Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Bucureşti
Facultatea de Biotehnologii
Student masterand:
Constatin Doina
Bucureşti
2020
1
CUPRINS
1.INTRODUCERE.....................................................................................................1
moderne....................
2
4.4.1. Sursa de explante.......................................................................................…
5. REFERINŢE BIBLIOGRAFICE....................................................................................
3
1.INTRODUCERE
Incadrare sistematica:
Regnul: Plantae
Increngatura: Magnoliophyta
Clasa: Magnoliopsida
Ordinul: Rosales
Familia: Rosaceae
Genul: Rosa
Figura 1 – Maces
(sursa https://hypericumimpex.ro/maces-rosa-canina/)
4
2.Substanţe Biogene din specia Rosa canina
(sursa https://www.nutripharm.ro/2017/08/macesele-compozitie-utilizari-si-posibile-interactiuni-
cu-medicamentele/)
Recoltarea fructelor începe în luna septembrie şi se poate face până la apariţia primului
îngheţ.
Maceşele recoltate trebuiesc prelucrate cat mai repede sau conservate pentru păstrarea
principiilor active, respectiv prin uscare (metoda cea mai utilizată) la temperaturi înalte sau
congelare.
5
Princialul element valoros al maceşului din punct de vedere al substanţelor cu activitate
biogena este fructul (Fructus cynosbati) ce se face remarcat prin conţinut ridicat de Vitamina C(acid
ascorbic), carotenoide cu β-caroten, licopen şi izomeri ai rubixantinei –ca provitamine A, vitaminele
E, K, PP, D, B1, B2, zaharuri simple, pectine, taninuri, acid malic, acid citric, terpenoidele
reprezentate prin glicozide ale acidului oleanolic, b- sitosterolului,( glicozidele A, B şi C ), linalool,
citronelol, geraniol, nerol.
Sunt autori care susţin că măceșele provin de la mai multe specii de Rosa. În această
variantă, pe lângă Rosa canina L. (Rosaceae) este vorba de alte câteva specii din același gen,
cunoscute în România: Rosa gallica L. – răsură, trandafiraș, trandafir de câmp, Rosa pendulina L. –
măceș de munte, trandafir de munte, Rosa rugosa Thunb. – trandafir de dulceaţă , dar şi de specii
din zone îndepărtate: Rosa dahurica, Rosa acicularis, Rosa Beggeriana, Rosa Fedtscenkoana, Rosa
cinnamomea. Dacă se ia în considerare și observaţia că măceșele recoltate de la Rosa canina sunt
sărace în vitamina C, cu menţiunea că au un conţinut de numai 0.20–0.80%, sau de 0.1–1% acid
ascorbic, se ajunge la realitatea că, în unele teritorii mai îndepărtate, există alte câteva specii de
Rosa care prin calităţile lor sunt mai puţin asemănătoare cu Rosa canina și chiar sunt capabile de
performanţe biochimice superioare.
6
Grăsimi 17000-26000 Potasiu 5,843-21,000
Vitamina C (acidul ascorbic) face parte din grupul de vitamine hidrosolubile. Este una din
vitaminele cele mai răspândite. Se găsește la toate vegetalele. Toate animalele cu excepţia
primatelor și a cobaiului, pot realiza sinteza acestei vitamine.
Acidul ascorbic este un acid organic cu proprietăţi antioxidante. Enantiomerul L al acidului ascorbic
este cunoscut sub numele comun de vitamina C. În 1937, Premiul Nobel pentru Chimie a fost
decernat lui Walter Haworth pentru munca sa în determinarea structurii acidului ascorbic (împărţit
cu Paul Karrer, care a primit premiul său pentru munca depusă în domeniul vitaminelor), iar
premiul pentru Fiziologie și Medicină, din același an, a fost acordat lui Albert Szent-Györgyi pentru
studiile sale în privinţa funcţiilor biologice ale L-acidului ascorbic.
