Celulele stem

Celulele stem sunt progenitori nediferentiati care au abilitatea de a se divide si dezvolta intr-o multitudine de alte tipuri de celule inalt specializate care sunt capabile sa formeze tesuturi. In functie de capacitatea lor replicativa si de potentialul de diferentiere, celulele stem au fost clasificate in: 1. Celule stem totipotente. Sunt produse prin fuziunea unui ovocit cu un spermatozoid. Tot celule totipotente sunt si cele aparute dupa primele diviziuni ale ovocitului fecundat. Acestea se pot diferentia in orice tip de celula, sunt capabile sa formeze o placenta si un embrion intreg;

Celulele stem

2. Celule stem pluripotente. Sunt descendente ale celulelor totipotente. Se pot diferentia in toate tipurile celulare, cu exceptia celulelor totipotente. Sunt capabile sa formeze tesuturi derivate din toate cele trei foite embrionare (endoderm, mezoderm si ectoderm); 3. Celule stem multipotente. Sunt celule care produc celulele dintr-o singura familie, progenitori ai celulelor din diferite te suturi (ex:celulele stem hematopoietice se vor diferentia in celulele sanguine: hematii, celule albe, trombocite etc). Au un potential regenerativ imens si isi reinnoiesc continuu populatiile celulare; 4. Celule stem unipotente. Aceste celule pot produce un singur tip de celule, dar au proprietatea de a se reinnoi, ceea ce le diferentiaza de celulele non-stem.

Se mai clasifica in celulele stem adulte si cele embrionare

Care este diferenta intre celulele stem adulte si cele embrionare? Diferenta majora intre celulele stem embrionare si cele adulte deriva din originea lor, si anume din organismul din care sunt recoltate. Celulele embrionare provin din embrioni cu varsta de maxim 7 zile, care pot fi, la randul lor, donati sau produsi in exces in timpul proceselor de fertilizare in vitro. Celulele stem adulte sunt fie prelevate din organisme adulte, fie din cordonul ombilical. Cercetatorii au evidentiat faptul ca si dupa nastere persista in organism un grup restrans de celule nediferentiate, considerate a avea rol de rezerva in cazul in care apar pe parcurs situatii care sa impuna folosirea lor. Inconvenientul major al acestor celule stem il reprezinta faptul ca in urma diviziunii lor, numarul de celule fiice este foarte limitat si inferior celulelor stem embrionare. O alta diferenta consta in longevitatea celulelor embrionare, care sunt capabile de a-si mentine abilitatea de a forma orice alt tip de celula chiar si dupa luni sau ani de utilizare si crestere in laborator.

ES Cells

Adult Stem Cells

Origine

Post-fertilizare , stadiul incipient(masa celulara interna a blastocistului) Metoda de instituirea celulei este dj stabilit, i este relativ uor de realizat infinit

Mduv de celule stromale

Tehnica de izolare Potential de proliferare Pluripotenta

Rar printre celulele din mduv osoas, i metoda de ramine inca de fi stabilita Numarul de diferentieri este necunoscut

Diferenierea acestora n orice tip de celul in vivo.

Recunoscute pentru a putea sa se diferenieze n celule mesodermale, cum ar fi osteoblaste, condroblati i adipocite, dar se pare supuse diferenierii n celulele nervoase (ectoblastderivate) Metoda concreta nu a fost stabilita

Diferentierea in cardiomiocit e Reactii de rejectie Potential tumoral

Metoda concreta nu a fost stabilita

Sint posibile

Absente

Risc de aparitie a teratoamelor

Nu

Celule stem derivate din maduva osoasa

HSCs au capacitate de reinoire constanta, insa pot suferi apoptoza.Au fost utilizate in terapia cancerului, precum si in tulburari ale sistemului imun.

Celule stem derivate din maduva osoasa

Distingem 3 tipuri : hematopoietice (hematopoietic stem cells [HSCs]),, endoteliale progenitoare si mezenchimale(MSCs).

