Lucrare practică 4

Cultivarea bacteriilor și a fungilor

OBIECTIVE:

La sfârşitul lucrării practice studenţii trebuie:

1. Să cunoască principalele tipuri de medii de cultură utilizate pentru cultivarea bacteriilor

2. Să cunoască tehnica însămânţării în 4 cadrane în scopul obţinerii culturii pure
3. Să poată descrie caracterele de cultură

1. Scopurile cultivării bacteriilor:

 Medical - diagnosticul etiologic al unei infecţii
- testarea sensibilităţii la antibiotice
 Industrial - obţinerea de vaccinuri, antibiotice, vitamine, etc..

2. Microorganisme cultivabile pe medii de cultura acelulare:

- bacterii
- fungi

Microorganisme cultivabile numai in celule receptive capabile sa le replice:

- virusuri
- bacterii obligat intracelulare (rickettsiile si chlamidiile)

3. Cultivarea bacteriilor:

Mediile de cultură = soluţii apoase ale unor substanţe nutritive (nutrienţi, factori de creştere).
Însămânţare = depunerea în mediul de cultură a materialului microbian, inoculum.
Cultură = totalitatea microorganismelor acumulate prin multiplicare
Cultură pură = cultură constituită din microorganisme de acelaşi fel
Colonie = masă de cultură, vizibilă cu ochiul liber pe suprafaţa unui mediu de cultură solid, rezultată prin
multiplicarea unei singure celule sau a unui grup de celule, numit unitate formatoare de colonii / UFC.
Colonie = clonă, DECI cultură pură

Condiţiile fizico-chimice necesare cultivării:

- presiunea osmotică, pH, temperatura, atmosfera de incubare

Condiţii pe care trebuie să le îndeplinească un mediu de cultură:

- să fie steril, nutritiv, transparent si să asigure presiunea osmotică şi pH optime

Clasificarea mediilor de cultură

Se vor discuta cu studentii: tipurile de medii de cultura, modul de repartizare si se vor da exemple pentru
fiecare tip de mediu de cultura.

Tehnicile uzuale de cultivare a bacteriilor:

- se efectuează demonstrativ însămânţarea prin epuizare în 4 cadrane, pentru obţinerea culturii pure
Criterii Clasificarea mediilor de cultură

provenienţa empirice -conţin ingrediente de origine animală sau vegetală Geloza-sange

nutrienţilor
sintetice - conţin ingrediente chimic pure Simmons
- utilizate pentru studiul necesităţilor nutritive
consistenţă lichide - nu permit separarea microorganismelor dintr-un Bulion nutritiv
(bulioane) amestec

solide - permit separarea microorganismelor dintr-un amestec Agar nutritiv

- obţinute prin adaos de agar sau coagularea proteinelor Lowenstein-
din ou Jensen

semisolide - conţin o concentraţie mai redusă de agar Geloza moale

- utilizate pentru - studiul mobilităţii bacteriilor
- conservarea tulpinilor
valoarea simple - conţin numai ingrediente de bază Agar nutritiv
nutritivă -permit cultivarea microorganismelor nepretenţioase
nutritiv
îmbogăţite - cu adaos de sânge, ser, ou, etc. Geloza sange
-asigură cultivarea microorganismelor pretenţioase
nutritiv
scopul de izolare  uzuale - satisfac exigenţele nutritive pentru o gamă Geloza sange
utilizării largă de specii
 diferenţiale - conţin substratul pentru anumite enzime CLED
microbiene şi un indicator care atestă atacarea acestui
substrat  un caracter metabolic diferenţiază între ele
microorganisme cu aspect al culturii identic pe mediile
simple.
 selective - medii solide Mac Conkey
-conţin ingrediente care inhibă dezvoltarea Hektoen
microorganismelor de contaminare a prelevatelor
- frecvent au şi caracter diferenţial
- utilizate pentru izolarea preferenţială a anumitor specii
dintr-un produs plurimicrobian (ex. materii fecale,
exsudat faringian)
 de îmbogăţire - medii lichide Bulion selenit
- favorizează multiplicarea microorganismelor a căror
izolare o urmărim
- inhibă selectiv flora de asociaţie (pentru un interval de
timp limitat)
- utilizate pentru izolarea unor microorganisme patogene
care se găsesc în număr redus în produse patologice
de - conţin substratul pentru anumite enzime microbiene şi TSI
identificare indicatori ai activităţii enzimatice (schimbare de pH, MIU
produşi de metabolism, etc.)
- utilizate pentru studiul activităţii biochimice a
microorganismelor în scopul încadrării într-un gen/specie
 pentru Agar Mueller Hinton
testarea
sensibilitatii
la
antibiotice
de Bulion glicerinat
conservare
de Cary Blair
transport

Descrierea caracterelor de cultură:

 condiţii optime de cultivare
 aspectul culturii pe medii lichide / solide:
Se vor descrie:
- forma de cultură S şi forma de cultură R pe mediu lichid / solid:
- aspectul coloniilor: diametru, circumferinţa, relief, suprafaţă, culoare, transparenţa, consistenţă, aderenţa
la mediu;
 modificări ale mediilor de cultură induse de cultivare:
- hemoliza pe agar-sânge: alfa / beta / gamma
- producerea de pigment difuzibil în mediu

Bibliografie:
Buiuc D, Microbiologie medicală, ed. a VI-a, Editura “Gr. T. Popa” Iasi, 2003, cap3, pag.39-42, 46-51.