7
Structura chimică
Acidul ascorbic are formula empirică C6H8O6. Este un acid monobazic. Conţine în
moleculă patru grupări hidroxil, din care doi hidroxili au funcţie de hidroxil alcoolic (C5 și C6) și
doi hidroxili au caracter enolic (C2 și C3). Una din funcţiile hidroxil alcoolic este o funcţie alcool
primar. Reducerea catalitică a acidului ascorbic duce la fixarea a 2 H, ceea ce indică prezenţa unei
duble legături în moleculă. Prezenţa acestei duble legături este indicată și de caracterul enolic a
două din cele patru grupări hidroxilice din moleculă. Gruparea carboxilică din molecula acidului
ascorbic nu este o grupare acidă liberă, ci blocată sub forma unei legături lactonice. Acidul ascorbic
poate fi considerat lactona unui acid cetohexonic. Este o γ-lactonă, ceea ce indică localizarea dublei
legături între C2 și C3. Acidul ascorbic este astfel lactona acidului 2,3-dienol-L-gluconic.
Carbonii C5 și C4 din molecula acidului ascorbic sunt carboni asimetrici, astfel că se poate
prezenta sub forma a doi izomeri optic active. Există sub două forme:―L- și ―D-, care diferă prin
configuraţia la C4.
a. Vitamina C
Concentrația de vitamina C din fructele de măceș atinge un nivel impresionant. Cantitatea prezentă
în 100 de grame de fructe este aceeași dintr-un kilogram de citrice. Cunoscută ca acid ascorbic, are
proprietăți imunostimulante.
b. Vitamina B
Măceșele se remarcă și prin aportul de B-uri, în principal de vitamina B1 (tiamina stimulează pofta
de mâncare și combate oboseala) și vitamina B2 (riboflavina servește pentru ameliorarea
inflamațiilor epidermice și pruritului).
c. Antioxidanți
d. Tanini
8
Este vorba despre molecule cu o acțiune antiinflamatoare, antibacteriană și astringentă. Au rolul să
intervină în scăderea tensiunii arteriale. În plus, prin reducerea peristaltismului, reușesc să combată
stările diareice.
e. Minerale
Din compoziția măceșelor, nu lipsesc nici oligoelementele. La o analiză mai amănunțită, fructele au
o concentrație semnificativă de săruri minerale, o concentrație semnificativă având-o sodiul,
potasiul, fosforul, magneziul, calciul și fierul.
9
4. Metode de extracţie a substanţelor biogene din specia Rosa Canina
Concentratele de vitamine din măceşe se obțin din fructe proaspete sau uscate. În cazul
folosirii fructelor proaspete există posibilitatea presării fructelor sau se poate efectua extracţia
apoasă a componentelor valoroase. Presarea fructelor nu se aplică în practică, datorită faptului că
sunt necesare utilaje care să lucreze sub presiune mare și randamentul de suc este foarte mic.
Extracţia apoasă a vitaminelor se poate executa prin două procedee: macerare și difuzie.
Extracţia prin macerare aduce în soluţie în afară de acid ascorbic și cantităţi importante de
substanţe pectice. Acestea produc greutăţi la filtrare și în special la operaţia de concentrare (la o
concentrare mai avansată produsul se transformă în gel).
Procedeul de extracţie prin macerare este aplicat pe scară largă, însă prezintă o serie de dezavantaje
dintre care se menţionează:
- durata relativ mare de extracţie care limitează capacitatea de producţie și conduce la pierderi de
acid ascorbic;
- necesitatea mărunţirii materiei prime ceea ce duce la extracte bogate în acid ascorbic, dar și în
substanţe balast, fapt care implică purificarea extractelor.
Extracţia acidului ascorbic este aproape totală, reziduul după descărcare mai conţine 2-3% din
cantitatea iniţială. Funcţionarea difuzoarelor este aceeași ca în industria zaharului.
