Nume, prenume student Plaiasu Andrei Simion

Program master MCADS

Tema de cercetare Hidroxiapatita dopata cu pamanturi rare

Revista selectata pentru “Revista Romana de Materiale”

publicarea articolului – https://www.revista-romana-de-materiale.upb.ro/domenii-de-
completati toate aceste interes/biomateriale-si-bionanomateriale/
informatii: titlu, adresa site,
factor impact (daca este
cazul)

Mentionati pe scurt motivele Am ales aceasta revista deoarece este o revista romaneasca cu
pentru care ati selectat sediul in Polizu unde este si facultatea noastra. Este usor de
aceasta revista accesat
 Hidroxiapatita cu proprietati de fluoroluminescenta

Proiectarea și sinteza unui agent alternativ biocompatibil și luminescent de bioimagistică pentru

aplicații în diagnosticare și medicină preventivă este foarte importantă pentru viitorul biomedicinei. Cu o
structură flexibilă avansată de hidroxiapatită (HAp), ionii de pământuri rare (Gd3+, Eu3+) au fost dopați
pentru a obține o proprietate optică luminescentă îmbunătățită. O metodă ușoară de co-precipitare
umedă a fost utilizată pentru a dopa Gd3+ și Eu3+ pe structura HAp gazdă (Eux-Gdx-HAp). Diferite
instrumente sofisticate de caracterizare, cum ar fi difracția de raze X a pulberilor, spectroscopia în
infraroșu cu transformată Fourier (FTIR), spectroscopia micro Raman, analiza termică diferențială
termogravimetrică (TG-DTA), analiza suprafeței Brunauer-Emmett-Teller (BET), confirmă structura
hexagonalcristalină, grupurile funcționale, stabilitatea termică ridicată, cu o suprafață mare și o
dimensiune medie a porilor. Proprietățile optice au fost măsurate prin spectroscopie de reflexie difuză
(DRS), spectroscopie de fotoluminescență (PL) și imagistică de fluorescență. Luminescența îmbunătățită
ar putea fi observată datorită codopajului "Gd-Eu", care determină transferul de energie (6IJ de
Gd3+→5HJ de Eu3+) sub excitație de 273 nm, cu un posibil efect de combinare a conversiei ascendente
cooperative și a transferului ulterior de energie sub excitație de 394 nm, respectiv. Studiul in vitro
confirmă comportamentul non-toxic intracelular al nanocristalelor Eux-Gdx-HAp cu o bună
biocompatibilitate. Alte studii in vivo cu nanocristale Eux-Gdx-HAp confirmă capacitățile de marcare
celulară și de imagistică invivo. Nanomaterialele Eux-Gdx-HAp sintetizate, biocompatibile și netoxice, au
potențialul de a acționa ca agent de contrast cu luminescență îmbunătățită pentru aplicații biomedicale
de imagistică fluorescentă.

Recent, sinteza nanoparticulelor luminescente biologic active a atras o atenție considerabilă

datorită aplicațiilor multifuncționale promițătoare ale acestora în imagistica biomedicală. Particulele
nanostructurate dopate cu elemente din pământuri rare sunt active din punct de vedere optic cu
caracteristici multifuncționale, inclusiv imagistică, administrare de medicamente, inginerie tisulară etc.
În ultima vreme, imagistica multimodală, cum ar fi tomografia cu emisie de fotoni unici (SPECT),
tomografia computerizată (CT), tomografia cu emisie de pozitroni (PET), imagistica prin rezonanță
magnetică (IRM), este bine practicată pentru diagnosticul și managementul clinic. Cele mai des întâlnite
nanoparticule luminescente pentru aplicațiile de bioimagistică sunt punctele cuantice (QD) (CdS, CdSe,
ZnS etc.).

