materiifecaleetc)estenecesarsfolosimmediideculturselectivespre
exemplunsmnminiialopartep.p.n9pridebulionpeptontriptoncuextractdecarnei
drojdie,suplimentatcucuacidnalidixiciacriflaviniardup27(sauchiar30)ziledeincubarela
temperaturafrigiderului,incubmnc1824deorela3537C.Ulteriorrealizmorepicarepemedii
selective(ex.agar,acriflavin,polimixinB,clorurdelitiu,ceftazidimetc).Existialtestrategii
folositepentruizolareaL.monocytogenes.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbacilifinisaucocobaciligrampozitivi,cudimensiunide
0,55mm/0,50,8mm,dispuiseparatsaugrupainpalisade,nperechisaunformdelitere
(asemntorcorynebacteriilor).nculturiletinerepredominformelecocobacilarentimpcen
culturilevechisecaracterizeazprinpleomorfismipotapreaformefilamentoase.npreparatul
proasptsepoatedemonstramobilitatea,nspecialdacsameninutculturala1825C(saula
temperaturacamerei).
Caracteredecultur:Culturadegajunmirosdelapte
acidulat.L.monocytogenesformeazcoloniidetipS.Dup12ziledeincubarela3537Cpeagar
glucozat,coloniileatingundiametrude11,5mm(maimicipeagarultriptozat)potsaibaspect
depicturiderou.Peagarsnge,coloniilesuntnconjuratedeozondiscretdebhemoliz.
Dacnsmnmprinnepareocoloandemediusemisolid,datoritmobilitiivaaprea
cretereanumbrel,caracteristicpentruL.monocytogenes.Multiplicarealatemperaturi
extreme(245C)poatefiutilpentruidentificare.
Caracterebiochimice:
L.monocytogenesproduceozondiscretdebhemoliz.
UtilizareaunortulpinistandarddeStaphylococcus
aureus(pentruL.monocytogenesiL.seeligeri)saudeRhodococcusequi(pentruL.ivanovii)n
cadrultestuluiCAMPesteutilpentruidentificare.
L.monocytogenesestecatalazopozitivifermenteazoseriedecarbohidrai(fr
produceredegaz).
Sepotutilizatrusecomercialemanuale(ex.APIListeriasauAPI20Strep)irespectiv
truseautomate(ex.rapidID32Strep)carepermitidentificareaL.monocytogenesn424deore,n
funciedetrusautilizat.
Caractereantigenice:
Seutilizeazseruricuanticorpicunoscuipentruidentificareatulpinilor
deListeriamonocytogenes,printehniciimunologice,nfunciedeAgsomaticesau
flagelare.Serotipareaesteutilnscopepidemiologic.Exist13serotipuri(serovaruri)majoritatea

tulpinilorizolatelaomaparinndtipurilorIa,IbiIVb.
Sensibilitatealabacteriofagi:Lizotipareaestefoarteutilnscopepidemiologicexist
tulpinicarenupotfitestateprinaceastmetod.
Caracteredepatogenitate:ngeneral,tulpiniledeListeriamonocytogenesizolatedela
pacienisuntvirulente.nlaboratoaredereferinpotfiefectuatensitestedepatogenitate.Dintre
acesteaovariantestereprezentatdecultivareanbuliontimpde24deore,urmatdeinocularea
uneipicturideculturnsaculconjunctivallaiepuresaucobaitulpinavirulentvadetermina
apariiauneiconjunctivitepurulenten13zile.Altemodalitidestudiereaviruleneitulpinilor
izolatesuntreprezentatedeinoculrilaoareciimunocompromii(inoculareintraperitoneal)sau
deinoculareamembraneichorioalantoidianaouluiembrionatdegin.
Altetesterezervatecentrelordereferin:nscopepidemiologicsauncadrulunorstudii
taxonomicesepotutilizaMultilocusEnzymeElectrophoresis(MLEE),analizamacrorestriciei
ADN,RFLPsauRAPDPCR.
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)poatefinecesariserealizeazdeobiceiprinmetodedifuzimetrice.ncazul
infeciilorgravesevordeterminaCMIiCMB(vezicapitolul14).

42. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Mycobacterium
ElementeleminimenecesarestabiliriiaparteneneilagenulMycobacteriumsuntreprezentate
de:1.rezistenaladecolorareacuacidalcool(baciliacidalcoolrezisteni,BAAR)2.prezenaunor
acizimycolicicareconin6090atomidecarbonicarepotficlivaiprinpiroliznacizigraicu22
irespectiv26atomidecarbon3.unconinutprocentualdeG+Cde6171%.
nafardeM.tuberculosisiM.leprae,aufostdescoperiteoseriedealtemycobacterii
considerateanteriorsaprofitedarcarefiindcondiionatpatogene,suntrelativfrecventimplicaten
patologiagazdelorimunocompromise(mycobacteriinetuberculoase,atipiceetc).
Genulmycobacteriumincludepeste80despeciidiferite,multedintreacesteafiindlargrspndite
nnatur.ncontinuarevomdiscutaaspectelelegatedediagnosticuldelaborator(microbiologic)n
infeciileprodusedeM.tuberculosis,variantahominis.
Tuberculozapoateavealocalizrivariate,darceamaifrecventntlnitestetuberculoza
pulmonar.Dinpunctdevedereepidemiologic,pacieniicutuberculozpulmonar(careeliminprin
sputBAAR)reprezintsursadeinfecieceamaiimportant.Diagnosticul,tratamentulcorecti
completalacestorpacieniesteesenial.
Diagnosticulpoatefisugeratdeelementeclinice,paraclinice(ex.radiologice),alteelementede
laborator,dartrebuieconfirmatprinizolareaiidentificareaM.tuberculosis.
Diagnosticuldelaboratormicrobiologicestenmodesenialbacteriologic,direct,lacaresepot

adugadateleobinutencadruldiagnosticuluiimunobiologiciserologic.Diagnosticuldelaborator
bacteriologicincludeetapelecunoscute.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibiotice,ctmairapid
icorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsiei
antisepsieinclusivproteciapersonaluluimedicalimplicatetc).nfunciedeformaclinicde
tuberculozsepotrecoltaurmtoareleprodusepatologice:sput,lichiddesplturbronic,LCR,
urin,lichiderecoltateprinpunciearticular,peritoneal,pleural,pericardic,probeobinuteprin
biopsie,puroietc.Uneoriestenecesarconcentrareap.p.princentrifugare.ncontinuarevom
discutacazulncarep.p.estereprezentatdesput(veziicapitolul6).Sputatrebuie
decontaminat(deex.printratarecuNaOH4%)ineutralizatnvedereabaciloscopieiicultivrii.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaaminimtreifrotiuridin
produsulpatologicrecoltatitransportatcorespunztor,caresevorcoloracuAM,Grami
respectivZiehlNeelsen.Frotiurileseexamineazlamicroscopulopticcuimersieisenoteaz
prezenacelulelordelanivelultractuluirespirator(ex.macrofagealveolare),prezenacelulelor
inflamatorii(ex.leucocite)iprezenaBAAR.nesuturileanimalelorbolnavebaciliituberculoi
aparcabastonaesubiri,rectilinii,cudimensiuneade0,4/3,acidalcoolrezisteni(aparroiipe
fondalbastru,toateceluleleibacteriilenonAARsuntcoloratenalbastru,lacoloraia
ZiehlNeelsen),imobili,necapsulai,nesporulai.Sepoateutilizaicoloraiafluorescent.Examenul
microscopicrmneoetapesenialndiagnosticuluneiinfeciimycobacterieneattnmomentul
examinriiunuiproduspatologic(examenulmicroscopicdirect)ctinmomentulcndprin
microscopieseconfirm(sauinfirm)morfologiaitinctorialitateamicroorganismelordintrocolonie
izolat.
Rezultateleexamenuluimicroscopic(coloraiefluorescentiZiehlNeelsen)trebuie
cuantificateprinnumruldeBAARnraportcunumruldecmpuriexaminate(1030ncazul
coloraieifluorescente,100300ncazulcoloraieiZN).Spreexemplu,prezenaa19bacili/10
cmpurinmicroscopiacufluorescenirespectiva19BAAR/100decmpurinmicroscopia
opticpermitenotificareanbuletinuldeanalizaunuirezultatcu1+ntimpceprezenaa1090
bacili/1cmpnmicroscopiacufluorescenirespectiva19BAAR/1cmpnmicroscopia
opticpermitenotificareanbuletinuldeanalizaunuirezultatcu3+(maximfiind4+,atuncicnd
seidentificspreex.peste9BAAR/1cmplacoloraiaZN).Notaiasemicantitativeste
obligatoriedeoareceexprimunitardensitateaBAARpefrotiuindiferentdemetodafolosit,
permindcomparaiintrelaboratoarediferite,ntrebolnavidiferiiipentruacelaibolnavn
momenteevolutivediferite.Dacrezultatulfinalestenedeterminattrebuiesfacemncunfrotiu
dinacelaiproduspatologicisindicmrecoltareaunuinouproduspatologic.Baciloscopia
negativnuexcludediagnosticuldetuberculoz.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobineoculturpur,caresevaidentifica.nmomentulactual,lanivelmondial,existomare
varietatedemediidecultur.Mycobacteriilesedezvoltngeneralpemediicomplexe.Mediilede
culturutilizatendiagnosticareauneiinfeciimycobacterienesempartn3grupeprincipale:medii
deculturlichide(ex.bulion7H9),mediideculturpebazdeou(ex.mediulLwenstein)i
mediideculturbazatepecompoziianagar(tipMiddlebrook).Pentruizolareaprimara
mycobacteriilorsepotfolosimediifoartevariate,dinfiecaregrupmenionat.Mediilepebazdeou

aucaingrediente:ousauglbenudeou,findecartof,sruri,asparaginiglicerol.Mediul
estesolidificatprincoagulare.Acestesubstanereprezintelementeledebazalemediuluiclasic
LwensteinJensenlacareseadaugverdemalachitpentruselectivitate(nacelaiscopsepot
adugaantibiotice).DezvoltareaM.bovis,M.africanumprecumiatulpinilordeM.
tuberculosisrezistentelaHINestefavorizatdesuplimentareacu0,4%piruvatdesodiuamediului
LwensteinJensen.
Atuncicndncercmsrealizmizolareaprimar,estenecesarcamediiledecultursse
incubezentroatmosferde810%CO2.Culturileseincubeazderutinlaotemperaturde
3537C.Mediiledecultursolidesevorexaminazilnicnprimasptmndupinoculareiarapoi
sptmnalpnlamplinireaa6812sptmnideoarecemycobacteriiletuberculoaseauorat
dediviziunede1227ore.
Sepotutilizaisistemedecultivarerapid(ex.MBBact,Bactec)cudepistareacreterii
mycobacterienen425dezile.nRomniaacestesistemeaunceputsfieutilizatenunele
centrencepndcuanul1998.Acestesistemepermittestareasensibilitiilamedicamentele
antimycobacterienepentrutulpinileizolate,conformrecomandrilorprogramuluinaional.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:nfrotiulrealizatdincoloniaizolatseevideniazBAAR
Caracteredecultur:M.tuberculosisirespectivM..bovisBCGformeazcoloniiR,
rugoase,neregulate,conopidiforme,grunjoase,greudeemulsionat,nepigmentate.TulpiniledeM.
tuberculosisrezistentelaHINpotformacoloniidetipS.
Caracterebiochimice:Identificareaspecieiserealizeazpebazaactevateste
fenotipiceclasiceianume:testulproduceriideniacin,testulreduceriinitrailor,testulcatalazeila
22Cila68C,hidrolizatween80,susceptibilitatealahidrazidaacidului2tiofencarboxilic(TCH)
isusceptibilitatealaacidulpaminosalicilic(PAS).Primele3testedaurezultatepozitivepentruM.
tuberculosis(ntimpcepentruM.bovisnumaial3leatestestepozitiv).Testulcatalazeila68Ci
respectivhidrolizaTween80suntnegativepentruambelespecii(hidrolizaTween80poatefipozitiv
pentruM.tuberculosis).M.tuberculosissedezvoltpemediulcuTCHntimpceM.bovis(sauM.
bovisBCGesteinhibatdectreaceastsubstan).Testulesteutilnspecialncazultulpinilor
deM.boviscareprezintreaciipozitive(sauslabpozitive)laprimele2teste.
Caractereantigenice:Sepotexaminancentredereferin.
Caracteredepatogenitate:M.tuberculosisestepatogenpentrucobai.Inoculareap.p.la
cobaiesteuneoripracticatnvedereadiagnosticului.
Altecaractere/testeutilizatenidentificare:Sepotutiliza(lanivelulunorcentrede
referin)testecaresebazeazpeproprietifenotipicemoleculare(ex.studiulcromatografical
acizilorgraidinperetelecelular)saugenotipice(fragmentederestriciealematerialuluigenetic,
sondenucelotidice,PCR).Existiposibilitateatestriisensibilitiifadeanumii
mycobacteriofagietc.
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)poatefinecesariserealizeazconformrecomandrilorProgramuluiNaionalde
controlaltuberculozei.Sepotutilizametodaconcentraiilorabsolute,metodaproporiilor,metoda
rapoartelorderezisten,metoderadiometriceetc.
Diagnosticulimunobiologicarelabazunmecanismderspunsimundetipcelular.Se

utilizeazintradermoreaciacutuberculin(PPD,derivatproteicpurificat),vezicapitolul21.
Diagnosticulserologicsebazeazperspunsulimundetipumoral(anticorpii
antimycobacterienipotfievideniaiprindiferitetehnici,deex.ELISA).Cutoatecmetodologianu
esteperfectstandardizat,subliniemfaptulcndiagnosticultuberculozeiniciunelementnupoate
ficonsideratcafiindlipsitdeimportanntrunanumitcontextclinic,paracliniciepidemiologic.
***
Deinuamprezentatelementelenecesareidentificriimycobacteriilornetuberculoasedorims
menionmc,ncazulutilizriiunuinumrredusdeteste,existrisculdeapuneundiagnostic
eronatirespectivdeaconsideraotulpindreptMycobacteriumtuberculosis,cutoatecafost
izolatomycobacterieatipic.

43. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de Bacillus anthracis
GenulBacillusaparinefamilieiBacillaceaeicuprindeunnumrfoartemaredespecii,dintre
carenpatologiesuntmaifrecventimplicateB.anthracis,B.cereusiB.subtilis.Germeniidin
speciaB.anthracisseprezintsubformdebaciligrampozitivi,dedimensiunimari,imobili,
sporulai,cusaufrcapsul.Suntaerobifacultativanaerobi.
Manifestrileclinicealeinfeciilordeterminatedebacilulantraxuluisuntreprezentatede
antraxulcutanat(formacelmaifrecventntlnitlaom),antraxulpulmonarirespectivantraxul
gastrointestinalntoateformelepoateavealocdiseminareainfeciei.DemenionatcB.
anthracisinfecteaznspecialanimaleleipoateproduceocazionalinfeciiumane.nultima
perioadsediscutfrecventdespreimplicareaacestuimicroorganismnbioterorism.
Diagnosticuldelaboratornantraxestebacteriologic,directitrebuierealizatctmairapid
sunturmateetapelecunoscutedarexistanumiteparticulariti.
Diagnosticulunuicazdeantraxpornetedeladatelecliniceiepidemiologice.Examenul
bacteriologicvaconfirmadiagnosticul.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.Produsulpatologicestereprezentatcelmaifrecventdesecreiidelanivelul
leziunilorcutanatedarsepotrecoltaiaspiratdinedemullocali/saudinganglioniiregionali,
sput,materiifecale,alimenteincriminate,lichidcefalorahidian,probenecroptice,snge(pentru
hemoculturi)etc,nfunciedeformaclinic.ncazulncareestedepresupuscp.p.este
contaminatsepotfolosioseriedemetode,spreex.utilizareamediilorselective,tratareatermic
sautratareacualcoolap.p.ncazulmediilorselective,agentulselectivmaifrecventutilizateste
polimixinaB.ncazulceleideatreiavariante,utilizmetanolsterilde95.Vomsuspensionap.p.
nproporieegalnetanolpentruoduratde3060minute,latemperaturacamerei,dupcarevom
prelevacirca0.25mldinsuspensiepecareocultivmpemediuldeculturales.ncazulncare
estimmctransportulctrelaboratorvaduramaimultde60minute,asigurmotemperaturde
transportde28C.Trebuiesmenionmfaptulcatuncicndpresupunemdiagnosticulde

antrax,trebuieluatemsuridebiosecuritatespeciale.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaunorfrotiuricarese
coloreazcualbastrudemetileniGramcelpuinunfrotiusevapstraderezerv.Semaipot
utilizaalbastrudemetilenpolicrom(McFadyean)saucoloraiaimunofluorescent,pentru
evideniereacapsuleibacteriene.np.p.sepotremarcastructuritisulare,leucociteibaciligram
pozitivi,cucapeteletiatedrept,dedimensiunimari(11,5mm/310mm),capsulai,dispui
izolat,nperechisaulanuriscurte,incluintrocapsulcomun.ncoloraiacualbastrude
metilenpolicrombaciliiaparalbatriiarcapsulaaparecaunhalodeculoareroz.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Putemutilizageloznutritivsaugelozsnge,ncondiiideaerobioz,laotemperaturde
37C(deisepoatemultiplicantre15i42C).ncazulncareestedepresupuscp.p.este
contaminatsepotfolosimetodelemenionatemaisus.PentruizolareaB.anthracissepoatefolosi
unmediucupolimixinB,lizozim,EDTAiacetatdethaliu,mediulPLET.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligrampozitivicudimensiunide11,5m/38m,
formndlanurilungincepeprocesuldesporogenez(sporulesteoval,situatcentral,maimic
dectgrosimeabaciluluirespectiv).
Caracteredecultur:
PemediisimpleproduccoloniidetipR,mari,cudiametrulde25mmmarginilesunt
neregulate,cuprelungirilateralefilamentoasecareaupermisasemnareaacestoracucapulde
meduzsaucoamadeleupemediilecusnge,poateapreaozondiscretdebhemoliz
deinmodcaracteristicB.anthracisestenonhemolitic.
Pemediispecialesepoatestimuladezvoltareacapsuleipolipeptidice(vezimaijos).
PemediulPLETproduccoloniimici,detipS.
Caracterebiochimice:
Bacillusanthracisestecatalazopozitiv,producelecitinaziestesensibillapenicilin
(fademajoritateaspeciilordingenulBacillus,rezistentelapenicilin)existialteteste
biochimicecaresuntefectuatelanivelulcentruluidereferin
Unaltcaractercaretrebuieinvestigatsereferlamotilitate,absentncazulB.
anthracisiprezentlamajoritateaspeciilordingenulBacillus.nacestscopputemnsmnao
coloandegelozmoale,cuincubarela37Cpentru14zileiurmrimdezvoltareaculturiifade
traseulpecareamnsmnatasemntorcuinterpretareamediuluiMIUncazulenterobacteriilor
Caracteredepatogenitate:
Testareaproduceriicapsuleiinvitro,caracteristictulpinilorvirulentedeB.anthracisse
poaterealizaprincultivare(repicare)peunmediucareconinebicarbonatdesodiu(0,7%),la37C
inprezenaunuiprocentcrescutdeCO2dup24deore,tulpinilecapsulatevorproducecolonii
mucoideiarprezenacapsuleisevademonstramicroscopic(ex.coloraiaMcFadyeansau
Giemsa).
Testareapatogenitiilaoarecelealb(vezicapitolul11)
Testareasensibilitiilabacteriofagulg
Altecaractere/testeutilizatenidentificarelanivelulcentrelordereferin:

diferitealtetestebiochimice
examenemicroscopice(frotiuricoloratecunegruSudanpentruidentificareaprezenei
globulelorlipidicedebhidroxibutirat)
altetestepentrudemonstrareasensibilitiilapenicilin(ex.testulcolieruluideperle)
tehnicialebiologieimoleculare(depistareaprezeneiplasmidelorpX01ipX02).
5.Antibiograma(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapice)nueste
necesar.Bacillusanthracisestesensibillapenicilin,eritromicin,tetraciclin,cloramfenicol,
ciprofloxacinetc.
nceeaceprivetediagnosticulimunobiologic,nRomniaafostpuslapuncttehnicaIDRcu
antraxin(BlteanuToma).
Trebuiemenionatfaptulcestedeodeosebitimportanpunereadiagnosticuluideantraxla
animale(nspecialierbivore),principalulrezervorpentruBacillusanthracis.
nacestscop,sepotutilizattehnicialediagnosticuluibacteriologic(evideniereamicroscopic
abacililornleziuni,obinereadeculturi,identificareaantigenelorprinreaciideprecipitaresau
tehnicidetipELISApentrureaciaAscoli,vezicapitolul16)saualediagnosticuluiimunologic
(intradermoreaciacuantraxin).

44. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Clostridium
GenulClostridiumincludepeste100despeciicaresegsescnintestinulanimalelorisepot
eliminanmediulexteriorprinmateriilefecale,sporulnd.Suntbaciligrampozitivi(uneorila
limit),dedimensiunimari,aezainperechisaulanuri,mobilicuciliperitrichi(cuexcepiaC.
perfringens).Multedintrespeciisintetizeazexotoxine.nceleceurmeazvomdiscutadespre
speciilecareproductetanos,botulismigangrenagazoas.
TetanosulesteprodusdeClostridiumtetanipatogenprinmultiplicarelapoartadeintrarei
toxinogenez(produceoexotoxinneurotrop).Neuroniimotorispinalisuntdeobiceiinhibaide
ctregliciniacidulgaminobutiric.Toxinablocheazeliberareaacestormediatoriceeace
determinexcitareaneuronilormotorispinali,cuapariiadespasmesevereidureroaseale
musculaturiistriate(paraliziespastic).Contienaestepstrat.Toxinapoateajungelanivelul
SNCiretrogradprinpropagarepecaleaxonaldelapoartadeintraresaupecalesangvin.Clinic,
la45ziledelacontaminareaparspasmealemusculaturiidinzonacontaminat,apoiale
muchilormasticatori,manifestateprintrismus(guranusemaipoatedeschide)ifaciesdetip
risussardonicus(spasmealemusculaturiifaciale).Oricestimulexternprecipitunatacdetetanos.
Moarteasepoateproduceprinasfixiemortalitateaestedecirca50%.
BotulismulaparedeobiceipriningestiadealimentecareconintoxinaprodusdeClostridium
botulinum,fiindotoxiinfeciealimentardetiptoxic(toxinpreformatnaliment).Toxinabotulinic
esteceamaiputernicotravcunoscutdozaletalpentruomestedecirca12mg.Dup
ingerare,toxinaseresoarbelanivelintestinal,ajungencirculaie,iarpeaceastcalelanivelul
plcilorneuromotoriiundempiediceliberareadeacetilcolin(determinparalizieflasc).Paralizia

ncepelaextremitateacefalic(ex.paraliziamuchilorglobilorocularicareaparela1824oredela
ingestieisemanifestprindiplopie)ievolueazdescendent.Decesulpoatesurveniprinasfixie
(datoritparalizieimuchilorrespiratori).Botulismulinfantil(posibililaaduli)esteurmarea
formriitoxineibotulinicepringerminarealanivelintestinalasporiloringerai.Mortalitatean
botulismulneonatalestefoartemare.Botulismulplgilorpoateaprealapersoanecarefolosesc
droguriinjectateintravenossauprezintleziunicontaminatecupmnt.
Gangrenagazoasesteprodusdedousaumaimultedintreurmtoarelespecii:C.
perfringens,C.novyi(C.oedematiens),C.septicum,C.histolyticumiC.sporogenes.Sporii
clostridieniajunglaniveltisularprincontaminareaunorleziuni(traume).ncondiiideanaerobioz
sporiigermineaz,formelevegetativesemultiplic,fermenteazzaharuriiaparegaz.Distensia
tisular,obstruciamecanicastructurilorvascularenconjunciecusintezadetoxinefavorizeaz
diseminareainfeciei.Enzimele(toxinele)produsecontribuieilaalterareagravastriigenerale.
Gangrenagazoasestecaracterizatprinedemedure,crepitante(datoritprezeneidegaz)i
necroz.Necrozatisularseextinde,multiplicareabacterianseamplific,apareanemie
hemolitic,toxemieievoluie(n2080%dincazuri)ctredeces.
naintedeadiscutactevaaspectelegatedediagnosticulinfeciilorprodusedeclostridiidorim
smenionmfaptulcexistialtemicroorganismeanaerobedeinteresmedical(baciligram
pozitivinesporulai,baciligramnegativi,cocigrampozitiviigramnegativi,
spirochete).Diagnosticuldelaboratoralinfeciilorprodusedegermenii
anaerobiestelaborios,costisitorideregulpoatefidefinitivatnumainlaboratoare
specializatesuntnecesaredotrispecialeiunpersonalmedicalcuexperien.
ncontinuarevomprezentactevaaspecteprivinddiagnosticuldelaboratorninfeciileproduse
demicroorganismeledingenulClostridium.
1.Etapaderecoltareitransportap.p.esteesenialtrebuiemeninutecondiiile
deanaerobioz.
2.Dinpunctdevederemacroscopicamputeamenionamirosulputridalp.p.,prezenaunor
fragmentedeesutnecrotic,aunorsecreiideculoarenchis,existenadesngeipuroinplag
etc.
Examenulmicroscopicarerolorientativ(pentrumajoritatealaboratoareloresteiultima
activitatecarepoatefirealizatatuncicndagentuletiologicesteunmicroorganismanaerob).
C.tetaniaredimensiunide0,52mm/218mmipoateprezentaunsporrotundlocalizatterminal,
C.botulinumaredimensiunide0,51,5mm/320mmipoateprezentaunsporovallocalizat
centralsausubterminaliarC.perfringensaredimensiunide0,51,5mm/1,519mmipoate
prezentaunsporovallocalizatsubterminal.Examenulmicroscopicpoatepermitenacelaitimpun
controlalcalitiip.p.(evideniindprezenacelulelorinflamatoriiiacelulelorlezate)iarputeaservi
laalegereaterapieiantimicrobiene.
3.Pentrucultivareap.p.vompregticelpuin3mediidecultur:bulionVF(viandefoi)cuacid
tioglicolicialbastrudemetilen(caretesteazdigestiacrniidectreclostridii),mediulgeloz
sngesuplimentatcuneomicin100mg/mlincubatnanaerobiozimediulgelozsnge
incubatncondiiiaerobe.Pentrup.p.provenitedinabcesesaudinplgicaresugereazgangrena
gazoasamputeafolosiimediulNagler(cuglbenudeou)carepermiteevaluareaproduceriide
lecitinazilipaz.
Pentruadistrugeformelevegetativeiareinesporiiputemprocedaaacumamartatn

