Romana

pag. 1 / 7 DiaMed - ID Micro Typing System

B005014.07.06

Cartela -ID NaCl, test enzimatic si aglutinine la rece Determinarea anticorpilor reactivi in test salin si test enzimatic (pentru proba serica a grupajului sanguin ABO, depistarea si identificarea anticorpilor, probe de compatibilitate) Identificarea produsului : 50520 Introducere Testele saline sunt utilizate pentru determinarea anticorpilor care reactioneaza cu precadere la + 4C sau la 18 - 25C (temperatura camerei), cum ar fi : anti-M, -N, -P, -Lea, -Leb, -I. Totodata sunt utilizate si pentru depistarea anticorpilor la rece din anumite anemii hemolitice autoimune. Testele enzimatice sunt foarte utile cand se urmareste o crestere a sensibilitatii in determinarea anticorpilor. Ele potenteaza reactivitatea unor anticorpi, mai ales a celor cu specificitate pentru sistemele Rhesus, Kell, Kidd. Deoarece enzimele proteolitice distrug unele antigene, cum ar fi M (MNS1), N (MNS2), S (MNS3), Fya (Fy1), Fyb(Fy2), testul enzimatic nu trebuie sa fie niciodata singurul test utilizat. Nu se considera necesara includerea testului salin la temperatura camerei in procedurile de depistare a anticorpilor, dar testul salin la + 4C poate fi utilizat pentru depistarea aglutininelor la rece. Cartela -ID NaCl, test enzimatic si aglutinine la rece este indicata pentru depistari si identificari de anticorpi, probe de compatibilitate, proba serica in grupajul sanguin ABO. Reactivi IVD Cartela -ID NaCl, test enzimatic si aglutinine la rece cu 6 microtuburi ce contin fiecare o suspensie neutra de gel. Agent conservant: < 0,1NaN3 . Se conserva la temperatura de 18 - 25C. Nu se stocheaza in apropierea unei surse de caldura,climatizare sau ventilatie. Stabilitate: a se vedea data de expirare inscrisa pe eticheta. Reactivi suplimentari necesari (a se vedea prospectele de utilizare corespondente) ID-Diluent 1: solutie de bromelina modificata pentru suspensia hematiilor ID-Diluent 2: solutie LISS modificata pentru suspensia hematiilor ID-Papaina: solutie de papaina pentru testul enzimatic ID-DiaCell I-II-III pentru test Coombs Indirect si aglutinine la rece ID-DiaCell I-II-III P (papainate) pentru testul enzimatic ID-DiaPanel pentru test Coombs Indirect si aglutinine la rece ID-DiaPanel P (papainate) pentru testul enzimatic ID-DiaCell ABO pentru proba serica in grupajul sanguin ABO. ID-I negativ Materiale necesare ID-Distribuitor ID-Pipeta ID-Conuri pentru pipeta Eprubete pentru prepararea dilutiilor ID-Stativ de lucru

