Diagnosticul multimarker modern

în tromboembolism pulmonar

Haba Mihai Stefan Cristian

 Trombembolismul pulmonar reprezintă a treia cea mai comună
cauză de deces cardiovascular, după infarctul miocardic și atacul
vascular cerebral.

Bĕlohlávek J, Experimental & Clinical Cardiology. 2013;18(2):129-138.

Diagnostic TEP

 scoruri de probabilitate clinică (scorurile

Wells, Geneva și Pisa)

 scintigrafia de ventilație/perfuzie

 multi-slice angio-CT toracic

 angiografia pulmonară
De ce biomarkeri in TEP?

 Noi metode diagnostice mai ales în cazul

pacienților cu care nu pot efectua angio-CT
pulmonar:
◦ pacienți cu alergie la agentul de contrast
◦ insuficiență renală severă
◦ femei însărcinate
 Evaluare a riscului pacienților cu TEP
 Sensibil si
specific

Monitorizarea Reflecta
eficentei severitatea
terapeutice bolii

Biomarker
ideal

Orienteaza
conduita Rol prognostic
terapeutica
Biomarkeri TEP
Ghidul de management al TEP al Societatii
Europene de Cardiologie:
 D-Dimeri
 hsTnT
 NT-proBNP
 h-FABP

In curs de evaluare
 MR-proADM
 GDF 15
Micro ARN circulant in TEP
Micro ARN-urile sunt un subtip de molecule ARN monocatenare,
non-codante, endogene care regleaza expresia genica prin
hibridizarea, inhibarea translatiei si promovarea degradarii ARN-ului
mesager.
ORIGINALITATEA STUDIULUI PROPUS

• analiza multi-marker, care să includă în special

micro-ARN-urile circulante

• evaluarii specificitatii si sensibilitatii acestora in

vederea diagnosticului rapid al TEP

• stabilirea posibilului rol prognostic al micro-

ARN-urilor circulante
 ETAPE DE REALIZARE
Selecționarea loturilor

3 loturi

Lot pacienți Lot pacienți cu

Lot de voluntari
diagnosticați cu TEP patologie CV
fara patolgie CV
prin angio-CT non-TE
Dozare h-FABP și MR-proADM

 Tehnica ELISA quantitative sandwich

◦ 1. incubarea serului pacientilor in godeurile placii

tapetate cu anticorpi.
◦ 2. incubarea cu anticorpi secundari, specifici
moleculei de interes, conjugati cu enzima.
◦ 3. incubarea cu substratul specific enzimei utilizate.
Dozare micro-ARN134 si micro-
ARN 1233
 Quantitative RT-PCR
◦ 1. Izolarea și purificarea moleculelor de micro-ARN
◦ 2. A doua etapă constă în efectuarea tehnicii two-
step RT-qPCR în care într-un prim pas are loc
reacția de revers transcripție a micro-ARN-ului de
interes în molecula ADN complementară, ulterior
efectuându-se reacția de polimerizare cantitativă.
 INFRASTRUCTURA MINIMA
NECESARA
1. Aparatura imagistică necesară stabilirii
diagnosticului și evaluării prognosticului
2. Aparatura de centrifugare, sistem de
refrigerare la -80 grade Celsius.
3. Kituri de tip quantitative sandwich pentru
h-FABP și MR-proADM
4. Kituri de izolare micro-ARN, primeri pentru
reacția PCR și kiturile de PCR.
5. Software dedicat pentru evaluarea datelor
medicale
 BUGET MINIM NECESAR
Denumire kit Pret lei fara TVA
Human mid regional pro 2500
adrenomedullin ELISA kit
MyBioSource®
Human Heart Fatty Acid Binding 2500
Protein ELISA kit MyBioSource®
MIRVANA PARIS 40 RXNS EACH 2410
TaqMan ® MicroRNA Reverse 1250
Transcription Kit
TAQMAN UNIV PCR MSTR MIX NO 2430
UNG
TAQMAN MICRO RNA ASSAYS 1180
INV SM 10
TaqMan™ Advanced miRNA 935
 REZULTATE ESTIMATE
 Într-o primă etapă, ne propunem să confirmăm
specificitatea și sensibilitatea microARN 1233 și
134 pentru diagnosticul TEP, la nivelul lotului
nostru de pacienți

 Analiza multi-marker ar putea aduce beneficii în

ceea ce privește diagnosticul rapid prin biomarkeri
al TEP.

 Vom evalua posibilele corelatii între valorile

mircro-ARN si extensia trombozei, evaluata prin
metode imagistige.
 FINALITATE PRACTICA

 Stabilirea unor noi criterii de diagnostic,

bazate pe biomarkeri, care ar putea inlocui
imagistica la pacienții cu contraindicații;

 Realizarea unor noi scoruri cu rol diagnostic

si prognostic;