capitolul10(tehnicideizolarespeciale).
Incubareancondiiideanaerobiozdureaz2448deorela3537C.
naintedeatrecelaetapadeidentificaretrebuiesncercmsdovedimcamizolatgermeni
anaerobiisverificmpuritateaculturiicareurmeazafiidentificat.ncondiiilencarep.p.a
fostnsmnatpe2plcicugelozsngeincubateaerobianaerob,esteutilsrealizm
examenulmicroscopicalcoloniilor.Dacaparcoloniiasemntoarenambeleplciiardinpunct
devederemicroscopicprezintcaracteresimilare,estevorbademicroorganismefacultativ
anaerobe.Dacpefrotiuriledincoloniileizolatepemediulincubatnanaerobiozaparialtetipuri
morfologice,nseamncexistmicroorganismestrictanaerobe.Pentruaverificapuritateaculturii
obinute,naintedeatrecelaetapadeidentificare,repicmcoloniilesuspectenbulionVF
regenerat(prelevmcoloniaprindecuparecugelozasubiacent).Incubmtimpde24orela3537
C.ncazulncareexistmultiplicarebacterianprocedmlaa.realizareaunuifrotiucoloratGram
(icomparmrezultatelecuceleobinuteanterior)b.repicareapeopantdegeloznutritivcu
incubarenaerobioz(nutrebuiesaparculturbacterianncazulncarebacteriileizolate
anteriorsuntanaerobe).Dacrezultatelesuntcorecte,trecemlaidentificareamicroorganismelor.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere,aacumamdiscutatincapitoleleprecedente.
Caracteremorfotinctoriale:Suntbaciligrampozitivicudimensiunilemenionatemaisus.
nculturinvechitebacteriilepotfigramnegativeisepotdetectaendosporii(deformeazbacilii).n
cazulncarelaexamenulmicroscopicnuevideniemsporivomrepicapemediulNagler,cu
incubare48deorela3536Ciapoilatemperaturacamerei.Urmrimsporulareapeunnoufrotiu
coloratGram.Putemevaluafenomenuldesporogeneziprinmetodedecultur(vezimaijos).
Caracteredecultur:Speciilemobile(mareamajoritate)formeazlasuprafaamediului
coloniidetipS,cumarginiondulate,neregulate,cutendindeinvadareamediului(datorit
mobilitii).njurulcoloniilorremarcmprezenabhemolizei.Dacaavutlocinoculareain
profunzimeamediului,coloniileauaspectpufos.Clostridiumperfringens(speciaimobil)formeaz
coloniidedimensiunimari,detipS,rotunde,cumarginiregulate,convexedarcarepotaveai
aspectrugos.Majoritateatulpinilorproduchemolizdubl(zonaintern,debhemoliz,estemai
ngustntimpcezonaextern,deahemolizestemailarg)existitulpinicareproduczone
foartelargidehemolizprecumitulpinislabhemolitice.Aacumammenionat,princultivare
putemsevalumfenomenuldesporogenez(cunoscutfiindcsporiirezisttimpde10minutela
temperaturade80C).DacpefrotiuldinculturcoloratGramnuevideniemspori,pregtim2
tuburicubulionpepton,glucoz,amidoniextractdelevur.Repicmcoloniilesuspectencele2
tuburiiarunuldintretuburinsupunemuneitemperaturide80C,10minute.Incubmcele2tuburi
la3537Cpnaparemultiplicareabacterian.Dacbacteriilesedezvoltnambeletuburi,am
doveditexistenasporilor.Dacdupoincubaredecelmult10zilenuaparemultiplicarebacterian
ntubulsupuslatemperatur,nuexistspori.
Caracterebiochimice:Existnumeroasecaracterebiochimicecarepotfiutilen
difereniereaspeciilordeclostridii.
nidentificareamicroorganismelordinacestgenutilizminiialtestareaproduceriide
lecitinazilipaz.PemediulNaglerinoculmtulpinanstriu(sepottestaconcomitentmaimulte
tulpini).Pentruapreciereaproduceriidelecitinazincubareadureaz48deore.ncazulncare
testulestepozitiv(precipitatopacnmediuldinjurulstriuluidecultur)poatefivorbadeotulpin

deC.perfringens.TestulestenegativpentruC.tetanisaupentruC.botulinum.Pentrutulpinile
lecitinazpozitive,lanivelulcentruluidereferinsemaipottestamobilitatea,fermentarealactozei,
producereadelipaz,ureaz,hidrolizagelatinei,digestiacrniietc.Pentruapreciereaproduceriide
lipazincubareadureaz1sptmn.ncazulncaretestulestepozitiv(filmperlat,iridescentla
nivelulstriuluideculturinmediuladiacent)poatefivorbadeotulpindeC.botulinum.Testul
estenegativpentruC.tetaniiC.perfringens.
Testulplcilorsemineutralizatepoatefipracticatlanivelulcentruluidereferin.Folosim
oplaccumediulNagler.Pejumtatedinplacetalmantitoxin(lecitinaz).Dupuscareaplcii
inoculmnstriuriotulpinmartorpozitiv,otulpinmartornegativictevatulpinidetestat.
Incubmtimpde1824deorela3537Cnanaerobioz.C.perfringens(caitulpinaM+)dun
rezultatpozitivdoarpejumtateadeplacfrantitoxin.
Cretereanlapteturnesolatsaucubromcrezolpurpur(C.perfringensproducecheag
alveolarnlapteleturnesolat).
Clostridiilesuntsensibilielavancomicinirezistentelacolistin.Aliautoripropun
testareasensibilitiilametronidazol.
Caractereantigenice:potfitestatencentreledereferin.
Altetestecarepotfiefectuatelanivelulcentrelordereferin
Demonstrareaprezeneitetanospasmineiprinseroneutralizarelaoareci(unanimaleste
protejatcu12orenaintedetestprininjectaresubcutanata1000deUAIdeantitoxintetanic
injectmlaambeleanimale0,5mldinculturapemediulichidanimalulprotejatsupravieuiete,iar
cellaltvaprezentasemnetipicedetetanos)
Testarea(laom)aprezeneiantitoxineitetanicentitruriprotectiveprinELISAsau
hemaglutinare(T0,01UAI/ml).
Demonstrareaprezeneitoxineibotulinicenalimente,materiifecale,sersaunmediide
cultur.Spreex.prelevmdinbulionulVFpecareamidentificatmultiplicareabacterian,
centrifugmiarsupernatantullmprimn2tuburi.Unuldintretuburilsupunemtemperaturiide
100C(toxinabotulinicestetermosensibil).Inoculmintraperitonealp.p.ladouloturide
oareci.Dacoareciiinjectaicup.p.inactivattermicmor,nuestevorbadetoxinabotulinic.
Urmrimoareciitimpde24zilepentruaremarcaapariiasemnelordebotulism(reducerea
mobilitii,respiraiiample,contraciialemuchilorabdominaliurmatedeconvulsiiideces).
Prezenatoxineibotulinicepoateficonfirmatprinseroneutralizare(protejmspreex.unanimalde
laboratorcuantitoxindetipAiunaltanimaldelaboratorcuantitoxindetipBdupcarei
injectmcup.p.respectivdacanimalulseroprotejatcuantitoxinadetipAsupravieuieteiar
cellaltanimalmoarecusemnecaracteristicepentrubotulism,nmediuldeculturaexistatC.
botulinumdetipA)
Titrareatoxineibotulinice,prinmetodaDL50(folosindinjectareap.p.nvenacoziii
curbestandardpentruinterpretare,pentrufiecareserotip)
TitrareatoxineibotuliniceprintrotehnicdetipELISA(poatedetecta10pg)
Testulinhibiieisialidazei,pozitivn26orepentruC.perfringensetc.
5.Antibiogramaderegulnuserealizeaz.Clostridiilesuntsensibilelapenicilin,
cefalosporine,vancomicin,tetracicline,metronidazoletc,nstratamentulestemultmaicomplex
nuneledintrebolileclostridienenuafosteficacitateatratamentuluicuantibioticesau
chimioterapicenuafostdovedit.

45. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Treponema
OrdinulSpirochaetalescuprindedoufamiliiimportantenpatologiauman,
familiaSpirochaetaceae(ncaresedescriugenurileTreponemaiBorrelia)i
familiaLeptospiraceaecuunsingurgen,Leptospira.GenulTreponemaincludespeciaTreponema
pallidumcupatrusubspeciicareproducinfeciilaom.Treponemapallidumsubspeciapallidumeste
agentuletiologicalsifilisului.
Sifilisulpoateficongenitalsaudobndit.ncazulsifilisuluidobnditexistmaimultestadii,
respectivstadiulprimar,stadiulsecundar,stadiullatent(recent,tardivsaudeduratnelimitat)i
stadiulteriar.nstadiulteriar,nfunciedeorganelesausistemeleafectateputemdiscutadespre
afectareanervoas(neurosifilis),cardiovascularetc.nmodparticularsediscutsifilisul
congenital,sifilisullagravideisifilisulaprutlapacieniiinfectaicuHIV.
InfecianaturalcuT.pallidumestelimitatlagazdauman.Infeciasetransmitedeobicei
princontactsexual,iarleziuniledeprimoinfeciesuntcantonatelanivelultegumentelori
mucoaselordinzonagenital.Totuin1020%dincazuri,leziunileprimaresuntlocalizatela
nivelrectal,perianalsauoral.Spirochetelesemultipliclocallapoartadeintrare,iaruneletrecde
barieraganglionilorlimfaticiiajungncirculaie.n210sptmnidelainfecie,laloculinoculrii
sedezvoltopapulcaresedeprimpentruaformaoulceraiecubazacurat,indurat(ancru
dur)lanivelulcreiasegseteunlichidclar,nsfoartebogatntreponeme.Aceastleziune
primarsevindecntotdeaunaspontan,dardupcirca210sptmniaparleziunile
secundare,careconstaunleziunieritematoasemaculopapularelocalizateoriundepecorpi
papuleumede,palide(condiloame)nregiunileanogenital,axilarincavitateabucal.Pot
apreadeasemeneameningita,corioretinita,hepatita,nefritasauperiostitasifilitic.Leziunile
secundareseremitielespontan.Attleziunileprimare,cticelesecundaresuntbogaten
spirocheteifoartecontagioase.
nceleceurmeazvomabordadiagnosticuldelaboratorncazulsifilisuluiprimarsau
secundar.Diagnosticulpornetedelaelementecliniceiepidemiologice,dartrebuieconfirmatprin
metodedelaborator.
Diagnosticuldelaboratornsifilispoatefibacteriologic(direct)sauserologic.
Diagnosticulbacteriologic
Treponemapallidumnupoateficultivatpemediiartificiale,nlaborator.Dinacestmotiv,
diagnosticulbacteriologiccuprindenumaiprimeleetapedinstructuraclasicaschemei
diagnosticuluidirect.Diagnosticulbacteriologicpoatefirealizatattnsifilisulprimarctin
sifilisulsecundar.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei,avndoseriedeparticulariti.Produsulpatologicpoatefireprezentatde