Romana ID-Incubator 37C ID-Centrifuga Frigider (2 - 8C) Esantioane de testat

pag. 2 / 7

B005014.07.06

Pentru rezultate optime, este indicat ca determinarea sa fie facuta pe sange proaspat recoltat sau conform procedurilor locale referitoare la criteriile de acceptare a esantioanelor. Este de preferat ca sangele sa fie recoltat pe anticoagulant tip citrat, EDTA sau CPD-A. Poate fi folosit si sange recoltat fara anticoagulant. Prepararea esantioanelor a) Suspensii de hematii pentru probe de compatibilitate si autocontrol in testul enzimatic si testul salin Se pregateste o dilutie a hematiilor de 0,8 % in ID-Diluent 2, dupa cum urmeaza (inainte de utilizare, ID-Diluentul 2 se aduce la temperatura camerei): 1. Se distribuie 1,0 ml ID-Diluent 2 intr-o eprubeta curata. 2. Se adauga 10 ml sediment eritrocitar si se omogenizeaza usor. Suspensia de hematii poate fi utilizata imediat. b) Plasma sau ser Daca esantioanele nu se testeaza imediat, dupa separare, se stocheaza la 2 - 8C pentru maximum 48 ore sau la -20C pentru o perioada mai mare de 48 de ore. Metoda de lucru Nu trebuie utilizate cartele care prezinta semne de uscare, bule de aer in coloana de gel, sigiliul de aluminiu deteriorat, picaturi de gel sau de supernatant in partea superioara a microtuburilor sau pe partea interioara a foliei de aluminiu. Inainte de utilizare se aduc la temperatura camerei ID-Hematiile test, ID-Diluentii, ID-Papaina, plasma sau serul de testat. (exceptie pentru determinarea aglutininelor la rece). A) Depistarea anticorpilor iregulari I. Test enzimatic cu hematii papainate (ID-DiaCell I-II-III P) Inainte de testare hematiile test se omogenizeaza usor pentru a fi remise in suspensie. 1. Se identifica microtuburile alese din cartela -ID cu datele primitorului sau donatorului. 2. Se indeparteaza folia de aluminiu ce sigileaza microtuburile identificate, tinand cartela in pozitie verticala. 3. Se pipeteaza 50 l din fiecare hematie test ID-DiaCell I-II-III P (papainate) in microtuburile corespunzatoare (marcate 1-3). 4. In cazul in care este inclus si autocontrolul, se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a esantionului de testat in microtubul corespunzator. 5. Se pipeteaza in fiecare microtub 25 l din serul sau plasma primitorului/donatorului. 6. Pentru autocontrol se pipeteaza 25 l ID-Papaina in microtubul corespunzator. 7. Se incubeaza cartela -ID, 15 minute la 37C in ID-Incubator. 8. Se centrifugheaza cartela -ID, 10 minute in ID-Centrifuga . 9. Citirea si inregistrarea rezultatelor.

Romana

pag. 3 / 7

B005014.07.06

II. Testul Salin la 4C (ID-DiaCeIl I-II-III) Inainte de testare hematiile test se omogenizeaza usor pentru a fi remise in suspensie. Inainte de utilizare, cartela -ID se pune la frigider (2-8C) pentru 2 ore. Esantioanele de analizat si ID-hematiile test se utilizeaza reci, direct de la frigider. 1. Se identifica microtuburile alese din cartela -ID cu datele primitorului sau donatorului. 2. Se indeparteaza folia de aluminiu ce sigileaza microtuburile identificate, tinand cartela in pozitie verticala. 3. Se pipeteaza 50 l din fiecare hematie test ID-DiaCell I-II-III in microtuburile corespunzatoare (marcate 1-3). 4. In cazul in care este inclus si autocontrolul, se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a esantionului de testat in microtubul corespunzator. 5. Se pipeteaza in fiecare microtub 25 l din serul sau plasma primitorului/donatorului. 6. Se incubeaza cartela -ID, 30 minute la 2 - 8C. 7. Se centrifugheaza cartela -ID, 10 minute in ID-Centrifuga . 8. Citirea si inregistrarea rezultatelor. B) Identificarea anticorpilor iregulari I. Test Enzimatic cu hematii papainate (ID -DiaPanel P) Inainte de testare hematiile test se omogenizeaza usor pentru a fi remise in suspensie. 1. Se identifica cartelele -ID cu datele primitorului sau donatorului. 2. Se indeparteaza folia de aluminiu ce sigileaza microtuburile identificate, tinand cartela in pozitie verticala. 3. Se pipeteaza 50 l din fiecare suspensie de hematie test in microtuburile corespunzatoare (marcate 1 - 11). 4. Se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a esantionului de testat in microtubul 12 (autocontrolul). 5. Se pipeteaza in fiecare microtub 25 l din serul sau plasma primitorului/donatorului. 6. Se incubeaza cartelele -ID, 15 minute la 37C in ID-Incubator . 7. Se centrifugheaza cartelele -ID, 10 minute in ID-Centrifuga . 8. Citirea si inregistrarea rezultatelor. II. Testul Salin la 4C (ID-DiaPanel) Inainte de testare hematiile test se omogenizeaza usor pentru a fi remise in suspensie. Inainte de utilizare, cartela -ID se pune la frigider (2 - 8C) pentru 2 ore. Esantioanele de analizat (plasma sau serul) si ID-hematiile test se utilizeaza reci. 1. Se identifica cartelele -ID cu datele primitorului sau donatorului. 2. Se indeparteaza folia de aluminiu ce sigileaza microtuburile identificate, tinand cartela in pozitie verticala. 3. Se pipeteaza 50 l din fiecare suspensie de hematie test in microtuburile corespunzatoare (marcate 1-11). 4. In cazul in care este inclus si autocontrolul, se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a esantionului de testat in microtubul 12 (autocontrolul). 5. Se pipeteaza in fiecare microtub 25 l din serul sau plasma primitorului /donatorului. 6. Se incubeaza cartelele -ID, 30 minute la 2 - 8C . 7. Se centrifugheaza cartela -ID, 10 minute in ID-Centrifuga . 8. Citirea si inregistrarea rezultatelor.