Elementele de pământuri rare, cum ar fi Eu3+, Gd3+, La3+, Ce3+, Tb3+ etc., au fost dopate cu
succes cu diferite sisteme nanostructurate gazdă pentru aplicații de bioimagistică. Avantajul dopajului cu
elemente de pământuri rare cu materiale gazdă constă în mai puțină fotodepoluare, mai puțină
dispersie a luminii, emisie fără clipire, imagistică pe termen lung și capacitate de penetrare în
profunzime a țesuturilor cu o stabilitate ridicată. Dintre elementele de pământuri rare, europiul (Eu)
este cel mai potrivit lantanid, care prezintă tranziții intraorbitare f-f ale electronilor, ceea ce are ca
rezultat proprietatea de fotoluminescență. În plus, Eu prezintă proprietăți optice excepționale și emite o
luminescență roșie vizibilă cu o deplasare Stokes mare, care permite excitarea și detectarea ulterioară.
Dimpotrivă, dopajul cu un singur mod de dopaj cu Eu nu generează o luminescență su cientă pentru a fi
util ca agent de contrast pentru un alt element de pământuri rare adecvat este foarte apreciabil.
 Având în vedere structura electronică, gadoliniul (Gd3+) este cel mai potrivit agent de co-
dopare. Numai ionii de lantanide, fără niciun material gazdă, ar putea genera citotoxicitate, instabilitate
chimică, oxidare atunci când sunt aplicați pentru imagistică in vivo. Unele cercetări au relevat o
biocompatibilitate slabă și un răspuns inamic asociat nanoparticulelor de silice. În mod similar, agenții de
contrast dopați cu elemente de pământuri rare prezintă unele limitări, cum ar fi: (i) semnalul scăzut din
cauza autourezistenței, (ii) adâncimea scăzută de penetrare în țesuturile biologice, (iii) deteriorarea
ADN-ului sau a organitelor celulare în timpul unei expuneri îndelungate etc. Până în prezent, sinteza
agenților de contrast biocompatibili luminescenți nanostructurați rămâne o mare provocare pentru
cercetătorii din întreaga lume. Cel mai îngrijorător lucru care limitează aplicarea clinică a
nanoparticulelor este toxicitatea indusă. Pentru a depăși aceste probleme de toxicitate, un material
gazdă biocompatibil adecvat este întotdeauna o primă alegere pentru dopajul cu ioni delantanide. În
această privință, hidroxiapatita [Ca10(PO4)6(OH)2], (HAp) ar putea juca un rol cheie, datorită structurii
sale hexagonale unice și a situsului Ca2+ substituibil cu ioni de lantanide înlocuibili. Mai mult, HAp este
cel mai cunoscut biomaterial, intens studiat și un constituent anorganic cheie pentru oase și dinți la
toate animalele [28,29]. Este, de asemenea, evidențiat faptul că HAp ar putea fi ușor de înlocuit cu
diferiți ioni monovalenți precum Na+, K+, Zn2+ divalent, Cu2+, Mg2+, Au3+ trivalent, Ag3+, La3+ etc.
Ti4+ tetravalent, Zr4+, cu o rezistență ridicată la distorsiuni structurale. Utilizarea HA dopată ca agent de
contrast sau agent de marcare ar putea fi o abordare promițătoare pentru imagistica luminescentă
biomedicală.