lichidulclar(serozitatea)delanivelulleziunilorprimarenfunciedelocalizare(penian,cervical,
vaginal,perianaletc),delanivelulleziunilorsecundare(condilomalata,rozeolesifiliticeetc),dela
nivelulunorleziuniumedebogatentreponemencazulsifilisuluicongenitaltimpuriusaupoatefi
prelevatdinganglioniilimfaticiregionali.ncazulancrului,vomrecoltap.p.dupndeprtareacu
grij(fraproducesngerare)acrustelorcareacoperleziunea.Arputeafinecesars
comprimmbazaleziuniipentruastimulaacumulareadelichid(clar)dincarevomefectua23
preparatemicroscopice.Prelevmlichidulfiecuajutorulanseibacteriologice,fiecuajutorulunei
pipetePasteur,fieaplicndpurisimplulamadesticlpeleziuneaumed.Acoperimcuolamel
ieliminmprinuoarapsareeventualelebuledeaer.Transportultrebuiesfierealizatfoarte
rapid,depreferatnmaxim20deminuteastfelnctserecomandcarecoltareasfierealizat
ntrunspaiucorespunztor,nimediatavecintatealaboratorului.Esteoetapesenial.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicsepoaterealizafiecuajutorul
microscopuluicufondntunecat,fieprinimunofluorescendirect(existialtetehnici,carenuvor
fidiscutatenacestmanual).
Pentruexamenulmicroscopicpefondntunecat,pregtim2lame(preferabil3)
pentrufiecareleziunepecaredorimsoexaminm.Preparatelenutrebuiesconinhematii,
leucocite,fragmentedeesutsaubuledeaer.ntimpceexaminmprimulpreparatmicroscopic
vomintroducecelelalte2preparatentrocutiePetrincareexistpuinvatsauhrtiedefiltru
umezit,pentruapstraatmosferaumediapreveniuscarea.Preparatulmicroscopictrebuie
examinatsistematic(minim10minutencazulunuirezultataparentnegativ),iniialcuobiectivul
uscat,ulterior,dupvizualizareaunormicroorganismecareparsaparingenuluiTreponema,cu
obiectivuldeimersie.Estenecesarcaexaminatorulsaibexperiennacesttipdeexaminare.
Microorganismelecaracteristicesuntfoartesubiriilungi(0.250.3mm/614mm),spiralate,
prezentnd814spire(regulate,strnse,adnciirigide),mobile(spirelenusedeformeaz),
deplasareancmpulmicroscopicnuestefoarterapiddarseamncuomicaredenurubare
(existimicroorganismecaresuntimobiledarpstreazmicriledetranslaie,rotaielent,
flexieuoardelauncaplacellaltsauflexiemediancurevenirecaunresort),luminoasepe
fondulnegrualcmpuluimicroscopic.ncazulunuirezultatnegativputemrepetarecoltareai
examinarea,nanumitesituaiisepoaterecomandancepereatratamentului,iarevoluiavafi
monitorizatcliniciserologic(rezultatulnegativnuelimindiagnosticuldesifilis).Rezultatul
pozitiv,atuncicndpoatefiexclusprezenaunortreponemesaprofite,punediagnosticuldesifilis
primarnaintecaanticorpiispoatfidetectaiserologic.
ImunofluorescenadirectpermitedifereniereaT.pallidumdealtetreponemecu
ajutorulanticorpilormarcaifluorescent(reacieAgAc)unaltavantajestereprezentatdefaptulc
nuestenecesarcatreponemelesfiemobile.nplus,pentrucreaciaestespecific,sepoate
utilizacusuccesincazulunorleziunifoarteprobabilcontaminatecutreponemesaprofite(ex.
orale,rectale).ncazulncareexaminareanupoatefirealizatimediatsecreiapoatefirecoltat
ntruntubcapilarcaresenchidelaflacripoatefitransportatla+4Calternativputemrealiza
frotiul,ateptmsseusucenvecintateabeculuidegaziputemsltrimitemctrelaborator.
Frotiulpoateficolorat:
cuAcantiT.pallidumobinuidelapacienicusifilissaudelaiepuriinfectaicuT.
pallidumserulestetratatpentrucretereaspecificitiicutulpinaReiter(otulpinnepatogendeT.
phagadenis)iarAcsuntapoimarcaicuizotiocianatdefluoresceinsau

cuAcmonoclonaliantiT.pallidumsubspeciapallidummarcaifluorescent.
Subliniemncodatimportanaexamenuluiclinicurmatderecoltarea,transportuli
examinareamicroscopicap.p.
nlaboratoareledereferinarmaiputeafiutilizateialtemetodenscopdiagnostic(mairar)
saupentrucercetare.
Inoculareap.p.laanimaledelaboratorreprezintceamaisensibilmetodpentru
detectareaT.pallidum.Pentrumeninereanlaboratoraunortreponemeviabilesaupentru
determinareainfectivitiiaufostutilizatediferiteanimale(hamsteri,cimpanzeietc)nscelmaiutil
esteiepurele.Iepurelepoatefiinoculat(intratesticularsaucutanat)cuoricetipdep.p.cucondiia
cantremomentulrecoltriiiinocularesnutreacmaimultde60minute.ncazcontrar,p.p.
trebuieadusrapidlaotemperaturdecelpuin78C(ex.nazotlichid)imeninutastfelpnn
momentulinoculrii.Testulinfectivitiilaiepure(RIT)rmnemetodastandardcuajutorulRITse
apreciazsensibilitateaispecificitateaoricreialtemetodecareestepropuspentrudiagnosticul
sifilisului.
ncentreledereferinaumaifostutilizateitehnicialebiologieimoleculare(sondele
nucleotidice,PCR).TehnicaPCRarputeaaveautilitateadiagnosticatuncicndp.p.este
reprezentatdelichidulamniotic.
Treponemapallidumipstreazsensibilitatealapenicilin,medicamentcarermnede
eleciepentrutratamentulsifilisului.Existioseriedealternative,dardorimssubliniemcn
vedereatratamentuluiacesteimaladiitrebuierespectaterecomandrilefcutedectrecomisiade
specialitateaministeruluisntii,pentrufiecareformdesifilisnparte.
Diagnosticulserologic
Diagnosticulserologicserealizeazfolosindantigenenontreponemicei
antigenetreponemice.Testelenontreponemice(nespecifice)itreponemice(specifice)sunt
complementarenuseexclud.Testelenontreponemicesuntutilizatenscreening,diagnostici
monitorizareapacienilorncursultratamentului.nvedereastabiliriidiagnosticuluivomutilizai
testeletreponemicencorelaiecucelenontreponemice(niciunuldintreceledoutipurinupot
acoperidinpunctdevederediagnostictoatestadiilesifilisului).CelmaifrecventutilizmVDRLsau
RPR(dinprimacategorie)cuplatcuTPHAsauFTAAbs(dinadouacategorie).Deobiceiutilizm
serulprovenitdelapacientulsuspect,darnanumitesituaiitestulesterealizatfolosindplasmsau
LCR.
A.Reaciiserologicecareutilizeazantigenenontreponemice
Antigenelenontreponemicesuntlipidecarepotfiextrasedindiferite
esuturi.Cardiolipinaesteundifosfatidilglicerol.Pentrucretereasensibilitii,cardiolipinaeste
cuplatcucolesterolilecitin.Anticorpiianticardiolipinaufostnumiireagine.Suntdepistain
serulpacienilorla23sptmniinLCRla48sptmnideladebutulinfeciei,ncazurile
netratate.
ReaciadefixareaacomplementuluiBordetWasserman(RBW)afostutilizatolung
perioaddetimp,ncepndcu1906.DatoritfaptuluicRFCesteometodlaborioasinspecial
datoritapariieiunoraltetehnici,RBWestediscutatnprezentdinpunctdevedereistoric.
TehnicaactualstandardesteVDRL(VeneralDiseaseResearchLaboratories),untest
defloculare.Testeledeflocularesebazeazpefaptulcparticuleleantigenicermndispersaten
serulnormal,darformeazgrunjivizibiliatuncicndsecombincureaginele.Testelesepreteaz

laautomatizareilafolosireapentruscreeningdatoritcostuluiredus.Ovarianteconomici
elegantestemicroreaciaVDRLcaresepracticnplcicugodeuri.
AgtipVDRLsepreparconformrecomandrilorproductorului.
Pregtireaseruluidecercetatincludecontrolulaspectuluiserului(seclarificprin
centrifugare),inactivareatimpde30minutela56Cionoucentrifugare(ncazulapariieiunor
particulensuspensie).Nuvorfitestateserurileinfectatesauhemolizate.ncazulncaretrecmai
multde4oredinmomentulinactivrii,serulvafiinactivatdinnoutimpde10minutela56C.
Temperaturadincameradelucrutrebuiesfientre2329C.Testulseefectueazpe
sernediluat(pentrumonitorizareaevoluieisubtratamentsepotfacediluiibinare).Sepottestamai
multeseruriconcomitentiestenecesaronotareclaragodeurilor,pentrufiecaregodeunparte.
Fiecaretestvaincludemartori(seruricureactivitatecunoscut,martorpentruAg).nfiecaregodeu
punemcte0,05mlser(ngodeulpentrumartorAgpunemsoluiesalinfiziologic).Dupagitarea
flaconuluicususpensiaantigenic,utilizndoseringcuaccalibratdepunemcteopictur(1/60
ml)nfiecaregodeu.Acoperimplacaioaezmpeunagitatorcarepoatefireglatla180turaiipe
minut,peoduratde4minute.
Citimimediatrezultatul,printransiluminarepefondnegru,cuajutoruluneilupe,
ncepndcumartorii(negativ,slabpozitiv,pozitiv,martorulpentruAg)icontinundcuserurilede
testat.
Rezultatulestenegativdaclichidulnuprezintflocoaneiesteasemntormartorului
negativimartoruluiAg.Rezultatulesteslabpozitivatuncicndvizualizmflocoanededimensiuni
micintrunlichiduorturbidntimpcerezultatulesteintenspozitivatuncicndvizualizmflocoane
dedimensiunimariiarlichidulesteclar.Repetmrezultateleslabpozitivesaudificildeinterpretat.
ncazulncaresuspicionmexistenafenomenuluideprozon(inhibiiatotalsaupariala
floculriiprinexcesdeAc),vomrepetatestareasevarepetapediluiideser.
Rezultatulnegativnuelimindiagnosticuldesifilispacientulsepoateaflanperioada
deincubaiesaupoateficazulunuisifilislatent(evideniabilprinTPHA).ncazulunuipacient
suspectpentrusifilisprimar,repetmtestuldup1sptmn,1lunila3luni.
Vomluanconsiderareunrezultatpozitivncorelaiecurezultatulobinutlatestul
treponemic,rezultatuldiagnosticuluibacteriologic,elementelecliniceiepidemiologice.Unrezultat
pozitivncondiiilencaretoatecelelaltedatesuntnegativeestedeobiceiunrezultatfalspozitiv.
Potaprearezultatefalspozitivelapersoanecuhepatitviralacut,pneumoniivirale,rujeol,
malarie,mononucleozinfecioas,alteinfeciivirale,lapersoanecareaufostrecentvaccinate,
precumilapersoanecubolialeesutuluicolagen,persoanecaresedrogheaz,lapersoanelen
vrstetc.Reaciilefalspozitivepotapreaipeparcursulsarcinii.
TestulVDRLsemicantitativ,efectuatpe2probeconsecutivedeseresteutiln
urmtoarelesituaii:scdereade4oriatitruluinsifilisulrecent,tratat,semnificderegul
eficacitateatratamentuluicretereade4oriatitruluisugereazoinfecieactivnevoluie,o
reinfeciesauineficacitateatratamentului.
Altetestedefloculareutilizatenpractic
TestulRPR(RapidPlasmaReagin)esteexecutatpecarduridinmaterialplasticpe
careaparmaimultecercuride18mm.Antigenulestepreparatdintrosuspensieantigenictip
VDRLmodificat(pentruaeliminaetapadeinactivareprincldur).Reactivulconineiparticulede
crbune.AntigenulRPResteamestecatcuseruldecercetatncerculdepecard.DacaAcantiT.

pallidumsuntprezeni,secombincuparticulelelipidicedinAgiproducaglutinarealor.
ParticuleledecrbunecoaglutineazcuAciduclaapariiaunorgranulenegrepefondulalbal
cardului.nabsenaAcrezultunaspectgriuniform.Testulsepoaterealizacalitativicantitativ
(diluiideser).
TestulRST(ReaginScreenTest)
TestulUSR(UnheatedSerumReagin)
TestulTRUST(ToluidineRedUnheatedSerumTest)
AfostpuslapunctiotehnicdetipELISAcuacesttipdeantigene.
Moduldeinterpretarealtestelornontreponemicedepindeidepopulaiacareeste
testat
B.Reaciiserologicecareutilizeazantigenetreponemice
Aufostrealizateitehniciserologicecareutilizeazantigenetreponemiceextrase
dinT.Reiter(specificedegrup)detipulRFCiCIE.
Deutilitatepracticsuntreaciileserologicecareutilizeazantigenetreponemice
extrasedintulpinaNicholsdeT.pallidum,cuomarespecificitate.
Pentruolungperioaddetimp,tehnicastandardafosttestulimobilizriitreponemelor
(TPI).Tehnicaafostpuslapunctnanul1949.Seruldecercetateradiluatiamestecatcu
complementitreponemevii,mobile,obinutedinancrultesticulardelaiepure.nprezenaAc
specifici,treponemeleerauimobilizate,ntimpcenlipsaacestora,mobilitateaerapstrat
(examinareasefceacumicroscopulpefondntunecat).
Testeledeimunofluorescenindirect(FluorescentTreponemalAntibody,FTA)au
nceputsfieutilizaten1957,seruldecercetatfiinddiluat1/5.Datoritrezultatelorfalspozitive,
ulteriorsatrecutladiluarea1/200aserului(FTA200).Din1962anceputsfieutilizattehnicape
careoavemladispoziieiastzi,FTAAbs.PorninddelatulpinaReitersaobinutprin
ultrasonicareunextractantigenic,pentruandeprtaAccarenusuntspecificipentruT.pallidum.
Probeledeseri/sauLCRdelapacienisuntdiluate1/5cuunextractcareconineAgtreponemice
degrup(Reiter),comunetreponemelorpatogeneicomensale.AstfelsuntnlturaiAcnespecifici.
ExistlamepecareafostfixattulpinaNicholsdeT.pallidum.Probeledeseri/sauLCR
absorbiteimartoriicorespunztorisedepunpespoturiledepelam.Dacnser/LCRexistAc
specifici,acetiasevorlegadetreponemelefixatepelamformndcomplexeantigenanticorp.
Dupndeprtareamaterialuluinelegatprinsplrirepetate,Aclegaisedetecteazprinincubare
cuunconjugatfluorescentantiIgumane.Dupndeprtareaprinsplareaconjugatuluinelegatde
complexeleantigenanticorp,lameleseexamineazlamicroscopulcufluorescen(UV).ncazuln
careseruldecercetatestepozitiv,treponemeledepelamaparfluorescente(galbenverzui).
Testuldehemaglutinare(TreponemapallidumHemagglutinationTest,TPHA)afostpus
lapunctnurmcu30deani.nprezenaunorAcfadeAgadsorbitepemembranalor,hematiile
aglutineaznreelecaracteristiceformatedincomplexeimune.Agtreponemicesteextrasdin
tulpinaNicholsiadsorbitpesuprafaahematiilordeoaiesaupasrefixate(hematiisensibilizate).
DreptmartorsuntfolositehematiifrAgtreponemice(nesensibilizate).ncazulncarenserulde
cercetatsuntprezeniAcantiT.pallidum,hematiilesensibilizateaglutineazhematiile
nesensibilizatenuaglutineazisedepunsubformaunuibutonpefundulgodeului.Pentru
cretereaspecificitii,majoritateatruselorcomercialeincludndiluentunextractdetreponeme
nepatogene.Testulpoatefirealizatcalitativsausemicantitativ(diluiialeseruluidecercetat).

