PCR

Cluj-Napoca, 2022 Mihu Mălina-Lorena

Biologie Medicală
 Metoda
Protocol
Tipuri

Cuprins Avantaje și dezavantaje

Aplicații
Concluzii
Bibliografie
Metoda

 Reacția de polimerizare în lanț -

PCR (polimerase chain reaction)
- in vitro – copii multiple ale unei
regiuni specifice de ADN sau
ARN
Protocol

 3 etape:
 Denaturare – ADN denaturat – 2 catene
 Aliniere – atașare primeri - complementar
 Elongare – extindere primeri – producere ampliconi
ADN
 Componentele reacției:
 Matrița ADN
 Primerii
 ADN polimeraza
 Dezoxiribonucleotide
 Soluție buffer
 Ioni
Tipuri

 Nested PCR
 Digital PCR
 Hot Start PCR
 Reverse Transcriptase PCR
 Real Time PCR
 Standard PCR
 Colony PCR
 Avantaje Dezavantaje
 Rapid și ușor de folosit  Sensibilitate crescută – contaminare
 ușoară
Sensibilitate
 Erori ale polimerazei
 Obținerea multiplelor copii a unei
singure secvențe de ADN  Greșeri de împerechiere
Aplicații

 Teste de paternitate
 Criminologie – amprentare
 Genotip mutații specifice
 Comparare expresie gene
 Clonare gene
Concluzii

 Aparatul folosit pentru diagnostic, detecție ADN

 Multiple copii – obținere unei cantități mari de ADN dintr-o probă
 Detecție virusuri sau bacterii
 Bibliografie

 Domingues, L. PCR Methods and Protocols. Springer Nature, New York, USA. ISSN 1940-
6029
 Karunanathie, H.; Kee, P.S.; Ng, S.F.; Kennedy, M.A; Chua, W.E. PCR enhancers: Types,
mechanisms, and applications in long-range PCR. Biochimie 2022, 197,130-143, ISSN
0300-9084, doi: 10.1016/j.biochi.2022.02.009.
 Canene-Adams, K; Lorsch, J. (editor) . Methods in Enzymology, Chapter Twenty Four -
General PCR. Academic Press, Cambridge, USA. Volume 529, 2013.
 Morley, A.A. Digital PCR: A brief history. Biomolecular Detection and Quantification 2014,
1, 1-2