Extractul brut rezultat are un conţinut de acid ascorbic de 300 mg/100 ml și un extract
refractometric de 12˚. Substanțele balast sunt în proporţie mult mai redusă decât la extracţia prin
macerare. Procedeul discontinuu de difuzie este deosebit de complicat în ceea ce privește
întreţinerea și repararea și nu înlătură complet operaţiile ulterioare de purificare a extractelor brute.
10
4. Multiplicarea speciei Rosa Canina prin tehnici de botehnologii vegetale moderne
Tehnicile de cultură in vitroau depăşit barierele timpului, trecând mai bine de un secol de la
cercetările vizionare ale lui Haberlandt (1902), care a experimentat, pentru prima dată, cultura de
celule şi ţesuturi in vitro. După descoperirea fitohormonilor (a auxinelor în anii ‘30 şi a
citochininelor în anii ‘50 ai secolului trecut), a regulatorilor sintetici de creştere şi diferenţiere
celulară şi după formularea compoziţiilor unor medii nutritive cu aplicabilitate amplă, tehnicile de
cultură in vitro au acaparat în mod arbitrar şi exclusiv propagarea în masă şi ameliorarea multor
speciilor de plante.
Regenerarea eficientă de novo de plante din culturile de celule şi ţesuturi somatice este
recunoscută ca o condiţie esenţială pentru aplicarea majorităţii tehnicilor in vitro de manipulare a
genomului (Nehra şi colab., 1990; Sullivan, 1991; Hammerschlag, 1992; Jain şi Pehu, 1992;
Popescu și colab., 1997; Popescu, 1998).
4.1.1.Sursa de explante
Pentru iniţierea culturii in vitro se utilizează apexuri caulinare cu 2-3 primordii foliare, cu
dimensiuni cuprinse între 0.1 şi 0.3 mm, excizate din vârful filamentelor recoltate de la plante
mature din câmp. În vederea iniţierii culturiiin vitroeste recomandată prelevarea explantelor în
lunile de vegetaţie activă a macesului, respectiv între lunile Martie şi Octombrie, pentru a evita
influenţa negativă a fitohormonilor implicaţi în procesul de dormanţă.
4.1.2.Metoda de aseptizare
După îndepărtarea primelor frunze cu ajutorul unei lame scalpel, filamentele se spală în apă
de robinet pentru îndepărtarea urmelor de substrat. Asepsizarea materialului biologic se realizeazăîn
două etape, prima etapă constând în imersia filamentelor în alcool etilic 94° timp de 1-2 minute, iar
în a doua etapă, în hipoclorit de calciu 6% timp de 14 minute, urmate de 3 clătiri cu apă distilată
sterilă. Prelevarea apexurilor caulinare după asepsizarese realizează la o lupă binoculară simplă şi în
atmosferă sterilă asigurată de hota cu flux laminar de aer steril, pentru a evita contaminările
secundare.
11
4.1.3.Mediu nutritiv
4.1.4Tipul de inocul
(sursa :https://www.researchgate.net/figure/Plantule-regenerate-prin-embriogeneza-somatica)
Embriogeneza somatică in vitro a fost semnalată la morcov de către Steward şi colab. (1958)
şi de către Reinert (1958, 1959). În inducerea embriogenezei somatice un rol important l-a avut
adăugarea în mediul de cultură a laptelui din nucă de cocos datorită citochininelor naturale, aflate
din abundenţă în acest produs natural.
4.2.1.Sursa de explante
Pentru iniţierea culturii in vitro se utilizează apexuri caulinare cu 2-3 primordii foliare, cu
dimensiuni cuprinse între 0.1 şi 0.3 mm, excizate din vârful filamentelor recoltate de la plante
mature din câmp. În vederea iniţierii culturiiin vitroeste recomandată prelevarea explantelor în
lunile de vegetaţie activă a macesului, respectiv între lunile Martie şi Octombrie, pentru a evita
influenţa negativă a fitohormonilor implicaţi în procesul de dormanţă.