Existmetodeautomate,utilizatepentrutestareasngeluidonat.
TehnicaELISA
TehnicaELISApentrudetectareaAcdetipIgMantiT.pallidumesteutilpentru
documentareainfecieintrauterine.
TehnicaWesternblotpoatedetectaattAcdetipIgMctidetipIgG.
Aacumammaimenionat,interpretarearezultatelorobinutesefaceinndcontdecontextul
clinic,epidemiologicidelaborator.Lundnconsiderarenumairezultateledelaboratorpentru
testelemenionatenacestcapitol,arputearezultamaimultevariante.Spreexemplu,dactestul
VDRLestenegativitestulTPHAestetotnegativ,deregulinfeciaesteexclus.Dacnegndim
cpacientulesteladebutulboliiiaranticorpiisuntncnedectabili,repetmtesteledup3
sptmni.ncazulncaretestulVDRLestepozitiviartestulTPHAestenegativ,esteposibilsne
aflmnsituaiademaisus,ladebutulboliiirepetmtesteledup3sptmni.Dacrezultatele
rmnnemodificate,estevorbadeoreaciefalspozitiv.Potfiluatendiscuieialteposibiliti.

46. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Leptospira
GenulLeptospiraincludemaimultespecii,dintrecaremaicunoscutesuntL.interrogansiL.
biflexa.Leptospirelesuntspirochetefoartemobile,descriindmicrideburghiuimprimatede
dispoziiaparticularaflagelilor,cudimensiunide0,1mm/615mm,prezentnduncrliglaunul
saulaambelecapete.ncadrulspecieiLeptospirainterrogansexistpeste218serotipuri
(serovarurinterminologiaanglosaxon,deex.L.icterohaemorrhagiaeunserovarincludemai
multegrupe)carepotdeterminaboalalaanimaleiaccidentallaom.SpeciaLeptospira
biflexareunetepeste63deserotipurisaprofite.
L.interrogansestepatogenprinmultiplicareiinvazivitate.Leptospirozasecaracterizeaz
prinpolimorfism,peparcursulevoluieiaspectulclinicputndusemodifica.Dupoperioadde
incubaiede12sptmni,debutulboliipoatefimarcatdefebr,perioadncareleptospiraeste
prezentnsnge.Microorganismulsecantoneazapoinorganeleparenchimatoase(ficati
rinichi),nformaceamaigrav(sindromulWeil)putnddeterminaapariiadeicter,hemoragii,
necroztisularidisfunciideorgan.Boalaestefrecventbifazic(dupoameliorareiniial
urmeazfazaadouaaboliiremarcndusecretereatitruluideanticorpidetipIgM).Infecia
leptospiroticpoateconducerelativfrecventlameningitaseptic(culichidclar).
Diagnosticuldelaboratornleptospirozpoatefibacteriologici/sauserologic.
Diagnosticulbacteriologicesterelativdificil,laborios,respectndetapelecunoscuteiestecel
maifrecventrealizatlanivelulcentruluidereferin.
Diagnosticulpornetedelaelementecliniceiepidemiologice.Diagnosticulbacteriological
leptospirozeiestelaboriosicostisitor.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile

cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.ProdusulpatologicpoatefireprezentatdesngesauLCR(nprimele710
zile),urin(dup9ziledeladebutpnla28sptmnideboal),darsarputearecoltailichid
peritoneal,pleuraletc.Datoritfragilitiileptospirelorifenomenuluideautoliz,transportultrebuie
sfierealizatrapid,nmaxim13ore,latemperaturacamerei.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaunuipreparatproaspt
(frafolosinslamela).Preparatulseexamineazlamicroscopulcufondntunecat.Existo
seriedeproceduriutilizatepentrupregtireapreparatului.ncazullichiduluiperitoneal,LCRetc,
produsuldecentrifugheazla1.500gpentruoduratde30minute,utilizndusesedimentul
obinut.ncazulsngelui,recoltareasefacepeanticoagulant(darnucucitrat),urmndoprim
centrifugarela500gpentruoduratde5minute.Prelumsupernatantulpecarelcentrifugmla
1.500gpentruoduratde30minuteiutilizmsedimentulobinut.nacestecondiii,unmedic
microbiologcuexperienarputeastabilidiagnosticulprezumtiv.Leptospireleaparcafilamente
luminoase,spiralate,foartemobile,cumicridenurubareiflexiune,daricuouoar
deplasarenspaiu,pefondulnegrualpreparatului.
UniiautorirecomandrealizareadefrotiuricolorateGiemsaprelungitsauprinimpregnare
argentic(FontanaTribondeau),maialespentrupreparatelehistopatologiceleptospireleaparca
filamenteregulatspiralatecuextremitilefinngroatesubformdebuton,deculoaremaro.A
fostrecomandaticolorareaimunofluorescent(IFdirect)ncazulsuspicionriidiagnosticuluide
leptospiroz.nultimaperioad,porninddelap.p.(ser,urin,LCRetc)aufostpuselapuncttehnici
PCR.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeazdificil,cucosturiridicate,
datoritsensibilitiinmediulexterniparticularitilordemultiplicarealeptospirelor.Deregul
cultivareasefacelanivelulcentruluidereferinutilizndmediideculturlichidenuobinemcolonii
izolate.
Existiposibilitateainoculriip.p.lacobaisaualtanimaldelaborator,intraperitoneal.Starea
clinictrebuiemonitorizatzilnic.Identificareainfecieisepoatefaceprindiagnosticserologic,prin
izolarealeptospirelor(hemocultur)sauanatomopatologicibacteriologicdupdecesulsau
sacrificareaanimaluluirespectiv.
ncazulutilizriimediilordeculturesterecomandatcatoatep.p.sfiensmnateattpe
mediideculturselectivectineselective.MediuldeculturcelmaicunoscutestemediulKorthof
(cuaciziialcooligrai,careconineiserdeiepure),pregtindnacestscopmaimultetuburin
carensmnmcantitiprogresivedep.p.(ex.pornimdelaopictur,continumcu2picturi
etc).Mediileselectiveincludneomicini/sau5fluorouracil.
Realizmincubareala28C.Multiplicareabacteriannudeterminotulburareamediului
(apariiaturbiditiireprezintcelmaifrecventocontaminarecuoaltbacterie).Dup3zile,
respectndcustricteenormeledeasepsie,realizmpreparatenativepecareleexaminmla
microscopulcufondulntunecat.ncazulncarerezultatulestenegativ,repetmaceast
examinarelaintervaldecirca3zilepentruodurattotaldeminim4sptmni,saupnla
obinereaunuirezultatpozitiv.ngeneralcretereabacterianarelocn314ziledelamomentul
nsmnrii.
Costuliduratadiagnosticuluicrescidatoritfaptuluic,pentruidentificaresuntnecesarecel
puin12repicripeunaltmediulichid,dupdetectareamicroscopicaunormicroorganismecare

arputeafiimplicatepatogenic.Oalternativ(imaicostisitoare,utilizatmaialesdac
presupunemcontaminareaculturiicuoaltbacterie)estereprezentatdeinocularea
intraperitonealaculturiirespectivelacobai.Dup3060minute,avndnvederefaptulc
leptospireleinvadeazsistemulcirculatormairapidncomparaiecualtebacterii,dup
anesteziereaanimaluluiserecolteazsnge(prinpunciecardiac)irealizmohemocultur.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Realizmunpreparatproaspt(frafolosilamela)din
mediuldeculturilexaminmlamicroscopulcufondntunecat.Leptospirelecudimensiunide
0,1mm/615mm,aparcafilamenteluminoase,spiralate,foartemobile,cumicridenurubare
iflexiune,daricuouoardeplasarenspaiu,pefondulnegrualpreparatului.Sepotrealiza
frotiuricolorateGiemsaprelungitsauprinimpregnareargentic(FontanaTribondeau)precumiprin
IFdirect.
Caracteredecultur:
Leptospirelenepatogenesemultiplicla1113CntimpceL.interrogansnu
Caracterebiochimice:
Leptospirelenepatogenesuntrezistentela8azaguaninntimpceL.interroganseste
sensibil
Caractereantigenice:
Seutilizeazseruridereferincuanticorpifadeserogrupurilecunoscuteitulpinade
identificatizolatnculturpuriconcentratlaodensitatestandard,prinreaciideaglutinare
microscopic,lanivelulcentruluidereferincareaelaboratprotocolulstandarddeoperarenmod
similarsepoateidentificaiserovarulimplicat
Altecaractere/testeutilizatenidentificarelanivelulcentrelordereferin:
tehnicialebiologieimoleculare(amplificareaprinPCRafragmentelorobinuteprin
restricieendonucleazicetc).
5.Antibiogramanuserealizeaz(nuafostpuslapunctotehnicnacestscop).Este
cunoscutfaptulcleptospirelesuntsensibilelapenicilin,amoxicilin,tetraciclin,doxiciclinetc
dartratamentulsestabiletenfunciedeformaigravitateabolii.
Diagnosticulserologic
Anticorpiispecificisepotevidenianserulpacienilorncepndcua46azideladebutul
bolii,atingndunnivelmaximntresptmnaa36adeboal,dupcarescadprogresiv.
Tehnicadereferinestereprezentatdereaciadeaglutinaremicroscopic,realizatpeseruri
pereche(primulrecoltatla12sptmnideladebut,aldoilearecoltatla34sptmnidela
debut).Ocreterede4oriatitruluilaadouadeterminaresemnificundiagnosticpozitiv.Un
titru1/800nprezenaunorsemnecliniceestefoartesugestiv.Trebuiesmenionmcpentru
uniipacieniseroconversiaarelocmaitardiv.Oaltproblemestereprezentatdefaptulcse
utilizeazleptospireviincalitatedeAgcunoscut,motivpentrucareaceastreacienusepoate
practicadectncentruldereferin.
LanivelulaltorunitisanitaresepotpracticareaciidetipELISA,reaciadehemaglutinare
indirectsaureaciadeaglutinarepelamutilizndAgpreparatedintulpinisaprofite(sensibilitatea
ispecificitateaacestorreaciiestemaisczut).TehnicaELISAdeidentificareaanticorpilordetip
IgMpunediagnosticulinfecieiacutedarnupoatepermitedeterminareaserogrupuluiimplicataa

cumsentmplncazultehniciidereferin.

47. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Borrelia
GenulBorreliaincludespirochetededimensiunimaimari(0,20,5mm/830mm),cuspire
largiiinegale,mobile(cumicriderotaieirsucire),careinfecteaznspecialanimaleleise
transmitlaomprinintermediulunorvectori.Producspreexemplufebrarecurent,boaltransmis
deartropodelehematofage,borreliozaLymeetc.Borreliozeletransmiseprincpuesaupduche
poartdeobiceinumeleregiuniigeograficencaresegsescpreponderent.Vomdiscutancelece
urmeazaspectelegatedefebrarecurentcuagentetiologicBorreliarecurrentis,careproduce
infeciiinEuropa.
B.recurrentissupravieuietemaimulteluninsngelecontaminatsaunculturila4C.n
anumitecpue,bacteriilesunttransferatedingeneraiengeneraie.TulpiniledeB.
recurrentisizolatendiverseprialelumii,deladiferitegazdeidelavectoridiferii(cpuesau
purici)auprimitdenumirivariatesauaufostcatalogatedreptsubtipurialespecieiprincipale.n
urmainfecieiapareunrspunsimunumoral,putndfidetectaianticorpiaglutinaniianticorpi
fixatoridecomplement.Deremarcatfaptulc,inclusivndecursuluneisingureinfeciiapar
modificriantigenice,careexplicrecderile.Ultimavindecare(dup310recderi)esteasociat
cuprezenaanticorpilormpotrivamaimultorvarianteantigenice.Imunitateaconsecutivinfeciei
estedeobiceidescurtdurat.
Dupoperioaddeincubaie(310zile),debutulestebrusc,cufrisoaneicreterearapida
temperaturii.Seasociazcefaleesever,mialgii,artralgii,letargie,fotofobieitusecusaufr
expectoraie.nacesttimp,spirocheteleseaflnnumrmarensnge.Potapreahemoragii
(peteii,epistaxisetc)darderegulfrevoluiefatal.Febrapersist36zile,apoiscade.
Perioadaafebrildureaz410zileiesteurmatdeunaldoileaatacdefrisoane,febr,cefalee
intensistarederu.Potapreasuccesivpnla10asemenearecderi,acrorseveritate
scadengeneralprogresiv.Puseelefebrileseasociazcubacteriemie.
Diagnosticuldelaboratornborreliozarecurentestebacteriologic,directurmndetapele
cunoscute.Diagnosticulserologicpoateoferiuneledate.
Diagnosticulborreliozelorpornetedelaelementeclinice,epidemiologice,anumitedatede
laboratoriesteconfirmatprindiagnosticbacteriologic.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.Produsulpatologicestereprezentatcelmaifrecventdesngedarsar
putearecoltaivectori(pduchi,cpue)sauLCR,lichidsinovialetc,nfunciedemanifestarea
clinic.Sngeletrebuierecoltatnperioadelefebrile.ncazulncareproduselenusepotexamina

imediat,recomandmtransportulacestoralatemperaturafrigiderului(+4C)sauinoculareaunor
animalereceptive(ex.oareci)itransportulacestoractrelaborator.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaunuipreparatproaspt
ntrelamilamelutilizndsngelecap.p.,cuexaminarelamicroscopulcufondntunecat.
Borreliilesevdcaspirocheteluminoasededimensiunimaimari(0,20,5mm/830mm),cuspire
largiiinegale,foartemobile(cumicriderotaieirsucire),pefondulnegrualpreparatului.Se
potrealizafrotiurisubirisauexamenulpicturiigroase,colorateGiemsaprelungit,
MayGrnwaldGiemsasauWrightprecumicuacridinorangesaucuAcmonoclonalimarcai
fluorescenticuexaminarelamicroscopulcufluorescen.PefrotiulcoloratGiemsaprelungit
spirocheteleaparalbastre,lungi,cucapeteleefilate,situateprintrehematii.Examenulmicroscopic
realizatdectreunmedicexperimentatpermiteidentificareaborreliilorncirca70%dintrecazuri,n
condiiilerespectriinormelordiagnosticuluibacteriologic.
Preparatelemicroscopicearmaiputeafirealizateporninddelahemolimfavectorilorinfectai
(pduche,cpu).Demenionatfaptulcncazulacestuip.p.borreliileimeninpentruolung
duratdetimpformaimobilitateacaracteristicentimpcensngelerecoltatdelagazdauman
sufermodificridatoritprezeneianticorpilorspecifici,iarntimpipierdmobilitatea).
nultimaperioadsaintrodustehnicaPCRpentruidentificareaADNuluiborrelian,pornindde
laprodusulpatologic.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeazderegullanivelul
centruluidereferin,existndmaimultetehnicicarearputeafiutilizate.
Sepotinoculaanimaledeexperiensensibile(ex.oarecisauobolani),cuinoculare
intraperitoneal.Animalelevorfimonitorizatezilniccliniciprinexaminareamicroscopica
sngelui(p.p.sepoaterecoltadelanivelulveneicozii).Semaipotinoculavectori(pduchisau
cpue)sauouldeginembrionat(lanivelintraalantoidiansaunmembranachorioalantoidian).
Sepotutilizaimediideculturartificialespeciale(cuagenireductori,Nacetilglucozamin,
acizigrainesaturaicucatenlung,serdeiepure),ncondiiidemicroaerofilie,cuincubarela
3237C.Serecomandiutilizareamediilorselectivecareincludocombinaiedeageni
antimicrobieniprecumrifampicin,amfotericinBifosfomicin.Datoritfaptuluicmediilede
cultursuntlichide,nuseobincoloniiizolate.Cretereamicrobiantrebuieverificatprinrealizare
depreparateproaspeteexaminatelamicroscopulcufondntunecatlafiecare3zile,pentruodurat
de26sptmni.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsepoaterealizapebaza:
Caracterelormorfotinctoriale:Suntspirocheteluminoasededimensiunimaimari
(0,20,5mm/830mm),cuspirelargiiinegale,foartemobile(cumicriderotaieirsucire),pe
fondulnegrualpreparatului.PefrotiulcoloratGiemsaprelungitspirocheteleaparalbastre,lungi,cu
capeteleefilate.
Caracterelordecultur:
Dacarelocmultiplicareaborreliilorpemediuldeculturacestarmnelimpede,fr
sediment,darimodificculoarea(ex.vireazdelarouportocaliusprerozglbui)
Caracterelorbiochimice:
Borreliilesuntmicroaerofile,fermenteazglucozaproducndbioxiddecarboniacid
lactic(daracestetestenusuntutilizatederegulndiagnostic).
Altecaractere/testeutilizatenidentificarelanivelulcentrelordereferin:

tehnicialebiologieimoleculare(PCR).
5.Nuafostpuslapunctometodpentrurealizareaantibiogramei(verificareasensibilitiila
antibioticeichimioterapice).Febrarecurentsetrateazcutetraciclin,cloramfenicol,penicilin
saueritromicin.nurmatratamentuluipoateapreasindromulJarischHerxheimer(frisonsever,
cretereatemperaturii,hipotensiune,leucopenie).
Diagnosticulserologicnuestefoarteutil,datoritvariaiilorantigenice(careaulocinclusivpe
parcursulbolii)icomplexitiifenomenuluiderecuren.
nserpotfidecelaianticorpiaglutinani,imobilizaniifixatoridecomplement.Suntfoarte
puinelaboratoarecarepracticacestereacii,deobiceinscopdecercetare.Lapacieniicufebr
recurentepidemic(purttoridepduchi)potapreaaglutininefadeProteusOXKioreacie
VDRLfalspozitiv.
Sepoatenregistraoleucocitozdepnla25.000celule/mm3iocretereimportanta
VSHului(depnla110mm/h).

48. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din familia Rickettsiaceae

Rickettsiilesuntmicroorganismecareiniialaufostncadrateprintrevirusurideoareceau
dimensiunimaimicidectbacteriile(600/300nm)inmajoritatenusepotcultivadectpegazde
vii.FamiliaRickettsiaceaeincludetreigenuri,genulRickettsia,genulCoxiellaigenulEhrlichia.
Microorganismelesunttransmisedeobiceidectreartropode(pduche,purice,cpu)
multiplicndusencorpulacestora.Celpuinpatrurickettsii(Rickettsiarickettsii,Rickettsia
conorii,Rickettsiatsutsugamushi,Rickettsiaakarii)iprobabilialtelesunttransmisetransovarian
nartropodecareservescdeopotrivcavectorirezervor.Rickettsiaprowazeckii,agentuletiologic
altifosuluiexantematicesteconsideratcaspeciatipagenuluiRickettsia.ncelemaimulte
cazuri,rickettsiozelesecaracterizeazprinasociereaunuisindrominfeciossevercuunexantem.
Clasificarealorsepoatefacedupmaimultecriterii.Dupprincipalelecaractereclinicei
epidemiologicerickettsiozelesepotmprinurmtoarelegrupe:a).tifosuldepduchesaupurice
b).grupulfebrelorbutonoase(febrelepeteiale)reuneterickettsiozeletransmiseprincpuecare
paraziteazanimaleledomesticeislbaticec).grupultifostropicalreunete
rickettsiozeletransmisedelarveleunormiciacarieni.TifosulpulmonarsaufebraQarecaagent
etiologicCoxiellaburnetiipoatefitransmisidecpue,contaminareaestensposibilipe
calerespiratoriesaudigestiv.
Microorganismelesemultiplicnceluleleendoteliuluivaselorsanguinemiciiproduc
vasculite.Celuleleseumflisenecrozeaz,apartrombozealevaselorcareduclarupturi
necroz.Leziunilevasculareparafibazaalterrilorhemostazei.Potapreacoagulare
intravasculardiseminatiocluziivasculare.Lanivelcerebralaparagregrilimfocitare,leucocitare

ialemacrofagelorceeaceconducelaapariianodulilortifici.Seobservleziunisimilarenvasele
micilanivelcardiacsaulanivelulaltororgane.Infeciilerickettsienesecaracterizeazprinfebr,
cefalee,indispoziie,prostraie(staregeneralfoartealterat),rash(erupie)cutanatimrirea
splineiificatului.nfebraQnuexistleziunicutanate.
VomdiscutancontinuaredesprediagnosticulfebreiQdeiCoxiellaburnetiipoateproducei
unsindromfebrilautolimitat(214zile),endocardit,hepatit,osteomielitetc.FebraQsepoate
manifestaprinpneumonieatipic,pneumonierapidprogresivsaupneumoniencaresemnul
principalestereprezentatdefebr(simptomatologiapulmonarfiindabsentiarimplicarea
pulmonarputndfidemonstratparaclinic).Pornimdelaelementeclinice(nespecifice),
paracliniceidelaboratorincercmstabilireaetiologieiprindiagnosticmicrobiologic
(bacteriologiciserologic).Obinereadehemoculturiisputoculturinegativepentrualte
microorganismeesteunelementcarencontextulcliniciparaclinicreprezintunelement
sugestiv.
Diagnosticulbacteriologic
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.Produsulpatologicestereprezentatcelmaifrecventdesputputem
recoltaisnge(arfidepreferatcheagulsanguin),lichidpleural,lichidpericardic,fragmentede
placent(ncazulunuiavort)etc.Transportultrebuierealizatrapidincondiiidemaxim
siguran(ceeacetrebuierespectatntoateetapelediagnosticuluibacteriologic
microorganismeledinfamiliaRickettsiaceaeprezintungradnsemnatdeinfeciozitateprin
aerosoli).ncazulncarep.p.nupoatefiprocesatiinoculatimediatesterecomandatmeninerea
la20C(inclusivpeparcursultransportului).
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicesterareoriutilpentrudiagnostic.n
sput,maialesdacesterecoltatprinbiopsietransbronic,putemremarcaprezena
macrofageloralveolareiarprintreacesteaprezenaunorcocobacilidedimensiunimici.Porninddela
genapentrusuperoxiddismutazaufostobinuiprimeri(amorse)utilizainamplificareagenetic,
porninddelaprodusulpatologic.
3.Cultivareapeprodusuluipatologicsepoaterealizanumaipegazdevii,lanivelulunui
laboratordereferin.Trebuieluatetoatemsuriledeprevenireauneiinfeciinlaborator.Coxiella
burnetiipoatecultivapeanimaldelaborator(cobai),culturidecelulesauoudeginembrionat(la
nivelulsaculuivitelin).nafardep.p.menionatemaisusamputeafolosipentruinocularei
artropode.LanivelulsaculuivitelinC.burnetiisuferovariaiedefaz,ntructvasimilarvariaieide
laformaSlaformaRntlnitlaaltebacterii.TulpinilerecentizolatesuntnfazaIntimpcedup
subcultivareseobintulpinicuvirulensczut,nfazaII.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizaastfel:
Caracteremorfotinctoriale:
evideniereaprinimunofluorescendirectamicroorganismelornhemolimfaanimalelor
infectatesaulanivelulsaculuivitelinalouluideginembrionat
realizareadefrotiuricolorateprinmetodaGimenez(microorganismeleapardeculoare
roiepefondulverdealfrotiului)sauMachiavello(microorganismeleapardeculoareroiepefondul
albastrualfrotiului)sepoateutilizaimetodaGiemsa
EvaluareaprezeneianticorpilorantiC.burnetiilaanimaleledelaboratorinoculatecu

p.p.
Tehnicialebiologieimoleculare(PCR)etc.
5.Testareasensibilitiilaantibioticenuserealizeazderutin.Cercetriefectuatedup
cultivareaC.burnetiipeliniidecelulefibroblasticeL929aupermisautorilorsafirmectulpinile
studiateaufostsensibilelachinolone(nspecial)irifampicindarmaipuinlacloramfenicol,
doxicilinitrimetoprim.Totui,tratamentulfebreiQsepoatefacecusefacecutetraciclinsau
macrolidenasocierecurifampicin.
Diagnosticulserologic
Datoritdificultiiiriscurilordiagnosticuluibacteriologic,celmaifrecventnpracticse
utilizeazdiagnosticulserologic.ExistmaimultetehnicidelaboratorcarepotfiutilizatedarRFC
rmnencontinuaremetodadereferin.Ocreterede4oriatitruluilaa2adeterminareajutla
punereadiagnosticuluipozitivnfebraQ.Maiputemutilizareaciademicroaglutinare,reaciade
microimunofluorescenindirect,otehnicdetipELISAsaureaciadelatexaglutinare(pozitivn
infeciaacut).Reaciademicroimunofluorescenindirectprezintunnivelridicatdesensibilitate
ispecificitatencondiiilencarepersonaluldelaboratorestebinepregtitiareexperienn
acesttipdediagnostic.nceeaceprivetedepistareaspecificaAcdetipIgM,nacestcaznu
esteutildeoareceIgMpotpersistantre1i2anidupinfeciaacut.
ndiferitestudiiepidemiologiceafostutilizatireaciadeseroneutralizare.Injectndla
oareceserspecificantiC.burnetii,acestavaneutralizaefectulinoculriidemicroorganismeviipe
caleintraperitonealsauintravenoas.Pentruultimametodreamintimnecesitatealuriituturor
msurilordeprevenireauneiinfeciiapersonaluluidelaborator.

49. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Chlamydia

Chlamydiilesuntbacteriidedimensiunimici(0,251mm),gramnegative,strictparazite,

imobile,caresemultiplicncitoplasmacelulelorgazdprintruncicludedezvoltarecaracteristic.
Datoritimportaneipentrudiagnostic,vomprezentacicluldedezvoltarealchlamydiilor.Dupce
ptrundeninteriorulceluleigazd,particulainfecioas(corpuscululelementar,formcocoid,cu
diametrulde0,250,3mm)setransformntroparticulmaimare(corpusculreticulat,cudiametrul
de0,51mm).Corpusculiireticulaisereunescisemultiplicprindiviziunebinar,formndcolonii
(incluzii)intracitoplasmatice.Dupoperioadvariabilnfunciedespeciadechlamydiiide
celulaparazitat,delanivelulincluziiloraparnoicorpusculielementari,caresuntexpulzai,urmnd
sparazitezealtecelule.ntregulcicludureaz2448ore.
Genulconinetreispeciicarepotfiimplicatenpatologiauman.Deregulinfeciaeste
subclinic,boalareprezentndoexcepielagazdelenaturalealeacestorgermeni.Transmitereade
lapsrilaomfavorizeazapariiabolii.C.trachomatisproduceincluziicompacte
intracitoplasmatice,cuglicogen.Includetulpinicaredeterminpneumonielaoareceicteva
afeciuniumane:trahom(serovarurileA,B,BaiC),conjunctivite,uretritenongonococice,
salpingite,cervicite,pneumoniilanounscui(serovarurileDK)ilimfogranulomatozavenerian
(serovarurileL1L3).C.psittaciproduceincluziiintracitoplasmaticedifuze,sracenglicogen.
Includetulpinicaredeterminpsitacozauman,ornitozelapsri,meningit,pneumonielafelinei
multealteafeciunialeanimalelor.(provoacinfeciilaanimaledarpoatefitransmisomului).C.
pneumoniaepoateprovocalagazdaumanpneumoniiatipicelafelcaiC.psittaci,Coxiella
burnetiisauMycoplasmapneumoniae.UniiautoriclasificC.psittaciiC.pneumoniaen
genulChlamydophila.
Diagnosticuldelaboratorninfeciilechlamydienepoatefibacteriologiciimunologic.
Infeciozitatea(prinaerosoli)esteimportantastfelctrebuieluatetoatemsurilenecesarepentru
prevenireaapariieiunorinfeciilapersonaluldelaborator.
Diagnosticulbacteriologic
Diagnosticulbacteriologiccompletpoatefirealizatlanivelulunorcentredereferin.
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapieiirespectndmsuriledeprecauie.Produsulpatologicpoatefireprezentat
deraclatconjunctivalsaudelanivelulaltormucoase(ex.cervival),urin,sperm,secreie
purulenturetral,secreiinazale,secreiifaringiene,sput,aspiratganglionar,puroidinfistuletc.
NevomreferincontinuareladiagnosticulinfecieiprodusedeC.trachomatis.ncazulncarespre
ex.secreiauretralnuesteevident,putemutilizauntamponsubirepecarelintroducemcu
blndee35cmnuretr,rotinduluor.Indiferentdep.p.recoltat,tampoanelenutrebuiesfiedin
vatsaualginatdecalciucidinDacron.Produsultrebuiesfieprelucratimediat.Dacacestlucru
nuesteposibil,transportulsevafacenmediispecialedetransportsaulacelpuin20C
(preferabil70C).
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicincluderealizareaunorfrotiuripecarele
colormdupcumurmeaz.Ceamaisensibilispecificmetodpentrupunereanevidena
incluziilorintracitoplasmaticesaucorpusculilorelementariesteimunofluorescena.Frotiuleste
uscat,fixatchimic(cuaceton,la20C)icoloratimunofluorescent(metodadirectsau
indirect).Urmrimprezenacelulelorinflamatorii(PMN)iacelulelorcaracteristiceesutuluidela
nivelulcruiaamrealizatrecoltarea.Incluziileaparcaomasbinedefinit,cufluorescendeex.
galbenverzui,ninteriorulcelulelorepiteliale.Frotiulvafiexaminatcelpuin3minutencazuln

careparesfienegativ.nafardeCelelaltefrotiurileputemcoloraprinmetodaGimenez
(corpusculiielementariaparaglomeraiideculoareroiepefondulverdealfrotiului),culugol
(incluziiledeC.trachomatisconinglicogenaparcaomasdeculoarebrun)sauMachiavello
(corpusculiielementariaparaglomeraiideculoareroiepefondulalbastrualfrotiului).Uniiautori
menioneazcexamenulcitologic,cupunereanevidenaunorlimfocitetransparenteiaunui
numrcrescutdehistiociteestesugestivpentruinfeciacuC.trachomatis.Printehnicidetip
ELISAsepotpunenevidenantigenenp.p.Existitehnicialebiologieimolecularecarepotfi
aplicatedirectpep.p.(sondenucleotidice,PCRetc).
3.Pentrucultivareaprodusuluipatologicamputeautilizaouldeginembrionat(lanivelul
saculuivitelin)darderegulsefolosescculturiledecelule.PentruChlamydiatrachomatissepot
utilizaliniilecelulareBGMK,HeLa229(tratatecudextranicicloheximid),McCoy(tratatecu
cicloheximid1mg/ml),pentruChlamydiapneumoniaesepotutilizaliniilecelulareHeLa,HEp2,
pentruChlamydiapsittacisepoateutilizaliniacelularMcCoyetc.naintedeinoculareapeculturile
decelule,p.p.estecentrifugat(3000g,timpde60minute).Sepotutilizaculturiledecelulen
sistemulclasicsaumicrometodadecultivarepeculturidecelulengodeuri.Incubareadureaz
4872deore.Tehnicaincubriiestedestuldecomplex(incubrirepetate,ncondiiidiferite)i
trebuiesrespectestrictprotocoluldelucru.
4.Identificareasevarealizadifereniat.ncazulncaresautilizatmicrometoda,godeurilese
examineazmicroscopicdupcolorareculugolsauprinimunofluorescen.ncazulcultivriiprin
metodaclasic,realizmfrotiuripecarelefixmchimic(deex.cumetanol).Unfrotiuvaficolorat
culugol(incluziiledeC.trachomatisconinglicogen)iaraltulcuAcmonoclonalimarcai
fluorescent.Sepotaplicaitehnicidebiologiemolecular.
5.Nuexisttehnicistandardizatedestabilireasensibilitiilaantibioticeichimioterapicea
tulpinilordeChlamydiaspp.ntratamentsepotfolosieritromicina(saualtemacrolide),tetraciclinele
saufluorochinolonele.
Diagnosticulserologic
Diagnosticulserologicimplicutilizareareacieidefixareacomplementului,reacieide
microimunofluoresceniatehnicilordetipELISA.Seconsidercuntitru1/64estesugestivn
timpceocreterede4oriatitruluindinamicpermitediagnosticulpozitiv.Identificareaprezenei
AcdetipIgMlanounscuipermitediagnosticuldepneumoniecuC.trachomatis.Tehnicile
imunologicesuntfrecventutilizatenscopepidemiologic(studiideseroprevalen).
Diagnosticulimunobiologic
Utilizareaintradermoreaciei(IDRFrei)aintratnistoriamedicinii.

50. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Mycoplasma

ClasaMollicutesincludepatruordine.OrdinulMycoplasmataceaeinclude
genurileMycoplasma(circa100specii)iUreaplasma(6specii).Ctevadintrespeciileacestor
genuriprezintinteresmedical.Mycoplasmelesuntcelemaimicimicroorganismecarepottriliber
nnatur(125250nm)isepotmultiplicapemediidelaborator.M.pneumoniaeesteimplicatn
infeciirespiratorii,M.hominispoateproduceinfeciiculocalizaregenitalinclusivinfecii
postabortumipostpartumntimpceU.urealyticumafostizolatdinuretritenongonococicei
dinalteinfeciiurogenitale.
Diagnosticuldelaboratorpoatefibacteriologici/sauserologic,nfunciedelocalizarea
infecieiispeciaimplicat.
Diagnosticulinfeciilorrespiratoriipornetedelaelementecliniceiparacliniceipoatefi
confirmatetiologicprindiagnosticulmicrobiologic.
Diagnosticulbacteriologic
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndregulile
cunoscute(vezicapitolul6),nspecialrecoltareactmairapiddupdebutulboliiinaintede
iniiereaantibioterapiei.Produsulpatologicpoatefireprezentatdeexsudatfaringian,secreiinazale,
sput,secreiigenitale,urinetcdarncontinuarevomdiscutanumaidiagnosticuldelaboratorn
infeciilerespiratorii.Transportultrebuierealizatlarece(la+4C)ctmairapidposibil,fradepi
unmaximde34oredelarecoltare.Oalternativestereprezentatdeutilizaremediilorspecialede
transportcarepotasiguraconservareap.p.pentrucelmult24deore.Utilizareaazotuluilichid(70
C)permiteconservareaprobelortimpdemaimulteziledarnuestencaccesibil(cufoartepuine
excepii)sistemuluisanitarromnesc.
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicnupermiteobinereaunorrezultateutile,M.
pneumoniaecaicelelaltespeciialeordinuluiaredimensiunifoartereduse.Uniiautorirecomand
realizareadefrotiuricolorateimunofluorescent.Porninddelap.p.sarputearealizaamplificarea
genetic(PCR)cuosensibilitatefoartebun.PrintehnicidetipELISApotfipusenevidenAg
deM.pneumoniaensput.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicsepoaterealizautilizndtehnicii
mediispeciale.Unuldintremediiledeculturcunoscutestemediulmbogit,pebazdeinfuziede
cordbovinnumitgenericPPLO.Acestmediuincludeattsubstanenutritive,sursedeenergie,
indicatordepH(roufenol)ctisubstanecareiasigurselectivitatea(penicilini/sauacetatde
taliu).Ceimaimuliautorirecomandnsmnareap.p.attpeunmediudecultursolidctipe
unmediudeculturlichid(ex.bulionPPLO).Vomrealizaoincubarela37Cnatmosferde5%
CO2iurmrimculturilepemediullichidpentruasesizactmairapid(darnumaidevremede
4872oredeincubare)modificriledeculoarecaretrdeazvirajulpHului.Mediuldevineacidprin
fermentareaglucozeincelmult34sptmni.Esterecomandatsrealizmrepicripemedii
solideilichidectmaicurnddupceamobservatvirajulpHului.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
CaracteremorfotinctorialenusuntutilenidentificareaM.pneumoniae
Caracteredecultur:
Sepotexaminalastereomicroscop(cumriredeminim25).nscopulidentificrii
trebuiescitimplacacumediuagarizatdecelpuin2oripesptmn.Potapreacoloniide
dimensiunifoartemici(cudiametrudela10mmpnla200mm),cuaspectmuriform.Sunt

descriseicoloniicuaspectdeouochi,cucentruldens,opac,nconjuratdeozonperifericmai
clarpecareuniiautorileconsiderdrepttipicepentruMycoplasma(astfeldecoloniiarmaiputeafi
produsedebacteriinformLinecesitrealizareadiagnosticuluidiferenial).
Sepoaterealizaicultivareapeouldeginembrionat(inoculareintravitelin)saun
culturidecelule.
Caracterebiochimice:
Fermenteazglucoza,numetabolizeazarginina,nuhidrolizeazureeadarreduce(n
aerobioz)tetrazoliul.Acestaesteuncompusincolor,iarncazulncareestereduslaformazan,
culoareadevineroie.Testulsepoaterealizadirectpeplacapecarepresupunemprezena
coloniilordeM.pneumoniae.
Altecaracterecarearputeafiutilizatenidentificaresunt
Fenomenuladsorbieihematiilordecobai
Colorareaimunofluorescentacoloniilorcuserurispecificemarcatecufluorocromi
Inhibareadezvoltriicoloniilornjurulunordiscuriimpregnatecuanticorpispecifici
Tehnicialebiologieimoleculare(sondenucleotidice,PCR)etc.
5.Nuexistostandardizareatehnicilorpentrudeterminareasensibilitiilaantibioticei
chimioterapice.TratamentulpneumonieicuM.pneumoniaesepoatefacecueritromicinsaualte
macrolidesaucutetracicline.Duratatratamentuluiestedecirca3sptmni.
Diagnosticulserologic
ncursulinfecieiseproducAcdindiferiteclase,uniifiindutilipentruneutralizareaM.
pneumoniaentimpcealiiacioneazcaautoAc.Dintreacetia,aglutininelelarecesuntAcde
tipIgMoligoclonalicarereacioneazcuunAgdelasuprafaahematiilorpacienilorinfectaicuM.
pneumoniae.Cutoatecexistialtemaladiincareaparaglutininelarece,iarpedealtparte
acetianusepotidentificalatoipacieniiinfectaicuM.pneumoniae,demonstrareaaglutininelorla
rececontinusfieutilndiagnosticulserologic.Utilizmserulpacientuluipecarelamestecm
cueritrociteprovenitedelapacienidegrupO,incubmla0Cctevaminuteiurmrimapariia
aglutinrii.Dacapareaglutinarearepetmtestulrealiznddiluiideserpentruadeterminatitrul.
Untitru1/32estesugestivpentruinfeciacuM.pneumoniae.
SepoateutilizaiRFC,darpentrucAcfixatoridecomplementapartardivesteutilnstudii
epidemiologice.TehnicadetipELISApoatedeterminaAcdetipIgMiesteutilninfeciaacut.