Romana

pag. 4 / 7

B005014.07.06

C) Probe de compatibilitate I.Testul Enzimatic (papaina sau bromelina) 1. Se identifica microtuburile corespunzatoare ale cartelei -ID cu datele primitorului si ale donatorului (unitatii de sange). 2. Se indeparteaza folia de aluminiu de pe microtuburile identificate ca fiind necesare, tinand cartela in pozitie verticala. 3. Se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a donatorului in microtubul corespunzator. 4. In cazul in care este inclus si autocontrolul, se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a esantionului de testat in microtubul corespunzator. 5. Se pipeteaza 25 l din serul sau plasma primitorului in fiecare microtub. 6. Se adauga 25 l de ID -Diluent 1 sau ID -Papaina in fiecare microtub. 7. Se incubeaza cartela 15 minute la 37C in ID -Incubator . 8. Se centrifugheaza cartela 10 minute in ID -Centrifuga . 9. Citirea si inregistrarea rezultatelor. II. Testul Salin 1. Se identifica microtuburile corespunzatoare ale cartelei -ID cu datele primitorului si ale donatorului (unitatii de sange). 2. Se indeparteaza folia de aluminiu de pe microtuburile identificate ca fiind necesare, tinand cartela in pozitie verticala. 3. Se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a donatorului in microtubul corespunzator. 4. In cazul in care este inclus si autocontrolul, se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a esantionului de testat in microtubul corespunzator. 5. Se pipeteaza 25 l din serul sau plasma primitorului in fiecare microtub. 6. Se incubeaza cartela 15 minute la temperatura ambientala (18 - 25C). 7. Se centrifugheaza cartela 10 minute in ID -Centrifuga . 8. Citirea si inregistrarea rezultatelor. D) Proba serica (ID-DiaCell ABO) Inainte de testare hematiile test se omogenizeaza usor pentru a fi remise in suspensie. 1. Se identifica microtuburile corespunzatoare ale cartelei ID datele primitorului sau ale donatorului. 2. Se indeparteaza folia de aluminiu de pe microtuburile identificate ca fiind necesare, tinand cartela in pozitie verticala. 3. Se pipeteaza 50 l din fiecare hematie test (A1, A2, B,O) in microtuburile marcate corespunzator fiecarui tip de hematie test. 4. In cazul in care este inclus si autocontrolul, se pipeteaza 50 l din suspensia eritrocitara a esantionului de testat in microtubul corespunzator. 5. Se pipeteaza 25 l din serul sau plasma primitorului in fiecare microtub. 6. O incubare de 10 minute la temperatura camerei (18 - 25C) este recomandata (vezi Observatii - pct.2) . 7. Se centrifugheaza cartela 10 minute in ID -Centrifuga. 8. Citirea si inregistrarea rezultatelor. Interpretarea rezultatelor A) Principiu Pozitiv: Negativ: hematiile aglutinate formeaza o linie rosie la suprafata gelului sau sunt hematii aglutinate dispersate in coloana de gel. hematiile neaglutinate sedimenteaza complet in buton compact la fundul microtubului.