Rezultate si discutii

Analiza DRX

Nanoparticulele sintetizate de HAp și Eux-Gdx-HAp au fost investigate prin analiză XRD pentru a
confirma structura, faza cristalină și puritatea acestora (Fig. 2). Vârfurile de difracție XRD obținute au
fost comparate cu datele standard JCPDS ale HAp pur (fișa ICDD nr. 72-1243). De asemenea, vârfurile
XRD au fost comparate cu JCPDS: 98-063-1848 și JCPDS: 98- 009-6953 pentru Eu, și complecșii de Gd.
Toate vârfurile corespunzătoare au fost asociate cu faza pură de HAp și nu au fost detectate alte faze.
Pentru toate probele, cel mai intens vârf a fost observat în planul (211), corespunzând unghiului de
difracție la ~31° unghiul 2 valoarea θ. Alte vârfuri suplimentare asociate cu unghiul de difracție 2θ 26°,
28°, 32°, 40°, 47°, 50°, 52°, 61° și 64° corespunzătoare planurilor (002), (210), (112), (130), (222), (213),
(004), (214) și, respectiv, (304) [44]. Am constatat că nu există schimbări semnificative în vârfurile
asociate cu dopajul cu Eu și Gd. Singurele caracteristici observabile sunt vârfurile suplimentare
identificate după dopajul cu Eu și Gd. Cu o evaluare critică a graficului XRD putem identifica lărgirea
poziției vârfurilor cu intensități diferite ale vârfurilor. Deoarece HAp este un material policristalin, de
aceea majoritatea vârfurilor legate de Eu și Gd au fost scufundate în vârfurile HAp.

Studiu de fluorescență cu raze X

Nanoparticulele de HAp pristin și Eux-Gdx-HAp sintetizate au fost caracterizate în continuare

pentru compoziția elementară prin spectrometrie de fluorescență cu raze X (XRF). Formula chimică
pentru HAp pristinic este Ca10(PO4)6(OH)2. Atunci când sunt dopate cu elemente de pământuri rare,
dopajul are ca rezultat înlocuirea parțială a Ca2+ cu ioni de pământuri rare mai mici (Eu3+, Gd3+) în
ambele poziții cationice ale HAp gazdă. Compoziția elementară a HAp-ului pristin, cum ar fi Ca, P și
dopanți variabili (Eu, Gd).

Analiza FTIR

Spectrele FTIR ale nanoparticulelor de HAp pristin și Eux-Gdx-HAp arată grupurile funcționale
caracteristice ale HAp (Fig. 3). Benzile înregistrate la 3569 cm-1 și 638 cm-1 sunt atribuite vibrațiilor de
întindere și de încovoiere O-H ale HAp. Pentru nanoparticulele de 2 mol.% Eu-HAp, și 0,25 mol%Eu-2,0
mol.% Gd-HAp, intensitatea benzilor O-H de întindere și de curbură scade. Spectrul înregistrat a
evidențiat regiunile de amprentă digitală la 474, 573-601 și 966-1099 cm-1 pentru modurile de întindere
și flexiune P-O. Există patru moduri de vibrație Raman și infraroșu active observate în ionii de fosfat (ʋ1,
ʋ2, ʋ3, ʋ4) pentru nanoparticulele HAp și Eux-Gdx-HAp. Vârfurile asociate la 966 cm-1 reprezentate ca
mod de întindere simetrică a grupului fosfat ʋ1. Acest vârf este observat pentru toate nanoparticulele
HAp dopate cu Eu, Gd în concentrații diferite. Modul simetric P-O la 474 cm-1 asociat modului de
flexiune ʋ2. Vârfurile identificate la 1099 cm-1 sunt asociate cu vibrația asimetrică de întindere ʋ3.
Modul de întindere O-H și modul vibrațional identificat la 573 și 601 cm-1 sunt atribuite modurilor de
vibrație ʋ4 ale grupului PO4 3-. Intensitatea vârfurilor obținute pentru nanoparticulele HAp și Eux-Gdx-
HAp diferă de fiecare spectru datorită efectului dopajului reușit în situsul de Calciu. Intensitatea redusă
și claritatea benzilor au confirmat cristalinitatea redusă a nanoparticulelor Eux-Gdx- HAp. O observație
notabilă a relevat deplasarea benzilor în poziții diferite pentru nanoparticulele Eux-Gdx-HAp indică
modificări în conformitatea structurală datorită acomodării adecvate a Eu, Gd la situsul Ca2+ în structura
HAp.

