TESTUL COOMBS INDIRECT

1.Metoda clasica

Metoda clasica se efectueaza in tuburi de hemoliza

- se selecteaza serul de cercetat

- se aleg eritrocitele fenotipate in sistemele antigenice cele mai
importante in functie de anticorpii cautati

- se resuspenda 5% in SF ( sau gata preparate de furnizor )

- se pipeteaza de obicei in 3 eprubete notate de la 1 la 3

2 pic. Ser de cercetat + 1 pic suspensie 5% er. Fenotip cunoscut

- se incubeaza 30 min la 370C

- se spala de 3 ori in SF ( fiecare spalare precedata de o

centrifugare de ½ min )

- se adauga 2 pic. antiimunoglobulina polivalenta

- se centrifugeaza 1 min la 1000 rpm

- se agita blind pina la desprinderea sedimentului

- se citeste la microscop

Prezenta aglutinatelor indica Test Coombs pozitiv !

Biolog Pr. Alexandra Zagrean

2. Metoda in cartela DiaMed

Procedura se bazeaza pe principiul aglutinarii.Eritrocitele poseda antigene
care aglutineaza in prezenta anticorpilor corespunzatori dirijati impotriva lor.
DiaMed –ID Micro Typing System utilizeaza tehnica de aglutinare in
coloana:
cartelele ID LISS/Coombs sint alcatuite din 3 coloane continind ser
antiglobulinic polispecific inclus intr-un gel
Reactiv suplimentar ID-Diluent 2 LISS.
Dupa incubare la 37oC si aditionarea eritrocitelor si centrifugarea casetelor,
aglutinatele sint retinute pe suprafata gelului iar eritrocitele neaglutinate se
sedimenteaza la baza coloanei.

pipeta automata -ID DiaMed

conuri- ID
eprubete dilutie
dispensor -ID

centrifuga- ID DiaMed

- Se aleg probele conform protocolului de laborator

Cind se utilizeaza serul in locul plasmei acesta va fi clarificat prin
centrifugare la 1500 g 10 min pt a elimina fibrina
Daca esantioanele nu sint testate imediat, dupa separare se stocheaza la
frigider la 2-8 oC max 48 ore sau la congelator -20 o C pt. Mai mult timp
- Se aduc reactivii ( panel hematii fenotipate ) la temperatura mediului
ambiant ( 18 – 25 o C )
- Se selecteaza serul de cercetat
- Nu se folosesc cartele cu gelul deshidratat sau cu bule de aer
- Se identifica fiecare proba cu o coloana din cartelela -ID
- Se inlatura folia de aluminiu
- Se distribuie 50 μl suspensie de eritrocit in microtub cu pipeta –ID
- Se pipeteaza cite 25μl din serul sau plasma de ceretat
- Se incubeaza 15 min. La 37oC in ID incubator
- Se centrifugheaza 10 min in ID-centrifuga
- Se citesc rezultatele si se inregistreaza

Prezenta aglutinatelor pe suprafata gelului indica Test Coombs pozitiv !

Biolog Pr. Alexandra Zagrean