Romana

pag. 5 / 7

B005014.07.06

B) Reactii pentru: I. Depistarea anticorpilor iregulari Reactiile negative indica absenta in serul sau plasma pacientului/donatorului a unor anticorpi iregulari detectabili. Reactiile pozitive indica prezenta unor anticorpi iregulari in serul sau plasma pacientului/donatorului. Se noteaza rezultatele obtinute, pe lista de antigene prezenta in cutia de conditionare a hematiilor test ID-DiaCell I-II-III P. Se verifica daca numarul de lot al hematiilor test utilizate corespunde cu numarul de lot inscris pe lista de antigene. In cele mai multe cazuri, in functie de tipul reactiei si configuratia antigenica, se poate indica specificitatea anticorpului prezent. Se procedeaza la teste suplimentare pentru identificarea anticorpilor. Reactiile pozitive cu anumite hematii test si cu autocontrolul negativ indica prezenta unui anticorp specific. Reactiile pozitive cu toate hematiile test si cu un autocontrol pozitiv sunt probabil cauzate de un autoanticorp. Reactiile pozitive cu toate hematiile test si cu un autocontrol pozitiv, dar cu una sau mai multe hematii test avand o reactie pozitiva de intensitate mai mare decit cea prezentata de autocontrol, pot indica prezenta unui anticorp mascat iar esantionul pacientului trebuie investigat si prin alte teste.

II. Identificarea anticorpilor iregulari Una sau mai multe reactii pozitive indica prezenta anticorpilor iregulari. Se noteaza rezultatele obtinute pe lista de antigene prezenta in cutia de conditionare a hematiilor test ID-DiaPanel P. Se verifica daca numarul de lot al hematiilor test utilizate corespunde cu numarul de lot inscris pe lista de antigene. In cele mai multe cazuri, in functie de tipul reactiei si de configuratia antigenica, avem posibilitatea de a identifica specificitatea anticorpului present (autocontrolul trebuie sa fie negativ). Reactiile pozitive cu toate hematiile test si cu un autocontrol negativ pot fi datorate unor reactii nespecifice sau pot indica prezenta unui alloanticorp cu specificitate pentru un antigen cu inalta frecventa. Reactiile pozitive cu toate hematiile test si un autocontrol pozitiv sunt cauzate probabil de un autoanticorp. Reactiile pozitive cu toate hematiile test ID-DiaPanel P si cu un autocontrol pozitiv dar cu una sau mai multe hematii test avand o reactie pozitiva de intensitate mai mare decat cea prezentata de autocontrol, pot indica prezenta unui anticorp mascat iar esantionul pacientului trebuie investigat si prin alte teste. De notat ca autoanticorpii evidentiati prin testul enzimatic pot da reactii mai putin intense cu hematiile pacientului (test enzimatic intr-o singura etapa) comparativ cu reactiile hematiilor test ID-DiaCelll I-II-III P sau ID-DiaPanel P (test enzimatic in doua etape). Conform Bunelor Practici de Laborator, sensibilitatea tehnicilor mentionate trebuie validata utilizand anticorpi cu potenta cunoscuta. Reactivul de referinta DiaMed anti-D permite efectuarea controalelor regulate pentru toate tehnicile de determinare a anticorpilor iregulari (a se vedea prospectul de utilizare corespunzator). Anticorpii la rece puternici pot fi cauza unor reactii pozitive mai ales in testul enzimatic. O determinare completa a anticorpilor trebuie efectuata. Anti-I este specificitatea frecvent intalnita in maladia cu aglutinine la rece. Confirmarea specificitatii ar trebui facuta cu ID-I negative cell.