Deplasarea Raman

Spectrele Raman ale HAp-ului pristin și Eux-Gdx-HAp ar putea dezvălui informații

complementare cu privire la conformitatea structurală, grupurile funcționale reprezentate în Fig. 4.
Eșantioanele au înregistrat o bandă intensă foarte semnificativă la 962 cm-1 corespunde întinderii
simetrice a legăturilor P-O de frecvență tetraedrică PO43- ʋ1. Pentru HAp pristinic, vârful înregistrat la
433 cm-1 corespunde modului de curbare simetrică (ʋ2) a grupărilor PO43-. La 577, 593 cm-1 au fost
găsite vârfuri de intensitate scăzută asociate modului de curbură antisimetrică (ʋ4) al grupărilor
structurale PO43-. Benzile asociate vibrațiilor PO43- sunt înregistrate pentru toate materialele HAp și
Eux-Gdx-HAp sintetizate. Cu diferite dopaje cu Eu și Gd pe HAp, intensitățile vârfurilor sunt variate
pentru toate materialele Eux-Gdx-HAp cu concentrații diferite. Cel mai intens vârf a fost observat pentru
nanoparticulele de 2,0 mol.% Eu 0,25 mol.% Gd-HAp. Întrucât au fost observate două vârfuri
caracteristice diferite, care corespund efectului dominant "Eu" la 1350 cm-1 până la 2100 cm-1 și
efectului dominant "Gd" la 2250 cm-1 până la 2700 cm-1. Studiile de spectroscopie FTIR și Raman au
relevat o bună corelație, ceea ce confirmă dopajul reușit al materialelor de pământuri rare în structura
HAp.

Analiza TG

Analiza termogravimetrică și analiza termică diferențială este o caracteristică importantă pentru

materiale. Nanoparticulele sintetizate de HAp și Eux-Gdx-HAp au fost încălzite până la temperatura de
800 °C (cu o viteză de încălzire de 10 °C/min) pentru caracterizare termică în atmosferă inertă de azot
(Fig. 5). Analiza TG pentru toate materialele sintetizate a evidențiat pierderea sig- nificativă de greutate.
Nanoparticulele sintetizate de 2mol.% Eu-HAp prezintă o pierdere maximă de greutate de ~8,79%, în
timp ce numai HAp prezintă o pierdere minimă de greutate de ~5,83%. Doar nanoparticulele Gd-HAp de
2mol.% prezintă o pierdere în greutate de ~7,87%. După o evaluare critică, am descoperit o corelație
între pierderea de greutate și dopajul cu elemente de pământuri rare pe suprafața HAp. Odată cu
creșterea dopajului cu Gd, pierderea de masă scade, ceea ce confirmă stabilitatea sporită a materialelor
complexe. Pierderile de masă ale nanoparticulelor de HAp sintetizate și ale nanoparticulelor Eux-Gdx-
HAp sunt reprezentate în tabelul 3. Pierderea de masă procentuală diferită se datorează utilizării unor
substanțe chimice precursoare cu concentrații diferite, cum ar fi nitratul de europiu pentahidrat și
nitratul de gadoliniu (III) hexahidrat. Pierderea de masă a materialelor experimentale a fost asociată cu
evaporarea și dehidratarea moleculelor de apă captive. O pierdere suplimentară de masă apare din
cauza descompunerii și oxidării materialelor sintetizate.

Au fost înregistrate vârfurile exotermice și endotermice pentru analiza termică diferențiată, care relevă
descompunerea, deshidratarea, cristalizarea și starea de tranziție vitroasă a materialelor sintetizate.
Pentru toate materialele a fost observată o bandă exotermică largă în intervalul de temperatură 250 °C-
400 °C, datorită formării parțiale de oxi- hidroxiapatită, care este asociată cu deshidratarea moleculei de
apă intercristalină captată.

Figura 2 - Caracterizarea XRD a nanoparticulelor HAp și Eux-Gdx-HAp.