Celule stem derivate din maduva osoasa : SP cells (side specifice ) Reactia de polimerizare in lant (PCR) al ARNului din celulele SP purificate au relevat absenta markerilor comuni pentru tesutul cardiac(desmin si -actinin) ,pentru celulele endoteliale (ICAM-2, VE-cadherin, vWF, and factor VIII) ,si pentru celulele progenitoare endoteliale (Flk-1 and Flt-1, receptori pentru VEGF).Insa a demonstrat ca celulele SP expreseaza Tie-2 gene ce codifica receptori pentru angiopoietina 1 si 2(+rol angiogenetic) ,precum si factor Tal-1/SCL

Tal-1/SCL
Excesul a TAL-1(T-cell acute leukemia) are un efect cantitativ asupra celulelor stem umane n timp ce expresia sa redus determin pierderea potentialului hematopoietic uman, precum i ncetarea de proliferare i difereniere, si inducerea leucemiei limfoblaste acute.

Incorporarea SP celulelor in celulele endoteliale intr-o arie de infarct.Expresia markerilor endoteliali: g-colorate cu FLT1, h-ICAM1,ilacZ.Rata de grefare = 3.3%

Celulele mezenchimale
au un specific de mentinere stabila a fenotipului.Astfel testarile au relevat ca MSCs nedeferentiate supuse diferentierii site specifice , au proliferat in cardiomiocite.Prin injectarea a 2 tipuri de celule din maduva : Lin- si MSCs, s-a demonstrat reducerea suprafetei necrozate si fibrozate.

MSCs si 5-azacytidina
Miocitele cu fenotipurile similare cardiomiocitelor fetale ventriculare , au fost produse prin tratarea MSCs cu 5-azacytidina, agent demethylat.Prin transplantul, in locul cicatrizarii criogene, a celulelor maduvei osoase, a culturii de MSCs si MSCs tratate cu 5-azacytidina s-a demonstrat ca toate 3 grupuri manifesta fenotipuri musculare , cu expresia markerilor cardiac-specifici troponin I si lantul greu al miozinei.Insa numai MSCs tratate cu 5-azacitidina au ameliorat dezvoltarea presiunii versus control.

Celulele mezenchimale
MSCs manifesta atit diferentiere morfologica fibroblast-like in ariile infarctului miocardic , cit si cardiomyocytelike phenotype in tesutul miocardic normal adiacent infarctului.Anume aceasta limita este favorabila transplantarii.

MSCs transfectate cu Akt1

Au fost capabile de a restabili volumul miocardic la o rat de patru ori mai mare dect cele cu celule transfectate cu gena reporter lacZ . Akt1 a fost initial identificata ca oncogena in retrovirus.Structuri disponibile: 1H10 , 1unp, 1unq,2umv.

Akt1 este activat de factorul de crestere plachetar derivat. A fost demonstrat c activarea are loc prin intermediul fosfatidilinozitol 3-kinaza. Akt este un mediator critic in inducerea supravietuirii neuronale,obtinuta prin suprimarea apoptozei intr-o maniera transcriptional independenta prin activarea serin-treonin kinazei.

1H10

Semnalele-cascada ale fosfatidilinozitol 3-kinaza mediaza efectele(prin recrutarea Akt1 spre plasma membranara prin PH (plexstrin -proteina gasita in trombocite. Numele deriva de la platelet and leukocyte C kinase substrate and the KSTR serie a aminoacizilor.

1unp

Expreseaza efecte ale : platelet-derived growth factor (PDGF), epidermal growth factor (EGF), insulin and insulin-like growth factor I (IGF-I) si cele antiapoptotice ale IGF-I.Sint totalmente activate prin fosforilare a 2 site-uri Ser308 (phosphorylated by PDK1) and Thr478 (phosphorylated by mTOR and DNA-PK).

1unq

Astfel,MSCs ameliorate prin Akt1 repara miocardul postinfarct,impiedica remodelarea si aproape complet normalizeaza performanta cardiaca.Celulele autoloage ale maduvei osoase au fost utilizate si in blocarea respingerii imunologice, atunci cind celulele de la o gazda sint injectate la un recipient .