51. Diagnosticul de laborator n infeciile produse

de microorganisme din genul Candida
Diagnosticulinfeciilorfungicenuesteundiagnosticfacil,darestefoarteimportantpentruc

trebuiesavemnvederecacesteafeciunisuntmultmaifrecventedectsuntraportatenara
noastr.Oricarelaboratorclinicartrebuispoatrealizacelpuinexaminareamicroscopicn
vedereaevidenieriilevurilorsaustructurilormicelienesaupseudomicelieneprecumitestul
filamentrii.Dintreinfeciilefungicevomdiscutadoardespreinfeciileprodusedelevuriidintre
acesteanumaidespreinfeciileprodusedelevuriledingenulCandida,maiprecisdespeciaCandida
albicans.
nceeaceprivetediagnosticuluneiinfeciicuCandidaspp.(respectivC.albicans)exist
anumiteparticularitidecaretrebuieinutcontatuncicndsediagnosticheazocandidoz
localizatlanivelmucocutanatncomparaiecuocandidozlocalizatprofund.Diagnosticulpoate
fimicologic(direct)sauimunologic(indirect).
Diagnosticulmicologic
1.Recoltareaitransportulprodusuluipatologictrebuiesserealizezerespectndoseriede
reguli(ctmaiaproapededebutulbolii,naintecapacientuluisfiprimitantibioticeantifungice,ct
mairapidicorectdinpunctdevederealtehnicilorutilizate,respectndtoatenormeledeasepsie
iantisepsieetc).ncazulcandidozelorsuperficiale,dupantiseptizareasuprafeeileziuniiraclm
spreex.tegumentulicolectmscuamelerezultatentrunrecipient.Maiputemrecoltafiredepr,
fragmentedeunghieetc.nprincipiuputemintroducep.p.recoltatnpachetdehrtie,introdusla
rndulluintrocutiePetri.Transportultrebuiesdurezemaxim48deore.ncazul
candidozelorprofundecaincazulcandidozelorlocalizatelanivelulmucoaselortrebuies
evitmuscareap.p.peparcursultransportului.Vomutilizarecipientecaresepotnchideermetici
dacestimmctransportulvaduramaimultde12oreintroducemnrecipientuntampondevat
sautifonumezitcusoluiesalinfiziologic.Pentruaprevenimultiplicareabacterianputem
adugap.p.antibiotice(ex.penicilin,streptomicin,cloramfenicol).Estebinecavolumuldep.p.
recoltatsfiectmaimare.ncazulcandidozelorprofundeprefermcarecoltareasfie
urmatimediatderealizareapreparatelormicroscopiceinsmnarepemediidecultur(lapatul
bolnavului).
2.Examinareamicroscopicaprodusuluipatologicserealizeazdiferit,nfunciedep.p.
prelucrat,darfacepartedinoriceexamenmicologic.
ncazulncareexaminmosecreiesauunprodusobinutprinraclaredelanivel
tegumentarsaufragmentedeunghievomrealizaunpreparatproaspt(umed),montatnsoluiede
1030%KOHglicerol.Putemutilizapentrucolorarecalcofluoralb,unfluorocromcarepermite
evidenierealevurilordatoritfaptuluicauncompoziiechitin(lanivelulpereteluicelular).
Elementelefungice(levuriovoide,cudimensiuneade4/6mm,pseudomiceliiimicelii)apar
galbenverzuisaualbalbstruinfunciedelungimeadeundaradiaieideexcitaie.Punerean
evidenaformaiunilormenionatemaisuspermitesuspicionareaprezeneiCandidaspp.,dar
pentruconfirmareaprezeneiC.albicansestenecesarobinereaculturilorpureiidentificarea
acestora.
ncazulncareexaminmsecreiidelanivelulmucoaselorvompregtiattpreparate
umedectifrotiuripecarelevomcolora(Gram,AMsauGiemsa).Pentrucretereasensibilitii
examinriipreparatelorumede,acesteavorficoloratecucalcofluoralbsauculactofenolalbastru
cotton.Indiferentdemetodautilizat,punereanevidenalevuriloripseudomiceliilorridico
suspiciune,nsdatoritprezeneiCandidaspp.,nfloramicrobiannormal(ex.bucal,vaginal
etc)doarpunereanevidenamiceliiloralturideprezenaformelorlevurice(grampozitivela

coloraiaGram)poatepermiteconfirmareainfeciei.Estenecesarobinereaculturilorpurei
identificareaacestora.Pedealtparte,dorimsmenionmcoculturpozitivnabsenaunui
examenmicroscopicpozitivridicsemnedentrebareprivinddiagnosticulinfeciecuC.albicans.
ncazulcandidozelorprofunde,interpretareasevafacedifereniat.Atuncicndp.p.este
normalsteril(recoltatprinpuncielombar,lavajbronhoalveolar,punciebiopticetc),identificarea
structurilorfungice(levuri,micelii)estefoarteimportantpentrudiagnostic.Dacp.p.este
reprezentatdeurin,materiifecale,sputsaualtproduspotenialcontaminatdefloramicrobian
normal,interpretareaestemaidificilnceeaceprivetesemnificaiastructurilorfungice
observate.Pentruexaminareap.p.recoltatedelapacienicareprezintcandidozeprofundevom
realizaattpreparateumedectifrotiurifixate,colorateprinmetodeleamintite.Esteposibilca
elementelefungicesapardeformatedatoritfixriiprecipitatelordecolorant,pefrotiulcolorat
Gram.ncazulbiopsiilortisulareamputeautilizacoloraiilehistochimice.
3.Cultivareapemediideculturaprodusuluipatologicserealizeaznaafelnctsse
poatobinecoloniiizolateirespectivoculturpur,caresevaidentifica(veziicapitolele9i
10).Existmaimultemediideculturcarepotfiutilizate.Celmaicunoscuteste
mediulSabouraud(agar,glucozsaumaltoz,polipepton)produsideINCDMICantacuzino.n
cazulp.p.contaminatevomfolosiimediiselective,deex.mediulSabouraudcuantibiotice
(cloramfenicol,gentamicini/sautetraciclin)i/saumediulSabouraudcucicloheximid.Dorims
menionmcncazulp.p.necontaminaterealizmcultivareanumaipemediulSabouraud
neselectivntimpcencazulp.p.contaminatevomrealizacultivareaattpemediulneselectivct
ipemediileselective.Putemincubaplcilela2230C,darmaifrecventincubareaserealizeaz
la28C(saulatemperaturacamerei)ila3537C,timpde2496orencazulcandidozelor
superficialeipnlamaxim3sptmnincazulcandidozelorprofunde.
4.Identificareamicroorganismuluiimplicatpatogenicsevarealizapebazamaimultor
caractere:
Caracteremorfotinctoriale:Examenulmicroscopicalculturilordelevuriserealizeaz
asemntorcuceeaceamdiscutatncazulidentificriibacteriilor.Existnsianumite
particulariti.
Vomrealizaattpreparateproaspete,coloratedeex.culactofenolctifrotiurifixatei
colorate.Vomputearemarcaprezenalevurilor(blastoconidii),rotunde,ovoidesaupuinmai
alungite,grampozitive,putndprezentamuguriipseudomicelii.Prinexamenulmicroscopic
dovedimipuritateacoloniei.
Duprepicareapeagarcufindeporumbsauagarcuextractdecartof(mediisrace
dinpunctdevederenutritiv),examinareamicroscopicapreparatuluiproasptvademonstra
producereadechlamidoconidii(chlamidospori)careaparlaextremitateapseudomiceliilor.
Testulestenegativnnumai34%dintrecazuri.
Caracteredecultur:
ProduccoloniidetipS,rotunde,bombate,netede,asemntoarecuunelecolonii
bacterienedarcudimensiunimaimari.Coloniileaparn14zile,auoculoarealbsaualbglbuie
iconsistencremoas.ntimpsuprafaacoloniilorcaptunaspectzbrcit.
Caracterebiochimice:
Auxanograma:Levurileprezintunanumitechipamentenzimaticcuajutorulcruiapot
sutilizezeunanumitcarbohidratcaunicsursdecarbon.Dezvoltareapeunmediuncareeste

inclusunsingurcarbohidratdemonstreazutilizareaacestuiacaunicsursdecarbon.nmod
asemntorsepoatetestacapacitateaasimilriiunorsubstaneazotate.C.albicansasimileaz
glucoz,maltoz,trehaloz,galactozetc(veziicapitolul12).
Zimograma:Testareafermentriiunorcarbohidrai
UtilizareaunortesteprodusecomercialprecumAPI20C,API32C,Viteketc
Relativrecentaufostpuselapunctmediicromogene(ex.CHROMagar)caretesteaz
producereaanumitorenzimeisuntutilenidentificareaC.albicans,C.kruseiiC.tropicalis.
Caractereantigenice:
Sepotutilizareaciadeaglutinarepelam,reaciadelatexaglutinaresauELISA
folosindantiseruricunoscute.Ultimeledoutehnicisuntfolositeinscopulidentificriiprezenei
AgdeCandidaspp.ndiferitep.p.
Caracteredepatogenitate:
Porninddelaoculturde24deorenmediulSabouraudlichidseparmsedimentuli
realizmosuspensie0,2%aacestuiansoluiesalinfiziologicsterilinoculmnvenelecoziila
unlotdeoareci(cte0,20,8mlpentrufiecareanimal)suspensiaobinutiurmrimevoluia
animalelortimpde410ziledacestevorbadeotulpindeC.albicanspatogen,animalelevor
muridupcirca1sptmn(anatomopatologicvomputeaevideniaabcesemiliarerenale,
splenice,hepatice)etc.
Altetestecepotfistudiatenscopulidentificriigermenilor:
Testulfilamentrii(testulproduceriidetubigerminativi):Verificmcapacitatea
blastoconidiilordeaproduce,nanumitecondiii,tubigerminativi.Repicmtulpinadestudiatpe
mediicareconinserdeiepuresaudeberbec.Laintervalede60deminuterealizmpreparate
proaspete(ntrelamilamel),examinmmicroscopicpentruaidentificaapariiatubilor
germinativi.C.albicansproducenmaxim4orepseudofilamente(tubigerminativi)relativscurte,
frstricturi,cuacelaicalibru.
Detectareaunormetaboliipringazlichidcromatografie(GLC)
Testedebiologiemolecular(sondenucleotidice,PCR).
5.Antifungigrama(verificareasensibilitiilaantibioticeichimioterapicenvedereastabilirii
tratamentului)afostpuslapunctrelativrecent.Eforturiledepusenvedereastandardizriiacestei
tehniciauavutlabazcretereainteresuluifadeinfeciilefungiceprecumiapariiafenomenului
derezistenlamedicamenteleantifungiceatulpinilorizolate.MetodarecomandatdeNCCLSeste
ceaadiluiilornbulion.
Diagnosticulimunologicpoatefiserologiciimunobiologic.
Diagnosticulserologic
Cutoatecoseriedeautoriconsiderdreptnerelevantacesttipdediagnostic,diferitestudii
aratcidentificareaititrareaAcantiC.albicanspoatefiutilndiagnosticulcandidozelor
profunde.IniialaufostutilizatetehnicideaglutinarepentrudetectareaprezeneiAcantimanan.
UlterioraufostpuselapuncttehnicipentrudetectareaprezeneiAcfadeAglocalizaten
citoplasmaC.albicans.Aufostutilizateimunodifuziangel,contraimunoelectroforeza,ELISAi
tehnicadelatexaglutinare.
Diagnosticulimunobiologic
Intradermoreaciacucandidinestepozitivlapractictoatepersoaneleadulte,fiindastfelutil
nundiagnosticareauneiinfeciicuCandida,cinapreciereaRIC.Semaipoateutilizatestul

transformriiblasticealimfocitelornprezenaunorAgdeC.albicans.
Trebuiesmenionmcexistoseriedeproblemeprivindstandardizareaiinterpretarea
tehnicilordiagnosticuluiimunologic.Cutoatecprinacestemodalitiutilizateizolatnuputem
punediagnosticuldecandidoz,interpretareaansambluluirezultatelordelaboratorobinutepoatefi
defolosnelucidareaimplicriipatogeniceatulpinilordeCandidaalbicans.