Analiza TEM

Morfologiile și nanostructura nanoparticulelor sintetizate au fost caracterizate prin analiză TEM (Fig. 6).
Studiul TEM a evidențiat nanostructura aproape sferică formată omogen de HAp pur și dopat. Au fost
calculate distribuțiile dimensiunilor particulelor pentru toate materialele nanostructurate. Distribuția
medie a dimensiunilor particulelor pentru HAp pur, 2 mol.% Eu-HAp și 2mol. % Gd-HAp sunt de 42,7 ±
6,3 nm, 40,22 ± 4,7 nm și, respectiv, 38,14 ± 8,5 nm. Se poate observa că HAp dopat cu Gd a arătat cea
mai mică distribuție a dimensiunilor particulelor în comparație cu HAp și Eu-HAp pristine. După co-
dopajul cu Eu și Gd, nanostructura HAp a dezvăluit o distribuție variată a dimensiunilor particulelor. O
observație importantă a relevat faptul că, în timpul dopajului, odată cu creșterea concentrației de dopaj
cu europiu, distribuția dimensiunilor particulelor a crescut. Pentru toate nanoparticulele HAp și Eux-Gdx-
HAp sintetizate. Distribuția medie a dimensiunii particulelor re- vește mai puțin de 50 nm, ceea ce este
perfect adecvat pentru un flux neîntrerupt ca nanomedicament în interiorul sistemului corporal.

Fig 3 - Caracterizarea FTIR a nanoparticulelor HAp și Eux-Gdx-HAp.

Fig. 4 - Deplasarea Raman a nanoparticulelor HAp și Eux-Gdx-HAp.

Fig. 5 - Studiul TG-DTA al nanoparticulelor HAp și Eux-Gdx-HAp.

 Fig. 6 - Analiza FE-TEM a nanoparticulelor HAp și Eux-Gdx-HAp.

In vivo fluorescence property of Eux-Gdx-HAp nanoparticles in nude mouse model.

Concluzii

Agentul de contrast nanocristal Eux-Gdx-HAp cu luminescență îmbunătățită a fost sintetizat cu

succes printr-o metodă ușoară de co-precipitare umedă. Dopajul are ca rezultat înlocuirea parțială a
Ca2+ cu ioni de pământuri rare mai mici (Eu3+, Gd3+) în ambele poziții cationice ale HAp gazdă.
Analizele XRD, XRF și TEM au confirmat compoziția chimică cantitativă cu o formă nanostructurată
aproape sferică (< 50 nm) fără nicio modificare a compoziției fazei cristaline. Studiul XRF confirmă că
raportul Ca/P pentru 2,0 mol.% Eu 0,25 mol.% Gd-HAp este de 1,69, aproape similar cu raportul apatitei
biologice de 1,67. Na- nocristalul Eux-Gdx-HAp sintetizat prezintă o stabilitate termică ridicată la
încălzire până la 800 °C. Studiul BET relevă creșterea suprafeței cu creșterea concentrației de "Gd".
Prezența emițătorilor dublu dopați în ambele situsuri cationice a fost confirmată prin FTIR, spectroscopie
Raman și studiu de foto-luminescență. Atunci când sunt excitate de lumina NIR, na- noparticulele Eux-
Gdx-HAp au emis lumină roșie vizibilă îmbunătățită datorită tranzițiilor 5D0→7F0-4 cu o lungime de
undă de excitație de 394 nm. Intensitatea PL a nanoparticulelor Eux-Gdx-HAp a putut fi ajustată prin
variația concentrațiilor de Eu3+ și Gd3+. Vizualizarea non-invazivă a șoarecilor nude cu injecție
subcutanată de cu proprietatea fotoluminescentă îmbunătățită potrivită pentru imagistica in vivo. Toate
nanoparticulele sintetizate de HAp și Eux- Gdx-HAp nu prezintă o toxicitate semnificativă și o bună
biocompatibilitate cu celulele și în modelul de șoarece. Prin urmare, HAp ar putea servi ca material
gazdă promițător pentru un supliment de contrast injectabil cu elemente de pământuri rare
luminescente.