12
4.2.2.Metoda de aseptizare
După îndepărtarea primelor frunze cu ajutorul unei lame scalpel, filamentele se spală în apă
de robinet pentru îndepărtarea urmelor de substrat. Asepsizarea materialului biologic se realizeazăîn
două etape, prima etapă constând în imersia filamentelor în alcool etilic 94° timp de 1-2 minute, iar
în a doua etapă, în hipoclorit de calciu 6% timp de 14 minute, urmate de 3 clătiri cu apă distilată
sterilă.
4.2.3.Mediu nutritiv
Se mai poate utiliza, de asemenea, un amestec de aminoacizi sau chiar un singur aminoacid
(glutamina sau alanina). . Maturarea acestora va fi favorizată de o reducere treptată a concentraţei
auxinei până la suprimarea totală a acesteia din mediul de cultură.
4.2.4.Tipul de inocul
Se poate declanşa caulogeneza reducând concentraţia de auxină. Alteori, cel mai mare
număr de muguraşi este atins atunci când se folosesc concentraţii relativ ridicate de citochinină. Dar
nu există reguli general valabile. Adeseori fiecare experienţă reprezintă un caz aparte, iar reacţia
explantelor, la balanţa hormonală din substrat, variază mult, în dependenţă de tipul materialului
vegetal.
13
scăzut în auxină şi cu un conţinut ridicat în citochinină, ar putea conduce cu succes la declanşarea
procesului de înmugurire.
Factorii externi (lumina, temperatura, calităţile fizice ale mediului) sunt controversaţi în ceea ce
priveşte efectele lor asupra caulogenezei. Acţiunea acestora depinde foarte mult de tipul inoculilor
şi de etapele parcurse anterior.
4.3.3.Mediu nutritiv
Folosirea alternativă a mediilor lichide şi a celor solide poate exercita un efect benefic
asupra producerii proceselor de morfogeneză. Astfel, la orhidee, se cunoaşte că menţinerea
protocormilor în stare submersă favorizează multiplicarea acestora, dar este inhibată organogeneza.
Trecerea protocormilor din mediu lichid pe mediu agarizat declanşează organogeneza. Dacă după o
perioadă de menţinere a protocormilor pe mediu agarizat (câteva săptămâni) se submersează
protocormii, prin acoperirea lor cu soluţie nutritivă diluată, sau cu apă distilată sterilă, se reuşeşte o
stimulare a proceselor de organogeneză (Cachiţă, 1983).
4.3.4Tipul de inoclu
Cu toate că numeroase specii necesită o anumită fotoperioadă pentru inducţie florală, în general se
apreciază că formarea de muguraşi este independentă de fotoperioadă.
14
Categoria de Simbolul Substanţa ml sol. mg V sol. g
substanţe soluţiei stoc / l substanţă/ l stoc substanţă /
stoc mediu mediu M S (ml) sol.
MS preparat stoc
preparat
A NH4NO3 20 1650 1000
ZnSO4.7H2O 8,6
KI 0,83
Na2MoO4.2H2O 0,25
CoCl2.6H2O 0,025
FeSO4.7H20 27,8
SEQUESTRIN G 5 1000
(Fe chelat) Na2EDTA 37,3
15
BIBLIOGRAFIE
4. CZECLAW STRUMILLO ; trd. Din lb. Polonă de IOLANDA PATRULIUS ȘI MIHAI BELCIU
– Bazele teoriei și tehnicii uscării, Editura Tehnica, București, 1984.
7. CONSTANTIN BANU – Manualul inginerului de industrie alimentară, vol. II, Editura Tehnică,
București, 1998.
9. CRĂCIUN F., BOJOR O., ALEXAN M. – Farmacia naturii, Editura Ceres, București, 1977.
16
14. ION RĂȘENESCU – Operaţii și utilaje în industria alimentară, vol.II, Editura Tehnică,
București, 1972.
17