Romana

pag. 6 / 7

B005014.07.06

III. Probe de compatibilitate Reactia pozitiva indica o posibila incompatibilitate intre primitor si donator, datorita prezentei anticorpilor iregulari in serul/plasma primitorului si investigatii suplimentare sunt necesare. Reactia negativa arata ca nu exista in serul/plasma primitorului, anticorpi cu specificitate pentru antigenele prezente pe hematiile donatorului, detectabili prin testul utilizat. Cand rezultatele indica o incompatibilitate intre primitor si donator, se vor face atat testele de depistare si identificare ale anticorpilor iregulari, cat si o reverificare a grupului sanguin ABO si Rh (D) al primitorului si al donatorului.

IV . Proba serica Reactie cu : Hematii test A2 B negativ + la ++++ la ++++ negativ negativ negativ la ++++ + la ++++ Grupa sanguina O negativ negativ negativ negativ A B AB O

A1 negativ + la ++++ negativ + la ++++ -

Se va include autocontrolul cand exista discordante intre rezultatele grupajului ABO cu seruri test (proba globulara) si rezultatul ABO al probei serice si/sau se obtin rezultate pozitive neasteptate cu hematiile test. Pentru procedurile care ar trebui urmate in caz de discordanta intre proba globulara si proba serica a grupajului ABO se poate consulta Tabelul DiaMed de identificare a grupelor sanguine ABO.

Observatii 1. Daca se observa o hemoliza in partea superioara a microtubului (esantionul analizat nefiind hemolizat), testul trebuie interpretat ca fiind pozitiv. 2. Pentru proba serica, o incubare de minimum 10 minute la 18 - 25C inaintea centrifugarii va potenta reactia si va reduce numarul controalelor datorate izoaglutininelor slabe. Limite a. Cartele care prezinta bule in coloana de gel sau picaturi in partea superioara a microtubului si/sau pe partea interioara a foliei de aluminiu, trebuie centrifugate inainte de utilizare. b. Contaminarea bacteriana sau de alta natura poate provoca reactii fals pozitive sau fals negative. c. Reziduurile de fibrina in suspensia de hematii pot bloca unele din hematiile neaglutinate. Dupa centrifugare apare o linie fina roz la suprafata gelului, in timp ce majoritatea hematiilor neaglutinate se gasesc sedimentate la fundul microtubului. d. Este esentiala respectarea stricta a metodelor de lucru si a modului de utilizare a echipamentelor recomandate de producator. Echipamentele trebuie verificate periodic conform Bunelor Practici de Laborator. e. Utilizarea pentru suspensia hematiilor a altor solutii decat ID-Diluent 2 sau ID-Diluent 1 poate modifica rezultatele. f. Utilizarea altor hematii test decat ID - Test cells poate modifica reactiile. g. Concentratii prea mari sau prea mici ale suspensiilor de hematii pot provoca rezultate eronate.

Romana

pag. 7 / 7

B005014.07.06

Bibliografie : 1. Mollison, P. D., Engelfriet, C. P. and Contreras, M.: Blood transfusion in Clinical Medicine, 10th ed. 1997; Blackwell Scientific Publication, Oxford 2.Technical Manual; 11th ed. 1993; American Association of Blood Banks 3. Lapierre Y. , Rigal D., Adam J. ,si altii : The Gel test ; A new way to detect red cell antigenantibody reactions. Transfusion 1990; 30:109-113 . 3.Technical Manual; 11th ed. 1993; American Association of Blood Banks Produs Cartela -ID NaCl, test enzimatic si aglutinine la rece 4 x12 24 x12 60 x12 112 x12 REF. REF. REF. REF. 005014 005017 005016 005015

Aceste produse sunt garantate pentru proprietatile si calitatile inscrise pe eticheta si in modul de utilizare. Producatorul declina orice responsabilitate ce decurge din vanzarea acestor produse pentru alte scopuri sau din utilizarea diferita fata de cea descrisa in prezentul prospect.

DiaMed S.A

1785 Cressier sur Morat / Elvetia