2umv

Celule stem derivate din singele periferic

Celule izolate din sngele periferic uman adult sau dovedit s se diferenieze n esuturi nonhematopoietice, cum ar fi celulele epiteliale a tractului gastrointestinal i a pielii. Un studiu a constatat c CD34 + ( celule izolate prin vena la oareci au reuit s gazduiasca zona infarctului i sa se diferentieze n cardiomiocite, celule endoteliale, i celulele musculare netede

G-CSF -Granulocyte - Colony Stimulating Factor ) din sangele periferic i injectate prin

CD34 stem cells

Au fost izolate prin suspendarea in solutia HBSS continind FCS si 2 g/ml de propidium iodide.Au fost testate pentru tumorogeneza prin testul antic-Kit Ab,fiind pozitiv

Celule stem derivate din singele periferic

Intr-un alt set de studii, acelasi tip de celule s-a injectat in cavitatea ventriculului sting lipsit de infarct experimental; celulele n-au migrat, fapt ce demonstreaza ca acestea sint apte sa migreze doar in locul prejudiciului. !Interesant e faptul ca administrarea de acid ascorbic catalizeaza gazduirea zonei de infarct.

S-a studiat si efectul celulelor stem derivate din single periferic in cardiopatia dilatativa(celulele fiind izolate de la fratele pacientului).Dupa 3 luni cardiomegalia sa atenuat,volumul ventricului sting s-a micsorat,fractia de ejectie crescind.
!!Cu toate acestea, dup 10 luni beneficiul de terapie celular a fost pierdut.

Celulele stem embrionare

Celulele stem embrionare (embryonar stem cell, ESC) pot da natere oricrui alt tip de celul/esut (pluripotenialitate), i pot fi obinute din esut embrionar. Expresia unor factori de transcriere (transcription factors ) ca Oct4, Nanog i Sox-2 este caracteristic acestor celule.

Oct-4
Oct-4(octamer-binding transcription factor 4) cunoscut inca ca POU5F1 (POU domain, class 5, transcription factor 1) este o protein care la om este codificat de gena POU5F1 si frecvent folosita ca un marker pentru celule nediferentiate.Proteinele Pou sunt factori de transcripie eucariotici ce conin un ADN bipartit. POU6F2 este cunoscut ca Human Accelerated Region 8, posibil implicat in diferentierea Omului din Maimute.

Acronim the Pituitary-specific Pit-1 the Octamer transcription factor proteins Oct1 and Oct-2 (octamer sequence is ATGCAAAT) the neural Unc-86 transcription factor from Caenorhabditis elegans
Este un promotor al autoreinoirii celulelor stem , ceea ce conduce la proliferarea lor in cardiomiocite.Oct4 poate forma un heterodimer cu Sox2, astfel nct aceste dou proteine legindu-se formeaza un ADN. SOX-2 verifica expresia Oct-4.

NANOG
este un factor de transcripie critic implicat n autorennoirea celulelor stem embrionare nediferentiate . Protein uman Nanog este compusa din 305 aminoacizi cu un homeodomain conservat care este localizat in componenta nuclear a c elulelor. Regiunea homeodomain faciliteaz formarea ADN-ului. Mentine pluripotenta,stabileste identitatea CSE.

Celulele stem embrionare

Frecventa de diferentiere in cardiomicite este de aproximativ 7-8%. Factori umorali care induc diferentierea in cardiomiocite sint protein-2 (BMP-2) si Wnt 11, iar printre inhibitori se enumera Wnt 3 and Wnt 8

Are loc expresia genica a polipeptidei natriuretice atriale si cerebrale, functii caracteristice cardiomiocitelor.Celulele demonstreaza autoexcitare, si o frecventa de 120-250 batai/min

Telocitele si celulele stem in regenerarea cardiomiocitelor

Actioneaza ca celule asistente pentru celulele progenitoare ale cardiomiocitelor.Totodata s-a constatat ca telocitele epicardiale au un fenotip similar cu telocitele situate printre cardiomicitele lucratoare.Regenerarea cardiomiocitelor ar avea loc la formarea unui tandem dintre TC si CS

Nisa celulelor stem cardiace este localizata aria subepicardica inconjurind artera coronara ,in imediata apropiere a locului de aparitie a aortei(dreptunghiul)

Telocitul ,situat in subepicardul uman limiteaza cardiomiocitele periferice; fiind inzestrat cu 3 telopode care transmit semnale pentru reglarea activitatii transcriptionale.

Telocitul este amplasat superior cardiomiocitelor in strinsa legatura cu capilarele sangvine

Telocitele subendocardiale (TC1) trimit telopode (Tp) printre cardiomiocite (CM) si comunica cu TC2.

Aceasta electron tomografie (grosimea sectiunii de aprox. 300 nm) demonstreaza nanostructuri ce conecteaza TC Si cardiomiocitul intr-o inima de soarece. Structurile conectante (incercuite) au 10-15 nm si sugereza o interactiune moleculara intre telopodul (Tp) unui telocit (TC) si 2 cardiomiocite adiacente. Segmentul dilatat al Tp Implicat in conectiunea heterocelulara (podom) contine mitocandria (m).

Regenerarea cardiomiocitelor prin fibroblaste

O echipa de la Gladstone Institute, Universitatea California, au descoperit o metoda de transformare a fibroblastelor in cardiomiocite. Procedeul implica administrarea lenta a trei substante - printr-un tub artificial, numit stent - in sange.Acestia au descoperit ca este nevoie de combinarea a trei substante - Gata4, Mef2c si Tbx5 - care sa asigure transformarea eficienta a fibroblastelor in celule care ar putea pulsa ca si cardiomiocitele. La o zi dupa ce cei trei factori au fost introdusi in inimile unor soareci, fibroblastele s-au transformat in cardiomiocite

Gata4
Factorul de transcriptie GATA-4 este o proteina codificata de gena GATA4. Aceast protein reglementeaza genele implicate in embriogeneza i n diferenierea miocardului . Mutatiile in aceasta gena au fost asociate cu defecte cardiace septale(atrial septal defect type 2) precum i defecte de reproducere.Reprezinta ,la fel, un mediator al semnalarii RhoA(ras homolog gene family, member A),ceea ce induce asamblare sarcomerilor.

Mef2c
Myocyte enhancer factor 2c.Induce morfogeneza cardiaca,miogeneza,precum si dezvoltarea vaselor.Proteina codificata Mef2 polipeptida C are o dubla activitate :de transactivare si de asamblare a AND-ului.Mentine starea diferentiala a celulelor musculare. Stopeaza hipertrofia postnatala a cordului.Mutatiile se asociaza cu retard mintal sever,epilepsie, i malformaii ce rebrale. Joac un rol esenial n procesul de nvare si memorizare hipocampal dependent ,prin suprimarea numrului de sinapse excitatorii

Tbx5
Implicat n reglementarea transcriptionala a genelor necesare pentru difereniere mesodermului.Defecte n TBX5 sunt cauza s indromului Holt-Oram Sindromul Holt-Oram denumit si sindromul inimamina este o afectiune ereditara caracterizata prin anomalii ale membrelor superioare si inimii.Cercetatorii Holt si Oram l-au descris pentru prima data in 1960 la o familie de 4 generatii cu defecte septale atriale si anomalii ale membrelor superioare. Sindromul este ereditar ca o boala autosomala dominanta complet penetranta. Sindromul este prezent de la nastere. Boala cardiaca de conducere este progresiva o data cu virsta. Sunturile intracardiace semnificative sunt asociate cu moartea subita sau dezvoltarea hipertensiunii pulmonare si a sindromului Eisenmenger.

Pericardul(p),atriul sting(lA)si drept (ra), ventriculul sitng(lV) sint expresate de TBX5.Realizat prin subclonarea pbluescript

Alte malformaiile congenitale de cord descrise n SHO

defect septal interventricular (DSV), canal atrioventricular comun, canal arterial persistent, coarctaie de aort, stenoz aortic subvalvular, boala Fallot, trunchi arterial comun, hipoplazie de arter pulmonar, atrezie de valva tricuspid cu drenaj venos pulmonar aberant, ventricul unic. La afectarea cardiac s-au mai descris: cardiomiopatii i prolaps de valv mitral, n procent mult redus.

Cardiomiocitele embrionare
Bernd Fleischmann (Universit de Bonn, Allemagne) au testat o alta metoda de regenerare:grefa de cardiomiocite embrionare(la un soarece cu aritmie).Ritmul s-a stabilizat gratie activitatii electrice superioare celulelor maduvei osoase.Geneza:este o expresie a unei proteine care permite celulelor grefate de a trimite semnale electrice la alte celule i, prin urmare s coordoneze activitatea contractil, esenial pentru inima-o protein numit connexin 43(Cx43), care creeaz conexiuni ntre celulele